CN1296059C - 草分支杆菌免疫液 - Google Patents
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Abstract
本发明是一种提高人体免疫力的草分支杆菌免疫液,其制备步骤包括:将选育的一株优良草分支杆菌(Mycobaterium phlei)进行培养和发酵,再通过匀质及灭菌、包装工序制成。草分支杆菌,在种子罐中的培养基配方是(重量%)蔗糖1.5~2.8、玉米浆0.4~0.8、磷酸氢二铵0.15~0.4、磷酸氢二钾0.05~0.1、酵母膏0.1~0.35、水余量,pH值为7.0;在发酵罐中的培养基配方是(重量%)蔗糖2~3、蛋白胨0.5~0.8、磷酸氢二铵0.15~0.4、磷酸氢二钾0.05~0.1、水余量,pH值为7.0。本免疫液可制成治疗皮肤病和其它疾病等针剂或胶囊药品。本发明工艺简单,产品无毒副作用、可促进肌体吸收和免疫力提高,具有防病、抗癌的效果。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学工程领域,特别是一种提高人体免疫力的草分支杆菌免疫液(麦可芙莱免疫液)。麦可芙莱由拉丁文Mycobaterium phlei翻译而来,它是草分支杆菌学名的译音。本专利用的微生物(株)sq-1,即草分支杆菌(Mycobaterium phlei),由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏,保臧日期是2003年4月1日,保藏号是CGMCC NO.0916。
背景技术
众所周知,在许多感染性疾病治疗过程中细胞的免疫起着重要作用,而在一些亚健康和已发病的个体中,由于免疫功能低下,使得纯粹的化学药物预防与治疗效果不佳。20世纪末,人们发现分支杆菌胞壁酰二肽(MDP)具有很强的免疫治疗作用,草分支杆多糖MPS(阿拉伯糖半乳糖聚多糖)在免疫调节、促进造血系统、抑止肿瘤和病毒复制方面有很大效果,并能修饰受损细胞。近年来,对去甲基化胞嘧啶及以鸟嘌呤为核心的寡聚脱氧核苷酸序列CpG的强佐剂作用引起广泛的关注。经免疫学等实验证明:草分支杆菌菌株的发酵制品可显著提高小白鼠脾淋巴细胞的转化,增强小鼠巨噬细胞和NK的数量和功能,促进肿瘤坏死因子(TNF)和白细胞介素II(IL-2)的分泌;明显增强二硝基氟酚诱导的小鼠迟发型变态反应和小鼠的碳廓清能力,显著提高血清中溶血素的含量。因此,国内外学者极力关注并认同免疫治疗的概念,从而促使卡介菌多糖,核酸、分支杆菌菌苗注射液用于膀胱癌、哮喘、结核等疑难病症的免疫治疗的热潮。在中医现代化理论的启迪下,生态治疗也悄然生起。
尽管中国专利“生态平衡营养精活素及其生产方法”(专利申请号98113617.6,公开号CN1207416A),在调节肌体的生理机制作用和提高肌体免疫力方面作出了有益的尝试,但是,由于所采用的技术不成熟,其产品中不含有或含有极少量的草分支杆菌有效成份,所以达不到该专利文献所述的发明目的和效果。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是:将微生物菌株草分支杆菌,通过发酵工程、遗传工程加之精湛的食品工艺技术,制成一种含有人体所需的胡萝卜素、黄酮和VB、VC、VE等多种维生素,以及人体必需的各种氨基酸、微量元素,尤其是还含有具有特殊免疫功能的胞壁酰二肽多糖等多种成份的麦可芙莱免疫液。该免疫液工艺简单,其产品能够有效地起到调节肌体的生理机制作用,以提高肌体免疫力,达到抗肿瘤、抗病毒等疾病的目的。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下:
其制备步骤包括:采用遗传工程方法,选育一株优良的微生物株sq-1,即保减号是CGMCC NO.0916的草分支杆菌(Mycobaterium phlei),将其置于种子罐中进行培养;在发酵罐中进行培养和发酵,获得含有胡萝卜素、黄酮多种维生素和胞壁酰二肽多糖的生物制品;再通过匀质及灭菌、工序,制成麦可芙莱免疫液产品。其中,在种子罐中,草分支杆菌的培养基配方是(重量%):蔗糖1.5~2.8,玉米浆0.4~0.8,磷酸氢二铵0.15~0.4,磷酸氢二钾0.05~0.1,酵母膏0.1~0.35,水余量,PH值为7.0。在发酵罐中草分支杆菌的培养基配方是(重量%):蔗糖2~3,蛋白胨0.5~0.8,磷酸氢二铵0.15~0.4,磷酸氢二钾0.05~0.1,水余量,PH值为7.0。
本发明试图从微生物草分支杆菌发酵产生多种营养元素,通过生态治疗来提高人们的健康水平,因而有如下优点:
其一.通过上述多种成份的协同作用,大大促进肌体对于其吸收利用率,并增强生理活性。油脂抗氧化实验证明:VC和黄酮混合使用比单独使用其抗氧化能力增加十倍以上。
其二.本免疫液含有分支杆菌胞壁酰二肽多糖MDP,它是胞壁中最小的免疫活性单位,而阿拉伯糖半乳糖聚多糖是免疫抗原,非常有效果地促进体内细胞活性因子的生成与释放,如:肿瘤坏死因子、干扰素、白细胞介素等的生成,明显提高肝匀浆中SOD酶活性,减少血清中LPO的含量;激活巨噬细胞和NK细胞大大提高肌体的免疫力,显著延长一次性较大计量辐照小鼠的生存期和存活率,且白细胞计数也明显高于对照组。
其三.起到了防病、抗癌的效果:对于疱疹病毒有明显抑制作用;对肠胃功能紊乱和溃疡、糖尿病、哮喘都有明显效果;甚至对于多种癌症也有不同程度的缓解和治愈作用。由放化疗引起的白细胞减少的患者,服用此生物制品,20ml×2/天或1克/天(粉剂)经过半个月以后,白细胞由2000上升到6000,对早期骨癌和胃癌都有治愈作用,乃至晚期肝、肺癌也有延缓50%的生命期的病例。
其四.将VC、VE、胡萝卜素、黄酮四大抗氧化体系集中在一个系统中,从而有效地避免了自由基和单态氧的毒害。
其五.本产品中的多种有效活性因子以微量或超微量的状态存在,不仅效果好,而且无任何毒副作用。
其六.工艺简单,操作方便。
附图说明
附图是本发明的工艺流程方框示意图。
具体实施方式
一.麦可芙莱免疫液的制备
包括:采用遗传工程方法,选育一株优良的微生物(株)sq-1,即保藏号是CGMCCNO.0916的草分支杆菌(Mycobaterium phlei),将其置于种子罐中进行培养;在发酵罐中进行培养和发酵,获得含有胡萝卜素、黄酮多种维生素和胞壁酰二肽多糖的生物制品;再通过匀质及灭菌、工序,制成麦可芙莱免疫液产品。
在种子罐中,草分支杆菌的培养基配方是(重量%):蔗糖1.5~2.8,玉米浆0.4~0.8,磷酸氢二铵0.15~0.4,磷酸氢二钾0.05~0.1,酵母膏0.1~0.35,水余量,PH值为7.0。在发酵罐中草分支杆菌的培养基配方是(重量%):蔗糖2~3,蛋白胨0.5~0.8,磷酸氢二铵0.15~0.4,磷酸氢二钾0.05~0.1,水余量,PH值为7.0。
上述生物制品的粉碎,可由高压均质机进行高压气流切割。高压均质机采用DenmarkAPV公司(丹麦铝制设备与容器有限公司)生产的产品。
下面结合附图对麦可芙莱免疫液制备的工艺作进一步说明。
1.种子培养:采用遗传工程培养草分支杆菌菌株,将其镜检和抽样化验,从中选育一株优良的微生物(株)sq-1,即草分支杆菌(Mycobaterium phlei)CGMCC NO.0916。
2.配料:按表一、表二所列原料配方,在无菌空气、蒸气和消泡剂条件下,配出种子罐、发酵罐中所用的培养基。其中,要采用经过水净化设备处理的水。种子罐、发酵罐发酵时,应保持在无菌空气、冷却水和蒸气条件下。
3.种子:将混合的原料连同所培养的草分支杆菌种子液一起放入种子罐中进行培养。工艺条件是:温度28~30℃,时间15~20小时,PH值为7.0。
4.发酵:将所选育的草分支杆菌菌株放入发酵罐中进行培养和发酵。工艺条件是:温度28~30℃,至少经过40小时的通气培养,PH值为7.0。
上述工序3、4中的制品,在流入下道工序前,应将其镜检和抽样化验。
5.匀质:将发酵罐的出品,由高压均质机进行高压气流切割,得纳米级匀浆制品。
6.无菌分装:将制品放入通过洗瓶、灭菌后的瓶中。
7.包装:包括贴签、盒装、外包装工序。
8.经检验,成品入库或出厂。
二.用麦可芙莱免疫液制成治疗皮肤病的药品
先将上述麦可芙莱免疫液的匀浆制品干燥,再用食用油浸提至少1小时,而制成治疗疱疹和皮肤损伤等外用药。
三.用麦可芙莱免疫液制成治疗胃溃疡、糖尿病、哮喘和多种癌症等疾病的药品,可以是针剂或胶囊等剂型。
四.附表
1.培养基配方
表一.在种子罐中的草分支杆菌培养基配方(重量%)
表二.在发酵罐中,草分支杆菌的培养基配方(重量%)
2.小鼠饮用麦可芙莱免疫液后的实验数据
表三.显著增强小鼠CONA诱导的脾淋巴细胞增殖能力(OD值)
表四.显著增强小鼠对DNFB诱发DTH反应的左右耳重量差(mg)
表五.明显升高血清溶血素(抗体积数)
表六.明显增强小鼠巨啮细胞吞啮功能
(1)吞啮百分率
(2)吞啮指数
表七.显著增强小鼠碳廓清功能(吞啮指数)
表八.显著增加小鼠血清及1%肝匀浆SOD酶活性(Nu/me)
(1)血清指标
(2)1%肝匀浆SOD酶活性(Nu/me)
表九.显著减少小鼠LPO含量
(1)血清(nmol)
(2)1%肝匀浆(MDA/me)
表十.抗辐射功能
用60Coγ射线一次性全身均匀辐照(30天)
(1)存活天数
由上表可知,对照组与实验组的存活率(%)分别是60、100。
(2)受照24天后白血球计数(×109个/L)
Claims (7)
1.草分支杆菌免疫液,其特征在于其制备步骤包括:采用遗传工程方法,选育一株微生物株sq-1,即保藏号是CGMCC NO.0916的草分支杆菌(Mycobaterium phlei),将其置于种子罐中进行培养;在发酵罐中进行培养和发酵,获得含有胡萝卜素、黄酮多种维生素和胞壁酰二肽多糖的生物制品;再通过匀质及灭菌、工序,制成草分支杆菌产品,
在种子罐中,按重量百分比计,草分支杆菌的培养基配方是:蔗糖1.5~2.8,玉米浆0.4~0.8,磷酸氢二铵0.15~0.4,磷酸氢二钾0.05~0.1,酵母膏0.1~0.35,水余量,PH值为7.0,
在发酵罐中,按重量百分比计,草分支杆菌的培养基配方是:蔗糖2~3,蛋白胨0.5~0.8,磷酸氢二铵0.15~0.4,磷酸氢二钾0.05~0.1,水余量,PH值为7.0。
2.根据权利要求1所述的草分支杆菌免疫液,其特征在于:在种子罐中进行培养15~20小时。
3.根据权利要求1所述的草分支杆菌免疫液,其特征在于:在发酵罐中至少经过40小时的通气培养。
4.根据权利要求1所述的草分支杆菌免疫液,其特征在于生物制品的匀质,由高压均质机进行高压气流切割。
5.根据权利要求4所述的草分支杆菌免疫液,其特征在于采用丹麦铝制设备与容器有限公司的高压均质机。
6.用权利要求1所述的草分支杆菌免疫液制作的治疗皮肤病的药品,其特征在于:先将生物制品进行匀质,得草分支杆菌免疫液的匀浆制品,经干燥,再用食用油浸提至少1小时,而成治疗疱疹和皮肤损伤的药品。
7.用权利要求1所述的草分支杆菌免疫液制作的治疗疾病的药品,其特征在于:药品剂型为针剂或胶囊。
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