CN1470868A - 丹参脂溶性成分指纹图谱的建立方法及其标准图谱 - Google Patents
丹参脂溶性成分指纹图谱的建立方法及其标准图谱 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1470868A CN1470868A CNA021253471A CN02125347A CN1470868A CN 1470868 A CN1470868 A CN 1470868A CN A021253471 A CNA021253471 A CN A021253471A CN 02125347 A CN02125347 A CN 02125347A CN 1470868 A CN1470868 A CN 1470868A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- finger
- red sage
- sage root
- reference substance
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了一种丹参脂溶性指纹图谱的建立方法及其标准图谱。首先制备供试品溶液，取丹参粉末0.3g，加入甲醇50ml，超声20－30min，放冷至室温，摇匀，即得供试品溶液；再配制对照品溶液，精密称定丹参酮II A对照品适量，加甲醇制成相当于每1ml含20μg的对照品溶液；分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各5μL，用高效液相色谱仪测定，计算，即得到丹参脂溶性成分标准指纹图谱。本发明的优点是方法简便、稳定、精密度高、重现性好，对整体上把握丹参的品种和质量状况起到有益的帮助，将其作为丹参质量控制以及真伪鉴别的指标之一。
Description
技术领域
本发明涉及中药材的指纹图谱的建立方法，具体地说本发明是关于丹参脂溶性成分指纹图谱的建立方法，本发明还涉及由此方法所得到的丹参脂溶性成分HPLC指纹图谱。
背景技术
丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎。全国大部分地区均有出产。但由于采收季节、产地以及采收期等极易造成质量的参差不齐，品质很难有保证。目前，就丹参药材及其复方制剂的质量要求，往往只选择丹参的一、二个活性成分作为定量测定、定性鉴别的指标。天津市金士力药物研究开发有限公司申请的专利“丹参药材指纹图谱建立的方法及其标准指纹图谱”(公开号CN 1322951 A)，对丹参药材水溶性部位指纹图谱的建立方法作了详细的阐述并提供了标准的指纹图谱。
但众所周知，丹参药材成分复杂，单单对其水溶性部位予以控制未免有失全面。目前，丹参已知的脂溶性成分有十几种，包括如丹参酮I、丹参酮IIA、隐丹参酮等(廉援朝，丹参研究与应用，西安出版社1998年：52-54)。现代药理学研究表明，它们具有明显的抗凝血、预防心肌梗塞、抗炎抑菌等药理作用(季宇彬，中药活血化瘀有效成分药理与应用，黑龙江科学技术出版社1999年：336-339)。现在，对丹参药材中脂溶性成分指纹图谱的建立未见报道。为了弥补上述不足，使其质量控制技术更加完善、科学。本申请人对不同产地丹参进行了考察比较，建立起了丹参脂溶性提取物指纹图谱的测定方法。
发明内容
本发明的目的是通过对丹参脂溶性提取物HPLC指纹图谱的研究，摸索出一种丹参药材的质量控制方法，建立了丹参脂溶性成分标准指纹图谱的方法，弥补现有技术的不足，使之更完善、更科学、更合理。本发明还提供了丹参脂溶性成分的标准指纹图谱。
本发明通过下述技术方案予以实现：
(1)试品溶液的制备：取丹参粉末，加入甲醇，超声，放冷至室温，过滤，滤液作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取对照品适量，加入甲醇制成对照品溶液；
(3)丹参脂溶性成分指纹图谱的测定：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液，用高效液相色谱仪测定，以对照品的色谱峰相对保留时间和峰面积为1，计算相对保留时间和相对峰面积，即得到丹参脂溶性成分标准指纹图谱。
所述高效液相色谱仪中的色谱柱，以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相为甲醇∶水的混合物为3∶1，检测波长270±1nm，理论塔板数以丹参酮IIA计算不低于2000；所述取丹参粉末0.3g，加入甲醇50ml，超声20-40min所述取丹参酮IIA，加入甲醇制成相当于每1ml含20μg的溶液，摇匀作为对照品溶液；所述精密吸取对照品溶液以及供试品溶液的加入量各为5μL。
利用丹参脂溶性成分指纹图谱的建立方法所得到的HPLC指纹图谱，是采用下列步骤建立的图谱：
(1)试品溶液的制备：取丹参粉末，加入甲醇，超声，放冷至室温，过滤，滤液作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取对照品适量，加甲醇制成对照品溶液；
(3)丹参脂溶性成分指纹图谱的测定：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液，用高效液相色谱仪测定，以对照品的色谱峰相对保留时间和峰面积为1，计算相对保留时间和相对峰面积，即得到丹参脂溶性成分标准指纹图谱。
所述图谱的图形如说明书附图中的图1所示的图谱，所述图谱中的共有峰不得少于5个
与现有技术相比，本发明具有以下优势：
1.研究表明，丹参的脂溶性部位具有明显的抗凝血、预防心肌梗塞、抗炎抑菌等药理作用(季宇彬，中药活血化瘀有效成分药理与应用，黑龙江科学技术出版社1999年：336-339)。因此，对其某一种活性成分或水溶性部位进行检测，未免有失全面。本发明针对丹参脂溶性提取物建立了标准指纹图谱，完善了现有技术的不足，使之更具有科学性。
2.本发明提供的方法具有简便、稳定、精密度高以及重现性好等特点。由于本发明针对着丹参脂溶性提取物进行检测，而绝大多数脂溶性成分在270nm处均表现出了良好的吸收，故选用270nm作为其检测波长，可以充分反映了其化学信息。
3.本发明选用了超声提取的方法进行处理，与传统的回流法(中国药典，2000
版：57)相比，大大地节约了成本和时间。
附图说明
图1是本发明商洛丹参指纹图谱
图2是广西丹参指纹图谱
图3是河南丹参指纹图谱
图4是野生丹参指纹图谱
图5是本发明商洛丹参指纹图谱
具体实施方式下面结合实施例对本发明做进一步说明：
实施例11.仪器与试药1.1仪器
安捷伦1100高效液相色谱仪；安捷伦VWD紫外可变波长检测器；美国奥泰色谱之星工作站。1.2试药
丹参酮IIA(含量测定用)，购于中国药品生物制品检定所；甲醇，色谱纯；自制蒸馏水；针筒式微孔滤膜过滤器，有机系，直径13mm，0.45μm；丹参药材为天士力商洛丹参药材基地所产丹参，市售丹参，购于天津市药材公司。2.方法与结果2.1色谱条件
色谱柱：十八烷基键合硅胶(4.6×250mm，5μ)美国奥泰公司；流动相：甲醇∶水为3∶1；检测波长：270nm；流速：1ml/min；柱温：40℃；理论塔板数以丹参酮IIA计算，不得低于2000。3.指纹图谱测定3.1丹参指纹图谱制备
对照品溶液的制备：取丹参酮IIA，加甲醇制成相当于每1ml含20μg的溶液，摇匀，即得。
参照物：选用丹参酮IIA为参照物(S)
供试品溶液制备：取丹参药材粉末0.3g，加甲醇50ml，超声30min，放冷至室温，过滤，即得。
分别精密吸取对照品以及样品溶液各5μL，分别注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，记录50分钟的色谱图，即得。以丹参酮IIA的色谱峰的相对保留时间和峰面积为1计算相对保留时间和相对峰面积。3.2共有峰确定
通过10批商洛丹参药材指纹图谱测定，比较其色谱图，确定共有峰7个，其中以丹参酮II A为参照物超过总峰面积10％的指纹峰为7号峰(丹参酮IIA、RT1.000)、4号峰(丹参酮I、RT0.566)，其余均小于10％，10批药材共有峰相对保留时间以及相对峰面积统计结果见下表1、表2。表1：10批丹参药材的相对保留时间统计批号\共
1 2 3 4 5 6 7有指纹峰材101 0.348 0.386 0.445 0.568 0.678 0.812 1材301 0.35 0.379 0.439 0.565 0.682 0.809 1材502 0.352 0.383 0.439 0.562 0.683 0.798 1材701 0.344 0.388 0.442 0.563 0.672 0.802 1材0801 0.341 0.375 0.448 0.563 0.676 0.807 1材0902 0.346 0.382 0.45 0.569 0.683 0.811 1材1001 0.344 0.374 0.44 0.57 0.676 0.796 1材1101 0.34 0.378 0.441 0.563 0.677 0.809 1材1102 0.344 0.379 0.442 0.568 0.682 0.813 1材1103 0.346 0.386 0.445 0.57 0.681 0.808 1均值 0.3455 0.381 0.4431 0.5661 0.679 0.8065 1RSD％ 1.09 1.26 0.85 0.57 0.55 0.73 0表2：10批丹参药材峰面积统计共有指纹峰 均值
101 301 502 701 801 0902 1001 1101 1102 1103\药材批号 ±SD
91866.6
峰面积 86989 94851 124533 93704 74882 876949 122559 77480 81981 89143
±9693.2峰4
相对峰
45.78 52.17 60.3 55.6 47.9 58.3 56.6 53.2 46.59 47.2 52.4±4.2
面积％峰 176063
峰面积 190016 181812 206523 168532 156329 1504201 216536 145639 175963 1888627-S ±15393丹参酮IIA含
0.35 0.33 0.34 0.31 0.29 0.28 0.36 0.31 0.32 0.35量(％)3.3共有特征峰的描述：(一)征峰共有7个，其中以丹参酮IIA峰面积最大，最高。(二)7个峰分为3组1号峰、2号峰、3号峰为1组；5号峰、6号峰为2组；4号峰、7号峰为3组。(三)峰高描述各组特征：1组相对峰高较低，1号峰∶2号峰∶3号峰(0.5∶1∶0.75)，呈右手食指、中指、无名指状。2组相对峰高较低，5号峰、6号峰为等高峰，且峰型对称，基本相似。3组7号峰为最高峰，4号峰∶7号峰(0.8～1∶1)。所得丹参药材标准指纹图谱见图1。3.4指纹图谱精密度试验
按照指纹图谱精密度规定方法操作，以商洛丹参药材2001101批为供试样品，取一份，连续进样5次，分别对共有峰保留时间相对以及相对峰面积有规定的峰面积进行统计，共有峰相对保留时间RSD％不得超过1.5％，相对峰面积不得超过3％。3.5指纹图谱稳定性试验
按照指纹图谱稳定性测定方法操作，以商洛丹参药材2001101批为供试样品，考察24小时溶液稳定性，分别对共有峰保留时间相对比值以及相对峰面积有规定的峰面积进行统计，共有峰相对保留时间RSD％不得超过1.5％，相对峰面积不得超过3％。
实施例2
供试品溶液制备取丹参药材粉末0.3g，加甲醇50ml，超声25min，放冷至室温，过滤，即得。试药采用天士力商洛药材基地所产丹参10批。其它条件同实施例1。
结果：十批药材共有峰相对保留时间以及相对峰面积统计结果见下表3、表4。表3：10批丹参药材的相对保留时间统计批号\共
1 2 3 4 5 6 7有指纹峰材1104 0.347 0.389 0.445 0.568 0.678 0.815 1材1105 0.351 0.380 0.442 0.566 0.683 0.813 1材1106 0.355 0.387 0.441 0.561 0.682 0.809 1材1107 0.346 0.375 0.443 0.563 0.680 0.806 1材1108 0.346 0.374 0.444 0.565 0.656 0.814 1材1109 0.346 0.370 0.450 0.565 0.665 0.813 1材1110 0.348 0.380 0.441 0.572 0.674 0.800 1材1111 0.340 0.375 0.443 0.563 0.676 0.803 1材1112 0.347 0.382 0.445 0.560 0.680 0.810 1材1113 0.349 0.385 0.446 0.570 0.683 0.810 1均值 0.348 0.387 0.446 0.569 0.681 0.813 1RSD％ 1.11 1.63 0.61 0.67 1.30 0.61 0表4：10批丹参药材峰面积统计共有指纹峰\
1104 1105 1106 1107 1108 1109 1110 1111 1112 1113 均值±SD药材批号
峰面积 86750 945568 124653 93587 74698 876652 122783 77586 81635 89574 172248.6±248093峰4相对峰面
积％ 45.63 52.01 60.36 55.49 47.72 58.28 58.71 53.30 46.47 47.52 52.5±5.2峰峰面积 190116 181820 206523 168630 156346 1504204 216524 145578 175658 188475 313387.4±418953.97-S丹参酮IIA
0.35 0.33 0.34 0.31 0.29 0.28 0.36 0.31 0.32 0.35含量(％)所得丹参药材标准指纹图谱见图5。共有特征的描述同实施例1。
以上试验结果表明，应用此方法对丹参脂溶性成分进行测定方法可靠。通过对基地实施标准的GAP管理，严格控制化肥、农药、采收等各个环节，使丹参质量可控，指纹图谱相对稳定。
下面给出商洛丹参指纹图谱与市售丹参药材图谱进行比较，但并不对本发明限制
市售各产地丹参药材的测定方法同商洛丹参指纹图谱测定方法，测定，与标准指纹图谱比较，发现具有很大差别，见表5，色谱图见说明书附图图1～4。
表5：各产地丹参药材指纹图谱比较
广西丹参 河南丹参 野生丹参共有峰数 7个，符合 7个，符合 7个，符合最大峰面积 7#，符合 4#，不符合 4#，不符合1组 2#峰超高，不符合 2#峰超高，不符合 符合
6#峰偏低(5#∶6#＝3.3∶1) 6#峰偏低(5#∶6#＝4∶1) 6#峰偏低(5#∶6#＝5∶3)2组
不符合 不符合 不符合3组 不符合 不符合 不符合
结果表明，与商洛丹参比较，市售丹参虽然具有形同数目的共有峰，但其峰形特征与商洛指纹图谱具有较大差别，不能互相替代。
Claims (8)
1.一种丹参脂溶性成分指纹图谱的建立方法，其特征是它包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取丹参粉末，加入甲醇，超声，放冷至室温，过滤，滤液作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取对照品适量，加入甲醇制成对照品溶液；
(3)丹参脂溶性成分指纹图谱的测定：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液，用高效液相色谱仪测定，以对照品的色谱峰相对保留时间和峰面积为1，计算相对保留时间和相对峰面积，即得到丹参脂溶性成分标准指纹图谱。
2.根据权利要求1所述的丹参脂溶性成分指纹图谱的建立方法，其特征是，所述高效液相色谱仪中的色谱柱，以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相为甲醇：水的混合物为3∶1；检测波长270±1nm；理论塔板数以丹参酮IIA计算，不低于2000。
3.根据权利要求1所述的丹参脂溶性成分指纹图谱的建立方法，其特征是，所述取丹参粉末0.3g，加入甲醇50ml，超声20-40min。
4.根据权利要求1所述的丹参脂溶性成分指纹图谱的建立方法，其特征是，所述取丹参酮IIA；加入甲醇制成相当于每1ml含20μg的溶液，摇匀作为对照品溶液。
5.根据权利要求1所述的丹参脂溶性成分指纹图谱的建立方法，其特征是，所述精密吸取对照品溶液以及供试品溶液的加入量各为5μL。
6.一种利用权利要求1所述的丹参脂溶性成分指纹图谱的建立方法得到的HPLC指纹图谱，其特征是，它采用下列步骤建立的图谱：
(1)供试品溶液的制备：取丹参粉末，加入甲醇，超声，放冷至室温，过滤，滤液作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取对照品适量，加甲醇制成对照品溶液；
(3)丹参脂溶性成分指纹图谱的测定：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液，用高效液相色谱仪测定，以对照品的色谱峰相对保留时间和峰面积为1，计算相对保留时间和相对峰面积，即得到丹参脂溶性成分标准指纹图谱。
7.根据权利要求6所述的，采用丹参脂溶性成分指纹图谱的建立方法得到的HPLC指纹图谱，其特征是，所述图谱的图形如说明书附图中的图1所示的图谱。
8.根据权利要求6或7所述的，利用丹参脂溶性成分指纹图谱的建立方法得到的HPLC指纹图谱，其特征是，所述图谱中的共有峰不得少于5个。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNA021253471A CN1470868A (zh) | 2002-07-26 | 2002-07-26 | 丹参脂溶性成分指纹图谱的建立方法及其标准图谱 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNA021253471A CN1470868A (zh) | 2002-07-26 | 2002-07-26 | 丹参脂溶性成分指纹图谱的建立方法及其标准图谱 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1470868A true CN1470868A (zh) | 2004-01-28 |
Family
ID=34142852
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNA021253471A Pending CN1470868A (zh) | 2002-07-26 | 2002-07-26 | 丹参脂溶性成分指纹图谱的建立方法及其标准图谱 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1470868A (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005088295A1 (fr) * | 2004-03-17 | 2005-09-22 | Tianjin Tasly Pharmaceutical Co., Ltd. | Procede de controle de qualite destine aux pilules a avaler composees de danshen |
| WO2007036132A1 (fr) * | 2005-09-28 | 2007-04-05 | Baihua Shen | Procédé microchimique d'identification de panax ginseng ca mey |
| CN100362345C (zh) * | 2005-07-21 | 2008-01-16 | 广州汉方现代中药研究开发有限公司 | 灵芝孢子或灵芝孢子油指纹图谱的建立方法 |
| CN100412546C (zh) * | 2004-03-17 | 2008-08-20 | 天津天士力制药股份有限公司 | 一种复方丹参滴丸指纹图谱的测定方法 |
| CN103149310A (zh) * | 2013-01-21 | 2013-06-12 | 贵州景峰注射剂有限公司 | 参芎葡萄糖注射液原料、中间体及其制剂的指纹图谱建立方法和质量控制方法 |
| CN105486787A (zh) * | 2015-12-04 | 2016-04-13 | 广东药学院 | 微乳色谱测定丹参有效成分指纹图谱的方法及应用 |
| CN106950329A (zh) * | 2016-11-29 | 2017-07-14 | 上海佰年诗丹德检测技术有限公司 | 一种化妆品中丹参酮ⅱa含量的测定方法 |
-
2002
- 2002-07-26 CN CNA021253471A patent/CN1470868A/zh active Pending
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005088295A1 (fr) * | 2004-03-17 | 2005-09-22 | Tianjin Tasly Pharmaceutical Co., Ltd. | Procede de controle de qualite destine aux pilules a avaler composees de danshen |
| CN100412546C (zh) * | 2004-03-17 | 2008-08-20 | 天津天士力制药股份有限公司 | 一种复方丹参滴丸指纹图谱的测定方法 |
| CN100362345C (zh) * | 2005-07-21 | 2008-01-16 | 广州汉方现代中药研究开发有限公司 | 灵芝孢子或灵芝孢子油指纹图谱的建立方法 |
| WO2007036132A1 (fr) * | 2005-09-28 | 2007-04-05 | Baihua Shen | Procédé microchimique d'identification de panax ginseng ca mey |
| CN103149310A (zh) * | 2013-01-21 | 2013-06-12 | 贵州景峰注射剂有限公司 | 参芎葡萄糖注射液原料、中间体及其制剂的指纹图谱建立方法和质量控制方法 |
| CN103149310B (zh) * | 2013-01-21 | 2015-05-20 | 贵州景峰注射剂有限公司 | 参芎葡萄糖注射液制剂的指纹图谱建立方法 |
| CN105486787A (zh) * | 2015-12-04 | 2016-04-13 | 广东药学院 | 微乳色谱测定丹参有效成分指纹图谱的方法及应用 |
| CN106950329A (zh) * | 2016-11-29 | 2017-07-14 | 上海佰年诗丹德检测技术有限公司 | 一种化妆品中丹参酮ⅱa含量的测定方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1141575C (zh) | 一种丹参药材的鉴别方法 | |
| CN1707260A (zh) | 当归、川芎中药材及其制剂指纹图谱的建立方法及标准指纹图谱 | |
| CN101979052A (zh) | 广西铁皮石斛hplc指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱 | |
| CN101049389A (zh) | 一种治疗畏寒型胃炎颗粒剂的质量控制方法 | |
| CN109490437B (zh) | 白芍的指纹图谱检测方法 | |
| CN109613134A (zh) | 一种桑白皮药材uplc指纹图谱的构建方法及其应用 | |
| CN101444589A (zh) | 一种分清五淋丸的质量标准及其检验方法 | |
| CN1850193A (zh) | 橘红枇杷胶囊的制备方法及其质量控制技术 | |
| CN1470868A (zh) | 丹参脂溶性成分指纹图谱的建立方法及其标准图谱 | |
| CN101028388A (zh) | 一种治疗眼疾近视及视疲劳中药制剂的质量检测方法 | |
| CN110297060B (zh) | 一种山苦荬药材指纹图谱检测方法及其指纹图谱 | |
| CN100351628C (zh) | 一种利用液相指纹图谱鉴别蜂胶真假的方法 | |
| CN101028460A (zh) | 一种中药制剂金嗓清音丸的质量检测方法 | |
| CN101078713A (zh) | 一种加入内标物的绞股蓝药材指纹图谱质量控制方法 | |
| CN1932506A (zh) | 吴茱萸脂溶性指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱 | |
| Zhang et al. | Chromatographic fingerprint combined with quantitative analysis of multi‐components by single‐marker for quality control of total lignans from Fructus arctii by high‐performance liquid chromatography | |
| CN101028487A (zh) | 一种治疗眼底出血中药制剂和血明目的质量检测方法 | |
| CN110261525B (zh) | 瑶药材益母姜二氯甲烷部位hplc指纹图谱的建立方法 | |
| CN1733040A (zh) | 灵丹草含片及其制备方法和灵丹草含片的质量控制方法 | |
| CN1538170A (zh) | 抗病毒口服液指纹图谱检测技术 | |
| CN1314964C (zh) | 一种用指纹图谱控制板蓝根及其制剂质量和药效的方法 | |
| CN103837627A (zh) | 一种落花生茎叶药材的指纹图谱建立方法 | |
| CN103969356A (zh) | 一种丹参药材的指纹图谱的鉴别方法 | |
| CN105467051B (zh) | 大川芎片全时段多波长融合指纹图谱的质量控制方法 | |
| CN113655166A (zh) | 一种金花清感颗粒中14种成分的高效液相检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |