CN1313863A - 尿激酶和血管形成的抑制剂 - Google Patents

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Abstract

提供了具有尿激酶抑制剂和减弱或抑制血管形成活性的新颖化合物。这些化合物在P1处具有精氨酸或精氨酸拟醛,或精氨酸酮酰胺基团。这些化合物可用于在体外监测纤溶酶激活物水平,和在体内治疗通过尿激酶抑制或减弱的活性而改善的情况,和治疗血管形成与病理情况相关的病理情况。

Description

尿激酶和血管形成的抑制剂
相关文献的交叉参考
本申请是一起指定并在申请过程中的美国系列号09/121,921(1998年6月24日提交)的部分延续，其公开部分在此引用以作参考。
发明领域
尿激酶是一种与肿瘤细胞转移、新生血管化和其它活性有关的酶。本发明的一个目的是提供新颖化合物，其作为尿激酶抑制剂是有活性的，能被用来抑制尿激酶的活性，从而弱化其有害作用。本发明的另一个目的是提供新颖化合物，其抑制血管形成，尤其是与病理情况有关的血管形成。
发明背景及介绍
尿型纤溶酶激活物(uPA；尿激酶)是胰蛋白酶/胰凝乳蛋白酶家族中的丝氨酸蛋白酶。在其生理学状态下，发现uPA有三种形式：单链前-uPA、双链uPA、和低分子量uPA(缺少N-末端功能域)。通过切开K158-1159处的肽键，将酶原前-uPA转化成u-PA。得到的双链uPA通过二硫键连接，具有约50kD的分子量，和C-末端丝氨酸蛋白酶功能域。
与其受体uPAR结合后，uPA活性集中在细胞表面。uPAR是一种单链糖基磷脂酰肌醇(GPI)-锚定的膜受体。uPAR的N-末端92个氨基酸在与uPA和前-uPA结合中起到了支配作用。upA受体已定位在T-细胞、NK(细胞、单核细胞和中性粒细胞，以及血管内皮细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞、角化细胞、胎盘滋养母细胞、肝细胞和各种肿瘤细胞上。
前-uPA转化成uPA(主要发生在细胞表面的uPAR处)后，uPA将纤溶酶原活化纤溶酶。对于人纤溶酶原，活化发生在PGR-VV残基处的切割后，或对于牛纤溶酶原，在残基SGR-Ⅳ处。由于纤溶酶原也存在于细胞表面，该活化级连将uPA和纤溶酶活性集中在细胞膜上。纤溶酶具有许多功能，包括活化其它uPA和其它酶，消化纤维蛋白，和消化胞外基质(ECM)的成分。消化肿瘤周围的ECM除去了作为转移细胞物理屏障的ECM，使这些细胞能自由脱离原发瘤并侵犯第二位点。在“癌症转移中的尿激酶型纤溶酶激活物系统：综述”，Andreasen等，Int.J.Can.72:1-22(1997)中提供了对uPA/uPAR系统在癌症转移中的作用。
在某些肿瘤，尤其是乳腺癌中已注意到在uPA高水平和转移高水平，以及预后不良之间的关联[Quax等，细胞生物学杂质，115:191-199(1991)；Duffy等，癌症研究，50:6827-6829(1990)]。例如，肺肿瘤[Oka等，癌症研究，51:3522-3525(1991)]，膀胱肿瘤[Hasui等，Int.J.Cancer 50:871-873(1992)]，胃肿瘤[Nekarda等，柳叶刀，343:117(1994)]，子宫癌[Kobayashi等，癌症研究54:6539-6548(1994)]，卵巢肿瘤[Kuhn等，Gynecol.Oncol.55:401-409(1994)]，肾脏肿瘤[Hofmann等，癌症78:487-492(1996)]，脑肿瘤[Bindah]等，神经癌杂志22:101-110(1994)]，和软组织肉瘤[Choong等，Int.J.Cancer(Pred.Oncol.)69:268-272(1996)]已显示了高水平的uPA和/或uPA活性，以及高水平的转移。已报道uPA的过度产生导致体内前列腺癌细胞的骨骼转移增加[Achbarou等，癌症研究，54:2372-2377(1994)]。
已显示抑制或降低uPA活性，或中断/抑制uPA和其受体(uPAR)之间的相互作用，对维持胞外基质和对转移的抑制作用有积极效果[Ossowski和Reich，细胞35:611-619(1983)；Ossowski，细胞52:321-328(1988)；Ossowski，细胞生物学107:2437-2445(1988)；Wilhelm等，临床实验转移13:296-302(1995)；Achbarou等，癌症研究54:2372-2377(1994)；Crowley等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5021-5025(1993)；Kook等，EMBO J.13:3983-3991(1994)]。这些实验研究的结果提示，uPA催化的纤溶酶原活化是肿瘤发展、局部肿瘤侵袭和/或远端转移形成的限速步骤[Andreasen等，Iht.J.Canc.72:1-22(1997)]。
据认为uPA系统对细胞迁移和侵袭的作用是由于纤溶酶介导的胞外基质降解的蛋白酶解作用，以及更主要的是由于uPA受体与胞外基质成分的直接作用引起的。胞外基质的降解使得转移细胞能侵入基质，而uPA受体和基质自身的相互作用帮助了细胞的迁移。uPA/纤溶酶系统在细胞表面上，或转移细胞的前沿的定位，与uPA在转移中的假定作用是一致的[Plesner等，干细胞15:398-408(1997)]。
uPAR与玻连蛋白(一种胞外基质的成分)的相互作用，介导细胞黏着并在uPAR被uPA结合时，能被增强。细胞表面黏着分子整联蛋白，看来也与该黏着作用有关，尤其是β-1和β-2整联蛋白[Paysant等，Br.J.Haematol.100:45-51(1998)；Simon等，Blood 88:3185-3194(1996)]。CD11b/CD18整联蛋白可与uPA-uPAR复合物结合，并促进带有这些受体的细胞，如中性粒细胞、白细胞的黏着。
uPA/uPAR系统还与新脉管系统的建立、或新血管形成有关。
新脉管系统的建立是维持原发和转移肿瘤生长所必需的。病理性新血管形成也是视网膜疾病、风湿性关节炎、增殖性玻璃体视网膜病、炎症疾病、糖尿病性视网膜病、慢性眼色素膜炎、Fuch’s异色性虹膜睫状体炎、新生血管性青光眼、角膜或视神经新血管形成、血管病、翼状胬肉、青光眼手术小泡衰竭、表皮角化病、瘢痕瘤和息肉形成的特征(见EP 451,130)。不需要的血管发生也会在下列条件下发生，或是下列作用的结果:黄斑部变性、早熟视网膜病、角膜移植排斥、晶状体后纤维增生、流行性角膜结膜炎、维生素A缺乏、隐性眼睛配戴过久、上缘角膜炎、翼状胬肉角膜炎干燥、斯耶格伦病(sogrens disease)、酒糟鼻性痤疮、phylectenulosis、梅毒、除麻风外的分枝杆菌感染、脂类降解、化学消耗、细菌或真菌溃疡、单纯疱疹或带状疱疹感染、原生动物感染、Kaposi’s肉瘤、角膜侵蚀性溃疡、Terrien’s边缘降解、边缘性角质层分离、外伤、风湿性关节炎、系统性狼疮、多动脉炎、Wegeners伯克氏病、巩膜炎(sleritis)、Steven’s Jobnson病、放射状角膜切开术、镰状细胞血症、肉样瘤、弹性假黄瘤、Pagets病、静脉或动脉闭合、颈动脉阻塞性疾病、Eales病、Bechets病、近视、视神经陷凹、Stargarts病、扁平部睫状体炎、慢性视网膜剥离、高粘稠度综合征、弓形体病、激光后并发症、维管组织异常增生、血管瘤、Osler-Wever-Rendu、实体瘤、造血骨骼肿瘤(blood borne tumor)、AIDS、眼球新生血管病、骨关节炎、慢性炎症、Crohn’s病、溃疡性结肠炎、横纹肌肉瘤肿瘤、成视网膜细胞瘤肿瘤、Ewing肉瘤肿瘤、神经母细胞瘤肿瘤、骨肉瘤肿瘤、白血病、牛皮癣、动脉粥样硬化、类天疱疮，如美国专利号5,712,291所述的。
曾提到一种uPA/uPAR结合拮抗剂(uPA的EGF-样功能域融合到IgG的Fc上)抑制小鼠B16黑色素瘤的新生血管生成和生长。[Min等，癌症研究56:2428-2433(1996)]。与该发现一致的是，在乳癌中注意到的微脉管密度、血管侵袭和uPA水平之间的关联[Hildenbrand等，Brit.J.Cancer 72:818-823(1995)]。还提到已知的uPA抑制剂阿米洛利抑制各种新生血管形成的病理[Glaser等，EP 451,130；Avery等，Arch.Ophthalmol.108:1474-1476(1990)]。
uPA的主要生理学上的抑制剂有两种，PAI-1和PAI-2，它们是蛋白酶抑制剂中丝氨酸蛋白酶抑制剂家族的成员。丝氨酸蛋白酶抑制剂与其对应蛋白酶的结合涉及各蛋白质的氨基酸之间的大量相互作用，包括在丝氨酸蛋白酶抑制剂反应环(对于PAI-1,Ser-Ala-Arg-Met-Ala(SEQ.ID.NO.1)，对于PAI-2,Thr-Gly-Arg- Thr-Gly(SEQ.ID.NO.2))中的那些。据报道将外源PAI-2引入实验动物中抑制了肺转移的速率[Evans和Lin,Amer.Surg.61:692-697(1995)；Mueller等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 92:205-209(1995)]。PAI-1的抑制转移作用还未一贯显示。在Loskutoff等，美国专利号4,952,512中公开了PAI-1的基因及其重组表达的方法。在Stephens等，美国专利号5,422,090中公开了重组和天然人PAI-2。
被最广泛研究的uPA抑制剂可能在4-取代苯并[b]噻吩-2-甲脒类的抑制剂中，其中B428(4-碘-苯并[b]噻吩-2-甲脒)和B623是其成员[Towle等，癌症研究53:2553-2559(1993)；Brodges等，Bioorg.Med.Chem.1:403-410(1993)；Bridges等，美国专利号5,340,833]。曾提到在接种肿瘤细胞的实验大鼠中输入B428能抑制uPA基因表达，减小原发瘤体积和减少转移[Xing等，癌症研究57:3585-3593(1997)]。提到用B428或B623每日腹腔内处理患肿瘤的小鼠能阻断向肌肉和脂肪的转移，但不能抑制肿瘤诱导的血管形成，或降低自发性肺转移的速率。事实上，B623增强肺转移的形成(Alonso等，乳癌研究和治疗，40:209-233(1996)]。在大鼠前列腺癌同系模型中输入B428也能导致原发瘤体积和肿瘤重量的减小，和转移的减少[Rabbani等，Int.J.Cancer.63:840-845(1995)]。其它已知的uPA抑制剂包括对氨基苄脒，它是uPA和阿米洛利的竞争性抑制剂。己显示两种化合物在实验动物中都能减小肿瘤的尺寸[Jankan等，癌症研究57:559-563(1997)；Billstrom等，Int.J.Cancer 61:542-547(1995)]。近来，报道了在绿茶中发现的一种多酚，表桔儿茶素-3没食子酸(EGCG)能与uPA结合，并抑制其活性[Janlun等，自然387:561(1997)]。那些研究人员总结出，EGCG是一种比阿米洛利弱的uPA抑制剂，但提示EGCG能以比阿米洛利高得多的剂量消耗，而没有毒性作用。Pye等，美国专利号4,165,258中公开了一种uPA的竞争性抑制剂，α-N-苄基磺酰基-对氨基苯丙氨酸。
其它抑制uPA/uPAR系统的方法包括开发一种双功能杂交分子，由uPA的uPAR结合功能域和PAI-2构成，曾提到其在体外抑制uPA并与uPAR结合[Ballance等，欧洲生物化学杂志207:177-183(1992)]。也已研究了uPAR的拮抗剂[Doyle和Rosenberg，美国专利号5,656,726；Min等，癌症研究56:2428-2433(1996)]，如具有和uPA互补的反义寡核苷酸[Wilhelm等，临床实验转移13:296-302(1995)；Iversen和Scholar，美国专利号5,552,390]。Dano等，美国专利号5,519,120中公开了针对uPAR，并提到抑制uPA和uPAR的结合的抗体。提到的抑制尿激酶，以及各种其它丝氨酸蛋白酶的小分子，包括Abe等在美国专利号5,508,385和美国专利号5,153,176中，和Takano等，在药物学实验治疗杂志，271:1027-1033(1994)中公开的那些。
已开发了化合物来直接抑制uPA和uPAR的结合(Crowley等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5021+5025(1993)；Goodson等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA91:7129-7133(1994)；Kobayashi等，英国癌症杂志67:537-544(1993)，和Int.L.Cancer 57:727-733(1994)，和生物化学杂志270:8361-8366(1995)；Lu等，FEBS通信356:56-59(1994)和FEBS通信380:21-24(1996))。
另外，前-肝细胞生长因子(HGF)，一种细胞迁移刺激蛋白，是uPA的底物[Naldinie等，EMBO J.11:4825-4833(1992)]。还已报道了一种66kDa胞外基质蛋白质和纤连蛋白被uPA切开，提示了uPA在促使细胞迁移中更直接的作用[Quigley等，Proc.Natl.Acad.Sci.84:2776-2780(1987)]。因此，uPA的抑制也可影响这些作用。
发明简述
本发明针对新颖肽醛和酮酰胺化合物。这些肽醛化合物在P1具有精氨酸或精氨酸拟物。酮酰胺化合物在P1具有精氨酸酮酰胺基团。这些化合物具有尿激酶的强大抑制剂活性，并从而能用于减小其有害作用。本发明的化合物对抑制血管形成，特别是与病理过程有关的血管形成是有活性的。
因此在一个方面，本发明针对式(Ⅰ)的化合物：
Figure A9981000200191
其中：
(a)X选自-S(O)2-、-N(R’)-S(O)2-、-(C=O)-、-OC(=O)-、-NH-C(=O)-、-P(O)(R’)-、和直接的化学键，其中R’分别是氢、1到约4个碳原子的烷基、约6到14个碳原子的芳基或约7到16个碳原子的芳烷基，条件是当X是-P(O)(R’)-时，R’不是氢；
(b)R1选自：
(1)1到约12个碳原子的烷基，其可任选的被Y1取代，
(2)1到约3个碳原子的烷基，被约5到8个碳原子的环烷基(其中可任选的被Y1、Y2和/或Y3在环上单-、二-或三取代)取代，
(3)3到约15个碳原子的环烷基，其在环上被Y1、Y2和/或Y3可任选的单-、二-、或三取代，
(4)4到约10个环上原子的杂环烷基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮、和S(O)i，其中i是0、1或2，该杂环烷基可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(5)4到约10个环上原子的杂环基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和S(O)i，其中i是0、1或2，包括
Figure A9981000200201
其中 是5到7个成员的杂环，具有3到6个环上碳原子，而V是-CH2-、-O-、-S(=O)-、-S(O)2-或-S-，其可任选在环上碳原子上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(6)可任选的被约5到8个碳原子的环烷基取代的，2到约6个碳原子的链烯基，其可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(7)约6到14个碳原子的芳基，其可任选被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(8)约5到14个环上原子的杂芳基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，所述杂芳基可任选被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(9)约7到15个碳原子的芳烷基，其可任选在芳环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(10)约5到14个环上原子的杂芳烷基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，而且其可任选的在烷基链上被羟基或卤素取代，可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(11)约8到16个碳原子的芳烯基，其在芳环上可任选被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(12)约5到14个环上原子的杂芳烯基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，而且该杂芳烯基可任选在环上碳原子上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
Figure A9981000200211
(17)约9到15个碳原子的稠合碳环烷基；
(18)二氟甲基或1到约12个碳原子的全氟烷基，
(19)约6到约14个碳原子的全氟芳基，
(20)约7到15个碳原子的全氟芳烷基，和
(21)氢(当X是直接键时)；其中Y1、Y2和Y3分别是选自，而且是
(ⅰ)选自卤素、氰基、硝基、四唑基、胍基、脒基、甲基胍基、-CF3、-CF2CF3、-CH(CF3)2、-C(OH)(CF3)2、-OCF3、-OCF2H、-OCF2CF3、-OC(O)NH2、-OC(O)NHZ1、-OC(O)NZ1Z2、-NHC(O)Z1、-NHC(O)NH2、-NH(O)NZ1、-NHC(O)NZ1NZ2、-C(O)OH、-C(O)OZ1、-C(O)NH2、-C(O)NHZ1、-C(O)NZ1Z2、-P(O)3H2、-P(O)3(Z1)2、-S(O)3H、-S(O)mZ1、-Z1、-OZ1、-OH、-NH2、-NHZ1、-NZ1Z2、-N-吗啉基、-S(CF2)qCF3、和-S(O)m(CF2)qCF3，其中m是0、1或2,q是0到5的整数，而Z1和Z2分别选自1到约12碳原子的烷基，约6到14个碳原子的芳基，约5到14个环上原子的杂芳基，约7到15个碳原子的芳烷基，和约5到14个环上原子的杂芳烷基，或
(ⅱ)Y1和Y2合起来选自-O[C(Z3)(Z4)]rO-，其中r是1到4的整数，而Z3和Z4分别是选自氢、1到约12个碳原子的烷基，约6到14个碳原子的芳基，约5到14个环上原子的杂芳基，约7到15个碳原子的芳烷基和约5到14个环上原子的杂芳烷基；
(c)R2选自H、-CH3、-C2H5、-(CH2)2OH、-(CH2)2OA2、-CH(R6)OH、-CH(R6)OA2和-CH2NH-X’-R6，其中A2是-C(=O)OR9或-C(=O)R9；X’是选自-S(O)2-、-S(O)2-N(R″)-、-(C=O)-、-C(=O)-O-、-C(=O)-NH-、-P(O)(R″)-、和直接键，其中R″是氢，1到约4个碳原子的烷基，约6到14个碳原子的芳基，或约7到16个碳原子的芳烷基，条件是当X’是-P(O)(R″)-时，R″不是氢；R6选自：
(1)1到约12个碳原子的烷基，可任选的被Y1取代，
(2)被约5到8个碳原子的环烷基取代的，1到约3个碳原子的烷基，该烷基可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(3)3到约15个碳原子的环烷基，其可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(4)4到约10个环上原子的杂环烷基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和S(O)i，其中i是0、1或2，该杂环烷基可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(5)4到约10个环上原子的杂环基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和S(O)i，其中i是0、1或2，包括 其中 是5到7个成员的杂环，具有3到6个环上碳原子，而V是-CH2-、-O-、-S(=O)-、-S(O)2-、或-S-，该杂环基可任选在环上碳原子上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(6)2到约6个碳原子的烯基，其可任选被约5到8个碳原子的环烷基取代，所述环烷基可任选的在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(7)约6到14个碳原子的芳基，其可任选被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(8)约5到14个环上原子的杂芳基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，所述杂芳基可任选的被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(9)约7到15个碳原子的芳烷基，其可任选在芳环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(10)约5到14个环上原子的杂芳烷基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，其可任选在烷基链上被羟基或卤素取代，可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(11)约8到15个碳原子的芳烯基，其可任选在芳环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(12)5到约14个环上原子的杂芳烯基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，而且该杂芳烯基可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，和
(13)氢；和
R9选自：
(1)1到约12个碳原子的烷基，可任选的被Y1取代，
(2)被约5到8个碳原子的环烷基取代的1到约3个碳原子的烷基，其可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(3)3到约15个碳原子的环烷基，其可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(4)4到约10个环上原子的杂环烷基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和S(O)i，其中i是0、1或2，环上原子可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(5)4到约10个环上原子的杂环，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和S(O)i，其中i是0、1或2，包括
Figure A9981000200231
其中 是5到7个成员的杂环，具有3到6个环上碳原子，而V是-CH2-、-O-、-S(=O)-、-S(O)2-、或-S-，该杂环可任选的在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(6)6到约14个碳原子的芳基，其可任选被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(7)约5到14个环上原子的杂芳基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，该杂芳基可任选的被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(8)约7到15个碳原子的芳烷基，其可任选在芳环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(9)约5到14个环上原子的杂芳烷基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，该杂芳烷基可任选在烷基链上被羟基或卤素取代，可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，和
(10)氢，条件是当A2是-C(=O)OR9时，R9不是氢；
(d)R3选自H或甲基，或R3和R4合起来选自在(f)中列出的；
(e)R4是S构型，而且选自H、-CH2-S-CH3、-CH2OH、-CH2CN、1到约3个碳原子的低级烷基，-CH2C≡CH、-CH2CH=CH2和-CH=CH2或R3和R4选自在(f)中列出的；
(f)或者，R3和R4合起来是S构型，在P2形成选自脯氨酰基、甲基哌啶基(pipecholyl)、吖丁啶-2-羰基、4-羟基脯氨酰基、3-羟基脯氨酰基和3,4-脱氢脯氨酰基的基团；
(g)R5是选自
Figure A9981000200241
和 其中R7选自
Figure A9981000200243
和
Figure A9981000200244
其中d是1到3的整数，而W是-N-或-CH-；和
(h)A1是-NHR8，其中R8是1到约12个碳原子的烷基，约6到14个碳原子的芳基，或约6到15个碳原子的芳烷基，所有的都可任选被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，或是氢；及其药物学上接受的盐。
本发明的化合物可被分为称为P1’、P1、P2、P3和P4的部分，如下式Ⅰa和Ⅰb显示的：其中X、R1、R2、R3、R4、R7和A1结合式(Ⅰ)定义。因此，称为P1或P1的式(Ⅰ)化合物的部分是链段
Figure A9981000200251
或
Figure A9981000200252
称为P2或P2的式(Ⅰ)化合物的部分是链段
Figure A9981000200253
称为P3或P3的式(Ⅰ)化合物的部分是链段
Figure A9981000200254
已报道肽基精氨酸醛在水溶液中以平衡结构存在。Bajusz,S.，等，医学化学杂志，33:1729(1990)。如下文所示，这些结构包括精氨酸醛、A、醛水合物，B和两种氨基环醇形式C和D。R基团将代表本发明举例的给定化合物的剩余部分。本发明的肽醛包括在其所有平衡形式的范围内。
在其它因素中，本发明基于我们对本发明新颖化合物作为尿激酶抑制剂有活性的发现。本发明的化合物展现了抑制血管生成的活性。
在另一方面，本发明针对药物组合物，其包含治疗有效量的本发明的化合物，和药物学上可接受的载体。
在另一方面，本发明针对使用本发明的化合物和药物组合物，来抑制尿激酶的方法。
定义
除非另外特别描述，根据本发明并在本文中所用的下列术语定义成具有下列意义：
术语“链烯基”指具有至少一个双键的未饱和脂肪族基团。
术语“烷基”指饱和脂肪族基团，包括直链、支链和环状(包括多环)基团。
术语“烷基氧”和“烷氧基”指具有式R-O-的基团，其中R是烷基。
术语“烷氧基羰基”指-C(O)OR，其中R是烷基。
术语“芳烯基”指被芳基取代的链烯基。优选链烯基具有2到约6个碳原子。
术语“芳烷基”指被芳基取代的烷基。合适的芳烷基包括苄基、苯乙基等，其中所有的都可任选被取代。优选烷基具有1到约6个碳原子。
术语“芳基”指具有至少一个环的芳族基团，该环具有共轭的π电子系统，并包括碳环芳基、杂环芳基和联芳基，其中所有的都可被任选取代。
术语“芳氧基”指具有式R-O-的基团，其中R是芳基。
术语“芳烷氧基”指具有式R-O-的基团，其中R是芳烷基。
术语“氨基酸”指D和L立体异构体(如果它们的结构允许这样的立体异构形式)的天然和非天然氨基酸，和它们的类似物。天然氨基酸包括丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、天门冬酰胺(Asn)、天门冬氨酸(Asp)、半胱氨酸(Cys)、谷氨酰胺(Gln)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、组氨酸(His)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、赖氨酸(Lys)、甲硫氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)、脯氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)和缬氨酸(Val)。非天然氨基酸包括但不限于：吖丁啶羧酸、2-氨基己二酸、3-氨基己二酸、β-丙氨酸、氨基丙酸、2-氨基丁酸、4-氨基丁酸、6-氨基己酸、2-氨基庚酸、2-氨基异丁酸、3-氨基异丁酸、2-氨基庚二酸、2,4-二氨基丁酸、锁链赖氨素(demosine)、2,2’-二氨基庚二酸、2,3’-二氨基丙酸、N-乙基甘氨酸、N-乙基天门冬酰胺、羟基赖氨酸、别羟基赖氨酸、3-羟基脯氨酸、4-羟基脯氨酸、异锁链素、别-异亮氨酸、N-甲基甘氨酸、N-甲基异亮氨酸、N-甲基缬氨酸、降缬氨酸、降赖氨酸、鸟氨酸和2-哌啶酸。氨基酸类似物包括天然和非天然氨基酸，其N-末端氨基或其侧链基团被可逆或不可逆的化学封闭或修饰(例如甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸砜、S-(羧甲基)-半胱氨酸、S-(羧甲基)-半胱氨酸亚砜和S-(羧甲基)-半胱氨酸砜)。
术语“氨基酸类似物”指一种氨基酸，其中C-末端羧基、N-末端氨基或侧链官能团已被化学修饰成另一种官能团。例如，天门冬氨酸-(β-甲基酯)是天门冬氨酸的氨基酸类似物；N-乙基甘氨酸是甘氨酸的氨基酸类似物；或丙氨酸羧酰胺是丙氨酸的氨基酸类似物。
术语“氨基酸残基”指具有下列结构的基团：(1)-C(O)-R-NH-，其中R通常是-CH(R’)-，其中R’是H或含有取代基的碳；或(2) 其中p是1、2或3，分别代表吖丁啶羧酸、脯氨酸或2-哌啶酸残基。
“联芳基”指被本文限定的碳环或杂环芳基取代的苯基，与苯环的结合点是邻位、间位或对位。
“盐水”指氯化钠的饱和水溶液。
“碳环芳基”指芳族基团，其中芳环上的环上原子是碳原子。碳环芳基包括：单环碳环芳基和萘基，它们都可任选的被取代。合适的碳环芳基包括苯基和萘基。合适的取代碳环芳基包括被1到2个取代基取代的茚和苯基，这些取代基宜是低级烷基、羟基、低级烷氧基、低级烷氧基羰基、卤素、三氟甲基、二氟甲基、硝基和氰基，取代的萘基指萘基，更优选指被根据上文式(Ⅰ)定义的Y1,Y2和/或Y3取代的1-或2-萘基。
“环链烯基”指环状链烯基。合适的环链烯基指例如环戊烯基和环己烯基。
“环烷基”指具有至少一个环的环状烷基，并包括多环基团(包括稠合环的环状烷基)。合适的环烷基包括例如环己基、环丙基、环戊基和环庚基。
“环己基甲基”指与CH2结合的环己基。
“稠合碳环”指稠合多环的碳环，同时具有芳族和非芳族环。合适的稠合碳环包括芴基、1,2,3,4-四氢化萘等。
“稠合碳环烷基”指被稠合碳环链段取代的烷基，优选被多环稠合的碳环，同时具有芳族和非芳族基团的碳环取代。合适的稠合碳环烷基包括芴基甲基等。
术语“卤素”指氟、氯、溴和碘。
“杂芳链烯基”指被杂芳基取代的链烯基，并包括在“化学和物理手册”，49版，1968,R.C.Weast编；The Chemical Rubber Co.,Cleveland,OH中描述的那些杂环系统。特别见C部分，命名有机化合物的方法，B．基本杂环系统。优选链烯基具有2到约6个碳原子。
“杂芳烷基”指被杂芳基，如被甲基吡啶基取代的烷基，并包括在“化学和物理手册”，49版，1968,R.C.Weast编；The Chemical Rubber Co.,Cleveland,OH中描述的那些杂环系统。特别见C部分，命名有机化合物的方法，B．基本杂环系统。优选烷基具有1到约6个碳原子。
“杂芳基”指具有1到14个碳原子而且剩余环上原子是杂原子的芳基，并包括在“化学和物理手册”，49版，1968,R.C.Weast编；The Chemical RubberCo.,Cleveland,OH中描述的那些杂环系统。特别见C部分，命名有机化合物的方法，B．基本杂环系统。合适的杂原子包括氧、氮和S(O)i,其中i是0、1或2，而合适的杂环芳基包括：呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基等。
“杂环”指包含碳、氮、氧和/或硫原子的还原杂环系统，并包括在“化学和物理手册”，49版，1968,R.C.Weast编；The Chemical Rubber Co.,Cleveland,OH中描述的那些杂环系统。特别见C部分，命名有机化合物的方法，B．基本杂环系统。
“杂环烷基”指被杂环基团取代的烷基，并包括在“化学和物理手册”，49版，1968,R.C.Weast编；The Chemical Rubber Co.，Cleveland，OH中描述的那些杂环系统。特别见C部分，命名有机化合物的方法，B．基本杂环系统。优选烷基具有约1到6个碳原子。
本文中和有机基或基团相关的术语“低级”定义为：这些基或基团具有1到并包括5个碳原子，优选达到并包括4个碳原子，并宜是一或2个碳原子。这些基或基团可以是直链或支链的。
“全氟烷基”指每个氢都被氟取代的烷基。
“全氟芳基”指每个氢都被氟取代的芳基。
“全氟芳烷基”指一个芳烷基，其中在芳基链段上的每个氢都被氟取代。
“药物学上可接受的盐”包括本发明化合物的盐，衍生自这些化合物与一种有机或无机酸化合。在实施中，盐形式的用量折合为碱形式的用量。本发明的化合物作为游离碱和盐的形式都是有用的，将两种形式都视为本发明范围内。
术语“Arg-al”指L-精氨醛的残基，具有式：术语“Arg-ol”指L-精氨醇的残基，具有式：
Figure A9981000200292
“(S)-Ng-硝基精氨醇盐酸盐”指具有下式的化合物：术语“N--叔丁氧基羰基-Ng-硝基-L-精氨酸”指具有下式的化合物：
Figure A9981000200294
术语“L-Ng-硝基精氨醛乙基环醇”指具有下述的基团：
Figure A9981000200295
还见美国专利号5,514,777。
“Bn”指苄基。
“Boc”指叔丁氧基羰基。
“BzlSO2”指苄基磺酰基。
“Cbz”或“CBz”指苄氧基羰基。
“DCA”指二氯乙酸。
“DCC”指N,N’-二环己基碳二亚胺。
“DCM”指二氯甲烷。
“DMF”指N,N-二甲基甲酰胺。
“DMSO”指二甲基亚砜。
“DMAP”指4-N,N-二甲基氨基吡啶。
“EDC”指1-乙基-3-(3-二甲基氨基-丙基)碳二亚胺盐酸盐。
“Et3N”指三乙基胺。
“EtOH”指乙醇。
“HBTU”指六氟磷酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲酯。
“HCl”指盐酸。
“HOAc”指乙酸。
“HPLC”指高效液相层析。
“HOBt”指1-羟基苯并三唑一水合物。
“i-BuOCOCl”指氯甲酸异丁酯。
“LiAlH4”指氢化钾铝。
“LiAlH2(OEt)2”指二乙氧基氢化钾铝。
“Me”指甲基。
“NMM”指N-甲基吗啉。
“PhB(OH)2”指苯基硼酸。
“PhBOP”指六氟磷酸苯并三唑氧基-三吡咯烷基鏻。
“TFA”指三氟乙酸。
“THF”指四氢呋喃。
“TLC”指薄层层析。
附图简述
图1描述了合成用于固相合成本发明化合物，在P1具有精氨醛基的中间物的反应流程。在该图中，“ⅰ”到“ⅶ”定义为：ⅰ)无水乙腈中的4-甲基吗啉、EDC、和1-羟基苯并三唑；室温搅拌16小时，后处理后回收率为78％；(ⅱ)-78℃氮气下氢化钾铝/四氢呋喃1小时，温至室温，冷却到-78℃，用硫酸氢钠淬灭，后产率为76％；ⅲ)乙腈中的6-羟基己酸乙酯，HCL水溶液；用乙酸酐和吡啶封端过量的6-羟基己酸乙酯，后处理后产率为93.7％；ⅳ)乙醇/水/乙酸(4∶1∶1)，10％钯碳，40psi H2 16小时，后处理后产率为94.4％；v)DCM,1NNaOH,pH11-13，氯甲酸烯丙酯，后处理后产率为80％；ⅵ)乙醇，3N LiOH，用1N HCl到pH2-3，后处理后产率为83％；和ⅶ)氨基甲基化的聚苯乙烯树脂(“AM树脂”)，DMF中的PyBOP，二异丙基乙基胺，用Kaiser试验测定偶联；用DMF/乙酸/三乙胺(8∶1∶1)封端，后处理后产率为92％。也见实施例1到7。
图2描述了用树脂1-9(见图1)固相合成本发明的化合物的反应流程。在该图中，“ⅰ”到“ⅶ”定义为ⅰ)DCM、TFA、和硫代苯甲醚；ⅱ)Fmoc-丙氨酸、1-羟基苯并三唑、TBTU和DMF中的二异丙基乙基胺，99.5％偶联效率；ⅲ)50％DMF中的哌啶；ⅳ)DMF、N-α-Fmoc-D-丝氨酸(O-叔丁基)、1-羟基苯并三唑、TBTU、二异丙基乙基胺；ⅴ)DMF中的50％哌啶；ⅵ)DMF中的氯甲酸异丁酯、二异丙基乙基胺；ⅶ)甲基亚砜、四氢呋喃、1N HCl、吗啉、四-三苯基膦合钯；和ⅷ)TFA/DCM/H2O(6∶3∶1)，用半制备级反相HPLC纯化。也见实施例8。
图3描述了用L-Ng-硝基精氨醛乙基环醇中间物液相合成本发明在P1具有精氨醛基的化合物的反应流程。化合物3-1是N-α-Cbz-D-丝氨酸(O-叔丁基)，化合物3-2是丙氨酸甲酯，盐酸盐。在该图中“ⅰ”到“ⅶ”如下定义ⅰ)EDC、1-羟基苯并三唑和乙腈，二异丙基乙基胺，得到Cbz-D-丝氨酸(O-叔丁基)-Ala-OMe；(ⅱ)乙醇/乙酸/水(4∶1∶1)，10％钯碳，45psi H2 2小时，后处理后95％产率；ⅲ)乙腈，苯磺酰氯，二异丙基乙基胺，后处理后43％产率；ⅳ)甲醇，1.0M氢氧化锂，在DOWEX离子交换树脂上酸化，用甲醇/水洗脱，后处理后产率为95％；ⅴ)1-羟基苯并三唑，乙腈，二异丙基乙基胺，后处理后95％产率；ⅵ)在10％钯碳上在乙醇/乙酸/水(4∶1∶1)中以50psi氢化，分离苄基磺酰基-D-丝氨酸(O-叔丁基)-L-Ala-L-精氨醛乙基环醇；和ⅶ)搅拌，用6MHCl,6.5M乙酸铵调节到pH4，用制备级反相HPLC纯化，三个步骤(ⅴ-ⅶ)产率为15％。也见实施例17到20。
图4描述了合成本发明在P1处具有精氨酸酮酰胺的化合物的反应流程。在该图中“ⅰ”如下定义：ⅰ)苯乙基胺，BOP和1-羟基苯并三唑、DMF、4-甲基吗啉，后处理后89％产率；ⅱ)乙酸乙酯中的HCl，得到Ng-硝基Arg-COH-苯乙基酰胺盐酸盐；ⅲ)叔丁氧基羰基-Ala-OH、EDC、1-羟基苯并三唑和乙腈、二异丙基乙基胺，后处理后95％产率；ⅳ)乙酸乙酯中的HCl，后处理后98％产率；ⅴ)叔丁氧基羰基丝氨酸苄基醚EDC和1-羟基苯并三唑、乙腈、二异丙基乙基胺、后处理后产率为92％；ⅵ)乙酸乙酯中的HCl、后处理后98％产率；ⅶ)乙腈，氯甲酸异丁酯、二异丙基乙基胺，后处理后85％产率：ⅷ)EDC、甲基亚砜和二氯乙酸，后处理后68％产率；ⅸ)-20℃，苯甲醚，HF，后处理后26％产率，并用制备级反相HPLC纯化。也见实施例27到34。
图5描述了另一种用来制备化合物1(图2描述的化合物)，一种L-Ng-硝基精氨醛乙基环醇中间物的液相合成途径的反应流程。在该图中，“ⅰ”到“ⅵ”如下定义：ⅰ)氯甲酸异丁酯、碳酸钠、水，后处理后99.5％产率；ⅱ)丙氨酸叔丁酯，盐酸盐，EDC，和乙腈中的羟基苯并三唑；二异丙基乙基胺、后处理后定量级产率；ⅲ)TFA、DCM、后处理后定量产率；ⅳ)Ng-硝基精氨醛乙基环醇、HCl盐、EDC、和乙腈中的羟基苯并三唑；二异丙基乙基胺，后处理后50％产率；ⅴ)乙醇/乙酸/水(4∶1∶1)，10％钯碳，50psi的H2,4小时；ⅵ)3.0MHCl；制备级反相HPLC；两步(ⅴ和ⅵ)步骤化合物1的产率为62％。也见实施例54到59。
图6描述了在固相合成本发明在P1处具有精氨醛的化合物中使用的保护的精氨醛亚肼基羰基氨基甲基化的聚苯乙烯树脂合成的反应流程。化合物6-1是N-α-芴基甲氧基羰基-ω、ω-二-N-叔丁氧基羰基-精氨酸。在该图中，“ⅰ”到“ⅳ”如下定义∶ⅰ)乙腈、碳酸钾、碘甲烷、50℃、乙酸乙酯；ⅱ)THF和甲醇、氯化钙、冰浴、硼氢化钠、搅拌、后处理后71％产率；ⅲ)甲基亚砜和甲苯、冰浴、EDC和二氯乙酸；和ⅳ)DCM、HCAM树脂、环境温度16到24小时。也见实施例41到45。
图7描述了固相合成本发明在P1处具有精氨醛的化合物，并使用图6中间物的反应流程。在该图中，“ⅰ”到“ⅸ”如下定义：ⅰ)30％哌啶/DMF；ⅱ)N-α-Fmoc-吖丁啶-2-羧酸、1-羟基苯并三唑、TBTU、和DMF中的二异丙基乙基胺；ⅲ)30％哌啶/DMF；ⅳ)N-α-Fmoc-D-丝氨酸-叔丁基醚、1-羟基苯并三唑、TBTU、和DMF中的二异丙基乙基胺；ⅴ)双重偶联：N-α-Fmoc-丝氨酸-o-叔丁基醚、1-羟基苯并三唑、TBTU和DMF中的二异丙基乙基胺，后处理后97％偶联效率；ⅵ)30％哌啶/DMF；ⅶ)苯磺酰氯和DMF中的二异丙基乙基胺；ⅷ)双重偶联：苯磺酰氯和DMF中的二异丙基乙基胺，后处理后96％偶联效率；和ⅸ)TFA/水(9∶1)，半制备级反相HPLC纯化后26％产率。也见实施例46到53。
图8描述了制备用于合成本发明在P1处具有3-哌啶基-(N-胍基)精氨醛的化合物的中间物的反应流程。在该图中，“ⅰ”到“ⅵ”如下定义：ⅰ)亚硫酰氯，甲醇；ⅱ)焦碳酸二叔丁酯，pH7到8；ⅲ)氢气、乙醇中的氧化铂，水和乙酸；ⅳ)双-苄氧基羰基S-甲基异硫脲、碱、四氢呋喃；ⅴ)氯化钙、四氢呋喃中的氢硼化钠和乙醇；ⅵ)HCl、乙酸乙酯。“*”表明不对称碳原子的位置。也见实施例60到64。
图9描述了制备中间物，用于合成本发明在P1处具有3-脒基苯基丙氨醛的化合物的反应流程。在该图中，“ⅰ”到“ⅹⅰ”定义如下：ⅰ)碘化钾、二噁烷；2.5M乙醇中的乙氧基钠，氩气，回流6小时；后处理后产率为60％；ⅱ)吡啶、三乙胺；H2S(g)，室温搅拌16小时，后处理后产率为98％；ⅲ)丙酮，碘甲烷、回流30分钟，过滤，甲醇；ⅳ)乙酸铵、回流1小时，过滤并干燥；ⅴ)浓盐酸、回流3小时，后处理后产率为30％；ⅵ)二噁烷、碳酸氢钠、焦碳酸二叔丁酯、室温搅拌18小时；ⅶ)4℃,4.0N NaOH调节到pH12；二噁烷中的4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯磺酰氯；1.0N HCl调节到pH7到8、水、后处理后产率为68％，ⅷ)O,N-二甲基羟基胺盐酸盐，羟基苯并三唑水合物，4-甲基吗啉、THF、搅拌2小时，后处理后产率为69％；ⅸ)LiAlH4、THF、-78℃；硫酸氢钾水溶液，后处理后产率为86％；ⅹ)4-二苯甲基氨基脲三氟乙酸盐(实施例65的化合物)，乙醇中的三水合乙酸钠，回流，后处理后产率为89％；和ⅹⅰ)50％TFA/DCM，加到乙醚中，后处理后产率为79％。也见实施例65到72。
图10描述了制备-种中间物，用于合成本发明在P1处具有4-哌啶基-(N-胍基)丙氨醛的化合物的反应流程。在该图中，“ⅰ”到“ⅵ”定义如下：ⅰ)亚硫酰氯、甲醇；ⅱ)焦碳酸二叔丁酯，pH7到8；ⅲ)氢气、乙醇中的氧化铂、水和乙酸；ⅳ)四氢呋喃中的双苄氧基羰基S-甲基异硫脲碱、THF；ⅴ)氯化钙、THF和乙醇中的硼氢化钠；和ⅵ)乙酸乙酯中的HCl。“*”表明非对称碳原子的位置。见实施例73。
图11描述了用图8的8-6等中间物，合成本发明在P1处具有3-胍基-哌啶醛基的化合物的反应流程。在该图中，“ⅰ”到“ⅸ”如下定义：ⅰ)氯甲酸异丁酯、碳酸氢钠、二噁烷水溶液；ⅱ)丙氨酸叔丁酯、EDC、HOBt、NMM；ⅲ)H2、Pd/C；ⅳ)吡啶、氯甲酸苯酯；ⅴ)TFA/DCM；ⅵ)EDC、HOBt、NMM；ⅶ)H2、Pd/C；ⅷ)EDC、DCA、DMSO、甲苯；和ⅸ)H2O,pH7；制备级反相HPLC。见实施例74。
图12描述了使用图9的9-10等中间物合成本发明在P1处具有脒基-苯基丙氨醛的化合物的反应流程。在该图中，“ⅰ”到“ⅲ”如下定义：ⅰ)EDC、HOBt、NMM；ⅱ)HF、苯甲醚；和ⅲ)90％TFA水溶液；制备级反相HPLC。见实施例75。
图13描述了使用中间物13-1(图5的5-5(实施例57))合成本发明化合物，其中R2是-CH2OA2和A2是-C(=O)R9的反应流程。在该图中，“ⅰ”到“ⅲ”如下定义：ⅰ)吡啶、R9COCl；ⅱ)H2、10％Pd/C、EtOH、H2O；ⅲ)HPF6水溶液、乙腈。
发明详述
1．优选化合物
本发明的化合物具有式：
Figure A9981000200341
其中：
(a)X选自-S(O)2-、-N(R’)-S(O)2-、-(C=O)-、-OC(=O)-、-NH-C(=O)-、-P(O)(R’)-、和直接的化学键，其中R’分别是氢、1到约4个碳原子的烷基、约6到14个碳原子的芳基或约7到16个碳原子的芳烷基，条件是当X是-P(O)(R’)-时，R’不是氢。
(b)R1选自：
(1)1到约12个碳原子的烷基，其可任选的被Y1取代，
(2)1到约3个碳原子的烷基，被约5到8个碳原子的环烷基取代，该环烷基可任选的被Y1、Y2和/或Y3在环上单-、二-或三取代，
(3)3到约15个碳原子的环烷基，其在环上被Y1、Y2和/或Y3可任选的单-、二-、或三取代，
(4)4到约10个环上原子的杂环烷基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮、和S(O)i，其中i是0、1或2，所述杂环烷基可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(5)4到约10个环上原子的杂环基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和S(O)i，其中i是0、1或2，包括
Figure A9981000200342
其中
Figure A9981000200343
是5到7个成员的杂环，具有3到6个环上碳原子，而V是-CH2-、-O-、-S(=O)-、-S(O)2-或-S-，该杂环基可任选在环上碳原子上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(6)2到约6个碳原子的链烯基，其可任选的被约5到8个碳原子的环烷基取代，该链烯基可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(7)约6到14个碳原子的芳基，其可任选被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(8)约5到14个环上原子的杂芳基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，该杂芳基可任选的被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(9)约7到15个碳原子的芳烷基，其可任选的在芳环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(10)约5到14个环上原子的杂芳烷基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，该杂芳烷基可任选的在烷基链上被羟基和卤素取代，可任选的在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(11)约8到16个碳原子的芳烯基，其在芳环上可任选被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(12)约5到14个环上原子的杂芳烯基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，该杂芳烯基可任选在环上碳原子上被Y1、Y2/或Y3单-、二-、或三取代，
(17)约9到15个碳原子的稠合碳环烷基；
(18)二氟甲基或1到约12个碳原子的全氟烷基，
(19)约6到约14个碳原子的全氟芳基，
(20)约7到15个碳原子的全氟芳烷基，和
(21)氢，当X是直接键；其中Y1、Y2和Y3分别是选自，而且是
(ⅰ)选自卤素、氰基、硝基、四唑基、胍基、脒基、甲基胍基、-CF3、-CF3(CF3)2、-C(OH)(CF3)2、-OCF3、-OCF2H、-OCF2CF3、-OC(O)NH2、-OC(O)NHZ1、-OC(O)NZ1Z2、-NHC(O)Z1、-NHC(O)NH2、-NH(O)NZ1、-NHC(O)NZ1NZ2、-C(O)OH、-C(O)OZ1、-C(O)NH2、-C(O)NHZ1、-C(O)NZ1Z2、-P(O)3H2、-P(O)3(Z1)2、-S(O)3H、-S(O)mZ1、-Z1、-OZ1、-OH、-NH2、-NHZ1、-NZ1Z2、-N-吗啉基、-S(CF2)qCF3、和-S(O)m(CF2)qCF3、其中m是0、1或2,q是0到5的整数，而Z1和Z2分别选自1到约12碳原子的烷基，约6到14个碳原子的芳基，约5到14个环上原子的杂芳基，约7到15个碳原子的芳烷基，和约5到14个环上原子的杂芳烷基，或
(ⅱ)Y1和Y2合起来选自-O[C(Z3)(Z4)]rO-，其中r是1到4的整数，而Z3和Z4分别是选自氢、1到约12个碳原子的烷基，约6到14个碳原子的芳基，约5到14个环上原子的杂芳基，约7到15个碳原子的芳烷基和约5到14个环上原子的杂芳烷基；
(c)R2选自H、-CH3、-C2H5、-(CH2)2OH、-(CH2)2OA2、-CH(R6)OH、-CH(R6)OA2和-CH2NH-X’-R6，其中A2是-C(=O)OR9或-C(=O)R9；X’是选自-S(O)2-、-S(O)2-N(R″)-、-(C=O)-、-C(=O)-O-、-C(=O)-NH-、-P(O)(R″)-、和直接键，其中R″是氢，1到约4个碳原子的烷基，约6到14个碳原子的芳基，或约7到16个碳原子的芳烷基，条件是当X’是-P(O)(R″)-时，R″不是氢；R6选自：
(1)可任选的被Y1取代的1到约12个碳原子的烷基，
(2)被约5到8个碳原子的环烷基取代的1到约3个碳原子的烷基，该环烷基可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(3)3到约15个碳原子的环烷基，其可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(4)4到约10个碳原子的杂环烷基，环上运转选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和S(O)i，其中i是0、1或2，该杂环烷基可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(5)4到约10个环上原子的杂环基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和S(O)i，其中i是0、1或2，包括
Figure A9981000200371
其中 是5到7个成员的杂环，具有3到6个环上碳原子，而V是-CH2-、-O-、-S(=O)-、-S(O)2-、或-S-，该杂环烷基可任选在环上碳原子上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(6)2到约6个碳原子的烯基，其可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(7)约6到14个碳原子的芳基，其可任选被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(8)约5到14个环上原子的杂芳基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，该杂芳基可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(9)约7到15个碳原子的芳烷基，其可任选在芳环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(10)约5到14个环上原子的杂芳烷基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，该杂环烷基可任选在烷基链上被羟基和卤素取代，在环上可任选的被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(11)约8到15个碳原子的芳烯基，其可任选的在芳环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(12)5到约14个环上原子的杂芳烯基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，该杂芳烯基可任选在环上碳原子上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，和
(13)氢；和
R9选自：
(1)可任选的被Y1取代的1到约12个碳原子的烷基，
(2)被约5到8个碳原子的环烷基取代的，1到约3个碳原子的烷基，该环烷基可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(3)3到约15个碳原子的环烷基，其可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(4)4到约10个环上原子的杂环烷基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和S(O)i，其中i是0、1或2，该杂环烷基可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，(5)4到约10个环上原子的杂环基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和S(O)i，其中i是0、1或2，包括
Figure A9981000200381
其中
Figure A9981000200382
是5到7个成员的杂环，具有3到6个环上碳原子，而V是-CH2-、-O-、-S(=O)-、-S(O)2-、或-S-，该杂环基可任选的在环上碳原子上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(6)6到约14个碳原子的芳基，其可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(7)约5到14个环上原子的杂芳基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，该杂芳基可任选的被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(8)约7到15个碳原子的芳烷基，其可任选在芳环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(9)约5到14个环上原子的杂芳烷基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，该杂芳烷基在烷基链上可任选的被羟基或卤素取代，可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，和
(10)氢，条件是当A2是-C(=O)OR9时，R9不是氢；
(d)R3选自H或甲基，或R3和R4合起来选自在(f)中列出的；
(e)R4是S构型，而且选自H、-CH2-S-CH3、-CH2OH、-CH2CN、1到约3个碳原子的低级烷基，-CH2C≡CH、-CH2CH=CH2和-CH=CH2或R3和R4合起来选自在(f)中列出的；
(f)另外，R3和R4都是S构型，在P2形成选自脯氨酰基、甲基哌啶基、吖丁啶-2-羰基、4-羟基脯氨酰基、3-羟基脯氨酰基和3,4-脱氢脯氨酰基；
(g)R5是选自和 其中R7选自
Figure A9981000200391
和
Figure A9981000200392
其中d是1到3的整数，而W是-N-或-CH-；和
(h)A1是-NHR8，其中R8是1到约12个碳原子的烷基，约6到14个碳原子的芳基，或约6到15个碳原子的芳烷基，所有可任选被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，或是氢；及其药物学上接受的盐。
优选X基团包括-S(O)2-、-OC(=O)-、-NH-C(=O)-、和直接键。尤其优选是-S(O)2-和-OC(=O)-。
优选R1基团包括：烷基、尤其是异丁基、2-乙基己基、甲基、丁基、异丙基、环己基甲基和环己基丙基；环烷基，尤其是(-)薄荷基、(+)薄荷基和环己基；芳基，尤其是萘基和苯基；芳烷基，尤其是苄基、3-苯基丙基和2-苯基乙基；和稠合的碳环烷基，尤其是芴基甲基。尤其优选的R1基团包括苯基、苄基、2-苯基乙基、异丁基和3-苯基丙基。
优选R1-X-的组合包括苯基-S(O)2-、苄基-S(O)2-、2-苯基乙基-S(O)2-、3-苯基丙基-S(O)2-、苄基-OC(=O)-、和异丁基-OC(=O)-。
优选R2基团包括H、-CH3、-C2H5、-CH2NH-X’-R6和-CH(R6)OH，其中R6是氢、烷基，尤其是甲基或芳烷基。优选α碳的手性是R。当手性时，优选β碳的手性是R。优选R2基团是那些限定P3位置是甘氨酸，d-丝氨酰(-CH(R6)OH，其中R6是H),(R,R)D-别苏氨酰基(-CH(R6)OH，其中R6是甲基)、D-2-氨基丁酰基、N-β-甲氧基羰基-d-2,3-二氨基丙酰基(-CH2NH-X’-R6，其中R6是CH3而X是(-C=O)O-)、N-D-(2-苯基乙基羰基)-d-2,3-二氨基丙酰基(-CH2NH-X’-R6，其中R6是2-苯基乙基而X’是-(C=O)-)、和N-β-苄氧基羰基-d-2,3-二氨基丙酰基(-CH2NH-X’-R6，其中R6是苄基而X’是-(C=O)O-)。尤其优选的R2基团是那些限定P3是d-丝氨酰基(R6是H)或(R,R)d-别苏氨酰基(R6是甲基)。
另外优选的R2基团包括-(CH2)OA2和-CH(R6)OA2，更优选-CH(R6)OA2；优选R6是H。更优选R2使得P3定义为酰基或d-丝氨酰的碳酸酯。R2是-(CH2)2OA2或-CH(R6)OA2的化合物可作为药物前体。
当R3和R4不合起来选择时，优选R3基团是氢。当R3和R4不合起来选择时，优选R4基团是甲基或炔丙基。当R3和R4合起来选择时，优选P2处的基团是脯氨酰基、4-顺-羟基脯氨酰基、3,4-脱氢脯氨酰基和吖丁啶-2-羰基-。
优选R5基团是-CH((CH2)3NHC(=NH)NH2)CHO，以在P1处产生精氨酸醛。
在所要求的化合物中，在化合物的该位置具有限定d-丝氨酸或d-异苏氨酸的R2部分，以及，在R5有一精氨酸醛的化合物是优选的。尤其优选的是还具有ⅰ)R3处的氢和R4处的甲基(P2是丙氨酸)，或ⅱ)具有合起来选择的R3和R4，从而P2是脯氨酰基、吖丁啶-2-羰基，或3,4-脱氢脯氨酰基的这些化合物。
本发明的优选化合物包括：
Figure A9981000200401
Figure A9981000200411
Figure A9981000200421
Figure A9981000200422
和
优选化合物的制备：
图1到12描述了制备某些本发明优选化合物的合成流程。
图1描述了合成N-α-叔丁氧基羰基-N-ω-烯丙氧基羰基-精氨醛(6-己酰基-氨基-甲基化的聚苯乙烯树脂)环醇，它用于固相合成本发明P1出具有精氨酸醛的化合物。实施例1到7详细描述了该合成。
图2描述了用图7描述的树脂固相合成本发明化合物。在实施例8中进一步描述了该合成。
图3描述了用L-Ng-硝基精氨醛乙基环醇中间物液相合成本发明化合物。也见实施例17到21和22到26。
图4描述了本发明P1处具有精氨酸酮酰胺基团的化合物的合成流程。实施例27到34进一步描述了这些化合物的合成。
实施例35到40描述了用L-Ng-硝基精氨醛乙基环醇中间物液相合成本发明优选化合物。
图5描述了用液相合成和L-Ng-硝基精氨醛乙基环醇中间物制备图2描述的化合物的另一种合成途径。也见实施例54到59。
图6描述了一种合成流程，而实施例41到45进一步描述了精氨醛-亚肼基羰基氨基甲基化的树脂的合成，可用它制备本发明的化合物。
图7描述了用实施例45的树脂固相制备本发明化合物的合成流程。实施例46到53进一步描述了这些固相合成。
图8描述了制备用于合成本发明在P1处具有3-哌啶基-(N-胍基)-丙氨醛基团的化合物的中间物的合成流程。实施例60到64更详细描述了其制备。
图9描述了制备一种中间物的反应流程，其可用于合成本发明在P1处具有3-脒基苯基丙氨醛基团的化合物。可根据图9描述的和实施例65到72描述的反应流程，用合适的α-溴-对甲苯腈起始材料制备用于制备式(Ⅰ)P1处具有4-脒基苯基丙氨醛基的化合物的中间物。
图10描述了制备中间物的反应流程，它用于合成本发明在P1处具有4-哌啶基-(N-胍基)丙氨醛基团的化合物。用与实施例60到64中描述的相似的程序，并使用合适起始材料制备了该中间物。
图11描述了用图8的8-6等中间物，制备本发明在P1处具有3-哌啶基-(N-胍基)丙氨醛基团的反应流程。
图12描述了用图9的9-10等中间物制备本发明在P1处3-脒基苯基丙氨醛基团的化合物的反应流程。
图13描述了制备本发明在P3处具有酯化d羟基的化合物的反应流程。
化学偶联(例如酰氨基键合功能)的优选方法包括：用本领域已知的常规偶联试剂形成肽键。见Bodanszky,N.肽化学，pp.55-73,Springer-Verlag,NewYork(1988)和其中引用的文献。可通过一步或两步偶联进行化学偶联。在一步偶联中，两个偶联配体直接偶联。一步偶联的优选偶联试剂包括DCC和HOBt、EDC和HOBt、EDC和HOAt、HBTU或TBTU。在两步偶联中，先在一种偶联配体的C-末端羧基形成活化酯或酸酐，然后与另一种配体偶联。
为了制备某些具有氢化敏感性取代基团的化合物，优选避免使用氢气和钯碳。另一种制备本发明含有氢化敏感性基团，如被卤素、氰基、硝基或-S-Z1取代的链烯基或芳基链段的优选方法是，用三(三氟乙酸)硼，B(OCOCF3)3，来切开精氨酸基团的Ng-硝基。通过使BBr3和CF3COOH在二氯甲烷中0℃反应制备该试剂。试剂也可商业购得。通常，Ng-硝基化合物在三氟乙酸中在0℃用三(三氟乙酸)硼处理。例如，Fiese,M.和Fieser,L.F.，有机合成的试剂，p.46，John Wiley& Sons,New York(1974)；Pless,J.，和Bauer，W.Angew.Chem.,Internat.Ed.,12,147(1973)。
另外，另一个用于选择性切开硝基的优选试剂是三氯化钛。该试剂可商业购得。用三氯化钛在含有乙酸铵缓冲液的甲醇水溶液中处理Ng硝基化合物，然后将反应混合物暴露在空气或二甲基亚砜中。见例如，Freidinger,R.M.,Hirschmann,R.，和Veber,D.F.，有机化学杂志，43,4800(1978)。
另一种用于合成这些具有L-精氨醛链段的化合物的优选方法是，将二-N-叔丁氧基羰基保护基团用于L-精氨醛链段的与钯碳氢化不相容的基团。例如，将α-N-苄氧基羰基-ω、ω’-二-N-叔丁氧基羰基精氨酸溶解于乙腈，并用羟基苯并三唑和1-乙基-3-(3-二甲基氨基-丙基)碳二亚胺盐酸盐处理，形成α-N-苄氧基羰基-ω、ω’-二-N-叔丁氧基羰基-L-精氨酸内酰胺。通过用THF中的LiAlH4在-70℃处理来还原内酰胺，提供α-N-苄氧基羰基-ω,ω’-二-N-叔丁氧基羰基-L-精氨醛。通过用乙醇和HCl处理，作为二乙基缩醛保护了该醛。通过用氢气和钯碳处理除去N-苄氧基羰基保护基，产生ω,ω’-二-N-叔丁氧基羰基-L-精氨醛二乙基缩醛，盐酸盐。然后可通过用N-羟基苯并三唑和1-乙基-3-(3-二甲基氨基-丙基)碳二亚胺盐酸盐处理，将该保护的L-精氨醛链段与所要的羧酸偶联。通过0℃用乙腈中的六氟磷酸处理，除去二乙基缩醛和二-Boc保护基团。通过加入2.5M乙酸钠水溶液直到pH4来淬灭反应混合物。将混合物滤过2微米滤膜。用0.1％CF3COOH在10-40％乙腈水溶液中进行制备级HPLC，提供了所要的取代的L-精氨醛化合物的三氟乙酸盐。
图13描述了合成本发明的化合物(其中R2是-CH2OA2和A2是-C(=O)R9)的反应流程。使13-1(实施例57)的中间物与酰氯R9COCl在吡啶等碱的存在下反应。氢化中间物13-2(H2、乙醇：水：乙酸中10％Pd/C)，然后用HPF6水溶液和乙腈处理，除去保护性基团，而不水解R2处的酯。通过使合适的对应13-1的中间物和合适的酰氯衍生物，R9COCl，优选在吡啶等碱的存在下反应，可方便的制备R2是-(CH2)2OA2或-CH(R6)OA2，其中A2是-C(=O)R9的化合物。在制备R5是精氨醛基的化合物时，然后氢化产物，用HPF2水溶液和乙腈处理，得到产物精氨醛，而不水解R2处的酯。
可通过用合适的氯甲酸酯衍生物处理R2是-(CH2)2OH或-CH(R6)OH的对应化合物，可方便的制备R2是-(CH2)2OA2或-CH(R6)OA2，其中A2是-C(=O)OR9的化合物。在制备P1是精氨醛的化合物中，优选用碳酸酯基团封端，然后使精氨酸侧链去保护。因此，优选用氯甲酸酯衍生物处理对应的Ng-硝基精氨醛-乙基环醇中间物(见例如实施例76)。然后氢化产物，在水解条件下处理，得到产物精氨醛(见例如实施例77到78)。
3．优选化合物的选择
根据本发明的一个方面，选择本发明优选化合物抑制丝氨酸蛋白酶，尤其是尿激酶的的能力和选择性。这些评估在体外常规进行，根据实施例A中列出的程序。如所述，和公知的，在允许蛋白酶及其底物反应的试验条件下使靶丝氨酸蛋白酶与其底物混合。在不存在测试化合物，和存在递增浓度的测试化合物的条件下进行试验。丝氨酸蛋白酶活性50％被测试化合物抑制的测试化合物浓度是IC50值(抑制浓度)或该化合物的EC50(有效浓度)值。在一系列或组测试化合物中，将那些具有较低IC50或EC50值的化合物视为是比具有较高IC50或EC50值的化合物更强的丝氨酸蛋白酶抑制剂。IC50测量常用于更简单化的试验，而EC50常用于更复杂的试验，如那些使用细胞的试验。
根据本发明的该方面，优选化合物具有如在尿激酶活性抑制的体外试验中测量的，100nM或更低的IC50值。尤其优选的化合物具有小于30nM的IC50值。
还评估了测试化合物对丝氨酸蛋白酶的选择性。如实施例中所述和公知的，试验测试化合物对一套丝氨酸蛋白酶和其它酶的能力，对于各试验系统中的各测试化合物，测定了IC50值或EC50值。将对靶酶，例如尿激酶具有较低的IC50或EC50值，而对于测试组中的其它酶(如组织纤溶酶原激活物、纤维蛋白酶、凝血因子Xa)，具有较高的IC50或EC50值的化合物视为对靶酶具有选择性。一般，认为如果一种化合物在靶酶试验中的IC50值或EC50值比酶选择性组中测量的第二最小的IC50或EC50值至少小一个数量级，该化合物是选择性的。
本发明的优选化合物如在尿激酶活性抑制的体外试验中测量的，具有100nM或更小的IC50值。尤其优选的化合物在体外尿激酶抑制试验中具有比体外tPA抑制试验中测量的IC50值至少小一个数量级的IC50值。尤其优选的是具有大于100的IC50tPA试验：IC50尿激酶试验选择性比的化合物。
还评估了本发明的化合物的体内活性。所选用于评估测试化合物的试验类型由要用该化合物治疗或预防的病理情况，以及要评估测试化合物的施用途径决定。
例如，为了评估本发明化合物通过抑制尿激酶减弱肿瘤生长的活性，可使用Jankun等[癌症研究57:559-563,1997]评估PAI-1的程序。简单说，将表达高水平的uPA的ATCC细胞系DU145和不表达uPA的LnCap注射入SCID小鼠。建立肿瘤后，根据化合物体外特性确定的施剂方案施给小鼠测试化合物。Jankun等化合物是水中施用的。每周两次测量肿瘤体积，进行约5周。如果施用该化合物的动物与接受合适的对照化合物的动物比较，显示肿瘤体积减小，认为该化合物是活性的。另外，在用DU145细胞注射的动物与用LnCaP细胞注射的动物中，比较化合物的作用，可表明化合物的效果是由于抑制尿激酶还是其它原因。
Billstrm等描述了另一种设计以评估对氨基苯甲脒，一种可能的尿激酶抑制剂化合物减小肿瘤体积作用的体内实验模型[Int.J.Cancer 61:542-547,1995]。
为了评估本发明的化合物降低转移的发生或抑制转移的能力，可使用Kobayashi等描述的程序[Int.J.Canc.57:727-733d,1994]。简单说，将用于选择高肺部占据能力的小鼠异种移植体注射入C57B1/6小鼠静脉内(实验转移)或皮下，进入腹腔壁(自发转移)。可将各种浓度的要测试的化合物与肿瘤细胞在Matrigel中混合，然后注射。在肿瘤接种后，1-6日或7-13日每日胃肠内注射测试化合物。肿瘤接种3或4周后杀死动物，计算肺部肿瘤集落。对得到数据的评估可用于测量实验化合物的效力、最佳剂量和施用途径。
可在Rabbani等[Int.J.Canc63:840-845,1995]描述的，用于评估其抑制剂的模型中评估本发明化合物对减小肿瘤体积和转移的活性。在此，将过度表达uPA的Mat LyLu肿瘤细胞注射入Copenhagen大鼠的肋部。然后将渗透性小型真空泵植入动物体内，来连续施用各种剂量的测试化合物，达3周。在实验期间评估了实验和对照动物的肿瘤质量和体积，以及转移生长。对得到数据的评估可用于测量实验化合物的效力、最佳剂量和施用途径。这些作者中的一些在Xing等[癌症研究57:3585-3593,1997]中描述了一种相关的方案。
为了评估本发明的化合物对新生血管形成的抑制剂活性，可使用兔角膜新生血管模型。Avery等[Arch.Ophthalmol 108:1474-1475,1990]描述了麻醉New Zealand白兔，然后进行中央角膜切割，并形成放射状的角膜囊。将一缓释前列素片放在囊中，以诱导新生血管形成。胃肠内施用测试化合物5日，在该时间杀死动物。通过复查对角膜缘间断拍摄的照片(可用来计算新生血管反应的面积和从而计算边缘新生血管形成)来评估测试化合物的效果。与合适的对照比较，减小的新生血管面积表明，测试化合物对减少或抑制新生血管形成是有效的。
Min等描述了一种用于评估测试化合物防止血管形成的血管形成模型[癌症研究56:2428-2433,1996]。C57BL6小鼠接受了含有bFGF(作为血管形成诱导剂)和有或无测试化合物的Matrigel混合物的皮下注射。5日后，杀死动物，对Matrigel栓拍照(在Matrigel栓中可见到新生血管形成)。接受Matrigel和有效量的测试化合物的实验动物将比对照动物，或接受较少或无效剂量的化合物的动物，显示较低的新生血管形成。
Crowley等描述了一种设计为测试化合物限制原发瘤扩散能力的体内系统[Proc.Natl.Acd.Sci.90:5021-5025,1993]。用工程改造，表达CAT(氯霉素乙酰转移酶)的肿瘤细胞(PC3)注射裸鼠。该细胞分泌大量uPA，并显示饱和量的uPA结合细胞表面上的uPAR的活性。将要测试减小肿瘤大小和/或转移生长的化合物施给该动物，然后测量肿瘤大小和/或转移生长。另外，不同器官中检测到的CAT水平提供了测试化合物抑制转移的活性指标；在处理过的动物中，相对于对照动物检测到组织中较少的CAT，表明较少表达CAT的细胞转移到该组织。
Alonso等描述了设计以使用据说是高侵染性的肿瘤细胞系F3II，来评估实验化合物的尿激酶抑制性能的体内实验模型[乳癌研究和治疗40:209-223,1996]。该研究小组描述了毒性测定、肿瘤生长、侵袭力、自发转移、实验性肺转移的体内研究，和血管形成试验。
首先由L.Ossowski于1998描述的CAM模型(鸡胚绒毛尿囊膜模型)[细胞生物学杂志107:2437-2445,1988]，提供了另一种评估测试化合物尿激酶抑制活性的方法。在CAM模型中，肿瘤细胞通过绒毛尿囊膜侵袭是由催化活性uPA的存在决定的。在尿激酶抑制剂存在下，使CAM和肿瘤细胞接触，导致较少或无肿瘤细胞过膜侵袭。因此，在有和无各种浓度的测试化合物的情况下，用CAM和肿瘤细胞进行CAM试验。在这些条件下测量肿瘤细胞的侵袭力，以提供化合物尿激酶抑制剂活性的指标。具有尿激酶抑制剂活性的化合物伴有较低的肿瘤侵袭。
也在血管形成的标准试验(即，对新血管形成的作用)(Brooks,P.C.；Montogamery,A.M.P.；和Cheresh,D.A.，分子生物学方法129:257-269(1999))中使用了CAM模型。根据该模型，将含有血管形成诱导剂，如碱性成纤维细胞生长因子的滤纸片放在CAM上。该细胞因子扩散入CAM，诱导了局部血管形成，这可用数种方法，如对直接在滤纸片下的CAM血管分枝点计数来测量。可用该模型测试本发明的化合物抑制细胞因子诱导的血管形成的活性。可将测试化合物加到含有血管形成诱导剂的滤纸片，然后直接放在膜上，或全身施用。有和/或无测试化合物时的新血管形成程度可用该模型比较。测试化合物存在时较少新血管的形成将指示抗-血管形成活性。由于本发明的某些化合物作为尿激酶的抑制剂是活性的，这些化合物的抗-血管形成活性可提示尿激酶在血管形成中起了重要作用。
4．药物学组合物
在另一个方面，本发明包含制备以供储藏或施用的药物组合物，其包含在药物学上可接受的载体中的治疗有效量的本发明化合物。
本发明化合物的治疗有效量将视施药途径、要治疗的哺乳动物种类，和考虑的特定哺乳动物的生理特性而定。这些因素及其与确定该量的关系是医药领域熟练技术人员熟知的。可修改该量和施用方法，来实现最佳效果，但将由这些因素，如重量、饮食、配伍药物状况和其它医学领域的技术人员将认识到的因素而定。
本发明化合物的治疗有效量将广泛变化，由所需效果和治疗指标决定。通常，剂量将在约0.01mg/kg和100mg/kg体重之间，优选约0.01和10mg/kg体重之间。
治疗用药物学上可接受的载体是药物学领域熟知的，而且在例如Remington’s药物科学，Mack Publishing Co.(A.R.Gennaro edit.1985)中描述。例如，可用生理pH下的无菌盐水和磷酸缓冲盐水。可在药物组合物中提供防腐剂、稳定剂、染料和甚至调味剂。例如，可加入作为防腐剂的苯甲酸钠、山梨酸和对羟基苯甲酸酯。同上，1449。另外，可用抗氧化剂和悬浮剂。同上。
可配制和使用作为片剂、胶囊或酏剂，用于口腔施药；栓剂，用于直肠施药；无菌溶液和悬浮液，用于注射施药等的本发明的药物学组合物。可修改施药的剂量和方法，来实现最佳效果，但将由这些因素，如重量、饮食、目前药物状况和其它医学领域的技术人员将认识到的因素而定。
当施药是肠道外，如每日静脉内的，可用制备常规形式的溶液或悬液、适用于在注射前溶解或悬浮在液体中的固体形式，或乳剂形式的可注射药物组合物。合适的赋形剂是例如：水、盐水、葡萄糖、甘露醇、乳糖、卵磷脂、白蛋白、谷氨酸钠等。另外如需要，可注射药物组合物可含有微量无毒性辅助物质，如湿润剂、pH缓冲剂等。如需要，可利用吸收增强制剂(如脂质体)。
实用性
可为许多用途在体内或体外使用本发明具有尿激酶抑制剂活性和/或减少或抑制血管形成，包括血管形成和新生血管形成的活性的化合物，将在下文描述这些用途中的一些。
本发明化合物具有尿激酶抑制剂活性，并特异性结合尿激酶。因此可体外使用这些含有适合连接在固体/凝胶载体上的位点的化合物，进行亲和层析，使用常规亲和层析程序从样品中纯化尿激酶或从样品中除去尿激酶。使用常规方法，使这些化合物直接或通过合适的连接基载体吸附或偶联在亲和层析上。见例如，蛋白质科学的目前方法，John Wiley&Sons(J.E.Coligan等编，1997)和蛋白纯化方案，Humana Press(S.Doonan编，1966)及其中的文献。
可在体外试验中用本发明具有尿激酶抑制剂活性的化合物，测量样品中的tPA活性。在测量血样中总纤溶酶原活化活性的试验中，本发明具有尿激酶抑制剂活性的化合物将剔除归因于uPA的纤溶酶原活化部分，其将可计算由于tPA活性的总纤溶酶原活化部分，以及由于uPA活性的部分。用这些试验监测tPA活性，在接受tPA的病人中将更好的控制剂量。还能用这些试验监测组织样品，如来自活体检查中的uPA活性水平，或监测其中测量纤溶酶原活化活性有帮助的任何临床情况中的uPA/tPA活性。还可用这些试验来监测纤溶酶原激活物活性，其中病人已用具有纤溶酶原激活物活性的非内源化合物，如链激酶和葡萄激酶治疗。
本发明化合物可用于体内治疗将通过降低尿激酶活性改善的病理情况。例如，这些化合物将抑制滑液中uPA-纤溶酶级连的金属蛋白酶的活化，因而可用于治疗关节炎。
据信这些化合物将可用于降低或抑制转移、新生血管形成和肿瘤及其它新生物的胞外基质降解。这些化合物将用作治疗剂，以治疗诸如视网膜疾病、视网膜病和其它情况，包括本文发明背景和介绍中所述的情况等，以病理性新生血管形成为特征的情况。
本发明具有尿激酶抑制剂活性的化合物的另一种用途是，作为解毒剂，如果对病人出于某种目的，如溶解血栓，施用了太多的尿激酶。
本发明化合物由于其对尿激酶抑制引起的抗炎症效果，从而干涉了细胞黏着或迁移的介导物，可用于治疗特征为炎症的情况。这些抗炎症用途包括：治疗中风和器官移植的并发症。
本发明包括预防或治疗哺乳动物的一种情况的方法，该哺乳动物被怀疑具有可通过抑制尿激酶活性予以弱化的情况，该方法包含施给所述哺乳动物治疗有效量的本发明的化合物或药物组合物。
体内施用本发明化合物或药物组合物，一般在哺乳动物内，优选是人。体内使用时，可用各种方法将该化合物或药物组合物施给哺乳动物，包括：口腔、胃肠内、静脉内、皮下、肌肉内、结肠内、直肠内、鼻内或腹膜内，使用各种剂量形式。施药优选口腔，如通过每日服用片剂、胶囊或酏剂。
在实施本发明的方法中，可单独或彼此联合，或联合其它治疗性或体内诊断剂施用本发明的化合物。
医药领域技术人员将明确，本发明“治疗有效量”的化合物或药物组合物将变化，视年龄、重量和治疗的哺乳动物物种、使用的具体化合物、施药的具体模式和所要的效果和治疗指标而定。因为在医学领域中这些因素及其与确定该量的联系是熟知的，治疗有效量水平的确定、实现所要抑制uPA活性的结果所需的剂量，将在本领域技术人员能力范围内。通常，本发明化合物或药物组合物的施用从较低剂量水平开始，增加剂量，直到达到所要抑制uPA活性的程度的效果，这就确定为治疗有效量。对于单独或作为药物组合物部分的本发明化合物，这些剂量是约0.01mg/kg和100mg/kg体重之间，优选约0.01和10mg/kg体重之间。
为了帮助理解，现在将进一步用下列实施例说明本发明。这些关联于本发明的实施例将当然不会要特别限定本发明，而且本发明的这些现在已知或将来开发的(在本领域技术人员的预见范围内)的变体，将在本说明书所述和权利要求的范围内。实施例A．起始材料的制备(见图1)实施例1N-α-叔丁氧基羰基-Ng-硝基精氨酰基-N-甲氧基-N-甲基酰胺的制备
Figure A9981000200511
将4-甲基吗啉(41.2g,407mmol,1.3当量)加到N-α-叔丁氧基羰基-Ng-硝基精氨酸(100克,313毫摩尔)、N,O-二甲基羟基胺盐酸盐(61.2克，626毫摩尔，2当量)、EDC(77.9克，407毫摩尔，1.3当量)、和1-羟基苯并三唑(55.1克，407毫摩尔，1.3当量)的无水乙腈(523毫升)溶液中。室温搅拌反应混合物16小时，真空除去溶剂。在乙酸乙酯和水之间分配残余物。用乙酸乙酯重复萃取水相(2X)。用1N HCl(1X)、水(1X)、饱和碳酸氢钠(1X)、水(1X)洗涤合并的有机层，然后干燥(硫酸镁)，过滤并真空浓缩。获得78％质量回收率的白色泡沫状标题化合物，并不经进一步纯化使用。产物TLC分析表明了令人满意的纯度。Rf=0.21(10％甲醇/二氯甲烷)。MS(M+H+)=363.0，计算值(MW)=362.2。
1H NMR(400MHz,CDCl3):d1.47(s,9H),1.55-1.68(m,2H),1.71-1.83(br,2H),3.23(s,3H),3.25-3.35(m,1H),3.55-3.68(m,1H),3.75-3.80(s,3H),4.66(t,1H),5.63(d,1H)。
实施例2
N-α-叔丁氧基羰基-Ng-硝基精氨醛的制备
Figure A9981000200512
在1升3颈圆底烧瓶中的实施例1化合物(25克，68.9毫摩尔，1当量)的无水四氢呋喃(300毫升)溶液中，-78℃,30分钟在氮气下滴加1M氢化钾铝/四氢呋喃(100毫升，1.45当量)。将反应混合物置于-78℃搅拌1小时，然后在室温下搅拌20到30分钟。观察到一层厚浆液。再次将反应混合物冷却到-78℃，缓慢用2M硫酸氢钾(100毫升)淬灭。滤出沉淀，用四氢呋喃(200毫升)洗涤。真空浓缩合并滤液。用乙酸乙酯和水分配粗残余物。用0.5N HCl、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤有机相。用硫酸镁干燥残余物并过滤。蒸发滤液，得到15.9克(76％产率)的白色固体状标题化合物。Rf=0.13(50％己烷/乙酸乙酯)用TLC判断所要产物的纯度。MS:(M+H+)=304.0，计算值(MW)=303.1。1H NMR(400MHz,CDCl3):d1.47(s,9H),1.55-1.68(m,2H),1.71-1.83(m,2H),3.19-3.35(m,2H),4.41-4.48(m,1H),5.82(s,1H)。
另外，可根据美国专利号5,731,413的实施例2列出的程序制备标题化合物。实施例3N-α-叔丁氧基羰基-Ng-硝基精氨醛(6-己酸乙酯)环醇的制备
Figure A9981000200521
在实施例2的化合物(32.7克，107.9毫摩尔，1当量)和6-羟基己酸乙酯(86.5克，539.6毫摩尔，5当量)的乙腈(20毫升)的搅拌溶液中加入3N HCl(260微升)。所有反应物在室温下15分钟后加入溶液。然后搅拌混合物24小时以后，取出一小部分用于TLC和质谱，来确定完成度。然后，在反应物中加入乙酸酐(55.1克，539.6毫摩尔，5当量)和吡啶(42.7克，539.6毫摩尔，5当量)，来封闭过量的羟基酯接头。继续反应过夜。蒸发残余物。将残余物溶于乙酸乙酯中，用1N HCl(1X)，水(1X)，饱和碳酸氢钠(1X)，水(1X)洗涤，并干燥(硫酸镁)，过滤并浓缩。用硅胶快速层析纯化残余物，使用25-33％己烷/乙酸乙酯梯度，并得到45.0克粘性油状的标题化合物(93.7％)。Rf=0.24(50％己烷/乙酸乙酯)。MS(M+H+)=446.0，计算值(MW)=445.2。1H NMR(400MHz,CDCl3):d1.25(t,3H),1.31-1.38(m,2H),1.45(s,9H),1.50-1.83(m,8H；aliph.,b,g),2.25-2.35(m,2H),3.30-3.45(m,2H),3.55-3.65(br,5H),3.75-3.83(br,1H),4.05-4.15(m,2H),4.85(d,1H),5.60(s,1H)。实施例4N-α-叔丁氧基羰基-精氨醛(6-己酸乙酯)环醇，乙酸盐的制备
Figure A9981000200531
在实施例3的化合物(45.8克，103.0毫摩尔，1当量)的乙醇/水/乙酸(4∶1∶1)(200毫升)溶液中加入10％钯碳(9.2克，20％重量)。40psi下氢化混合物16小时。过滤溶液，真空蒸发滤液。将残余物置于水中，用乙醚(3X)洗涤。用水重新抽提有机层(1X)。合并水相，冻干得到标题化合物(44.7克，94.4％产率)。Rf=0.18(二氯甲烷/甲醇/浓氢氧化铵；25∶5∶1)。MS(M+H+)=401.0，计算值(MW)=4002.2。1H NMR(400MHz,CDCl3):d1.25(t,3H),1.31-1.38(m,2H),1.45(s,9H),1.50-1.83(m,8H；aliph.,b,g),2.25-2.35(m,2H),3.05-3.28(m,1.5H),3.32-3.48(m,2H),3.55-3.61(br,.5H),3.63-3.73(m,1H),4.08-4.15(m,2H),4.89(d,1H),5.14(d,1H)。
实旆例5
N-α-叔丁氧基羰基-N-ω-烯丙氧基羰基-精氨醛(6-己酸乙酯)环醇的制备
Figure A9981000200532
在实施例4的化合物(44.7克，97.3毫摩尔，1当量)的二氯甲烷(292毫升)悬液中0℃分步加入1N氢氧化钠(291.9毫升，291.9毫摩尔，3当量)溶液，来维持pH=11-13。以3部分将氯甲酸烯丙酯(15.3克，126.5毫摩尔，1.3当量)加到反应物中。在用TLC和MS监测1小时后，用二氯甲烷(3X)萃取混合物，干燥(硫酸镁)，过滤并蒸发。立即用硅胶快速层析纯化粗产物，使用己烷和乙酸乙酯作为洗脱液。获得(88％产率)粘性油状的标题化合物(41.5克)。Rf=0.30(50％己烷/乙酸乙酯)。MS(M+H+)=485.0，计算值(MW)=484.2。1HNMR(400MHz,CDCl3):d1.24(t,3H),1.31-1.38(m,2H),1.45(s,9H),1.50-1.83(m,8H；aliph.,b,g),2.25-2.35(m,2H),2.90-3.12(m,1.5H),3.30-3.45(m,2H),3.55-3.65(br,5H),3.75-3.83(br,1H),4.05-4.15(m,2H),4.57(d,2H),4.83(s,1H),5.25(q,2H),5.90-6.05(m,1H)。
实施例6
N-α-叔丁氧基羰基-N-ω-烯丙氧基羰基-精氨醛(6-己酸)环醇的制备
在实施例5的化合物(40.3克，83.2毫摩尔)的乙醇溶液(83.2毫升)中加入3N氢氧化锂(55.5毫升、166.4毫摩尔、2当量)。室温下搅拌21/2小时后，真空浓缩反应物。将残余物溶解在水中，用乙醚(3X)洗涤。将水相用1N HCl酸化到pH=2-3，用二氯甲烷萃取。干燥溶液(硫酸镁)，过滤，并蒸发，得到31.5克白色玻璃状泡沫的标题化合物(83.0％产率)。Rf=0.33(乙酸乙酯)。MS(M+H+)=457.1，计算值(MW)=456.2。1H NMR(400MHz,CDCl3):d1.45(s,9H),1.52-1.87(m,10H；aliph.,b,g),2.32-2.43(m,2H),3.05-3.28(m,1.5H),3.37-3.55(m,2H),3.83(s,1H),4.57-4.65(m,2H),4.88(d,1H),5.31(s,1H),5.90-6.05(m,1H)。
实施例7
N-α-叔丁氧基羰基-N-ω-烯丙氧基羰基-精氨醛（6-己酰基-氨基甲基化的聚苯乙烯树脂)环醇的制备
Figure A9981000200542
室温下，在氨基甲基化的聚苯乙烯树脂(22.6克，26.2毫摩尔，1当量)中加入溶于二甲基甲酰胺(214毫升)实施例6的化合物(15.5克，34.0毫摩尔，1.3当量)和PyBOP(17.7克，34.0毫摩尔，1.3当量)，然后加入二异丙基乙基胺(4.4克，34.0毫摩尔，1.3当量)。在圆底烧瓶中缓慢搅拌混合物过夜。用大量二氯甲烷和甲醇洗涤树脂。真空干燥树脂(取出3毫克干燥树脂样品，用于Kaiser试验)，并用二甲基甲酰胺/乙酸酐/三乙基胺(8∶1∶1)在环境温度中乙酰化30分钟。再次用有机溶剂(二氯甲烷和甲醇)连续洗涤树脂，并真空干燥，得到标题化合物(40.8克；92.0％产率重量)。Kaiser试验(O.D:99％偶联)；树脂取代度(约0.75毫摩尔/克)。
B．固相制备较少量化合物的通用程序
固相合成可用于生产小量本发明的某种化合物。如肽的常规固相合成，用于固相合成肽基精氨醛的反应器是由一种至少一个表面对溶剂和溶解的试剂可渗透，但对所选筛尺寸的合成树脂不可渗透的容器构成的。这些反应器包括有一个砂芯玻璃烧结的玻璃固相反应容器，具有烧料的聚丙烯管或柱，或由Irori Inc.,San Diego CA制造的反应器KansTM。所选反应器的类型由所需固相树脂的体积决定，可在合成的不同阶段使用不同反应器类型。
实施例8描述了固相合成少量本发明化合物的通用程序。见图2。实施例9到15描述了修改该过程得到本发明其它化合物。实施例8异丁氧基羰基-D-丝氨酰基-L-丙氨酰基-精氨醛(化合物1)的固相合成
Figure A9981000200551
步骤1：N-ω-烯丙氧基羰基-精氨醛(6-己酰基-氨基甲基化的苯乙烯树脂)环醇的制备
Figure A9981000200561
在60毫升固相反应容器中加入2.0克实施例7的化合物(0.6-0.7meq/g取代度)和二氯甲烷(12毫升)、三氟乙酸(6毫升)和硫代苯甲醚(2毫升)的混合物。冒泡通氮气15分钟。从树脂中抽出反应物，连续用二氯甲烷(2×20毫升)、二异丙基乙基胺(20毫升)、二氯甲烷(2×20毫升)、二异丙基乙基胺(20毫升)、二氯甲烷(2×20毫升)、二异丙基乙基胺(2×20毫升)、和乙醚(2×20毫升)洗涤树脂。真空储藏标题化合物。树脂的水合茚三酮测试显示除去t-叔丁氧基羰基基团产生的游离胺的暗蓝色特征。
步骤2：N-α-Fmoc-N-ω-烯丙氧基羰基-精氨醛(6-己酰基-氨基甲基化的聚苯乙烯树脂)环醇的制备
Figure A9981000200562
将步骤1的化合物(2.1克)置于固相反应容器中，在其中加入Fmoc-丙氨酸(1克，3.2毫摩尔)、1-羟基苯并三唑(0.5克，3.2mmol)、TBTU(1.024克，3.2mmol)和二异丙基乙基胺(600微升，3.4毫摩尔)的二甲基甲酰胺溶液(15-20毫升)。室温氮气冒泡通过反应器2小时。从树脂中排干试剂，连续用二甲基甲酰胺(2×20毫升)、二氯甲烷(2×20毫升)、二甲基甲酰胺(2×20毫升)、二氯甲烷(2×20毫升)和乙醚(2×20毫升)洗涤树脂。真空干燥树脂，取出小量用于水合茚三酮比色分析，其显示产生标题化合物中99.5％的偶联效率。
步骤3：丙氨酰基-N-ω-烯丙氧基羰基-精氨醛(6-己酰基-氨基甲基化的聚苯乙烯树脂)环醇的制备
Figure A9981000200571
在室温下，用氮气搅动，用50％哌啶的二甲基甲酰胺(20毫升)处理步骤2的化合物30分钟。如上洗涤树脂，真空干燥，得到标题化合物。对小量进行水合茚三酮试验，得到暗蓝色树脂和溶液，显示高去保护产率。
步骤4：N-α-Fmoc-D-丝氨酰基(O-叔丁基)-丙氨酰基-N-ω-烯丙氧基羰基-精氨醛(6-己酰基-氨基甲基化的聚苯乙烯树脂)环醇的制备
Figure A9981000200572
将步骤3的化合物(100毫克)置于Irori KanTM反应容器中。将容器置于含有二甲基甲酰胺(4毫升)、N-α-Fmoc-D-丝氨酸(O-叔丁基)(184毫克，0.48毫摩尔)、1-羟基苯并三唑(73毫克，0.48毫摩尔)、TBTU(154毫克、0.48毫摩尔)和二异丙基乙基胺(84微升，0.48毫摩尔)的20毫升小瓶中。在摇床上摇动反应器3小时。排干反应器，连续用二甲基甲酰胺(2×3毫升)、二氯甲烷(2×3毫升)、二甲基甲酰胺(2×3毫升)、二氯甲烷(2×3毫升)、异丙醇(2×3毫升)、二氯甲烷(2×3毫升)、异丙醇(2×3毫升)和乙醚(2×3毫升)洗涤。真空干燥树脂，得到标题化合物。
步骤5：D-丝氨酰基(O-叔丁基)-丙氨酰基-N-ω-烯丙氧基羰基-精氨醛(6-己酰基-氨基甲基化的聚苯乙烯树脂)环醇的制备
用50％哌啶的二甲基甲酰胺(5毫升)溶液在20毫升试管中室温处理含有步骤4的化合物的容器45分钟，一面在摇床上摇动。如上洗涤树脂，真空干燥，得到步骤5的化合物。对小量进行水合茚三酮试验，得到暗蓝色树脂和溶液，显示高去保护产率。
步骤6：D-丝氨酰基(O-叔丁基)丙氨酰基-N-ω-烯丙氧基羰基-精氨醛(6-己酰基-氨基甲基化的聚苯乙烯树脂)环醇的氨基甲酸酯类似物的制备。如：
Figure A9981000200582
将含有步骤5的化合物的容器，以及其它含有相关树脂结合类似物(见实施例9到14，下文)的容器，分别放置在含有0.12M各种氯甲酸酯(包括氯甲酸异丁酯)的二甲基甲酰胺(5-10毫升)溶液的20毫升试管中。加入二异丙基乙基胺(105-210微升，0.6-1.2毫摩尔)，振摇试管2.5小时。排干所有试管，连续用二甲基甲酰胺(2×3毫升)、二氯甲烷(2×3毫升)、二甲基甲酰胺(2×3毫升)、二氯甲烷(2×3毫升)、异丙醇(2×3毫升)、二氯甲烷(2×3毫升)、异丙醇(2×3毫升)和乙醚(2×3毫升)。真空干燥KansTM，包括含有异丁氧基羰基-D-丝氨酰基(O-叔丁基)丙氨酰基-N-ω-烯丙氧基羰基-精氨醛(6-己酰基-氨基甲酰化的聚苯乙烯树脂)环醇的树脂。
步骤7:D-丝氨酰基(O-叔丁基)-丙氨酰基精氨醛(6-己酰基-氨基甲基化的聚苯乙烯树脂)环醇的制备，如：
Figure A9981000200591
对于本发明的几种化合物，通过将38个容器的集合置于250毫升聚丙烯瓶中，加入甲基亚砜(10毫升)、四氢呋喃(10毫升)、1N HCl(2.5毫升)和吗啉(25毫升)的混合物，同时从步骤5的产物上除去烯丙氧基保护基团。然后加入四-三苯基膦合钯(0.87克)，室温振摇瓶子4小时。排干容器，包括含有异丁氧基羰基-D-丝氨酰基(O-叔丁基)-丙氨酰基精氨醛(6-己酰基-氨基甲基化的聚苯乙烯树脂)环醇的，连续用二甲基甲酰胺(2×3毫升)、二氯甲烷(2×3毫升)、二甲基甲酰胺(2×3毫升)、二氯甲烷(2×3毫升)、异丙醇(2×3毫升)、二氯甲烷(2×3毫升)、异丙醇(2×3毫升)和乙醚(2×3毫升)洗涤，真空干燥，分别得到容器中的标题化合物。
步骤8：异丁氧基羰基-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛的制备
Figure A9981000200592
将含有异丁氧基羰基-D-丝氨酰基(O-叔丁基)-丙氨酰基精氨醛(6-己酰基-氨基甲基化的聚苯乙烯树脂)环醇的容器倒到含有三氟乙酸/二氯甲烷/水(1.5毫升6∶3∶1的混合物)的Whatman聚丙烯微型柱上。室温振摇该柱4小时。将反应溶液排到试管中，用二氯甲烷和水洗涤树脂。将洗涤混合物和反应混合物收集在同一试管中，搅动混合物，然后使其分成两相。取出水层，过滤。用半制备级反相HPLC纯化标题化合物(化合物1)，冻干，称重，并用HPLC和质谱分析。在实施例36到43中提供了另一种合成化合物1的途径。
实施例9苄氧基羰基-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛的固相合成(化合物2)
Figure A9981000200601
按照实施例8的步骤1到4和7到8制备了苄氧羰基-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛(化合物2)，在步骤4中用Cbz-D-丝氨酸(O-叔丁基)代替Fmoc-D-丝氨酸(O-叔丁基)。
实施例10
化合物3到9和35到40的固相合成
根据实施例8的步骤1到8制备了下列化合物，用标出的代替步骤6中的氯甲酸异丁酯：
化合物号     化合物名称  步骤6中的代替
    3  (-)薄荷氧基-羰基-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛 氯甲酸(-)薄荷酯
    4  2-萘氧基-羰基-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛 氯甲酸2-萘酯
    5  苯氧基羰基-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛 氯甲酸苯基
    6  2-乙基己氧基-羰基-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛 氯甲酸2-乙基己酯
    7  (+)薄荷氧基-羰基-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛 氯甲酸(+)薄荷酯
    8  甲氧基羰基-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛 氯甲酸甲酯
    9  正丁氧基羰基-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛 氯甲酸正丁酯
    35  3-环己基丙酰基-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛 3-环己基丙酰氯
    36 环己基甲氧基羰基-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛 氯甲酸环己基甲酯
    37 环己基甲基氮杂羰基-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛 异氰酸环己基甲酯
    38 苄基氮杂羰基-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛 异氰酸苄酯
    39 异戊酰基-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛 异戊酰氯
    40 异丙氧基羰基-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛 氯甲酸异丙酯
实施例11芴基甲氧基羰基-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛(化合物10)的固相合成
根据实施例8的步骤1到4和步骤7和8制备了芴基甲氧基羰基-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛(化合物10)。
实施例12
化合物11到18的固相合成
根据实施例8的步骤1-4和7-8制备了化合物11-18，用Cbz-D-丝氨酸(O-叔丁基)代替步骤4中的Fmoc-D-丝氨酸(O-叔丁基)，和用标出的代替物在步骤2中代替Fmoc-丙氨酸。
化合物号     化合物名称 步骤2中的代替物
    11 苄氧基羰基-D-丝氨酰基-脯氨酰基-精氨醛 Fmoc-脯氨酸
    12 苄氧基羰基-D-丝氨酰基-L-吖丁啶-2-羰基-精氨醛 Fmoc-L-吖丁啶-2-羧酸
    13 苄氧基羰基-D-丝氨酰基-2-哌啶酰基-精氨醛 Fmoc-2-哌啶酸
    14 苄氧基羰基-D-丝氨酰基-2-氨基丁酰基-精氨醛 Fmoc-氨基丁酸
    15 苄氧基羰基-D-丝氨酰基-S-甲基半胱氨酰基-精氨醛 Fmoc-S-甲基半胱氨酸
    16 苄氧基羰基-D-丝氨酰基-2-降缬氨酰基-精氨醛 Fmoc-降缬氨酸
    17 苄氧基羰基-D-丝氨酰基-2-甘氨酰基-精氨醛 Fmoc-甘氨酸
    18 苄氧基羰基-D-丝氨酰基-肌氨酰基-精氨醛 Fmoc-肌氨酸
实施例13
化合物19到23的固相合成
根据实施例8的步骤1-4和7-8制备了化合物19-23，用标出的代替物代替步骤4中的Fmoc-D-丝氨酸(O-叔丁基)。
化合物号     化合物名称 步骤4中的代替物
19 苄氧基羰基-D-别苏氨酰基-丙氨酰基-精氨醛 Cbz-D-异苏氨酸(O-叔丁基)
    20 苄氧基羰基-苏氨酰基-丙氨酰基-精氨醛 Cbz-D-异苏氨酸(O-叔丁基)
    21 苄氧基羰基-D-丙氨酰基-丙氨酰基-精氨醛 Cbz-D-丙氨酸
    22 苄氧基羰基-D-苏氨酰基-丙氨酰基-精氨醛 Cbz-D-异苏氨酸(O-叔丁基)
    23 苄氧基羰基-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛 Cbz-丝氨酸(O-叔丁基)
实施例14化合物24、25和33的固相合成
根据实施例8的步骤1-4和7-8制备了化合物24、25和33，用Cbz-D-异苏氨酸(O-叔丁基)代替步骤4中的Fmoc-D-丝氨酸(O-叔丁基)，和标出的代替物代替步骤2中的Fmoc-丙氨酸。
化合物号     化合物名称 步骤2中的代替物
    24 苄氧基羰基-D-别苏氨酰基-肌氨酰基-精氨醛 Fmoc-肌氨酸
    25 苄氧基羰基-D-别苏氨酰基-N-甲基丙氨酰基-精氨醛 Fmoc-N-甲基丙氨酸
实施例15
化合物26到27的固相含成
根据实施例8的步骤1-4和7-8制备了化合物26和27，用Fmoc-脯氨酸代替步骤2中的Fmoc-丙氨酸，和标出的代替物代替步骤3中的Fmoc-D-丝氨酸(O-叔丁基)。
化合物号     化合物名称 步骤4中的代替物
    26 苄氧基羰基-D-苏氨酰基-脯氨酰基-精氨醛 Cbz-D-苏氨酸(O-叔丁基)
    27 苄氧基羰基-D-高丝氨酰基-脯氨酰基-精氨醛 Cbz-D-高丝氨酸(O-叔丁基)
实施例16
化合物41到43的固相合成
根据实施例8的步骤1-4和7-8制备了化合物41到43，用N-α-Cbz-N-β-Fmoc-D-2,3-二氨基丙酸代替步骤4中的Fmoc-D-丝氨酸(O-叔丁基)，和标出的代替物代替步骤6中的各氯甲酸酯：
化合物号     化合物名称 步骤6中的代替物
    41 N-α-苄氧基羰基-N-β-2-苯基乙基羰基-D-2,3-二氨基丙酰基-丙氨酰基-精氨醛     氢化肉桂酰氯
    42 N-G-N-β二苄氧基羰基-D-2,3-二氨基丙酰基-丙氨酰基-精氨醛     氯甲酸苄酯
    43 N-α-苄氧基羰基-N-β-甲氧基羰基-D-2,3-     氯甲酸甲酯
二氨基丙酰基-丙氨酰基-精氨醛
C．某些化合物的其它合成途径
(ⅰ)实施例17到21描述了苯磺酰基-D-Ser-L-Ala-L-Arg-al，三氟乙酸盐(化合物28)的制备。见图3。实施例17D-Ser(O-t-Bu)-Ala-OMe，乙酸盐的合成
Figure A9981000200642
合并N-α-Cbz-D-丝氨酸(Bachem,4.97克，16.8毫摩尔)，丙氨酸甲酯，盐酸盐(Novabiochem,4.7克，33.7毫摩尔)、EDC(6.5克，33.7毫摩尔)，和1-羟基苯并三唑(2.6克，16.8毫摩尔)，并加入乙腈(67毫升)。然后搅拌浆液10分钟，加入二异丙基乙基胺(14.4毫升，84毫摩尔)，再搅拌得到的澄清混合物18小时。减压除去溶剂，将残余物悬浮在乙酸乙酯(500ml)中。用0.5MHCl(2×100毫升)、饱和碳酸氢钠(2×100毫升)和盐水(100毫升)洗涤溶液。然后用硫酸钠干燥有机层。真空除去溶剂，得到定量产率的Cbz-D-Ser(O-t-Bu)-Ala-OMe，作为反相(C18)HPLC的单峰(tR=16.9,0.1％三氟乙酸在5-75％乙腈水溶液中，20分钟以上)。然后将Cbz-D-Ser(O-t-Bu)-Ala-OMe溶解在乙醇/乙酸/水(150毫升的4∶1∶1混合物)。用氮气充满烧瓶，加入10％钯碳(1.5克)。45psi氢化该混合物2小时。滤去钯碳催化剂，减压除去溶剂，得到4.58克95％产率的标题化合物，作为反相(C18)HPLC的单峰(tR=8.0分钟，0.1％三氟乙酸在5-75％乙腈水溶液中，20分钟以上)，MS(M+H=247.2)。实施例18苯磺酰基-D-Ser(O-t-Bu)-Ala-OMe的合成
Figure A9981000200651
在实施例17的化合物(1.0克，3.3毫升)的乙腈(13毫升)搅拌浆液中加入苯磺酰氯(0.87克，4.9毫摩尔)。在该混合物中以5部分用1小时加入二异丙基乙基胺(1.67毫升，9.8毫摩尔)。将混合物再搅拌1小时。减压除去溶剂，将残余物悬浮在乙酸乙酯(100毫升)中。用0.5M HCl(2×10ml)、饱和碳酸氢钠(2×10毫升)和盐水(1×10毫升)洗涤溶液。然后用硫酸镁干燥，减压除去溶剂。用快速层析，用50％己烷/乙酸乙酯洗脱，纯化残余物，得到0.54克，1.4毫摩尔产率为43％的产物。产物是反相(C18)HPLC的单峰(tR=20.2分钟，0.1％三氟乙酸于5-75％乙腈水溶液中，20分钟以上)。1H NMR(CD3OD):7.5-7.9ppm(m,5H),4.3ppm(q,1H),3.9ppm(t,1H),3.7(s,3H),3.4ppm(m,1H),3.5ppm(m,1H),1.3ppm(d,3H),1.05ppm(s,9H)。
实施例19
苯磺酰基-D-Ser(O-t-Bu)-Ala-OH的合成
Figure A9981000200652
在实施例18化合物(0.53克，1.4毫摩尔)的甲醇溶液(9毫升)中加入1.0M氢氧化锂(3.0毫升，3毫摩尔)。搅拌18小时后，将反应混合物倒到10毫升DOWEX(50×8-400)离子交换树脂柱上，用甲醇/水(60毫升1∶1混合物)洗脱。减压泵去甲醇，冻干剩余水，得到0.49克，1.3毫摩尔(95％)标题化合物，作为反相(C18)HPLC的单峰(tR=13.5分钟，0.1％三氟乙酸于5-75％乙腈水溶液中，20分钟以上)。1H NMR(CD3OD):7.9ppm(d,2H),7.6ppm(t,1H),7.5ppm(t,2H),4.25ppm(q,1H),3.9(t,1H),3.5ppm(m,1H),3.4ppm(m,1H),1.3ppm(d,3H),1.075ppm(s,9H)。
实施例20
苯磺酰基-D-Ser(O-t-Bu)-Ala-Ng-硝基精氨醛乙基环醇的合成
Figure A9981000200661
混合实施例19的化合物(0.48克，1.3毫摩尔)、L-Ng-硝基精氨醛乙基环醇，盐酸盐(0.41克，1.5毫摩尔)、EDC(0.37克，1.9毫摩尔)，和1-羟基苯并三唑(0.20克，1.3毫摩尔)并加入乙腈(5毫升)。搅拌得到的浆液10分钟后，加入二异丙基乙基胺(1.10毫升，84毫摩尔)，将得到的澄清混合物再搅拌18小时。减压除去溶剂，将残余物悬浮在乙酸乙酯(100毫升)中。用0.5MHCl(2×10ml)、饱和碳酸氢钠(2×10毫升)和盐水(1×10毫升)洗涤溶液。用硫酸镁干燥有机层，真空除去溶剂，得到产率为95％的0.72克标题化合物。产物是反相(C18)HPLC的单峰(tR=15.2分钟，0.1％三氟乙酸于5-75％乙腈水溶液中，20分钟以上)，MS(M+H=371)。
实施例21
苯磺酰基-D-Ser-L-Ala-L-Arg-al，三氟乙酸盐(化合物28)的合成
Figure A9981000200662
在乙醇/乙酸/水(24.5毫升4∶1∶1的混合物)中的10％钯碳(250毫克)上以50psi氢化实施例20的化合物(0.72克，1.23毫摩尔)18小时。过滤催化剂，从滤液真空除去溶剂，得到定量产率的苄基磺酰基-D-Ser(O-t-Bu)-L-Ala-L-精氨醛乙基环醇，搅拌1小时，作为反相(C18)HPLC的单峰(tR=12.8分钟，0.1％三氟乙酸于5-75％乙腈水溶液中，20分钟以上)，和MS(M+H=541)。用6MHCl(12.25ml)处理苄基磺酰基-D-Ser(O-t-Bu)-L-Ala-L-精氨醛乙基环醇，搅拌1小时，然后用6.5M乙酸铵中和到pH4。将该材料直接荷载到制备级HPLC柱上，用0-20％乙腈水溶液梯度洗脱，冻干后得到88毫克15％产率的标题化合物。标题化合物具有反相(C18)HPLC的三个峰(tR=8.2分钟，9.2分钟和9.5分钟，0.1％三氟乙酸于5-50％乙腈水溶液中，20分钟以上)，MS(M+H=457)。
(ⅱ)实施例22到26描述了苄基磺酰基-D-Ser-L-Ala-L-Arg-al，三氟乙酸盐(化合物29)的合成。实施例22苄基磺酰基-D-Ser(O-t-Bu)-OMe的合成
Figure A9981000200672
在D-丝氨酸(O-t-Bu)甲酯，盐酸盐(2.07克，9.8毫摩尔)的乙腈(39毫升)搅拌溶液中，加入α-甲苯磺酰氯(1.86克，9.8毫摩尔)。在该混合物中分5部分在1小时中加入二异丙基乙基胺(3.7毫升，21.5毫摩尔)。再搅拌混合物1小时。减压除去溶剂，将残余物悬浮在乙酸乙酯(100毫升)中。用0.5MHCl(2×10ml)、饱和碳酸氢钠(2×10ml)、和盐水(1×10ml)洗涤溶液。用硫酸钠干燥有机层，真空除去溶剂，得到产率为88％的标题化合物2.84克。Rf=0.4(4∶1乙酸乙酯∶己烷)。
实施例23
苄基磺酰基-D-Ser(O-t-Bu)-OH的合成
在实施例22的化合物的(2.66克，8.1毫摩尔)的搅拌甲醇(54毫升)溶液中加入1.0M氢氧化锂(17.8毫升，17.8毫摩尔)。搅拌反应混合物18小时，然后倒到10毫升DOWEX(50×8-400)离子交换柱上，用甲醇∶水(60毫升的1∶1混合物)洗脱。减压除去甲醇，冻干剩余水溶液，得到2.47克97％产率的标题化合物。tR=14.8分钟(0.1％三氟乙酸的5-75％乙腈水溶液，20分钟)。实施例24苄基磺酰基-D-Ser(O-t-Bu)-Ala-OMe的合成
Figure A9981000200682
混合实施例23的化合物(1.0克，3.2毫摩尔)、丙氨酸甲酯、盐酸盐(Novabiochem,0.89克，6.3毫摩尔)、EDC(1.22克，6.3毫摩尔)、和1-羟基苯并三唑(0.49克，3.2毫摩尔)，并加入乙腈(13毫升)。搅拌得到的浆液10分钟后，加入二异丙基乙基胺(2.71ml,15.8mmol)，再搅拌得到的澄清混合物18小时。减压除去溶剂，将残余物悬浮在乙酸乙酯(100毫升)中。用0.5MHCl(2×10毫升)、饱和碳酸氢钠(2×10毫升)和盐水(1×10毫升)洗涤溶液。然后用硫酸钠干燥有机层，真空除去溶剂，得到1.22克产率为97％的标题化合物。tR=16.2分钟(0.1％三氟甲酸的5-75％乙腈水溶液，20分钟)。
实施例25
苄基磺酰基-D-Ser(O-t-Bu)-Ala-OH的合成
在实施例24的化合物(1.22克、3.1毫摩尔)的甲醇(22毫升)溶液中，加入1M氢氧化锂(7.2毫升，7.2毫摩尔)。搅拌18小时后，将反应混合物倒到10毫升DOWEX(50×8-400)离子交换树脂柱上，用甲醇∶水(60毫升的1∶1混合物)洗脱。减压除去甲醇，冻干水溶液，得到1.16克产率为91％的标题化合物。tR=13.2分钟(0.1％三氟甲酸的5-75％乙腈水溶液，20分钟)。
实施例26
苄基磺酰基-D-Ser-Ala-Arg-al，三氟乙酸盐(化合物29)的合成
从实施例25的化合物根据实施例20和21的程序，在实施例20描述的程序中用实施例25的化合物代替实施例19的化合物，制备了标题化合物。
(ⅲ)实施例27到34描述了异丁氧基羰基-D-Ser-Ala-Arg-CO-苯乙基酰胺，三氟乙酸盐(化合物30)的合成。见图4。
Figure A9981000200693
实施例27N-α-叔丁氧基羰基-Ng-硝基Arg-COH苯乙基酰胺的合成
混合N-α-叔丁氧基羰基-Ng-硝基Arg-COH-COOH(1.079,3mmol)(根据美国专利号5,371,072，实施例2到5中的程序制备)、苯乙基胺(38毫升，3毫摩尔)、BOP(1.35克，3毫摩尔)和1-羟基苯并三唑(0.23克，1.5毫摩尔)，加入二甲基甲酰胺(122毫升)。搅拌该混合物10分钟，然后加入4-甲基吗啉(2.01毫升，18毫摩尔)，再搅拌得到的混合物18小时。减压除去溶剂，将残余物悬浮在100毫升乙酸乙酯中。溶液用0.5M HCL(2×10ml)、饱和碳酸氢钠(2×10毫升)、和盐水(1×10ml)洗涤。然后用硫酸钠干燥有机层，减压除去溶剂。用快速层析纯化残余物，用乙酸乙酯∶己烷(4∶1)洗脱，得到1.22克产率为89％的标题化合物。tR=13.2分钟和14.1分钟(0.1％三氟甲酸的5-75％乙腈水溶液，20分钟)。
实施例28
叔丁氧基羰基-Ala-Ng-硝基Arg-COH苯乙基酰胺的合成
在搅拌的实施例27的化合物(1.229,2.7mmol)乙酸乙酯溶液(10毫升)中加入5MHCl的乙酸乙酯溶液(10毫升)。2小时后，滤出形成的固体，干燥，得到定量产率的Ng-硝基Arg-COH-苯乙基胺，盐酸盐，它与叔丁氧基羰基-Ala-OH(Novabiochem,0.77克，4.1毫摩尔)、EDC(2.4克，5.4毫摩尔)和1-羟基苯并三唑(0.42克，2.7毫摩尔)；然后加入乙腈(11毫升)。搅拌该浆液状混合物10分钟，然后加入二异丙基乙基胺(2.3毫升，13.55毫摩尔)。再搅拌得到的澄清混合物18小时。减压除去溶剂，将残余物悬浮在100毫升乙酸乙酯中。溶液用0.5M HCL(2×10ml)、饱和碳酸氢钠(2×10毫升)、和盐水(1×10ml)洗涤。然后用硫酸钠干燥有机层，真空除去溶剂，得到1.34克产率为95％的标题化合物。tR=13.0分钟和13.6分钟(0.1％三氟甲酸的5-75％乙腈水溶液，20分钟)。实施例29HCl-Ala-Ng-硝基Arg-COH-苯乙基酰胺的合成
将实施例28的化合物(1.34克，2.6毫摩尔)溶于10毫升乙酸乙酯中。在该混合物中加入10毫升5M盐酸的乙酸乙酯溶液，搅拌得到的混合物。2小时后，滤出形成的固体，干燥，得到1.188克98％产率的标题化合物。
实旅例30
叔丁氧基羰基-D-Ser(OBn)-Ala-Ng-硝基Arg-COH-苯乙基酰胺的合成
混合实施例29的化合物(1.18克，2.4毫摩尔)、叔丁氧基羰基-D-丝氨酸苄酯(Novabiochem,1.089,3.6mmol)、EDC(2.15克，4.9毫摩尔)，和1-羟基苯并三唑(0.37克，2.4毫摩尔)，加入乙腈。在该浆液中以10分钟加入二异丙基乙基胺(2.1毫升，15毫摩尔)，搅拌得到的澄清混合物18小时。减压除去溶剂，将残余物悬浮在100毫升乙酸乙酯中。溶液用0.5M HCL(2×10ml)、饱和碳酸氢钠(2×10毫升)、和盐水(1×10ml)洗涤。然后用硫酸钠干燥有机层，真空除去溶剂，得到1.56克产率为92％的标题化合物。tR=16.0分钟和16.5分钟(0.1％三氟甲酸的5-75％乙腈水溶液，20分钟)。
实施例31
HCl-D-Ser(OBn)-Ala-Ng-硝基Arg-COH-苯乙基酰胺的合成
在实施例30的化合物(1.5克，2.1毫摩尔)的乙酸乙酯(10毫升)溶液中加入5MHCl的乙酸乙酯(10毫升)溶液。搅拌2小时后，滤出形成的固体，干燥，得到1.31克产率为98％的标题化合物。tR=11.8分钟和12.3分钟(0.1％三氟甲酸的5-75％乙腈水溶液，20分钟)。
实施例32
异丁氧基羰基-D-Ser(OBn)-Ala-Ng-硝基Arg-COH-苯乙基酰胺的合成
Figure A9981000200722
在实施例31化合物(1.0克，1.6毫摩尔)的搅拌乙腈(6毫升)溶液中，加入氯甲酸异丁酯(0.225毫升，1.8毫摩尔)、二异丙基乙基胺(0.81毫升，4.74毫摩尔)；搅拌该混合物2小时。减压除去溶剂，将剩余物悬浮在乙酸乙酯(100毫升)中。用0.5M HCL(2×10ml)、饱和碳酸氢钠(2×10毫升)、和盐水(1×10ml)洗涤溶液。然后用硫酸钠干燥有机层，减压除去溶剂，残留物用快速层析纯化，用乙酸乙酯/己烷(4∶1)洗脱，得到0.94克产率为85％的标题化合物。tR=20.2分钟和21.2分钟(0.1％三氟甲酸的25-45％乙腈水溶液，20分钟)。
实施例33
异丁氧基-D-Ser(OBn)-Ala-Ng-硝基Arg-CO-苯乙基酰胺的制备
Figure A9981000200723
将实施例32的化合物(0.1克，0.143毫摩尔)溶于DMSO(1.4毫升)。加入EDC(0.14克，0.714毫摩尔)和二氯乙酸(0.12毫升，1.43毫摩尔)，搅拌混合物1小时。然后将反应混合物倒入乙酸乙酯(50毫升)，用0.5M HCL(2×10ml)、饱和碳酸氢钠(2×10毫升)、和盐水(1×10ml)洗涤。然后用硫酸钠干燥有机层，减压除去溶剂。用快速层析纯化残余物，用乙酸乙酯/己烷(4∶1)洗脱，得到68毫克68％产率的标题化合物。Rf=0.32(4∶1乙酸乙酯/己烷)
实施例34
异丁氧基羰基-D-Ser-Ala-Arg-CO-苯乙基酰胺，三氟乙酸盐的制备
Figure A9981000200731
将实施例33的化合物(68毫克，0.1毫摩尔)和苯甲醚(1毫升)加到HF容器中。用HF(10毫升)-20℃处理混合物并搅拌。30分钟后，蒸发HF。将残余物悬浮在20％乙酸中，用乙醚洗涤(3X)。冻干水层。用反相制备级HPLC纯化粗冻干物(0.1％三氟甲酸的0-40％乙腈水溶液，C-18反相)，冻干，得到14.4g标题化合物，产率26％。tR=12.5分钟(0.1％三氟乙酸的5-75％乙腈水溶液，20分钟)和MS(M+H=564.5)。
(ⅳ)实施例35到40描述了另一种制备化合物1的合成途径。
实施例35
异丁氧基羰基-D-Ser(O-t-Bu)-OMe的合成
Figure A9981000200732
在HCl-D-Ser(O-t-Bu)-OMe(15g,71mmol,Bachem)的四氢呋喃(200毫升)搅拌均匀溶液中加入饱和碳酸氢钠(80毫升)、氯甲酸异丁酯(19.45克，142毫摩尔)。分层，用乙酸乙酯(50毫升)洗涤水层。合并有机相，减压除去溶剂。将残余物悬浮在乙酸乙酯(100毫升)中，用1MHCL(100ml)、饱和碳酸氢钠(100毫升)、和盐水(100ml)洗涤。用硫酸镁干燥有机层，用脱色碳处理(如以商品名Darco出售的)，过滤，减压除去溶剂，得到定量产率的标题化合物。Rf=0.3(20％乙酸乙酯/己烷)。
实施例36
异丁氧基羰基-D-Ser(O-t-Bu)-OH的合成
Figure A9981000200741
在实施例35的化合物(19.51克，70毫摩尔)的四氢呋喃(78毫升)搅拌溶液中加入氢氧化锂(78毫摩尔，3.28克)。剧烈搅拌反应混合物3小时，直到用TLC(20％乙酸乙酯/己烷)观察不到起始材料。用浓盐酸酸化溶液至ph~2，减压除去溶剂。将粗产物悬浮在乙酸乙酯中，用饱和碳酸氢钠抽提(2X,75毫升)。用6M HCl酸化合并的碳酸氢钠洗液，用乙酸乙酯(2×100ml)萃取分离的油。用硫酸镁干燥合并的有机层，用Darco处理，过滤，减压除去溶剂，得到定量产率的标题化合物。Rf=0.01(20％乙酸乙酯溶于己烷)。实施例37异丁氧基羰基-D-Ser(O-t-Bu)-Ala-OMe的合成
Figure A9981000200742
在实施例36的化合物(16.5克，63毫摩尔)、HCl-Ala-OMe(10.6克，85毫摩尔)、1-羟基苯并三唑(10.2克，76mmol)和EDC(16.33克，85mmol)的乙腈(280毫升)0℃溶液中，加入4-甲基吗啉(35毫升，315毫摩尔)。0℃搅拌该混合物1小时，然后在环境温度下搅拌72小时。减压除去溶剂，将得到的残余物悬浮在乙酸乙酯(300毫升)和1MHCl(350毫升)中。分离水层，用乙酸乙酯(300毫升)洗涤。合并合并的乙酸乙酯层，用1M HCL(300ml)、饱和碳酸氢钠(400毫升)、和盐水(200ml)洗涤。用硫酸镁干燥有机层，用Darco处理，过滤，减压除去溶剂，得到21.48克标题化合物(产率98％)。
实施例38
异丁氧基羰基-D-Ser-Ala-OH的合成
将实施例37的化合物(21克，58毫摩尔)溶于三氟乙酸(110毫升)；搅拌得到的混合物35分钟。在冰浴上冷却溶液，加入饱和碳酸氢钠(630毫升)，然后用45分钟加入固体碳酸氢钠(7克)，直到得到pH=7。用乙酸乙酯(3×250ml)萃取水层，合并有机萃取液，用硫酸镁干燥，用Darco处理，过滤，真空除去溶剂，得到定量产率的异丁氧基羰基-D-Ser-Ala-OMe。
在粗残余物的四氢呋喃(68毫升)搅拌溶液中，加入氢氧化锂(2.7克，64毫摩尔，1.1当量)水溶液(17毫升)。剧烈搅拌反应混合物0.5小时，直到用TLC(9∶1二氯甲烷/异丙醇)观察不到起始材料。用6M HCl(13ml)酸化溶液至pH~2，减压除去溶剂。将粗产物悬浮在乙酸乙酯(400毫升)和水(50毫升)中。用乙酸乙酯(200毫升)萃取水层。用硫酸镁干燥合并的有机层，过滤，真空除去溶剂，得到13.94克标题化合物(86％产率)。Rf=0.3(90∶30∶5氯仿/甲醇/乙酸)。
实施例39
异丁氧基羰基-D-Ser-Ala-Ng-硝基Arg-O(乙基环醇)的合成
Figure A9981000200752
在2,6-二甲基吡啶(30.5毫升，272毫摩尔)的乙腈(520毫升)的机械搅拌的溶液中，在0℃加入L-Ng-硝基精氨醛乙基环醇，盐酸盐(16.44克，61毫摩尔)。在该混合物中，加入实施例39的化合物(13.94克，50.5毫摩尔)的乙腈(200毫升)溶液，然后加入1-羟基苯并三唑(8.32克，33毫摩尔)。快速搅拌得到的混合物。以15分钟分小部分加入EDC(12.9克，67毫摩尔)。除去冰浴，再搅拌混合物69小时。减压浓缩溶液，将残余物溶于乙酸乙酯(300毫升)和6MHCl(200毫升)中。滤出得到的沉淀并干燥，得到批号Ⅰ。分离滤液各层，用1MHCL(200ml)洗涤有机层。用NaCl饱和合并的水层，用乙酸乙酯萃取(300毫升)。用饱和碳酸氢钠(300毫升)和盐水(150毫升)洗涤合并有机层，用硫酸镁干燥，减压除去溶剂，得到批号Ⅱ。用20％异丙醇的二氯甲烷溶液(2×150ml)萃取碳酸氢钠洗液。用硫酸镁干燥合并的有机层，减压除去溶剂，得到批号Ⅲ。分别将批号Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ溶解在最小量热乙腈中，冷却过夜。过滤得到的固体并干燥，得到批号Ⅰ(4.15g)、批号Ⅱ(6.63g)、和批号Ⅲ(0.3克)。用TLC和1NMR鉴定批号Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ。标题化合物的合并产率是11.08克(45％产率)。实施例40异丁氧基羰基-D-Ser-Ala-Arg-al，三氟乙酸盐(化合物1)的合成
Figure A9981000200761
在实施例39的化合物的乙醇/乙酸(230毫升的1∶1混合物)溶液中加入10％钯碳(5.74克)；加热混合物至48℃。45分钟后，加入甲酸铵(8.82克，140毫摩尔)的水(9毫升)溶液。搅拌混合物3小时，冷却并过滤。用乙醇洗涤残余物，减压除去溶剂。将残余物溶于水(250毫升)并冻干，得到定量产率的异丁氧基羰基-D-Ser-Ala-L-精氨醛环醇。tR=12分钟，0.1％三氟甲酸的15-25％乙腈水溶液，20分钟。
在0℃的异丁氧基羰基-D-Ser-Ala-L-精氨醛乙基环醇中，加入冷的6MHCl(115毫升)。搅拌该混合物50分钟。除去冰浴，在环境温度下搅拌反应混合物2小时。此后，重新在冰浴上冷却溶液，加入乙酸钠(100克)的水(200毫升)溶液。过滤溶液，用制备级HPLC(用0.1％三氟甲酸分步梯度为10,18,30,50％乙腈水溶液，C-18反相柱)纯化，得到三批标题化合物：LotⅠ(1.41克，14％,99％纯度)、lotⅡ(1.52克，16％，98％纯度)、和lotⅢ(3.13克，32％,95％纯度)。tR=9.46分钟，12.82分钟和13.87分钟(反相HPLC,C-18,0.1％三氟甲酸的10-20％乙腈水溶液，20分钟)，MS(M+H=417.5)。
(ⅴ)实施例4l到45描述了用于合成本发明化合物的精氨醛-亚肼基羰基-氨基甲基化的聚苯乙烯树脂的合成。见图6。
实施例41
叔丁氧羰基-肼基-羰基-氨基甲基化聚苯乙烯树脂的制备
Figure A9981000200771
在1,1-羰基二咪唑(29.19克，180毫摩尔，6当量)的二甲基甲酰胺(300毫升)悬液中分部加入肼基甲酸叔丁酯(23.76克，180毫摩尔，6当量)，一边在环境温度下在氮气下搅拌。加完后，室温搅拌反应混合物2 1/2小时，然后倒到肽合成烧瓶中的氨基甲基化聚苯乙烯树脂(30克，1meq/g，Advance Chemtech)。用氮气净化该悬液3小时。滤出树脂，用3×350毫升二氯甲烷洗涤。Kaiser试验(溶液和珠；淡蓝色，澄清)。进行双重偶联，确保定量反应；然而，双重偶联是可任选的。因此，在环境温度下搅拌1,1-羰基二咪唑(14.60克，90毫摩尔，3当量)和肼基甲酸叔丁酯(11.88克，90毫摩尔，3当量)的150二甲基甲酰胺溶液30分钟，然后倒到前面制备的树脂上。用氮气净化1小时后，滤出树脂，用各6×350毫升的二氯甲烷、甲醇、二氯甲烷、甲醇、二氯甲烷和甲醇洗涤。Kaiser试验(溶液和珠；淡蓝色，澄清)。真空干燥树脂，用DMF/乙酸酐/Et3N(8∶1∶l；约300毫升)环境温度下乙酰化30分钟。连续用各种溶剂(二氯甲烷和甲醇)洗涤3次树脂，真空干燥，得到定量产率的产物。
实施例42
肼基羰基-氨基甲基加聚苯乙烯树脂的制备
将DCM/TFA(1∶1)(300ml)和硫代苯甲醚(10毫升)加到实施例41的树脂(30克)中，来去保护。在肽合成器烧瓶中，环境温度下用氮气缓慢净化混合物30分钟。滤出去保护的树脂，用DCM(2X)、DCM/DIEA(2X)、DCM(2X)和另选的用溶剂(二氯甲烷、甲醇)洗涤。真空干燥得到的标题化合物。Kaiser试验(溶液和珠；淡蓝色，沙色)；该合成得到总产率为30.64克的树脂(约0.85meq氨基脲/克)。
另外，如下制备标题树脂：在氨基甲基化聚苯乙烯树脂(1.0克，1.0毫摩尔，Advanced Chemtech)的N,N-二甲基甲酰胺(12毫升)中加入1,1-羰基二咪唑(3.89克，24.0毫摩尔，24当量)。室温振摇悬液5小时，然后滤入肽合成器烧瓶。用大量二氯甲烷洗涤树脂。Kaiser试验(溶液和珠；淡蓝色，白色)。在树脂中加入2M肼的N,N-二甲基甲酰胺(12毫升)溶液，环境温度下振摇过夜。滤出树脂，另外用有机溶剂(二氯甲烷和甲醇)洗涤，真空干燥，得到标题化合物1.06克(约0.94mmol/g)。
实施例43
N-α-芴基甲氧基羰基-ω,ω’-二-N-叔丁氧基羰基-精氨酸甲酯的制备
在N-α-芴基甲氧基羰基-ω,ω’-二-N-叔丁氧基羰基-精氨酸(4.97克，8.329毫摩尔，Advanced Chemtech)的乙腈(82毫升)溶液中加入碳酸钾(1.38克，10毫摩尔)和碘甲烷(1.037毫升，16.66毫摩尔)。加热混合物至50℃。50℃搅拌4.5小时后，将反应混合物倒到乙酸乙酯(500毫升)中，连续用水(1×50毫升)、饱和碳酸氢钠(1×50毫升)和盐水(1×50毫升)洗涤。用硫酸钠干燥有机相，减压除去溶剂，得到4.7克标题化合物。
实施例44
N-α-芴基甲氧基羰基-ω,ω’-二-N-叔丁氧基羰基-精氨醛的制备
在实施例43的化合物(5.675克，9.29毫摩尔)的四氢呋喃(15.5毫升)和甲醇(93毫升)的溶液中加入氯化钙(2.06克，18.58毫摩尔)。在冰浴中冷却混合物。分部缓慢将硼氢化钠(1.4克，37.17毫摩尔)加到搅拌冷却的溶液中。1.5小时后，减压除去溶剂。将残余物悬浮在乙酸乙酯(500毫升)和水(300毫升)中。分离相，连续用0.5MHCL(200ml)和盐水(200毫升)洗涤有机层。用乙酸乙酯回萃取合并的水层。合并乙酸乙酯层，加入二氧化硅(30克)，减压除去溶剂。将二氧化硅荷载到150×80mm二氧化硅快速层析柱上，用50％乙酸乙酯/己烷洗脱产物，得到3.855克(71％产率)的标题化合物。回收0.938克(17％产率)实施例43的化合物(起始材料)。Rf=0.30(50％乙酸乙酯/己烷)。1H NMR(CDCl3):8.35ppm(bs,1H),7.75ppm(m,2H),7.6ppm(m,2H),7.38ppm(m,2H),7.3ppm(m,2H),5.45ppm(m,1H),4.4ppm(d,2H),4.2ppm(m,1H),3.7ppm(m,2H),3.57ppm(m,1H),3.45ppm(m,1H),2.15ppm(m,1H),1.6ppm(m,4H),1.45ppm(d,18H)。
实施例45
N-α-芴基甲氧基羰基-ω,ω’-二-N-叔丁氧基羰基精氨醛亚肼基羰基氨基甲基化聚苯乙烯树脂的制备
在实施例44的化合物(3.62克，6.21毫摩尔)的甲基亚砜(31毫升)和甲苯(31毫升)在冰浴上冷却的溶液中，加入EDC(11.93克，62.1毫摩尔)和二氯乙酸(2.56毫升，31.06毫摩尔)。搅拌反应混合物40分钟，直到用TLC(50％乙酸乙酯/己烷)观察不到起始材料。加入水(150毫升)和乙酸乙酯(500毫升)，分离相。然后连续用0.5M HCl(100ml)、饱和碳酸氢钠(2×100ml)和盐水(100毫升)洗涤有机层。用硫酸钠干燥有机层，减压除去溶剂。然后将该残余物溶于二氯甲烷(45毫升)，加到实施例42的化合物(3.65克，3.1毫摩尔)中，在封闭试管来回倒着搅拌过夜。滤出树脂，用二氯甲烷(3×50毫升)、二甲基甲酰胺(3×50毫升)和甲醇(3×50毫升)洗涤，然后在高真空下干燥。得到标题化合物4.3克。加样的哌啶富烯确定显示0.37mmol/g(60％偶联)。
(ⅵ)实施例46描述了苯磺酰基-D-丝氨酰基-吖丁啶基-精氨醛，三氟乙酸盐(化合物31)的合成。见图7。实施例46苯磺酰基-D-丝氨酰基-吖丁啶酰基-精氨醛，三氟乙酸盐的制备
步骤1：ω,ω’-二二-N-叔丁氧基羰基-精氨醛亚肼基羰基氨基甲基化聚苯乙烯树脂的制备
Figure A9981000200802
用30％哌啶/二甲基甲酰胺(1.5毫升)在4毫升聚丙烯柱中处理实施例45的树脂产物(125毫克)。30分钟后，排干树脂，用二氯甲烷(2×3毫升)和甲醇(2×3毫升)连续洗涤树脂，真空干燥得到标题化合物。对小量进行的茚三酮试验得到暗蓝色树脂和溶液，显示高去保护产率。
步骤2：N-α-Fmoc-吖丁啶-2-羰基-ω,ω’-二-N-叔丁氧基羰基-精氨醛亚肼基羰基氨基甲基化聚苯乙烯树脂的制备：
在4毫升聚丙烯柱中的步骤1的化合物(0.12克)中加入N-α-Fmoc-吖丁啶-2-羧酸(110毫克，0.34毫摩尔)、1-羟基苯并三唑(7.7毫克，0.057毫摩尔)、TBTU(37毫克，0.11毫摩尔)和二异丙基乙基胺(29.8微升，0.17毫摩尔)的二甲基甲酰胺(95微升)溶液。室温振摇反应混合物过夜。从树脂中排干试剂，用二氯甲烷(2×3毫升)和甲醇(2×3毫升)连续洗涤树脂。真空干燥树脂，取出小量用于茚三酮显色分析，其显示生产标题化合物中97％的偶联效率。
步骤3：吖丁啶-2-羰基-ω,ω’-二-N-叔丁氧基羰基-精氨醛亚肼基羰基氨基甲基化聚苯乙烯树脂的制备
Figure A9981000200812
用30％哌啶/二甲基甲酰胺(1.5毫升)在4毫升聚丙烯柱中处理步骤2的化合物。30分钟后，排干树脂，用二氯甲烷(2×3毫升)和甲醇(2×3毫升)连续洗涤树脂，真空干燥得到标题化合物。对小量进行的茚三酮试验得到暗蓝色树脂和溶液，显示高去保护产率。
步骤4：N-α-Fmoc-丝氨酰基(O-叔丁基)-吖丁啶-2-羰基-N-ω,ω’-二-N-叔丁氧基羰基-精氨醛亚肼基羰基氨基甲基化聚苯乙烯树脂的制备：
在4毫升聚丙烯柱中的步骤3的化合物(0.12克)中加入N-α-Fmoc-D-丝氨酸叔丁基醚(43毫克，0.11毫摩尔)、1-羟基苯并三唑(7.7毫克，0.057毫摩尔)、TBTU(37毫克，0.11毫摩尔)和二异丙基乙基胺(29.8微升，0.17毫摩尔)的二甲基甲酰胺(95微升)溶液。室温振摇反应混合物4小时。从树脂中排干试剂；用二氯甲烷(2×3毫升)和甲醇(2×3毫升)连续洗涤树脂。真空干燥树脂，然后用N-α-Fmoc-丝氨酸O-叔丁基醚(43毫克，0.11毫摩尔)、1-羟基苯并三唑(7.7毫克，0.057毫摩尔)、TBTU(37毫克，0.11毫摩尔)和二异丙基乙基胺(29.8微升，0.17毫摩尔)的二甲基甲酰胺(95微升)溶液双重偶联。室温振摇反应混合物2小时。从树脂中排干试剂；用二氯甲烷(2×3毫升)和甲醇(2×3毫升)连续洗涤树脂。真空干燥树脂，取出小量用于茚三酮显色分析，其显示生产标题化合物中97.4％的偶联效率。
步骤5：丝氨酰基(O-叔丁基)-吖丁啶-2-羰基-ω,ω’-二-N-叔丁氧基羰基-精氨醛亚肼基羰基氨基甲基化聚苯乙烯树脂的制备
用30％哌啶/二甲基甲酰胺(1.5毫升)在4毫升聚丙烯柱中处理步骤4的化合物。30分钟后，排干树脂，用二氯甲烷(2×3毫升)和甲醇(2×3毫升)连续洗涤树脂，真空干燥得到标题化合物。对小量进行的茚三酮试验得到暗蓝色树脂和溶液，显示高去保护产率。
步骤6：N-α-苯磺酰基-D-丝氨酰基(O-叔丁基)-吖丁啶-2-羰基-ω,ω’-二-叔丁氧基羰基精氨醛亚肼基羰基氨基甲基化聚苯乙烯树脂的制备
在4毫升聚丙烯柱中的步骤5的化合物(0.12克)中加入苯磺酰氯(17微升，0.133毫摩尔)、二异丙基乙基胺(46.3微升，0.27毫摩尔)的二甲基甲酰胺(888微升)溶液。室温振摇反应混合物过夜。从树脂中排干试剂，用二氯甲烷(2×3毫升)和甲醇(2×3毫升)连续洗涤树脂。真空干燥树脂，然后用苯磺酰氯(17微升，0.133毫摩尔)和二异丙基乙基胺(46.3微升，0.27毫摩尔)的二甲基甲酰胺(888微升)溶液双重偶联。室温振摇反应混合物2小时。从树脂中排干试剂；用二氯甲烷(2×3毫升)和甲醇(2×3毫升)连续洗涤树脂。真空干燥树脂，取出小量用于茚三酮显色分析，其显示生产标题化合物中96％的偶联效率。步骤7：苯磺酰基-D-丝氨酰基-吖丁啶-2-羰基-精氨醛，三氟乙酸盐的制备
Figure A9981000200832
用三氟乙酸/水(0.5毫升的9∶1混合物)在4毫升聚丙烯柱中处理步骤6的化合物(45毫克)。室温下振摇柱1.5小时。将反应溶液排到试管中，用水洗涤树脂，到滤液总体积为5.2毫升。用半制备级反相HPLC(0.1％三氟甲酸的0-40％乙腈水溶液，C-18反相)纯化标题化合物，冻干，得到14.4克26％产率的标题化合物。合并HPLC分析的纯组分，冻干得到标题化合物(2.1毫克)。MS(M+H=469)。
Figure A9981000200841
(ⅶ)实施例47到50描述了N-α-(3-苯基丙基)-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛，三氟乙酸盐(化合物32)。
实施例47
N-α-(3-苯基丙基)-D-丝氨酰基-叔丁基醚甲酯的制备
Figure A9981000200842
使丝氨酸O-叔丁基醚甲酯(1.50克，7.1毫摩尔)，氢化肉桂醛(1.40毫升，10.6毫摩尔)，和三乙基胺(1.18毫升，8.5毫摩尔)在四氢呋喃(70毫升)中回流4小时。使溶液冷却至室温后，分两部分将氢硼化钠(0.46克，12毫摩尔)加到搅拌溶液中。在环境温度下搅拌反应混合物30分钟；减压浓缩溶液。在乙酸乙酯和1.0M HCl之间分配残余物。用1.0N HCl洗涤有机层。用40％NaOH将水层碱化到pH10，然后用乙酸乙酯(2X)萃取。用硫酸钠干燥合并有机层；真空除去溶剂。用硅胶快速层析(1×6英寸柱)纯化残余物，用10-30％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到150毫克(7％产率)的标题化合物。Rf=0.60(50％乙酸乙酯/己烷)。
实施例48
N-α-叔丁氧基羰基-N-O-(3-苯基丙基)-D-丝氨酸二叔丁基醚甲酯的制备室温下，在四氢呋喃(2毫升)中搅拌实施例47的化合物(150毫克，0.51毫摩尔)、焦碳酸二-叔丁酯(167毫克，0.77毫摩尔)和二异丙基乙基胺(0.13毫升，0.77毫摩尔)过夜。减压浓缩反应混合物。用乙酸乙酯(20毫升)稀释残余物，连续用1.0N HCl(2X)、饱和碳酸氢钠(2X)、和盐水(1X)洗涤。真空除去溶剂，得到206毫克定量产率的标题化合物。Rf=0.74(50％乙酸乙酯/己烷)。
实施例49
N-α-叔丁氧基-N-α-(3-苯基丙基)-D-丝氨酸-叔丁醚的制备
Figure A9981000200851
在实施例48化合物(206毫克，0.52毫摩尔)的甲醇(3.5毫升)溶液中滴加1.0N LiOH(0.63毫升，0.63毫摩尔)。溶液变混浊，然后5分钟后变均匀。在环境温度下搅拌反应混合物过夜。再加入1.0N LiOH(1.47毫升)。2小时后，再加入1.0N LiOH(1.0毫升)。用TLC(50％乙酸乙酯/己烷)观察不到起始材料后，用DOWEX(50×8-400)离子交换树脂将反应混合物酸化到pH4。过滤溶液，用甲醇，然后用水漂洗。减压浓缩溶液，然后冻干，得到189毫克产率为95％的黄色油状标题化合物。Rf=0.04(50％乙酸乙酯/己烷)。
实施例50
N-α-(3-苯基丙基)-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛，三氟乙酸盐(化合物32)的制备
Figure A9981000200852
根据实施例46步骤1到4和步骤7，用N-α-Fmoc-丙氨酸取代步骤2中的N-α-Fmoc-吖丁啶，用实施例49的化合物取代步骤4中的N-α-Fmoc-D-丝氨酸O-叔丁基醚，来制备标题化合物。
(ⅷ)实施例51到53描述了本发明某些化合物的固相合成。
实施例51
化合物44、47和48的固相合成
根据实施例46的步骤1到4和步骤7，用标出的代替物代替步骤4中的Fmoc-D-丝氨酸(O-叔丁基)：
化合物号     化合物名称 步骤4中的代替物
    44 苄氧基羰基-D-2-氨基丁酰基-L-丙氨酰基-精氨醛 Cbz-D-2-氨基丁酸
    47 2-苯基乙基磺酰基-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛 2-苯基乙基磺酰基-D-丝氨酸-(O-叔丁基)
    48 3-苯基丙基-磺酰基-D-丝氨酰基-丙氨酰基-精氨醛 3-苯基丙基-磺酰基-D-丝氨酸(D-叔丁基)
对于2-苯基乙基磺酰基-D-丝氨酸-O-叔丁基，根据实施例22和23的程序，在实施例22中有两个代替。用2苯基乙基磺酰氯或3-苯基丙基磺酰氯代替了α-甲苯磺酰氯，用4-甲基吗啉代替二异丙基乙基胺。
实施例52
化含物45、46和49到51的固相合成
根据实施例46的步骤1到4和步骤7，用Cbz-D-丝氨酸(O-叔丁基)代替步骤4中的Fmoc-D-丝氨酸(O-叔丁基)，并用标出的代替物代替步骤2中的Fmoc-L-吖丁啶-2-羧酸：
化合物号     化合物名称     步骤2中的代替
    45 苄氧基羰基-D-丝氨酰基-L-丝氨酰基-精氨醛 Fmoc-L-丝氨酸-O-叔丁基
    46 苄氧基羰基-D-丝氨酰基-L-β-氰基丙氨酸-精氨醛 Fmoc-L-β-氰基丙氨酸
    49 苄氧基羰基-D-丝氨酰基-L-顺-4-羟基脯氨酰基-精氨醛 Fmoc-顺-4-羟基脯氨酸
    50 苄氧基羰基-D-丝氨酰基-L-3,4-脱氢脯氨酰基-精氨醛 Fmoc-L-3,4-脱氢脯氨酸
    51 苄氧基羰基-D-丝氨酰基-L-炔丙基甘氨 Fmoc-L-炔丙基甘氨酸
酰基-精氨醛
    52 苄氧基羰基-D-丝氨酰基-L-烯丙基甘氨酰基-精氨醛 Fmoc-L-烯丙基甘氨酸
 实施例53
反-β-苯乙烯磺酰基-D-丝氨酰基-L-丙氨酰基-精氨醛的固相合成(化合物53)
Figure A9981000200871
根据实施例46的步骤1到7，用Fmoc-L-丙氨酸代替步骤2中的NαFmoc-吖丁啶-2-羧酸，用反-β-苯乙烯磺酰氯代替步骤6中的苯磺酰氯，来制备标题化合物。
(ⅸ)实施例54到59描述了化合物1的另一种合成方法。见图5。
实施例54
异丁氧基羰基-D-Ser(O-叔丁基)-OH的制备
在D-丝氨酸-O-叔丁基醚(10.5克，65.3毫摩尔)水溶液(51毫升)中加入碳酸钠(20.1克，196.2毫摩尔)，然后加入氯甲酸异丁酯(9.8毫升，75.2毫摩尔)。3小时后，该混合物变混浊，再搅拌3小时。6小时后，用6M HCl(~50m1)酸化溶液。然后用乙酸乙酯(3×200毫升)萃取反应混合物。萃取一次后，用氯化钠饱和水层，用乙酸乙酯(2×200毫升)萃取。合并乙酸乙酯层，用硫酸钠干燥，然后真空除去溶剂，得到17.0克(99.5％产率)白色固体状标题化合物。HPLC：t=18.5分钟，5％-75％乙腈梯度，溶于0.1％TFA缓冲液，在4.6×250mm,5微米颗粒上，100孔，C18柱，流速为1ml/min。NMR(CDCl3):5.5ppm(m,1H)，4.45ppm(bs,1H),3.82-3.95ppm(m,3H),3.52-3.6ppm(m,1H),1.85-1.97ppm(m,1H),1.2ppm(s,9H),0.9ppm(d,6H)。
实施例55
异丁氧基羰基-D-Ser(叔丁基)-L-Ala-O-叔丁基的制备
Figure A9981000200881
室温下搅拌实施例54的化合物(10克，38.3毫摩尔)，L-丙氨酸叔丁酯，HCl盐(10.43克，57.4毫摩尔)，EDC(11.05克，57毫摩尔)，和羟基苯并三唑(5.85克，38.3毫摩尔)的乙腈(153毫升)溶液15分钟。加入二异丙基乙基胺(32.7毫升，191毫摩尔)，搅拌反应混合物18小时。减压除去溶剂；将得到的残余物重新悬浮在乙酸乙酯(1000毫升)和1M HCl(100毫升)中。用0.5M HCl(100ml)洗涤乙酸乙酯层，用碳酸氢钠(2×100毫升)和盐水(100毫升)洗涤。用硫酸钠干燥乙酸乙酯层，真空除去溶剂，得到定量产率的标题化合物。HPLC:tr=18.7分钟，于5％-90％乙腈梯度，溶于0.1％TFA缓冲液中，在4.6×250mm，5微米颗粒，100孔，C18柱上，流速为1ml/min。NMR(CDCl3):7.15ppm(bs,1H),5.6ppm(bs,1H),4.4-4.5ppm(m,1H),4.2(bs,1H),3.87-3.95ppm(m,3H),3.3-3.4ppm(m,1H),1.85-1.95ppm(m,1H),1.45ppm(s,9H),1.39ppm(d,3H),1.2ppm(s,9H),0.9ppm(d,6H)。
实施例56
异丁氧基羰基-D-Ser-L-Ala-OH制备
在实施例55化合物(7.15克，18.4毫摩尔)的二氯甲烷(35毫升)溶液中加入三氟乙酸(35毫升)。搅拌该混合物2小时，然后减压除去溶剂。加入甲苯，真空除去溶剂，来除去三氟乙酸。然后用得到的定量产率的粘性黄色油状标题化合物进行下一步。tr=10.5分钟，于5％-90％乙腈梯度，0.1％TFA缓冲液中，在4.6×250mm柱上，5微米颗粒，100孔，C18柱，流速1ml/min。
实施例57
异丁氧基羰基-D-Ser-L-Ala-Ng-硝基精氨醛-乙基环醇的制备
Figure A9981000200891
在环境温度下，搅拌实施例56的化合物(5.09克，18.4毫摩尔)、Ng-硝基精氨醛乙基环醇、HCl盐(6.4克，23.9毫摩尔)、EDC(5.31克，27.6毫摩尔)、和羟基苯并三唑(2.82克，18.4毫摩尔)的乙腈(74毫升)溶液15分钟。加入二异丙基乙基胺(15.7毫升，92毫摩尔)，搅拌反应混合物18小时。减压除去溶剂，将得到的残余物重新悬浮在乙酸乙酯(1000毫升)和0.5m HCl(100毫升)。用0.5M HCl(100毫升)、饱和碳酸氢钠(2×100毫升)和盐水(100毫升)洗涤乙酸乙酯层，然后用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，到约25毫升体积，得到白色沉淀。然后将反应混合物置于4℃过夜。然后过滤并干燥沉淀，得到4.6克(50％产率)的标题化合物，作为HPLC:t=11.5分钟，于0.1％TFA缓冲液中的5％-90％乙腈梯度，在4.6×250mm,5微米颗粒，100孔，C18柱于1ml/分钟流速的单峰。
实施例58
异丁氧基羰基-D-Ser-L-Ala-精氨醛-乙基环醇的制备
Figure A9981000200892
用氮气对实施例57的化合物(4.55克，9.3毫摩尔)的乙醇∶水∶乙酸(55毫升的4∶1∶1混合物)的溶液通气，然后加入钯碳(1.15克，10％钯，50％水)。在50psi下，氢化该混合物18小时。然后过滤反应混合物，以除去钯，真空除去溶剂，得到定量产率的标题化合物。HPLC:tr=14.2分钟，于0.1％TFA缓冲液中的5-50％乙腈梯度，5微米颗粒，100孔，C18柱，流速为1ml/分钟。实施例59异丁氧基羰基-D-Ser-L-Ala-精氨醛(化合物1)的制备
搅拌实施例58的化合物(9.3毫摩尔)的3M HCl溶液3小时。然后直接将该材料分3批荷载到50×300mm,15微米颗粒，100孔，C18柱上，流速为80ml/min。合并并冻干含有产物的组分，得到2.38克(61％产率)标题化合物，用分析级HPLC分析，纯度是97％。HPLC:t=16.4分钟和19.6分钟，于0.1％TFA缓冲液中的5％-25％乙腈梯度中，在4.6×250mm，5微米颗粒，100孔，C18柱于1ml/分钟流速。NMR(D2O):5.4ppm(s,1H),4.25-4.37ppm(m,1H),4.1-4.25ppm(m,1H),3.75-3.95ppm(m,5H),3.42-3.52ppm(m,1H),3.2-3.3ppm(m,1H),1.58-1.98ppm(m,5H),1.35ppm(d,3H),0.85ppm(d,6H)。
(ⅹ)实施例60到72描述了在合成本发明化合物中可用的某些中间物。见图8(实施例60到64)和图9(实施例65到72)。
实施例60
N-(叔丁氧基羰基)-3-(3-吡啶基)-L-丙氨酸-甲酯的制备
在N-(叔丁氧基羰基)-3-(3-吡啶基)丙氨酸(5.0克，18.8毫摩尔)的甲醇(100毫升)溶液中，加入亚硫酰氯(2M二氯甲烷溶液，66毫升，132毫摩尔)。在环境温度下搅拌得到的溶液过夜。减压将甲醇除至最少体积，加入乙酸乙酯(100毫升)。将得到的白色沉淀收集在多孔漏斗中。在收集沉淀的四氢呋喃/水(各40毫升)混合物溶液中，加入焦碳酸二-叔丁酯(4.8克，21.99毫摩尔)和碳酸钠(1.95克，18.4毫摩尔)。在环境温度下搅拌12小时后，用乙酸乙酯(10毫升)稀释反应混合物，用饱和碳酸氢钠(25毫升)溶液洗涤。用无水硫酸钠干燥有机层，真空浓缩，得到粗产物。对该产物进行硅胶(230-400筛目)快速柱层析，使用8×52cm柱，用乙酸乙酯/己烷的10∶90混合物、乙酸乙酯/己烷的60∶40混合物洗脱。获得油状的4克(74％)标题化合物。薄层层析(硅胶；乙酸乙酯)，Rf=0.68。
实施例61
N-(叔丁氧基羰基)-3-([R.S]-3-哌啶基)-L-丙氨酸甲酯、乙酸盐的制备
Figure A9981000200911
在45psi下，用氧化钯(500毫克)氢化实施例60的化合物(5克，17.8毫摩尔)的乙醇(24毫升)、乙酸(6毫升)和水(6毫升)溶液3小时。滤去催化剂，真空浓缩滤液，得到油状残余物(6.89克)，不经进一步纯化用于实施例62描述的程序。薄层层析得到两点，对应Rf值分别为0.16和0.26的两种非对映体(硅胶；4∶1；1正丁醇/乙酸/水)。
实施例62
N-(叔丁氧基羰基)-3-[R.S]-3-哌啶基-(N-胍基(双-苄氧基羰基))]-L-丙氡酸甲酯的制备
在实施例61的化合物(6.89克，19.9毫摩尔)的四氢呋喃(80毫升)溶液中加入S-甲基异硫脲双-苄氧基羰基(7.13克，19.9毫摩尔)，然后加入N-甲基吗啉(4.37毫升)。在环境温度下搅拌反应混合物18小时。然后真空浓缩反应混合物，将得到的残余物溶于乙酸乙酯(100毫升)，用1N硫酸氢钠和饱和氯化钠(各50毫升)洗涤。在无水硫酸钠上干燥后，真空除去溶剂；对粗标题化合物进行硅胶(230-400筛目)的快速柱层析，用8×52厘米柱，用1∶9乙酸乙酯/己烷(两柱体积)，然后用1∶1乙酸乙酯/己烷洗脱。获得两种非对映体的混合物的2.75克标题化合物。薄层层析得到两个Rf值分别为0.57和0.62的点(硅胶；1；1/乙酸乙酯/己烷)。
实施例63
N-(叔丁氧基羰基)-3-[(R,S)-3-哌啶基-(N-胍基(双-苄氧基羰基))]-L-丙氨醇的制备
Figure A9981000200921
在实施例62的化合物(2.23克，3.7毫摩尔)的无水乙醇(8毫升)和无水四氢呋喃(4毫升)搅拌溶液中，加入氯化钙(844毫克，7.6毫摩尔)和氢硼化钠(575毫克，15.2毫摩尔)。在环境温度下搅拌12小时后，真空浓缩反应混合物，在乙酸乙酯和1N硫酸氢钠(各10毫升)之间分配得到的残余物。分离这两层；用1N硫酸氢钠洗涤两次有机层，用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到残余物。在硅胶(230-400筛目)上，用5.5×45cm柱快速柱层析残余物，用乙酸乙酯洗脱，得到1.3克白色泡沫状标题化合物。薄层层析得到两点，对应Rf值分别为0.18和0.27的两种非对映体(硅胶；1；1乙酸乙酯/己烷)。
实施例64
3-[(R.S)-3-哌啶基-(N-胍基(双苄氧基羰基))]-L-丙氨酸，盐酸盐的制备
Figure A9981000200922
在环境温度下用2.5N无水盐酸的乙酸乙酯(2.0ml)溶液处理实施例63的化合物(290毫克，0.57毫摩尔)1小时。真空除去溶剂，得到粘性白色固体(260毫克)。不经进一步纯化使用该固体，制备本发明P1处具有3-哌啶基-(N-胍基)-丙氨醛的化合物。CD3OD中取到的1H NMR显示1.4ppm处无叔丁氧基羰基质子。
实施例65
氨基脲-4-基二苯基甲烷，三氟乙酸盐的制备
Figure A9981000200931
步骤1：
室温制备羰基二咪唑(16.2克，0.10毫摩尔)的225毫升二甲基甲酰胺溶液，氮气下搅拌。然后在30分钟内滴加肼基甲酸叔丁酯(13.2克，0.100摩尔)的225毫升二甲基甲酰胺溶液。然后，在30分钟内加入二苯基甲胺(18.3克，0.10摩尔)。在氮气下，室温下搅拌反应混合物1小时。加入水(10毫升)，真空浓缩该混合物到约150毫升。将该溶液倒到500毫升水中，然后用400毫升乙酸乙酯萃取。各用75毫升1N HCl、水、饱和碳酸氢钠和盐水萃取两次乙酸乙酯相。然后用无水硫酸镁干燥。过滤混合物，浓缩溶液，得到29.5克(85％产率)白色泡沫状的1-叔丁氧基羰基-氨基脲-4-基二苯基甲烷。虽然可通过重结晶从乙酸乙酯/己烷中纯化该材料，但它已纯得足以直接用于步骤2:mp142-143℃。1NMR(CDCl3)δ1.45(s,9H),6.10(dd,2H),6.42(s,1H),6.67(bs,1H),7.21-7.31(m,10H)。C19H23N3O3的分析计算值:C,66.84；H,6.79；N,12.31。实测值：C,66.46；H,6.75；N；12.90。
步骤2：
用12.5毫升三氟乙酸在0℃处理1-叔丁氧基羰基-氨基脲-4-基二苯基甲烷(3.43克，10毫摩尔)的12.5毫升二氯甲烷溶液。在该温度下搅拌反应混合物30分钟。然后将反应混合物滴加入75毫升乙醚中，得到沉淀。滤去得到的沉淀，用乙醚洗涤，得到2.7克(80％产率)的标题化合物；mp182-184℃。
实施例66
3-硫代酰氨基苄基-N-乙酰基氨基丙二酸二乙酯的制备
Figure A9981000200932
在氩气下，在α-溴-间-甲苯腈(45.0克，0.24摩尔)、乙酰氨基丙二酸二乙酯(48.0克，0.22摩尔)和碘化钾(3.0克，0.018摩尔)的二噁烷(500毫升)溶液中滴加2.5M乙氧化钠的乙醇(100毫升)溶液。加入完成后，回流溶液6小时。将反应混合物在室温放置过夜，然后用盐水(250毫升)和水(250毫升)稀释，用乙酸乙酯萃取4次(总1升)。用水(100毫升)、10％柠檬酸(100毫升)、水(100毫升)和盐水(2×50毫升)洗涤合并的萃取物，然后用无水硫酸镁干燥并过滤。真空除去溶剂。从乙酸乙酯和乙醚中分两批重结晶粗残余物，得到43.51克(60％)黄色晶体状3-氰基苄基-N-乙酰氨基丙二酸二乙酯。
将H2S气体冒泡通入快速搅拌的3-氰基苄基-N-乙酰基氨基丙二酸二乙酯(44.3克，0.13毫摩尔)的吡啶(300毫升)和三乙胺(100毫升)溶液中40分钟。室温搅拌反应混合物16小时，然后倒入3.0升水中。立即形成黄色沉淀。将溶液置于4℃4小时，然后过滤。从乙酸乙酯和己烷中重结晶粗产标题化合物，得到48.1克(98％产率)的黄色晶体状标题化合物，m.p.183-186℃。1HNMR(CDCl3):δ1.31(t,J=7.1Hz,6H),2.06(s,3H),3.70(s,2H),4.29(q,J=7.1Hz,6H),4.80-4.87(m,1H),6.60(s,1H),7.10-7.20(m,1H),7.27-7.35(m,2H),7.60-7.70(m,2H)。C17H22N2O5S的分析计算值：C,55.72；H,6.05；N,7.64。实测值：C,55.55；H,5.96；N,7.76。实施例673-脒基-D,L-苯基丙氨酸，二乙酸盐的制备
Figure A9981000200941
将实施例66的化合物(48.19,0.13mol)溶于丙酮(800毫升)。加入碘甲烷(18.3毫升，0.19摩尔，1.5当量)，回流溶液30分钟。将溶液冷却至室温；过滤中间物硫代酰亚胺酸酯，干燥并溶于甲醇(500毫升)。加入乙酸铵(14.8克，0.19摩尔，1.5当量)。回流反应混合物1小时，然后冷却至室温，倒入乙醚(1.21)中。将溶液置于4℃72小时。过滤粗3-脒基苄基-N-乙酰基氨基丙二酸二乙酯，用乙醚洗涤，空气干燥，然后在浓盐酸(250毫升)中回流3小时。真空浓缩反应混合物，用水(0.51)稀释，再次真空浓缩。重复这些步骤。用阳离子交换剂(Sephadex SP-C25)用0-1.0N HCl梯度作为洗脱剂，纯化粗标题化合物，得到10.8克(30％产率)的白色标题化合物。1NMR(D2O):δ3.14-3.29(2H,m),4.17(dd,J=7.4,6.2Hz,1H),7.42-7.69(4H,m)。C10H13N3O2·2HCl·1.9H2O的分析计算值：C,38.20；H,6.03；N,13.36。实测值：C,38.51；H,5.64；N,12.89。
实施例68
N-α-Boc-N-ω-4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯磺酰基-3-脒基-D,L-苯基丙氨酸的制备
Figure A9981000200951
将3-脒基-D,L-苯基丙氨酸(实施例67的化合物)(4.00克，13毫摩尔)溶于50％二噁烷水溶液(20毫升)。加入碳酸氢钠(3.38克，40毫摩尔)，然后加入焦碳酸二叔丁酯(2.93克，13毫摩尔)的二噁烷水溶液(4毫升)。室温搅拌反应混合物18小时。在冰浴中冷却溶液，然后滴加4.0N氢氧化钠，直到溶液是pH12。滴加4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯磺酰氯(8.01克，32毫摩尔)的二噁烷水溶液(10毫升)。如所需，加入4.0N氢氧化钠，保持pH12。除去冰浴。1小时后，加入1.0N HCl，得到pH7-8的溶液。再用50毫升水稀释溶液，然后用乙酸乙酯洗涤两次(各20毫升)。用1.0N HCl将水层酸化到pH1.0，用乙酸乙酯萃取3次(总的100毫升)。用水(20毫升)和盐水两次(各10毫升)洗涤合并的有机层。用无水硫酸镁干燥有机层，真空除去溶剂。将残余物溶于最小量二氯甲烷中，然后滴加到乙醚(25毫升)中。过滤除去固体杂质，真空从滤液中除去溶剂，得到4.90克(68％粗产率)的灰白色泡沫标题化合物。用制备级薄层层析进一步纯化30毫克标题化合物样品，用1％乙酸/5％异丙醇/二氯甲烷展开，得到9毫克更纯的标题化合物。Rf=0.16(1％乙酸/5％异丙醇/二氯甲烷)。1H NMR(CD3OD):δ1.32(s,9H),2.14(s,3H),2.63(s,3H),2.71(s,3H),2.93(dd,J=13.7,9.3Hz,1H),3.22(dd,J=13.7,4.3Hz,1H),3.85(s,3H),4.34-4.37(m,1H),6.72(s,1H),7.35-7.47(2H,m),7.69-7.75(m,2H)。
实施例69
N-α-Boc-N-ω-4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯磺酰基-3-脒基-D,L-苯基丙氨酸-N-甲基-O-甲基-羧酰胺的制备
Figure A9981000200961
在实施例68的化合物(1.00克，1.92毫摩尔)，O,N-二甲基羟基胺盐酸盐(375毫克，3.85毫摩尔)，羟基苯并三唑水合物(294毫克，1.92毫摩尔)和4-甲基吗啉(1.06毫升，9.62毫摩尔)的四氢呋喃(4毫升)在冰浴中冷却的搅拌溶液中加入EDC(406毫克，2.12毫摩尔)。除去冰浴，室温下搅拌反应混合物2小时。用乙酸乙酯(75毫升)稀释反应混合物，用水、10％柠檬酸、水、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。用无水硫酸镁干燥有机层，真空除去溶剂。分离到750毫克(69％产率)的标题化合物。1H NMR(CD3Cl):δ1.33(s,9H),2.14(s,3H),2.66(s,3H),2.75(s,3H),2.80-2.88(m,1H),3.06-3.20(m,4H),3.70(s,3H),3.84(s,3H),4.98-5.06(m,1H),5.21(d,J=8.7Hz,1H),6.48(bs,1H),6.58(s,1H),7.30-7.34(m,2H),7.60-7.68(m,2H),8.11(bs,1H)。C22H38N4O7S·0.5H2O:C,56.73；H,6.88；N,9.80。实测值：C,56.97；H,6.66；N,9.43。
实施例70
N-α-Boc-N-ω-4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯磺酰基-D,L-3-脒基苯基丙氨醛的制备
Figure A9981000200962
在LiAlH4(2.00ml的1.0M四氢呋喃溶液，1.24毫摩尔)的四氢呋喃溶液(8毫升)在干冰/丙酮浴中冷却的搅拌溶液中，滴加实施例69的化合物(0.75克，1.9毫摩尔)的四氢呋喃(5毫升)溶液)。除去冷却浴，使反应混合物温至5℃。将反应混合物重新在干冰丙酮浴中冷却，并用3.0毫升1∶2.7wt./wt硫酸氢钾水溶液淬灭。使反应混合物温至室温，搅拌3小时，过滤并真空浓缩。将残余物溶于乙酸乙酯(20毫升)，用10％柠檬酸(2毫升)、水(2毫升)、饱和碳酸氢钠(2毫升)和盐水(2毫升)洗涤。用无水硫酸镁干燥有机层，真空除去溶剂，得到580毫克(86％)的标题化合物。1H NMR(CD3Cl):δ1.31(s,9H),2.07(s,3H),2.57(s,3H),2.67(s,3H),2.90-3.17(2H,m),3.77(s,3H),4.33-4.40(1H,m),5.02-5.08(1H,m),6.48(1H,s),7.23-7.31(2H,m),7.50-7.62(2H,m),7.94,(1H,bs),8.05(1H,bs),9.55(1H,s)。C25H33N3O6S·0.5H2O:C,58.58；H,6.69；N,8.20。实测值：C,58.57；H,6.72；N,7.98。
实施例71
N-α-Boc-N-ω-4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯磺酰基-D,L-3-脒基苯基丙氨醛-缩氨基脲基-4-N-二苯基甲烷的制备
使实施例70的化合物(0.58g,1.9mmol)、实施例65的化合物(410毫克，1.15毫摩尔)和三水合乙酸钠(188毫克，1.38毫摩尔)在75％酒精(10毫升)中回流1小时。将反应混合物冷却至室温后，用乙酸乙酯(50毫升)稀释，用1.0NHCl(5毫升)、水(5毫升)、饱和碳酸氢钠(5毫升)和盐水(2×5毫升)洗涤，用无水硫酸镁干燥。真空除去溶剂，得到750毫克(89％产率)的白色泡沫状标题化合物。C39H46N6O6S·1.0H2O:％C,62.88；％H,6.49；％N,11.28。实测值：％C,63.14；％H,6.35％N,11.10。计算分子量是726.90。
实施例72
N-ω-4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯磺酰基-D,L-3-脒基苯基丙氨酰基-缩氨基脲基-4-N-二苯基甲烷，三氟乙酸盐的制备
Figure A9981000200981
在室温下，用50％三氟乙酸/二氯甲烷(3毫升)处理实施例71的化合物(750毫克，1.9毫摩尔)30分钟。将反应混合物滴加入乙醚(50毫升)中。将溶液置于4℃18小时。滤出产物，真空干燥，得到600毫克(79％产率)的灰白色固体状标题化合物。C34H38N6O4S·1.3CF3CO2H:％C,56.72；％H,5.11；％N,10.84。实测值：％C,56.34；％H,5.47；％N,11.49。该盐具有计算分子量740.8。
实施例73
化合物10-6的制备
根据实施例60到64的方法制备了图10的化合物10-6，用实施例60中的叔丁氧基羰基-4-(4-吡啶基)丙氨酸代替。
实施例74
化合物11-7的制备
根据图11的反应流程制备了图11的化合物11-7。
实施例75
化合物12-5的制备
根据图12的反应流程制备了图12的化合物12-5。
实施例76
异丁氧羰基-D-(异丙氧基羰基)Ser-L-Ala-Ng-硝基丙氨醛-乙基环醇的制备
Figure A9981000200991
在冰浴中冷却的实施例58的化合物(21.0克，42.9毫摩尔)的吡啶(100毫升)溶液中，加入氯甲酸异丙酯(21毫升1M甲苯溶液，20毫摩尔，5当量)。1小时后，用分析级HPLC确定反应完成。用甲苯稀释反应混合物(300毫升)；减压除去溶剂。将残余物溶于乙腈(400毫升)，减压除去溶剂。将残余物溶于乙腈(30毫升)和乙酸乙酯(30毫升)中。加入乙醚，分离沉淀。用乙醚洗涤固体，然后真空干燥。用乙醚和乙酸乙酯(2×200毫升的1∶1混合物)洗涤固体，然后真空干燥，得到22.4克产率为91％的灰白色微黄固体状标题化合物。HPLC：tr=18.1分钟，0.1％TFA缓冲液中的5-75％乙腈梯度，4.6×250mm，5微米颗粒，100孔，C18柱，流速为1毫升/分钟。实施例77异丁氧基羰基-D-(异丙氧基羰基)Ser-L-Ala-精氨醛-乙基-环醇的制备
Figure A9981000200992
用氮气对实施例76的化合物(11.0克，19毫摩尔)的乙醇∶水∶乙酸(450毫升的4∶1∶1混合物)通气，加入10％钯碳(2.0克)。以35psi氢化混合物6小时。加入硅藻土，过滤反应混合物除去钯，真空除去溶剂，得到淡黄色胶状固体的标题化合物，直接在实施例87的程序中使用。HPLC:tr=13.1分钟，0.1％TFA缓冲液中的5％-75％乙腈梯度，4.6×250mm，5微米颗粒，100孔，C18柱，流速为1毫升/分钟。
实施例78
异丁氧基羰基-D-(异丙氧基羰基)Ser-L-Ala-精氨醛的制备
Figure A9981000201001
用6M HCl(60毫升)处理实施例77的化合物(19毫摩尔)乙腈(20毫升)溶液40分钟。将反应混合物冷却至0℃，然后用乙酸钠淬灭(240毫升的2.5M溶液)。过滤得到的溶液，然后分两批用制备级HPLC纯化。用含有0.1％TFA的5-40％乙腈水溶液洗脱含有产物的级分，合并，冻干，得到4.1克(42％)白色粉末状标题化合物。分析级HPLC观察到三个峰。HPLC:tr=17.2,18.2,18.6分钟，0.1％TFA缓冲液中的5％-50％乙腈梯度，4.6×250mm,5微米颗粒，100孔，C18柱，流速为1毫升/分钟。
实施例79
根据实施例76到78的方法，用标出的取代物代替氯甲酸异丙酯，制备了下列化合物：
    化合物名称 实施例76中的取代
异丁氧基羰基-D-((+)-薄荷氧基羰基)Ser-L-Ala-精氨醛(实施例79A) 氯甲酸(+)-薄荷酯
异丁氧基羰基-D-(苯氧基羰基)Ser-L-Ala-精氨醛(实施例79B) 氯甲酸苯酯
Figure A9981000201011
异丁氧基羰基-D-((+)-薄荷氧基羰基)Ser-L-Ala-精氨醛(实施例79A)。
Figure A9981000201012
异丁氧基羰基-D-(苯氧基羰基)Ser-k-Ala-精氨醛(实施例79B)。实施例80N-α-苄氧基羰基-D-Ser(O-叔丁基)-L-Ala-叔丁基酯的制备
在N-α-Cbz-D-丝氨酸叔丁醚(5.02克，17毫摩尔)的乙腈(100毫升)溶液中，加入EDC(4.90克，25.5毫摩尔，1.5当量)和1-羟基苯并三唑(2.60克，17毫摩尔)。搅拌45分钟后，加入丙氨酸叔丁酯，盐酸盐(3.55克，19.6毫摩尔，1.15当量)和4-甲基吗啉(7.5毫升，68毫摩尔，4当量)。搅拌反应混合物1.5小时。TLC表明反应完成。减压浓缩反应混合物。将残余物溶于乙酸乙酯(100毫升)，然后连续用1N HCl，饱和碳酸氢钠，水和盐水(各25毫升)洗涤。真空除去溶剂，得到油，放置后结晶。获得淡黄色固体状的标题化合物(6.95克)，产率为97％。Rf=0.63(5％异丙醇的二氯甲烷溶液)。
实施例81
D-Ser(O-叔丁基)-L-Ala叔丁酯的制备
Figure A9981000201021
用氢氧化钯(110毫克)在低压下氢化实施例80化合物(1.14克，2.69毫摩尔)的甲醇溶液1.5小时。将反应混合物滤过硅藻土，真空除去溶剂，得到定量产率的黄色油状标题化合物。Rf=0.44(5％甲醇的二氯甲烷溶液)。
实施例82
苯乙基磺酰基-D-Ser(O-叔丁基)-L-Ala叔丁酯的制备
Figure A9981000201022
在冰浴中冷却的实施例82的化合物(4.2克，14.6毫摩尔)和苯乙基磺酰氯(3.58克，17.5毫摩尔，1.2当量)的乙腈(100毫升)搅拌溶液中，加入2,4,6-可力丁(4.8毫升，36.5毫摩尔，2.5当量)。使反应混合物温至室温，然后搅拌过夜。减压浓缩反应混合物。将残余物溶于乙酸乙酯(80毫升)；连续用1.0NHCl、饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤得到的溶液，然后用硫酸钠干燥。真空除去溶剂。用硅胶层析残余物，洗脱0-60％乙酸乙酯/己烷。分离得到产率为89％的黄色油状标题化合物(5％甲醇的二氯甲烷溶液)。
实施例83
苯乙基磺酰基-D-Ser-L-Ala-Ng-硝基精氨醛-乙基环醇的制备
Figure A9981000201031
用50％TFA/二氯甲烷(40毫升)处理实施例82的化合物(4.16克，9.11毫摩尔)。3小时后，用甲苯(45毫升)稀释反应混合物，减压除去溶剂。将残余物溶于乙腈(40毫升)；真空除去溶剂，得到苯乙基磺酰基-D-丝氨酸-L-丙氨酸(4.36克)。Rf=0.52(10％异丙醇的二氯甲烷溶液)。
将粗苯乙基磺酰基-D-丝氨酸-L-丙氨酸(9.11毫摩尔，理论量)溶于乙腈(90毫升)。在冰浴中氮气下冷却搅拌溶液。加入EDC(3.63克，18.9毫摩尔)和1-羟基苯并三唑(1.93克，12.6毫摩尔)；搅拌反应混合物5分钟。加入Ng-硝基精氨醛乙基环醇，盐酸盐(4.04克，15.1毫摩尔)。搅拌10分钟后，除去冷却浴，加入4-甲基吗啉(5.54毫升，50毫摩尔)。搅拌反应混合物过夜。减压浓缩反应混合物，然后用乙酸乙酯稀释。连续用1.0N HCl、饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤溶液，然后用硫酸钠干燥，减压浓缩。用乙酸乙酯(25毫升)反萃取合并水层。连续用1.0N HCl、饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤有机层，然后用硫酸钠干燥，减压浓缩。用硅胶层析来自萃取和反萃取的合并粗产物，使用1-6％乙醇的二氯甲烷溶液。分离橙色固体状的标题化合物(3.25克，64％产率)。Rf=0.83(10％异丙醇的二氯甲烷溶液)。
实施例84苯乙基磺酰基-D-Ser-L-Ala-精氨醛的制备
根据实施例58到59中描述的两步氢化和水解方法，制备了白色粉末状的标题化合物。HPLC:tr=15.6和17.8分钟，0.1％TFA缓冲液中的10％-30％乙腈梯度，4.6×250mm,5微米颗粒，100孔，C18柱，流速为1毫升/分钟。质谱(M+H)=485。
实施例85
苯乙基磺酰基-D-(异丙氧基羰基)Ser-L-Ala-精氨醛的制备
根据实施例76到78中描述的碳酸酯的形成，氢化和水解三步方法，制备了白色粉末状的标题化合物。HPLC:tr=12.6,13.1和13.2分钟，0.1％TFA缓冲液中的5％-90％乙腈梯度，4.6×250mm，5微米颗粒，100孔，C18柱，流速为1毫升/分钟。质谱(M+H)=571。
根据本发明的详述和实施例，使用合适的起始材料和试剂，制备了下列化合物：
N-α-(2-苯基乙基)磺酰基-D-丝氨酰基-吖丁啶-2-羰基-精氨醛；
苄氧基羰基-D-丝氨酰基-4-羟基脯氨酰基-精氨醛；和
苄氧基羰基-D-丝氨酰基-3-反-羟基脯氨酰基-精氨醛。
根据本发明详述和实施例，使用合适的起始材料和试剂，制备了下列化合物：
N-α-(2-苯基乙基)磺酰基-D-丝氨酰基-3,4-二氢脯氨酰基-精氨醛；苯乙氧基羰基-D-Ser-L-Ala-精氨醛；
Figure A9981000201052
苯乙基磺酰基-D-Ser-L-炔丙基Gly-精氨醛；
Figure A9981000201053
3-苯丙氧基羰基-D-Ser-L-Ala-精氨醛；
Figure A9981000201054
苄基氨基羰基-D-Ser-L-脱氢脯氨酰基-精氨醛；苯乙基氨基羰基-D-Ser-L-Ala-精氨醛；
Figure A9981000201061
苄基氨基羰基-D-Ser-L-吖丁啶-2-羧基-精氨醛；3-苯丙基氨基羰基-D-Ser-L-Ala-精氨醛；环己基甲基氨基羰基-D-Ser-L-脱氢脯氨酰基-精氨醛；
Figure A9981000201064
3-苯乙基氨基羰基-D-Ser-L-脱氢脯氨酰基-精氨醛；环己基甲基氨基羰基-D-Ser-L-P吖丁啶-2-羧基-精氨醛；
Figure A9981000201071
3-苯丙基氨基羰基-D-Ser-L-吖丁啶-2-羧基-精氨醛；
Figure A9981000201072
苯乙基磺酰基-D-Ser-L-脱氢脯氨酰基-精氨醛；
Figure A9981000201073
苯乙基磺酰基-D-Ser-L-吖丁啶-2-羧基-精氨醛；
Figure A9981000201074
异丁氧基羰基-D-(乙氧基羰基)-Ser-L-Ala-精氨醛；
Figure A9981000201081
异丁氧基羰基-D-(正丙氧基)-ser-L-Ala-精氨醛；异丁氧基-D-(正丁氧基羰基)-Ser-L-Ala-精氨醛；
Figure A9981000201083
异丁氧基-D-(2-甲氧基乙氧基羰基)-Ser-L-Ala-精氨醛；
Figure A9981000201084
苯乙基磺酰基-D-(乙氧基羰基)-Ser-L-Ala-精氨醛；
Figure A9981000201091
苯乙基磺酰基-D-(正丙氧基羰基)-Ser-L-Ala-精氨醛；
Figure A9981000201092
苯乙基磺酰基-D-(正丁氧基羰基)-Ser-L-Ala-精氨醛；和
Figure A9981000201093
苯乙基磺酰基-D-(2-甲氧基乙氧基羰基)-Ser-L-Ala-精氨醛。
实施例A
特异性测定的体外酶试验
通过测定将尿激酶活性抑制到50％(IC50)的测试化合物浓度，并将该值与下列相关的丝氨酸蛋白酶(重组组织纤溶酶原激活物(rt-PA)、纤溶酶、活化的蛋白C、胰凝乳蛋白酶、凝血因子Xa、纤维蛋白酶和胰蛋白酶)的全部或一些的值比较，评估了本发明化合物作为尿激酶催化活性的选择性抑制剂的能力。
全部试验所用的缓冲液是HBSA(10mM HEPES,pH7.5,150mM氯化钠，0.1％牛血清清蛋白)。
通过在Corning微量滴定板的合适孔中合并50微升HBSA、50微升特定浓度的稀释于HBSA中的测试化合物(或只用HBSA，用于V0(无抑制速率)的测定)(覆盖广浓度范围)，和50微升稀释于HBSA中的酶，进行IC50测定试验。环境温度培养30分钟后，将50微升下列特定浓度的底物加到孔中，得到最终总体积为200微升(约4xKm)。用Thermo MaxKineticMicroplate Reader在5分钟内(利用小于5％的加入底物)测量405纳米处的吸光度改变，来测量生色底物水解的起始速度。将加入的，导致起始水解速率降低50％的抑制剂浓度定义为IC50值。
尿激酶试验
使用生色底物150mM S-2444(L-焦谷氨酰基-甘氨酰基-L-精氨酸-p-硝基苯胺盐酸盐)(获自DiaPharma Group,Inc.)测定了尿激酶催化活性。从PriorityPharmaceuticals获得Abbott Laboratories制造的尿激酶(Abbokinase)，在HBSA试验缓冲液中稀释到750pM，然后使用。试验缓冲液是HBS(10mMHEPES,150mM氯化钠，pH7.4)和0.1％BSA。
纤维蛋白酶(fIIa)试验
使用生色底物，Pefachrome t-PA(CH3SO2-D-六氢酪氨酸-甘氨酸-L-精氨酸-p-硝基苯胺，获自Pentapharm Ltd.)测定了酶活性。使用前，将底物在去离子水中重建。从Enzyme Research Laboratories,Inc获得纯化的人α-纤维蛋白酶。用于全部试验的缓冲液是HBSA(10mM HEPES,pH7.5,150mM氯化钠，0.1％牛血清清蛋白)。
在合适的孔中合并HBSA(50微升)，α-纤维蛋白酶(50微升)(最终酶浓度是0.5nM)和抑制剂(50微升)(覆盖广浓度范围)，室温培育30分钟，然后加入底物Pefachrome-t-PA(50微升)(最终底物浓度是250微摩尔，约5×Km)，进行IC50测定。用Thermo MaxKineticMicroplate Reader在5分钟内(利用小于5％的加入底物)测量405纳米处的吸光度改变，来测量Pefachrome-t-PA水解的起始速度。将加入的，导致起始水解速度降低50％的抑制剂浓度定义为IC50值。
凝血因子Xa
用生色底物S-2765(N-苄氧基羰基-D-精氨酸-L-甘氨酸-L-精氨酸-p-硝基苯胺)，获自DiaPharma Group(Franklin，OH)测定了凝血因子的催化活性。使用前，将全部底物在去离子水中重建。S-2765的最终浓度是250μM(约5倍Km)。纯化的人凝血因子X从Enzyme Research Laboratories,Inc.(South Bend,IN)获得，活化凝血因子Xa(FXa)，如所述[Bock,P.E.,Craig,P.A.,Olson,S.T.，和Singh,P.，农业生物化学生物物理273:375-388(1989)]从其制备。试验前将酶稀释入HBSA，其中最终浓度是0.25nM。
重组组织纤溶酶原激活物(rt-PA)试验
使用底物Pefachrome t-PA(CH3SO2-D-六氢酪氨酸-甘氨酰基-L-精氨酸-p-硝基苯胺，获自PentaPharm Ltd.)测定了rt-PA催化活性。将底物配制在去离子水中，然后试验前稀释在HBSA中，其中最终浓度是500毫摩尔(约3倍Km)。从Genentech Inc.获得了人rt-PA(Activase)。将酶重建于去离子水中，试验前稀释于HBSA，其中最终浓度是1.0nM。
纤溶酶试验
用生色底物，S-2366[L-焦谷氨酰-L-脯氨酰基-L-精氨酸-p-硝基苯胺盐酸盐]，获自DiaPharma Group。将底物配制于去离子水，然后在试验前稀释于HBSA，其中最终浓度是300微摩尔(约2.5倍Km)。纯化人纤溶酶获自Enzyme ResearchLaboratories,Inc.试验前将酶稀释于HBSA，其中最终浓度是1.0nM。
活化蛋白质C(aPC)试验
使用生色底物，Pefachrome PC(δ-苄氧羰基-D-赖氨酸-L-脯氨酰基-L-精氨酸-p-硝基苯胺二盐酸盐，获自Pentapharm Ltd.)测定了aPC催化活性。将底物配制于去离子水，然后在试验前用HBSA稀释，其中最终浓度是400毫摩尔(约3倍Km)。纯化人aPC获自Hematologic technologies,Inc。试验前将酶稀释于HBSA，最终浓度是1.0nM。
胰凝乳蛋白酶试验
使用生色底物，S-2586(甲氧基-琥珀酰基-L-精氨酸-L-脯氨酰基-L-酪氨酰基-p-硝基苯胺)，获自DiaPharma Group测定了胰凝乳蛋白酶催化活性。将底物配制于去离子水，然后在试验前用HBSA稀释，其中最终浓度是100毫摩尔(约9倍Km)。纯化(3X-结晶的；CDI)牛胰α-胰凝乳蛋白酶获自WorthingtonBiochemical Corp。将酶配制于去离子水，试验前稀释于HBSA，最终浓度是0.5nM。
胰蛋白酶试验
使用生色底物，S-2222(苯甲酰基-L-异亮氨酸-L-谷氨酸-[γ-甲酯]-L-精氨酸-p-硝基苯胺)，获自DiaPharma Group测定了胰蛋白酶催化活性。将底物配制于去离子水，然后在试验前用HBSA稀释，其中最终浓度是250毫摩尔(约4倍Km)。纯化(3X-结晶的；TRL3)牛胰蛋白酶获自Worthington BiochemicalCorp。将酶配制于去离子水，试验前稀释于HBSA，最终浓度是0.5nM。
表Ⅰ
表Ⅰ列出了本发明化合物对上述酶的测定IC50值，显示与其它丝氨酸蛋白酶比较，对尿激酶抑制的高度特异性。表Ⅰ
化合物号 实施例号     uPA*     tPA* 纤溶酶*
    1     835-4054-61     A     D     C
    2     9     A     C     C
    3     10     A     D     NT
    4     10     A     D     NT
    5     10     A     D     NT
    6     10     A     D     NT
    7     10     A     D     NT
    8     10     A     D     NT
    9     10     A     D     NT
    10     11     A     D     NT
    11     12     A     D     C
    12     12     A     D     C
    13     12     B     D     NT
    14     12     A     D     NT
    15     12     B     D     NT
    16     12     B     D     NT
    17     12     B     D     NT
    18     12     C     D     NT
    19     13     A     D     C
    20     13     B     D     NT
    21     13     B     NT     NT
    22     13     C     D     NT
    23     13     C     D     NT
    24     14     B     NT     NT
    25     14     B     NT     NT
    26     15     B     D     NT
    26     15     B     D     A
    27     15     B     D     A
    28     16-20     A     D     C
    29     21-26     A     D     C
    30     27-34     B     D     C
    31     46     A     NT     C
    32     47-50     A     D     C
    35     10     C     D     D
    36     10     A     D     C
    37     10     B     D     D
    38     10     B     D     B
    39     10     C     D     D
    40     10     A     D     D
    41     16     C     D     C
    42     16     B     D     B
    43     16     C     D     C
    44     51     C     D     C
    45     52     B     D     C
    46     52     A     D     C
    47     51     A     D     C
    48     51     A     D     C
    49     52     A     D     C
    50     52     A     D     C
    51     52     A     D     C
    52     52     B     D     C
    53     53     A     D     C
*
A=小于100nm
B=100-200nm
C=250-2500nm
D=大于2500nm
NT=未检测到
实施例B
化合物1作为体内血管形成抑制剂的评估
用鸡CAM(鸡胚绒毛尿囊膜)模型(这是一种标准抗血管形成试验)评估化合物1抑制血管形成的能力。该模型是已建立的评估试验化合物影响新血管形成活性的模型。
将一片用0.5微克/毫升碱性纤维生长因子(bFGF)饱和的滤纸片置于10天龄的鸡胚CAM上，来诱导血管生长。24小时后，将0-1微克化合物1的总体积为100微升的无菌PBS静脉内注射入胚胎。约48小时后，杀死鸡胚，切下滤纸片和周围的CAM组织用于分析。通过对贴近滤纸的区域中的血管分枝点数进行计数来定量血管形成[Brooks,P.C.，等，分子生物学方法120:257-269(1999)]。将血管形成指数定义为实验组和未处理的对照组之间血管分枝点数的差异。各实验组含有8到10个鸡胚。单施用1微克化合物1在该实验中抑制92％的血管形成。
                              表Ⅱ
    化合物1对细胞因子-诱导的血管形成的抑制
    处理 血管分枝点数 血管形成指数
 无     13+/-2     0
 bFGF     39+/-8     26
 bFGF,0.001微克化合物1     35+/-5     22
 bFGF,0.01微克化合物1     21+/-5     8
 bFGF,1.0微克化合物1     15+/-1     2
实施例C
化合物1抑制人肿瘤细胞在鸡胚模型中生长的评估
用鸡胚模型来评估化合物1抑制人肿瘤细胞体内生长的活性。将含有4×105细胞，总体积为40微升的人纤维肉瘤细胞的单细胞悬液涂在如Brooks等(“Brooks,P.C.等“整合素αrβ3拮抗剂通过诱导血管形成的凋亡促进肿瘤衰退”，细胞79:1157-1164(1994))所述的10日龄鸡胚上。24小时后，将0-10微克化合物1静脉注射入胚胎。一次施用化合物后，培育对照和处理的胚胎共7天，然后杀死。切下肿瘤，剪去周围的CAM组织，并称重。表Ⅲ列出了该实验中切下的肿瘤湿重。各实验组含有10-12个鸡胚。单剂的10微克化合物减少肿瘤重量约65％。
                                  表Ⅲ
    化合物1对鸡胚中HT1080细胞生长的抑制
    处理     湿重(毫克)
    对照     273+/-49
    化合物1(1微克)     174+/-25
    化合物1(10微克)     97+/-15

Claims (70)

1．一种化合物，其特征在于，该化合物具有下式：
Figure A9981000200021
其中：(a)X选自-S(O)2-、-N(R’)-S(O)2-、-(C=O)-、-OC(=O)-、-NH-C(=O)-、-P(O)(R’)-、和直接的化学键，其中R’分别是氢、1到约4个碳原子的烷基、约6到14个碳原子的芳基或约7到16个碳原子的芳烷基，条件是当X是-P(O)(R’)-时，R’不是氢；
(b)R1选自：
(1)可任选的被Y1取代的1到约12个碳原子的烷基，
(2)被约5到8个碳原子的环烷基取代的1到约3个碳原子的烷基，所述环烷基可任选的被Y1、Y2和/或Y3在环上单-、二-或三取代，
(3)在环上被Y1、Y2和/或Y3可任选的单-、二-、或三取代的3到约15个碳原子的环烷基，
(4)4到约10个环上原子的杂环烷基，环上原子选自碳和杂原子，所述杂原子选自氧、氮、和S(O)i，其中i是0、1或2，该杂环烷基可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(5)4到约10个环上原子的杂环基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和S(O)i，其中i是0、1或2，包括
Figure A9981000200022
其中
Figure A9981000200023
是5到7个成员的杂环，具有3到6个环上碳原子，而V是-CH2-、-O-、-S(=O)-、-S(O)2-或-S-，V可任选在环上碳原子上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(6)2到约6个碳原子的链烯基，所述链烯基可任选的被约5到8个碳原子的环烷基取代，所述环烷基可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(7)约6到14个碳原子的芳基，所述芳基可任选被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(8)约5到14个环上原子的杂芳基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，所述杂芳基可任选被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(9)约7到15个碳原子的芳烷基，所述芳烷基可任选在芳环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(10)约5到14个环上原子的杂芳烷基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，而且所述杂芳烷基在烷基链上任选被羟基和卤素取代，并可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(11)约8到16个碳原子的芳烯基，所述芳烯基在芳环上可任选被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(12)约5到14个环上原子的杂芳烯基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，所述杂芳烯基可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
Figure A9981000200031
Figure A9981000200032
Figure A9981000200033
Figure A9981000200034
(17)约9到15个碳原子的稠合碳环烷基；(18)二氟甲基或1到约12个碳原子的全氟烷基，(19)约6到约14个碳原子的全氟芳基，(20)约7到15个碳原子的全氟芳烷基，和(21)氢，当X是直接键时；其中Y1、Y2和Y3是独立的，而且是(ⅰ)选自卤素、氰基、硝基、四唑基、胍基、脒基、甲基胍基、-CF3、-CF2CF3、-CH(CF3)2、-C(OH)(CF3)2、-OCF3、-OCF2H、-OCF2CF3、-OC(O)NH2、-OC(O)NHZ1、-OC(O)NZ1Z2、-NHC(O)Z1、-NHC(O)NH2、-NH(O)NZ1、-NHC(O)NZ1NZ2、-C(O)OH、-C(O)OZ1、-C(O)NH2、-C(O)NHZ1、-C(O)NZ1Z2、-P(O)3H2、-P(O)3(Z1)2、-S(O)3H、-S(O)mZ1、-Z1、-OZ1、-OH、-NH2、-NHZ1、-NZ1Z2、-N-吗啉基、-S(CF2)qCF3、和-S(O)m(CF2)qCF3，其中m是0、1或2,q是0到5的整数，而Z1和Z2分别选自1到约12碳原子的烷基，约6到14个碳原子的芳基，约5到14个环上原子的杂芳基，约7到15个碳原子的芳烷基，和约5到14个环上原子的杂芳烷基，或
(ⅱ)Y1和Y2合起来选自-O[C(Z3)(Z4)]rO-，其中r是1到4的整数，而Z3和Z4分别是选自氢、1到约12个碳原子的烷基，约6到14个碳原子的芳基，约5到14个环上原子的杂芳基，约7到15个碳原子的芳烷基和约5到14个环上原子的杂芳烷基；
(c)R2选自H、-CH3、-C2H5、-(CH2)2OH、-(CH2)2OA2、-CH(R6)OH、-CH(R6)OA2和-CH2NH-X’-R6，其中A2是-C(=O)OR9或-C(=O)R9；X’是选自-S(O)2-、-S(O)2-N(R″)-、-(C=O)-、-C(=O)-O-、-C(=O)-NH-、-P(O)(R″)-、和直接键，其中R″是氢，1到约4个碳原子的烷基，约6到14个碳原子的芳基，或约7到16个碳原子的芳烷基，条件是当X’是-P(O)(R″)-时，R″不是氢；R6选自：
(1)1到约12个碳原子的烷基，可任选的被Y1取代，
(2)被约5到8个碳原子的环烷基取代的1到约3个碳原子的烷基，所述烷基可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(3)3到约15个碳原子的环烷基，所述环烷基可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(4)4到约10个环上原子的杂环烷基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和S(O)i，其中i是0、1或2，所述杂环烷基可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(5)4到约10个环上原子的杂环基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和S(O)i，其中i是0、1或2，包括 其中 是5到7个成员的杂环，具有3到6个环上碳原子，而V是-CH2-、-O-、-S(=O)-、-S(O)2-、或-S-，所述杂环基可任选在环上碳原子上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(6)2到约6个碳原子的烯基，其可任选被约5到8个碳原子的环烷基取代，该烯基可任选的在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(7)约6到14个碳原子的芳基，其可任选被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(8)约5到14个环上原子的杂芳基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，所述杂芳基可任选的被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(9)约7到15个碳原子的芳烷基，所述芳烷基可任选在芳环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(10)约5到14个环上原子的杂芳烷基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，而且所述杂芳烷基可任选的在烷基链上被羟基或卤素取代，可任选的在芳环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(11)约8到16个碳原子的芳烯基，其可任选在芳环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(12)5到约14个环上原子的杂芳烯基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，所述杂芳烯基可任选在环上碳原子上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，和
(13)氢；和
R9选自：
(1)可任选的被Y1取代的1到约12个碳原子的烷基，
(2)被约5到8个碳原子的环烷基取代的1到约3个碳原子的烷基，所述烷基可任选的在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(3)3到约15个碳原子的环烷基，所述环烷基可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(4)4到约10个环上原子的杂环烷基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和S(O)i，其中i是0、1或2，所述杂环烷基可任选的在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(5)4到约10个环上原子的杂环基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和S(O)i，其中i是0、1或2，包括 其中
Figure A9981000200052
是5到7个成员的杂环，具有3到6个环上碳原子，而V是-CH2-、-O-、-S(=O)-、-S(O)2-、或-S-，所述杂环基可任选的在环上碳原子上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(6)6到约14个碳原子的芳基，所述芳基可任选被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(7)约5到14个环上原子的杂芳基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，而且所述杂芳基可任选在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(8)约7到15个碳原子的芳烷基，所述芳烷基可任选在芳环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，
(9)约5到14个环上原子的杂芳烷基，环上原子选自碳和杂原子，其中杂原子选自氧、氮和硫，而且所述杂芳烷基可任选的在烷基链上被羟基或卤素取代，并可任选的在环上被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，和
(10)氢，条件是当A2是-C(=O)OR9时，R9不是氢；
(d)R3选自H或甲基，或R3和R4合起来选自在(f)中列出的；
(e)R4是S构型，而且选自H、-CH2-S-CH3、-CH2OH、-CH2CN、1到约3个碳原子的低级烷基，-CH2C≡CH、-CH2CH=CH2和-CH=CH2或R3和R4合起来选自在(f)中列出的；
(f)或者，R3和R4合起来是S构型，在P2形成选自脯氨酰基、甲基哌啶基、吖丁啶-2-羰基、4-羟基脯氨酰基、3-羟基脯氨酰基和3,4-脱氢脯氨酰基的基团；
(g)R5是选自
Figure A9981000200061
和
Figure A9981000200062
其中R7选自和
Figure A9981000200064
其中d是1到3的整数，而W是-N-或-CH-；和
(h)A1是-NHR8，其中R8是1到约12个碳原子的烷基，约6到14个碳原子的芳基，或约6到15个碳原子的芳烷基，所有的都可任选被Y1、Y2和/或Y3单-、二-、或三取代，或是氢；及其药物学上接受的盐。
2．如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R5是：
Figure A9981000200071
3．如权利要求2所述的化合物，其特征在于，R7是：
4．如权利要求3所述的化合物，其特征在于，d是2。
5．如权利要求4所述的化合物，其特征在于，R2是：H、-CH3、-CH2CH3、-CH2NH(X’)(R6)或-CH(R6)OH。
6．如权利要求5所述的化合物，其特征在于，R6是：氢、可任选的被Y1取代的烷基或可任选的被Y1、Y2和/或Y3单-、双-或三-取代的芳烷基。
7．如权利要求6所述的化合物，其特征在于，R2是：H、-CH2OH或-CH(CH3)OH。
8．如权利要求7所述的化合物，其特征在于，R2是-CH(CH3)OH并具有R构型。
9．如权利要求7所述的化合物，其特征在于，R3是氢。
10．如权利要求9所述的化合物，其特征在于，R4是甲基或炔丙基。
11．如权利要求7所述的化合物，其特征在于，R3和R4是合起来选择，得到在P2处选自脯氨酰基、甲基哌啶基、吖丁啶-2-羰基、4-羟基脯氨酰基、3-羟基脯氨酰基和3,4-脱氢脯氨酰基的基团。
12．如权利要求11所述的化合物，其特征在于，R3和R4合起来选择，得到在P2处选自脯氨酰基、4-顺-羟基脯氨酰基、3,4-脱氢脯氨酰基和吖丁啶-2-羰基的基团。
13．如权利要求5所述的化合物，其特征在于，R6是H。
14．如权利要求1所述的化合物，其特征在于，X选自-S(O)2-、-OC(=O)-、-NH-C(=O)-和直接键。
15．如权利要求14所述的化合物，其特征在于，X是-S(O)2-或-OC(=O)-。
16．如权利要求15所述的化合物，其特征在于，R1是选自苯基、苄基、2-苯基乙基、异丁基和3-苯基丙基。
17．如权利要求16所述的化合物，其特征在于，R1-X-是选自苯基-S(O)2-、苄基-S(O)2-、2-苯基乙基-S(O)2-、3-苯基丙基-S(O)2-、苄基-OC(=O)-和异丁基-OC(=O)-。
18．如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R2选自氢、甲基、乙基、-CH2NH(X’)(R6)和-CH(R6)OH。
19．如权利要求18所述的化合物，其特征在于，R6是：氢、可任选的被Y1取代的烷基或可任选的被Y1、Y2和/或Y3单-、双-或三-取代的芳烷基。
20．如权利要求19所述的化合物，其特征在于，选择R2在P3处得到选自甘氨酰基、D-丝氨酰基、(R,R)D-别苏氨酰基、D-2-氨基丁酰基、N-β-甲氧基羰基-D-2,3-二氨基丙酰基、N-β-(2-苯基乙基羰基)-D-2,3-二氨基丙酰基和N-β-苄氧基羰基-D-2,3-二氨基丙酰基。
21．如权利要求20所述的化合物，其特征在于，P3是D-丝氨酰基或(R,R)D-别苏氨酰基。
22．如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R3是氢。
23．如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R4是甲基或炔丙基。
24．如权利要求1所述的化合物，其特征在于，合起来选择，R3和R4在P2处形成选自脯氨酰基、甲基哌啶基、吖丁啶-2-羰基、4-羟基脯氨酰基、3-羟基脯氨酰基和3,4-脱氢脯氨酰基的基团。
25．如权利要求24所述的化合物，其特征在于，合起来选择，R3和R4在P2处形成选自脯氨酰基、4-顺-羟基脯氨酰基、3,4-脱氢脯氨酰基和吖丁啶-2-羰基的基团。
26．如权利要求1所述的化合物，其特征在于，选择R2在P3处形成D-丝氨酰基和(R,R’)D-别苏氨酰基，选择R5在P1处形成精氨酸醛。
27．如权利要求26所述的化合物，其特征在于，R3是氢而R4是甲基。
28．如权利要求26所述的化合物，其特征在于，合起来选择，R3和R4在P2处形成选自脯氨酰基、吖丁啶-2-羰基和3,4-脱氢脯氨酰基的基团。
29．如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R5是
Figure A9981000200091
30．如权利要求1所述的化合物，其特征在于，该化合物选自
Figure A9981000200092
Figure A9981000200101
Figure A9981000200111
Figure A9981000200112
Figure A9981000200113
和
Figure A9981000200114
31．如权利要求7所述的化合物，其特征在于，R2是-CH2OH，而且具有R构型。
32．一种化合物，其特征在于，该化合物具有式：及其药物学上可接受的盐。
33．如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R2是-(CH2)OA2或-CH(R6)OA2。
34．如权利要求33所述的化合物，其特征在于，R2是-CH(R6)OA2。
35．如权利要求34所述的化合物，其特征在于，R6选自氢、可任选的被Y1取代的烷基或可任选的被Y1、Y2和/或Y3单-、双-或三-取代的芳烷基。
36．如权利要求35所述的化合物，其特征在于，选择R2在P3处形成选自烯丙基和D-丝氨酰基的碳酸酯的基团。
37．如权利要求36所述的化合物，其特征在于，R3是氢。
38．如权利要求37所述的化合物，其特征在于，R4是甲基或炔丙基。
39．如如权利要求36所述的化合物，其特征在于，合起来选择，R3和R4在P2处形成选自脯氨酰基、甲基哌啶基、吖丁啶-2-羰基、4-羟基脯氨酰基、3-羟基脯氨酰基和3,4-脱氢脯氨酰基的基团。
40．如权利要求1所述的化合物，其特征在于，选择R2在P3处形成酰基和D-丝氨酰基的碳酸酯等基团，选择R5在P1处形成精氨酸醛。
41．如权利要求40所述的化合物，其特征在于，R3是氢而R4是甲基。
42．如权利要求40所述的化合物，其特征在于，合起来选择，R3和R4在P2处形成选自脯氨酰基、吖丁啶-2-羰基和3,4-脱氢脯氨酰基的基团。
43．如权利要求4所述的化合物，其特征在于，R2选自-(CH2)2OA2或-CH(R6)OA2。
44．如权利要求4所述的化合物，其特征在于，选择R2在P3处形成选自酰基和D-丝氨酰基的碳酸酯的基团。
45．如权利要求29所述的化合物，其特征在于，R2选自氢、-CH3、-CH2CH3、-CH2NH(X’)(R6)和-CH(R6)OH。
46．如权利要求29所述的化合物，其特征在于，R2是-(CH2)OA2或-CH(R6)OA2。
47．一种药物组合物，其特征在于，该药物组合物包含药物学上可接受的载体和治疗上有效量的权利要求1所述的化合物。
48．一种药物组合物，其特征在于，该药物组合物包含药物学上可接受的载体和治疗上可接受量的权利要求4所述的化合物。
49．一种药物组合物，其特征在于，该药物组合物包含药物学上可接受的载体和治疗上可接受量的权利要求12所述的化合物。
50．一种药物组合物，其特征在于，该药物组合物包含药物学上可接受的载体和治疗上可接受量的权利要求17所述的化合物。
51．一种药物组合物，其特征在于，该药物组合物包含药物学上可接受的载体和治疗上可接受量的权利要求21所述的化合物。
52．一种药物组合物，其特征在于，该药物组合物包含药物学上可接受的载体和治疗上可接受量的权利要求24所述的化合物。
53．一种药物组合物，其特征在于，该药物组合物包含药物学上可接受的载体和治疗上可接受量的权利要求26所述的化合物。
54．一种药物组合物，其特征在于，该药物组合物包含药物学上可接受的载体和治疗上可接受量的权利要求30所述的化合物。
55．一种药物组合物，其特征在于，该药物组合物包含药物学上可接受的载体和治疗上有效量的权利要求32所述的化合物。
56．一种药物组合物，其特征在于，该药物组合物包含药物学上可接受的载体和治疗上有效量的权利要求33所述的化合物。
57．一种药物组合物，其特征在于，该药物组合物包含药物学上可接受的载体和治疗上有效量的权利要求40所述的化合物。
58．一种治疗在需要治疗的哺乳动物体内通过抑制或减弱尿激酶活性而改善的情况的方法，其特征在于，该方法包括施给所述哺乳动物治疗有效量的权利要求1所述的化合物。
59．一种治疗在需要治疗的哺乳动物体内通过抑制或减弱尿激酶活性而改善的情况的方法，其特征在于，该方法包括施给所述哺乳动物治疗有效量的权利要求4所述的化合物。
60．一种治疗在需要治疗的哺乳动物体内通过抑制或减弱尿激酶活性而改善的情况的方法，其特征在于，该方法包括施给所述哺乳动物治疗有效量的权利要求12所述的化合物。
61．一种治疗在需要治疗的哺乳动物体内通过抑制或减弱尿激酶活性而改善的情况的方法，其特征在于，该方法包括施给所述哺乳动物治疗有效量的权利要求17所述的化合物。
62．一种治疗在需要治疗的哺乳动物体内通过抑制或减弱尿激酶活性而改善的情况的方法，其特征在于，该方法包括施给所述哺乳动物治疗有效量的权利要求21所述的化合物。
63．一种治疗在需要治疗的哺乳动物体内通过抑制或减弱尿激酶活性而改善的情况的方法，其特征在于，该方法包括施给所述哺乳动物治疗有效量的权利要求24所述的化合物。
64．一种治疗在需要治疗的哺乳动物体内通过抑制或减弱尿激酶活性而改善的情况的方法，其特征在于，该方法包括施给所述哺乳动物治疗有效量的权利要求26所述的化合物。
65．一种治疗在需要治疗的哺乳动物体内通过抑制或减弱尿激酶活性而改善的情况的方法，其特征在于，该方法包括施给所述哺乳动物治疗有效量的权利要求30所述的化合物。
66．一种治疗在需要治疗的哺乳动物体内通过抑制或减弱尿激酶活性而改善的情况的方法，其特征在于，该方法包括施给所述哺乳动物治疗有效量的权利要求32所述的化合物。
67．一种在需要治疗的哺乳动物体内减弱或抑制血管形成的方法，其特征在于，该方法包括施给所述哺乳动物治疗有效量的权利要求32所述的化合物。
68．如权利要求67所述的方法，其特征在于，该方法包括所述血管形成与病理情况有关。
69．一种治疗在需要治疗的哺乳动物体内通过抑制或减弱尿激酶活性而改善的情况的方法，其特征在于，该方法包括施给所述哺乳动物治疗有效量的权利要求33所述的化合物。
70．一种治疗在需要治疗的哺乳动物体内通过抑制或减弱尿激酶活性而改善的情况的方法，其特征在于，该方法包括施给所述哺乳动物治疗有效量的权利要求40所述的化合物。
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Families Citing this family (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6797504B1 (en) * 2000-09-08 2004-09-28 Dendreon San Diego Llc Inhibitors of serine protease activity of matriptase or MTSP1
EP1268525B1 (en) * 2000-04-05 2008-12-31 Schering Corporation Macrocyclic ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus comprising n-cyclic p2 moieties
DE10029014A1 (de) 2000-06-15 2001-12-20 Univ Schiller Jena Urokinase-Hemmstoffe
US7244721B2 (en) * 2000-07-21 2007-07-17 Schering Corporation Peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
RU2003105221A (ru) 2000-07-21 2004-09-20 Шеринг Корпорейшн (US) Новые пептиды, как ингибиторы ns3-серинпротеазы вируса гепатита с
AU2001276988B2 (en) 2000-07-21 2007-01-25 Dendreon Corporation Peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
NZ547626A (en) * 2000-08-11 2007-10-26 Wilex Ag Non-covalent inhibitors of urokinase and blood vessel formation
ES2285989T3 (es) * 2000-08-11 2007-12-01 Wilex Ag Inhibidores no covalentes de la uroquinasa y de la formacion de vasos sanguineos.
US7157596B2 (en) 2000-09-08 2007-01-02 Dendreon Corporation Inhibitors of serine protease activity of matriptase or MTSP1
CA2447050A1 (en) * 2001-05-14 2002-11-21 Dendreon San Diego Llc Nucleic acid molecules encoding a transmembrane serine protease 10, the encoded polypeptides and methods based thereon
DE50209313D1 (de) * 2001-12-12 2007-03-08 Wilex Ag Selektive arylguanidinpeptide als urokinaseinhibitoren
AU2003219039A1 (en) 2002-03-11 2003-09-22 Curacyte Ag Urokinase inhibitors, production and use thereof
US20030228365A1 (en) * 2002-06-07 2003-12-11 Fortuna Haviv Pharmaceutical formulation
WO2004026225A2 (en) * 2002-09-20 2004-04-01 Medisyn Technologies, Inc. Therapeutic agents and corresponding treatments
US7019019B2 (en) 2002-12-23 2006-03-28 Dendreon Corporation Matriptase inhibitors and methods of use
DE10301300B4 (de) 2003-01-15 2009-07-16 Curacyte Chemistry Gmbh Verwendung von acylierten 4-Amidino- und 4-Guanidinobenzylaminen zur Inhibierung von Plasmakallikrein
DE10342108A1 (de) 2003-09-11 2005-04-14 Curacyte Chemistry Gmbh Basisch-substituierte Benzylaminanaloga als Inhibitoren des Gerinnungsfaktors Xa, ihre Herstellung und Verwendung
US7252834B2 (en) 2005-04-25 2007-08-07 Clemson University Research Foundation (Curf) Elastin stabilization of connective tissue
RU2410087C2 (ru) 2005-06-24 2011-01-27 Вилекс Аг Применение ингибиторов урокиназы для лечения и/или предупреждения невропатологических заболеваний
DE102006050672A1 (de) 2006-10-24 2008-04-30 Curacyte Discovery Gmbh Hemmstoffe des Plasmins und des Plasmakallikreins
US20090155337A1 (en) * 2007-11-12 2009-06-18 Endologix, Inc. Method and agent for in-situ stabilization of vascular tissue
EP2224949B1 (en) 2007-11-30 2012-10-17 University of Debrecen Use of urokinase type plasminogen activator inhibitors for the treatment of corneal disorders
US20090214654A1 (en) * 2008-02-21 2009-08-27 Isenburg Jason C Treatment of aneurysm with application of connective tissue stabilization agent in combination with a delivery vehicle
US20100016833A1 (en) * 2008-07-15 2010-01-21 Ogle Matthew F Devices for the Treatment of Vascular Aneurysm
US20100267803A1 (en) * 2008-11-07 2010-10-21 The Research Foundation Of State University Of New York Regulators Of Fat Metabolism As Anti-Cancer Targets
US20100119605A1 (en) * 2008-11-12 2010-05-13 Isenburg Jason C Compositions for tissue stabilization
US20100261662A1 (en) * 2009-04-09 2010-10-14 Endologix, Inc. Utilization of mural thrombus for local drug delivery into vascular tissue
EP2485687A1 (en) * 2009-10-09 2012-08-15 Vatrix Medical, Inc. In vivo chemical stabilization of vulnerable plaque
US8444624B2 (en) * 2009-10-19 2013-05-21 Vatrix Medical, Inc. Vascular medical devices with sealing elements and procedures for the treatment of isolated vessel sections
KR101228668B1 (ko) * 2010-09-17 2013-01-31 가톨릭대학교 산학협력단 혈관신생 억제 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도
US8911468B2 (en) 2011-01-31 2014-12-16 Vatrix Medical, Inc. Devices, therapeutic compositions and corresponding percutaneous treatment methods for aortic dissection
JP2014516695A (ja) 2011-05-18 2014-07-17 バトリックス・メディカル・インコーポレイテッド 血管安定化用被覆バルーン
US9283241B2 (en) 2012-07-10 2016-03-15 Clemson University Treatment to render implants resistant to diabetes
IT202100023357A1 (it) 2021-09-09 2023-03-09 Cheirontech S R L Peptidi con attività anti-angiogenica

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3867364A (en) * 1968-11-21 1975-02-18 Microbial Chem Res Found Process for the synthesis of leupeptins and their analogues
EP0451130A3 (en) * 1990-04-05 1992-08-05 Baltimore Biotech, Inc. Use of amiloride and other pyrazine derivatives for preventing or treating ocular neovascularization
JPH0813834B2 (ja) 1990-08-01 1996-02-14 日東紡績株式会社 トリペプチド誘導体及びそれを有効成分とする蛋白分解酵素阻害剤
JPH0813835B2 (ja) 1990-09-05 1996-02-14 日東紡績株式会社 ピログルタミン酸残基を有するトリペプチド誘導体
US5283293A (en) * 1990-12-14 1994-02-01 Corvas, Inc. Reagents for automated synthesis of peptide analogs
US5371072A (en) 1992-10-16 1994-12-06 Corvas International, Inc. Asp-Pro-Arg α-keto-amide enzyme inhibitors
US5629327A (en) * 1993-03-01 1997-05-13 Childrens Hospital Medical Center Corp. Methods and compositions for inhibition of angiogenesis
DE69731226T2 (de) 1996-06-10 2006-03-09 The Scripps Research Institute, La Jolla Verwendung von substrat-subtraktionsbibliotheken zur unterscheidung von enzymspezifitäten

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Publication number Publication date
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