CN1332019C - 猪苓发酵菌粉及猪苓多糖的生产方法和产品 - Google Patents

Abstract

本发明根据猪苓的生物学特性，采用微生物发酵技术、现代生物提取技术和细胞破壁技术等工序生产出猪苓超细发酵菌粉，并以猪苓超细发酵菌粉为原料加工生产出剂型为胶囊、菌片或冲剂等猪苓发酵菌粉产品；继而又以猪苓超细发酵菌粉为原料，通过热水浸提和生物活性酶浸提混合法以及吸附法等工序制备出猪苓多糖干粉或冻干粉以及剂型为冲剂、软、硬胶囊或口服液等剂型的其它猪苓多糖产品。其技术方案的实施对扩大猪苓的应用范围，提高猪苓的药理功能等方面均具有积极的意义。

Description

猪苓发酵菌粉及猪苓多糖的生产方法和产品

所属技术领域

本发明内容属于生化物品制备技术领域，涉及一种利用猪苓菌种制备猪苓发酵菌粉的方法和产品以及一种根据以上菌粉为原料提取猪苓多糖的方法和产品。

背景技术

猪苓(学名：Polyporus umbellatus，英文名：Agaric，Umbellate PoreFungus)是主产于我国陕西、山西、四川、云贵、湖北等地的食药兼性真菌，属于猪菌亚门、层菌纲、无隔胆子菌亚纲、非褶菌目、多孔菌科、多孔菌属。猪苓的干燥菌核(子实体)是一种为我国历代中医常用的中药材，其药理作用明显，治疗范围广泛。根据《神农本草经》和《图经本草》记载，先人用之，多治小便不利、水肿胀满、淋浊带下、妊娠子肿胎肿、脾湿引起的泄痢和痰湿引起的湿虐等证。而今人用之则多针对心脏功能不全引起的水肿以及由各种原因发生的胸水、腹水、下肢浮肿和泌尿系统诸疾患。考据历代医书文献，几乎都把猪苓的利水道功效作为首选，如清代临床巨匠叶天士大师在解释猪苓的功效时论述到“猪苓味甘益脾，脾统血，血旺故耐老；辛甘益肺，肺主气，气和故身轻也”。近代科学在总结前人经验的基础上，将猪苓的药理作用予以进一步发扬光大，高度地利用了猪苓的功效，尤其是将猪苓多糖应用在对晚期癌症的临床治疗中，取得了满意疗效。目前在临床实践中业已充分证明，猪苓多糖是一种有效的免疫增强剂，使用后能明显提高机体免疫机能。又据《中国科技报》近期报道，将猪苓多糖与乙肝疫苗合用对治疗慢性乙型肝炎具有良好疗效。由此可见，随着猪苓药理功能的扩展，人类对猪苓及其产品类型的需求量也越来越多。由于过去长期以来猪苓的生产都是以野生采挖为主，野生猪苓生长缓慢且资源紧缺，所以开发猪苓产品受到多种条件的限制；近年来，随着科学技术的发展，猪苓菌种的分离工作已经完成，猪苓的半人工栽培技术以及生物培养技术均已经得到广泛的推广，但依然存在有产量有限和产品内猪苓多糖含量低等问题，难以满足日益增长的国内外市场对猪苓的需求。为此，本领域迫切需要开发新的生产猪苓产品的方法，以扩大猪苓应用范围进而充分发挥其药理作用，同时也为我国中草药进入国际市场及生产标准化高附加值产品创立一条道路。

发明内容

本发明的目的之一在于针对已有技术现状，提供一种更利于为人们吸收的猪苓发酵菌粉的生产方法及产品；本发明的另一个目的在于针对猪苓子实体中猪苓多糖含量低、生产数量少及提取成本高的问题，提供一种以上述猪苓发酵菌粉为原料提取猪苓多糖的生产方法及产品，用以进一步提高猪苓的药理功能。

用于实现上述发明目的的整体设计思路是这样的：根据猪苓的生物学特性，采用微生物发酵技术和现代生物提取技术和细胞破壁技术等工序生产出猪苓超细发酵菌粉，并以猪苓超细发酵菌粉为原料加工生产出剂型为片剂、冲剂或胶囊剂的猪苓发酵菌粉产品；继而又以猪苓超细发酵菌粉为原料，通过热水浸提和生物活性酶浸提混合法及吸附法等工序制备出猪苓多糖干粉或冻干粉以及剂型为冲剂、软胶囊剂、硬胶囊剂或口服液剂等的其它猪苓多糖产品。

具体实施方式

本发明所述的生产方法与产品包括利用猪苓菌种为原料，通过微生物发酵培养法制备猪苓超细发酵菌粉的方法与产品以及以猪苓超细发酵菌粉为原料制备猪苓多糖的方法与产品两部分内容。

本发明所述猪苓超细发酵菌粉以及剂型产品的生产方法由以下制备工序构成：

(一)、利用猪苓菌种，通过微生物发酵培养法生产猪苓发酵菌丝体，包括固体发酵培养基培养法(下称固体发酵培养法)和液体发酵培养基培养法(下称液体发酵培养法)两种，其中：

a、固体发酵培养法中所用培养基内各组分物的重量百分比含量为：

麸皮    10～20％，玉米粉      3～10％，

土豆    10～20％，大米        10～20％，

有机氮  3～5％，  蛋白胨      3～5％，

酵母膏  2～5％，  磷酸二氢钾  1％，

硫酸镁  0.5％，   其余为水，

固体发酵的条件为：培养温度为15～32℃，发酵培养周期10～30天，培养基pH值控制在5～9之间，而且要求先酸后碱；

b、液体发酵培养法中所用培养基内各组分物的重量百分比含量为：

麸皮  5～10％，   玉米粉  3～10％，

土豆  2～5％，    蛋白胨  3～5％，

酵母膏  2～5％，  磷酸二氢钾  1％，

硫酸镁  0.5％，   其余为水，

液体发酵的条件为：培养温度为15～32℃，发酵培养周期5～13天，培养基pH值控制在5～9之间，而且要求先酸后碱；

(二)、将经固体发酵培养或液体发酵培养产生的猪苓发酵菌丝体低温烘干后，进行粗粉碎，再根据中药现代化超细粉碎要求，利用微粉技术将其粉碎成～300目(粒径4～8微米)的超细猪苓发酵菌粉；然后根据市场的不同要求和生产目的，将菌粉加工成菌片、冲剂、胶囊剂等产品。产品的整个制备过程温度不能超过65℃，产品副料选择常规药用产品的副料，副料的含量占2～8％。

经上述工艺制得的超细猪苓发酵菌粉的细胞破壁率≥98％，由于细胞及微粉的粒子大小是人体吸收利用食品和药品的基础，产品的功效成分基本存在于细胞内，因此当细胞破壁后，胞内的有效成分就会释放出来，细胞破壁率越高，产品的药理功能越好，而且起效速度也就越快，兼之其组织形态也达到国际制药行业对产品原料的最高要求，使产品可以一次到位直接与国际市场接轨。经对成品所做的检测分析结果证明：超细猪苓发酵菌粉产品的有效成分猪苓多糖含量(8～25％)高于猪苓子实体有效成分猪苓多糖含量(野生猪苓子实体中猪苓多糖含量是0.5％)，且野生猪苓子实体中猪苓多糖和猪苓菌粉中猪苓多糖的分子结构和药理功能相同。

本发明更深层的研发产品是以超细猪苓发酵菌粉为原料制备的猪苓多糖干粉或冻干粉及其产品。以往本领域由于受猪苓原料来源和猪苓子实体多糖含量很少的影响，国内外市场仅有猪苓多糖针剂注射液这种单一产品。由于针剂注射液生产技术要求严格，使用设备要求精密，目前本领域对猪苓多糖针剂注射液的生产水平尚还仅仅停留在原料的粗加工水平上，而且针剂注射液不仅产品成本高，同时还存在有因分子量大以致人体不易吸收的缺陷。本发明针对现有技术的上述缺陷，采用热水浸提和生物活性酶浸提混合方法作为猪苓多糖的提取方法，该方法可克服现有技术的缺陷，不仅能够降低产品成本，而且还可有效提高人体吸收利用猪苓多糖的能力。

由超细猪苓发酵菌粉生产猪苓多糖干粉或冻干粉及其剂型产品的工艺路线是：将猪苓发酵菌粉放入50～70℃的热水中，获得40～80％的液体，加入1～5％的生物活性酶，每份量生物活性酶的组成是1单位量淀粉酶，0.5单位量糖化酶，1单位量蛋白酶，浸提1～6小时，将提取液温度提高到90～115℃；继续浸提6～12小时，提取液用乙醇沉淀后，过滤得粗制品，加三倍量水及0.2～5％的鞣酸，去除粗制品中的杂蛋白，对去除过杂蛋白的粗制品用活性碳脱色后加乙醇沉淀，沉淀物用中性氢氧化物质如氢氧化铝等色谱柱吸附后用水洗脱，用乙醇使之沉淀，对沉淀物进行低温干燥或冷冻干燥后获得猪苓多糖干粉或猪苓多糖冻干粉；然后根据市场的不同要求和生产目的，将猪苓多糖干粉或猪苓多糖冻干粉加工成冲剂、软胶囊剂、硬胶囊剂或口服液剂等产品，产品中猪苓多糖含量为15～85％。

在上述剂型产品中，应用猪苓多糖生产治疗乙肝的专用制剂，将是本发明的核心产品，其体剂型为冲剂、胶囊剂和口服液剂。

与传统的猪苓多糖提取方法相比，采用本发明所述生产方法生产的产品多糖含量高，猪苓子实体经微生物发酵提取和生物活性酶浸提等工序后，产品内原有的大量粗纤维已经被分解成人体可以利用的小分子物质，原有复杂的大分子结构物质也被转化为不同人体可以利用的中、小分子结构物质，这样就大大提高了产品活性，增强了产品的药理功能。本发明的生产工艺完全实行生物技术生产，不采用任何化学物质，应用的原料采用天然物质，不产生任何污染问题，所获得产品属于具有高附加值的药用特效功能产品，技术含量高，市场前景好，其技术方案的实施可扩大猪苓的应用范围，提高猪苓的药理功能，方便患者食用，同时也适应我国发展中药现代化的需要，符合国家产业化开发政策，因而具有显著的技术创新性和实用性。

实施例1、利用猪苓菌种采用固体发酵生产超细猪苓发酵菌粉

A、猪苓菌种的扩大培养

菌种：猪苓菌种Polyporus umbellatus*(Pers)Fries购自中国科学院微生物研究所)

斜面培养基：常规PDA培养基加少量酵母膏

二级菌种培养基：利用上述固体培养基配方，采用常规方法生产固体发酵需要的菌种，

培养条件是：温度为18～28℃，发酵培养周期10天左右，培养基pH值为5～8。采用静止培养方法

B、固体发酵

严格按照固体发酵培养基配方配制固体发酵培养基，然后，将培养基进行高温灭菌，当温度下降到50℃以下时，按2～8％的接种量接种，静止或者进行搅拌后，培养。培养温度为15～32℃，发酵培养周期10～30天，培养基pH值为5～8，要求调整pH先酸后碱；

C、当发酵成熟时，将培养物进行干燥和粉碎，采用沉降分离技术，进行菌体和培养基分离，收集菌体后，再进行干燥，然后，采用细胞破壁粉碎技术，获得成品粒度为-300目的超细猪苓发酵菌粉。

实施例2、利用猪苓菌种采用液体发酵生产超细猪苓发酵菌粉

A、猪苓菌种的扩大培养

菌种：猪苓菌种Polyporus umbellatus*(Pers)Fries购自中国科学院微生物研究所)

斜面培养基：常规PDA培养基加少量酵母膏

二级菌种培养基：利用上述液体培养基配方，采用常规方法生产液体发酵需要的菌种。

培养条件是：温度为18～28℃，发酵培养周期3～5天，培养基pH值为5～8，采用遥床培养方法，遥床转速为100rpm。

B、液体发酵

严格按照液体发酵培养基配方配制液体发酵培养基，然后，将培养基进行高温灭菌，当温度下降到50℃以下时，按2～8％的接种量接种后，进行搅拌培养。培养温度为23℃，发酵培养周期5天，培养基pH值为5～8，要求调整pH先酸后碱；

C、当发酵成熟时，将培养物进行喷雾干燥，然后，采用细胞破壁粉碎技术，获得成品粒度为-300目的超细猪苓发酵菌粉。

实施例3、利用超细猪苓发酵菌粉生产猪苓多糖干粉或冻干粉

将固体或液体发酵生产的超细猪苓发酵菌粉放入内盛50～70℃热水的水浴锅中，加入1～5％的生物活性酶，每份量生物酶的组成是1单位量淀粉酶，0.5单位量糖化酶，1单位量蛋白酶，搅拌混合，静置浸提3～4小时，将提取液温度提高到90～115℃；继续浸提7～10小时，提取液用乙醇沉淀后，过滤得粗制品，加三倍量水及0.5％的鞣酸去除粗制品中的杂蛋白，对去除过杂蛋白的粗制品用活性碳脱色后加乙醇沉淀，沉淀物用中性氢氧化铝等色谱柱吸附后用水洗脱，用乙醇使之沉淀，对沉淀物进行冷冻干燥后获得猪苓多糖冻干粉；

实施例4、利用超细猪苓发酵菌粉加工生产颗粒冲剂；胶囊；菌片。

A.颗粒冲剂的配方和生产工艺

配方：超细猪苓发酵菌粉60～90％，麦芽糊精10～40％，

操作：按比例将各组分放置到混合机中充分混合，采用造粒机进行造粒，干燥，分计量进行包装，经⁶⁰Co 7kGy照射，检验合格入库。

B.菌片的配方和生产工艺

利用颗粒冲剂的配方和生产工艺生产的颗粒或者喷雾干燥生产的超细猪苓发酵菌粉直接压片，压片机选用单冲压片机或旋转压片机，然后，干燥，分计量进行包装，经⁶⁰Co 7kGy照射，检验合格入库。

C.硬胶囊的配方和生产工艺

组成：超细猪苓发酵菌粉100％，合格空胶囊；

操作：将超细猪苓发酵菌粉装入胶囊，抛光，包装，经⁶⁰Co 7kGy照射，检验合格入库。

实施例5、利用猪苓多糖冻干粉加工生产颗粒冲剂；胶囊；菌片；口服液

A.棵粒冲剂的配方和生产工艺

配方：猪苓多糖冻干粉60～90％，麦芽糊精10～40％，

操作：按比例将各组分放置到混合机中充分混合，采用造粒机进行造粒，干燥，分计量进行包装，经⁶⁰Co 7kGy照射，检验合格入库。猪苓多糖含量是15-80％

B.菌片的配方和生产工艺

利用颗粒冲剂的配方和生产工艺生产的颗粒或者猪苓多糖菌粉直接压片，压片机选用单冲压片机或旋转压片机，然后，干燥，分计量进行包装，经⁶⁰Co 7kGy照射，检验合格入库。

C.软胶囊的配方和生产工艺

组成：猪苓多糖冻干粉100％，胶料(明胶；甘油，山梨醇)

操作：采用压制法和滴制法生产，包装，经⁶⁰Co 7kGy照射，检验合格入库。

D.口服液的配方和生产工艺

将猪苓多糖冻干粉用软化水进行定量稀释，根据生产目的，添加副料，例如，白砂糖，葡萄糖，麦芽低聚糖等，混合过滤、分装、杀菌，杀菌条件是，在70～80℃的热水中进行加热杀菌25～40min，用冷水进行冷却至常温，擦干瓶外，包装入库。

实施例6、利用猪苓多糖冲剂、胶囊剂和口服掖剂形成的乙肝疫苗的辅助治疗制剂

将经过实施例5所述生产过程制备的猪苓多糖冲剂、胶囊剂或口服掖剂分别按每3～9克量与10～100ppm量的乙肝疫苗配组，形成剂型为冲剂、胶囊剂和口服掖剂的乙肝疫苗的辅助治疗制剂。

Claims (5)

1、一种用于生产猪苓发酵菌粉的方法，其特征在于利用猪苓菌种通过固体发酵培养基培养法或液体发酵培养基培养法制得猪苓发酵菌丝体，将猪苓发酵菌丝体低温烘干后，进行粗粉碎，然后再将其粉碎成300目的超细猪苓发酵菌粉，其中

在固体发酵培养基培养法中所用培养基内各组分物的重量百分比含量为：

麸皮      10～20％，  玉米粉     3～10％，

土豆      10～20％，  大米       10～20％，

有机氮    3～5％，    蛋白胨     3～5％，

酵母膏    2～5％，    磷酸二氢钾 1％，

硫酸镁    0.5％，     其余为水，

固体发酵的条件为：培养温度为15～32℃，培养周期10～24天，培养基pH值控制在5～9之间，而且先酸后碱；

在液体发酵培养基培养法中所用培养基内各组分物的重量百分比含量为：

麸皮      5～10％，   玉米粉      3～1 0％，

土豆      2～5％，    蛋白胨      3～5％，

酵母膏    2～5％，    磷酸二氢钾  1％，

硫酸镁    0.5％，     其余为水，

液体发酵的条件为：培养温度为15～32℃，培养周期5～13天，培养基pH值控制在5～9之间，而且先酸后碱。

2、一种猪苓发酵菌粉产品，其特征在于所说的产品为根据权利要求1所述生产方法制得的剂型为片剂、冲剂或胶囊剂的猪苓发酵菌粉产品。

3、一种用于生产猪苓多糖的方法，其特征在于以根据权利要求1所述方法制得的猪苓发酵菌粉为原料，采用热水浸提和生物活性酶浸提混合提取法，制得猪苓多糖干粉或猪苓多糖冻干粉。

4、如权利要求3所述的用于生产猪苓多糖的方法，其特征在于将根据权利要求1所述方法制得的猪苓发酵菌粉放入50～70℃的热水中，获得40～80％的液体，加入1～5％的生物活性酶，每份量生物活性酶的组成是1单位量淀粉酶，0.5单位量糖化酶，1单位量蛋白酶，浸提1～6小时，将提取液温度提高到90～115℃；继续浸提6～12小时，提取液用乙醇沉淀后，过滤得粗制品，加三倍量水及0.2～5％的鞣酸，去除粗制品中的杂蛋白，对去除过杂蛋白的粗制品用活性碳脱色后加乙醇沉淀，沉淀物用中性氢氧化物色谱柱吸附后用水洗脱，再用乙醇使之沉淀，对沉淀物进行低温干燥或冷冻干燥后获得猪苓多糖干粉或猪苓多糖冻干粉。

5、一种猪苓多糖产品，其特征在于所说的产品是以根据权利要求3或4所述生产方法获得的猪苓多糖干粉或猪苓多糖冻干粉为原料，经常规法加工制成的剂型为冲剂、软胶囊剂、硬胶囊剂或口服液剂的猪苓多糖产品，产品中猪苓多糖含量为15～85％。