CN106728038B - 一种防治水产动物肝胆疾病的中药饲料预混剂及其制备方法 - Google Patents

一种防治水产动物肝胆疾病的中药饲料预混剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种防治水产动物肝胆疾病的中药饲料预混剂及其制备方法，其特征在于：大青叶40‑60份，甘草10‑20份，大黄20‑40份，连翘10‑20份，茵陈10‑20份，白芍10‑20份，牡丹皮10‑20份，藿香10‑20份，加入8～12倍50％～80％乙醇溶液，回流提取2～3次，每次1～3h，回流温度50℃～80℃。冷却至室温，4000～10000rpm在线离心，经膜过滤，50℃～80℃低压浓缩体积至与原药材同等份量，加入1～3倍量米糠对浓缩液进行吸附，于70℃～90℃烘至干燥，粉碎后即得产品；其有益结果在于：本发明将药材进行低温回流提取，经离心，微膜与超膜过滤，纯化活性成分，最后浓缩、吸附、干燥形成粉剂产品。本产品有效降低水产动物肝胆综合征发生率，提高机体抗病能力，降低患肝胆疾病动物死亡率，降低水产养殖风险，提高经济效益。

Description

一种防治水产动物肝胆疾病的中药饲料预混剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及中药领域、饲料添加剂和水产疾病防控领域，具体涉及一种由纯中药制成用于防治肝胆疾病的饲料预混剂及其制备方法。
背景技术
随着现代农业的发展和农业科技的进步，水产养殖业也取得了迅猛发展。但是随着高密度，集约化养殖模式的出现，养殖水体环境日趋恶化，加大了水产疾病的诱发几率，同时由于饲料营养不均衡，药物滥用等原因，进一步导致水产病害的暴发，其中以肝胆疾患最为典型，即肝胆综合征，该类疾病是水产养殖中最常见危害较大的非传染性、非寄生性因素引起的肝脏损伤、肝功能障碍性疾病。在集约化高密度养殖模式下，一旦发生肝损伤及肝胆综合征等疾病，便会出现大规模和整体性死亡现象，死亡率高达80％～90％。由于该类疾病大多为累积性损伤引发的慢性病，在早期很容易被忽略。但随着病情的发展，出现一些肝胆肿大变色，体表发炎，腮丝变色，溃烂，内脏出血并出现死亡现象时，则说明病情已经非常严重，此时再实施治疗难度相当大。
目前用于治疗水产动物肝胆系统疾病的药物种类很多，其中大部分均为西药，根据临床应用情况，西药对肝胆疾病有一定的治疗作用，但作用单一，容易出现副作用和抗药性等问题。而中药利用辨证施治的治疗方法对整体进行调理，以到达防病治病的目的，有效避免了上述问题。但是由于市场中中药产品多为中药原料经过粉碎后复配而成，药物的消化吸收率低，有效成分不能充分利用，导致临床使用疗程长，见效慢。为此有些厂家将中药和西药以组合的形式进行使用，固然提高了治疗效果，但仍然无法规避耐药性方面的问题。
本发明以中医药理论为指导，对肝胆疾病治疗有显著效果的传统处方进行精简优化，筛选出一个由8味中药材组成的一种对水产动物肝胆损伤有显著修复效果的中药处方，并从中药的有效成分入手，利用高温回流提取、膜过滤纯化技术和低压浓缩技术，将中药的有效成分充分解离出来，再通过固体吸附工艺和烘干粉碎工艺，制备成饲料预混剂。有效克服了中药材中有效成分被纤维物质包裹而无法被充分吸收利用的弊端，减少了用药量，保证水产动物的适口性，更加具有针对性。目前该产品已经开始车间大规模生产，并在水产养殖市场中推广应用，市场反馈良好，并得到广大养殖户的广泛认可。
发明内容
本发明提供了一种防治水产动物肝胆疾病的饲料预混剂，用于水产动物肝胆疾病的防控和治疗，避免因肝损伤而引发的其他疾病，减少水产动物病害的发生。
本发明还提供了一种防治水产动物肝胆疾病的饲料预混剂的制备方法，其特征在于：该产品的处方组分主要由以下成分构成，大青叶40-60份，甘草10-20份，大黄20-40份，连翘10-20份，茵陈10-20份，白芍10-20份，牡丹皮10-20份，藿香10-20份。
该工艺其特征在于：按照权利要求1中的组方配比，加入8～12倍的50％～80％乙醇溶液，回流提取2～3次，每次1～3h，回流温度50℃～80℃。对提取溶液在线高速离心，弃去沉淀，离心溶液经微孔滤膜与超微滤膜过滤，50℃～80℃减压浓缩至与原药材同等份量，加入1～3倍量的米糠对浓缩液进行吸附，于70℃～90℃烘干箱内烘至干燥，粉碎后即得产品。
工艺步骤如下：
(1)本饲料预混剂先将8种药材粉碎成粗粉，按照处方比例称取药材粗粉，投于回流提取罐内。
(2)将配制完毕的50％～80％的乙醇溶液按照8～12倍量体积注入回流提取罐内，密封，升温至50℃～80℃，回流提取2～3次，每次1～3h。
(3)将回流提取液迅速冷却至室温，以4000～10000rpm在线高速离心，离心液经膜过滤，50℃～80℃低压浓缩体积至与原药材同等份量。
(4)利用1～3倍量的米糠为辅料吸附浓缩液，于混料罐中充分混合后置于70℃～90℃烘干箱内烘至干燥，粉碎后即得产品。
其中，步骤(3)离心液经膜过滤，首先将离心液进行孔径大小为0.5～0.9μm微膜过滤，过膜压力为0.1～0.3MPa，微膜过滤的作用在于：除去不溶性的微颗粒杂质，纯化提取液，提高活性物质纯度，保护后面的超滤膜。该工艺中所使用的超滤膜的截留分子量为50000～100000道尔顿，主要目的在于截留分子量高于50000～100000道尔顿的高分子杂质(如高分子蛋白和多糖等)，提高提取物活性物质的纯度，结果表明经超滤膜过滤后的提取产品在临床试验效果明显好于未过滤的产品。
本发明与现有的防治水产动物肝胆疾病的中药工艺相比具有以下优势：
1.首次将大青叶、甘草、大黄、连翘、茵陈、白芍、牡丹皮、藿香混合提取物应用到水产动物肝胆疾病的防治领域，尤其是增加牡丹皮和藿香后对药物的防治效果更显著。
2.利用回流醇提技术，显著提高大黄酸、靛玉红和甘草酸等活性成分的提取得率，保证产品在市场中的应用效果。
3.利用微滤膜和超滤膜分级纯化，显著提高活性物质纯度，增强产品药效，降低养殖应用成本。
4.本产品能够预防水产动物肝胆疾病的发生，显著降低肝胆疾病暴发后的死亡率。
5.本产品为纯中药植物饲料预混剂，安全无毒副作用，不产生耐药性。
附图说明
附图为本发明提取生产中药饲料预混剂的工艺流程图。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明作进一步说明，但并不仅局限于此。
实施例1
处方配比：大青叶60份，甘草10份，大黄20份，连翘20份，茵陈10份，白芍10份。
将配制完毕的65％的乙醇溶液按照10倍量体积注入提取罐内，密封后，升温至80℃，回流提取3次，每次1h。将回流提取液迅速冷却至室温，以8000rpm在线高速离心，50℃低压浓缩体积至与原药材同等份量。利用1倍量的米糠为辅料吸附浓缩液，于混料罐中充分混合后置于70℃烘干箱内烘干，粉碎后即得产品。
实施例2
处方配比：大青叶50份，甘草10份，大黄30份，连翘20份，茵陈10份，白芍10份，牡丹皮10份，藿香10份。
将配制完毕的65％的乙醇溶液按照10倍量体积注入提取罐内，密封后，升温至80℃，回流提取3次，每次1h。将回流提取液迅速冷却至室温，以8000rpm在线高速离心，离心液于50℃低压浓缩体积至与原药材同等份量。利用1倍量的米糠为辅料吸附浓缩液，于混料罐中充分混合后置于70℃烘干箱内烘干，粉碎后即得产品。
实施例3
处方配比：大青叶40份，甘草20份，大黄40份，连翘20份，茵陈10份，白芍10份，牡丹皮10份，藿香10份。
将配制完毕的65％的乙醇溶液按照10倍量体积注入提取罐内，密封后，升温至80℃，回流提取3次，每次1h。将回流提取液迅速冷却至室温，以8000rpm在线高速离心，离心液经0.5μm微膜过滤，再经截留分子量50000超滤膜纯化，50℃低压浓缩体积至与原药材同等份量。利用1倍量的米糠为辅料吸附浓缩液，于混料罐中充分混合后置于70℃烘干箱内烘干，粉碎后即得产品。
实施例4
处方配比：大青叶40份，甘草20份，大黄20份，连翘20份，茵陈20份，白芍20份，牡丹皮20份，藿香20份。
将配制完毕的65％的乙醇溶液按照10倍量体积注入提取罐内，密封后，升温至80℃，回流提取3次，每次1h。将回流提取液迅速冷却至室温，以8000rpm在线高速离心，离心液经0.5μm微膜过滤，再经截留分子量50000超滤膜纯化，50℃低压浓缩体积至与原药材同等份量。利用1倍量的米糠为辅料吸附浓缩液，于混料罐中充分混合后置于70℃烘干箱内烘干，粉碎后即得产品。
实施例5
处方配比：大青叶60份，甘草20份，大黄20份，连翘20份，茵陈10份，白芍10份，牡丹皮10份，藿香10份。
将配制完毕的65％的乙醇溶液按照10倍量体积注入提取罐内，密封后，升温至80℃，回流提取3次，每次1h。将回流提取液迅速冷却至室温，以8000rpm在线高速离心，离心液经0.5μm微膜过滤，再经截留分子量50000超滤膜纯化，50℃低压浓缩体积至与原药材同等份量。利用1倍量的米糠为辅料吸附浓缩液，于混料罐中充分混合后置于70℃烘干箱内烘干，粉碎后即得产品。
实施例6
处方配比：大青叶50份，甘草20份，大黄20份，连翘20份，茵陈20份，白芍20份，牡丹皮20份，藿香20份。
将配制完毕的65％的乙醇溶液按照8倍量体积注入提取罐内，密封后，升温至60℃，回流提取2次，每次1.5h。将回流提取液迅速冷却至室温，以4000rpm在线高速离心，离心液经0.5μm微膜过滤，再经截留分子量50000超滤膜纯化，60℃低压浓缩体积至与原药材同等份量。利用1倍量的米糠为辅料吸附浓缩液，于混料罐中充分混合后置于70℃烘干箱内烘干，粉碎后即得产品。
实施例7
处方配比：大青叶40份，甘草20份，大黄40份，连翘20份，茵陈20份，白芍20份，牡丹皮20份，藿香20份。
将配制完毕的65％的乙醇溶液按照10倍量体积注入提取罐内，密封后，升温至100℃，回流提取2次，每次2h。将回流提取液迅速冷却至室温，以10000rpm在线高速离心，离心液经0.5μm微膜过滤，再经截留分子量50000超滤膜纯化，80℃低压浓缩体积至与原药材同等份量。利用1倍量的米糠为辅料吸附浓缩液，于混料罐中充分混合后置于70℃烘干箱内烘干，粉碎后即得产品。
1.产品对水产动物肝损伤疾病防治试验研究：
1.1试验设计和试验饲料
本试验在基础日粮中添加本发明产品，由北京生泰尔科技股份有限公司提供。饲喂基础日粮为对照组；发明产品添加量设定为0.2％，具体饲料营养水平和试验设计见表1、2。
表1饲料组分及营养水平表
1.2试验动物及饲养
试验鱼来自重庆市荣昌县梅石坝渔场的1龄草鱼鱼种。在室内水泥池进行驯养1周，使用空白组混合饲料进行投喂。试验开始前24h停饲，选取体格健壮、规格均匀的个体，称重后随机放入各自鱼缸中并编号，每缸30尾。每组设3个平行，生长试验持续56d，每天早中晚投喂3次，投饵率为3-5％。
1.3指标测定
增重率＝(每尾终试平均体重-每尾始试平均体重)/每尾始试平均体重×100％
饵料系数＝鱼总增重量/总投饵量×100％
蛋白效率＝(体重增加量/饲料摄取量×蛋白质含量)×100％
成活率＝成活的数量/总数量×100％
鱼静脉取血注入EP管，离心(4000r/min，10min)，取血清用于各指标测定。超氧化物歧化酶(SOD)活性(参照Misra和Fridovich方法)测定；过氧化氢酶(CAT)活性(参照Aebi方法)；丙二醛含量(参照Mertens方法)，谷草转氨酶(谷草转氨酶检测试剂盒)，谷丙转氨酶(谷丙转氨酶检测试剂盒)。
1.4注射感染
养殖试验结束后，每缸取20尾草鱼，以腹腔注射的方式使草鱼感染肠型点状产气单孢菌。试验菌株取自上海海洋大学农业部渔业动植物病原库，菌株号：ST 78-3-3。将肠型点状产气单孢菌涂布于营养琼脂上，28℃下培养过夜，以制备菌悬液。梯度稀释制备菌悬液：用0.9％的无菌生理盐水将肠型点状产气单孢菌从营养琼脂平板上洗下菌落，采用活菌直接镜检计数法计数菌数，推算出菌悬液的活菌数，并将上述悬液稀释得到107cfu/ml。空白对照每尾鱼注射0.1mL无菌生理盐水，原试验缸的各组鱼为空白对照，并对最终死亡率作折算。
1.5试验结果与统计分析
1.5.1产品对草鱼生长性能的影响
按照临床试验设定试验流程和观察指标进行试验，具体试验结果见表3。
表3产品对草鱼生长性能的影响(平均值±标准误)(％湿重)
从表3可知，在草鱼饲料中添加0.2％的实施例产品后，各检测指标均有明显好转，其中实施例1的试验效果相比于其他实施例组较差，同时在实施例1组配方中增加牡丹皮和藿香后的各试验组对草鱼生长性能的改善作用显著，在此基础上经过膜过滤后的实施例组产品，在增重率、饵料系数和蛋白效率与空白对照组相比差异显著(P<0.05)，成活率均达到96％以上。说明专利产品在防治肝胆综合征疾病时对生长性能未造成副作用影响，相反，对草鱼的快速生长起到一定的促进作用，有效降低死亡率。
1.5.2产品对草鱼抗氧化指标的影响试验结果
本试验对饲喂专利产品后的草鱼抗氧化指标进行了检测，主要检测了超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、丙二醛含量，具体检测结果见表4。
表4草鱼抗氧化指标检测结果
从表4结果中可以看出，在草鱼饲料中添加实施例1-7产品后，各个免疫指标均呈现较明显的改善趋势，相对于空白对照组，各实施例组在增强机体抗氧化性方面起到积极作用，尤其是超氧化物歧化酶和丙二醛指标表现出显著性差异(P<0.05)；同时，实施例3-7的作用效果较为明显，增强了肝脏解毒排毒的功能，说明在原配方基础上增加牡丹皮和藿香两味中药并经膜过滤后的实施例组产品更充分的发挥其药效作用。总体说明，在饲料中添加专利产品有助于加强抗氧化机能，增强机体免疫力，同时降低肝胆综合征疾病的出现几率。
1.5.3产品对草鱼抗病能力的影响
对饲喂专利产品后的草鱼进行攻毒试验，持续观察死亡情况，统计死亡数据，并检测各试验组鱼血清中谷草转氨酶活性和谷丙转氨酶活性，比较各组之间的差异，具体试验结果见表5。
表5攻毒后草鱼的存活率％
草鱼感染肠型点状产气单孢菌后第1d各组均无草鱼死亡，第2d开始表现出明显的发病症状，肠道充血，体表有出血点。到第14d，空白对照组感染肠型点状产气单胞菌的最终存活率为60.0％；而各实施例组的存活率均高于空白对照组，说明在饲料中添加实施例产品能够有效降低由肠型点状产气单孢菌感染导致的肝胆综合征疾病造成的死亡率。同时对各试验组剩余草鱼血清中GOT和GPT酶活性进行检测，发现饲喂了实施例组产品的草鱼血清中两种酶活性要比空白对照组低，其中实施例2～7组差异明显(P<0.05)，说明在鱼体中感染了肠型点状产气单孢菌后对草鱼的肝脏造成一定的损害，使得此两种酶活水平较高；而饲喂了实施例组产品后，两种酶活性降低，说明产品对缓解草鱼的肝脏损伤起到明显作用。
2.产品对水产动物肝损伤疾病防治的大区临床应用试验：
案例1
本试验在基础日粮中添加实施例3产品，由北京生泰尔科技股份有限公司提供。
试验地点为浙江省湖州市某草鱼养殖基地，养殖面积10亩，水深1.2米。
鱼体病症：草鱼摄食量减少，甚至停食，有死亡情况出现，经剖解发现，肠壁充血发炎、轻按有脓液流出，肝脏肿大并变色，经鉴定可能是由肠型点状产气单孢菌致病菌引起的肝胆综合征。
治疗方案：按照每百公斤饲料中添加200g供试产品，1天2次，连续用药4天，第2天基本无死亡情况，摄食情况正常，4天之后病鱼的肝胆症状全部消失。
案例2
本试验在基础日粮中添加实施例4产品，由北京生泰尔科技股份有限公司提供。
试验地点为湖南常德市安乡县官当镇某渔场，养殖面积20亩，水深1.4米。
鱼体病症：长期有零星死亡，近期死亡数量上升，镜检下颌有轻微出血，尾鳍末端腐烂，鳃丝红肿，肛门红肿，解刨肝脏白绿相间色，易碎，胆囊肿大，肠道有食有脓液。经鉴定有嗜水气单胞菌感染迹象。
治疗方案：按照每百公斤饲料中添加200g供试产品，1天2次，连续用药5天，第3天死亡情况开始明显减少，摄食情况正常，第5天未出现死鱼情况，剖检后病鱼的肝胆症状全部消失。
案例3
本试验在基础日粮中添加实施例5产品，由北京生泰尔科技股份有限公司提供。
试验地点为浙江省绍兴市某罗非鱼养殖厂，养殖面积35亩，水深1.0米。
鱼体病症：病鱼食欲减退，鳃盖暗红、眼睛发白浑浊，肛门红肿，经剖解发现，肝脏肿大充血，呈黄白色、部分绿色，比较脆弱，肠道有轻微充血发炎，经检测可能是由链球菌引起的肝胆综合征。
治疗方案：按照每百公斤饲料中添加200g供试产品，1天2次，连续用药7天，死亡情况消失，摄食情况也有明显改善，经剖检大部分草鱼肝胆综合症状消失。
案例4
本试验在基础日粮中添加实施例6产品，由北京生泰尔科技股份有限公司提供。
试验地点为广东省湛江某渔场，养殖面积24亩，水深1.3米。
鱼体病症：草鱼开口变差，摄食量明显下降，经过解剖未发现明显器官病灶，个别鱼肝脏肿胀，所以初断鱼摄食不佳的原因为本身体质下降，肝脏及肠道出现问题。
治疗方案：按照每百公斤饲料中添加200g供试产品，1天2次，连续用药3天，摄食情况也有明显改善，后期连续阴雨天也未影响草鱼的摄食，池塘水面动静很大，鱼较活跃。
案例5
本试验在基础日粮中添加实施例7产品，由北京生泰尔科技股份有限公司提供。
试验地点为湖北省潜江市某水产养殖服务中心，养殖面积3亩，水深1.5米。
鱼体病症：死鱼体表完好、鳃正常、眼球凸出，解剖发现腹内有少量腹水、肝脏苍白、局部花肝、局部变绿，胆囊肿大，无充血现象，拨开鱼皮，肌肉有充血。初步诊断草鱼的病症主要由病毒性引起的。
治疗方案：按照每百公斤饲料中添加200g供试产品，1天2次，连续用药5天，死亡情况有所好转，但摄食情况不佳，经剖检发现草鱼肝脏仍存在异常，肝胆综合症状未完全消失。
由上述临床试验发现，本产品在防治由细菌引起的肝胆综合征方面能够起到良好的治疗效果，病鱼能在短时间内恢复正常；但是在解决由病毒引起的肝胆综合征方面，治疗周期较长，最终治疗效果也不太理想。所以本产品在用于防治由细菌引起的肝胆综合征方面效果最理想。

Claims (4)

1.一种防治水产动物肝胆疾病的中药饲料预混剂，其特征在于：该产品的处方组分由以下成分构成，大青叶40-60份，甘草10-20份，大黄20-40份，连翘10-20份，茵陈10-20份，白芍10-20份，牡丹皮10-20份，藿香10-20份。
2.一种防治水产动物肝胆疾病的中药饲料预混剂的制备方法，其特征在于：按照权利要求1中的组方配比，加入8～12倍的50％～80％乙醇溶液，回流提取2～3次，每次1～3h，回流温度50℃～80℃，将回流提取液迅速冷却至室温，以4000～10000rpm在线高速离心，离心液经膜过滤，50℃～80℃减压浓缩体积至与原药材同等份量，加入1～3倍量的米糠对浓缩液进行吸附，于70℃～90℃烘干箱内烘至干燥，粉碎后即得产品。
3.根据权利要求2所述的一种防治水产动物肝胆疾病的中药饲料预混剂的制备方法，其特征在于：离心液利用孔径大小0.5～0.9μm微膜过滤，过膜压力为0.1～0.3MPa。
4.根据权利要求3所述的一种防治水产动物肝胆疾病的中药饲料预混剂的制备方法，其特征在于：过滤液再用超滤膜过滤，超滤膜截留分子量为50000～100000道尔顿。
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