CN104257721B - 一种防治水产动物链球菌病的中药组合物 - Google Patents

Abstract

本发明属水产养殖疾病防控领域，涉及一种防治水产动物链球菌病的中药组合物，是将金银花、马兜铃粉碎后混合得到混合料，然后用乙醇溶液提取，减压蒸馏回收全部乙醇，收集剩余提取液稀释或浓缩至琼脂扩散法抑菌圈直径为18mm的浓度，备用。本发明针对罗非鱼的链球菌病进行针对性筛选和组合，将天然中草药进行科学配伍，协同作用，能有效地抑制环境中链球菌的生长繁殖，降低链球菌病爆发的风险，可对罗非鱼链球菌病进行安全高效防治，具有高效、低毒、来源广泛、不易引起病原菌耐药等特点，有利于水产养殖业的健康发展。

Description

一种防治水产动物链球菌病的中药组合物

技术领域

本发明属水产养殖疾病防控领域，涉及一种链球菌病的防治药物，具体是一种防治水产动物链球菌病的中药组合物。

背景技术

链球菌是广泛分布于自然界的革兰氏阳性菌，大部分为过氧化氢酶阴性的兼性厌氧菌，呈球形或卵圆形，直径小于2μm呈链状排列，最适生长温度为20～34℃，是人、畜、鱼共患的病原菌，常感染猪、牛、羊、马、鸡等畜禽，最近在水貂、犊牛和兔等类禽畜也发现有链球菌，可引起化脓创和败血症，也表现为各种局限性感染，危害严重。对水生生物危害方面，链球菌广泛危害罗非鱼、虹鳟、斑点叉尾、牙鲆和多耙等淡海水养殖鱼类，其对温水性鱼类，尤其是对罗非鱼的危害最为严重。我国是全球最大的罗非鱼养殖国，2007年罗非鱼养殖产量达161.25万吨，占全球罗非鱼产量的62.1％，罗非鱼产品的出口已成为我国水产品出口创汇的主要品种之一。随着养殖集约化程度的不断提高，链球菌对罗非鱼的养殖以及罗非鱼产业的发展造成了巨大影响，该病发病速度快、流行范围广、死亡率高，2009年广东、海南、福建和广西地区养殖罗非鱼链球菌发病率为20～50％，死亡率达50～70％；2011年以来，罗非鱼链球菌病不仅发病时间提前，而且危害范围扩大，逐渐向原来不发病的小规格鱼种和鱼苗蔓延，损失极为惨重。目前，链球菌病已成为制约罗非鱼养殖可持续健康发展的最主要因素之一。

链球菌具有多种耐药和免疫逃避途径，耐药途径方面，仅针对阳离子抗菌肽的耐药途径就存在改变细胞表面电荷、青霉素结合蛋白调节、菌毛调节等途径；在免疫逃避方面，研究较多的有荚膜多糖抗原、Alp家族、β蛋白、C5a肽酶、Lmb、FbsA、Sip等介导的途径，其中荚膜多糖抗原含有末端唾液酸的成分，是抗吞噬细胞功能的重要因子，β蛋白具有与人IgA和因子H结合能力，有助于免疫逃避。随着罗非鱼链球菌病爆发日益频繁，许多养殖场为了控制病害的发生和蔓延，滥用和乱用抗生素等违禁药物进行疾病防控的现象也大幅增加，导致养殖罗非鱼产品违禁药物残留严重，已严重影响养殖罗非鱼产品品质，对消费者健康和养殖产品出口造成了巨大的潜在威胁。

中草药具有天然、毒副作用少、残留少、致病菌不易产生抗药性、资源丰富等优势，因其含有与动物的免疫功能密切相关的生物碱、黄酮、茶多酚、低聚糖、精油等，能促进机体的健康、减少抗生素的使用，其作用既针对致病微生物本身直接的抑制和杀灭作用，又可提高饲喂动物免疫技能和抗应激能力，因此在动物疾病和预防中发挥了重要的作用。将中草药成分作为药物或者饲料添加剂，用于防治水产养殖中容易出现的病害完全符合发展无公害水产业、生产绿色水产品的病害防治准则，尤其适用于当前水产业集约化、规模化生产的需要，便于进行高密度养殖病害的菌体防治，又可增强水产动物的免疫机能，提高养殖的养成率。因此针对链球菌存在的问题，亟需开发一种防治水产养殖动物链球菌病的中药组合物，以降低链球菌的耐药性和避免抗生素的药物残留，促进水产养殖业的健康和可持续发展。

发明内容

本发明的目的是提供一种防治水产动物链球菌病的中药组合物，将天然中草药进行科学配伍，协同作用，可对罗非鱼链球菌病进行安全高效防治，具有高效、低毒、来源广泛、不易引起病原菌耐药等特点。

本发明所采用的技术方案：

一种防治水产动物链球菌病的中药组合物，是将金银花、马兜铃粉碎后混合得到混合料，然后用60～80％的乙醇溶液在常温或加热至60℃以下提取1～4h，减压蒸馏回收全部乙醇，收集剩余提取液稀释或浓缩至琼脂扩散法抑菌圈直径为18mm的浓度，备用。所述混合料中金银花与马兜铃的重量比为1:1。

在提取过程中，乙醇溶液与混合料的体积质量比为18～22：1(L：kg)。

应用方法：将中药组合物提取液拌入饲料中(分为1号饲料和2号饲料，1号饲料每千克饲料拌200ml药液，2号饲料每千克饲料拌100ml药液)，首次投喂采用1号饲料投喂，之后采用2号饲料投喂，按鱼体重的1～2％进行投喂，一天投喂两次，连续投喂14d。

本发明针对罗非鱼的链球菌病进行针对性筛选和组合，将天然中草药进行科学配伍，协同作用，能有效地抑制环境中链球菌的生长繁殖，降低链球菌病爆发的风险，可对罗非鱼链球菌病进行安全高效防治，同时也能避免抗生素的滥用，具有高效、低毒、来源广泛、不易引起病原菌耐药等特点，有利于水产养殖业的健康发展。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。所述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。

实施例一

分别将金银花、马兜铃粉碎后按重量比为1:1的比例混合得到混合料，按乙醇溶液与混合料的体积质量比为20：1的比例用60％的乙醇溶液提取4h，提取温度50℃。减压蒸馏回收全部乙醇，收集剩余提取液，备用。

实施例二

分别将金银花、马兜铃粉碎后按重量比为1:1的比例混合得到混合料，按乙醇溶液与混合料的体积质量比为22：1的比例用70％的乙醇溶液提取3h，提取温度40℃。减压蒸馏回收全部乙醇，收集剩余提取液，备用。

实施例三

分别将金银花、马兜铃粉碎后按重量比为1:1的比例混合得到混合料，按乙醇溶液与混合料的体积质量比为19：1的比例用80％的乙醇溶液提取2h，提取温度30℃。减压蒸馏回收全部乙醇，收集剩余提取液，备用。

试验：

1、抑菌效果

采用60％、70％和80％乙醇、料液比1:18.7(g/ml)、浸提温度39℃、浸提时间2h的提取方法分别提取金银花、马兜铃，减压蒸馏回收全部乙醇，收集剩余提取液，备用。

采用琼脂扩散法测实施例所得提取液的抑菌效果，以金银花、马兜铃的单质提取液为对照，结果见表1。

表1 各提取液的抑菌效果

2、实体试验

A、取实施例三所得提取液用琼脂扩散法测定效价，并稀释至琼脂扩散法测定抑菌圈恰为18.00mm，每千克饲料拌200ml药液。

在养殖场，挑选体长10～15cm、健康、活力好的罗非鱼，在水泥池中暂养3d，暂养期间不投喂任何饲料，然后运回实验室，暂养于两个水族箱(75×60×65cm)中，每个水族箱7条，加水深35cm，水体24h连续充氧，每天投喂鱼体重1.0％的罗非鱼饲料，每天换水一次，每次换水量1/5，水体水温为30±2℃，桶中水体可见度为32cm后继续暂养7d。将暂养好的罗非鱼分成对照组和实验组两组，对照组投喂罗非鱼日常饲料，实验组投喂含药饲料，按鱼体重1％进行投喂，一日两次，连续投喂14d。以浓度为3×10⁵cfu/ml罗非鱼无乳链球菌菌悬液腹腔注射对两组罗非鱼进行攻毒，观察7d，对照组7条罗非鱼4d内全死亡，实验组7条罗非鱼全部存活，成活率达到100％。

B、取实施例三所得提取液用琼脂扩散法测定效价，并稀释至琼脂扩散法测定抑菌圈恰为18.00mm，拌入饲料中(分为1号饲料和2号饲料，1号饲料每千克饲料拌200ml药液，2号饲料每千克饲料拌100ml药液)投喂罗非鱼鱼苗，首次投喂采用1号饲料投喂，之后采用2号饲料投喂，一天投喂两次，连续投喂3-6d，四个重复。对照组投喂罗非鱼日常饲料。记录试验数据，结果见表2。

表2 罗非鱼鱼苗

结果表明，本发明中药组合对罗非鱼苗的无乳链球菌病治愈率达90.00％以上，有着显著的治疗效果。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (2)

1.一种防治水产动物链球菌病的中药组合物，其特征在于：是将金银花、马兜铃粉碎后混合得到混合料，然后用60～80％的乙醇溶液在常温或加热至60℃以下提取1～4h，减压蒸馏回收全部乙醇，收集剩余提取液稀释或浓缩至琼脂扩散法抑菌圈直径为18mm的浓度，备用；所述混合料中金银花与马兜铃的重量比为1:1。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于：乙醇溶液与混合料的体积质量比为18～22：1。