CN1431025A - 一种血液内乙型肝炎病毒免疫吸附柱 - Google Patents

一种血液内乙型肝炎病毒免疫吸附柱 Download PDF

Info

Publication number
CN1431025A
CN1431025A CN 03110948 CN03110948A CN1431025A CN 1431025 A CN1431025 A CN 1431025A CN 03110948 CN03110948 CN 03110948 CN 03110948 A CN03110948 A CN 03110948A CN 1431025 A CN1431025 A CN 1431025A
Authority
CN
China
Prior art keywords
hepatitis
virus
blood
hbs
immunoabsorbent column
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN 03110948
Other languages
English (en)
Inventor
高庆伟
李永新
邹汉法
孔亮
Original Assignee
高庆伟
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 高庆伟 filed Critical 高庆伟
Priority to CN 03110948 priority Critical patent/CN1431025A/zh
Publication of CN1431025A publication Critical patent/CN1431025A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

一种血液内乙型肝炎病毒免疫吸附柱,其特征在于所述免疫吸附柱是通过将有效量的乙型肝炎病毒的特异性抗体IgG-HBs的Fc端健合于琼脂糖凝胶颗粒上,或者是通过将有效量的乙型肝炎病毒的特异性抗体HBs-IgG的Fc端健合于琼脂糖凝胶颗粒上构建而成。本发明可以高度选择性地清除人体血液中的HBV病毒,从而达到从病原上治疗HBV病毒感染所致乙型肝炎的目的。

Description

一种血液内乙型肝炎病毒免疫吸附柱
技术领域:
本发明涉及医疗器械,特别提供了一种人体血液内乙型肝炎病毒的免疫吸附柱。
背景技术:
免疫吸附是通过特异性的抗原抗体免疫反应清除体内各种致病因子,净化血液,从而达到治疗某些难治性疾病目的的一种新兴的治疗方法,是一种高选择性的免疫治疗新技术,其原理是将单一提纯的特异性抗体(或抗原)牢固地结合在一个固定的载体上构建成吸附装置(该装置又被称为免疫吸附柱),再将其与血管连通,使血液在规定的时间内通过此装置,并充分地与吸附柱上的抗体(或抗原)相接触,最终将血液内有害的相应抗原(或抗体)彻底清除出去,目前该方法已经被用于治疗人体内源性的一些免疫性疾病,并取得了满意的疗效。如,1979年美国科学家首先采用火棉胶包埋法制备了活性炭DNA免疫吸附剂,并成功地救治一名重症系统性红斑狼疮患者。1992年美国的IMRE公司以硅胶作为基体,键合Protein A作为免疫吸附剂用于治疗自身免疫系统疾病,获得了良好的效果。1995年,这一血液免疫吸附装置的治疗方案通过了美国FDA认证。近年来国内外在对狼疮肾炎、器官移植、肾病综合症、多关节炎、肾小球肾炎、血友病、格淋巴利综合症等疾病的治疗作用已得到证实并取得了预期的临床效果。但是正如上述指出的,目前的免疫吸附治疗还仅限于人体内源性的自身免疫系统疾病,对于那些由于肌体外部因素既外源性的致病因子所导致的的疾病,如病毒感染,至今未见相关的免疫吸附治疗的报道,现在由病毒感染引起疾病的死亡人数,在各种因疾病的死亡的人数中仍占有相当的比例,一种好的彻底清除体内病毒的方法无疑具有重要的社会经济意义。
我国是乙型肝炎病毒HBV感染的高发区,全世界HBV感染发病人数约为3.5亿。而根据2000年全国病毒性肝炎血清流行病学调查,人群中HBsAg阳性率平均为9.75%,约1亿2千万人,占全世界HBV感染人数的1/3。其中慢性乙型肝炎病人约3千万,10~30%可能发展为肝硬化,部分病人可能进一步发展为肝癌。HBsAg和HBeAg双阳性的母亲所生婴儿约95%可出现HBsAg阳性,此类HBsAg阳性的婴儿常为慢性终身携带HBV。因此,HBV感染在我国是一种严重危害人民健康的传染病。目前乙型肝炎的治疗主要是通过药物,如干扰素、拉米夫定、胸腺肽等,人工肝系统、肝移植等,但是由于HBV致病机理及人体免疫系统的高度复杂性,加之HBV在慢性乙型肝炎患者体内持久存在、复制和变异,不能彻底被人类免疫系统和药物清除,通常使肝脏病变持续发生及进展,另外现有的治疗手段还存在毒副作用大治疗费用高的缺点。现有的研究结果表明,HBV仅存于患者的肝脏和血液中,因此如果能够降低甚至清除血液中的HBV及相关标志物,减轻甚至阻断血液中HBV对肝脏的循环感染及相关免疫复合物所致的体内免疫损害,对于早期HBV急性感染、肝脏移植患者及慢性乙型肝炎患者都具有及其重要的治疗意义。
技术内容:
本发明提供了一种血液内乙型肝炎病毒免疫吸附柱,其可以高度选择性地清除人体血液中的乙型肝炎病毒,从而达到从病原学上清除、治疗乙型肝炎病毒及其感染所致乙型病毒性肝炎的目的。
具体地,本发明提供了一种血液内乙型肝炎病毒免疫吸附柱,其特征在于所述免疫吸附柱是通过将有效量的乙型肝炎病毒的特异性抗体IgG-HBs的Fc端健合于琼脂糖凝胶颗粒上构建而成。
本发明还提供了一种血液内乙型肝炎病毒免疫吸附柱,其特征在于所述免疫吸附柱是通过将有效量的乙型肝炎病毒的特异性抗体HBs-IgG的Fc端健合于琼脂糖凝胶颗粒上构建而成。
本发明血液内乙型肝炎病毒免疫吸附柱中,所述琼脂糖凝胶颗粒可以是经过修饰的。
本发明又提供了上述血液内乙型肝炎病毒免疫吸附柱的制备方法,其特征在于首先将琼脂糖凝胶环氧化、氨基化、醛基化,再与乙型肝炎病毒的特异性抗体IgG-HBs或HBs-IgG健合,最后对未反应的醛基进行封尾。
众所周知,乙型肝炎病毒的抗原蛋白与其特定的抗体蛋白具有特异性结合的特点,本发明正是利用了乙型肝炎病毒的这一特点,通过将乙型肝炎病毒的特异性抗体牢固地结合于琼脂糖颗粒微球载体上构建成对乙型肝炎病毒高选择性吸附的免疫吸附装置(免疫吸附柱),再通过与现有的常规的体外循环装置相结合,在体外将血液中的乙型肝炎病毒清除出去,从而达到从病原上彻底清除、治疗该病毒及其所致疾病的目的。
本发明所提供的血液内乙型肝炎病毒免疫吸附柱,适用于由乙型肝炎病毒所致乙型肝炎的治疗,特别是当需要清除血液中的乙型肝炎病毒从而保证肝移植后清洁肝脏不被再感染、乙型肝炎病毒携带孕龄妇女的母婴传播阻断。
具体实施方式:
血液内乙型肝炎病毒免疫吸附柱的制备过程如下,该具体的实施方式并不限制本发明。1.环氧介质的合成:
用量筒量取150mL商品的Sepharose CL-4B凝胶,倒入砂心漏斗抽滤,再用生理盐水冲洗、抽干后转入500mL烧杯,分别加入生理盐水180mL,2mol/LNaOH 70mL,环氧氯丙烷50mL,混匀。将此混匀的物料加到锥形瓶中,封口。在摇床中40℃反应2小时,转速为200转/分钟,反应完成后,倒入砂心漏斗抽滤,再分别用无水乙醇和水冲洗,抽干。2.氨基介质的合成:
将上述制备的环氧凝胶转入500mL烧杯,分别加入生理盐水50mL,13g/L己二胺-NaHCO3缓冲液450mL,混匀。将此混匀的物料加到锥形瓶中,封口。在摇床中50-55℃反应2小时,转速为200转/分钟,反应完成后,倒入砂心漏斗抽滤,再分别用无水乙醇和水冲洗,抽干。3.醛基介质的合成:
将上述的氨基凝胶转入500mL烧杯,分别加入生理盐水370mL,25%的戊二醛30mL,混匀。将此混匀的物料加到锥形瓶中,封口。在摇床中室温反应2小时,转速为200转/分钟,反应完成后,倒入砂心漏斗抽滤,再分别用水、2mol/L醋酸和水冲洗,最后用0.1mol/L pH8.2的硼酸盐缓冲液平衡、抽干。4.免疫吸附介质的合成:
将上述的醛基凝胶转入500mL烧杯,加入生理盐水50mL,然后将600mg的抗HBV的IgG溶于250mL 0.1mol/L的硼酸盐缓冲液,加入烧杯中,混匀。将此混匀的物料平均分加到锥形瓶中,封口。在摇床中室温反应20小时,转速为200转/分钟,反应完成后,倒入砂心漏斗抽滤。5.未反应醛基的封尾:
将上述的免疫吸附凝胶转入500mL烧杯,分别加入生理盐水50mL和40g/LpH8.2的甘氨酸乙酯缓冲液250mL,混匀。将此混匀的物料加到锥形瓶中,封口。在摇床中室温反应2小时,转速为200转/分钟。最后称5g硼氢化钠4℃下分4次加入,室温反应6-8小时。反应完成后,倒入砂心漏斗抽滤,分别用水、0.2mol/L pH2.3的甘氨酸-盐酸缓冲液、含1mol/L氯化钠的0.1mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液和水冲洗,抽干后得到Ab-HBs免疫吸附凝胶。
将上述制备的乙型肝炎病毒免疫吸附柱及血液净化体外循环系统对富含乙型肝炎病毒及其HBsAg的血浆在体外进行免疫吸附清除实验,在实验前后分别对血清中的HBV-DNA、HBsAg进行定量检测,结果表明:随着免疫吸附时间及循环次数的增加,血清中HBV-DNA、HBsAg、HbeAg的量逐渐降低。
Ab-HBs健合琼脂糖颗粒微球步骤及参数见下表。
                     表1 体外免疫吸附试验参数
  吸附血浆量   单次吸附时间   循环吸附次数   总吸附时间
  500毫升   33分钟   2次   70分钟
                     表2 免疫吸附柱构建参数
外形及容积 载体及抗体 健合抗体量   健合时间   健合温度 保存液及浓度
圆柱状60ml 琼脂糖凝胶颗粒Ab-HBs 200mg   48小时   4℃ 0.2%NaN3
表3 HBV-DNA及相关标志物定量检测方法
 HBV-DNA(拷贝/ml)     HBsAg(s/n)     HBeAg(s/co)
 PCR荧光定量     微粒子化学发光     微粒子化学发光
表4 体外HBVM、HBVDNA特异性免疫吸附结果
               吸附前               吸附后
 HBsAg  HBeAg  HBV-DNA  HBsAg  HBeAg  HBV-DNA
样品1 128.69 104.42 1.67×105 104.75 107.25 0.21×105
样品2  376.59  576.82  8.66×107  298.65  426.92  1.39×105
样品3  273.52  152.73  3.96×108  220.44  66.50  9.79×105
样品4 326.99 153.92 4.462×105 234.47 136.34 5.03×104
表5 体外HBVM、HBVDNA特异性免疫吸附血浆生化指标变化情况
项    目 TPg/L ALBg/L Gg/L A/G  ALTU/L  ASTU/L     S/L     TBILumol/L     DBILumol/L     IBILumol/L
免疫吸附前 56.60 25.80 30.80 0.80  143.80  112.90     0.80     107.66     51.37     5629
免疫吸附后 56.10 25.40 30.70 0.80  147.60  117.90     0.80     120.36     56.56     63.80
表6 健和前后样品中IgG-HBs定量检测结果
    健合前     健合后     健合率
    200mg/ml     1.6mg/ml     99.92%

Claims (4)

1、一种血液内乙型肝炎病毒免疫吸附柱,其特征在于所述免疫吸附柱是通过将有效量的乙型肝炎病毒的特异性抗体IgG-HBs的Fc端健合于琼脂糖凝胶颗粒上构建而成。
2、一种血液内乙型肝炎病毒免疫吸附柱,其特征在于所述免疫吸附柱是通过将有效量的乙型肝炎病毒的特异性抗体HBs-IgG的Fc端健合于琼脂糖凝胶颗粒上构建而成。
3、按权利要求1或2所述血液内乙型肝炎病毒免疫吸附柱,其特征在于所述琼脂糖凝胶颗粒是经过修饰的。
4、一种权利要求3所述血液内乙型肝炎病毒免疫吸附柱的制备方法,其特征在于首先将琼脂糖凝胶环氧化、氨基化、醛基化,再与乙型肝炎病毒的特异性抗体IgG-HBs或HBs-IgG健合,最后对未反应的醛基进行封尾。
CN 03110948 2003-01-28 2003-01-28 一种血液内乙型肝炎病毒免疫吸附柱 Pending CN1431025A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 03110948 CN1431025A (zh) 2003-01-28 2003-01-28 一种血液内乙型肝炎病毒免疫吸附柱

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 03110948 CN1431025A (zh) 2003-01-28 2003-01-28 一种血液内乙型肝炎病毒免疫吸附柱

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN1431025A true CN1431025A (zh) 2003-07-23

Family

ID=4790127

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN 03110948 Pending CN1431025A (zh) 2003-01-28 2003-01-28 一种血液内乙型肝炎病毒免疫吸附柱

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN1431025A (zh)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100374564C (zh) * 2005-10-27 2008-03-12 云南大学 一段乙型肝炎病毒特异性dna序列的应用
CN101961512A (zh) * 2010-05-07 2011-02-02 武汉百泰生物技术有限公司 一种乙型肝炎病毒亲和吸附柱及其制备方法
CN103691017A (zh) * 2014-01-15 2014-04-02 倪自谦 一种乙肝病毒特异性血浆吸附柱及使用方法
CN105688841A (zh) * 2014-11-25 2016-06-22 中国科学院大连化学物理研究所 一种免疫吸附高分子微球及其制备和应用
CN106140110A (zh) * 2015-04-16 2016-11-23 中国科学院大连化学物理研究所 一种低密度脂蛋白吸附剂的制备方法
CN110711571A (zh) * 2019-07-08 2020-01-21 中国海洋大学 一种适应于鱼类原肌球蛋白纯化的琼脂糖硼酸亲和材料的制备方法
CN111659355A (zh) * 2020-06-23 2020-09-15 武汉瑞法医疗器械有限公司 烷基化修饰的乙肝病毒免疫吸附剂及其制备方法

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100374564C (zh) * 2005-10-27 2008-03-12 云南大学 一段乙型肝炎病毒特异性dna序列的应用
CN101961512A (zh) * 2010-05-07 2011-02-02 武汉百泰生物技术有限公司 一种乙型肝炎病毒亲和吸附柱及其制备方法
CN103691017A (zh) * 2014-01-15 2014-04-02 倪自谦 一种乙肝病毒特异性血浆吸附柱及使用方法
CN105688841A (zh) * 2014-11-25 2016-06-22 中国科学院大连化学物理研究所 一种免疫吸附高分子微球及其制备和应用
CN105688841B (zh) * 2014-11-25 2018-02-23 中国科学院大连化学物理研究所 一种免疫吸附高分子微球及其制备和应用
CN106140110A (zh) * 2015-04-16 2016-11-23 中国科学院大连化学物理研究所 一种低密度脂蛋白吸附剂的制备方法
CN106140110B (zh) * 2015-04-16 2018-01-16 中国科学院大连化学物理研究所 一种低密度脂蛋白吸附剂的制备方法
CN110711571A (zh) * 2019-07-08 2020-01-21 中国海洋大学 一种适应于鱼类原肌球蛋白纯化的琼脂糖硼酸亲和材料的制备方法
CN110711571B (zh) * 2019-07-08 2021-06-22 中国海洋大学 一种适应于鱼类原肌球蛋白纯化的琼脂糖硼酸亲和材料的制备方法
CN111659355A (zh) * 2020-06-23 2020-09-15 武汉瑞法医疗器械有限公司 烷基化修饰的乙肝病毒免疫吸附剂及其制备方法
CN111659355B (zh) * 2020-06-23 2022-12-13 武汉瑞法医疗器械有限公司 烷基化修饰的乙肝病毒免疫吸附剂及其制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4542016A (en) Non-a non-b hepatitis surface antigen useful for the preparation of vaccines and methods of use
JPS62242628A (ja) プロテインa−シリカ免疫吸着剤及びその製造方法
Hantz et al. Non‐A, non‐B hepatitis: Identification of hepatitis‐B‐like virus particles in serum and liver
CN101602805B (zh) 用于纯化手足口病免疫球蛋白的琼脂糖亲和介质及其制备方法
CN105126784B (zh) 吸附剂及其制备方法、用于血液灌流的吸附装置
CN101628135A (zh) 特异性清除血液中病毒粒子的亲和吸附柱及其制备方法
Nishioka et al. Antibody to the hepatitis C virus in acute hepatitis and chronic liver diseases in Japan
CN1431025A (zh) 一种血液内乙型肝炎病毒免疫吸附柱
CN111659355B (zh) 烷基化修饰的乙肝病毒免疫吸附剂及其制备方法
CN103111270B (zh) 一种乙型肝炎抗原蛋白的吸附材料及其制备方法
JPH0585526B2 (zh)
CN102018955A (zh) 一种病毒性疫苗大规模生产的纯化方法
CN101961512A (zh) 一种乙型肝炎病毒亲和吸附柱及其制备方法
WO1981000050A1 (en) Process for producing hepatitis b vaccine
CN1250284C (zh) 甲型肝炎灭活疫苗
CN107304230A (zh) 一种抗犬细小病毒精制抗体及其制备方法
CN112375142B (zh) 静注新型冠状病毒人免疫球蛋白的制备方法
Grabow et al. Isolation and purification of hepatitis-associated antigen by affinity chromatography with baboon antiserum
CN1457899A (zh) 血液内病毒免疫吸附清除系统
JPS63197462A (ja) 抗−ヒトIgM免疫吸着剤およびその製造方法
CN114210310B (zh) 乙型肝炎病毒和HBsAg免疫吸附材料的制备方法及应用
CN109627334A (zh) 一种纳米抗体、以该纳米抗体为配基的吸附剂及其用途
CN1872101A (zh) 具抗病毒作用的小紫金牛提取物及其提取方法和应用
JP4942034B2 (ja) 自己抗体吸着材及び体外循環モジュール
Kitagawa et al. Anti-poly (I)· poly (C) antibody bound to cellulose and its use in the specific separation of double-stranded RNAs

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C12 Rejection of a patent application after its publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication