CN105688841A - 一种免疫吸附高分子微球及其制备和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及血液净化领域，具体涉及一种用于免疫吸附高分子吸附剂的制备方法。其中用于免疫吸附的高分子吸附剂包括作为吸附剂基质的高分子载体和化学共价键合在载体表面的配基，其中所述配基包括色氨酸和苯丙氨酸。本发明所述的免疫吸附高分子吸附剂对IgG致病因子具有良好的清除效果。

Description

一种免疫吸附高分子微球及其制备和应用

技术领域

本发明属于高分子领域，涉及一种免疫吸附高分子微球制备方法及应用。

背景技术

免疫吸附(Immunoadsorption，IA)疗法是指通过体外循环，利用抗原-抗体免疫反应除去血浆中的致病因子或利用吸附材料除去血浆中与免疫有关的致病因子，达到治疗疾病目的的技术。免疫吸附疗法是在血浆置换基础上发展起来的新技术，是血液净化的重要组成部分。

自1979年Terman首次采用体外DNA免疫吸附技术成功治疗1例系统性红斑狼疮患者以来，该项技术日趋完善，并已广泛应用于多种风湿免疫病的治疗。2001年在英国召开的欧洲第一届免疫吸附研讨会上，与会专家一致认为免疫吸附是继药物、手术治疗风湿免疫病之后的一种重要方法和前沿技术，它能使患者平稳地度过危重期，最大限度地提供“治疗窗口期”。免疫吸附治疗的关键部分是吸附柱，包括载体部分、配体部分及两者间链接方式。与吸附对象(致病物质)发生吸附反应的核心部分称为载体，固定于载体上、具有免疫吸附活性的物质称为配体，两者间通过交联或耦联的方式相互作用。配体的吸附活性本质是与吸附对象(致病物质)之间的选择性或特异性亲和力，即分子间相互作用，包括生物学亲和力(如抗原-抗体反应)和物理化学亲和力(如疏水交互作用)。

目前可用于免疫吸附柱配体的物质有葡萄球菌A蛋白、小牛血清、多克隆抗人IgG抗体(Ig-Therasorb吸附)、苯丙氨酸(PH-350和PH-250吸附)、色氨酸(TR-350吸附)、MedisorbaMG-50吸附柱、硫酸葡聚糖纤维素(DSC)、多粘菌素B纤维柱(PMX-F)等。用于免疫吸附柱的基质有琼脂糖、活性炭、碳化树脂、聚乙烯醇微球等基质。

高分子聚合物吸附树脂具有较大的比表面积和适当的孔径，键合配体后对某些特定离子或分子有选择性亲和作用，已经成为重要的有机功能材料之一。高分子微球的制备方法有多种，经典方法包括悬浮聚合法、分散聚合法、乳液聚合发法、沉淀聚合法等等，各种方法制备的微球的直径尺寸、孔径分布和比表面积大小各不相同，微球直径的分散度也存在差异。

本发明采用悬浮聚合方法以甲基丙烯酸缩水甘油酯为单体，双季戊四醇五丙烯酸酯为交联剂，制备得到易于衍生、交联度高、机械强度大及亲水性好的环氧树脂，并在其上键合色氨酸或苯丙氨酸得到免疫吸附树脂。

发明内容

本发明采用悬浮聚合方法以甲基丙烯酸缩水甘油酯为单体，双季戊四醇五丙烯酸酯为交联剂，在致孔剂的存在下制备得到粒径在100μm－500μm范围的多孔微球树脂。用无水乙二胺与树脂上的环氧基团反应引入氨基。随后用戊二醛与带有氨基的树脂反应得到带有醛基的树脂。最后把色氨酸或苯丙氨酸水溶液与树脂混合进行反应得到免疫吸附树脂。

具体包括如下内容：

(1)多孔环氧树脂的制备

配制含有分散剂的水溶液，将甲基丙烯酸缩水甘油酯、双季戊四醇五丙烯酸酯、引发剂和致孔剂的混合油相加入水溶液中，加热搅拌得到多孔微球树脂。

(2)醛基树脂制备

首先用无水乙二胺与环氧树脂混合，加热搅拌得到胺基树脂，随后把胺基树脂与戊二醛溶液进行混合，制备得到醛基树脂。

(3)免疫吸附树脂的制备

用色氨酸水溶液与醛基树脂反应得到免疫吸附树脂。

上述反应中所述引发剂为过氧化苯甲酰，引发剂相对于单体的质量百分数为0.5－10％。

所述致孔剂可选用甲苯、乙苯、正己烷、正庚烷、正辛烷、正庚醇、邻苯二甲酸酯类或上述致孔剂之间不同体积比的混合物，致孔剂相对于单体的质量比例在50-200％。

所述分散剂为聚乙烯醇和明胶，两者之间的质量比例1:1-6，分散剂与水的比例为0.4-8％。

所述加热搅拌通常在150-400r.p.m.，反应温度通常在70-80℃。

所述无水乙二胺与环氧树脂的反应在室温下进行，两者之间的质量数为1-5:1。

所述的胺基化反应的温度为60-90℃，反应时间为8-12小时，醛基化反应的温度为30-50℃，反应时间为8-12小时。

本发明所述的免疫吸附高分子吸附剂对IgG致病因子具有良好的清除效果。

附图说明

图1为交联剂双季戊四醇五丙烯酸酯结构示意图；

图2为免疫吸附树脂扫描电镜图片。

具体实施方案

实施例1

(1)多孔环氧树脂的制备

配制含聚乙烯醇为10g/L和明胶为20g/L的水溶液1L作为悬浮聚合法制备环氧树脂反应体系的水相溶液。将120mg过氧化苯甲酰溶于含有12mL甲基丙烯酸缩水甘油酯、3mL双季戊四醇五丙烯酸酯和18mL正庚烷的混合溶液中，将该油性混合溶液加入到60mL水溶液中，得到的油水两相分层的混合体系在室温下以300r.p.m.的机械搅拌速度下搅拌1小时，然后将温度升高至80℃，聚合反应20小时，得到的产物环氧树脂依次用丙酮和乙醇洗涤三次后于60℃下真空干燥12小时后备用。

醛基树脂制备

把100mL乙二胺加入30g环氧树脂里，在80℃下反应5小时。得到的产物胺基树脂与100mL的戊二醛水溶液混合，在30℃搅拌反应10小时得到醛基树脂。

免疫吸附树脂的制备

浓度为200mg/L色氨酸水溶液100mL与30g醛基树脂混合，于30℃反应8小时，得到的产物用依次用水和乙醇洗涤三次后于60℃下真空干燥12小时后备用。

所制备的微球对15mL浓度为300mg/L的IgG溶液中IgG去除率为59.2％。

实施例2

(1)多孔环氧树脂的制备

配制含聚乙烯醇为8g/L和明胶为12g/L的水溶液1L作为悬浮聚合法制备环氧树脂反应体系的水相溶液。将120mg过氧化苯甲酰溶于含有12mL甲基丙烯酸缩水甘油酯、3mL双季戊四醇五丙烯酸酯和18mL正己烷的混合溶液中，将该油性混合溶液加入到60mL水溶液中，得到的油水两相分层的混合体系在室温下以300r.p.m.的机械搅拌速度下搅拌1小时，然后将温度升高至80℃，聚合反应20小时，得到的产物环氧树脂依次用丙酮和乙醇洗涤三次后于60℃下真空干燥12小时后备用。

醛基树脂制备

把100mL乙二胺加入30g环氧树脂里，在80℃下反应5小时。得到的产物胺基树脂与100mL的戊二醛水溶液混合，在30℃搅拌反应10小时得到醛基树脂。

免疫吸附树脂的制备

浓度为200mg/L苯丙氨酸色氨酸水溶液100ml与30g醛基树脂混合，于30℃反应8小时，得到的产物用依次用水和乙醇洗涤三次后于60℃下真空干燥12小时后备用。

所制备的微球对15mL浓度为300mg/L的IgG溶液中IgG去除率为46.3％。

Claims (6)

1.一种免疫吸附高分子微球，其特征在于：所述免疫吸附剂是以高分子微球为载体，免疫吸附配基包括色氨酸和/或苯丙氨酸。

2.一种权利要求1所述免疫吸附高分子微球的制备方法，其特征在于：

1)采用悬浮聚合法制备粒径在100μm－500μm范围的多孔环氧树脂；

2)用无水乙二胺与环氧树脂混合，加热搅拌得到胺基树脂，随后把胺基树脂与戊二醛溶液进行混合，制备得到醛基树脂；

3)用色氨酸和/或苯丙氨酸与醛基树脂反应，得到免疫吸附高分子微球。

3.按照权利要求2所述的制备方法，其特征在于：

步骤1)中悬浮聚合法的具体过程为：配制含有分散剂的水溶液，将聚合单体甲基丙烯酸缩水甘油酯、交联剂双季戊四醇五丙烯酸酯、引发剂和致孔剂的混合油相加入水溶液中，加热搅拌得到多孔微球树脂；

油相与水溶液的体积比1:1-10；

油相中甲基丙烯酸缩水甘油酯、双季戊四醇五丙烯酸酯的质量比例1-8:1；

所述引发剂为过氧化苯甲酰，引发剂为单体质量的0.5－10％；所述致孔剂可选用甲苯、乙苯、正己烷、正庚烷、正辛烷、正庚醇、邻苯二甲酸酯中的一种或二种以上，致孔剂为单体质量的50-200％；

所述分散剂为聚乙烯醇和明胶，两者之间的质量比例1:1-6，分散剂与水的质量比例为0.4-8％。

4.按照权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤2)中无水乙二胺或戊二醛溶液用量为环氧树脂质量的1-5倍；胺基化反应的温度为60-90℃，反应时间为8-12小时；醛基化反应的温度为30-50℃，反应时间为8-12小时。

5.按照权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤3)中反应温度为40℃，反应时间为6-12小时。

6.一种权利要求1所述免疫吸附高分子微球在血液净化中的应用。