CN104055184B - 一种中华被毛孢降血脂型保健饮料及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种中华被毛孢降血脂型保健饮料及其制备方法。该饮料中活性成分为未过滤或过滤后的中华被毛孢发酵液；发酵液的制备方法包括：将由女贞子10-40重量份、桑叶10-40重量份、绞股蓝10-40重量份和淫羊藿10-40重量份组成的中药材经水溶液提取，得到中药复合水提液；采用中药复合水提液、甲鱼油、香榧油、葡萄糖和水配制发酵培养基；将中华被毛孢菌种接入发酵培养基中，经液体发酵，得到中华被毛孢发酵液。该饮料中含有利用甲鱼油、香榧油及女贞子、桑叶、绞股蓝和淫羊藿等天然保健成分搭配进行发酵的中华被毛孢发酵液，具有显著的降血脂功能。所述饮料的制备方法包括：将原料混合均匀，经过滤和杀菌，即得；操作简单，易于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及营养保健饮料，具体涉及一种中华被毛孢降血脂型保健饮料及其制备方法，属于保健食品领域。
背景技术
中华被毛孢(Hirsutella sinensis)是从天然虫草中分离得到的无性型虫草菌株。由于野生冬虫夏草的稀缺性，现在人们大多采用人工方法分离和培育菌种来获得冬虫夏草的替代品。虽然人工培育的虫草菌丝体和天然野生的虫草菌丝体在化学成分和药效上并不完全一样，但是其活性成分仍然具有很高的药效及经济价值。如中华被毛孢是以生物工程发酵而来，其作为冬虫夏草替代品，以单方或复方的形式广泛用于治疗多种疾病，是食药两用的保健品。
甲鱼(Amyda Sincnsis)是我国传统的上等中药材，具有极高的药用价值，是滋阴补肾的佳品，有滋阴壮阳，软坚散结、化瘀和延年益寿的功能。甲鱼油来源于甲鱼的脂肪油，它富含ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3polyunsaturated fatty acids，ω-3PUFAs)，尤其是其中的二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)，被称为天然的血液净化剂，具有减少血栓形成、预防中风、预防动脉硬化及心肌梗死、降血压、减缓发炎、减轻并改善类风湿性关节炎、改善并减轻结肠性结肠炎等作用。当人体内有足够ω-3多不饱和脂肪酸时，可以预防肿瘤、智力障碍、记忆力下降以及自身免疫性疾病，并有效预防心血管疾病并提高运动的耐受力。
榧子(Semen Torreyae)又称细榧、真榧、香榧子等，为红豆杉科(Taxaceae)榧属(Torreya)植物榧树Torreyagrandis Fort.的种子。其种仁含油量约546.2g/kg，不仅富含多不饱和脂肪酸如油酸、亚油酸等，还有多种维生素、氨基酸、微量矿物质、挥发油及鞣质等营养成分。香榧子是世界珍贵干果之一，有调节血脂、促进血液循环，调节老化内分泌系统的疗效。陈振德等已证实香榧子油对动脉粥样硬化形成有明显的预防作用(陈振德,陈志良,侯连兵等,香榧子油对实验性动脉粥样硬化形成的影响[J].中药材,2000)。
女贞子为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实。女贞子含有齐墩果酸、熊果酸、甘露醇、葡萄糖、棕榈酸、硬脂酸、油酸及亚麻酸等多种活性物质，始载于《神农本草经》，具有补益肝肾、清热明目的功效，用于肝肾阴虚、头昏目眩、耳鸣、腰膝疲软、须发早白等症。现代药理研究表明女贞子具有保肝利胆、抗肝纤维化、抗菌消炎、抗肿瘤、降血脂、降血糖、降低血液黏度、增强机体免疫调节等多种药理活性。
桑叶(mulberry leaves)为桑树植物的叶子，桑叶中主要含有黄酮、蛋白质、γ-氨基丁酸、桑叶多糖、生物碱、植物甾醇、矿物质等多种营养成分，并且具有降血糖，降血脂，降胆固醇、抗血栓形成和抗动脉粥样硬化、抗炎、抗衰老、抗病毒、抗肿瘤、清热解毒等多种药理作用，桑叶已被卫生部正式归入“既是食品又是药品”之列。
绞股蓝(Gynostemmapentaphyllum)为葫芦科绞股蓝属多年生草质藤本植物，别名七叶胆、甘茶蔓、七叶参等。绞股蓝主要有效成份是绞股蓝皂甙、绞股蓝糖甙(多糖)、水溶性氨基酸、黄酮类、多种维生素、微量元素、矿物质等，可降血脂，调血压、防治血栓，防治心血管疾患，调节血糖，促睡眠，缓衰老，防抗癌，提高免疫力，调节人体生理机能。
淫羊藿(Epimediumbrevicornu Maxim.)为小檗科淫羊藿属植物，别名三枝九叶草、仙灵脾、牛角花、三叉风、羊角风、三角莲等，是我国国家卫生部批准的可用于保健食品的中草药之一，主要含黄酮类化合物、多糖、木脂素、生物碱、挥发油及一些微量元素等，味辛甘性温，归肝肾经，因其具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的功效，常用作滋补类中草药，主治肾阳虚衰、阳痿遗精、筋骨痿软、风湿痹痛等症。
中国专利ZL201110369312.6公开了一种发酵蛹虫草复合饮料的制备方法，以蛹虫草发酵液、红枣、枸杞、金银花的浸提液为主要原料制成饮料，营养丰富、具有提高人体免疫力、增强体力、养肝明目、补脾胃、养血安神、补肾益精、抗衰老、抗突变、抗肿瘤等辅助功效。中国专利ZL200910230033.4公开了一种北虫草红茶菌活性保健饮料及其制备方法，该饮料以北虫草子实体、茶叶和白糖的提取液及蜂蜜、甜蜜素为培养液，接入红茶菌进行发酵而制得，对于慢性胃炎、高血压、糖尿病、恶性肿瘤等多种疾病的辅助康复效果显著。向培养基中添加适量中药成分或油脂类物质，可显著促进食药用真菌的生长或提高活性代谢产物的产量(李羿,杨胜,李晨等.茯苓摇瓶液体发酵复合药性培养基及其化学成分研究[J].中草药,2012,43(8):1519-1522；Zhou H,Bi P,Wu X,et al.Improvedpolysaccharide production in submerged culture of Ganodermalucidumn by theaddition of coixenolide[J].Applied Biochemistry and Biotechnology,2014,172:1497-1505.)。中药发酵技术研究发现，真菌在代谢过程中还有可能对中药中的萜类、黄酮类、生物碱、皂甙类等某些活性物质进行生物转化，以提高中药药效、消除中药毒副作用、增加中药及复方制剂的安全性、改变中药药性(庄毅,谢小梅.药用真菌新型(双向性)固体发酵工程对雷公藤解毒持效的初步研究[J].中国中药杂志,2009,34(6):2083-2087.)，甚至形成新的成分或是活性更高的物质(李国红,沈月毛,王启方等.发酵三七中的皂苷成分研究[J].中草药,2005,36(4):499-500.)，明显增强发酵产物的生物活性和药理功能。但尚未发现与甲鱼油、香榧油及女贞子、桑叶、绞股蓝和淫羊藿等天然保健成分搭配进行发酵而制得的具有降血脂功效的虫草饮品。
发明内容
本发明的目的在于提供一种中华被毛孢降血脂型保健饮料，该饮料中含有利用甲鱼油、香榧油及女贞子、桑叶、绞股蓝和淫羊藿等天然保健成分搭配进行发酵的中华被毛孢发酵液，能够显著降低血清中的总胆固醇和甘油三酯含量，具有显著的降血脂功能。
本发明还提供了一种中华被毛孢降血脂型保健饮料的制备方法，通过添加甲鱼油、香榧油和特定种类的中药复合水提液等天然保健成分，进行中华被毛孢的液体发酵培养，进一步提升中华被毛孢保健饮料的降血脂保健功能。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种中华被毛孢降血脂型保健饮料，其活性成分为中华被毛孢发酵液或过滤后的中华被毛孢发酵液；所述的中华被毛孢发酵液的制备方法包括：
(1)将由女贞子10-40重量份、桑叶10-40重量份、绞股蓝10-40重量份和淫羊藿10-40重量份组成的中药材经水溶液提取，得到中药复合水提液；
(2)采用步骤(1)制备的中药复合水提液、甲鱼油、香榧油、葡萄糖和水配制发酵培养基；
(3)将中华被毛孢菌种接入步骤(2)制得的发酵培养基中，经液体发酵，得到中华被毛孢发酵液。
所述的中华被毛孢发酵液可以直接作为或用于配制中华被毛孢降血脂型保健饮料，也可以将中华被毛孢发酵液过滤后作为或用于配制中华被毛孢降血脂型保健饮料，澄清度和口感更佳。将中华被毛孢发酵液过滤的方法可采用本领域常用的过滤方法，优选：将中华被毛孢发酵液调整温度至40℃-60℃，加占中华被毛孢发酵液重量0.05％-1.5％的壳聚糖澄清1h-5h后过滤，得到过滤后的中华被毛孢发酵液。
本发明中，富含虫草、甲鱼油、香榧油、女贞子、桑叶、绞股蓝和淫羊藿等天然保健原料的有效成分，经发酵后色泽淡黄、口感柔和、酸甜可口、清凉爽口、营养丰富、清香淡雅，同时发酵过程中发生复杂的生物转化，消除中药毒副作用、增加安全性、提高降血脂功效，产生多种对人体有益的活性成分，因此，本发明未过滤或过滤后的中华被毛孢发酵液可以直接作为一种纯天然降血脂保健饮料或在未过滤或过滤后的中华被毛孢发酵液中添加适量的添加剂后作为一种降血脂保健饮料。所述的中华被毛孢降血脂型保健饮料中未过滤或过滤后的中华被毛孢发酵液的质量百分含量可为10％-100％，从节约原料并兼顾功效等角度考虑，优选为10％-50％。
为了使所述的中华被毛孢降血脂型保健饮料具备优良的口感，可在未过滤或过滤后的中华被毛孢发酵液中添加适量的添加剂。优选，所述的中华被毛孢降血脂型保健饮料由以下质量百分比的组分组成：
中华被毛孢发酵液或者
其中，所述的果胶与羧甲基纤维素钠的质量比进一步优选为1：1。
步骤(1)中，所述的中药复合水提液的制备可采用本领域常规的水提法，优选采用以下方法：按所述量称取中药材，粉碎，加2倍-10倍水浸泡0.5h-1h，然后加热煎熬，保持温和的沸腾状态20min-60min，过滤收集提取液；重复提取1次-4次，合并滤液，得到中药复合水提液。所述的中药材优选粉碎至60目-120目的粉末，更方便提取有效成分。
步骤(2)中，所述的甲鱼油和香榧油可采用市售产品，也可以采用现有的方法制备，例如二氧化碳超临界萃取法：所述的甲鱼油的制备方法包括：将甲鱼脂肪粉末经二氧化碳超临界萃取制得甲鱼油，萃取条件优选为：压力24MPa-32MPa，温度35℃-45℃，二氧化碳流量10L/h-25L/h，萃取时间3h-6h。所述的香榧油的制备方法包括：将香榧子粉末经二氧化碳超临界萃取制得香榧油，萃取条件优选为：压力10MPa-25MPa，温度35℃-50℃，二氧化碳流量10L/h-20L/h，萃取时间4h-6h。所述的甲鱼脂肪粉末和香榧子粉末优选80目-120目的粉末，更方便提取有效成分。
所述的发酵培养基每1000ml由以生药材量计为15g-20g的中药复合水提液、2g-6g的甲鱼油、1g-3g的香榧油、20g葡萄糖和余量的水组成。
步骤(3)中，所述的中华被毛孢菌种可采用任意一种中华被毛孢菌种，可采用市售产品，例如中华被毛孢菌株Hirsutella sinensis，保藏编号：CGMCC No.2126，该菌株已于2007年8月6日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)注册保藏。
所述的中华被毛孢菌种的接入方法为本领域的常规方法，包括：将在PDA斜面培养基中活化后的中华被毛孢菌种，接入灭菌后的液体种子培养基中培养，得到培养好的种子液，然后将培养好的种子液接入步骤(2)制得的发酵培养基中。进一步优选：将在PDA斜面培养基中活化后的中华被毛孢菌种，取5mm2-8mm2接入灭菌后的液体种子培养基中，配制成100ml-200ml，20℃-30℃(最优选25℃)，100r/min-150r/min(最优选120r/min)下摇床培养3天-5天，得到培养好的种子液，然后将培养好的种子液接入步骤(2)制得的发酵培养基中。
所述的PDA斜面培养基和液体种子培养基均采用本领域种子培养常用的培养基，可采用市售产品。进一步优选，所述的PDA斜面培养基：马铃薯200g、葡萄糖20g和琼脂15g-20g，用水定容至1000毫升。进一步优选，所述的液体种子培养基：葡萄糖20g，酵母粉5g，KH2PO41g和MgSO40.5g，用水定容至1000毫升。
所述的中华被毛孢菌种的菌种接种量优选为5％-15％。液体发酵条件优选：在温度20℃-30℃，转速60r/min-150r/min条件下，摇床培养10天-20天。
所述的菌种接种量指接入的菌种体积或接入的培养好的种子液体积与发酵培养基体积之比的百分数。
所述的中华被毛孢降血脂型保健饮料可以为液体饮料，也可以制备成其它形式的饮料如固体饮料。
本发明所用的培养基均需灭菌后使用。
本发明中，所述的中药材符合《中华人民共和国药典》的要求，可采用市售产品。
所述的中华被毛孢降血脂型保健饮料的制备方法，包括步骤：将原料混合均匀，经过滤和杀菌，得到中华被毛孢降血脂型保健饮料。
本发明的有益效果：
本发明中华被毛孢降血脂型保健饮料，富含虫草、甲鱼油、香榧油及女贞子、桑叶、绞股蓝和淫羊藿等天然保健原料的有效成分，经发酵后色泽淡黄、口感柔和、酸甜可口、清凉爽口、营养丰富、清香淡雅，同时发酵过程中发生复杂的生物转化，消除中药毒副作用、增加安全性、提高降血脂功效，产生多种对人体有益的活性成分，是一种新型的纯天然降血脂保健饮料，能够显著降低血清中的总胆固醇和甘油三酯含量，具有显著的降血脂功能。
本发明中华被毛孢降血脂型保健饮料的制备方法，操作简单，易于工业化生产。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细描述，有助于本领域技术人员更全面地理解本发明。
菌种中华被毛孢(HirsutellaSinensis)，可在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心获取，保藏编号：CGMCC No.2126。
所用的PDA斜面培养基：马铃薯200g、葡萄糖20g和琼脂15g，用水定容至1000毫升，自然pH，在121℃下灭菌20min。
实施例1
1.发酵培养
(1)摇瓶种子培养
1L液体种子培养基：葡萄糖20g/L，酵母粉5g/L，KH2PO4 1g/L，MgSO40.5g/L，pH自然，在121℃下灭菌20min。
培养方法：将在PDA斜面培养基中活化后的中华被毛孢菌种，取5mm2(即黄豆大小)接入灭菌后液体种子培养基中，500mL锥形瓶的装瓶量为150mL，25℃，120r/min下摇床培养3d，得到培养好的种子液。
(2)中药复合水提液制备
称取20g复合中药材(已粉碎，过60目)，由以下重量份的中草药组成：女贞子10份、桑叶40份、绞股蓝20份和淫羊藿30份。加10倍水浸泡0.5h，用电炉煎熬，调整适当的加热温度，保持温和的沸腾状态，煮沸60min，过滤收集提取液。重复提取2次，滤液合并后置于500mL容量瓶中，加水定容得以生药材量计浓度为40mg/mL的中药复合水提液。
(3)甲鱼油和香榧油的制备
首先将经过筛选去除杂质的甲鱼脂肪在低温冷冻干燥机内，在-42℃条件下，冷冻干燥24h，使其含水量达到8.9％，然后将香榧子在50℃的温度下干燥至含水量为7.7％；再用粉碎机分别把干燥后的甲鱼脂肪、香榧子粉碎成80目的粉末。将粉碎好的甲鱼脂肪、香榧子分别进行二氧化碳超临界萃取。其中甲鱼脂肪的萃取条件是：萃取压力为25Mpa，萃取温度为38℃，二氧化碳流量15L/h，萃取时间5.5h；香榧子粉末的萃取条件为：萃取压力为16Mpa，萃取温度为38℃，二氧化碳流量12L/h，萃取时间6h。上述过程获得油状液体，分别是甲鱼油、香榧子油。
(4)发酵培养
液体发酵培养基:20g葡萄糖、2g甲鱼油、3g香榧油、500mL40mg/mL中药复合水提液，pH自然，加水充分溶解并定容至1000mL，装入发酵罐，121℃灭菌20min，冷却后用于中华被毛孢液体发酵。
培养方法：将培养好的种子液以10％的接种量接入发酵罐中，在25℃，转速60r/min培养10d，得到中华被毛孢发酵液。
2.饮料配制
(1)将上述中华被毛孢发酵液调整温度至55℃，加壳聚糖澄清2h，壳聚糖与中华被毛孢发酵液的重量百分比为0.15％，过滤，滤液即过滤后的中华被毛孢发酵液；
(2)将上述过滤后的中华被毛孢发酵液作为活性成分，添加白糖、柠檬酸、苹果酸、果胶、CMC和纯净水，搅拌均匀，经过滤、杀菌，得到中华被毛孢降血脂型保健饮料。
其中，中华被毛孢降血脂型保健饮料由以下质量百分比的组分组成：
3.辅助降血脂实验
(1)实验动物分组
小鼠24-28g，雌雄各半，适应性生长1周后根据TC水平随机分组，每组10只。通过测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平判断降血脂的效果。
(2)给药方法及剂量
高脂饲料为北京华阜康生物科技有限公司的KK鼠料，粗脂肪质量百分含量16.15％，在给予高脂饲料的同时给予不同剂量的受试样品(即中华被毛孢降血脂型保健饮料)。实验设5个处理，即高、中、低3个剂量组(8.0ml/kg、16.0ml/kg、24.0ml/kg)、基础对照组和高脂对照组，高脂对照组和基础对照组均以蒸馏水灌胃，并分别给予高脂饲料和基础饲料(购自广东省医用动物场)，与剂量组同步进行。各剂量组每天灌胃1次中华被毛孢降血脂型保健饮料，连续饲喂30天，在给予受试样品的同时喂高脂饲料，自由进食和饮水。
(3)测定内容及方法
本实验为预防性给药，在给予高脂饲料的同时给予不同剂量的受试样品，于实验结束禁食16小时，根据总胆固醇测定试剂盒(COD-PAP法)及甘油三酯测定试剂盒(GPO-PAP法)中说明书所述，分别测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平。
检测结果见表1、表2。
实施例2
1.发酵培养
(1)摇瓶种子培养
1L液体种子培养基：葡萄糖20g/L，酵母粉5g/L，KH2PO4 1g/L，MgSO40.5g/L，pH自然，在121℃下灭菌20min。
培养方法：将在PDA斜面培养基中活化后的中华被毛孢菌种，取5mm2(即黄豆大小)接入灭菌后液体种子培养基中，500mL锥形瓶的装瓶量为150mL，25℃，120r/min下摇床培养3d，得到培养好的种子液。
(2)中药复合水提液制备
称取20g复合中药材(已粉碎，过60目)，由以下重量份的中草药组成：女贞子20份、桑叶30份、绞股蓝30份和淫羊藿20份。加10倍水浸泡0.5h，用电炉煎熬，调整适当的加热温度，保持温和的沸腾状态，煮沸60min，过滤收集提取液。重复提取2次，滤液合并后置于500mL容量瓶中，加水定容得以生药材量计浓度为40mg/mL的中药复合水提液。
(3)甲鱼油和香榧油的制备
首先将经过筛选去除杂质的甲鱼脂肪在低温冷冻干燥机内，在-45℃条件下，冷冻干燥24h，使其含水量达到8.5％，然后将香榧子在55℃的温度下干燥至含水量为7.5％；再用粉碎机分别把干燥后的甲鱼脂肪、香榧子粉碎成80目的粉末。将粉碎好的甲鱼脂肪、香榧子分别进行二氧化碳超临界萃取。其中甲鱼脂肪的萃取条件是：萃取压力为28Mpa，萃取温度为40℃，二氧化碳流量18L/h，萃取时间4.5h；香榧子粉末的萃取条件为：萃取压力为20Mpa，萃取温度为42℃，二氧化碳流量16L/h，萃取时间5h。上述过程获得油状液体，分别是甲鱼油、香榧子油。
(4)发酵培养
液体发酵培养基:20g葡萄糖、4g甲鱼油、2g香榧油、500mL40mg/mL中药复合水提液，pH自然，加水充分溶解并定容至1000mL，装入发酵罐，121℃灭菌20min，冷却后用于中华被毛孢液体发酵。
培养方法：将培养好的种子液以10％的接种量接入发酵罐中，在25℃，转速120r/min培养14d，得到中华被毛孢发酵液。
2.饮料配制
(1)将上述中华被毛孢发酵液调整温度至60℃，加壳聚糖澄清2h，壳聚糖与中华被毛孢发酵液的重量百分比为0.5％，过滤，滤液即过滤后的中华被毛孢发酵液；
(2)将上述过滤后的中华被毛孢发酵液作为活性成分，添加白糖、柠檬酸、苹果酸、果胶、CMC和纯净水，搅拌均匀，经过滤、杀菌，得到中华被毛孢降血脂型保健饮料。
其中，中华被毛孢降血脂型保健饮料由以下质量百分比的组分组成：
3.辅助降血脂实验同实施例1。检测结果见表1、表2。
实施例3
1.发酵培养
(1)摇瓶种子培养
1L液体种子培养基：葡萄糖20g/L，酵母粉5g/L，KH2PO4 1g/L，MgSO40.5g/L，pH自然，在121℃下灭菌20min。
培养方法：将在PDA斜面培养基中活化后的中华被毛孢菌种，取5mm2(即黄豆大小)接入灭菌后液体种子培养基中，500mL锥形瓶的装瓶量为150mL，25℃，120r/min下摇床培养3d，得到培养好的种子液。
(2)中药复合水提液制备
称取20g复合中药材(已粉碎，过60目)，由以下重量份的中草药组成：女贞子30份、桑叶10份、绞股蓝40份和淫羊藿20份。加10倍水浸泡0.5h，用电炉煎熬，调整适当的加热温度，保持温和的沸腾状态，煮沸60min，过滤收集提取液。重复提取2次，滤液合并后置于500mL容量瓶中，加水定容得以生药材量计浓度为40mg/mL的中药复合水提液。
(3)甲鱼油和香榧油的制备
首先将经过筛选去除杂质的甲鱼脂肪在低温冷冻干燥机内，在-50℃条件下，冷冻干燥24h，使其含水量达到8.1％，然后将香榧子在60℃的温度下干燥至含水量为7.2％；再用粉碎机分别把干燥后的甲鱼脂肪、香榧子粉碎成120目的粉末。将粉碎好的甲鱼脂肪、香榧子分别进行二氧化碳超临界萃取。其中甲鱼脂肪的萃取条件是：萃取压力为30Mpa，萃取温度为43℃，二氧化碳流量22L/h，萃取时间3.5h；香榧子粉末的萃取条件为：萃取压力为25Mpa，萃取温度为48℃，二氧化碳流量18L/h，萃取时间4h。上述过程获得油状液体，分别是甲鱼油、香榧子油。
(4)发酵培养
液体发酵培养基:20g葡萄糖、6g甲鱼油、1g香榧油、500mL40mg/mL中药复合水提液，pH自然，加水充分溶解并定容至1000mL，装入发酵罐，121℃灭菌20min，冷却后用于中华被毛孢液体发酵。
培养方法：将培养好的种子液以10％的接种量接入发酵罐中，在25℃，转速80r/min培养20d，得到中华被毛孢发酵液。
2.饮料配制
(1)将上述中华被毛孢发酵液调整温度至45℃，加壳聚糖澄清1h，壳聚糖与中华被毛孢发酵液的重量百分比为0.8％，过滤，滤液即过滤后的中华被毛孢发酵液；
(2)将上述过滤后的中华被毛孢发酵液作为活性成分，添加白糖、柠檬酸、苹果酸、果胶、CMC和纯净水，搅拌均匀，经过滤、杀菌，得到中华被毛孢降血脂型保健饮料。
其中，中华被毛孢降血脂型保健饮料由以下质量百分比的组分组成：
3.辅助降血脂实验同实施例1。检测结果见表1、表2。
实施例4
1.发酵培养
(1)摇瓶种子培养
1L液体种子培养基：葡萄糖20g/L，酵母粉5g/L，KH2PO4 1g/L，MgSO40.5g/L，pH自然，在121℃下灭菌20min。
培养方法：将在PDA斜面培养基中活化后的中华被毛孢菌种，取5mm2(即黄豆大小)接入灭菌后液体种子培养基中，500mL锥形瓶的装瓶量为100mL，20℃，100r/min下摇床培养5d，得到培养好的种子液。
(2)中药复合水提液制备
称取15g复合中药材(已粉碎，过120目)，由以下重量份的中草药组成：女贞子40份、桑叶10份、绞股蓝10份和淫羊藿40份。加2倍水浸泡1h，用电炉煎熬，调整适当的加热温度，保持温和的沸腾状态，煮沸20min，过滤收集提取液。重复提取1次，滤液合并后置于500mL容量瓶中，加水定容得以生药材量计浓度为30mg/mL的中药复合水提液。
(3)甲鱼油和香榧油的制备
首先将经过筛选去除杂质的甲鱼脂肪在低温冷冻干燥机内，在-45℃条件下，冷冻干燥24h，使其含水量达到8.5％，然后将香榧子在55℃的温度下干燥至含水量为7.5％；再用粉碎机分别把干燥后的甲鱼脂肪、香榧子粉碎成80目的粉末。将粉碎好的甲鱼脂肪、香榧子分别进行二氧化碳超临界萃取。其中甲鱼脂肪的萃取条件是：萃取压力为24Mpa，萃取温度为35℃，二氧化碳流量10L/h，萃取时间6h；香榧子粉末的萃取条件为：萃取压力为10Mpa，萃取温度为35℃，二氧化碳流量10L/h，萃取时间5h。上述过程获得油状液体，分别是甲鱼油、香榧子油。
(4)发酵培养
液体发酵培养基:20g葡萄糖、5g甲鱼油、2g香榧油、500mL30mg/mL中药复合水提液，pH自然，加水充分溶解并定容至1000mL，装入发酵罐，121℃灭菌20min，冷却后用于中华被毛孢液体发酵。
培养方法：将培养好的种子液以5％的接种量接入发酵罐中，在20℃，转速150r/min培养12d，得到中华被毛孢发酵液。
2.饮料配制
(1)将上述中华被毛孢发酵液调整温度至40℃，加壳聚糖澄清5h，壳聚糖与中华被毛孢发酵液的重量百分比为0.05％，过滤，滤液即过滤后的中华被毛孢发酵液；
(2)将上述过滤后的中华被毛孢发酵液作为活性成分，添加白糖、柠檬酸、苹果酸、果胶、CMC和纯净水，搅拌均匀，经过滤、杀菌，得到中华被毛孢降血脂型保健饮料。
其中，中华被毛孢降血脂型保健饮料由以下质量百分比的组分组成：
3.辅助降血脂实验同实施例1。检测结果见表3、表4。
实施例5
1.发酵培养
(1)摇瓶种子培养
1L液体种子培养基：葡萄糖20g/L，酵母粉5g/L，KH2PO4 1g/L，MgSO40.5g/L，pH自然，在121℃下灭菌20min。
培养方法：将在PDA斜面培养基中活化后的中华被毛孢菌种，取8mm2(即黄豆大小)接入灭菌后液体种子培养基中，500mL锥形瓶的装瓶量为200mL，30℃，150r/min下摇床培养4d，得到培养好的种子液。
(2)中药复合水提液制备
称取18g复合中药材(已粉碎，过80目)，由以下重量份的中草药组成：女贞子30份、桑叶30份、绞股蓝30份和淫羊藿10份。加6倍水浸泡50min，用电炉煎熬，调整适当的加热温度，保持温和的沸腾状态，煮沸40min，过滤收集提取液。重复提取4次，滤液合并后置于500mL容量瓶中，加水定容得以生药材量计浓度为36mg/mL的中药复合水提液。
(3)甲鱼油和香榧油的制备
首先将经过筛选去除杂质的甲鱼脂肪在低温冷冻干燥机内，在-45℃条件下，冷冻干燥24h，使其含水量达到8.5％，然后将香榧子在55℃的温度下干燥至含水量为7.5％；再用粉碎机分别把干燥后的甲鱼脂肪、香榧子粉碎成80目的粉末。将粉碎好的甲鱼脂肪、香榧子分别进行二氧化碳超临界萃取。其中甲鱼脂肪的萃取条件是：萃取压力为32Mpa，萃取温度为45℃，二氧化碳流量25L/h，萃取时间3h；香榧子粉末的萃取条件为：萃取压力为18Mpa，萃取温度为50℃，二氧化碳流量20L/h，萃取时间4h。上述过程获得油状液体，分别是甲鱼油、香榧子油。
(4)发酵培养
液体发酵培养基:20g葡萄糖、5g甲鱼油、2g香榧油、500mL36mg/mL中药复合水提液，pH自然，加水充分溶解并定容至1000mL，装入发酵罐，121℃灭菌20min，冷却后用于中华被毛孢液体发酵。
培养方法：将培养好的种子液以15％的接种量接入发酵罐中，在30℃，转速100r/min培养15d，得到中华被毛孢发酵液。
2.饮料配制
(1)将上述中华被毛孢发酵液调整温度至50℃，加壳聚糖澄清4h，壳聚糖与中华被毛孢发酵液的重量百分比为1.5％，过滤，滤液即过滤后的中华被毛孢发酵液；
(2)将上述过滤后的中华被毛孢发酵液作为活性成分，添加白糖、柠檬酸、苹果酸、果胶、CMC和纯净水，搅拌均匀，经过滤、杀菌，得到中华被毛孢降血脂型保健饮料。
其中，中华被毛孢降血脂型保健饮料由以下质量百分比的组分组成：
3.辅助降血脂实验同实施例1。检测结果见表3、表4。
对照例1
1.发酵培养
(1)摇瓶种子培养
1L液体种子培养基：葡萄糖20g/L，酵母粉5g/L，KH2PO4 1g/L，MgSO40.5g/L，pH自然，在121℃下灭菌20min。
培养方法：将在PDA斜面培养基中活化后的中华被毛孢菌种，取5mm2(即黄豆大小)接入灭菌后液体种子培养基中，500mL锥形瓶的装瓶量为150mL，25℃，120r/min下摇床培养3d，得到培养好的种子液。
(2)发酵培养
液体发酵培养基:20g葡萄糖，pH自然，加水充分溶解并定容至1000mL，装入发酵罐，121℃灭菌20min，冷却后用于中华被毛孢液体发酵。
培养方法：将培养好的种子液以10％的接种量接入发酵罐中，在25℃，转速120r/min培养14d，得到中华被毛孢发酵液。
2.饮料配制
(1)将上述中华被毛孢发酵液调整温度至60℃，加壳聚糖澄清2h，壳聚糖与中华被毛孢发酵液的重量百分比为0.5％，过滤，滤液即过滤后的中华被毛孢发酵液；
(2)将上述过滤后的中华被毛孢发酵液作为活性成分，添加白糖、柠檬酸、苹果酸、果胶、CMC和纯净水，搅拌均匀，经过滤、杀菌，得到中华被毛孢降血脂型保健饮料。
其中，中华被毛孢降血脂型保健饮料由以下质量百分比的组分组成：
3.辅助降血脂实验同实施例1。检测结果见表3、表4。
表1 中华被毛孢降血脂型保健饮料对小鼠总胆固醇和甘油三酯的影响(X±S，n＝10)
表2 中华被毛孢降血脂型保健饮料降低小鼠总胆固醇和甘油三酯的百分比(X±S，n＝10)
表3 中华被毛孢降血脂型保健饮料对小鼠总胆固醇和甘油三酯的影响(X±S，n＝10)
表4 中华被毛孢降血脂型保健饮料降低小鼠总胆固醇和甘油三酯的百分比(X±S，n＝10)
表2、表4中的数据是各实施例低剂量组、中剂量组、高剂量组中检测的血清总胆固醇含量、甘油三酯含量分别相对高脂对照组中对应的血清总胆固醇含量、甘油三酯含量所降低的百分比。
表1、表2、表3和表4的数据显示，采用本发明方法发酵培养的中华被毛孢发酵液制备的饮料与常规培养方法发酵培养的中华被毛孢发酵液制备的饮料相比对血清中的总胆固醇和甘油三酯含量的降低更加显著，说明本发明利用女贞子、桑叶、绞股蓝和淫羊藿四种特定种类的中药复合水提液，以及甲鱼油和香榧油搭配进行发酵的中华被毛孢发酵液制备的饮料，能够显著降低血清中的总胆固醇和甘油三酯含量，具有显著的降血脂功能。
在本发明配方和制备方法限定的范围内各参数的变化并不影响中华被毛孢降血脂型保健饮料的降血脂功效和制备，因此本发明配方和制备方法中任意参数的组合均可得到中华被毛孢降血脂型保健饮料。在此不再赘述。
Claims (9)
1.一种中华被毛孢降血脂型保健饮料，其特征在于，所述的饮料中活性成分为中华被毛孢发酵液或过滤后的中华被毛孢发酵液；所述的中华被毛孢降血脂型保健饮料中中华被毛孢发酵液或过滤后的中华被毛孢发酵液的质量百分含量为10％-100％；所述的中华被毛孢发酵液的制备方法包括：
(1)将由女贞子10-40重量份、桑叶10-40重量份、绞股蓝10-40重量份和淫羊藿10-40重量份组成的中药材经水溶液提取，得到中药复合水提液；
(2)采用步骤(1)制备的中药复合水提液、甲鱼油、香榧油、葡萄糖和水配制发酵培养基；所述的发酵培养基每1000mL由以生药材量计为15g-20g的中药复合水提液、2g-6g甲鱼油、1g-3g香榧油、20g葡萄糖和余量的水组成；
(3)将中华被毛孢菌种接入步骤(2)制得的发酵培养基中，经液体发酵，得到中华被毛孢发酵液。
2.根据权利要求1所述的中华被毛孢降血脂型保健饮料，其特征在于，所述的中药复合水提液的制备方法包括：按所述量称取中药材，粉碎，加2倍-10倍水浸泡0.5h-1h，然后加热煎熬，保持温和的沸腾状态20min-60min，过滤收集提取液；重复提取1次-4次，合并滤液，得到中药复合水提液。
3.根据权利要求1所述的中华被毛孢降血脂型保健饮料，其特征在于，所述的中华被毛孢菌种的接入方法包括：将在PDA斜面培养基中活化后的中华被毛孢菌种，接入灭菌后的液体种子培养基中培养，得到培养好的种子液，然后将培养好的种子液接入步骤(2)制得的发酵培养基中。
4.根据权利要求3所述的中华被毛孢降血脂型保健饮料，其特征在于，所述的中华被毛孢菌种的接入方法包括：将在PDA斜面培养基中活化后的中华被毛孢菌种，取5mm2-8mm2接入灭菌后的液体种子培养基中，配制成100ml-200ml，20℃-30℃，100r/min-150r/min下摇床培养3天-5天，得到培养好的种子液，然后将培养好的种子液接入步骤(2)制得的发酵培养基中。
5.根据权利要求1所述的中华被毛孢降血脂型保健饮料，其特征在于，所述的中华被毛孢菌种的菌种接种量为5％-15％。
6.根据权利要求1所述的中华被毛孢降血脂型保健饮料，其特征在于，所述的液体发酵条件：在温度20℃-30℃，转速60r/min-150r/min条件下，摇床培养10天-20天。
7.根据权利要求1所述的中华被毛孢降血脂型保健饮料，其特征在于，所述的过滤后的中华被毛孢发酵液的制备方法包括：将中华被毛孢发酵液调整温度至40℃-60℃，加占中华被毛孢发酵液重量0.05％-1.5％的壳聚糖澄清1h-5h后过滤，得到过滤后的中华被毛孢发酵液。
8.根据权利要求1所述的中华被毛孢降血脂型保健饮料，其特征在于，所述的饮料中还含有添加剂，由以下质量百分比的组分组成饮料：
9.根据权利要求1-8任一项所述的中华被毛孢降血脂型保健饮料的制备方法，其特征在于，包括步骤：将原料混合均匀，经过滤和杀菌，得到中华被毛孢降血脂型保健饮料。
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Also Published As
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