CN1127917C - 一种延缓衰老的功能性营养保健品 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种延缓衰老的功能性营养保健品，它是由天然冬虫夏草或其分离菌株通过深层发酵培养得到人工冬虫夏草菌丝体粉与绞股兰粉经科学加工精制而成，兼备天然冬虫夏草和绞股兰的特点和生理活性成份。本营养保健品具有延缓衰老及对化学性肝损伤有保护作用的功能，并可补充机体有关营养素，改善新陈代谢、调节生理平衡，增强免疫能力，对人体具有良好的保健作用。
Description
本发明涉及一种营养保健品，特别是涉及一种延缓衰老的功能性营养保健品及其制造方法。
随着人类社会的进步与发展，生活水平不断提高，以及社会老龄化，健康长寿是人们的共同愿望，尤其步入老龄后，人们的体质随着年龄的增长，生理机能的衰退而逐渐虚弱。过去传统方式常采用人参、燕窝之类名贵滋补中药，起到一定作用，收到一定效果；但受到资源限制，价格昂贵，又没有从科学药理研究出发；探索提高免疫能力，增强体质，延缓衰老的各种原因和因素，从而提出延缓衰老的途径，进行科学配方。
中国专利公开号CN1081895A公开一种冬虫夏草发酵菌丝体口服液，主要用于慢性乙型肝炎，艾滋病治疗。青海中药厂以冬虫夏草、人参、鹿茸等昂贵药品精制而成的虫草精的营养口服液，用作强身滋补品，难以普遍应用。
本发明目的在于发明人经过长期对营养保健品的药补研究，利用现代生物医药最新技术与中草药珍稀滋补品相结合，克服传统滋补方式及中草药资源紧缺昂贵的问题提供一种延缓衰老的功能性营养保健品。
本发明提供一种延缓衰老的功能性营养保健品，基本上由60-90％(重量)冬虫夏草和10-40％(重量)绞股兰组成；优选为70-85％(重量)冬虫夏草和15-30％(重量)绞股兰；更优选为80％(重量)冬虫夏草和20％(重量)绞股兰。
按照本发明提供的延缓衰老的功能性营养保健品中，所述冬虫夏草(简称(虫草)是指天然野生冬虫夏草(简称天然虫草)或由天然野生冬虫夏草分离菌株经人工深度培养而得到的冬虫夏草菌丝体(简称人工虫草菌丝体)。所述天然野生冬虫夏草可采用任何地区采集的野生冬虫夏草，例如四川、青海、云南、西藏等地产的，优选为云南及青海产的冬虫夏草。所述人工虫草菌丝体，是由天然野生冬虫夏草分离的菌株经人工多级深度培养而得到的冬虫夏草菌丝体。目前市场上有多种人工虫草菌株出售，本发明优选选用由上海农科院食用菌研究所提供的，编号为001虫草菌株(见上海市农科院食用菌研究所菌种保藏中心的统一编号)等，它是由云南冬虫夏草重要产区地德庆地区高海拔草地上采集分离培养的冬虫夏草菌株。
001号冬虫夏草菌株系天然野生冬虫夏草的无性阶段，鉴定为顶头孢霉，可能是一个变体。
菌株形态：
(1)在马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基上，25℃培养时菌丝生长良好，7天后形成分生孢子，菌落呈绒毛状或棉絮状。气生菌丝常形成束状，菌落白色，反面微黄色，分生孢子粳直立，不分枝，无隔，基部较粗，末端渐变细，孢子在分生孢子粳末端聚集成头状，包含有5-10个分生孢子，分生孢子呈园形或长园形，壁光滑透明。
(2)001号虫草菌株的干菌丝中甘露醇含量很高，这一特征与天然虫草一致；其氨基酸含量，紫外、红外吸收光谱都与天然虫草接近，间接证明001号菌株系天然虫草的无性世代。
(3)最适温度为20-25℃。
(4)最适PH为5.5-6.5。
(5)001号虫草菌株生长较快，发酵得率较高，适于工业生产。
干人工冬虫夏草菌丝体收率2.68％左右，其干菌丝体中含甘露醇7.14％，含胱氨酸等18种氨基酸，还含有脲嘧啶、虫草素C3′-脱氧腺苷、虫草酸、腺嘌呤、D-甘露糖醇、有机酸、粗蛋白、粗纤维、脂肪及多种人体所需元素等。
冬虫夏草在中药典中指出具有补虚损、益精气、止血化痰之功效，现代临床医学及药理研究表明人工虫草菌丝体与天然虫草腺苷成份接近，氨基酸、麦角甾醇比天然虫草高出1倍，微量元素两者相似，D--甘露糖醇低30％，具有天然虫草的特性及生理活性特性。所以人工虫草菌丝体与天然野生虫草一样，经药理研究证明具有明显增强单核巨细胞吞噬活性，显著抑制单胺氧化酶的活性，保护细胞膜减少脂质过氧化作用；调节体液和细胞免疫功能水平以及调节蛋白质、核酸及能量代谢，增加抗体抵抗力，改善机体功能，起到滋补强壮作用，从而延缓衰老。
此外，近来对人工虫草菌丝体进行大量动物试验和临床疗效观察，证明人工虫草菌丝体具有耐缺氧，增加心肌血量，降低血清胆固醇和脂蛋白，对老年人的动脉硬化、冠心病等有扶正固本的治疗作用。
天然野生冬虫夏草或人工冬虫夏草菌丝体在延缓衰老功能性保健品中用量一般为60-90％(wt)，优选为70-85％(wt)，最优选为80％(wt)。
所述绞股兰又名七叶胆，为葫芦科绞股兰属多年生草质藤本植物，生长在世界各国，中国品种多、资源丰富，根据中国药典记载其味苦、性寒，具有益气健脾，养心安神，固表敛汗，补肾温阳，清热解毒止咳祛痰功效；近代医学研究表明其成份中含有丰富的皂甙达80余种，与人参皂甙有类似结构，其中6种与人参皂甙相同，例如绞股兰皂甙3，4，8，12与人参皂甙R6、Rd、F2在化学结构上完全相同，其总皂甙含量为人参总皂甙含量的3倍，还含有多种人体必需的氨基酸、微量元素及维生素、黄酮生物碱、有机酸、多糖等有效活性物质。药理研究表明，绞股兰皂甙与人参皂甙一样是一种较好免疫调节剂，具有抗氧化自由基和脂质过氧化，能显著提高超氧化物歧化酶对超氧自由基的清除，调节肌体免疫功能，改善机体代谢，保护细胞膜的正常功能；经动物试验表明能促进生长发育，预防早衰，延缓衰老效果明显；以及还具有预防心血管疾病，降血脂抗动脉硬化抑制血小板凝集，抗血栓形成，降低心、肝、脑、脂质过氧化物含量，保护这些脏器细胞免受损伤，药理活性明显。
所述绞股兰经洗净、晒干，磨成粉末使用，在本发明营养保健品中用量一般10-40％(wt)，优选为15-30％(wt)，最优选为20％(wt)。
本发明将冬虫夏草和绞股兰都有调节机体的免疫功能，提高巨噬细胞和网状内皮细胞的吞噬能力，改善机体代谢，降低脂质过氧化，保护细胞生物膜的完整性，减少自由基对机体的损害，维护心、脑、肝、肾等重要器官的正常功能；在延缓衰老，保肝的保健功能，有较显著的药理活性的二种组份有机结合；以天然冬虫夏草或人工冬虫夏草菌丝体精粉为主，辅以绞股兰总皂甙粉，使本发明的延缓衰老的功能性营养保健品兼备二者组份的特点和功能，充分发挥更能较全面体现出本发明的营养保健品的营养价值和保健功能。本发明的营养保健品形式可以为片剂或胶囊，优选为胶囊剂型。本发明提供的营养保健品的制造方法以天然冬虫夏草或人工冬虫夏草菌丝体不同分为下列二种制造方法。
一将天然冬虫夏草及绞股兰分别经精选、洗净、烘干、粉碎成天然冬虫夏草精粉和绞股兰粉，按上述两组份重量百分配比混合均匀成粉料，后填装胶囊或制成片剂，经照射灭菌后得成品。
二以人工冬虫夏草菌丝体为原料的营养保健品的制造方法
1人工冬虫夏草菌丝体的生产
①斜面培养菌种
冬虫夏草菌株：001号冬虫夏草菌株，
培养基：
蚕蛹2.5％(重量)，蔗糖3.5％(重量)，酵母粉0.5％(重量)，磷酸二氢钾0.1％(重量)，硫酸镁0.1％(重量)，氯化钙0.1％(重量)
接PDA培养基斜面每支母种0.5CM，25℃培养5-7天，至斜面长满白色菌丝。
②一级摇瓶种子
培养基：蔗糖3％(重量)，蚕蛹2％(重量)，酵母粉0.5％(重量)，磷酸二氢钾0.1％(重量)，硫酸镁0.05％(重量)，氯化钙0.1％(重量)，
接种：每瓶200毫升培养基接步骤1中斜面培养菌种2cm2，
培养：25℃放置48h，上摇床200转/分培养48h，直至菌液浓厚，无异味，无杂菌终止。
③二级摇瓶种子
培养基：蔗糖3％(重量)，蚕蛹2％(重量)，酵母粉0.5％(重量)磷酸二氢钾0.1％(重量)，硫酸镁0.05％(重量)，氯化钙0.1％(重量)，
接种：将检查合格的步骤2的一级菌液在无菌情况下倒入二级培养基中，
培养：25℃上摇床200转/分振荡48h，直至菌液浓厚，无异味，无杂菌为止。
④种子发酵罐：
培养基：蚕蛹2.5％(重量)，蔗糖3.5％(重量)，酵母粉0.5％(重量)，磷酸二氢钾0.1％(重量)，硫酸镁0.05％(重量)，氯化钙0.1％(重量)，121℃灭菌30分钟，然后降温25℃。
接种：用无菌方法接入步骤③二级摇瓶种子，接种量为5％(重量)。
培养：条件为温度25℃，转速180转/分，通气量为1∶1V/Vmin，罐压4.9×104pa左右，发酵时间为36-48h，直至菌液浓厚，无杂菌生长为止。
⑤发酵罐培养：
培养基：蚕蛹2.5％(重量)，蔗糖3.5％(重量)，酵母粉0.5％(重量)，磷酸二氢钾0.1％(重量)，硫酸镁0.05％(重量)，121℃灭菌30分钟，然后降温25℃，
接种：以无菌方法移入步骤④种子罐的菌种，
培养：条件25℃，转速180转/分，通气量可为0.5～1∶1V/Vmin，发酵时间32h，视菌丝生长良好，无杂菌，发酵液浓厚，含有大量菌球，发酵液PH5-6，将发酵罐升温至100℃，保持15分钟终止发酵。
⑥将发酵液输入胶体磨研磨，细度1.0um，然后在60℃温度下浓缩，再喷雾干燥成粉剂。
2、将步骤1得到的人工冬虫夏草菌丝体精粉和绞股兰粉，按上述重量百分配比混合均匀，填装胶囊或制成片剂，再经照射灭菌成成品。
产品是淡棕色褐色的固体粉未，均匀、分散，无结块，具有特有的气味和滋味、无异味。其理化指标为：
根据检测，该产品含有总皂甙(mg/100g)≥200.0，腺甙(mg/100g)≥18.0，甘露醇(g/100g)≥0.3和丰富蛋白质(≥30％)，无机盐与微量元素，如钙、磷、铁、锰、锌、硒、维生素B1、B2、C、E及机体必需的氨基酸营养成份。实验表明，本品具有延缓衰老，对化学性肝损伤有保护作用的功能，并可补充机体有关营养素，改善新陈代谢，调节生理平衡，对人体具有良好的保健作用。
本发明将用下列实施例进一步说明本发明，但本发明并不限於下列实施例。
实施例1-2将天然采集的冬虫夏草与绞股兰分别经精选、洗净、烘干、磨碎成精粉，按下列表1重量百分比，进行充分混合均匀，装填制成胶囊，再经照射灭菌成成品
实施例3-41、人工冬虫夏草菌丝 体粉制造。
| 实施例号 | 天然冬虫夏草精粉 | 人工冬虫夏草菌丝体粒粉 | 绞股兰粉 |
| 1 | 70克 | 30克 | |
| 2 | 80克 | 20克 | |
| 3 | 70克 | 30克 | |
| 4 | 80克 | 20克 |
①斜面培养菌种
冬虫夏草菌株：001号冬虫夏草菌株，
培养基：
蚕蛹2.5％(重量)，蔗糖3.5％(重量)，酵母粉0.5％(重量)，磷酸二氢钾0.1％(重量)，硫酸镁0.1％(重量)，氯化钙0.1％(重量)
接PDA培养基斜面每支母种0.5CM，25℃培养5-7天，至斜面长满白色菌丝。
②一级摇瓶种子
培养基：蔗糖3％(重量)，蚕蛹2％(重量)，酵母粉0.5％(重量)，磷酸二氢钾0.1％(重量)，硫酸镁0.05％(重量)，氯化钙0.1％(重量)，
接种：每瓶200毫升培养基接步骤1中斜面培养菌种2cm2，
培养：25℃放置48h，上摇床200转/分培养48h，直至菌液浓厚，无异味，无杂菌终止。
③二级摇瓶种子
培养基：蔗糖3％(重量)，蚕蛹2％(重量)，酵母粉0.5％(重量)，磷酸二氢钾0.1％(重量)，硫酸镁0.05％(重量)，氯化钙0.1％(重量)，
接种：将检查合格的步骤2的一级菌液在无菌情况下倒入二级培养基中，
培养：25℃上摇床200转/分振荡48h，直至菌液浓厚，无异味，无杂菌为止。
④种子发酵罐：
培养基：蚕蛹2.5％(重量)，蔗糖3.5％(重量)，酵母粉0.5％(重量)，磷酸二氢钾0.1％(重量)，硫酸镁0.05％(重量)，氯化钙0.1％(重量)，121℃灭菌30分钟，然后降温25℃。
接种：用无菌方法接入步骤③二级摇瓶种子，接种量为5％(重量)。
培养：条件为温度25℃，转速180转/分，通气量为1∶1V/Vmin，罐压4.9×104p左右，发酵时间为36-48h，直至菌液浓厚，无杂菌生长为止。
⑤发酵罐培养：
培养基：蚕蛹2.5％(重量)，蔗糖3.5％(重量)，酵母粉0.5％(重量)，磷酸二氢钾0.1％(重量)，硫酸镁0.05％(重量)，121℃灭菌30分钟，然后降温25℃，
接种：以无菌方法移入步骤④种子罐的菌种，
培养：条件25℃，转速180转/分，通气量可为0.5～1∶1V/Vmin，发酵时间32h，视菌丝生长良好，无杂菌，发酵液浓厚，含有大量菌球，发酵液PH5-6，将发酵罐升温至100℃，保持15分钟终止发酵。
⑥将发酵液输入胶体磨研磨，细度1.0um，然后在60℃温度下浓缩，再喷雾干燥成粉剂。
将步骤1制造得到的人工冬虫夏草菌丝体粉与绞股兰粉，按表1中所列重量充分混合均匀，装填制成胶囊，再经照射灭菌后成成品。
经北京联合大学应用文理学院保健检测中心二个检验报告结果与判定为：
经口给予不同剂量的本发明营养保健胶囊40天后，与空白对照组相比，低剂量组(0.25g/kg.bw)心肌脂褐素含量降低了7.4％(P＜0.05).高剂量组(1.5g/kg.bw)小鼠肌脂褐素含量降低了12.1％(P＜0.01)，GSH-PX活力提高12.6％(P＜0.05)。
中剂量组(添加1％受试物)雄性果蝇平均寿命提高11.3％(P＜0.05)，雌性果蝇平均寿命提高9.6％(P＜0.05)。高剂量组(添加5％受试物)雄性果蝇平均寿命提高18.2％(P＜0.001)，雌性果蝇平均寿命提高19.0％(P＜0.001)。
因此，根据《保健食品的功能学评价程序和检测方法》判定高剂量胶囊具有延缓衰老功能。
经口给予小鼠不同剂量的胶囊30天，灌胃CCI4损伤肝脏后测定生化指标表明：与CCI4对照组相比，低剂量(0.25mg/kg.bw)可显著降低血清谷丙转氨酶活力(P＜0.05)33.9％和谷草转氨酶活力42.4％(P＜0.001)。中剂量(0.5mg/kg.bw)可降低血清谷丙转氨酶活力33.1％(P＜0.05)和谷草转氨酶活力26.5％(P＜0.01)。高剂量(1.5mg/kg.bw)可降低血清谷丙转氨酶活力45.3％(P＜0.01)和谷草转氨酶活力38.1％(P＜0.001)。病理检查结果显示：用CCI4损伤肝脏后，各剂量组小鼠的肝组织病理改变与CCI4的对照组相比均有明显减轻。因此，判定胶囊具有预防化学性肝损伤作用。
经北京市卫生防疫站食品科经理化、微生物检验，所有指标均符合国家有关食品卫生标准和保健食品通用卫生要求，产品质量稳定，保质期为二年。检验结果如下。
| 酵母数(cfu/ml.g) | ＜5 | ＜5 | ＜5 |
| 霉菌数(cfu/ml.g) | ＜5 | ＜5 | ＜5 |
| 砷(mg/kg) | ＜0.3 | ＜0.3 | ＜0.3 |
| 铅(mg/kg) | ＜0.5 | ＜0.5 | ＜0.5 |
| 锌(mg/100g) | 23.02 | 22.83 | 22.39 |
| 灰份(％) | 2.4 | 2.5 | 2.5 |
| 水份(％) | 6.9 | 6.9 | 6.9 |
| 腺苷(mg/g) | 187.18 | 196.20 | 182.17 |
| 甘露醇(％) | 0.31 | 0.29 | 0.34 |
| 总皂甙(mg/g) | 2.76 | 3.04 | 2.11 |
| 铜(mg/kg) | 10.08 | 9.89 | 10.05 |
| 镁(mg/100g) | 6.70 | 6.91 | 6.88 |
| 钙(mg/100g) | 304.55 | 303.92 | 307.99 |
| 硒(mg/100g) | 10.94 | 12.30 | 10.44 |
| 六六六(mg/kg) | ＜0.10 | ＜0.10 | ＜0.10 |
| DDT(mg/kg) | ＜0.10 | ＜0.10 | ＜0.10 |
| 乐果(mg/kg) | 未检出 | 未检出 | 未检出 |
| 对硫磷(mg/kg) | 未检出 | 未检出 | 未检出 |
| 马拉硫磷(mg/kg) | 未检出 | 未检出 | 未检出 |
| DDV(mg/kg) | 未检出 | 未检出 | 未检出 |
| 氨基酸含量(mg/100g) | |||
| 天门冬氨酸 | 203.66 | 216.22 | 200.28 |
| 谷氨酸 | 224.39 | 231.56 | 240.23 |
| 丝氨酸 | 159.76 | 149.32 | 157.66 |
| 甘氨酸 | 114.63 | 116.58 | 120.65 |
| 组氨酸 | 296.59 | 240.30 | 242.43 |
| 精氨酸 | 265.85 | 261.42 | 259.78 |
| 苏氨酸 | 181.71 | 174.23 | 188.78 |
| 丙氨酸 | 135.37 | 119.78 | 125.63 |
| 脯氨酸 | 175.61 | 181.35 | 176.77 |
| 酪氨酸 | 275.61 | 264.25 | 285.32 |
| 缬氨酸 | 178.05 | 180.91 | 184.26 |
| 蛋氨酸 | 226.83 | 240.26 | 230.21 |
| 半胱氨酸 | 92.68 | 89.24 | 98.68 |
| 异亮氨酸 | 200.00 | 212.39 | 208.92 |
| 亮氨酸 | 186.78 | 188.45 | 179.72 |
| 苯丙氨酸 | 251.22 | 244.59 | 255.26 |
| 赖氨酸 | 237.17 | 226.76 | 230.21 |
| 蛋白质(％) | 42.5 | 42.0 | 42.4 |
Claims (7)
1、一种延缓衰老的功能性营养保健品，其特征在于基本上由下列组份及重量百分比组成：冬虫夏草60-90％，绞股兰10-40％。
2、根据权利要求1的营养保健品，其特征在于所述组份及其重量百分比为冬虫夏草70-85％，绞股兰15-30％。
3、根据权利要求1的营养保健品，其特征在于所述组份及其重量百分比为冬虫夏草80％，绞股兰20％。
4、根据权利要求1-3任一项的营养保健品，其特征在于所述冬虫夏草为天然冬虫夏草。
5、根据权利要求1-3任一项的营养保健品，其特征在于所述冬虫夏草为人工冬虫夏草菌丝体。
6、一种延缓衰老的功能性营养保健品的制造方法，该方法将天然冬虫夏草及绞股兰分别经精选、洗净、凉干、粉碎成冬虫夏草精粉和绞股兰粉按权利要求1-3任一项的重量百分比填充胶囊或制成片剂，经照射灭菌后得成品。
7、一种延缓衰老的功能性营养保健品的制造方法，该方法包括下列步骤：
(1)人工冬虫夏草菌丝体的生产
①斜面培养菌种
冬虫夏草菌株：001号冬虫夏草菌株，
培养基：
蚕蛹2.5％(重量)，蔗糖3.5％(重量)，酵母粉0.5％(重量)，磷酸二氢钾0.1％(重量)，硫酸镁0.1％(重量)，氯化钙0.1％(重量)
接PDA培养基斜面每支母种0.5CM，25℃培养5-7天，至斜面长满白色菌丝；
②一级摇瓶种子
培养基：蔗糖3％(重量)，蚕蛹2％(重量)，酵母粉0.5％(重量)，磷酸二氢钾0.1％(重量)，硫酸镁0.05％(重量)，氯化钙0.1％(重量)，
接种：每瓶200毫升培养基接步骤1中斜面培养菌种2cm2，
培养：25℃放置48h，上摇床200转/分培养48h，直至菌液浓厚，无异味，无杂菌终止；
③二级摇瓶种子
培养基：蔗糖3％(重量)，蚕蛹2％(重量)，酵母粉0.5％(重量)，磷酸二氢钾0.1％(重量)，硫酸镁0.05％(重量)，氯化钙0.1％(重量)，
接种：将检查合格的步骤②的一级菌液在无菌情况下倒入二级培养基中，
培养：25℃上摇床200转/分振荡48h，直至菌液浓厚，无异味，无杂菌为止；
④种子发酵罐：
培养基：蚕蛹2.5％(重量)，蔗糖3.5％(重量)，酵母粉0.5％(重量)，磷酸二氢钾0.1％(重量)，硫酸镁0.05％(重量)，氯化钙0.1％(重量)，121℃灭菌30分钟，然后降温25℃，
接种：用无菌方法接入步骤3二级摇瓶种子，接种量为5％(重量)；
培养：条件为温度25℃，转速180转/分，通气量为1∶1V/Vmin，罐压4.9×104pa左右，发酵时间为36-48h，直至菌液浓厚，无杂菌生长为止；
⑤发酵罐培养：
培养基：蚕蛹2.5％(重量)，蔗糖3.5％(重量)，酵母粉0.5％(重量)，磷酸二氢钾0.1％(重量)，硫酸镁0.05％(重量)，121℃灭菌30分钟，然后降温25℃，
接种：以无菌方法移入步骤④种子罐的菌种，
培养：条件25℃，转速180转/分，通气量可为0.5～1∶1V/Vmin，发酵时间32h，视菌丝生长良好，无杂菌，发酵液浓厚，含有大量菌球，发酵液PH5-6，将发酵罐升温至100℃，保持15分钟终止发酵；
⑥将发酵液输入胶体磨研磨，细度1.0um，然后在60℃温度下浓缩，再喷雾干燥成粉剂；
(2)将步骤(1)得到的人工冬虫夏草菌丝体精粉和绞股兰粉，按上述权利要求1-3任一项的重量百分配比充分混合均匀，填装胶囊或制成片剂，再经照射灭菌成产品。
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