CN110314186A - 一种防治水产动物肠炎的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种由纯中药制成的用于防治水产动物肠炎病的药物组合物及其制备方法,其特征在于:该组合物由五倍子、乌梅、山茱萸、白头翁、黄柏、苦参组成,经乙醇溶液回流提取,离心,浓缩,吸附,烘干,粉碎所得。其有益结果在于:用于水产动物肠炎病的防控和治疗,减少水产动物养殖过程中因肠炎病害造成的损失。

Description

一种防治水产动物肠炎的中药组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及中药领域、药剂学领域和水产疾病防控领域,具体涉及一种由纯中药制成用于防治水产动物肠炎的药物组合物及其制备方法。
背景技术
随着我国鱼类养殖的集约化程度不断提升,养殖规模不断扩大,密度不断增加,鱼类病害频繁发生。水产药物在水产动物病害防治中占有重要地位,也是鱼类疾病防治的重要手段之一。目前,抗生素和化学药品的大量使用不仅会造成水产品药物残留,同时也产生微生物耐药及水环境污染等问题,威胁人类健康。中草药作为天然药物在防治水产动物疾病方面有着悠久的历史,因其具有毒副作用小、残留少、抗药性不明显等优点,逐渐受到生态养殖的重视和认可。肠炎是养殖鱼类经常发生的肠道性疾病,其主要原因是由于一些致病性细菌在鱼体消化道内繁殖、代谢,进而破坏鱼体肠壁结构,引起微生态环境失衡,消化吸收功能障碍等,严重时可造成鱼类大量死亡。中草药常通过采用饲料添加的方式给药,消化道是其直接作用部位,然而目前有关中草药对鱼类肠炎防治效果及其对鱼体肠道菌群影响的研究仍较为欠缺。
肠炎是困扰水产养殖业的重要疾病,一直以来主要用化学药物治疗。尽管抗生素类能较好杀灭肠炎致病菌,定期饲喂可以预防肠炎的发生,但抗生素的大量使用会造成水生动物肠道菌群失衡,消化吸收功能受到影响,同时,会造成抗药菌的滋生,加快超级菌的产生,对人类安全产生威胁。随着国家对食品安全的重视,减抗无抗必然会成为未来水产养殖业的发展趋势。
发明一种安全有效的防治水产动物肠炎的中药饲料添加药物是十分必要的。因此,我们利用肠炎致病菌(嗜水气单胞菌、大肠杆菌、沙门氏菌)对几千种中药进行体外抑菌筛选,并利用草鱼肠炎模型进行体内试验验证,最终获得了一种安全有效的防治水产动物肠炎的药物组合物。
发明内容
本发明提供了一种防治水产动物肠炎的中药组合物,该中药组合物由五倍子、乌梅、山茱萸、白头翁、黄柏、苦参组成,其配比可以为乌梅4-6份、山茱萸4-6份、白头翁2-4份、黄柏2-4份、五倍子1-3份、苦参1-3份,优选乌梅5份、山茱萸5份、白头翁3份、黄柏3份、五倍子2份、苦参2份。
本发明还提供了一种制备该组合物的方法,其特征在于:按组方配比称取原药材,加入提取溶剂提取、离心、浓缩、吸附、干燥、粉碎即得产品。提取溶剂可以为50%~80%乙醇溶液,提取方法可以是回流提取,提取溶剂用量可以为药材重量的8-12倍,回流提取温度可以是50℃~80℃,提取次数可以为2-3次,每次提取的时间可以为1-3小时,在线高速离心的转速可以是4000~10000转/分钟,提取液浓缩的温度可以是50℃~80℃,用于吸附的米糠的量可以是浓缩液重量的1-3倍,吸附后,烘干温度可以是70℃~90℃。
本发明与现有的防治水产动物肠炎的药物相比具有以下优势:
1.组方首创,首次将五倍子、乌梅、山茱萸、白头翁、黄柏、苦参混合提取物应用到水产动物肠炎的防治领域,组合后有显著增效作用,尤其是增加山茱萸、乌梅后对药物的防治效果更显著。
2.工艺独特,利用回流醇提技术,显著提高苦参碱、柠檬酸等活性成分的提取得率,保证产品在市场中的应用效果。
3.本产品能够预防水产动物肠炎的发生,显著降低肠炎暴发后的死亡率。
4.本产品为纯中药植物药物组合物,对人体安全,不污染环境,可自然降解,安全无毒副作用,不产生耐药性。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明作进一步说明,但并不仅局限于此。应当理解的是,本领域普通技术人员可根据本说明进行改进或转换,而这些改进和转换都应该属于本发明所附权利要求的保护范围。
试验药物:各实施例中药物组成,详见表1。
表1 各实施例中药物组成
制备方法:将配制完毕的65%的乙醇溶液按照药材质量10倍体积注入提取罐内,密封后,升温至80℃,回流提取3次,每次1h。将回流提取液迅速冷却至室温,以8000rpm在线高速离心,50℃低压浓缩体积至与原药材同等份量。利用1倍量的米糠为辅料吸附浓缩液,于混料罐中充分混合后置于70℃烘干箱内烘干,粉碎后即得半成品。实施例1-11均按上述方法制备得到半成品。最后,将各实施例的半成品与一定数量的米糠混合均匀,使各实施例成品重量相同。
一、利用嗜水气单胞菌构建草鱼肠炎模型评价各实施例对草鱼肠炎的防治效果
1实验目的
通过预防性给药后,利用肠炎致病菌攻毒的方法评价各实施例药物对草鱼细菌性肠炎的防治效果。
2实验方法
2.1实验药物
试验药物:实施例1-11(详见表1)、博落回散
2.2实验菌株
实验菌株:中国水产科学研究院珠江水产研究所提供7株嗜水气单胞菌及浙江省淡水水产研究所提供的肠炎致病菌1株,经攻毒造模实验反复筛选,确定珠江所的7号菌株为最佳攻毒用菌株。
2.3实验动物及分组
试验动物:草鱼(平均体重:50±10g)。
实验鱼在容积为50L的玻璃鱼缸内,28±1℃条件下暂养1周。
试验开始后,在20L的塑料盒中进行试验,组方及分组见下表2,每组10尾鱼,设置空白对照组和模型组每天用空白饲料饲喂,试验组每天饲喂药饵,日投喂量为鱼体重的2-3%,分早晚2次饱食投喂。每天排污、换水约30%。
连续饲喂药饵30天后,利用7号菌株进行肠道攻毒处理,24小时后剖检观察,计算肠炎疾病活性指数评分(disease activity index,DAI),评价该添加剂对草鱼细菌性肠炎的预防效果。
表2 实验分组情况
2.4攻毒方法
实验菌株活化培养:菌株采用LB培养基进行扩培,每100ml培养基接种甘油管菌种一支(1ml),培养24h后,紫外分光光度法测定菌液浓度,调整攻毒菌液的浓度为5×107cfu/ml。
攻毒前1天,饥饿处理,以减少肠道粘液及排泄物污染,进行细菌攻毒。用注射针(小鼠灌胃针头)从肛门插入至约3cm深进行肛灌处理。每尾鱼灌入0.5mL菌液。对照组肛灌相同体积的灭菌生理盐水。肛灌处理后,将鱼头部朝下2–3min,以避免灌入的菌液漏出。每组攻毒10尾鱼。攻毒后,停止饲喂。
2.5观察指标
在攻毒后24h,每组取10尾鱼进行体表观察、评分,剖检观察、评分,计算肠道疾病活性指数评分(disease activity index,DAI),计算各实施例对防治草鱼肠炎的有效率。
肠道疾病活性指数评分标准如下:(每条鱼各项评分之和即作为该鱼的肠道疾病活性指数评分)
(1)肛门炎症情况(无充血0分、轻微充血1分、中度充血2分、严重充血3分)
(2)体表充血情况(无充血0分、充血部位1-2处1分、充血部位3-5处2分、充血部位5处以上3分)
(3)腹水情况(无0分、少量1分、大量2分)
(4)肠道发红充血部位占比(无充血0分,1-25%充血1分,26-50%充血2分,51-75%充血3分,76-100%充血,4分)。
(5)肠道粘液(无粘液0分、少量1分、大量2分)
有效率=(模型组平均评分-实施例平均评分)/(模型组平均评分-空白组平均评分)×100%
3实验结果及分析
各组实施例药物有效率结果见下表3。
由表3可知,各实施例药物及阳性对照组对肠炎疾病防治的有效率均达到50%以上,其中多个实施例的有效率甚至达到了85%以上(实施例一、三、六、七、八、十、十一),说明该实施例组方可显著降低因细菌感染引起的肠炎症状,起到防治肠炎的效果。由实施例一与实施例四、五比较,发现在组方中加入乌梅和山茱萸后,组方防治肠炎的有效率大幅度提高,显示出乌梅和山茱萸在该组方中的重要作用。同时,通过本实验,确定优先的最佳组方为实施例一,即乌梅5份、山茱萸5份、白头翁3份、黄柏3份、五倍子2份、苦参2份。
表3 各组药物有效率结果
组号 实施例 乌梅 山茱萸 白头翁 黄柏 五倍子 苦参 有效率
1 实施例一 5 5 3 3 2 2 92.6%
2 实施例二 0 5 3 3 2 2 84.9%
3 实施例三 5 0 3 3 2 2 85.7%
4 实施例四 0 0 3 3 2 2 69.5%
5 实施例五 0 0 6 6 4 4 80.2%
6 实施例六 6 4 4 2 3 1 88.4%
7 实施例七 4 6 2 4 1 3 87.8%
8 实施例八 6 6 4 2 1 1 89.7%
9 实施例九 4 4 2 4 3 3 82.3%
10 实施例十 4 6 4 2 1 3 88.1%
11 实施例十一 6 4 2 4 3 1 88.9%
12 博落回散(阳性对照) - - - - - - 56.7%
5.结论与讨论
该实施例药物按推荐剂量添加到饲料中,可显著降低因肠炎致病菌感染引起的肠炎症状,具有防治肠炎的效果。其中实施例一对肠炎的有效率最高,达到92.6%,推荐为优选的最佳配方。
通过实施例间的对比发现,乌梅和山茱萸的加入对组方具有显著的增效作用,这也是本发明的一大创新点。
二、产品对水产动物肠炎防治的临床应用试验
为验证该中药组合物的临床使用效果,我们对优选的几个实施例开展了大量临床试验,下面选取部分案例进行简要介绍。
案例1
本试验在发病池塘拌饵投喂实施例一产品,由北京生泰尔科技股份有限公司提供。
试验地点:江苏省宜兴市某草鱼养殖基地,养殖面积60亩,水深2.2米。
鱼体病症:草鱼摄食量减少,出现零星死亡,捞取贴边独游的草鱼剖检,可发现腹水、肠道有大量黏液、肠道发红,食糜稀薄,有死亡情况出现,经分离鉴定,确定由于嗜水气单胞菌感染,引起的草鱼肠炎。
治疗方案:减少投喂,并在饵料中添加实施例一产品,按照每100kg饲料添加500g供试产品,1天1次,连用7天,第5天打样解剖观察,具有肠炎症状的鱼大量减少,第七天打样解剖观察,未发现病鱼,基本痊愈,逐渐恢复投喂量,肠炎症状未复发。
案例2
本试验在发病池塘拌饵投喂实施例六产品,由北京生泰尔科技股份有限公司提供。
试验地点:湖北仙桃市某渔场,养殖面积200亩,水深2.0米。
鱼体病症:长期有零星死亡,近期死亡数量上升,取样观察,肠道有大量黏液,肠壁溃烂,有大量腹水,摄食大大减少。经鉴定为肠炎致病菌感染。
治疗方案:按照每100kg饲料添加500g供试产品,1天1次,连用7天,第4天打样,整体肠炎症状显著减轻,第7天打样,肠炎症状基本消失,病鱼活力增强,摄食旺盛。
案例3
本试验在发病池塘拌饵投喂实施例八产品,由北京生泰尔科技股份有限公司提供。
试验地点:浙江省绍兴市某罗非鱼养殖厂,养殖面积55亩,水深1.8米。
鱼体病症:病鱼食欲减退,肛门红肿,经解剖观察,肠道无食物,有大量稀薄恶臭液体,肠道发红,每天死亡200多条。经分离致病菌鉴定为嗜水气单胞菌感染引起的肠炎。
治疗方案:按照每100kg饲料添加500g供试产品,1天1次,连续用药7天,死亡情况由原来的200多条减少到现在的十几条,摄食情况也有明显改善,经检查大部分罗非鱼肠炎症状消失,打样剖检,少量鱼仍有肠炎症状,又增加用药3天进行巩固,到第10天时镜检观察,已完全恢复健康,未发现有肠炎症状的病鱼。
综合大量临床试验,我们发现该中药组合物针对水产动物肠炎具有良好的治疗效果,通常连续用药7-10天,肠炎症状会明显改善甚至痊愈,效果良好。

Claims (3)

1.一种防治水产动物肠炎的中药组合物,其特征在于:该中药组合物由乌梅4-6份、山茱萸4-6份、白头翁2-4份、黄柏2-4份、五倍子1-3份、苦参1-3份组成。
2.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征在于:该中药组合物的最佳配比为乌梅5份、山茱萸5份、白头翁3份、黄柏3份、五倍子2份、苦参2份。
3.根据权利要求1或2所述中药组合物的制备方法,其特征在于:按组方配比称取原药材,加入药材总质量8~12倍体积的提取溶剂,回流提取2~3次,每次1~3h,将回流提取液迅速冷却至室温后,在线高速离心,低压浓缩体积至与原药材同等份量,加入1~3倍量的米糠对浓缩液进行吸附,烘至干燥,粉碎后即得产品。
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