CN1305492A - 吡嗪酮蛋白酶抑制剂 - Google Patents

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Abstract

描述了吡嗪酮化合物,包括式Ⅰ化合物,其中X是O、NR11或CH=N,R3－R11、Ra、Rb、Rc、W、m和n列在说明书中,及其溶剂化物、水合物或药学上可接受的盐。本发明化合物是蛋白酶的有效抑制剂,尤其是胰蛋白酶样蛋白酶,例如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶、纤溶酶和Xa因子。某些化合物通过对凝血酶的直接的、选择性抑制作用,表现抗血栓形成活性。还描述了组合物,用于抑制血小板丧失、抑制血小板聚集物的形成、抑制纤维蛋白的形成、抑制血栓形成和抑制栓子形成。本发明化合物的其他用途是作为抗凝剂,包埋在或者物理连接于用于装置制造的材料中,该装置用于血液采集、血液循环和血液贮存,例如导管、血液透析仪器、血液采集注射器与试管、血线与斯膝特氏印模。另外,可以通过可检测的方式对该化合物进行标记,用于体内血栓成像。

Description

吡嗪酮蛋白酶抑制剂
                    发明背景
发明领域
本发明涉及起到蛋白酶抑制剂作用的新颖化合物，特别涉及一类新颖的凝血酶抑制剂。
相关技术
蛋白酶是在单一的、特定的肽键上分解蛋白质的酶。蛋白酶可以分为四类：丝氨酸、硫醇或半胱氨酰、酸或天冬氨酰、和金属蛋白酶(Cuypers等《生物化学杂志》257:7086(1982))。蛋白酶对各种生物学活性来说都是必需的，例如消化、血块的形成与溶解、生殖、和对外来细胞与器官的免疫反应。在人和其他动物中，异常的蛋白水解作用与大量疾病状态有关。人嗜中性蛋白酶、弹性蛋白酶和组织蛋白酶G是引起以组织破坏为标志的疾病状态的原因。这些疾病状态包括肺气肿、类风湿性关节炎、角膜溃疡和肾小球性肾炎(Barret《酶抑制剂药物》Sandler,ed.,University Park Press,Baltimore(1980))。其他蛋白酶、例如纤溶酶、C-1酯酶、C-3转化酶、尿激酶、纤溶酶原激活物、顶体蛋白和激肽释放酶，在哺乳动物的正常生物学功能中扮演关键角色。在很多情况下，在对哺乳动物进行治疗的过程中瓦解一种或多种蛋白水解酶的功能是有益的。
丝氨酸蛋白酶例如包括弹性蛋白酶(人白细胞)、组织蛋白酶G、纤溶酶、C-1酯酶、C-3转化酶、尿激酶、纤溶酶原激活物、顶体蛋白、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶、Xa因子和激肽释放酶。
人白细胞酯酶是由多形核白细胞在炎症部位释放的，因此是大量疾病状态的诱因。组织蛋白酶G是另一种人嗜中性丝氨酸蛋白酶。具有抑制这些酶活性的能力的化合物预期具有抗炎作用，可用于痛风、类风湿性关节炎和其他炎性疾病的治疗以及肺气肿的治疗。胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶是消化酶。这些酶的抑制剂可用于治疗胰腺炎。尿激酶和纤溶酶原激活物的抑制剂可用于治疗细胞过度生长的疾病状态，例如良性前列腺肥大、前列腺癌和牛皮癣。
丝氨酸蛋白酶中的凝血酶在止血和血栓形成中占据核心地位，作为一种多因子蛋白质，对血小板、内皮细胞、平滑肌细胞、白细胞、心脏和神经元诱发大量作用。凝固级联通过内部途径的激活(接触激活)或外部途径的激活(通过血浆暴露于非内皮表面下、对血管壁的损伤或组织因子释放而激活)导致一系列集中于凝血酶的生化反应。凝血酶分解纤维蛋白原，最终导致形成止血栓(血块形成)，通过细胞表面凝血酶受体的独特的蛋白水解作用有效地激活血小板(Coughlin《血液学讨论会》31(4):270-277(1994))，通过一种反馈机理自我扩增它本身的产生。因此，凝血酶功能抑制剂对心血管疾病和非心血管疾病患者具有治疗的可能。
Xa因子是凝固途径中的另一种丝氨酸蛋白酶。Xa因子与磷脂膜上的Va因子和钙联合形成凝血酶原酶复合物。该凝血酶原酶复合物然后将凝血酶原转化为凝血酶(Claeson《血液凝固和纤维蛋白溶解》5:411-436(1994)；Harker《血液凝固和纤维蛋白溶解》5(增刊1)：S47-S58(1994))。Xa因子抑制剂被认为优于直接抑制凝血酶的试剂，这是因为直接的凝血酶抑制剂仍然允许有显著的新的凝血酶生成(Lefkovits and Topol《循环》90(3):1522-1536(1994)；Harker《血液凝固和纤维蛋白溶解》5(增刊1)：S47-S58(1994))。
血管内血栓的体内诊断成像法以前已有报道。这些成像法使用可检测的用放射性原子或顺磁性原子标记的化合物。例如，用γ放射体In-111标记的血小板可以用作显像剂，用于检测血栓(Thakur,M.L.等《血栓研究》9:345(1976)；Powers等《神经病学》32:938(1982)。用Tc-99m标记的血栓溶解酶链激酶已被提出用作显像剂(Wong，美国专利4418052(1983))。来源于金黄色酿脓葡萄球菌的、用γ放射体Ⅰ-125和Ⅰ-131标记的蛋白A的纤维蛋白结合域已被提出用作显像剂(Pang，美国专利5011686(1991))。对纤维蛋白(相对纤维蛋白而言)具有特异性、并且用Tc-99m标记的单克隆抗体已被提出用作显像剂(Berger等，美国专利5024829(1991)；Dean等，美国专利4980148(1990))。顺磁性造影剂二亚乙三胺五乙酸钆在通过溶栓治疗的急性心肌梗塞患者的磁共振成像中的用途已有报道(De Roos等《国际心血管成像杂志》7:133(1991))。放射性标记和顺磁性标记的α-酮酰胺衍生物也已被提出用作血栓显像剂(Abelman等，美国专利5656600)。
对非肽类化合物的需求继续存在着，该化合物是有效的和选择性蛋白酶抑制剂，比当前可得到的蛋白酶抑制剂具有较高生物利用度和较少副作用。因此，以有效的抑制能力和较低的哺乳动物毒性为特征的、新型有效的蛋白酶抑制剂可能是各种疾病状态的有价值的治疗剂，包括对大量哺乳动物蛋白水解的疾病状态的治疗。
                        发明概述
本发明涉及新颖的氨基胍(肼基脒)与烷氧基胍(烷氧基氨基脒)吡嗪酮(pyrazinone)，见下式Ⅰ。也提供了制备式Ⅰ化合物的方法。本发明的新化合物是有效的蛋白酶抑制剂，尤其是胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶，例如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶、纤溶酶和Xa因子。某些化合物通过直接、选择性抑制凝血酶表现抗凝血酶活性，或者是可用于生成具有抗凝血酶活性的化合物的中间体。还提供了抑制或治疗哺乳动物异常蛋白水解的方法，和治疗哺乳动物血栓形成、局部缺血、中风、再狭窄或炎症的方法，也就是将有效量的式Ⅰ化合物给药。
本发明包括一种组合物，用于抑制哺乳动物血小板的损失、抑制血小板聚集物的形成、抑制纤维蛋白的形成、抑制血栓形成、和抑制栓塞物形成，该组合物在药学上可接受的载体内包含本发明化合物。这些组合物可选地可以包括抗凝剂、抗血小板剂和溶栓剂。该组合物可以加入到血液、血液制品或哺乳动物器官中，以达到所需的抑制作用。
也提供了抑制或治疗哺乳动物异常蛋白水解的方法，和用于治疗下述的方法：心肌梗塞；不稳定的绞痛；中风；再狭窄；深静脉血栓；由创伤、脓毒症或肿瘤转移导致的播散性血管内凝血；血液透析；心肺旁路术；成人呼吸窘迫综合征；内毒素性休克；类风湿性关节炎；溃疡性结肠炎；硬结；转移；化疗过程中的凝固性过高；阿耳茨海默氏病；Down氏综合征；眼内纤维蛋白形成；和伤口愈合。本发明化合物的其他用途是作为抗凝剂，包埋在或者物理连接于用于装置制造的材料中，该装置用于血液采集、血液循环和血液贮存，例如导管、血液透析仪器、血液采集注射器与试管、血线(blood1ines)与斯滕特氏印模(stents)。
本发明也包括用于减少哺乳动物表面血栓形成的方法，是将本发明化合物以共价或非共价方式结合在该表面上。
另一方面，本发明包括可用于哺乳动物体内血栓成像的组合物，该组合物包含能够在体外被检测的本发明化合物。优选的组合物包含本发明化合物和一种可检测的标记，例如放射性或顺磁性原子。
另一方面，本发明提供可用于哺乳动物体内血栓成像的诊断组合物，该组合物包含药学上可接受的载体和诊断学上有效量的本发明化合物或组合物。
另一方面，本发明包括可用于哺乳动物体内血栓成像的方法。
优选实施方式的详细说明
本发明化合物包括式Ⅰ化合物：
或其溶剂化物、水合物或药学上可接受的盐；其中：
W是氢、R1、R1OCO、R1CO、R1(CH2)sNHCO或(R1)2CH(CH2)sNHCO，其中的s是0-4；
R1是
R2，
R2(CH2)tC(R12)2，其中的t是0-3，每个R12可以是相同或不同的，
(R2)(OR12)CH(CH2)p，其中的p是1-4，
(R2)2(OR12)C(CH2)p，其中的p是1-4，
R2C(R12)2(CH2)t，其中的t是0-3，每个R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以与相邻的C形成一个由C3-7环烷基代表的环，
R2CF2C(R12)2(CH2)q，其中的q是0-2，每个R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以与相邻的C形成一个由C3-7环烷基代表的环，
R2CH2C(R12)2(CH2)q，其中的q是0-2，每个R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以与相邻的C形成一个由C3-7环烷基代表的环，
(R2)2CH(CH2)r，其中的r是0-4，每个R2可以是相同或不同的，其中的(R2)2也可以与CH形成一个由C3-7环烷基、C7-12二环烷基、C10-16三环烷基代表的环，或者形成一个5至7元单环或二环的杂环，该杂环可以是饱和或不饱和的，并含有一至三个选自N、O和S的杂原子，
R2O(CH2)p，其中的p是2-4，
(R2)2CF(CH2)r，其中的r是0-4，每个R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以与C形成一个由C3-7环烷基、C7-12二环烷基、C10-16三环烷基代表的环，或者形成一个5至7元单环或二环的杂环，该杂环可以是饱和或不饱和的，并含有一至三个选自N、O和S的杂原子，
Figure A9980727500311
其中的s是0或1，或
R2CF2C(R12)2；
R2是
苯基、萘基或联苯基，它们每个是未取代的或者被一个或多个C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤素、羟基、CF3、OCF3、COOH、CONH2或SO2NH2取代，
一个5至7元单环或9至10元二环的杂环或非杂环，该环可以是饱和或不饱和的，其中的杂环含有一至四个选自N、O和S的杂原子，其中的杂环或非杂环是未取代的或者被卤素或羟基取代，
C1-7烷基，它是未取代的或者被一个或多个羟基、COOH、氨基、芳基、C3-7环烷基、CF3、N(CH3)2、-C1-3烷基芳基、杂芳基或杂环烷基取代，
CF3，
C3-7环烷基，它是未取代的或者被芳基取代，
C7-12二环烷基，或
C10-16三环烷基；R3是
氢、烷基、环烷基、烯基、炔基、可选被取代的芳基、可选被取代的芳烷基、可选被取代的杂芳基、三氟甲基、卤素、羟基烷基、氰基、硝基、甲酰氨基、-CO2Rx、-CH2ORx或-ORx，
其中的Rx在每种情况中独立地是氢、烷基或环烷基之一，其中所述的烷基或环烷基可以可选地具有一个或多个不饱和度；
R4是氢或卤素；
R12是
氢，
苯基、萘基或联苯基，它们每个是未取代的或者被一个或多个C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤素、羟基、CF3、OCF3、COOH或CONH2取代，
一个5至7元单环或9至10元二环的杂环，该杂环可以是饱和或不饱和的，并含有一至四个选自N、O和S的杂原子，
C1-4烷基，它是未取代的或者被一个或多个羟基、COOH、氨基、芳基、杂芳基或杂环烷基取代，
CF3，
C3-7环烷基，
C7-12二环烷基，或
C10-16三环烷基；
R5是氢、C1-4烷基或C2-4烯基；
R6是氢、烷基、烯基、芳烷基、芳基、羟基烷基、氨基烷基、单烷基氨基(C2-10)烷基、二烷基氨基(C2-10)烷基或羧基烷基；
R7、R8、R9和R10独立地是氢、烷基、芳烷基、芳基、羟基烷基、氨基烷基、单烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基或羧基烷基；
或者R7和R8一起形成-(CH2)u-，其中的u是2至7，优选为2至5，而R9和R10是如上所定义的；
或者R9和R10一起形成-(CH2)v-，其中的v是2至7，优选为2至5，而R7和R8是如上所定义的；
或者R7和R9一起形成-(CH2)y-，其中的y是0(一条键)或1至7，优选为0至4，而R8和R10是如上所定义的；
X是氧、NR11或CH=N(其中的N是键合在NR6上的)，
其中的R11是氢、烷基、环烷基或芳基，其中所述的烷基、环烷基或芳基可以可选地被氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、烷氧基、羟基、羧基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、芳基、杂芳基、酰氨基、氰基或三氟甲基取代；
Ra、Rb和Rc独立地是氢、烷基、羟基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷氧基羰基氧基、氰基或-CO2Rw，
其中的Rw是烷基、环烷基、苯基、苄基、或
Figure A9980727500332
其中的Rd和Re独立地是氢、C1-6烷基、C2-6烯基或苯基，Rf是氢、C1-6烷基、C2-6烯基或苯基，Rg是氢、C1-6烷基、C2-6烯基或苯基，Rh是芳烷基或C1-6烷基；
n是0至8；
m是0至6。
在一类化合物及其药学上可接受的盐中，R3是氢、C1-4烷基、C3-7环烷基或CF3；优选为C1-4烷基，m和n各自是0至4。
在一小类该类化合物及其药学上可接受的盐中，R4是氢或卤素。
在一组该小类化合物及其药学上可接受的盐中，W是H或R1。
在一小组该组化合物及其药学上可接受的盐中，
R1是
R2，
R2(CH2)tC(R12)2，其中的t是0-3，每个R12可以是相同或不同的，
R2C(R12)2(CH2)t，其中的t是0-3，每个R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以与C形成一个由C3-7环烷基代表的环，
R2CH2C(R12)2(CH2)q，其中的q是0-2，每个R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以与C形成一个由C3-7环烷基代表的环，
(R2)2CH(CH2)r，其中的r是0-4，每个R2可以是相同或不同的，其中的(R2)2也可以与CH形成一个由C3-7环烷基、C7-12二环烷基、C10-16三环烷基代表的环，或者形成一个5至7元单环或二环的杂环，该杂环可以是饱和或不饱和的，并含有一至三个选自N、O和S的杂原子，
R2CF2C(R12)2(CH2)q，其中的q是0-2，每个R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以与C形成一个由C3-7环烷基代表的环，
R2O(CH2)p，其中的p是2-4；
R2是
苯基或萘基，它们每个是未取代的或者被一个或多个C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤素、羟基、CF3、OCF3或SO2NH2取代，
一个5至7元单环或9至10元二环的杂环或非杂环，该环可以是饱和或不饱和的，其中的杂环含有一至四个选自N、O和S的杂原子，其中的杂环或非杂环是未取代的或者被卤素或羟基取代，
C1-7烷基，它是未取代的或者被一个或多个羟基、COOH、C3-7环烷基、CF3、N(CH3)2、-C1-3烷基芳基、杂芳基或杂环烷基取代，
CF3，或
C3-7环烷基，它是未取代的或者被芳基取代；R12是
氢，或
C1-4烷基，它是未取代的或者被一个或多个羟基、COOH、氨基、芳基、杂芳基或杂环烷基取代。
在一族该小组化合物及其药学上可接受的盐中，
R3是H、CH3或CH2CH3；
R4是H或氯；
W是PhCH2CH2,(CH3)3C-,HOOCCH2,CF3CH2,(CH3)2N(CH2)2,PhCH2O(CH2)2,
PhCH(CH3),PhCH2CH(COOH),CH3(CH2)5,PhCH2,H,CH3(CH2)4,
CH3CH2CH(CH3)CH2,(Ph)2CHCH2,PhCH2CH(CH3),PhCH(CH3)CH2,
(CH3)2CH,PhCH(OH)CH2,PhC(CH3)2CH2,(Ph)2CHCH2，或
Figure A9980727500391
优选的R5是氢。
当X是NR11时，优选的化合物是其中R11是氢或C1-6烷基的那些，该烷基可选被一个、两个或三个——优选为一个——氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、烷氧基、羟基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、烷氧羰基、苯基、氰基、三氟甲基、乙酰氨基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、吡咯基或咪唑基取代。
适合的R11包括氢、甲基、乙基、丙基、正丁基、苄基、苯乙基、2-羟基乙基、3-羟基丙基、4-羟基丁基、羧甲基和羧乙基。
最优选的化合物是其中X是氧的那些。
优选的化合物是式Ⅰ的那些，其中R6是氢或C1-6烷基。
优选的化合物是式Ⅰ的那些，其中R7、R8、R9和R10独立地是氢、C1-6烷基、C6-10芳基C1-6烷基、C6-10芳基、C2-10羟基烷基或C2-7羧基烷基之一。有用的R7、R8、R9和R10包括氢、甲基、乙基、丙基、正丁基、苄基、苯乙基、2-羟基乙基、3-羟基丙基、4-羟基丁基、2-羧基甲基、3-羧基乙基和4-羧基丙基。
也优选这样的化合物，其中R7与R8或R9与R10联合作为一个亚烷基链，分别是-(CH2)u-和-(CH2)v-，其中u和v各自是2-5，最优选为2或3。
式Ⅰ中优选的Ra、Rb和Rc是氢、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基或-CO2Rw，其中的Rw在每种情况中优选为C1-4烷基、C4-7环烷基或苄氧基羰基之一。适合的Ra、Rb和Rc包括氢、甲基、乙基、丙基、正丁基、羟基、甲氧基、乙氧基、氰基、-CO2CH3、-CO2CH2CH3和-CO2CH2CH2CH3。在最优选的实施方式中，Ra、Rb和Rc各自是氢。
关于Ra、Rb和Rc是-CO2Rw，也优选为其中的Rw是
Figure A9980727500401
或
Figure A9980727500402
之一，其中的Rd-Rh是如上所定义的。当Ra、Rb和Rc是-CO2Rw时，其中的Rw是这些部分之一，所得化合物是药物前体，具有所需的制剂特征和生物利用度特征。优选的每个Rd、Re和Rg是氢，Rf是甲基，优选的Rh包括苄基和叔丁基。
式Ⅰ中优选的n值包括0至6，更优选为0至4，最优选为0、1或2。
优选的m值是0至4，最优选为0、1或2。
尤其优选的化合物是由式Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ所代表的：
Figure A9980727500411
或其溶剂化物、水合物或药学上可接受的盐；其中
W定义同上，并具有如上式Ⅰ所优选的含义；
X是-O-、-NH-或-CH=N-(脒基腙基，其中的NH连接在母体分子的NH上)。X优选地连接在环的3-位或4-位、优选为4-位上。
R3是氢、C1-3烷基、卤素或C1-2烷氧基；
R4是氢或卤素；
n是0、1、2或3，优选为0、1或2；
m是0、1、2或3，优选为0或1；
n’是0、1、2或3，优选为0、1或2；
m’是0、1、2或3，优选为0或1。
本发明范围内的具体化合物包括如下：
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2,2-二苯基乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-甲基苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-甲氧基苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1-苯基环丁基)甲氨基-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-[2-(1-萘)乙基]氨基-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基)氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-苯基-1-丁氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3,4-亚甲二氧基苯基)乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2-吡啶基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2-甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3-甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2-三氟甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3-三氟甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[4-三氟甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3,5-二甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-二氢茚氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3,4-二氟苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[5-二氢茚基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-氟苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基1氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(3,4-二甲氧基苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-氟苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-乙基苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-苯基丙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(3,4-二甲基苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-萘乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2,2-二苯基丙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-(3-吲哚基)乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[1-(4-甲基萘)]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2,4-二氟苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基-N’-甲基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[4-甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-5-氯-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-5-氯-6-甲基-3-(2,2-二苯基乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基肼基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(苯乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基肼基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1-甲基-2-苯基乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基肼基)乙基]氨基}羰基甲基-6-乙基-3-(苯乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基肼基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-甲基苯基乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1-甲基-2-(4-甲氨基-3-吡啶基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1-甲基-2-(3-吡啶基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-环丙基-2-(3,4-二甲氧基苯基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-环丁基乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-环丁基-2,2-二氟乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-(3-氟苯基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2,2-二氟-2-苯基乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-苯基环丙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-(4-氯苯基)-2-环丙基乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-环丙基-2-(3-吡啶基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-苄基环丙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-环丙基-2-(3-氟苯基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-环丙基-2-(3,4-二氟苯基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2,2-二氟-2-苯基乙氨基)-吡嗪酮，
及其药学上可接受的盐，例如它们的盐酸盐、乙酸盐和三氟乙酸盐。
也不言而喻的是，本发明被认为包括立体异构体以及旋光异构体，例如对映体混合物以及各对映体和非对映体，其产生原因是所选择的该系列化合物中的结构不对称性。本发明化合物也可以具有多晶型，所有多晶型也都包括在本发明内。
式Ⅰ化合物也可以是溶剂化物的形式，尤其是水合物。水合可以发生在化合物或包含化合物的组合物的生产过程中，或者由于化合物的吸湿性，经过一定时间可发生水合。
式Ⅰ范围内的某些化合物是被称之为药物前体的衍生物。“药物前体”这一表达方式表示已知直接起效的药物的衍生物，该衍生物与药物相比其释放特性和治疗价值都增强了，并且通过酶或化学过程转化为活性药物。有用的药物前体是其中Ra、Rb和/或Rc是-CO2Rw的那些，其中的Rw是如上所定义的。见美国专利5466811和Sauhier等《生物有机与医药化学快报》4:1985-1990(1994)。
当任意组分或式Ⅰ中的任意可变参数出现不止一次时，它每次出现的定义与其他每次出现的定义是无关的。而且，取代基和/或可变参数的组合也是允许的，只要这些组合能够得到稳定的化合物即可。
另一方面，本发明包括可用于哺乳动物体内血栓成像的组合物，该组合物包含能够在体外被检测的本发明化合物。优选的组合物包含本发明化合物和一种可检测的标记，例如放射性或顺磁性原子。
另一方面，本发明提供可用于哺乳动物体内血栓成像的诊断组合物，该组合物包含药学上可接受的载体和诊断学上有效量的本发明化合物或组合物。
另一方面，本发明包括可用于哺乳动物体内血栓成像的方法。
按照优选的方面，有用的化合物是其中R1取代基是被一种可检测的标记取代的那些，该标记例如放射性碘原子，如Ⅰ-125、Ⅰ-131或Ⅰ-123。在这方面，R1优选为具有对位Ⅰ-123、对位Ⅰ-125或对位Ⅰ-131取代的苯基，或具有间位Ⅰ-123、间位Ⅰ-125或间位Ⅰ-131取代的苄基。
可检测的标记也可以是放射性或顺磁性螯合物，其中有适合的配体(L)结合在R1取代基上，直接地或者经由一个二价连接基团A”。或者，基团-A”-L取代式Ⅰ中的基团W。适合的配体指的是能够螯合放射性或顺磁性金属离子的有机部分。
这些化合物中，二价连接基团A”包括能够以共价方式与游离氨基结合的基团和螯合单元。例如，A”可以是-C(=S)-、-C(=0)-、-C(=NH)-(CH2)6-C(=NH)-、-C(=O)-(CH2)6-C(=O)-、
Figure A9980727500461
等。
而且，在由式Ⅰ代表的化合物中，螯合配体L包括能够以共价方式或非共价方式与放射性或顺磁性原子结合的基团。螯合单元包括常用于络合放射性或顺磁性原子的那些。这些螯合单元含有3至12个、优选为3至8个亚甲基膦酸根、亚甲基羰基异羟肟酸根、羧亚乙基或尤其为羧亚甲基，它们结合在氮原子上。如果只有一个或两个酸根结合在氮原子上，那么这个氮通过可选被取代的亚乙基或至多四个被氮或氧或硫原子分隔的亚乙基单元结合在另一个具有这些基团的氮上。完整的含义优选为二亚乙基三胺-N,N,N’,N”,N”-五乙酸(DTPA)。DTPA是本领域熟知的、用于放射性原子铟-111(In-111)、锝-99m(Tc-99m)和顺磁性原子钆(Gd)的螯合单元。Khaw等《科学》209:295(1980)；Paik C.H.等的美国专利4652440(1987)；Gries,H.等的美国专利4957939(1990)。优选的螯合配体L是1-(对氨基苄基)二亚乙基三胺五乙酸。螯合单元也包括这样的化合物，其中含有至少四个巯基或胺部分，并任意组合。这些巯基或胺部分彼此被至少两个原子分隔，分隔原子可以是碳、氮、氧或硫。尤其优选的螯合单元L是金属硫蛋白，它也是本领域熟知的、用于Tc-99m的螯合单元。
本文所用术语“烷基”单独或作为另一基团的一部分，指至多12个碳的直链和支链原子团，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、异己基、庚基、4,4-二甲基戊基、辛基、2,2,4-三甲基戊基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基。
本文所用的术语“烯基”指2-20个碳原子的直链或支链原子团，除非链长受此限制，包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基等。优选地，烯基链是2至10个碳原子的长度，更优选为2至8个碳原子长度，最优选为2至4个碳原子长度。
本文所用的术语“炔基”指2-20个碳原子的直链或支链原子团，除非链长受此限制，其中在链中两个碳原子之间存在至少一条叁键，包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基等。优选地，炔基链是2至10个碳原子的长度，更优选为2至8个碳原子长度，最优选为2至4个碳原子长度。
在所有存在烯基或炔基部分作为取代基的情况中，不饱和键、即乙烯基或乙炔基优选地不直接连接在氮、氧或硫部分上。
本文所用的术语“烷氧基”指1至20个碳原子的直链或支链原子团，除非链长受此限制，键合在氧原子上，包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基等。优选地，烷氧基链是1至10个碳原子的长度，更优选为1至8个碳原子长度。
本文所用的术语“芳基”单独或作为另一基团的一部分，指的是单环或二环芳族基团，环部分中含有6至12个碳，优选在环部分中含有6-10个碳，例如苯基、萘基或四氢萘基。
本文所用的术语“杂芳基”指具有5至14个环原子的基团；10或14个π电子形成环状排列；含有碳原子，并含有1、2或3个氧、氮或硫杂原子(杂芳基的实例有：噻吩基、苯并[b]噻吩基、萘并[2,3-b]噻吩基、噻蒽基、呋喃基、吡喃基、异苯并呋喃基、苯并噁唑基、色烯基、呫吨基、phenoxathiinyl、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吲嗪基、异吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、异喹啉基、喹啉基、酞嗪基、萘啶基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、4αH-咔唑基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、口白啶基、菲咯啉基、吩嗪基、异噻唑基、吩噻嗪基、异噁唑基、呋咱基和吩噁嗪基)。
本文所用的术语“芳烷基”或“芳基烷基”单独或作为另一基团的一部分，指的是具有芳基取代基的、如上所述的C1-6烷基，例如苄基、苯乙基或2-萘甲基。
本文所用的术语“环烷基”单独或作为另一基团的一部分，指的是含有3至9个碳原子的环烷基，优选为3至7个碳原子。典型实例有环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基和环壬基。
术语“C7-12二环烷基”意在包括二环[2.2.1]庚基(降冰片基)、二环[2.2.2]辛基、1,1,3-三甲基二环[2.2.1]庚基(冰片基)等。
术语“C10-16三环烷基”意在包括三环[5,2,1,02,6]癸基、金刚烷基等。
本文所用的术语“卤素”或“卤”单独或作为另一基团的一部分，指的是氯、溴、氟或碘，其中氯是优选的。
本文所用的术语“单烷基氨基”单独或作为另一基团的一部分，指的是被一个具有1至6个碳原子的烷基取代的氨基。
本文所用的术语“二烷基氨基”单独或作为另一基团的一部分，指的是被两个烷基取代的氨基，每个烷基具有1至6个碳原子。
本文所用的术语“羟基烷基”指的是被一个或多个羟基部分取代的任意上述烷基。
本文所用的术语“羧基烷基”指的是被一个或多个羧酸部分取代的任意上述烷基。
本文所用的术语“杂环”或“杂环的环”除非另有注解，代表稳定的5至7元单或二环或稳定的7至10元二环的杂环系，任意的环可以是饱和或不饱和的，由碳原子和一至三个杂原子组成，杂原子选自由N、O和S组成的组，其中的氮和硫杂原子可以可选地是被氧化的，氮杂原子可以可选地是季铵化的，包括任意这样的二环基团，其中任意上述杂环是与苯环稠合的。尤其有用的是这样的环，含有一个氧或硫、一至三个氮原子、或与一或两个氮原子结合的一个氧或硫。杂环可以被连接在任意的杂原子或碳原子上，形成稳定结构。这样的杂环基的实例包括哌啶基、哌嗪基、2-酮基哌嗪基、2-酮基哌啶基、2-酮基吡咯烷基、2-酮基氮杂基、氮杂基、吡咯基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑基、吡唑烷基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、噁唑基、噁唑烷基、异噁唑基、异噁唑烷基、吗啉基、噻唑基、噻唑烷基、异噻唑基、奎宁环基、异噻唑烷基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、噻二唑基、苯并吡喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、呋喃基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、噻吩基、苯并噻吩基、硫吗啉基、硫吗啉亚砜、硫吗啉砜、和噁二唑基。吗啉代与吗啉基是相同的。
本文所用的术语“杂原子”指氧原子(“O”)、硫原子(“S”)或氮原子(“N”)。当杂原子是氮时，它可以形成一个NRaRb部分，其中的Ra和Rb彼此独立地是氢或C1至C8烷基，或者与它们所键合的氮一起形成一个饱和或不饱和的5、6或7元环。
流程1和2概括了制备式Ⅰ化合物的合成步骤。
                     流程1
Figure A9980727500501
1-流程2
Figure A9980727500502
流程1和2中，W、R3、R7、R8、R9、R10、Ra、Rb、Rc、n和m是如上所定义的；R4=Cl或Br；P是一种氨基保护基团，例如苄氧基羰基(Cbz)，P’是一种酯保护基团，例如苄基。
流程1中，利用Mitsunobu偶合操作(Mitsunobu,O.《合成》1(1981))将被保护的氨基醇1与N-羟基邻苯二甲酰亚胺偶合，得到化合物3。优选的偶合条件包括使用三烷基膦或三芳基膦，例如三苯膦，在适当的溶剂中，例如四氢呋喃或二氯甲烷，和偶氮二甲酸二烷基酯，例如偶氮二甲酸二乙酯。利用本领域熟知的标准条件(Greene,T.W.,Wuts,P.G.M.《有机合成中的保护基团》第2版,John Wiley and Sons,Inc.New York(1991))，在适当的溶剂中，例如乙醇或异丙醇，除去邻苯二甲酰亚胺保护基团，例如甲胺或肼。使用取代的胍基化剂将所得烷氧基胺胍基化为4，胍基化剂例如N,N’-双(叔丁氧基羰基)-S-甲基异硫脲(Bergeron,R.J.和McManis,J.S.《有机化学杂志》52：1700(1987))或N-Ra、N-Rb、N-Rc-1H-吡唑-1-甲脒(Bernatowicz,M.S.等《四面体快报》34:3389(1993))。氨基的去保护作用得到中间体5，这是利用本领域熟知的标准操作(Greene,T.W.,Wuts,P.G.M.《有机合成中的保护基团》第2版，John Wiley and Sons,Inc.New York(1991))，例如碳上的钯，在适当的溶剂中完成，例如甲醇或乙醇。在某些情况下，加入一种酸是有利的，例如氢氯酸。
流程2中，酯保护的甘氨酸、例如P’=苄基或乙基，与一种醛、例如乙醛，和一种氰化物、例如氰基三甲基硅烷(TMSCN)，在适当的溶剂中缩合，例如二氯甲烷，得到氨基腈6。使氨基腈与草酰氯或草酰溴在适当的溶剂中反应，例如1,2-二氯苯，得到吡嗪酮7。吡嗪酮7的3-氯或3-溴然后被适当的胺替换，例如苯乙胺、2,2-二苯基乙胺或4-甲氧基苯乙胺，在适当的溶剂中，例如乙酸乙酯，得到化合物8。通过本领域熟知的标准操作(Greene,T.W.,Wuts,P.G.M.《有机合成中的保护基团》第2版，John Wiley and Sons,Inc.New York(1991))，例如碱水解，如LiOH或NaOH，将酯8在适当的溶剂中转化为酸9，例如四氢呋喃/甲醇/水。其余氯或溴然后可选地通过氢解作用加以除去，反应使用一种催化剂，例如碳上的钯或阮内镍，在适当的溶剂中进行，例如水，得到9。或者，在P’=苄基的情况下，苄基酯的去保护和其余氯或溴的除去可以同时实现，反应使用碳上的钯，在适当的溶剂中进行，例如四氢呋喃/乙醇，得到9。然后利用典型的氨基酸偶合操作，将酸与胺5偶合，例如BOP或PyBOP，反应在适当的溶剂、例如N,N-二甲基甲酰胺，和碱、例如二异丙基乙胺(DIEA)中进行，在Ra和Rb=叔丁氧基羰基(Boc)且Rc=氢的情况下，然后可选地除去Ra、Rb、Rc。在适当的溶剂中，例如二氯甲烷或二噁烷，通过用一种酸处理，例如三氟乙酸或氢氯酸，除去Boc基，得到目标化合物10。
用流程3显示的步骤可以生成其中X是-CH=NR11-或NR11的化合物。
                     流程3
Figure A9980727500521
利用标准的氨基酸偶合操作，例如BOP或PyBOP，在N,N-二甲基甲酰胺等溶剂和DIEA等碱中，将酸9(按流程2合成)与氨基醇11偶合，生成化合物12。利用醇氧化的常规操作(例如参见Carey,F.A.和Sundberg,R.J.《有机化学进展B部分：反应与合成》第3版，Plenum Press,New York(1990))合成对应的醛13，例如Swern氧化(Mancuso,A.J.等《有机化学杂志》3329(1976))、氯铬酸吡啶鎓(Corey,E.J.和Suggs,J.W.《四面体快报》2647(1975))、重铬酸吡啶鎓(Corey,E.J.和Schmidt,G.《四面体快报》399(1979))或三氧化硫吡啶络合物/二甲基亚砜(《四面体快报》28：1603(1987))。
然后利用标准条件将醛13转化为脒基腙14，例如用氨基胍或取代的氨基胍处理，如氨基胍或2-肼基咪唑啉，反应可选地在一种酸的存在下，例如硝酸、氯化氢或溴化氢，在适当的溶剂中进行，例如乙醇或甲醇，另外可以含有其他溶剂，例如二氯甲烷或四氢呋喃。
脒基腙14向氨基胍15的转化是本领域熟知的还原条件下完成的，例如硼氢化锂，反应在适当的溶剂中，例如四氢呋喃或甲醇，在高达回流的不同温度下进行。作为替代方法，可以使用催化氢化反应，催化剂为碳上的钯。
利用本领域熟知的条件，可以可选地除去化合物14和15中的Ra、Rb和Rc在Ra和Rb=叔丁氧基羰基(Boc)且Rc=氢的情况下，Boc基是通过酸处理而被除去的，例如三氟乙酸或氢氯酸，反应在适当的溶剂中进行，例如二氯甲烷或二噁烷，分别得到化合物16和17。
式Ⅰ化合物的药学上可接受的盐(以水溶性或油溶性产物或可分散的产物的形式)包括常规的非毒性盐或季铵盐，它们例如是从无机或有机酸或碱生成的。酸加成盐的实例包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢氯酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、扑酸盐、果胶酯酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一酸盐。碱盐包括铵盐，碱金属盐、例如钠和钾盐，碱土金属盐、例如钙和镁盐，有机碱的盐、例如二环己胺盐、N-甲基-D-葡糖胺盐，和氨基酸的盐、例如精氨酸、赖氨酸等。而且，碱性含氮基团可以用这样的试剂季铵化，例如低级烷基卤化物，如甲基、乙基、丙基和丁基的氯、溴和碘化物；硫酸二烷基酯，如硫酸二甲酯、二乙酯、二丁酯和二戊酯；长链卤化物，如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂酰基的氯、溴和碘化物；芳烷基卤化物，如苄基和苯乙基的溴化物等。优选用于生成酸加成盐的酸包括HCl和乙酸。
本发明化合物代表一类新颖的、金属蛋白酶、酸蛋白酶、硫醇蛋白酶和丝氨酸蛋白酶的有效抑制剂。被本发明范围内的化合物抑制的丝氨酸蛋白酶的实例包括嗜中性白细胞弹性蛋白酶，它是一种涉及肺气肿发病机理的蛋白水解酶；胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶，它们是消化酶；胰弹性蛋白酶，和组织蛋白酶G，它也是与白细胞有关的胰凝乳蛋白酶样蛋白酶；凝血酶和Xa因子，它们是血液凝固途径中的蛋白水解酶。对嗜热菌蛋白酶和胃蛋白酶的抑制作用也是本发明化合物的用途，前者是一种金属蛋白酶，后者是一种酸蛋白酶。本发明化合物优选地用于抑制胰蛋白酶样蛋白酶。
对它们的最终应用来说，本发明化合物的酶抑制特性的效力和其他生化参数是易于按照本领域熟知的标准生化工艺加以确定的。例如，抑制胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶的化合物的最终应用是治疗胰腺炎。具体最终应用的实际剂量范围当然取决于所治疗的患者或动物疾病状态的性质和严重性，这些是由随访的诊断医师加以决定的。预期有用的剂量范围将是约0.01至10mg每kg每天，即可达到有效的治疗效果。
以抑制凝血酶的能力而卓著的本发明化合物可以用于多种治疗目的。作为凝血酶抑制剂，本发明化合物抑制凝血酶的产生。因此，这些化合物可用于以异常静脉或动脉血栓形成为特征的状态的治疗或预防，这些状态涉及凝血酶的产生或作用，包括但不限于深静脉血栓；发生在脓毒性休克、病毒感染和癌症过程中的播散性血管内凝血；心肌梗塞；中风；冠状动脉旁路；眼内纤维蛋白形成；髋部复位；由溶栓疗法或经皮经腔冠状血管成形术(PCTA)导致的血栓形成。其他用途包括所述凝血酶抑制剂作为抗凝剂的用途，包埋在或者物理连接于用于装置制造的材料中，该装置用于血液采集、血液循环和血液贮存，例如导管、血液透析仪器、血液采集注射器与试管、和血线。本发明化合物也可以在体外血液循环中用作抗凝剂。
金属斯滕特氏印模显示出减少再狭窄的作用，但是也有形成血栓的作用。减少斯滕特氏印模形成血栓的一个策略是在斯滕特氏印模表面上涂覆、包埋、吸附或共价结合凝血酶抑制剂。本发明化合物可用于该目的。本发明化合物可以结合或包埋在可溶性和/或可生物降解的聚合物内，然后涂在斯滕特氏印模材料上。这样的聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、聚羟基-丙基异丁烯酰胺-苯酚、聚羟乙基-天冬氨酰胺-苯酚、被棕榈酰残基取代的聚环氧乙烷-聚赖氨酸、聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸与聚乙醇酸的共聚物、聚ε己内酯、聚羟基丁酸、聚原酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯、和水凝胶的交联或两亲嵌段共聚物。见欧洲申请761251、欧洲申请604022、加拿大专利2164684和PCT公开说明书WO 96/11668、WO 96/32143和WO 96/38136。
凭藉凝血酶对平滑肌细胞、内皮细胞和嗜中性白细胞等宿主细胞类型的作用，发现了本发明化合物的另外用途，用于成人呼吸窘迫综合征；炎性反应；伤口愈合；再灌注损伤；动脉粥样硬化；和气囊血管成形术、atherectomy和动脉斯滕特氏印模放置等损伤后继发的再狭窄的治疗或预防。
本发明化合物可用于治疗瘤形成和瘤转移以及神经变性疾病，例如阿耳茨海默氏病和帕金森氏病。
当用作凝血酶抑制剂时，本发明化合物给药的有效量可以在约0.1至约500mg/kg体重的剂量范围内，优选为0.1至10mg/kg体重，给药方案为每日一次或2-4次。
当用作凝血酶的抑制剂时，本发明化合物可以与溶栓剂联合使用，例如组织纤溶酶原激活物、链激酶和尿激酶。另外，本发明化合物可以与其他抗血栓形成药或抗凝药联合使用，例如但不限于纤维蛋白原拮抗剂和凝血噁烷受体拮抗剂。
凝血酶抑制剂可以与可溶性聚合物偶合，后者作为可定向的药物载体。这样的聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基-丙基异丁烯酰胺-苯酚、聚羟乙基-天冬氨酰胺-苯酚、或被棕榈酰残基取代的聚环氧乙烷-聚赖氨酸。而且，凝血酶抑制剂可以与一类可生物降解的聚合物偶合，后者可用于实现药物的控制释放，例如聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸与聚乙醇酸的共聚物、聚ε己内酯、聚羟基丁酸、聚原酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯、和水凝胶的交联或两亲嵌段共聚物。
人白细胞弹性蛋白酶是由多形核白细胞在炎症部位释放的，因此是大量疾病状态的诱因。本发明化合物预期具有抗炎作用，可用于痛风、类风湿性关节炎和其他炎性疾病的治疗以及肺气肿的治疗。本发明化合物的白细胞弹性蛋白酶抑制性质是按下述方法测定的。组织蛋白酶G也涉及关节炎、痛风和肺气肿等疾病状态，以及由肺部感染导致的肾小球性肾炎和肺感染。在它们的最终应用中，式Ⅰ化合物的酶抑制性质是易于为本领域熟知的标准生化工艺所确定的。
本发明范围内的化合物的组织蛋白酶G抑制性质是按下述方法测定的。按照Baugh等《生物化学》15:836(1979)的操作，得到部分纯化的人组织蛋白酶G制剂。白细胞颗粒是白细胞弹性蛋白酶和组织蛋白酶G制剂的主要来源(胰凝乳蛋白酶样活性)。将白细胞溶解，分离颗粒。白细胞颗粒用0.20M乙酸钠pH4.0萃取，将萃取液在4℃下对含有0.05M NaCl的0.05M Tris缓冲液pH8.0透析过夜。蛋白质部分在透析过程中沉淀出来，离心分离之。该部分含有大多数胰凝乳蛋白酶样活性的白细胞颗粒。制备每种酶的特异性酶解物，也就是N-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-对硝基N-酰苯胺和Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-对硝基N-酰苯胺。后者不被白细胞弹性蛋白酶水解。酶制剂在2.00ml 0.10M Hepes缓冲液pH7.5中进行测定，该缓冲液中含有0.50M NaCl、10％二甲基亚砜和作为酶解物的0.0020M Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-对硝基N-酰苯胺。对硝基N-酰苯胺酶解物的水解是在405nm和25℃下进行监测的。
本发明化合物作为嗜中性白细胞弹性蛋白酶抑制剂和组织蛋白酶G抑制剂应用的有用剂量范围取决于疾病状态的性质和严重性，这些是由随访的诊断医师加以确定的，可用于上述疾病状态的剂量范围是0.01至10mg/kg体重每天。
抑制尿激酶或纤溶酶原激活物的本发明化合物有效地用于治疗过度细胞生长的疾病状态。本发明化合物也可用于良性前列腺肥大和前列腺癌的治疗、牛皮癣的治疗和用作堕胎药。对它们的最终应用来说，本发明化合物的酶抑制特性的效力和其他生化参数是易于按照本领域熟知的标准生化工艺加以确定的。这种应用的实际剂量范围将取决于所治疗的患者或动物疾病状态的性质和严重性，这些是由随访的诊断医师加以决定的。预期一般的剂量范围将是约0.01至10mg每kg每天，即可达到有效的治疗效果。
本发明化合物的其他用途包括对商品酶试剂进行活性部位浓度分析。例如，作为标准试剂供应的胰凝乳蛋白酶用于在临床上定量测定胰液和粪便中的胰凝乳蛋白酶活性。这种测定用于诊断胃肠道和胰腺机能紊乱。胰弹性蛋白酶也是作为商品试剂供应的，用于定量测定血浆中的α1-抗胰蛋白酶。血浆α1-抗胰蛋白酶在若干炎性疾病的进程中浓度增加，α1-抗胰蛋白酶缺乏与肺病发病率的增加有关。本发明化合物可用于提高这些测定的准确度和再现性，方法是对作为试剂供应的商品弹性蛋白酶进行滴定测量标准化。见美国专利4499082。
某些蛋白质提取物中的蛋白酶活性在特定蛋白质的纯化过程中是可能使蛋白质分离操作结果复杂化和打折扣的经常性问题。某些存在于这些提取物中的蛋白酶能够在纯化步骤中被本发明化合物所抑制，后者与不同蛋白水解酶紧密结合。
本发明的药物组合物能够对任意能够体验本发明化合物有益效果的动物给药。这些动物中最重要的是人，不过本发明并不受此局限。
本发明的药物组合物能够通过任意可达到预期目的的方式给药。例如，给药可以通过肠胃外、皮下、静脉内、肌内、腹膜内、透皮、颊部或眼部途径。或者，可以通过口服途径并行给药。给药剂量将取决于受治疗者的年龄、健康状况和体重、并行治疗的种类——若有的话、治疗频率、和所需效果的性质。
除了药学上的活性化合物以外，该新颖的药物制剂还可含有适合的药学上可接受的载体，包括有利于将活性化合物加工成能够药用的制剂的赋形剂和助剂。
本发明的药物制剂是按照本身已知的方式制造的，例如通过常规的混合、造粒、成丸、溶解、或冻干过程。因此，通过将活性化合物与固体赋形剂混合可以得到口用药物制剂，如果需要或必要的话，可选地加入适合的助剂，然后研磨所得混合物，将颗粒混合物加工成片剂或锭剂芯。
适合的赋形剂特别是填充剂，例如糖类，如乳糖或蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇，纤维素制剂和/或磷酸钙，如磷酸三钙或磷酸氢钙，以及粘合剂，例如淀粉糊，如玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、马铃薯淀粉，明胶，黄芪胶，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，羧甲基纤维素钠，和/或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要的话，可以加入崩解剂，例如上述的淀粉和羧甲基淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、或藻酸或其盐，例如藻酸钠。助剂尤其是流动调节剂和润滑剂，例如硅石、滑石、硬脂酸或其盐，如硬脂酸镁或硬脂酸钙，和/或聚乙二醇。锭剂芯具有适合的包衣，如果需要的话，该包衣是耐受胃酸的。为此可以使用浓缩的糖溶液，其中可以可选地含有阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆用溶液和适合的有机溶剂或溶剂混合物。为了形成耐受胃酸的包衣，使用适合的纤维素制剂的溶液，例如邻苯二甲酸乙酸纤维素或邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素。可以向片剂或糖衣丸剂的包衣中加入染料或颜料，例如，用于鉴别或为了描绘各剂活性化合物的组合。
其他可以口服使用的药物制剂包括由明胶制成的推入配合式胶囊，以及由明胶和甘油或山梨糖醇等增塑剂制成的软密封胶囊。推入配合式胶囊可以含有颗粒形式的活性化合物，它们可以与乳糖等填充剂、淀粉等粘合剂和/或滑石或硬脂酸镁等润滑剂以及可选的稳定剂混合。在软胶囊中，活性化合优选溶解或悬浮在适宜的液体中，例如脂肪油或液体石蜡。另外，也可以加入稳定剂。
适合于肠胃外给药的制剂包括水溶性活性化合物的水溶液，例如水溶性盐、碱性溶液和环糊精包合的络合物。尤其优选的碱式盐是铵盐，例如是用Tris、氢氧化胆碱、Bis-Tris丙烷、N-甲基葡糖胺或精氨酸制备的。可以使用一种或多种改性或未改性的环糊精来稳定和增加本发明化合物的水溶性。为此有用的环糊精公开在美国专利4727064、4764604和5024998中。
另外，活性化合物可以作为适当的油性注射用悬浮液给药。适合的亲脂性溶剂或载体包括脂肪油、如芝麻油，或合成的脂肪酸酯、如油酸乙酯或甘油三酯或聚乙二醇-400(化合物可溶于PEG-400)。水性注射用悬浮液可以含有增加悬浮液粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇和/或葡聚糖。可选地，悬浮液也可以含有稳定剂。
利用交换反应，式Ⅰ化合物可以用放射性碘进行标记。用热碘交换冷碘是本领域所熟知的。或者，经由三丁基甲锡烷基中间体，可以从对应的溴化合物制备放射性碘标记的化合物。见美国专利5122361，引用在此作为参考。
本发明也包括可用于哺乳动物体内血栓成像的组合物，其中该组合物是由与放射性原子络合的式Ⅰ化合物组成的。
对式Ⅰ化合物来说，适合的放射性原子包括Co-57、Cu-67、Ga-67、Ga-68、Ru-97、Tc-99m、In-111、In-113m、Hg-197、Au-198和Pb-203。某些放射性原子非常适合用在放射化学成像工艺中。特别是锝-99m(Tc-99m)是成像理想的放射性原子，这是由它的核性质所决定的。它是一种γ发射体，单光子能为140keV，半衰期为约6小时，易于从Mo-99/Tc-99发生器获得。铼-186和-188也具有γ发射，使其可被成像。优选的组合物含有放射性原子Tc-99m。
本发明组合物适宜通过将式Ⅰ化合物与适合于外部检测的放射性同位素络合加以制备。γ发射体铟-111m和锝-99m是优选的放射性原子，因为它们可用γ照相机检测，并具有良好的体内半衰期。
式Ⅰ化合物可以按照本领域已知的任意多种工艺加以标记，得到本发明的组合物。例如，这些化合物可以通过一种螯合剂进行标记，例如二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)或金属硫蛋白，它们都能以共价方式与式Ⅰ化合物结合。
一般，含有锝-99m的本发明组合物是这样制备的，先形成锝-99m与一种还原剂和一种水溶性配体的水性混合物，然后使该混合物与由式Ⅰ代表的本发明化合物接触。例如，本发明的成像化合物是这样制备的，使锝-99m(氧化态)与具有一种螯合单元的本发明化合物在一种还原剂的存在下反应，在还原态(Ⅳ或Ⅴ价态)锝-99m之间形成稳定的络合物。
本发明组合物的一种实施方式是这样制备的，将具有DTPA螯合单元的式Ⅰ化合物用锝-99m标记。实现这一点可以通过将预定量(例如5μg至0.5mg)本发明化合物与含有柠檬酸盐缓冲剂和亚锡还原剂的水溶液混合，然后加入含有预定水平放射性(例如15mCi)的新近洗脱的过锝酸钠。混合物在室温下保持恒温，然后将反应混合物通过无菌滤器(0.2-0.22微米)装入屏蔽注射器内，如果需要的话，再分散在0.9％的注射盐水中。
本发明组合物的另一种实施方式是这样制备的，将具有金属硫蛋白螯合单元的式Ⅰ化合物用锝-99m标记。实现这一点可通过将含水过锝酸-99m钠与含水葡萄庚糖酸亚锡混合，形成锝-99m(还原态)与两分子葡萄庚糖酸盐的可溶性络合物，然后将该溶液与结合有金属硫蛋白的式Ⅰ化合物混合。混合物恒温一定时间，使锝-99m从葡萄庚糖酸盐络合物交换到式Ⅰ化合物的金属硫蛋白上，从而形成本发明的锝标记组合物。
锝-99m的来源应当优选是水溶性的。优选的来源是碱金属与碱土金属的过锝酸盐(TcO4 -)。最优选的锝-99m是以新鲜过锝酸钠的形式从无菌锝-99m发生器(例如常规的Mo-99/Tc-99m发生器)中得到的。不过，也可以使用生理学上可接受的锝-99m的任意其他来源。
用在该方法中的还原剂是生理学上可接受的，用于将锝-99m从其氧化态还原为Ⅳ或Ⅴ价态，或者用于还原氧化态的铼。可以使用的还原剂是氯化亚锡、氟化亚锡、葡萄庚糖酸亚锡、酒石酸亚锡和连二亚硫酸钠。优选的是亚锡还原剂，尤其是氯化亚锡或葡萄庚糖酸亚锡。还原剂的量是还原锝-99m所必需的，使其以这种放射性同位素还原态与式Ⅰ化合物的螯合单元结合。例如，还原剂是氯化亚锡(SnCl2)，可以使用1-1000μg/ml。尤其优选的浓度是约30-500ρg/ml。
柠檬酸与锝-99m迅速络合，形成稳定的锝-99m-柠檬酸盐络合物。一旦在温和条件下与式Ⅰ化合物接触，锝-99m基本上定量地从柠檬酸盐络合物快速转移到式Ⅰ化合物的螯合单元上。柠檬酸(例如柠檬酸钠)的量可以从约0.5mg/ml至介质中可溶解的最大量。优选的柠檬酸用量范围从15至30μg/ml。
具有螯合单元的式Ⅰ化合物的量可以从0.001至约3mg/ml，优选为约0.017至约0.15mg/ml。最后，过锝酸盐形式的锝-99m的用量可以优选为约1-50mCi。每mg本发明化合物的mCi量优选为约30-150。
式Ⅰ化合物与金属离子-转移配体络合物之间的反应优选是在水溶液中进行的，并且式Ⅰ化合物在反应的pH下是稳定的。“稳定”指化合物仍是可溶性的，并保持对α-凝血酶的抑制活性。通常，反应的pH将从约5至9，优选的pH为约6-8。将锝-99m-柠檬酸盐络合物和式Ⅰ化合物恒温，温度优选为约20℃至约60℃，最优选为约20℃至约37℃，持续时间足以使金属离子从柠檬酸盐络合物转移到式Ⅰ化合物的螯合单元上。一般地，不到一小时即可足以在这些条件下完成转移反应。
其他本发明组合物包括In-111标记的本发明化合物。
本发明也包括可用于哺乳动物体内血栓成像的本发明化合物的组合物，该组合物是由与顺磁性原子络合的由式Ⅰ代表的化合物组成的。
优选的顺磁性原子是原子数为21至29、42、44和58至70的元素的二价或三价离子。适合的离子包括铬(Ⅲ)、锰(Ⅱ)、铁(Ⅲ)、铁(Ⅱ)、钴(Ⅱ)、镍(Ⅱ)、铜(Ⅱ)、镨(Ⅲ)、钕(Ⅲ)、钐(Ⅲ)和镱(Ⅲ)。由于磁矩非常强，钆(Ⅲ)、铽(Ⅲ)、镝(Ⅲ)、钬(Ⅲ)和铒(Ⅲ)是优选的。尤其优选的顺磁性原子是钆(Ⅲ)。
本发明组合物可以通过将式Ⅰ化合物与顺磁性原子混合加以制备。例如，将适合的顺磁性原子的金属氧化物或金属盐(例如硝酸盐、氯化物或硫酸盐)溶解或悬浮在由水和一种醇组成的介质中，醇例如甲醇、乙醇或异丙醇。将该混合物加入到等摩尔量式Ⅰ化合物在相似的含水介质中的溶液中，搅拌。反应混合物可以适当加热，直至反应完成。通过过滤可以分离所形成的不溶性组合物，通过蒸发溶剂可以分离可溶性组合物。如果螯合单元上的酸根仍然存在于本发明组合物中，那么可以加入无机或有机碱、甚至氨基酸，将酸性络合物转化为中性络合物，以促进同质组合物的分离或纯化。有机碱或碱性氨基酸可以用作中和剂，以及无机碱也是如此，例如钠、钾或锂的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐。
本发明也包括可用于哺乳动物体内血栓成像的诊断组合物，该组合物包含药学上可接受的载体和诊断学上有效量的得自式Ⅰ化合物的组合物。
每剂所需的“诊断学上有效量”的组合物将取决于给药途径、所治疗哺乳动物的类型和所考虑的具体哺乳动物的体格特征。这些因素及其与确定剂量之间的关系是医学诊断领域技术人员所熟知的。而且，可以调整诊断学上的有效量和给药方法，使其达到最佳疗效，不过也取决于诸多因素，例如体重、饮食、并行的药物治疗和医学领域技术人员将要考虑的其他因素。在任何方面，用于成像的剂量应当足以检测所针对血栓部位中的成像剂的存在。通常，放射成像要求由本发明药物组合物所提供的剂量为约5至20μCi，优选为约10μCi。磁共振成像要求所提供的剂量为约0.001至5mmol/kg、优选为约0.005至0.5mmol/kg与顺磁原子络合的式Ⅰ化合物。在两种情况下，本领域已知实际剂量将取决于血栓的位置。
用于体内的“药学上可接受的载体”是药学领域所熟知的，例如描述在Remington’s Pharmaceutical Sciences,Mack PublishingCo.(A.R.Gennaro edit.1985)中。本发明的药物组合物可以用药学上可接受的载体配制成用于注射给药的无菌溶液或悬浮液。特别是注射剂可以制备成常规剂型，要么是液体溶液或悬浮液、适合于在注射前溶解或悬浮在液体中的固体形式，要么是乳液。适合的赋形剂例如水、盐水、葡萄糖、甘露糖醇、乳糖、卵磷脂、白蛋白、谷氨酸钠、盐酸半胱氨酸等。另外，如果需要的话，可注射的药物组合物可以含有少量无毒的辅助物质，例如润湿剂、pH缓冲剂等。如果需要的话，可以使用促进吸收的制剂(例如脂质体)。
本发明也涵盖为贮存或给药而制备的诊断组合物。它们另外含有防腐剂、稳定剂和染剂。例如，作为防腐剂可以加入苯甲酸钠、山梨酸和对羟基苯甲酸的酯。出处同上，1449页。另外，可以使用抗氧化剂和悬浮剂。
本发明的体内成像方法也提供了若干优于以前的成像工艺的优点，这些成像工艺用于检测或监测血栓的存在、大小、消退或增加。特别是本发明所提供的化合物、组合物和诊断组合物已经被设计成与凝血酶极为紧密地结合，凝血酶是与血栓相关联的，从而减少由未结合的成像剂产生的循环放射性或顺磁性“背景”。而且，通过冠脉内注射本发明化合物、组合物或诊断组合物而进行的体内成像预期几乎是瞬时的，这是由于这些成像剂会立即饱和与血栓结合的凝血酶。
因此，本发明也包括用于哺乳动物体内血栓成像的方法，该方法包括下列步骤：(1)将诊断学上可接受的量的本发明化合物、组合物或诊断组合物对哺乳动物给药，和(2)检测血管内的血栓。
本文所用的术语“体内成像”指哺乳动物血栓的检测方法，以及监测哺乳动物血栓大小、位置和数量以及血栓溶解或生长的方法。
该方法在体内使用化合物、组合物或诊断组合物时，“给药”是通过肠胃外途径实现的，以全身或局部定向的方式均可。实现全身给药的方法是将本发明化合物、组合物或诊断组合物注射到适宜和可用的静脉或动脉内。这包括但不限于通过ankecubutal静脉给药。实现局部定向给药的方法是将本发明化合物、组合物或诊断组合物以接近血流的速度注射到被怀疑在远离注射部位含有血栓的静脉或动脉内。这包括但不限于直接注射到冠状动脉脉管系统内，使冠脉血栓成像，直接注射到颈动脉内，使脑脉管系统中的血栓成像，或者直接注射到足静脉内，使腿部深静脉血栓成像。
本发明组合物向血栓部位的释放方式也在术语“给药”所考虑的范围内。例如，可以将连接有螯合单元的由式Ⅰ代表的化合物注射到哺乳动物内，稍后注入放射性原子，从而在血栓部位体内形成包含与放射性原子络合的式Ⅰ化合物的组合物。或者，可以将包含与放射性原子络合的式Ⅰ化合物的组合物注射到哺乳动物内。
如前文所述，用在本发明方法中的化合物、组合物或诊断组合物的“诊断学上有效的量”将取决于给药途径、所治疗哺乳动物的类型和所治疗具体哺乳动物的体格特征。这些因素及其与确定剂量之间的关系是医学诊断领域技术人员所熟知的。在任何方面，用于体内成像的剂量应当足以检测所针对血栓部位中的成像剂的存在。通常，放射成像要求由本发明诊断组合物所提供的剂量为约5至20μCi，优选为约10μCi。磁共振成像要求由诊断组合物所提供的剂量为约0.001至5mmol/kg、优选为约0.005至0.5mmol/kg与顺磁原子络合的式Ⅰ化合物。在两种情况下，本领域已知实际剂量将取决于血栓的位置。
由于放射性或顺磁性原子在血栓部位的存在，使通过成像检测血栓成为可能。
与本发明组合物和诊断组合物相关的放射性原子优选利用一种能够检测γ放射的放射检测装置进行成像，例如γ照相机等。通常，放射成像照相机利用一种转换介质(其中高能γ射线被吸收，一旦恢复为轨道状态即替换发射光子的电子)、排列在空间检测腔中的光感测器(以测定所发射光子的位置)和用于分析腔内所检测的光子和产生图像的电路。
与本发明组合物和诊断组合物相关的顺磁性原子是在磁共振成像(MRI)系统中检测的。在这样的系统中，强磁场用于排列患者体内原子的核自旋向量。该磁场受到存在于血栓的顺磁性原子的干扰，当核恢复为它们的平衡排列时读取到患者的图像。
下列实施例阐述而非限制本发明的方法和组合物。不同条件和参数的其他适当修改和调整也是正常的，对本领域技术人员来说，显然也在本发明的精神和范围之内。
在以下的说明中，α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix表示α-氰基-4-羟基肉桂酸基质，Calcd.代表计算值，Found代表实测值。实施例1
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
Figure A9980727500661
a．   N-[2-(苄氧基羰基氨基)乙氧基]邻苯二甲酰亚胺
Figure A9980727500662
向N-(2-羟基乙基)氨基甲酸苄基酯(5.9g,30mmol)、N-羟基邻苯二甲酰亚胺(4.9g,30mmol)与三苯膦(7.9g,30mmol)的四氢呋喃(100ml)溶液中加入偶氮二甲酸二乙酯(5.2g,30mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜。加入乙酸乙酯(200ml)，用饱和NaHCO3(2×100ml)和盐水(100ml)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。蒸发滤液后，残余物用快速柱色谱法纯化(二氯甲烷至4％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液)，得到标题化合物，为白色固体(9.3g,91％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ7.84(m,2H),7.78(m,2H),7.37(m,5H),5.97(brs,1H),5.14(s,2H),4.27(t,J=4.9Hz,2H),3.51(q,J=5.2Hz,2H).
b．    2-(苄氧基羰基氨基)乙氧基胺
向前一步中制备的N-[2-(苄氧基羰基氨基)乙氧基]邻苯二甲酰亚胺(1.36g,4.0mmol)的乙醇(20ml)与四氢呋喃(20ml)溶液中加入40％甲胺(2.0ml,25mmol),在室温下搅拌1小时。蒸发溶剂后，使残余物通过硅胶(3∶1乙酸乙酯∶己烷至乙酸乙酯)，得到标题化合物，为白色固体(800mg,95％)。1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ7.36(m,5H),5.47(br s,2H),5.21(br s,1H),5.10(s,2H),3.72(t,J=5.0Hz,2H),3.44(q,J=5.0Hz,2H)。
c．    [N,N’-二(叔丁氧基羰基)]2-(苄氧基羰基氨基)乙氧基胍
向前一步中制备的2-(苄氧基羰基氨基)乙氧基胺(780mg,3.7mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(20ml)溶液中加入[N,N’-二(叔丁氧基羰基)]脒基吡唑(1.25g,4.0mmol)。混合物在室温下搅拌过夜，在高真空下蒸发溶剂。残余物用快速柱色谱法纯化(0-5％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液)，得到标题化合物，为无色的油(1.55g,93％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ9.08(s,1H),7.67(s,1H),7.33(m,5H),6.21(br s,1H),5.21(br s,1H),5.11(s,2H),4.12(t,J=4.8Hz,2H),3.54(q,J=4.9Hz,2H),1.49(s,9H),1.46(s,9H).
d．    [N,N’-二(叔丁氧基羰基)]2-氨基乙氧基胍
Figure A9980727500672
将前一步中制备的[N,N’-二(叔丁氧基羰基)]2-(苄氧基羰基氨基)乙氧基胍(730mg,1.5mmol)与10％碳上的钯(70mg)在乙醇(20ml)与四氢呋喃(20ml)中的混合物在氢(气囊)下氢化30分钟。通过硅藻土过滤除去催化剂，滤液在真空中浓缩。残余物在Waters Sep-Pak上纯化(10g,95∶5二氯甲烷∶用氨饱和的甲醇)，得到标题化合物，为无色的油(290mg,61％)。1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ9.08(br s,1H),4.08(t,J=5.2Hz,2H),2.99(q,J=5.1Hz,2H),1.50(s,9H),1.48(s,9H)。
e．    盐酸苄基-N-(1-氰基乙基)甘氨酸
Figure A9980727500673
在氩气下，向搅拌着的苄基甘氨酸游离碱(5.0g,30mmol)与乙醛(1.7ml,30mmol)的二氯甲烷(15ml)溶液中小心地加入三甲基氰基硅(TMSCN)(4.0ml,30mmol)。15小时后，在真空中除去挥发性组分，将残余物溶于乙酸乙酯(200ml)，用盐水(100ml)洗涤，干燥(Na2SO4)，蒸发得到油。将该油再次溶解在乙醚(30ml)和乙醇(30ml)中，滴加1M HCl的乙醚溶液(33ml)，得到标题化合物(6.60g,100％)，为不完全白色结晶性沉淀。1H-NMR(300MHz,CD3OD)δ7.31-7.48(m,5H),5.32(s,2H),4.68(q,J=7.0Hz,1H),4.22(s,2H),1.73(d,J=7.1Hz,3H)；CIMS m/z=192(M+H).Anal.Calcd.for C12H14N2O2.HCl:C,56.49；H,5.95；N,11.00.Found:C,56.32；H,5.88,N,10.89.
f．    1-苄氧基羰基甲基-3,5-二氯-6-甲基吡嗪酮
将搅拌着的草酰氯(5.3ml,60mmol)与前一步中制备的盐酸苄基-N-(1-氰基乙基)甘氨酸(3.82g,15mmol)在1,2-二氯苯(30ml)中的混合物加热至100℃过夜。在真空中蒸发溶剂，残余物用快速柱色谱法纯化(20-30％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到固体。加入10％乙酸乙酯的己烷溶液(100ml)，收集固体，得到标题化合物，为橙色结晶性固体(2.7g,55％)。1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ7.38(m,5H),5.24(s,2H),4.89(s,2H),2.34(S,3H)。
g．    3-(2-苯乙氨基)-5-氯-6-甲基-1-(苄氧基羰基甲基)-吡嗪酮
向搅拌着的前一步中制备的1-苄氧基羰基甲基-3,5-二氯-6-甲基吡嗪酮(1.31g,4.0mmol)的乙酸乙酯(10ml)溶液中加入苯乙胺(1.5ml,12mmol),所得混合物在氮下加热至回流。2小时后，反应混合物冷却，用二氯甲烷(100ml)稀释，用5％柠檬酸(2×50ml)、盐水(50ml)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤。在真空中蒸发滤液后，收集固体，用20％乙酸乙酯的己烷溶液洗涤，得到标题化合物，为结晶性固体(1.5g,91％)。1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ7.22-7.38(m,10H),6.11(t,J=5.8Hz,1H),5.21(s.2H),4.79(s,2H).3.68(q.J=7.0Hz,2H).2.93(t,J=7.0Hz,2H),2.22(s,3H)。
h．    3-(2-苯乙氨基)-6-甲基-1-羧甲基吡嗪酮和3-(2-苯乙氨基)-5-氯-6-甲基-1-羧甲基吡嗪酮的混合物
Figure A9980727500691
将前一步中制备的3-(2-苯乙氨基)-5-氯-6-甲基-1-(苄氧基羰基甲基)-吡嗪酮(412mg,1.0mmol)与碳上的钯(10％,100mg)在四氢呋喃(10ml)与乙醇(40ml)中的混合物在氢(气囊)下搅拌两天。反应物通过硅藻土过滤，玻璃原料用乙醇洗涤，滤液在真空中蒸发，得到3-(2-苯乙氨基)-6-甲基-1-羧甲基吡嗪酮和3-(2-苯乙氨基)-5-氯-6-甲基-1-羧甲基吡嗪酮的混合物，为浅红色固体(210mg)，直接用在下面的步骤中，无需进一步纯化。
i．    1-{N-[2-(N’,N”-双(叔丁氧基羰基)脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮和1-{N-[2-(N’,N”-双(叔丁氧基羰基)脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-5-氯-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮
向前一步中制备的3-(2-苯乙氨基)-6-甲基-1-羧甲基吡嗪酮和3-(2-苯乙氨基)-5-氯-6-甲基-1-羧甲基吡嗪酮的混合物(200mg)、实施例1步骤d中制备的[N,N’-二(叔丁氧基羰基)]2-氨基乙氧基胍(225mg,0.7mmol)与二异丙基乙胺(180μl,1.0mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10ml)溶液中加入Casto试剂(BOP)(442mg,1.0mmol)。混合物在室温下搅拌过夜，在高真空下除去溶剂，将残余物溶于二氯甲烷(100ml)，用10％柠檬酸(2×50ml)和盐水(50ml)洗涤，经Na2SO4干燥。在真空中蒸发溶剂后，残余物用柱色谱法纯化(2∶1至3∶1乙酸乙酯∶己烷)，得到1-{N-[2-(N’,N”-双(叔丁氧基羰基)脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-5-氯-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮，为无色泡沫(100mg,23％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3/CD3OD)δ8.42(t,J=4.8Hz,1H),7.26(m,5H),6.68(s,1H),4.75(s,2H),4.11(t,J=4.6Hz,2H),3.60(n,4H),2.91(m,2H),2.15(s,3H),1.52(s,9H),1.49(s,9H)。
也分离到1-{N-[2-(N’,N”-双(叔丁氧基羰基)脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮，为无色泡沫(130mg,32％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3/CD3OD)δ8,47(t,J=4.9Hz,1H),7.44-7.87(m,3H),7.25(m,5H),4.80(s,2H),4.11(m,2H),3.65(t,J=7.0Hz,2H),3.59(m,2H),2.93(t,J=7.1Hz,2H),2.28(s,3H),1.52(s,9H),1.48(s,9H).
j．    1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
Figure A9980727500711
将前一步中制备的1-{N-[2-(N’,N”-双(叔丁氧基羰基)脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮(120mg,0.2mmol)与三氟乙酸(2ml)在二氯甲烷(4ml)中的混合物在室温下搅拌1小时。在真空中蒸发溶剂后，残余物在WatersSep-Pak上纯化(5g,10％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到标题化合物，为白色固体(90mg,89％)。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.95(s,1H),8.44(t,J=5.6Hz,1H),7.73(br s,4H),7.20-7.30(m,6H),6.67(s,1H),4.61(s,2H),3.81(t,J=5.4Hz,2H),3.50(q,J=6.7Hz,2H),3.39(q,J=5.4Hz,2H).2.86(t,J=6.9Hz,2H),2.07(s,3H).Mass spectrum(MALDI-TOF,α-cyano-4-hydroxycinnamicacid matrix)Calcd.for C18H25N7O3:388.2(M+H),410.2(M+Na)；Found:388.3,410.4。
实施例2
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-5-氯-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
Figure A9980727500712
利用实施例1步骤j操作，从实施例1步骤i中制备的1-{N-[2-(N’,N”-双(叔丁氧基羰基)脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-5-氯-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮制备标题化合物。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.96(s,1H),8.46(br s,1H),7.73(br s,4H),7.42(t,J=5.3Hz,1H),7.18-7.33(m,5H),4.66(s,2H),3.81(br s,2H),3 49(m,2H),3.36(m,2H),2.86(t,J=7.2Hz,2H),2.18(s,3H).Mass spectrum(MALDI-TOF,α-cyano-4-hydroxycinnamic acidmatrix)Calcd.for C18H24ClN7O3:422.2(M+H),444.2(M+Na)；Found:422.1,444.0.
实施例3
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2,2-二苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
利用实施例1步骤g-j操作,从实施例1步骤f中制备的1-苄氧基羰基甲基-3,5-二氯-6-甲基吡嗪酮和2,2-二苯基乙胺制备标题化合物。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.89(br s,1H),8.42(t,J=5.5Hz,1H),7.70(br s,4H),7.17-7.31(m,10H),6.74(br s,1H),6.69(s,1H),4.57(s,2H),4.48(t,J=7.8Hz,2H),3.91(t,J=6.6Hz,2H),3.79(t,J=5.4Hz,2H),3.36(t,J=5.4Hz,2H),2.06(s,3H).Mass spectrum(MALDI-TOF,α-cyano-4-hydroxycinnamicacid matrix)Calcd.for C24H29N7O3:464.3(M+H),486.2(M+Na)；Found:464.3,486.3.
实施例4
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-5-氯-6-甲基-3-(2,2-二苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
Figure A9980727500722
利用实施例1步骤g-j操作,从实施例1步骤f中制备的1-苄氧基羰基甲基-3,5-二氯-6-甲基吡嗪酮和2,2-二苯基乙胺制备标题化合物。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.90(br s,1H),8.41(br s,1H),7.71(br s,4H),7.18-7.32(m,10H),4.63(s,2H),4.52(t,J=7.7Hz,2H),3.89(t,J=6.3Hz,2H),3.79(t,J=5.3Hz,2H),3.37(t,J=5.3Hz,2H),2.17(s,3H).Mass spectrum(MALDI-TOF,α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix)Calcd.for C24H28ClN7O3:498.2(M+H),520.2(M+Na)；Found:498.2,520.2.
实施例5
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-甲基苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
利用实施例1步骤g-j操作，从实施例1步骤f中制备的1-苄氧基羰基甲基-3,5-二氯-6-甲基吡嗪酮和4-甲基苯乙胺制备标题化合物。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.92(s,1H),8.44(t,J=5.6Hz.1H),7.71(br s,4H),7.11(s,4H),6.67(s,1H),4.61(s,2H),3.81(t,J=5.4Hz,2H),3.50(m,2H),3.38(m,2H),2.81(t,J=6.9Hz,2H),2.27(s,3H),2.07(s,3H).Mass spectrum(MALDI-TOF,α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix)Calcd.for C19H27N7O3:402.2(M+H),424.2(M+Na)；Found:402.1,424.2.
实施例6
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-甲氧基苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
Figure A9980727500732
利用实施例1步骤g-j操作,从实施例1步骤f中制备的1-苄氧基羰基甲基-3,5-二氯-6-甲基吡嗪酮和4-甲氧基苯乙胺制备标题化合物。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.88(s,1H),8.42(t,J=5.5Hz,1H),7.68(br s,4H),7.15(d,J=8.6Hz,2H),6.85(d,J=8.7Hz,2H),6.67(s,1H),4.61(s,2H),3,81(t,J=5.3Hz,2H),3.72(s,3H),3.50(m,2H),3.38(m,2H),2.79(t,J=6.9Hz,2H),2.07(s,3H).Mass spectrum(MALDI-TOF,α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix)Calcd.for C19H27N7O4:418.2(M+H),440.2(M+Na)；Found:418.3,440.4.
实施例7
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1-苯基环丁基)甲氨基-吡嗪酮三氟乙酸酯
a．    (1-苯基环丁基)甲胺
向1-苯基环丁烷甲腈(0.96g,6.09mmol)的无水四氢呋喃(40ml)溶液中加入1N氢化锂铝(LAH)的四氢呋喃溶液(12ml,12mmol)。在环境温度下搅拌2小时后，用水(10ml)缓慢抵消掉过量的LAH，另用四氢呋喃(20ml)稀释。然后使其与0.25N含水NaOH(5ml)在环境温度下反应20小时，过滤，滤液在真空中浓缩，残余物用快速柱色谱法纯化(10％甲醇的二氯甲烷溶液，用氨气饱和)，得到标题化合物，为黄色的油(0.52g,53％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.32(m,2H),7.19(m,1H),7.10(m,2H),2.93(s,2H),2.38-2.26(m,2H),2.1 8-2.01(m,3H),1.92-1.82(m,1H),1.14(bs,2H).
b．    3-(1-苯基环丁基)甲氨基-5-氯-6-甲基-1-(苄氧基羰基甲基)吡嗪酮
将前一步骤产物(0.52g,3.21mmol)与实施例1步骤f中制备的1-苄氧基羰基甲基-3,5-二氯-6-甲基吡嗪酮(0.36g,1.08mmol)的乙酸乙酯(15ml)溶液回流3小时，在真空中除去溶剂。将残余物溶于二氯甲烷，用10％含水柠檬酸和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。蒸发后的滤液用快速柱色谱法纯化(20％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到标题化合物，为黄色的油(0.35g,71％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.32(m,7H),7.17(m,3H),5.86(t,1H,J=5.5Hz),5.17(s,2H),4.73(s,2H),3.72(d,2H,J=5.7Hz),2.35(m.2H),2.22(m,2H),2.17(s,3H),1.89(m,1H).
c．    3-(1-苯基环丁基)甲氨基-6-甲基-1-羧甲基-吡嗪酮
将前一步骤产物(0.33g,0.74mmol)、10％碳上的钯(0)(0.13g)和固体氢氧化钾(0.2g,3.6mmol)溶于甲醇、水与四氢呋喃的1∶1∶1混合物(60ml)，通入氮并放置在吸气器压力下进行脱气，然后在环境温度和氢气囊下搅拌。24小时后，反应物通过硅藻土过滤，蒸发滤液，残余物用快速柱色谱法部分纯化(20％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到标题化合物(0.16g,65％)，为固体，使用时无需进一步纯化。
d．    1-{N-[2-(N’,N”-双{叔丁氧基羰基}脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1-苯基环丁基)甲氨基-吡嗪酮将前一步骤产物(0.16g,0.48mmol)、Casto试剂(0.24g,0.54mmol)和实施例1步骤d中制备的[N,N’-二(叔丁氧基羰基)]-2-氨基乙氧基胍(0.16g,0.52mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10ml)，与三乙胺(0.25ml,1.80mmol)在环境温度下反应。24小时后，在真空中除去溶剂，将残余物溶于二氯甲烷，溶液用10％含水柠檬酸、饱和NaHCO3和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。蒸发后的滤液用快速柱色谱法纯化(33％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液)，得到标题化合物，为澄清的固体(0.11g,37％)。1H
NMR(300MHz,CDCl3)δ9.15(s,1H),8.36(t,1H,J=5Hz),7.57(s,1H),7.32(m,2H),7.18(m,3H),6.66(s,1H),5.77(m,1H),4.72(s,2H),4.11(m,2H),3.71(d,2H,J=5.7Hz),3,60(dd,2H,J=8.8Hz,5.0Hz),2.36(m,2H),2.26(m,3H),2.12(s,3H),1.90(m,1H),1.51(s,9H),1.46(s,9H).Mass spectrum(MALDI-TOF,α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix)calcd.for C31H45N7O7:428.2(M-2Boc+H).Found:428.9.
e．    1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1-苯基环丁基)甲氨基-吡嗪酮三氟乙酸酯
将前一步骤产物(0.10g,0.17mmol)溶于二氯甲烷(5ml)，与三氟乙酸(2ml)在环境温度下反应。6小时后，在真空中除去挥发性组分，残余物在Waters Sep-Pak上纯化(梯度洗脱：10-20％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到标题化合物，为吸湿性浅黄色固体(0.10g,100％)。1HNMR(300MHz,CDCl3/CD3OD)δ7.33(m,2H),7.19(m,3H),6.56(d,1H,J=1.0Hz),4.65(s,2H),3.94(t,2H,J=5Hz),3.75(s,2H),3.48(t,2H,J=5Hz),2.43(m,2H),2.25(m,3H),2.12(s,3H),1.93(m,1H).Mass spectrum(MALDI-TOF,gentisic acid matrix)calcd.for C21H29N7O3:428.2(M+H),450.2(M+Na).Found:428.8,450.7.
实施例8
盐酸1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-[2-(1-萘)乙基]氨基-吡嗪酮
Figure A9980727500761
a．    2-(1-萘乙基)邻苯二甲酰亚胺
将1-萘乙醇(2.51g,14.6mmol)、三苯膦(4.57g,17.4mmol)与邻苯二甲酰亚胺(2.37g,16.1mmol)的四氢呋喃(120ml)溶液与偶氮二甲酸二乙酯(2.80ml,17.8mmol)在环境温度下反应2小时。蒸发后的产物用二乙醚洗涤，在真空干燥器中干燥过夜，得到标题化合物(4.34g,99％),为乳白色固体。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ8.31(d,1H,J=8.5Hz),7.86(m,3H),7.74(m,3H),7.60(ddd,1H,J=8.4Hz,6.9Hz,1.5Hz),7.50(ddd,1H,J=8.0Hz,6.9Hz,1.2Hz),7.41(m,2H),4.04(m,2H),3.44(m,2H).
b．    2-(1-萘)乙胺
将前一步骤产物(4.30g,14.3mmol)溶于甲醇(30ml)，与40％含水甲胺(20ml)在70℃下反应20小时。反应物在真空中浓缩，将残余物溶于二氯甲烷，所得溶液用10％含水HCl和水萃取。含水层用固体KOH碱化，所得溶液用二氯甲烷萃取。后者有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，滤液蒸发，得到标题化合物，为棕色的油(0.83g,34％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.06(m,1H),7.87(m,1H),7.74(d,1H,J=8.0Hz),7.50(m,2H),7.37(m,2H),3.23(t,2H,J=6.6Hz),3.11(t.2H,J=6.6Hz).
c．    3-[2-(1-萘)乙基]氨基-5-氯-6-甲基-1-(苄氧基羰基甲基)吡嗪酮
将前一步骤产物(0.82g,4.76mmol)、三乙胺(2.0ml,14mmol)与实施例1步骤f中制备的1-苄氧基羰基甲基-3,5-二氯-6-甲基吡嗪酮(1.05g,3.21mmol)的乙酸乙酯(80ml)溶液回流20小时。蒸发后，将残余物溶于二氯甲烷，用10％含水柠檬酸、饱和NaHCO3和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。滤液然后在真空中蒸发，得到标题化合物，为黄褐色固体(1.49g,68％)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ8.33(d,1H,J=8.6Hz),7.86(dd,1H,J=8Hz,1Hz),7.75(d,1H,J=7.8Hz),7.58(ddd,1H,J=8.4Hz,6.9Hz,1.5Hz),7.50(ddd,1H,J=8.0Hz,6.9Hz,1.2Hz),7.37(m,7H),6.26(t,1H,J=5.9Hz),5.22(s,2H),4.80(s,2H),3.78(m,2H),3.40(m,2H),2.24(s,3H).
d．    3-[2-(1-萘)乙基]氨基-6-甲基-1-羧甲基-吡嗪酮
向前一步骤产物(1.48g,3.20mmol)、10％碳上的钯(0)(500mg)与固体KOH(2.05g,36.5mmol)在2∶1∶1四氢呋喃/甲醇/水中的混合物中通入氮气，抽吸，在环境温度和氢(气囊)下剧烈搅拌。16小时后，反应物通过硅藻土过滤，玻璃原料用甲醇/水洗涤，蒸发滤液。残余物用10％含水HCl处理，冷却，过滤，沉淀用水和乙醚洗涤，在真空中干燥过夜，得到标题化合物(0.84g,78％)，为金黄色固体，经过NMR分析，它是5-氯与5-氢产物的混合物，用TLC不能分离。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.54(d,0.5H,J=8.3Hz),8.25(d,1H,J=8.2Hz),7.93(t,2H,J=7.1Hz),7.82(t,2H,J=8.6Hz),7.51(m,7H),6.75(s,1H),4.77(s,1H),4.74(s,2H),3.79(m,2H),3.56(m,1H).3.40(m,2H),3.31(m,1H),2.25(s,1.5H),2.17(s,3H).
e．    1-{N-[2-(N’,N”-双{叔丁氧基羰基}脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-[2-(1-萘)乙基]氨基-吡嗪酮
将前一步骤产物(0.84g,2.49mmol)、Casto试剂(1.15g,2.60mmol)和实施例1步骤d中制备的[N,N’-二(叔丁氧基羰基)]1-2-氨基乙氧基胍(0.91g,2.55mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(50ml)，在环境温度下用三乙胺(1.0ml,7.2mmol)处理。搅拌过夜后，反应物在真空中蒸发，残余物用快速柱色谱法纯化(乙酸乙酯)，得到标题化合物(0.79g,50％)，为浅橙色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.17(s,1H),8.41(m,1H),8.13(d,1H,J=8.4Hz),7.84(m,1H),7.73(dd,1H,J=7.5Hz,1.6Hz),7.58(m,1H),7.50(m,2H),7.37(m,3H),6.72(d,1H,J=0.9Hz),6.15(m,1H),4.77(s,2H),4.12(m,2H),3.76(m,2H),3.61(dd,2H,J=8.7Hz,5.1Hz),3.39(t,2H,J=7.3Hz),2.14(d,3H,J=0.7Hz),1.51(s,9H),1.47(s,9H).
f．    盐酸1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-[2-(1-萘)乙基]氨基-吡嗪酮
将前一步骤产物(0.79g,1.25mmol)溶于二氯甲烷(10ml)，与三氟乙酸(5ml)在环境温度下反应过夜。反应物在真空中浓缩，残余物用快速柱色谱法纯化(15％甲醇的二氯甲烷溶液，用氨气饱和)，蒸发后的柱部分用4N HCl的甲醇溶液处理，在高真空下浓缩，得到标题化合物(0.43g,73％)，为淡黄色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.1(s,1H),8.71(t,1H,J=5.3Hz), 8.26(d,1H,J=8.2Hz),7.94(d,1H,J=8.1Hz),7.83(d,1H,J=8.2Hz),7.78(bs,4H),7.56(m,3H),7.46(t,1H,J=7.5Hz),6.73(s,1H),4.69(s,2H),3.80(m,4H),3.42(m,4H),2.14(s,3H).Mass spectrum(LCMS,ESI pos.)calcd.forC22H27N7O3:438.2(M+H).Found:438.2.
实施例9
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-苯基-1-丁氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
Figure A9980727500791
以类似于实施例7的方式，从1-苯基-环丙烷甲腈制备标题化合物，为淡黄色固体，但是环丙烷环在催化氢化过程中被打开。
1HNMR (300MHz,CDCl3/CD3OD)δ7.24-7.07(m,5H),6.47(s,1H),3.81(t,2H,J=4.7Hz),3.62(dd,1H,J=13.5Hz,6.3Hz),3.42(dd,1H,J=13.6Hz,9.0Hz),3.35(t,2H,J=4.6Hz),2.73(m,1H),2.02(s,3H),1.72-1.44(m,2H),0.69(t,3H,J=7.3Hz).Mass spectrum(MALDI-TOF,gentisic acid matrix)calcd.for C20H29N7O3:416.2(M+H),438.2(M+Na).Found:416.4,438.4.
实施例10
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3,4-亚甲二氧基苯基]乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
Figure A9980727500792
以类似于实施例1的方式，从盐酸3,4-亚甲二氧基苯乙胺制备标题化合物，为淡黄色油。
1HNMR(300MHz,CDCl3/CD3OD)δ6.70(m,3H),6 63(s,1H),5.91(s,2H),4.67(s,2H),3.95(t,2H,J=4.8Hz),3.61(t,2H,J=7.3Hz),3.49(t,2H,J=4.7Hz),2.86(t,2H,J=7.3Hz),2.17(s,3H).Mass spectrum(MALDI-TOF,α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix)calcd.for C19H25N7O5:432.2(M+H),454.2(M+Na).Found:432.6,454.8.
实施例11
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2-吡啶基]乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
Figure A9980727500793
以类似于实施例1的方式，从2-(2-氨基乙基)吡啶制备标题化合物，为橙色的油。1HNMR(300MHz,CDCl3/CD3OD)δ8.46(d.1H,J=4.2Hz),7.74(t,1H,J=7Hz),7.34(d,1H,J=7.7Hz),7.25(dd,1H,J=7.1Hz,4.9Hz),6.71(s,1H),3.99(t,2H,J=4.5Hz),3.72(t,2H,J=6.7Hz),3.54(m.2H),3.11(t,2H,J=6.7Hz),2.18(s,3H).Massspectrum(MALDI-TOF,gentisic acid matrix)calcd.for C17H24N8O3:389.2(M+H),411.2(M+Na).Found:389.8,411.6.
实施例12
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2-甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
以类似于实施例7的方式,从2-甲基苯乙腈制备标题化合物，为淡橙色油。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.13(s,1H),8.48(t,1H,J=5.5Hz),7.83(bs,4H),7.12(m,4H),6.68(d,1H,J=1.0Hz),4.63(s,2H),3.82(t,2H,J=5.4Hz),3.47(m,2H),3.39(q,2H,J=5Hz),2.85(m,2H),2.31(s,3H),2.08(s,3H).Mass spectrum(LCMS,ESI pos.)calcd.for C19H27N7O3:402.2(M+H).Found:402.2.
实施例13
盐酸1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3-甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮
以类似于实施例7的方式，从3-甲基苯乙腈制备标题化合物，为淡黄色油。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.16(s,1H),8.74(t,1H,J=5.5Hz),7.80(bs,4H),7.19(t,1H,J=7.5Hz),7.16(s,1H),7.12(d.1H,J=7.5Hz),7.03(d,1H,J=7.4Hz),6.70(s,1H),4.67(s,2H),3.82(t,2H,J=5.2Hz),3.69(m,2H),3.39(q,2H,J=5.3Hz),2.89(t,2H,J=7.6Hz),2.28(s,3H),2.14(s,3H).Mass spectrum(LCMS,ESI pos.)calcd.forC19H27N7O3:402.2(M+H).Found:402.2.
实施例14
盐酸1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2-三氟甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮
以类似于实施例8的方式，从2-(三氟甲基)苯乙醇制备标题化合物，为淡黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.09(s,1H),8.66(t,1H,J=5.5Hz),7.76(bs,4H),7.70(m,2H),7.64(t,1H,J=7.5Hz),7.46(t,1H,J=7.6Hz),6.72(s,1H),4.67(s,2H),3.82(t,2H,J=5.3Hz),3.71(m,2H),3.39(q,2H,J=5.5Hz),3.11(t,2H,J=7.3Hz),2.13(s,3H).Mass spectrum(LCMS,ESI pos.)calcd for C19H24N7O3F3:456.2(M+H),Found:456.1.
实施例15
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3-三氟甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
以类似于实施例8的方式，从3-(三氟甲基)苯乙醇制备标题化合物，为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.01(s,1H),8.47(t,1H,J=5.6Hz),7.75(bs,4H),7.57(m,4H),6.68(s,1H),4.62(s,2H),3.81(t,2H,J=5.4Hz),3.57(q,2H,J=6.6Hz),3.37(m,2H),2.98(t.2H,J=7.3Hz),2.10(s,3H).Mass spectrum(LCMS,ESIpos.)calcd.for C19H24N7O3F3:456.2(M+H),Found:456.2.
实施例16
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[4-三氟甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
Figure A9980727500821
以类似于实施例7的方式，从4-(三氟甲基)苯基乙腈制备标题化合物，为黄褐色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.98(s,1H),8.45(t,1H,J=5.5Hz),7.74(bs,4H),7.66(d,2H,J=8.1Hz),7.47(d,2H,J=8.0Hz),6.68(s,1H),4.62(s,2H),3.81(t,2H,J=5.4Hz),3.38(q,2H,J=5.4Hz),2.97(t,2H,J=7Hz),2.08(s,3H).Massspectrum(LCMS,ESI pos.)calcd.for C19H24N7O3F3:456.2(M+H).Found:456.2.
实施例17
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3,5-二甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
Figure A9980727500822
以类似于实施例7的方式，从3,5-二甲基苯基乙腈制备标题化合物，为淡黄色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.88(s,1H),8.44(t,1H,J=5.7Hz),7.68(bs,4H),6.84(s,3H),6.68(s,1H),4.61(s,2H),3.81(t,2H,J=5.4Hz),2.77(t,2H,J=7.6Hz),2.24(s,6H),2.08(s,3H),Mass spectrum(LCMS,ESI pos.)calcd.for C20H29N7O3:416.2(M+H).Found:416.2.
实施例18
盐酸1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2,3-二氢化茚基]氨基)-吡嗪酮
Figure A9980727500831
以类似于实施例1的方式，从盐酸2-氨基-(1,2-二氢化茚)制备标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.95(s,1H),8.54(m,1H),7.69(bs,4H),7.17(m,4H),6.71(s,1H),4.64(s,2H),3.81(t,2H,J=5.3Hz),3.27(dd,2H,J=16Hz,7.6Hz),3.05(dd,2H,J=16Hz,6.7Hz),2.11(s,3H)Mass spectrum(LCMS,ESI pos.)calcd.forC19H25N7O3:400.2(M+H).Found:400.3.
实施例19
盐酸1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3,4-二氟苯基]乙氨基)-吡嗪酮
以类似于实施例7的方式，从3,4-二氟苯基乙腈制备标题化合物,为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.05(s,1H),8.63(t,1H,J=5.5Hz),7.74(bs,4H),7.46(t,1H,J=10Hz),7.36(dt,1H,J=10.9Hz,8.5Hz),7.15(m,1H),6.70(s,1H),4.66(s,2H),3.82(t,2H,J=5.4Hz),3.66(m,2H),3.38(m,2H),2.91(t,2H,J=7.4Hz),2.13(s,3H).Mass spectrum(LCMS,ESI pos.)calcd.for C18H23N7O3F2:424.2(M+H).Found:424.2.
实施例20
盐酸1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[5-(2,3-二氢化茚基)]乙氨基)-吡嗪酮
Figure A9980727500833
以类似于实施例7的方式，从5-(2,3-二氢化茚基)-乙腈(F.Lauria和W.Logemann，美国专利3452085)制备标题化合物，为淡黄色固体。1H NMR(400MHz.DMSO-d6)δ11.13(s,1H),8.71(t,1H,J=5.5Hz),7.78(bs,4H),7.19(s,1H).7.14(d,1H,J=7.7Hz),7.07(m,1H),6.70(s,1H),4.67(s,2H),3.82(t,2H,J=5.3Hz),3.65(m,2H),2.84(m,6H),2.13(s,3H),1.99(pentet,2H,J=7.4Hz)Mass spectrum(LCMS,ESI pos.)calcd.for C21H29N7O3:428.2(M+H).Found:428.3.
实施例21
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-氟苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸盐
Figure A9980727500841
利用实施例1步骤g-j操作，从实施例1步骤f中制备的1-苄氧基羰基甲基-3,5-二氯-6-甲基吡嗪酮和2-氟苯乙胺制备标题化合物。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.91(s,1H),8.43(t,J=5.6Hz,1H),7.70(br s,4H),7.30(m,2H),7.15(m,3H),6.66(s,1H),4.61(s,2H),3.81(t.J=5.4Hz,2H),3.37(m,4H),2.90(t,J=7.2Hz,2H),2.06(s,3H).Mass spectrum(MALDI-TOF,α-cyano4-hydroxycinnamic acid matrix)Calcd.for C18H24FN7O3:406.2(M+H),428.2(M+Na)；Found:406.3,428.3.
实施例22
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(3,4-二甲氧基苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸盐
Figure A9980727500842
利用实施例1步骤g-j操作，从实施例1步骤f中制备的1-苄氧基羰基甲基-3,5-二氯-6-甲基吡嗪酮和3,4-二甲氧基苯乙胺制备标题化合物。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.95(s,1H),8.44(t,J=5.6Hz,1H),7.72(brs,4H),6.85(t,J=8.1Hz,2H),6.73(d,J=8.1Hz,2H).6.67(s,1H),4.61(s,2H),3.81(t,J=5.3Hz,2H).3.73(s,3H),3.71(s,3H),3.39(m,4H),2.79(t,J=7.2Hz,2H),2.07(s,3H).Mass spectrum(MALDI-TOF.α-cyano-4-hydroxycinnamic acidmatrix)Calcd.for C20H29N7O5:448.2(M+H),470.2(M+Na)；Found:448.6,470.4.
实施例23
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-氟苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸盐
Figure A9980727500851
利用实施例1步骤g-j操作，从实施例1步骤f中制备的1-苄氧基羰基甲基-3,5-二氯-6-甲基吡嗪酮和4-氟苯乙胺制备标题化合物。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.97(s,1H),8.45(t,J=5.6Hz,1H),7.74(br s,4H),7.26(m,3H),7.15(t,J=8.8Hz,2H),6.68(s,1H),4.61(s,2H),3.81(t,J=5.4Hz,2H),3.39(m,4H),2.85(t,J=7.3Hz,2H),2.07(s,3H).Mass spectrum(MALDI-TOF,α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix)Calcd.for C18H24FN7O3:406.2(M+H),428.2(M+Na)；Found:406.6,428.5.
实施例24
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-乙基苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸盐
Figure A9980727500852
利用实施例7步骤b-e操作，从实施例1步骤f中制备的1-苄氧基羰基甲基-3,5-二氯-6-甲基吡嗪酮和4-乙基苯乙胺制备标题化合物。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.97(s,1H),8.44(t,J=5.6Hz,1H),7.73(br s,4H),7.18(m,1H),7.14(s,4H),6.67(s,1H),4.61(s,2H),3.81(t,J=5.2Hz,2H),3.39(m,4H),2.82(t,J=7.5Hz,2H),2.56(q,J=7.6Hz,2H),2.07(s,3H),1.16(t,J=7.5Hz,3H).Mass spectrum(MALDI-TOF,α-cyano-4-hydroxycirmamic acid matrix)CalcdforC20H29N7O3:416.2(M+H),438.2(M+Na)；Found:416.2,438.2.
实施例25
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-苯基丙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸盐
利用实施例7步骤b-e操作，从实施例1步骤f中制备的1-苄氧基羰基甲基-3,5-二氯-6-甲基吡嗪酮和1-甲基苯乙胺制备标题化合物。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.98(s,1H),8.43(t,J=5.6Hz.1H),7.74(br s,4H),7.28(m,5H),7.20(m,1H),6.66(s,1H),4.59(s,2H),3.80(t,J=5.4Hz,2H),3.44(t,J=6.5Hz,2H),3.38(t,J=5.4Hz,2H),3.13(q,J=7.1Hz,2H),2.06(s,3H),1.19(d,J=7.0Hz,3H).Mass spectrum(MALDI-TOF,(-cyano-4-hydroxycinnamic acidmatrix)Calcd.forC19H27N7O3:402.2(M+H),424.2(M+Na)；Found:402.4,424.5.
实施例26
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(3,4-二甲基苯乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸盐
利用实施例7步骤a-e操作，从3,4-二甲基苯乙腈制备标题化合物。
                  1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.10(s,1H),8.47(t,J=5.5Hz,1H),7.81(br s,4H),7.55(m,1H),7.03(t,J=7.9Hz,2H),6.94(d,J=7.8Hz,1H),6.68(s,1H),4.62(s,2H),3.82(t,J=5.3Hz,2H),3.48(m,2H),3.38(m,2H),2.78(t,J=7.5Hz,2H),2.19(s,3H),2.17(s,3H),2.08(s,3H).Massspectrum(MALDI-TOF,α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix)Calcd.forC20H29N7O3:416.2(M+H),438.2(M+Na)；Found:416.0,437.9.
实施例27
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-萘乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸盐
Figure A9980727500871
利用实施例8步骤a-f操作，从2-萘乙醇制备标题化合物。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.90(s,1H),8.43(t,J=5.5Hz,1H),7.87(m,3H),7.85(s,1H),7.69(br s,4H),7.47(m,3H),6.69(s,1H),4.61(s,2H),3.80(t,J=5.4Hz,2H),3.61(m,4H),3.04(t,J=7.2Hz,2H),2.07(s,3H).Mass spectrum(LCMS,ESI)Calcd.for C22H27N7O3:438.2(M+H)；Found:438.2.
实施例28
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2,2-二苯基丙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸盐
利用实施例1步骤g-j操作，从实施例1步骤f中制备的1-苄氧基羰基甲基-3,5-二氯-6-甲基吡嗪酮和盐酸2,2-二苯基丙胺制备标题化合物。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.89(s.1H),8.41(t.J=5.4Hz,1H),7.70(br s,4H),7.32(m,4H),7.26(m,6H),6.68(s,1H),5.75(m,1H),4.56(s,2H),4.00(d,J=5.0Hz,2H),3.79(t,J=5.4Hz,2H),3.36(m,2H),2.05(s,3H),1.67(s,3H).Mass spectrum(LCMS,ESI)Calcd.for C25H31N7O3:478.2(M+H)；Found:478.2.
实施例29
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-(3-吲哚基)-乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸盐
Figure A9980727500881
利用实施例1步骤g-j操作，从实施例1步骤f中制备的1-苄氧基羰基甲基-3,5-二氯-6-甲基吡嗪酮和色胺制备标题化合物。
1H-NMR(400MHz.DMSO-d6)δ10.98(s,1H),8.44(t,J=5.6Hz,1H),7.74(br s,4H),7.00-7.60(m,6H),6.69(s,1H),4.62(s,2H),3.81(t,J=5.3Hz,2H).3.39(m,4H),2.97(t,J=7.4Hz,2H),2.08(s,3H)Mass spectrum(LCMS,ESI)Calcd.for C24H26N8O3:427.2(M+H)；Found:427.3.
实施例30
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[1-(4-甲基萘)]乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
Figure A9980727500882
以类似于实施例7的方式，从1-(4-甲基萘)乙腈制备标题化合物,为白色固体。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.94(s,1H),8.45(t,J=5.6Hz,1H),8.33(d,J=7.2Hz,1H),8.04(d,J=7.1Hz,1H),7.72(br s,4H),7.58(m,2H),7.28(s,2H),6.73(s,1H),4.63(s,2H),3.82(t,J=5.4Hz,2H),3.57(m,2H),3.40(t,J=6.4Hz,2H),3.29(t,J=7.3Hz,2H),2.62(s,3H),2.09(s,3H).Mass spectrum(MALDI-TOF,α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix)Calcd.for C23H29N7O3:452.2(M+H),474.2(M+Na)；Found:452.2,474.3.
实施例31
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2,4-二氟苯基]乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸酯
Figure A9980727500891
以类似于实施例8的方式，从2,4-二氟苯基乙醇制备标题化合物，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.03(s,1H),8.46(t,J=5.6Hz,1H),7.77(br s,4H),7.34(q,J=7.8Hz,1H),7.18(t,J=9.5Hz,1H),7.03(t,J=8.0Hz,1H),6.67(s,1H),4.62(s,2H),3.81(t,J=5.4Hz,2H),3.51(m,2H),3.39(t,J=5.5Hz,2H),2.89(t,J=7.1Hz,2H),2.08(s,3H)Mass spectrum(MALDI-TOF,α-cyano-4-hydroxycinnamic acid matrix)Calcd.for C19H23F2N7O3:424.2(M+H),446.2(M+Na)；Found:424.3,446.5.
实施例32
盐酸1-{N-[2-(脒基-N’-甲基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[4-甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮
Figure A9980727500892
向实施例5产物(0.09g,0.19mmol)与碳酸氢钠(0.53g,6.30mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10ml)中的混合物中加入2ml 4NHCl的乙醇溶液，溶于甲醇/二氯甲烷，再次过滤。滤液然后在真空中浓缩，得到标题化合物，为黄色固体(0.08g,86％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.62(t,1H,J=5.3Hz),7.90(bs,3H),7.18(d,2H,J=7.9Hz),7.11(d,2H,J=7.9Hz),6.70(s,1H),4.64(s,2H),3.91(t,2H,J=5.2Hz),3.39(q,2H,J=5.2Hz),3.25(s,3H),2.86(t,2H,J=7.5Hz),2.27(s,3H),2.12(s,3H).Mass spectrum(LCMS,ESIpos.)calcd.for C20H29N7O3:416.2(M+H).Found:416.2；MS/MS found 374.1(M-C(=NH)NH2).
实施例33
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2,2-二氟-2-苯基乙氨基)-吡嗪酮三氟乙酸盐
Figure A9980727500901
利用实施例1步骤g-j操作，从实施例1步骤f中制备的1-苄氧基羰基甲基-3,5-二氯-6-甲基吡嗪酮和2,2-二氟-2-苯基乙胺制备标题化合物。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.89(s,1H),8.46(t,J=5.5Hz,1H),7.69(br s,4H),7.53(m,2H),7.50(m,3H),6.84(t,J=6.5Hz,1H),6.64(s,1H),4.62(s,2H),4.06(dt,J=6.5,14.4Hz,2H),3.81(t,J=5.4Hz,2H),3.38(m,2H),2.06(s,3H).Mass spectrum(LCMS,ESI)Calcd.for C18H23F2N7O3:424.3(M+H)；Found 424.4.
实施例34
片剂的制备
如下所述制备分别含有25.0、50.0和100.0mg下列活性化合物的片剂：
a．    1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-甲氧基苯乙氨基)-吡嗪酮；和
b．    1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2,2-二苯基乙氨基)-吡嗪酮。
含有25-100mg活性化合物的片剂量-mg活性化合物    25.0    50.0    100.00微晶纤维素    37.25    100.0    200.0改性玉米淀粉  37.25     4.25      8.5硬脂酸镁       0.50     0.75      1.5
将全部活性化合物、纤维素和一部分玉米淀粉混合，造粒得到10％玉米淀粉糊。所得颗粒过筛，干燥，与其余玉米淀粉和硬脂酸镁混合。然后将所得颗粒压制成片，每片分别含有25.0、50.0和100.0mg活性成分。
实施例35
静脉内溶液制剂
如下制备上述活性化合物的静脉内剂型：活性化合物       0.5-10.0mg柠檬酸钠         5-50mg柠檬酸           1-15mg氯化钠           1-8mg注射用水(USP)    适量，至1ml
按照上述用量，在室温下将活性化合物溶于预先制备的溶液，该溶液是氯化钠、柠檬酸与柠檬酸钠的注射用水溶液(美国药典/处方集1995(USP)第1636页，美国药典委员会Inc.出版，Maryland(1994))。
实施例36
纯化酶的体外抑制作用
试剂：所有缓冲盐从Sigma Chemical Company(St.Louis,MO)获得，并且是最高纯度。酶解物是N-苯甲酰-Phe-Val-Arg-对硝基N-酰苯胺(Sigma B7632)、盐酸N-苯甲酰-Ile-Glu-Gly-Arg-对硝基N-酰苯胺(Sigma B2291)、N-对甲苯磺酰-Gly-Pro-Lys-对硝基N-酰苯胺(Sigma T6140)、N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe-对硝基N-酰苯胺(Sigma S7388)和N-CBZ-Val-Gly-Arg-对硝基N-酰苯胺(Sigma C7271)，从Sigma获得。N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Arg-对硝基N-酰苯胺(BACHEM L-1720)和N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Val-对硝基N-酰苯胺(BACHEM L-1770)从BACHEM(King of Prussia,PA)获得。
人α-凝血酶、人Xa因子和人纤溶酶从Enzyme ResearchLaboratories(South Bend,Indiana)获得。牛α-胰凝乳蛋白酶(Sigma C4129)、牛胰蛋白酶(Sigma T8642)和人肾细胞尿激酶(Sigma U5004)从Sigma获得。人白细胞弹性蛋白酶从ElastinProducts(Pacific,MO)获得。
Ki测定：全部测定都是以供试化合物抑制酶催化的肽对硝基N-酰苯胺酶解物的水解作用的能力为基础的。在典型的Ki测定中，酶解物是在DMSO中制备的，并稀释在测定缓冲液中，后者由50mMHEPES、200mM NaCl组成，pH7.5。每种酶解物的最终浓度列在下面。一般来说，酶解物的浓度低于用实验方法测定的Km值。将供试化合物制成1.0mg/ml的DMSO溶液。制备8种最终浓度的DMSO稀释液，浓度跨度达200倍。在测定缓冲液中制备酶溶液，浓度列在下面。
在典型的Ki测定中，向96孔板的每孔中吸移280ml酶解物溶液、10ml供试化合物溶液，将板子在37℃分子装置(MolecularDevices)板读数器中热平衡＞15分钟。加入10ml等分试样的酶引发反应，在405nm下记录15分钟内的吸光度增加值。对应于不到10％总酶解物水解的数据用于计算。不含供试化合物的样本速度比率(吸光度的变化速率，为时间的函数)除以含有供试化合物的样本速度，以供试化合物浓度的函数作图。对数据进行线性回归处理，计算直线的斜率值。斜率的倒数是用实验方法测定的Ki值。
凝血酶：评价凝血酶活性的标准是水解酶解物N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Arg-对硝基N-酰苯胺的能力。在测定缓冲液中制备酶解物溶液，浓度为32mM(32mM＜＜Km=180mM)。最终的DMSO浓度是4.3％。将纯化的人α-凝血酶在测定缓冲液中稀释至浓度为15nM。最终的试剂浓度是：[凝血酶]=0.5nM，[酶解物N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Arg-对硝基N-酰苯胺]=32mM。
X因子[FXa]：评价FXa活性的标准是水解酶解物盐酸N-苯甲酰-Ile-Glu-Gly-Arg-对硝基N-酰苯胺的能力。在测定缓冲液中制备酶解物溶液，浓度为51mM(51mM＜＜Km=1.3mM)。最终的DMSO浓度是4.3％。将纯化的活化人X因子在测定缓冲液中稀释至浓度为300nM。最终的试剂浓度是：[FXa]=10nM，[盐酸N-苯甲酰-Ile-Glu-Gly-Arg-对硝基N-酰苯胺]=51mM。
纤溶酶：评价纤溶酶活性的标准是水解N-对甲苯磺酰-Gly-Pro-Lys-对硝基N-酰苯胺的能力。在测定缓冲液中制备酶解物溶液，浓度为37mM(37mM＜＜Km=243mM)。最终的DMSO浓度是4.3％。将纯化的人纤溶酶在测定缓冲液中稀释至浓度为240nM。最终的试剂浓度是：[纤溶酶]=8nM，[N-对甲苯磺酰-Gly-Pro-Lys-对硝基N-酰苯胺]=37mM。
胰凝乳蛋白酶：评价胰凝乳蛋白酶活性的标准是水解N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe-对硝基N-酰苯胺的能力。在测定缓冲液中制备酶解物溶液，浓度为14mM(14mM＜＜Km=62mM)。最终的DMSO浓度是4.3％。将纯化的牛胰凝乳蛋白酶在测定缓冲液中稀释至浓度为81nM。最终的试剂浓度是：[胰凝乳蛋白酶]=2.7nM，[N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe-对硝基N-酰苯胺]=14mM。
胰蛋白酶：评价胰蛋白酶活性的标准是水解N-苯甲酰-Phe-Val-Arg-对硝基N-酰苯胺的能力。在测定缓冲液中制备酶解物溶液，浓度为13mM(13mM＜＜Km=291mM)。最终的DMSO浓度是4.3％。将纯化的牛胰蛋白酶在测定缓冲液中稀释至浓度为120nM。最终的试剂浓度是：[胰蛋白酶]=4nM，[N-苯甲酰-Phe-Val-Arg-对硝基N-酰苯胺]=13mM。
弹性蛋白酶：评价弹性蛋白酶活性的标准是水解N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Val-对硝基N-酰苯胺的能力。在测定缓冲液中制备酶解物溶液，浓度为19mM(19mM＜＜Km=89mM)。最终的DMSO浓度是4.3％。将纯化的人白细胞弹性蛋白酶在测定缓冲液中稀释至浓度为750nM。最终的试剂浓度是：[弹性蛋白酶]=25nM，[N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Val-对硝基N-酰苯胺]=19mM。
尿激酶：评价尿激酶活性的标准是水解N-CBZ-Val-Gly-Arg-硝基N-酰苯胺的能力。在测定缓冲液中制备酶解物溶液，浓度100mM(100mM＜＜Km=1.2mM)。最终的DMSO浓度是4.3％。将纯化人肾尿激酶在测定缓冲液中稀释至浓度为1.2mM。最终的试剂浓是：[尿激酶]=40nM，[N-CBZ-Val-Gly-Arg-对硝基N-酰胺]=100mM。
实施例1至6化合物的结果显示在下表中。
表1
    测定Ki(μM)(凝血酶)
化合物(例号)     1     2     3     4     5     6
    Ki(凝血酶)     0.046     0.330     0.006     0.085     0.020  0.013
结果表明，本发明化合物是凝血酶的有效与高度选择性抑制剂。
通过对本发明的完整描述，对本领域普通技术人员来说不言而喻的是，在广泛与等价的条件、配方和其他参数的范围内，在不影响本发明或其任意实施方式的前提下，都可以实施本发明。本文所引用的全部专利和公开文献整体内容结合在此作为参考文献。

Claims (37)

1、式Ⅰ化合物：
Figure A9980727500021
或其溶剂化物、水合物或药学上可接受的盐；其中：
W是氢、R1、R1OCO、R1CO、R1(CH2)sNHCO或(R1)2CH(CH2)sNHCO，其中的s是0-4；
R1是
R2，
R2(CH2)tC(R12)2，其中的t是0-3，每个R12可以是相同或不同的，
(R2)(OR12)CH(CH2)p，其中的p是1-4，
(R2)2(OR12)C(CH2)p，其中的p是1-4，
R2C(R12)2(CH2)t，其中的t是0-3，每个R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以与相邻的C形成一个由C3-7环烷基代表的环，
R2CH2C(R12)2(CH2)q，其中的q是0-2，每个R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以与相邻的C形成一个由C3-7环烷基代表的环，
R2CF2C(R12)2(CH2)q，其中的q是0-2，每个R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以与相邻的C形成一个由C3-7环烷基代表的环，
(R2)2CH(CH2)r，其中的r是0-4，每个R2可以是相同或不同的，其中的(R2)2也可以与相邻的C形成一个由C3-7环烷基、C7-12二环烷基、C10-16三环烷基代表的环，或者形成一个5至7元单环或二环的杂环，该杂环可以是饱和或不饱和的，并含有一至三个选自N、O和S的杂原子，
R2O(CH2)p，其中的p是2-4，
(R2)2CF(CH2)r，其中的r是0-4，每个R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以与相邻的C形成一个由C3-7环烷基、C7-12二环烷基、C10-16三环烷基代表的环，或者形成一个5至7元单环或二环的杂环，该杂环可以是饱和或不饱和的，并含有一至三个选自N、O和S的杂原子，
Figure A9980727500031
Figure A9980727500032
其中的s是0或1，或R2CF2C(R12)2；R2是
苯基、萘基或联苯基，它们每个是未取代的或者被一个或多个C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤素、羟基、CF3、OCF3、COOH、CONH2或SO2NH2取代，
一个5至7元单环或9至10元二环的杂环或非杂环，该环可以是饱和或不饱和的，其中的杂环含有一至四个选自N、O和S的杂原子，该环是未取代的或者被卤素或羟基取代，
C1-7烷基，它是未取代的或者被一个或多个羟基、COOH、氨基、芳基、C3-7环烷基、CF3、N(CH3)2、-C1-3烷基芳基、杂芳基或杂环烷基取代，
CF3，
C3-7环烷基，它是未取代的或者被芳基取代，
C7-12二环烷基，或
C10-16三环烷基；
R3是
氢、烷基、环烷基、烯基、炔基、可选被取代的芳基、可选被取代的芳烷基、可选被取代的杂芳基、三氟甲基、卤素、羟基烷基、氰基、硝基、甲酰氨基、-CO2Rx、-CH2ORx或-ORx，
其中的Rx在每种情况中独立地是氢、烷基或环烷基之一，其中所述的烷基或环烷基可以可选地具有一个或多个不饱和度；
R4是氢或卤素；
R12是
氢，
苯基、萘基或联苯基，它们每个是未取代的或者被一个或多个C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤素、羟基、CF3、OCF3、COOH或CONH2取代，
一个5至7元单环或9至10元二环的杂环，该杂环可以是饱和或不饱和的，并含有一至四个选自N、O和S的杂原子，
C1-4烷基，它是未取代的或者被一个或多个羟基、COOH、氨基、芳基、杂芳基或杂环烷基取代，
CF3，
C3-7环烷基，
C7-12二环烷基，或
C10-16三环烷基；
R5是氢、C1-4烷基或C2-4烯基；
R6是氢、烷基、烯基、芳烷基、芳基、羟基烷基、氨基烷基、单烷基氨基(C2-10)烷基、二烷基氨基(C2-10)烷基或羧基烷基；
R7、R8、R9和R10独立地是氢、烷基、芳烷基、芳基、羟基烷基、氨基烷基、单烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基或羧基烷基；
或者R7和R8和相邻的C一起形成3至8元的环烷基，而R9和R10是如上所定义的；
或者R9和R10和相邻的C一起形成3至8元的环烷基，而R7和R8是如上所定义的；
或者R7和R9和相邻的C一起形成3至8元的环烷基，而R8和R10是如上所定义的；
X是氧、NR11或-CH=N-，
其中的R11是氢、烷基、环烷基或芳基，其中所述的烷基、环烷基或芳基可以可选地被氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、烷氧基、羟基、羧基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、芳基、杂芳基、酰氨基、氰基或三氟甲基取代；Ra、Rb和Rc独立地是氢、烷基、羟基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷氧基羰基、氰基或-CO2Rw，
其中的Rw是烷基、环烷基、苯基、苄基、
Figure A9980727500051
或
其中的Rd和Re独立地是氢、C1-6烷基、C2-6烯基或苯基，Rf是氢、C1-6烷基、C2-6烯基或苯基，Rg是氢、C1-6烷基、C2-6烯基或苯基，Rh是芳烷基或C1-6烷基；
n是0至8；
m是0至6。
2、权利要求1的化合物，其中
R3是氢、C1-4烷基、C3-7环烷基或CF3；
m是0至4；和
n是0至4。
3、权利要求2的化合物，其中R3是C1-4烷基。
4、权利要求2的化合物，其中R4是氢或卤素。
5、权利要求4的化合物，其中W是H或R1。
6、权利要求5的化合物，其中
R1是
R2，
R2(CH2)tC(R12)2，其中的t是0-3，每个R12可以是相同或不同的，
R2C(R12)2(CH2)t，其中的t是0-3，每个R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以与相邻的C形成一个由C3-7环烷基代表的环，
R2CH2C(R12)2(CH2)q，其中的q是0-2，每个R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以与相邻的C形成一个由C3-7环烷基代表的环，
(R2)CH(CH2)r，其中的r是0-4,R2可以是相同或不同的，其中的(R2)2也可以与相邻的C形成一个由C3-7环烷基、C7-12二环烷基、C10-16三环烷基代表的环，或者形成一个5至7元单环或二环的杂环，该杂环可以是饱和或不饱和的，并含有一至三个选自N、O和S的杂原子，
R2CF2C(R12)2(CH2)q，其中的q是0-2，每个R12可以是相同或不同的，其中的(R12)2也可以与相邻的C形成一个由C3-7环烷基代表的环，
R2O(CH2)p，其中的p是2-4；
R2是
苯基或萘基，它们每个是未取代的或者被一个或多个C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤素、羟基、CF3、OCF3或SO2NH2取代，
一个5至7元单环或9至10元二环的杂环或非杂环，该环可以是饱和或不饱和的，其中的杂环含有一至四个选自N、O和S的杂原子，该环是未取代的或者被卤素或羟基取代，
C1-7烷基，它是未取代的或者被一个或多个羟基、COOH、C3-7环烷基、CF3、N(CH3)2、-C1-3烷基芳基、杂芳基或杂环烷基取代，
CF3，或
C3-7环烷基，它是未取代的或者被芳基取代；
R12是
氢，或
C1-4烷基，它是未取代的或者被一个或多个羟基、COOH、氨基、芳基、杂芳基或杂环烷基取代。
7、权利要求6的化合物，其中
R3是H、CH3或CH2CH3；
R4是H或氯；
W是PhCH2CH2,(CH3)3C-,HOOCCH2,CF3CH2,(CH3)2N(CH2)2,PhCH2O(CH2)2,
PhCH(CH3),PhCH2CH(COOH),CH3(CH2)5,PhCH2,H,CH3(CH2)4,
CH3CH2CH(CH3)CH2,(Ph)2CHCH2,PhCH2CH(CH3),PhCH(CH3)CH2,
(CH3)2CH,PhCH(OH)CH2,PhC(CH3)2CH2,(Ph)2CHCH2，
或者W是
Figure A9980727500081
Figure A9980727500091
Figure A9980727500101
Figure A9980727500111
Figure A9980727500121
8、权利要求1-7中任一项的化合物，其中R5是氢。
9、权利要求1-7中任一项的化合物，其中X是NR11或-CH=N-，其中的R11是氢或C1-6烷基，该烷基可选被一至三个氨基、单烷基氨基、二烷基氨基、烷氧基、羟基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、烷氧羰基、苯基、氰基、三氟甲基、乙酰氨基、吡啶基、噻吩基、呋喃基、吡咯基或咪唑基取代。
10、权利要求1-7中任一项的化合物，其中X是氧。
11、权利要求1-7中任一项的化合物，其中R6是氢或C1-6烷基。
12、权利要求1-7中任一项的化合物，其中R7、R8、R9和R10独立地是氢、C1-6烷基、C6-10芳基C1-6烷基、C6-10芳基、C2-10羟基烷基或C2-7羧基烷基中之一。
13、权利要求12的化合物，其中R7、R8、R9和R10独立地是氢、甲基、乙基、丙基、正丁基、苄基、苯乙基、2-羟基乙基、3-羟基丙基、4-羟基丁基、2-羧基甲基、3-羧基乙基和4-羧基丙基中之一，或者R7与R8或R9与R10和相邻的C形成一个3至7元碳环。
14、权利要求1-7中任一项的化合物，其中Ra、Rb和Rc独立地是氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基或-CO2Rw中之一，其中的Rw在每种情况中是C1-4烷基、C4-7环烷基或苄氧基羰基。
15、权利要求14的化合物，其中Ra、Rb和Rc独立地是氢、甲基、乙基、丙基、正丁基、羟基、甲氧基、乙氧基、氰基、-CO2CH3、-CO2CH2CH3和-CO2CH2CH2CH3中之一。
16、权利要求15的化合物，其中Ra、Rb和Rc各自是氢。
17、权利要求14的化合物，其中Ra、Rb和Rc独立地是
Figure A9980727500141
或之一，其中的Rd-Rh是如权利要求1所定义的。
18、权利要求17的化合物，其中Rd、Re和Rg各自是氢；Rf是甲基；和Rh是苄基或叔丁基。
19、权利要求1的化合物，具有式Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ之一：
或其溶剂化物、水合物或药学上可接受的盐，其中n’和m’各自独立地是0-3,R3、R4、W、X、n和m是如权利要求1所定义的。
20、权利要求19的化合物，其中
W是PhCH2CH2,(CH3)3C,HOOCCH2,CF3CH2,(CH3)2N(CH2)2,PhCH2O(CH2)2,
PhCH(CH3),PhCH2CH(COOH),CH3(CH2)5,PhCH2,H,CH3(CH2)4,
CH3CH2CH(CH3)CH2,(Ph)2CHCH2,PhCH2CH(CH3),PhCH(CH3)CH2,
(CH3)2CH,PhCH(OH)CH,PhC(CH3)2CH2,(Ph)2CHCH2,或者W是
Figure A9980727500151
Figure A9980727500161
21、权利要求1的化合物，它是下列之一：
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2,2-二苯基乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-甲基苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-甲氧基苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1-苯基环丁基)甲氨基-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-[2-(1-萘)乙基]氨基-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基)氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-苯基-1-丁氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3,4-亚甲二氧基苯基)乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2-吡啶基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2-甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3-甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2-三氟甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3-三氟甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[4-三氟甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3,5-二甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-二氢茚氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[3,4-二氟苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[5-二氢茚基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-氟苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基1氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(3,4-二甲氧基苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-氟苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-乙基苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-苯基丙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(3,4-二甲基苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-萘乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2,2-二苯基丙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-(3-吲哚基)乙氨基-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[1-(4-甲基萘)]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[2,4-二氟苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基-N’-甲基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-[4-甲基苯基]乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-5-氯-6-甲基-3-(苯乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-5-氯-6-甲基-3-(2,2-二苯基乙氨基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基肼基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(苯乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基肼基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1-甲基-2-苯基乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基肼基)乙基]氨基}羰基甲基-6-乙基-3-(苯乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基肼基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(4-甲基苯基乙基)-吡嗪酮，
1-(N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1-甲基-2-(4-甲氨基-3-吡啶基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(1-甲基-2-(3-吡啶基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-环丙基-2-(3,4-二甲氧基苯基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-环丁基乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-环丁基-2,2-二氟乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-(3-氟苯基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2,2-二氟-2-苯基乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-苯基环丙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-(4-氯苯基)-2-环丙基乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-环丙基-2-(3-吡啶基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-苄基环丙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-环丙基-2-(3-氟苯基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2-环丙基-2-(3,4-二氟苯基)乙基)-吡嗪酮，
1-{N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]氨基}羰基甲基-6-甲基-3-(2,2-二氟-2-苯基乙氨基)-吡嗪酮，
及其药学上可接受的盐。
22、权利要求1-7中任一项的化合物，其中R1包含放射性原子。
23、权利要求22的化合物，其中所述的放射性原子是放射性碘原子，选自Ⅰ-125、Ⅰ-131和Ⅰ-123。
24、药物组合物，包含权利要求1的化合物和药学上可接受的载体。
25、药物组合物，包含权利要求19的化合物和药学上可接受的载体。
26、药物组合物，包含权利要求21的化合物和药学上可接受的载体。
27、抑制蛋白酶的方法，包括使该蛋白酶与权利要求1的化合物接触。
28、根据权利要求27的方法，其中所述的蛋白酶是嗜中性白细胞弹性蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、胰弹性蛋白酶、组织蛋白酶G、凝血酶、Xa因子、嗜热菌蛋白酶或胃蛋白酶。
29、根据权利要求27的方法，其中所述的蛋白酶是凝血酶。
30、减少表面血栓形成的方法，包括将权利要求1的化合物涂覆、包埋、吸附或共价结合在所述表面上。
31、治疗哺乳动物异常蛋白水解的方法，包括将权利要求1的化合物对该哺乳动物给药。
32、治疗哺乳动物血栓形成的方法，该血栓形成与局部缺血、病毒感染、中风、癌症、再狭窄、心肌梗塞、由创伤导致的播散性血管内凝血、冠状动脉旁路术、髋部复位、溶栓疗法、脓毒症、血液透析、成人呼吸窘迫综合征、类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎、硬结、转移、化疗过程中的凝固性过高、阿耳茨海默氏病、Down氏综合征、眼内纤维蛋白形成、伤口愈合或炎症有关，该方法包括将权利要求1的化合物对该哺乳动物给药。
33、减少哺乳动物血液凝固的方法，包括将权利要求1的化合物对该哺乳动物给药。
34、检测哺乳动物凝血酶的方法，包括：
(a)将权利要求22的化合物对该哺乳动物给药；和(b)检测所述化合物与所述凝血酶的结合。
35、根据权利要求30的方法，其中所述的表面是斯滕特氏印模。
36、药物剂型，包含约0.1至约500毫克权利要求1的化合物。
37、根据权利要求36的剂型，适合于肠胃外或口服给药。
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