CN107410798A - 一种具有提高免疫力功效的中药发酵饮料及其制备方法 - Google Patents

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张春杰
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Abstract

本发明提供了一种具有提高免疫力功效的中药发酵饮料及其制备方法，有效成分由北虫草枸杞金银花共提物、糖液、醋酸菌、乳酸菌和酵母菌组成，其中，每500mL北虫草枸杞金银花共提物中有糖液300mL、醋酸菌1×103‑1×1013CFU、乳酸菌1×103‑1×1013CFU，酵母菌1×103‑1×1013CFU，将醋酸菌、乳酸菌和酵母菌加入到北虫草枸杞金银花共提物、糖液混合液中进行制备；所得饮料能够有效调节肠道菌群，改善血液中CD4+CD8+平衡，改善因化疗造成的免疫低下，提高免疫力效果突出。

Description

一种具有提高免疫力功效的中药发酵饮料及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种发酵饮料及其制备方法，尤其是一种具有提高免疫力功效的中药发酵饮料及其制备方法。
背景技术
免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细菌等)，处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。现代免疫学认为，免疫力是人体识别和排除“异己”的生理反应。人体内执行这一功能的是免疫系统。数百万年来，人类生活在一个既适合生存又充满危险的环境，人类得以存续，也获得了非凡的免疫力。所以说免疫力是生物进化过程的产物。负离子可加强单核吞噬细胞系统的功能，使血液中抗体含量增加，提高机体的非特异性免疫功能，促进新陈代谢，提高人体免疫力。
免疫力按其获得方式的不同可分为：
1、先天性免疫，是人一生下来就有的。如猪瘟在猪群中传播很快，但和人类无缘。这是因为人类天生就不会得这种病；
2、获得性免疫，是人生下来以后在生活过程中自然获得的，或者用人工辅助的方法被动得到。
北虫草是北冬虫草的简称，也叫蛹虫草或踊虫草、蛹草，俗名不老草，是虫，菌结合的药用真菌北虫草属于真菌门，子囊菌纲，肉座菌目，麦角菌科，虫草属。它主要生长在我国的北方地区。北虫草不仅含有丰富的蛋白质，氨基酸和虫草素，而且含有30多种人体所需的微量元素。通过研究，北虫草的营养及化学成分，药理药效基本上与冬虫夏草相同，主要有保肺益肾，止血化痰，提高免疫力，防癌抗癌等功效。其功能成分主要有以下几种：
虫草素：抗病毒、抗菌、明显抑制肿瘤生长、干扰人体RNA及DNA的合成；
虫草酸：预防治疗脑血栓、脑溢血、肾功能衰竭，利尿；
腺苷：抗病毒、抗菌，防治脑血栓、脑溢血，抑制血小板积聚，防止血栓形成，消除面斑，抗衰防皱；
虫草多糖：提高免疫力，延缓衰老，扶正固本，保护心脏、肝脏
麦角甾醇：抗癌、抗衰、减毒；
超氧化物歧化酶(SOD酶)：抑制或消除催人衰老的超氧自由基形成及抗癌、抗衰、减毒；
硒：为国际医学界公认的抗癌元素，也是重要的抗氧化剂：能增强人体免疫能力；
北虫草的食用方法主要为：泡水、煲汤、干燥后胶囊吞服，但是这几种食用方法存在吸收效果不好的问题，从而影响药效。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种具有极高的水中悬浮率的具有提高免疫力功效的中药发酵饮料。
本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述具有提高免疫力功效的中药发酵饮料的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
一种具有提高免疫力功效的中药发酵饮料，有效成分由北虫草枸杞金银花共提物、糖液、醋酸菌、乳酸菌和酵母菌组成，其中，每500mL北虫草枸杞金银花共提物中有糖液300mL、醋酸菌1×103-1×1013CFU、乳酸菌1×103-1×1013CFU，酵母菌1×103-1×1013CFU。
优选的，上述具有提高免疫力功效的中药发酵饮料，所述北虫草枸杞金银花共提物是由下述方法制备得到的：每10-80g北虫草与10-80g干枸杞、10-80g金银花混合并加入500mL纯净水70-100℃浸提10-120min，40目筛过滤，滤出渣再用纯净水70-100℃浸提10-120min，40目筛过滤，将两次滤液合并在一起，即得。
优选的，上述具有提高免疫力功效的中药发酵饮料，所述糖液是由下述方法制备得到的：每10-100g白砂糖与10-100g蜂蜜混合后加入300mL纯净水溶化过滤至澄清，即得。
优选的，上述具有提高免疫力功效的中药发酵饮料，每500mL北虫草枸杞金银花共提物中有糖液300mL、醋酸菌1×109CFU、乳酸菌1×1010CFU，酵母菌1×1010CFU。
优选的，上述具有提高免疫力功效的中药发酵饮料，所述北虫草枸杞金银花共提物中北虫草、干枸杞、金银花的质量比为7:4:2。
上述具有提高免疫力功效的中药发酵饮料的制备方法，具体步骤为：
(1)按组方量将北虫草枸杞金银花共提物加糖液混合并加纯净水配平至1L，121℃，20min灭菌，待液体降温至室温，接入醋酸菌、乳酸菌和酵母菌，20-40℃发酵，发酵周期3-15d；
(2)将发酵液在无菌条件下离心：2000-10000rpm离心5-20min，将上层澄清液体进行0.2μm微孔滤膜过滤除菌，灌装即得。
本发明的有益效果是：
上述具有提高免疫力功效的中药发酵饮料，除含有北虫草枸杞金银花共提物中各种有效成分外，还含有大量对身体有益的有机酸及各种酶，各组分协同作用，能够有效调节肠道菌群，改善血液中CD4+CD8+平衡，改善因化疗造成的免疫低下，提高免疫力效果突出，且所述饮料口味酸甜，口感细腻，无刺激性，无毒无致畸作用，安全可靠，其制备方法简单，具有广泛应用前景。
附图说明
图1是发酵饮料对小鼠体重影响图。
图2是发酵饮料对小鼠脏器指数影响图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明所述技术方案作进一步的说明。
实施例1
一种具有提高免疫力功效的中药发酵饮料，有效成分由北虫草枸杞金银花共提物、糖液、醋酸菌(巴氏醋杆菌，CICC20064，中国工业微生物菌种保藏管理中心)、乳酸菌(植物乳杆菌，LP45，石家庄一然生物科技有限公司)和酵母菌(发酵毕赤酵母，CICC20442，中国工业微生物菌种保藏管理中心)组成，其中，每500mL北虫草枸杞金银花共提物中有糖液300mL、醋酸菌1×109CFU、乳酸菌1×1010CFU，酵母菌1×1010CFU。其中，
所述北虫草枸杞金银花共提物是由下述方法制备得到的：每70g北虫草与40g干枸杞、20g金银花混合并加入500mL纯净水90℃浸提100min，40目筛过滤，滤出渣再用纯净水80℃浸提80min，40目筛过滤，将两次滤液合并在一起，即得。
所述糖液是由下述方法制备得到的：每50g白砂糖与50g蜂蜜混合后加入300mL纯净水溶化过滤至澄清，即得。
上述具有提高免疫力功效的中药发酵饮料的制备方法，具体步骤为：
(1)按组方量将北虫草枸杞金银花共提物加糖液混合并加纯净水配平至1L，121℃，20min灭菌，待液体降温至室温，接入醋酸菌、乳酸菌和酵母菌，30℃发酵，发酵周期10d；
(2)将发酵液在无菌条件下离心：7000rpm离心15min，将上层澄清液体进行0.2μm微孔滤膜过滤除菌，灌装即得。
实施例2
一种具有提高免疫力功效的中药发酵饮料，有效成分由北虫草枸杞金银花共提物、糖液、醋酸菌(巴氏醋杆菌，CICC20056，中国工业微生物菌种保藏管理中心)、乳酸菌(植物乳杆菌，LP45，石家庄一然生物科技有限公司)和酵母菌(双倒卵形红冬孢酵母菌，CICC31994，中国工业微生物菌种保藏管理中心)组成，其中，每500mL北虫草枸杞金银花共提物中有糖液300mL、醋酸菌1×1013CFU、乳酸菌1×1013CFU，酵母菌1×103CFU。其中，
所述北虫草枸杞金银花共提物是由下述方法制备得到的：每80g北虫草与10g干枸杞、10g金银花混合并加入500mL纯净水100℃浸提120min，40目筛过滤，滤出渣再用纯净水70℃浸提10min，40目筛过滤，将两次滤液合并在一起，即得。
所述糖液是由下述方法制备得到的：每100g白砂糖与10g蜂蜜混合后加入300mL纯净水溶化过滤至澄清，即得。
上述具有提高免疫力功效的中药发酵饮料的制备方法，具体步骤为：
(1)按组方量将北虫草枸杞金银花共提物加糖液混合并加纯净水配平至1L，121℃，20min灭菌，待液体降温至室温，接入醋酸菌、乳酸菌和酵母菌，40℃发酵，发酵周期3d；
(2)将发酵液在无菌条件下离心：10000rpm离心5min，将上层澄清液体进行0.2μm微孔滤膜过滤除菌，灌装即得。
实施例3
一种具有提高免疫力功效的中药发酵饮料，有效成分由北虫草枸杞金银花共提物、糖液、醋酸菌(巴氏醋杆菌，CGMCC1.24，中国普通微生物菌种保藏管理中心)、乳酸菌(植物乳杆菌，LP-G18，润盈生物工程(上海)有限公司)和酵母菌(酿酒酵母，CICC1002，中国工业微生物菌种保藏管理中心)组成，其中，每500mL北虫草枸杞金银花共提物中有糖液300mL、醋酸菌1×103CFU、乳酸菌1×103CFU，酵母菌1×1013CFU。其中，
所述北虫草枸杞金银花共提物是由下述方法制备得到的：每10g北虫草与80g干枸杞、80g金银花混合并加入500mL纯净水70℃浸提10min，40目筛过滤，滤出渣再用纯净水100℃浸提120min，40目筛过滤，将两次滤液合并在一起，即得。
所述糖液是由下述方法制备得到的：每10g白砂糖与100g蜂蜜混合后加入300mL纯净水溶化过滤至澄清，即得。
上述具有提高免疫力功效的中药发酵饮料的制备方法，具体步骤为：
(1)按组方量将北虫草枸杞金银花共提物加糖液混合并加纯净水配平至1L，121℃，20min灭菌，待液体降温至室温，接入醋酸菌、乳酸菌和酵母菌，20℃发酵，发酵周期15d；
(2)将发酵液在无菌条件下离心：2000rpm离心20min，将上层澄清液体进行0.2μm微孔滤膜过滤除菌，灌装即得。
实施例4
一种具有提高免疫力功效的中药发酵饮料，有效成分由北虫草枸杞金银花共提物、糖液、醋酸菌(汉氏葡糖酸醋杆菌，CGMCC1.1811，中国普通微生物菌种保藏管理中心)、乳酸菌(植物乳杆菌，LP-G18，润盈生物工程(上海)有限公司)和酵母菌(发酵毕赤酵母，CICC20442，中国工业微生物菌种保藏管理中心)组成，其中，每500mL北虫草枸杞金银花共提物中有糖液300mL、醋酸菌1×1011CFU、乳酸菌1×108CFU，酵母菌1×109CFU。其中，
所述北虫草枸杞金银花共提物是由下述方法制备得到的：每60g北虫草与50g干枸杞、30g金银花混合并加入500mL纯净水80℃浸提80min，40目筛过滤，滤出渣再用纯净水80℃浸提60min，40目筛过滤，将两次滤液合并在一起，即得。
所述糖液是由下述方法制备得到的：每40g白砂糖与60g蜂蜜混合后加入300mL纯净水溶化过滤至澄清，即得。
上述具有提高免疫力功效的中药发酵饮料的制备方法同实施例1。
实施例5
一种具有提高免疫力功效的中药发酵饮料，有效成分由北虫草枸杞金银花共提物、糖液、醋酸菌(苹果醋酸杆状菌，CGMCC1.5116，中国普通微生物菌种保藏管理中心)、乳酸菌(植物乳杆菌，LP-G18，润盈生物工程(上海)有限公司)和酵母菌(酿酒酵母，CICC1002，中国工业微生物菌种保藏管理中心)组成，其中，每500mL北虫草枸杞金银花共提物中有糖液300mL、醋酸菌1×1010CFU、乳酸菌1×108CFU，酵母菌1×107CFU。其中，
所述北虫草枸杞金银花共提物是由下述方法制备得到的：每50g北虫草与50g干枸杞、40g金银花混合并加入500mL纯净水90℃浸提60min，40目筛过滤，滤出渣再用纯净水80℃浸提60min，40目筛过滤，将两次滤液合并在一起，即得。
所述糖液是由下述方法制备得到的：每60g白砂糖与40g蜂蜜混合后加入300mL纯净水溶化过滤至澄清，即得。
上述具有提高免疫力功效的中药发酵饮料的制备方法同实施例2。
上述实施例中所述各组分用量按照相同比例增加或减少，所得各组分的重量份数关系均属于本发明的保护范围。
组方分析：
在保留北虫草枸杞金银花共提物富含：虫草多糖、虫草素、多种微量元素和氨基酸的基础上，利用枸杞色素和枸杞多糖提高免疫力以及清除自由基、抗疲劳、抗辐射的功效，辅以金银花抑菌、抗病毒，同时增加了改善肠道菌群，调节肠道免疫的功能。该发酵饮料除含有北虫草枸杞金银花共提物中各种有效成分外，还含有大量对身体有益的有机酸及各种酶。通过动物实验验证，该发酵饮料中的共提物经乳酸菌、酵母菌、醋酸菌发酵后，能够有效调节肠道菌群，改善血液中CD4+CD8+平衡，改善因化疗造成的免疫低下小鼠的营养状态、免疫水平，提高免疫力功效显著提高。
试验例(实验组采用实施例1所述中药发酵饮料)
动物实验
实验动物：SPF级昆明小鼠90只，体重20±3g
免疫功能低下小鼠造模：取实验小鼠，随机分成9组，模型组、空白对照组、高剂量组、中等剂量组、低剂量组，适应性饲养7d后，除空白组外，开始造模，腹腔注射CTX(50mg·kg－1)，空白对照组用相同方法注射生理盐水，连续3d。
小鼠分组及治疗，见表1。
表1
组别 治疗方式
A：空白组(不造模) 灌胃生理盐水
B：阴性对照组 灌胃生理盐水
C：水提物组 灌胃未发酵北虫草枸杞金银花共提物0.4mL
D：高剂量组 灌胃发酵饮料原液0.4mL
E：中等剂量组 灌胃发酵饮料2倍稀释液0.4mL
F：低剂量组 灌胃发酵饮料4倍稀释液0.4mL
每组小鼠15只
小鼠造模同时开始进行治疗，治疗共进行9d，每天记录小鼠摄食量及体重，第11d处死小鼠，分离完整组织，称重、记录。
实验结果：
发酵饮料对小鼠体重的影响：
小鼠体重是衡量小鼠免疫功能和精神状态的重要指标，如图1所示，由实验结果可以看出，该发酵饮料能够有效改善免疫低下小鼠体重指标，并且随着剂量的增加具有剂量依赖性，发酵饮料高、中、低三个剂量组都具有显著改善小鼠体重的作用，北虫草枸杞金银花共提物组也有改善小鼠体重的效果，与阴性对照组相比具有显著差异，但是其效果低于发酵组三个浓度，表明，北虫草被发酵后改善小鼠体重能力有所提高。
碳粒廓清功能的影响
小鼠在治疗第9天后，给药后禁食不禁水12h，分别称定小鼠质量，并在每只鼠的尾静脉注射0.2mL墨汁稀释液。分别在注射后2和10min，用提前经肝素处理的定量毛细管从小鼠眼眶取血40μL，溶于4mL 1g/L的碳酸钠溶液，将溶液与所取血液混匀。在680nm处用紫外分光光度计测定吸光度A1和A2，以碳酸钠溶液为空白对照。结果见表2。
碳粒廓清率K＝(LgA1-LgA2)/(T2-T1)；
吞噬指数＝K1/3×体质量/(肝质量+脾质量)
表2
＊与空白组相比▲与模型组相比■与未发酵组相比■p＜0.05■■p＜0.01
由上述实验结果可以看出，该发酵饮料能够有效改善免疫低下小鼠碳粒廓清功能，并且随着剂量的增加具有剂量依赖性，发酵饮料高、中、低三个剂量组都具有显著改善小鼠免疫作用，北虫草枸杞金银花共提物组也有改善小鼠粒廓清功能的效果，与阴性对照组相比具有显著差异，但是其效果低于发酵组三个浓度，表明北虫草共提物被发酵后改善小鼠粒廓清功能能力有所提高。
发酵饮料对小鼠脏器指数影响：
脱臼处死小鼠，摘取胸腺、脾脏，称定小鼠质量，根据公式计算脏器指数，并用吞噬指数表示小鼠碳粒廓清能力。脏器指数＝脏器质量(mg)/小鼠体质量(g)；
通过图2所示，该发酵饮料能够有效改善免疫低下小鼠胸腺指数及脾脏指数，并且随着剂量的增加具有剂量依赖性，发酵饮料高、中、低三个剂量组都具有显著改善小鼠胸腺指数及脾脏指数作用，北虫草枸杞金银花共提物组也有改善小鼠胸腺指数及脾脏指数的效果，与阴性对照组相比具有显著差异，但是其效果低于发酵组三个浓度，表明，北虫草被发酵后改善小鼠胸腺指数及脾脏指数能力有所提高。
发酵饮料对小鼠外周血淋巴细胞亚群影响研究，结果见表3。
表3
＊与空白组相比▲与模型组相比■与未发酵组相比■p＜0.05■■p＜0.01
对免疫低下小鼠外周血T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+的影响模型组小鼠外周血T淋巴细胞亚群比例失调，CD4+/CD8+比值下降，显著低于正常组(P＜0.01)；与模型组比较，发酵饮料各剂量组能明显提高CD4+细胞数以及降低CD8+细胞数，发酵饮料中、高剂量组能明显提升CD4+/CD8+比值(P＜0.05)，且效果优于水提物组。
发酵饮料对血清IL-2影响研究：
IL-2是一种具有多向性作用的因子，主要由活化的淋己细胞产生，是机体中调节免疫功能最重要的淋巴因子之一，能够激活多种免疫细胞，诱导淋巴细胞的增生与免疫效应。有文献报道显示，高浓度的IL-2能够诱导自然杀伤细胞和T细胞来源的LAK细胞增殖并促进其活性，也可解除TIL细胞(肿瘤浸润淋巴细胞)的免疫抑制状态并增强免疫功能，测试结果见表4。
表4
空白组 模型组 未发酵组组 高剂量组 中等剂量组 低剂量组
IL2 67.32±3.18 46.54±2.19 54.67±2.61 65.47±2.64 62.37±3.54 56.74±2.03
发酵饮料对小鼠淋巴细胞增殖效果研究
末次给药20小时后眼球取血脫颈处死，置于75％乙醇溶液中浸泡，无菌条件下取小鼠脾脏冰上研磨，3mL Hank’s液将脾细胞冲入无菌平皿中，覆盖16层纱布于细胞悬液上，过滤吸出细胞悬液离心1000rmp 15分钟，弃掉上清液加入3mL完全1640营养液，调整脾细胞悬液1×106个/mL，取细胞悬液100μl/mL加入96孔板并加入浓度为10μg/mL的ConA 100μl/mL(终浓度5mg/mL)同时设置ConA对照孔及空白对照孔，平行3复孔。将96孔细胞培养板置于37℃的CO2培养箱解育68小时，培养终止前4小时每孔加入终浓度为5mg/mL的MTT10μL继续37℃的CO2培养箱解育4小时后800rpm离心10min弃上清液150μL每孔加入有机溶剂二甲基亚砜(DMSO)100μL及甘氨酸缓冲液20μL，570nm处酶标仪上测定OD值，计算结果，见表5。SI(刺激指数)＝OD加样孔/OD对照孔。
表5
空白组 模型组 未发酵组组 高剂量组 中等剂量组 低剂量组
SI 0.52±0.04 0.21±0.03 0.37±0.01 0.49±0.05 0.42±0.01 0.39±0.02
发酵饮料对小鼠肠道菌群影响效果研究，结果见表6。
表6
由上述实验结果可以看出，小鼠经化疗后，肠道菌群发生较大变化：肠杆菌、肠球菌、乳酸菌、双歧杆菌的数量都有显著下降。未经发酵的水提物对小鼠肠道菌群有一定的恢复和保护作用，且与化疗组相比有显著差异。高剂量组和中剂量组能够有效提高小鼠各种肠道菌群数量，且与水提物组有显著差异。
综上可知，北虫草共提物经醋酸菌、乳酸菌、酵母菌混合发酵后能够有效提高其提高免疫力能力。与传统水提物饮用比较，该发酵饮料提高免疫力效果好，口味好，可接受度高的优点，动物营养状况也有显著改善，且能够保护和修复肠道菌群。
上述参照实施例对该一种具有提高免疫力功效的中药发酵饮料及其制备方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种具有提高免疫力功效的中药发酵饮料，其特征在于：有效成分由北虫草枸杞金银花共提物、糖液、醋酸菌、乳酸菌和酵母菌组成，其中，每500mL北虫草枸杞金银花共提物中有糖液300mL、醋酸菌1×103-1×1013CFU、乳酸菌1×103-1×1013CFU，酵母菌1×103-1×1013CFU。
2.根据权利要求1所述的具有提高免疫力功效的中药发酵饮料，其特征在于：所述北虫草枸杞金银花共提物是由下述方法制备得到的：每10-80g北虫草与10-80g干枸杞、10-80g金银花混合并加入500mL纯净水70-100℃浸提10-120min，40目筛过滤，滤出渣再用纯净水70-100℃浸提10-120min，40目筛过滤，将两次滤液合并在一起，即得。
3.根据权利要求1所述的具有提高免疫力功效的中药发酵饮料，其特征在于：所述糖液是由下述方法制备得到的：每10-100g白砂糖与10-100g蜂蜜混合后加入300mL纯净水溶化过滤至澄清，即得。
4.根据权利要求1所述的具有提高免疫力功效的中药发酵饮料，其特征在于：每500mL北虫草枸杞金银花共提物中有糖液300mL、醋酸菌1×109CFU、乳酸菌1×1010CFU，酵母菌1×1010CFU。
5.根据权利要求1所述的具有提高免疫力功效的中药发酵饮料，其特征在于：所述北虫草枸杞金银花共提物中北虫草、干枸杞、金银花的质量比为7:4:2。
6.权利要求1所述具有提高免疫力功效的中药发酵饮料的制备方法，其特征在于：具体步骤为：
(1)按组方量将北虫草枸杞金银花共提物加糖液混合并加纯净水配平至1L，121℃，20min灭菌，待液体降温至室温，接入醋酸菌、乳酸菌和酵母菌，20-40℃发酵，发酵周期3-15d；
(2)将发酵液在无菌条件下离心：2000-10000rpm离心5-20min，将上层澄清液体进行0.2μm微孔滤膜过滤除菌，灌装即得。
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