CN1417230A - 蝎毒多肽的制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种蝎毒多肽的制备方法，涉及一种生物制药方法，尤其是蝎毒多肽的制备方法，主要为生产蝎毒多肽提供一种新的方法，其制备方法包括装柱、平衡及洗脱、加样、梯度洗脱及全检和产品包装等步骤，由此种制备方法生产出来的蝎毒多肽为一种无色至微黄色液体，可用于生产蝎毒多肽冻干粉制剂，广泛用于医疗行业。
Description
技术领域
本发明涉及一种生物制药方法，尤其是蝎毒多肽的制备方法。
背景技术
在传统的中医药学中，全蝎有悠久的药用历史，近年来有关蝎毒的研究与应用愈来愈受到人们的重视。研究认为蝎毒素是全蝎药理作用的主要成份，有较强的中枢镇痛作用。目前有的已用于疾病的治疗。中国专利申请号93109133、97120965和98101335公开的专利申请文件中，公开了蝎毒注射液，及其制取方法，有的采用多卡因药物联合配用蝎毒注射液有的采用不破坏蛋白质晶体蝎毒配制注射液，其不足之处在于其蝎毒注射液中蝎毒原料均以蝎毒蛋白质混合物存在，其质量不够稳定，直接影响了使用效果；由于配制制剂的原料没有具体定性、定量指标，难于满足国家对药品原料质量的要求。
发明内容
针对当前蝎毒药品中存在的不足，本发明的目的在于公开一种制备蝎毒多肽的方法，用该方法可以获取较高纯度的蝎毒多肽，以蝎毒多肽为主要原料可制取蝎毒多肽冻干粉制剂等。它是一种纯度较高、活性较强、质量可控、性能稳定，疗效确切的药物。
本发明的制备方法步骤如下：
①装柱：用CM-Sephadex G-50层析填料装柱；②平衡及洗脱：用缓冲液平衡，再用缓冲液洗脱；③加样：将市售蝎毒样品用缓冲液稀释后上样；④梯度洗脱：用缓冲液和氯化钠溶液进行梯度洗脱；⑤洗脱液的收集与检测；⑥合并收集液：根据检测结果合并收集液；⑦浓缩与脱盐；⑧低温保存；⑨全检；⑩产品包装，图1为其生产工艺流程图。
以上制备方法要求在无菌、恒温(10℃)冷柜中进行。
采用本方法制备的产品是一种无色至微黄色液体，其收率为20％-30％，其相对分子质量在1000-10000个单位的蝎毒多肽，其纯度高于90％。本制备方法工艺简单，易于实现自动化生产，并能实现微机工作站控制质量。
附图说明
图1为其生产工艺流程图。
图2为蝎毒多肽高压液相色谱图。
图3为不同分子量蛋白质和多肽的高压液相色谱图。
具体实施方式
下面对本发明做进一步描述：
取CM-Sephadex G-50层析柱，其柱长为26×30cm。用10倍于柱体积的缓冲液冲洗平衡层析柱，待平衡好柱后上样。将1g蝎毒样品(淡黄色粉末)溶于10ml磷酸盐缓冲溶液中，待柱床上的缓冲液基本吸附后，用滴管沿柱壁轻轻注入样品(上样)，用缓冲液稀释余下的样品，每次1-2ml，分两次加入即可。然后将缓冲液旋转式加入一段液柱，上盖、收集，流速为5ml/1200秒。将100ml左右的缓冲液用完后，改为梯度洗脱。梯度洗脱：20管前为平衡液洗脱；21管后加NaCL进行梯度洗脱，搅拌瓶为400ml磷酸盐缓冲溶液(10mM的磷酸盐缓冲液，PH＝6.4)，储存瓶为1MNaCL的磷酸盐缓冲液400ml:3、直至收集150管为止。检测以后，根据检测结果合并；合并65-82管，83-103管，在无菌、低温下超滤，待紫外检测确定浓度后，置密闭瓶中在-20℃以下低温保存。
成品蝎毒多肽的质量控制方法采用高效液相色谱法，具体条件为：
色谱柱：日本东洋曹达公司TSK-125。
流动相：PH＝7.0的K2HPO4t和KH2PO4缓冲液加50ml异丙醇到1000ml。
流速：1ml/min。
柱压：3Mpa
柱测：uv-280nm。
柱测结果：样品色谱图见附图2。
不同分子量的标准物质图谱见附图3。
柱测结果表明：本方法提取得到的蝎毒分子量在1000-10000之间。
Claims (2)
1.一种蝎毒多肽的制备方法，其特征在于它包括如下步骤：
①装柱：用CM-Sephadex G-50层析填料装柱；
②平衡及洗脱：用缓冲液平衡，再用缓冲液洗脱；
③加样：将市售蝎毒样品用缓冲液稀释后上样；
④梯度洗脱：用缓冲液和氯化钠溶液进行梯度洗脱；
⑤洗脱液的收集与检测；
⑥合并收集液：根据检测结果合并收集液；
⑦浓缩与脱盐；
⑧低温保存：于密闭瓶中在-20℃以下低温保存；
⑨全检；
⑩产品包装。
2.按照权利要求1所述蝎毒多肽的制备方法，其特征在于所述制备方法要求在无菌、恒温(10℃)的冷柜中进行。
Priority Applications (1)
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| CN 02144756 CN1417230A (zh) | 2002-12-11 | 2002-12-11 | 蝎毒多肽的制备方法 |
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| CN 02144756 CN1417230A (zh) | 2002-12-11 | 2002-12-11 | 蝎毒多肽的制备方法 |
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| CN1417230A true CN1417230A (zh) | 2003-05-14 |
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ID=4750658
Family Applications (1)
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| CN 02144756 Pending CN1417230A (zh) | 2002-12-11 | 2002-12-11 | 蝎毒多肽的制备方法 |
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|---|---|
| CN (1) | CN1417230A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1312176C (zh) * | 2005-04-15 | 2007-04-25 | 赵恩成 | 一种蝎毒多肽及其制备方法 |
| CN107176984A (zh) * | 2017-06-08 | 2017-09-19 | 赵恩成 | 一种蝎肽及其制备方法 |
| CN114031678A (zh) * | 2021-12-08 | 2022-02-11 | 中国科学院新疆理化技术研究所 | 一种条斑钳蝎毒素多肽组分的制备方法及其应用 |
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2002
- 2002-12-11 CN CN 02144756 patent/CN1417230A/zh active Pending
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| CN1312176C (zh) * | 2005-04-15 | 2007-04-25 | 赵恩成 | 一种蝎毒多肽及其制备方法 |
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| CN107176984B (zh) * | 2017-06-08 | 2019-02-15 | 赵恩成 | 一种蝎肽及其制备方法 |
| CN114031678A (zh) * | 2021-12-08 | 2022-02-11 | 中国科学院新疆理化技术研究所 | 一种条斑钳蝎毒素多肽组分的制备方法及其应用 |
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