CN101332256B - 用于鸡传染性法氏囊炎的中药组合物及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于防治鸡传染性法氏囊炎的中药组合物及其制备方法。该药物组合物含有党参、黄芪、板蓝根、生地、当归、干草、大青叶、蒲公英、猪苓、连翘，用于鸡只扶正解毒、健脾利湿，提高机体免疫力。本发明的制备方法为：a、将组分分别粉碎成粗粉；b、取粗粉加入溶剂收集提取液；c、将得到的溶液进行浓缩；d、加入澄清剂充分搅拌并静置；e、将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，用本发明的制备方法实现的制剂疗效确切，质量可靠。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药组合物及其制备方法，特别涉及一种用于防治鸡传染性法氏囊炎的中药组合物及其制备方法。
背景技术
鸡传染性法氏囊炎(IBD)是由Birnaviredae科所属的Avibiranrus病毒所引起的一种急性、高传染性疾病。本病属于双股RNA病毒、无封套，对干燥、日光及部分消毒剂有抵抗力。本病1962年首先在美国的干保罗镇爆发，因此取名为干保罗病(Gumboro disease)。该病的临床表现为精神不振、厌食、间接性腹泻、震颤和重度虚弱，剖检变化以脱水、骨骼肌出血、肾小管尿酸盐沉积和法氏囊的淋巴细胞生成受到破坏，降低或不能产生免疫球蛋白，导致免疫机能障碍，因而雏鸡的免疫中枢器官受破坏，病鸡抗体生成受阻，抵抗力明显下降，甚至能使鸡群对痘苗接种的应答反应性降低。
鸡传染性法氏囊炎自二十世纪70年代在我国首次发现至今一直困扰着养殖业的健康发展，尤其是改革开放二十年来，我国畜牧业进入快速发展期，随着畜牧业向商业化、专业化、现代化转变，养禽业生产正向集约化、正规化发展。由于采取现代化管理技术及规范化防疫措施，许多集约化养殖厂烈性传染病已经得到控制，而鸡的传染性法氏囊炎，虽然我们国家成功的研制出预防传染性法氏囊炎病的疫苗，但疫苗的保护率一般低于90％，本病一旦在鸡厂发病，由于法氏囊病毒对外界环境抵抗力强，耐酸碱、对热稳定，所以很难根除，另外传统的治疗方法使用传染性法氏囊炎高免卵黄抗体需要注射给药，费时间费力、鸡只应激反应强烈，而西医对本病还没有较为有效的治疗方法，多采用对证治疗的辅助疗法。
发明内容
有鉴于此，本发明的主要目的在于提供用于防治鸡传染性法氏囊炎的中药组合物及其制备方法，用于鸡只扶正解毒、键脾利湿，提高机体免疫力，用本发明的制备方法实现的制剂疗效确切，质量可靠。
本发明药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)：
党参20-50重量份 黄芪40-80重量份 板蓝根30-60重量份
生地10-50重量份 当归1-30重量份 甘草10-30重量份
大青叶40-80重量份 蒲公英30-60重量份
猪苓20-60重量份 连翘10-50重量份。
本中药组合物的制备方法：
a、以上十味，将党参、黄芪、板蓝根、生地、当归、甘草、大青叶、蒲公英、猪苓、连翘分别粉碎成粗粉备用或混匀后直接分装；
b、取所述的粗粉放入多功能提取罐中，加入饮用水进行加热动态回流提取，减压低温浓缩，收集提取液及挥发油；
c、将得到的溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩，相对密度不低于1.05；
d、将符合标准的浓缩药液加入澄清剂，澄清剂为壳聚糖、101果汁澄清剂或AB澄清剂，并可以混合使用，添加比例为0.01％-5％，加入澄清剂后充分搅拌并静置；
e、将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，直接打入十万级区，加入回收的挥发油及0.1％吐温-80，加0.1％的苯甲酸钠和0.05％尼泊金为防腐剂直接分装即得合剂。
在上述中药组合物的制备方法中：
b方法为：将所述的粗粉放入超声逆流提取罐中用乙醇水混合液作溶剂进行提取，收集提取液；
e方法为将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，直接打入十万级区，加入0.1％苯甲酸钠和0.05％尼泊金为防腐剂直接分装即得合剂。
在上述中药组合物的制备方法中：
e方法为：将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，打入雾化干燥车间，过雾化干燥设备得到干燥粉，再按药粉7份、白碳黑或加益粉3份混合，总混时喷入挥发油，然后直接分装即得可溶性粉。
在上述中药组合物的制备方法中：
e方法为：将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，打入雾化干燥车间，过雾化干燥设备得到干燥粉，混合时喷入挥发油，然后直接分装即得浓缩浸膏粉。
在上述中药组合物的制备方法中：
e方法为：将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，打入雾化干燥车间，过雾化干燥设备得到干燥粉，然后按药物干粉7份、蔗糖2份、淀粉1份用一部制粒法制粒，然后干燥整粒，总混合时喷入挥发油，然后直接分装即得颗粒剂。
当上述中药组合物的制备方法中：
c方法为：将得到的溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩至200ml，加入乙醇，使溶液含醇量为70％，静置12小时，滤过，回收滤液中的乙醇；
d方法为：浓缩液加5％明胶溶液至无沉淀为止，冷藏12-24小时，滤过，滤液再加95％乙醇使溶液含醇量80％，静置12-24小时，滤过，回收滤液中的乙醇，浓缩至定量；
e方法为：第三次加95％乙醇使溶液含醇量为90％以上，用20％氢氧化钠调节ph值至4.5-6.5，冷藏12-24小时后，滤过，回收滤液中乙醇，加注射用水至全量，加5g药用碳，煮沸20分钟，放冷，滤过至澄明，灌封、灭菌即得注射剂。
所述的中药组合物在制备防治鸡的传染性法氏囊炎的药物中的应用。
中医认为传染性法氏囊炎主要是外感湿邪或寒热所伤。根据发病鸡只的临床病症、病理变化我们组方遵循以下三个原则：1、由于鸡的传染性法氏囊炎为“病毒性疾病”，中医认为是外感湿邪或寒热所伤，所以方中以大青叶为主药，起清热解毒，消肿退斑；2、法氏囊属于鸡的免疫器官，早期属于鸡的免疫中枢，它发生炎症，整个机体的免疫力低下，抗病力弱，所以方中，以党参、黄芪扶正固本提高免疫，消除免疫抑制，用当归清热凉血，解除炎症时的发热症状；3、又因法氏囊炎的解剖有肾脏肿胀这一症状，所以方中以猪苓渗水利湿消肿，缓解肾肿。
本发明的中药组合物是基于中兽医学的扶正兼驱邪等原则结合鸡传染性法氏囊炎特点和鸡只生长特点研制而成的，其组方原则是扶正固本、清热解毒、活血消肿、利水通淋。其方解如下：方中党参和黄芪扶正固本、补中益气，板蓝根和大青叶清肝热、解疫毒，生地清热凉血、补阴生津，当归补血、活血止痛，连翘和蒲公英清热散结、消肿止痛，猪苓利湿健脾胃，甘草调和诸药。综观全方具有扶正解毒、健脾利湿、和中止泻的作用。另外，方中党参、黄芪中均有有效成分可提高机体免疫力，是一种纯中药绿色制剂。
由此，本发明的用于防治鸡传染性法氏囊炎的中药组合物及其制备方法具有以下主要技术效果：
1、该组合为中草药制剂，可以给鸡群饮水、拌料或肌注使用，方便、有效，克服了注射高免蛋黄液可能带来的问题。另外，本组合为天然中草药，可以给鸡群混水或拌料使用，重症鸡只肌注，方便、快速、有效，对动物机体的副作用小，低残留，在公共卫生反面具有明显的优势，因此，该中药组合的研究和开发具有显著的现实意义；
2、该中药组合物对IBD的攻毒保护率最高可达88.82％，现场治疗有效率达92％，显效率达85％以上；
3、该中药组合可提高鸡群血清中的超氧化物歧化酶(T-SOD、Cu-Zn-SOD、Mn-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)丙二醛(MDA)的含量，使机体抵抗力增加。
具体实施方式
实施例1
本发明的中药组合物是由下述原料药制成的：
党参20g 黄芪60g 板蓝根40g 生地20g 当归30g
甘草30g 大青叶60g 蒲公英30g 猪苓50g 连翘20g
以上十味粉碎成粗粉混合均匀至全部通过80目筛分装。
实施例2
本发明的药物组合物是由下述原料药制成的：
党参30g 黄芪30g 板蓝根60g 生地10g 当归30g
甘草20g 大青叶80g 蒲公英30g 猪苓20g 连翘30g
以上十味粉碎成粗粉混合均匀至全部通过80筛分装。
实施例3
本发明合剂的制备方法：
a、称取党参20g、黄芪60g、板蓝根40g、生地20g、当归30g、甘草30g、大青叶60g、蒲公英30g、猪苓50g、连翘20g粉碎成粗粉；
b、粗粉放入多功能提取罐中，加入饮用水进行加热动态回流提取、减压低温浓缩，收集提取液及挥发油；
c、将得到的溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩，相对密度不低于1.05；
d、将符合标准的浓缩药液加入澄清剂，澄清剂可以为壳聚糖、101果汁澄清剂或AB澄清剂，并可以混合使用，添加比例为0.01％-5％，加入澄清剂后充分搅拌并静置；
e、将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，直接打入十万级区，加入回收的挥发油及0.1％吐温-80，加0.1％的苯甲酸钠和0.05％尼泊金为防腐剂直接分装即得。
实施例4
本发明合剂的另一种制备方法，包括如下步骤：
a、称取党参20g、黄芪60g、板蓝根40g、生地20g、当归30g、甘草30g、大青叶60g、蒲公英30g、猪苓50g、连翘20g粉碎成粗粉；
b、粗粉放入超声逆流提取罐中用乙醇水混合液作溶剂进行提取，收集提取液；
c、将得到的提取溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩，相对密度不低于1.05；
d、将符合标准的浓缩药液加入澄清剂，澄清剂可以为壳聚糖、101果汁澄清剂或AB澄清剂，并可以混合使用，添加比例为0.01％-5％，加入澄清剂后充分搅拌并静置；
e、将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，直接打入十万级区，加0.1％的苯甲酸钠和0.05％尼泊金为防腐剂直接分装即得。
实施例5
按照实施例3所述的方法，不同之处是选用下列重量的原料：党参30g、黄芪30g、板蓝根60g、生地10g、当归30g、甘草20g、大青叶80g、蒲公英30g、猪苓20g、连翘30g。
实施例6
按照实施例4所述的方法，不同之处是选用下列重量的原料：党参30g、黄芪30g、板蓝根60g、生地10g、当归30g、甘草20g、大青叶80g、蒲公英30g、猪苓20g、连翘30g。
实施例7
本发明可溶性粉的制备方法，包括如下步骤：
a、称取党参20g、黄芪60g、板蓝根40g、生地20g、当归30g、甘草30g、大青叶60g、蒲公英30g、猪苓50g、连翘20g粉碎成粗粉；
b、粗粉放入多功能提取罐中，加入饮用水进行加热动态回流提取、减压低温浓缩，收集提取液及挥发油；
c、将得到的溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩，相对密度不低于1.05；
d、将符合标准的浓缩药液加入澄清剂，澄清剂可以为壳聚糖、101果汁澄清剂或AB澄清剂，并可以混合使用，添加比例为0.01％-5％，加入澄清剂后充分搅拌并静置；
e、将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，打入雾化干燥车间，过雾化干燥设备得到干燥粉，再按药粉7份、白碳黑或加益粉3份混合，总混时喷入挥发油，然后直接分装即得。
实施例8
本发明可溶性粉的另一种制备方法，包括如下步骤：
a、称取党参20g、黄芪60g、板蓝根40g、生地20g、当归30g、甘草30g、大青叶60g、蒲公英30g、猪苓50g、连翘20g粉碎成粗粉；
b、粗粉放入超声逆流提取罐中用乙醇水混合液作溶剂进行提取，收集提取液；
c、将得到的溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩，相对密度不低于1.05；
d、将符合标准的浓缩药液加入澄清剂，澄清剂可以为壳聚糖、101果汁澄清剂或AB澄清剂，并可以混合使用，添加比例为0.01％-5％，加入澄清剂后充分搅拌并静置；
e、将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，打入雾化干燥车间，过雾化干燥设备得到干燥粉，再按药粉7份、白碳黑或加益粉3份混合，然后直接分装即得。
实施例9
按照实施例7所述的方法，不同之处是选用下列重量的原料：党参30g、黄芪30g、板蓝根60g、生地10g、当归30g、甘草20g、大青叶80g、蒲公英30g、猪苓20g、连翘30g。
实施例10
按照实施例8所述的方法，不同之处是选用下列重量的原料：党参30g、黄芪30g、板蓝根60g、生地10g、当归30g、甘草20g、大青叶80g、蒲公英30g、猪苓20g、连翘30g。
实施例11
本发明浓缩浸膏粉的制备方法，包括如下步骤：
a、称取党参20g、黄芪60g、板蓝根40g、生地20g、当归30g、甘草30g、大青叶60g、蒲公英30g、猪苓50g、连翘20g粉碎成粗粉；
b、粗粉放入多功能提取罐中，加入饮用水进行加热动态回流提取、减压低温浓缩，收集提取液及挥发油；
c、将得到的溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩，相对密度不低于1.05；
d、将符合标准的浓缩药液加入澄清剂，澄清剂可以为壳聚糖、101果汁澄清剂或AB澄清剂，并可以混合使用，添加比例为0.01％-5％，加入澄清剂后充分搅拌并静置；
e、将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，打入雾化干燥车间，过雾化干燥设备得到干燥粉，混合时喷入挥发油，然后直接分装即得。
实施例12
本发明浓缩浸膏粉的另一种制备方法，包括如下步骤：
a、称取党参20g、黄芪60g、板蓝根40g、生地20g、当归30g、甘草30g、大青叶60g、蒲公英30g、猪苓50g、连翘20g粉碎成粗粉；
b、粗粉放入超声逆流提取罐中用乙醇水混合液作溶剂进行提取，收集提取液；
c、将得到的溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩，相对密度不低于1.05；
d、将符合标准的浓缩药液加入澄清剂，澄清剂可以为壳聚糖、101果汁澄清剂或AB澄清剂，并可以混合使用，添加比例为0.01％-5％，加入澄清剂后充分搅拌并静置；
e、将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，打入雾化干燥车间，过雾化干燥设备得到干燥粉，然后直接分装即得。
实施例13
按照实施例11所述的方法，不同之处是选用下列重量的原料：党参30g、黄芪30g、板蓝根60g、生地10g、当归30g、甘草20g、大青叶80g、蒲公英30g、猪苓20g、连翘30g。
实施例14
按照实施例12所述的方法，不同之处是选用下列重量的原料：党参30g、黄芪30g、板蓝根60g、生地10g、当归30g、甘草20g、大青叶80g、蒲公英30g、猪苓20g、连翘30g。
实施例15
本发明颗粒剂的制备方法，包括如下步骤：
a、称取党参20g、黄芪60g、板蓝根40g、生地20g、当归30g、甘草30g、大青叶60g、蒲公英30g、猪苓50g、连翘20g粉碎成粗粉。
b、粗粉放入多功能提取罐中，加入饮用水进行加热动态回流提取、减压低温浓缩，收集提取液及挥发油；
c、将得到的溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩，相对密度不低于1.05；
d、将符合标准的浓缩药液加入澄清剂，澄清剂可以为壳聚糖、101果汁澄清剂或AB澄清剂，并可以混合使用，添加比例为0.01％-5％，加入澄清剂后充分搅拌并静置；
e、将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，打入雾化干燥车间，过雾化干燥设备得到干燥粉，然后按药物干粉7份、蔗糖2份、淀粉1份用一部制粒法制粒，然后干燥整粒，总混合时喷入挥发油，然后直接分装即得。
实施例16
本发明颗粒剂的另一种制备方法，包括如下步骤：
a、称取党参20g、黄芪60g、板蓝根40g、生地20g、当归30g、甘草30g、大青叶60g、蒲公英30g、猪苓50g、连翘20g粉碎成粗粉；
b、粗粉放入超声逆流提取罐中用乙醇水混合液作溶剂进行提取，收集提取液；
c、将得到的溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩，相对密度不低于1.05；
d、将符合标准的浓缩药液加入澄清剂，澄清剂可以为壳聚糖、101果汁澄清剂或AB澄清剂，并可以混合使用，添加比例为0.01％-5％，加入澄清剂后充分搅拌并静置；
e、将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，打入雾化干燥车间，过雾化干燥设备得到干燥粉，然后按药物干粉7份、蔗糖2份、淀粉1份用一部制粒法制粒，干燥、整粒，总混油，然后直接分装即得。
实施例17
按照实施例15所述的方法，不同之处是选用下列重量的原料：党参30g、黄芪30g、板蓝根60g、生地10g、当归30g、甘草20g、大青叶80g、蒲公英30g、猪苓20g、连翘30g。
实施例18
按照实施例16所述的方法，不同之处是选用下列重量的原料：党参30g、黄芪30g、板蓝根60g、生地10g、当归30g、甘草20g、大青叶80g、蒲公英30g、猪苓20g、连翘30g。
实施例19
本发明注射剂的制备方法，包括以下步骤：
a、称取党参20g、黄芪60g、板蓝根40g、生地20g、当归30g、甘草30g、大青叶60g、蒲公英30g、猪苓50g、连翘20g粉碎成粗粉；
b、粗粉放入多功能提取罐中，加入饮用水进行加热动态回流提取、减压低温浓缩，收集提取液及挥发油；
c、将得到的溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩至200ml，加入乙醇，使溶液含醇量为70％，静置12小时，滤过，回收滤液中的乙醇；
d、浓缩液加5％明胶溶液至无沉淀为止，冷藏12-24小时，滤过。滤液再加95％乙醇使溶液含醇量80％，静置12-24小时，滤过，回收滤液中的乙醇，浓缩至定量；
e、第三次加95％乙醇使溶液含醇量为90％以上，用20％氢氧化钠调节ph值至4.5-6.5，冷藏12-24小时后，滤过，回收滤液中乙醇，加注射用水至全量，加5g药用碳，煮沸20分钟，放冷，滤过至澄明，灌封、灭菌即得。
实施例20
本发明注射剂的另一种制备方法，包括以下步骤：
a、称取党参20g、黄芪60g、板蓝根40g、生地20g、当归30g、甘草30g、大青叶60g、蒲公英30g、猪苓50g、连翘20g粉碎成粗粉；
b、粗粉放入超声逆流提取罐中用乙醇水混合液作溶剂进行提取，收集提取液；
c、将得到的溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩至200ml，加入乙醇，使溶液含醇量为70％，静置12小时，滤过，回收滤液中的乙醇；
d、浓缩液加5％明胶溶液至无沉淀为止，冷藏12-24小时，滤过。滤液再加95％乙醇使溶液含醇量80％，静置12-24小时，滤过，回收滤液中的乙醇，浓缩至定量；
e、第三次加95％乙醇使溶液含醇量为90％以上，用20％氢氧化钠调节ph值至4.5-6.5，冷藏12-24小时后，滤过，回收滤液中乙醇，加注射用水至全量，加5g药用碳，煮沸20分钟，放冷，滤过至澄明。灌封、灭菌即得。
实施例21
按照实施例19所述的方法，不同之处是选用下列重量的原料：党参30g、黄芪30g、板蓝根60g、生地10g、当归30g、甘草20g、大青叶80g、蒲公英30g、猪苓20g、连翘30g。
实施例22
按照实施例20所述的方法，不同之处是选用下列重量的原料：党参30g、黄芪30g、板蓝根60g、生地10g、当归30g、甘草20g、大青叶80g、蒲公英30g、猪苓20g、连翘30g。
本发明的中药组合物在用于防治鸡传染性法氏囊炎的用量分别是：
(1)散剂用于防治传染性法氏囊炎：混饲 鸡1-2g；
(2)合剂用于防治传染性法氏囊炎：混饮 鸡1-2ml；
(3)可溶性粉用于防治传染性法氏囊炎：混饮 鸡1-2g；
(4)浓缩浸膏粉用于防治传染性法氏囊炎：混饮 鸡1-2g；
(5)颗粒剂用于防治传染性法氏囊炎：混饮 鸡1-2g；
(6)注射剂用于防治传染性法氏囊炎：皮下或肌肉注射 每1kg 体重0.5-1ml；
本发明做过以下功效试验：
试验一、防治鸡IBD的效果观察
摘要：将15日龄健康雏鸡180只随机分为6个组，通过实验室人工发病鸡传染性法氏囊病，分设高(2.0mL/只)、中(1.0mL/只)、低(0.5mL/只)剂量组和IBD高免卵黄抗体对照组，同时设阳性对照组(感染不给药)和健康对照组。除健康对照组外，其它各组试验鸡胸部肌肉注射鸡传染性法氏囊病毒液人工感染鸡传染性法氏囊病，同时通过饮水给药观察纯中药口服液的疗效。结果为高、中剂量组的治愈率和相对增重率与IBD高免卵黄抗体对照组相比差异不显著(P＞0.05)，表明该纯中药组合对鸡传染性法氏囊病的治疗效果与IBD高免卵黄抗体相当。
1 材料与方法
1.1 供试药品
1 试验药物 中药组合物，由党参、黄芪、板蓝根、生地、当归、甘草、大青叶、蒲公英、猪苓、连翘按一定比例制成口服液。批号(20050328)，规格250ml/瓶，由保定冀中药业有限公司生产。用法与用量；禽 混饮1.0ml/只，每日1次，连用3～5天。
2 对照药物 IBD高免卵黄抗体，批号(20050208)河北农业大学微生物实验室提供，用法与用量，肌肉注射，1ml/只用一次。
1.1.3 鸡传染性法氏囊病毒毒株(G5)，购自中国兽药监察所IBD抗原、阳性血清河北农大微生物实验室提供。
1.2 受试动物
1 日龄健康海兰雏鸡180只，雌雄兼有，喂以不含抗菌、抗病毒药物的全价配合饲料，常规饲养至15日龄，未接种过任何疫苗。将试验鸡随机分为6个组，即纯中药组合高、中、低剂量组、IBD高免卵黄抗体对照组、阳性对照组(感染不给药)和健康对照组(不感染不给药)。试验前和试验结束时分别称重，常规隔离饲养，自由采食和饮水。分组及处理情况见表1。
表1 试验鸡分组及处理
1.3 人工诱发出鸡传染性法氏囊病
1.3.1 标准毒株 鸡传染性法氏囊病毒毒株(G5)，购自中国兽药监察所。使用前，将鸡传染性法氏囊病毒标准毒株先接种孵化5天的鸡胚，48h将鸡胚致死，取尿囊液，用滴度稀释法测定病毒滴度为106.7-7.5。
1.3.2 接种量和细菌数 试验雏鸡胸部肌肉注射鸡传染性法氏囊病毒液0.3ml/只，健康对照组肌注灭菌生理盐水0.3ml/只。
1.3.3 反应观察 接种前后观察鸡的临床症状，主要包括精神状态、食欲、粪便及死亡情况，并分别记录，对死亡鸡进行尸体剖检，取肝、脾及肺进行细菌分离培养。
1.4 试验性治疗 雏鸡接种鸡传染性法氏囊病毒后，按照表1剂量对1-3组鸡进行饮水给药，1次/d，连续给药4d；第4组1.0ml/只，肌肉注射，IBD高免卵黄抗体，只用一次。用药结束后，继续观察15d，每天观察记录各组鸡的临床表现，对死亡鸡进行剖检，观察病理变化，并作病毒分离，确定死因，试验前后对每只鸡进行称重。
1.5 疗效判定指标
1.5.1 死亡率：凡在试验期间，出现鸡传染性法氏囊病典型症状并死亡，尸体剖检有特征性病变，从法氏囊、肝、脾、肺等器官组织中分离出鸡传染性法氏囊病毒，判为感染死亡。根据死亡鸡数计算各组的死亡率。
1.5.2 治愈率：凡在试验期间，经饮水给药后精神状态、食欲恢复正常，不再出现白色稀粪等临床症状均属治愈。根据治愈鸡数占试验鸡数的比例计算治愈率。
1.5.3 相对增重率：根据试验开始时和试验结束时的体重，计算各组的平均增重，据此计算试验组的相对增重率。相对增重率＝各用药组的平均增重/健康对照组的平均增重×100％，其中健康对照组设为100％。
1.6 数据的分析和处理 用生物统计学方法，对数据进行差异显著性检验，死亡率、治愈率采用χ2检验，相对增重率采用t检验。
2 结果
2.1 阳性对照组 30只雏鸡中有13只在接种鸡传染性法氏囊病毒后13-29h内死亡。临床表现为萎糜、呆立、垂翼、软嗉、聚堆等，接种后48h，排白色稀便。剖检变化为病鸡消瘦，胸腿肌有出血，法氏囊肿大，肝肿大，呈土黄色，胆囊扩张并积满粘稠胆汁，脾肿大暗红、脆弱，肾苍白肿大、有尿酸盐沉积，细菌学检验结果为阴性，病死鸡法氏囊、肝、脾经病毒培养、琼扩实验、悬滴标本、血清学检验等，均符合鸡传染性法氏囊病特征。
2.2 试验性治疗
与阳性对照组比较，试验组和药物对照组给药后，均能迅速减轻临床症状，试验期间各组的死亡率、治愈率和相对增重率见表2。
表2 纯中药对鸡传染性法氏囊炎的治疗效果
注：a与阳性对照组相比差异极显著(P＜0.01)；b与低剂量相比差异极显著(P＜0.01)；
3 讨论与结论
自表2可见，用药组的死亡率极显著低于阳性对照组；纯中药组合口服液高、中剂量组和IBD高免卵黄抗体对照组的治愈率极显著高于纯中药组合低剂量组，纯中药组合高、中剂量组与IBD高免卵黄抗体对照组差异不显著；纯中药组合高、中剂量组和IBD高免卵黄抗体对照组的相对增重率极显著高于阳性对照组和低剂量组，纯中药组合高、中剂量组与IBD高免卵黄抗体对照组间差异不显著。
按中兽医的观点，IBD属温热病，抗IBD病的中药方剂是根据温热病的辩证论治疗原则组方的。纯中药组合强调了整体观念，体现了扶正祛邪，标本兼治的原则。方中党参和黄芪扶正固本、补中益气，板蓝根和大青叶清肝热、解疫毒，生地清热凉血、补阴生津，当归补血、活血止痛，连翘和蒲公英清热散结、消肿止痛，猪苓利湿健脾胃，甘草调和诸药。综观全方具有清热解毒、健脾利湿、和中止泻的作用。
综上所述，纯中药组合对人工感染雏鸡传染性法氏囊病的治疗效果与IBD高免卵黄抗体相当，可以用于鸡传染性法氏囊病的防治，其临床推荐饮水剂量为禽混饮1.0ml/只，每日1次，连用3～5天。
纯中药组合高、中、低剂量治疗组，在治疗过程中未出现药物的中毒反应，严格按照推荐剂量使用本品是安全有效的。
试验二、中药组合物对鸡免疫力的影响
摘要：本实验观察了纯中药组合对正常雏鸡血清中清中GSH-Px、SOD活性及MDA含量的影响。在不同日龄(5d、14d、25d)、不同中药组合物剂量(0、2.5、5、10ms/只)水平下，以口服、肌肉注射的不同给药方式使用纯中药组合后，各试验组血清GSH-Px、SOD活性均表现显著升高(P＜0.05)，MDA含量均表现显著降低(P＜0.05)。表明纯中药组合物可提高鸡的抗氧化作用，提示纯中药组合物可通过增强免疫器官中GSH-Px、SOD活性提高免疫防御和免疫监视。
关键词：纯中药组合物；抗氧化作用；免疫功能；鸡
动物机体在新陈代谢的过程中，活性氧自由基(O2-)的产生和消除保持着一种动态平衡，O2-的消除主要依赖于机体完整的抗氧化防御系统的预防性或阻断性控制[1]。促进或提高O2-的消除，可通过减少脂质过氧化物及其降解产物的产生，减少对实质器官的病理损害，提高机体的抗病力，这其中发挥重要作用的是SOD和GSH-Px[2，3]。我们在纯中药组合物对鸡免疫力影响的研究中，测定了鸡血液中的SOD、GSH-Px活性及MDA含量的变化，以探讨机体抗氧化作用的改变对鸡免疫功能的影响。
1 材料与方法
1.1 供试动物
600只罗曼1日龄公雏，隔离饲养至所需日龄。
1.2 药品
纯中药组合物，保定市冀中兽药厂惠赠。
1.3 试验设计
采用5、14、和25日龄罗曼公雏各180只，各日龄组随机分为三组，每组60只，I组为对照组，II、III组为试验组，5日龄组采取皮下注射、14日龄组采用口服给药的方式使进入I-IV组鸡体内的纯中药组合物分别为0、2.5、5和10mg/只。5日龄组在5、12、19、26日龄每组随机取5只鸡，心脏采血，分离血清，-18℃条件备检；14日龄组采样时间为14、19、24、29、36日龄；25日龄组采样时间为25、30、35、40日龄。
1.4 测定项目与方法
血清中超氧化物歧化酶(T-SOD、Cu-Zn-SOD、Mn-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)丙二醛(MDA)测定采用南京建成生物技术公司生产的试剂盒。
2 统计分析
采用SAS统计分析软件进行方差分析与多重比较。
3 结果
3.15 日龄组测定结果
皮下注射纯中药组合物7d天内，各试验组GSH-Px活性逐渐升高，7d后逐渐下降，2.5mg/只组12日龄及5、10mg/只组12、19日龄GSH-Px测定值显著高于对照组(P＜0.05)，各实验组26日龄测定值与对照组差异不显著(P＞0.05)，其中以纯中药组合物5mg/只组血清GSH-Px活性最高；各试验组血清MDA含量7d内逐渐下降，7d后又逐渐升高，在相同的日龄水平下，各实验组12、19日龄血清MDA的含量显著低于对照组(p＜0.05)，26日龄测定值则与对照组差异不显著(P＞0.05)，其中以纯中药组合物5mg/只组血清MDA含量最低；血清T-SOD、Cu-Zn-SOD、Mn-SOD的活性变化趋势同GSH-Px(表1)。
表1 5日龄组血清GsH-Px)、SOD活性及MDA含量测定值(n＝5)
Table 1 Activity of GsH-Px)and SOD and contents of MAD in serum of 5 days groups(n＝5)
注：同一列数据在右上角凡是相同字母者，表示差异不显著(P＞0.05)，字母不相同者，表差异显著(p＜0.01)，以下各表均同。
Note：The same alphabets in the right side of the same list show no significance(p＞0.05)，on the contrary，having significance(P＜0.01).TheSame form was adopted in following tables.
3.2 14日龄组测定结果
在口服纯中药组合物后5d内，各试验组GSH-Px、SOD活性升高，显著高于对照组，5d后则逐渐下降，MDA含量的变化趋势同酶活性变化趋势相反(表2)。
表2 14日龄组血清GSP-Px、SOD活性及MDA含量测定值(n＝5)
Table2 Activity of GHS-Px and SOD and comtents of MDA in serum of 14days
groups
4 分析讨论
试验中，在不同日龄、不同纯中药组合剂量水平下，以皮下注射、口服给药的不同给药方式使用后，各试验组血清GSH-Px、SOD活性均表现升高，5-7天达到峰值，之后逐渐下降，但仍显著高于对照组，直到20-25d后与对照组才无显著差异(p＞0.05)；而各试验组血清MDA含量的变化与GSH-Px、SOD活性的变化相反，其中以5mg/只组变化最为显著。SOD和GSH-Px活性的升高，表明机体抗氧化能力的增强，脂质过氧化产物MDA的含量也必然随之降低。本试验血清中GSH-Px、SOD活性升高后有逐渐下降，MDA含量降低后又逐渐增加的变化规律可能与本试验中APS是单次给药而非继续使用有关。因此我们可以得出结论：该纯中药组合物的生物保护作用可以通过增强免疫器官中SOD和GSH-Px活性，提高免疫预防和免疫监视，增强实质器官的抗氧化作用，减少其细胞的病理变化，保护和维持机体的重要生命活动，提高机体抗病力。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。
Claims (14)
1.一种用于防治鸡传染性法氏囊炎的中药组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的：
党参20-50重量份 黄芪40-80重量份 板蓝根30-60重量份 生地10-50重量份
当归1-30重量份 甘草10-30重量份 大青叶40-80重量份
蒲公英30-60重量份 猪苓20-60重量份 连翘10-50重量份。
2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物是由下述原料制成的：
党参20重量份 黄芪60重量份 板蓝根40重量份 生地20重量份
当归30重量份 甘草30重量份 大青叶60重量份 蒲公英30重量份
猪苓50重量份 连翘20重量份。
3.一种用于防治鸡传染性法氏囊炎的中药组合物，其特征在于该中药组合物是由下述原料制成的：
党参30重量份 黄芪30重量份 板蓝根60重量份 生地10重量份
当归30重量份 甘草20重量份 大青叶80重量份 蒲公英30重量份
猪苓20重量份 连翘30重量份。
4.一种用于防治鸡传染性法氏囊炎的中药组合物的制备方法，其特征在于该方法为：
党参20-50重量份 黄芪40-80重量份 板蓝根30-60重量份 生地10-50重量份
当归1-30重量份 甘草10-30重量份 大青叶40-80重量份
蒲公英30-60重量份 猪苓20-60重量份 连翘10-50重量份
a、以上十味，将党参、黄芪、板蓝生地、当归、甘草、大青叶、蒲公英、猪苓、连翘分别粉碎成粗粉备用或混匀后直接分装；
b、取所述的粗粉放入多功能提取罐中，加入饮用水进行加热动态回流提取，减压低温浓缩，收集提取液及挥发油；
c、将得到的溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩，相对密度不低于1.05；
d、将符合标准的浓缩药液加入澄清剂，澄清剂为壳聚糖、101果汁澄清剂或AB澄清剂，并可以混合作用，添加比例为0.01％-5％，加入澄清剂后充分搅拌并静置；
e、将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，直接打入十万级区，加入回收的挥发油及0.1％吐温-80，加0.1％的苯甲酸钠和0.05％尼泊金为防腐剂直接分装即得合剂。
5.一种用于防治鸡传染性法氏囊炎的中药组合物的制备方法，其特征在于该方法为：
党参20-50重量份 黄芪40-80重量份 板蓝根30-60重量份 生地10-50重量份
当归1-30重量份 甘草10-30重量份 大青叶40-80重量份
蒲公英30-60重量份猪苓20-60重量份 连翘10-50重量份
a、以上十味，将党参、黄芪、板蓝根、生地、当归、甘草、大青叶、蒲公英、猪苓、连翘分别粉碎成粗粉备用或混匀后直接分装；
b、将所述的相粉放入超声逆流提取罐中用乙醇水混合液作溶剂进行提取，收集提取液；
c、将得到的溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩，相对密度不低于1.05；
d、将符合标准的浓缩药液加入澄清剂，澄清剂为壳聚糖、101果汁澄清剂或AB澄清剂，并可以混合使用，添加比例为0.01％-5％，加入澄清剂后充分搅拌并静置；
e、将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，直接打入十万级区，加入0.1％苯甲酸钠和0.05％尼泊金为防腐剂直接分装即得合剂。
6.一种用于防治鸡传染性法氏囊炎的中药组合物的制备方法，其特征在于该方法为：
党参20-50重量份 黄芪40-80重量份 板蓝根30-60重量份 生地10-50重量份
当归1-30重量份 甘草10-30重量份 大青叶40-80重量份
蒲公英30-60重量份 猪苓20-60重量份 连翘10-50重量份
a、以上十味，将党参、黄芪、板蓝根、生地、当归、甘草、大青叶、蒲公英、猪苓、连翘分别粉碎成粗粉备用或混匀后直接分装；
b、取所述的粗粉放入多功能提取罐中，加入饮用水进行加热动态回流提取，减压低温浓缩，收集提取液及挥发油；
c、将得到的溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩，相对密度不低于1.05；
d、将符合标准的浓缩药液加入澄清剂，澄清剂为壳聚糖、101果汁澄清剂或AB澄清剂，并可以混合使用，添加比例为0.01％-5％，加入澄清剂后充分搅拌并静置；
e、将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，打入雾化干燥车间，过雾化干燥设备得到干燥粉，再按药粉7份、白碳黑或加益粉3份混合，总混时喷入挥发油，然后直接分装即得可溶性粉。
7.一种用于防治鸡传染性法氏囊炎的中药组合物的制备方法，其特征在于该方法为：
党参20-50重量份 黄芪40-80重量份 板蓝根30-60重量份 生地10-50重量份
当归1-30重量份 甘草10-30重量份 大青叶40-80重量份
蒲公英30-60重量份猪苓20-60重量份 连翘10-50重量份
a、以上十味，将党参、黄芪、板蓝根、生地、当归、甘草、大青叶、蒲公英、猪苓、连翘分别粉碎成粗粉备用或混匀后直接分装；
b、将所述的粗粉放入超声逆流提取罐中用乙醇水混合液作溶剂进行提取，收集提取液；
c、将得到的溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩，相对密度不低于1.05；
d、将符合标准的浓缩药液加入澄清剂，澄清剂为壳聚糖、101果汁澄清剂或AB澄清剂，并可以混合使用，添加比例为0.01％-5％，加入澄清剂后充分搅拌并静置；
e、将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，打入雾化干燥车间，过雾化干燥设备得到干燥粉，再按药粉7份、白碳黑或加益粉3份混合，总混时喷入挥发油，然后直接分装即得可溶性粉。
8.一种用于防治鸡传染性法氏囊炎的中药组合物的制备方法，其特征在于该方法为：
党参20-50重量份 黄芪40-80重量份 板蓝根30-60重量份 生地10-50重量份
当归1-30重量份 甘草10-30重量份 大青叶40-80重量份
蒲公英30-60重量份 猪苓20-60重量份 连翘10-50重量份
a、以上十味，将党参、黄芪、板蓝根、生地、当归、甘草、大青叶、蒲公英、猪苓、连翘分别粉碎成粗粉备用或混匀后直接分装；
b、取所述的粗粉放入多功能提取罐中，加入饮用水进行加热动态回流提取，减压低温浓缩，收集提取液及挥发油；
c、将得到的溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩，相对密度不低于1.05；
d、将符合标准的浓缩药液加入澄清剂，澄清剂为壳聚糖、101果汁澄清剂或AB澄清剂，并可以混合使用，添加比例为0.01％-5％，加入澄清剂后充分搅拌并静置；
e、将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，打入雾化干燥车间，过雾化干燥设备得到干燥粉，混合时喷入挥发油，然后直接分装即得浓缩浸膏粉。
9.一种用于防治鸡传染性法氏囊炎的中药组合物的制备方法，其特征在于该方法为：
党参20-50重量份 黄芪40-80重量份 板蓝根30-60重量份 生地10-50重量份
当归1-30重量份 甘草10-30重量份 大青叶40-80重量份
蒲公英30-60重量份猪苓20-60重量份 连翘10-50重量份
a、以上十味，将党参、黄芪、板蓝根、生地、当归、甘草、大青叶、蒲公英、猪苓、连翘分别粉碎成粗粉备用或混匀后直接分装；
b、将所述的相粉放入超声逆流提取罐中用乙醇水混合液作溶剂进行提取，收集提取液；
c、将得到的溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩，相对密度不低于1.05；
d、将符合标准的浓缩药液加入澄清剂，澄清剂为壳聚糖、101果汁澄清剂或AB澄清剂，并可以混合使用，添加比例为0.01％-5％，加入澄清剂后充分搅拌并静置；
e、将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，打入雾化干燥车间，过雾化干燥设备得到干燥粉，混合时喷入挥发油，然后直接分装即得浓缩浸膏粉。
10.一种用于防治鸡传染性法氏囊炎的中药组合物的制备方法，其特征在于该方法为：
党参20-50重量份 黄芪40-80重量份 板蓝根30-60重量份 生地10-50重量份
当归1-30重量份 甘草10-30重量份 大青叶40-80重量份
蒲公英30-60重量份猪苓20-60重量份 连翘10-50重量份
a、以上十味，将党参、黄芪、板蓝根、生地、当归、甘草、大青叶、蒲公英、猪苓、连翘分别粉碎成粗粉备用或混匀后直接分装；
b、取所述的粗粉放入多功能提取罐中，加入饮用水进行加热动态回流提取，减压低温浓缩，收集提取液及挥发油；
c、将得到的溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩，相对密度不低于1.05；
d、将符合标准的浓缩药液加入澄清剂，澄清剂为壳聚糖、101果汁澄清剂或AB澄清剂，并可以混合使用，添加比例为0.01％-5％，加入澄清剂后充分搅拌并静置；
e、将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，打入雾化干燥车间，过雾化干燥设备得到干燥粉，然后按药物干粉7份、蔗糖2份、淀粉1份用一步制粒法制粒，然后干燥整粒，总混合时喷入挥发油，然后直接分装即得颗粒剂。
11.一种用于防治鸡传染性法氏囊炎的中药组合物的制备方法，其特征在于该方法为：
党参20-50重量份 黄芪40-80重量份 板蓝根30-60重量份 生地10-50重量份
当归1-30重量份 甘草10-30重量份 大青叶40-80重量份
蒲公英30-60重量份猪苓20-60重量份 连翘10-50重量份
a、以上十味，将党参、黄芪、板蓝根、生地、当归、甘草、大青叶、蒲公英、猪苓、连翘分别粉碎成粗粉备用或混匀后直接分装；
b、将所述的相粉放入超声逆流提取罐中用乙醇水混合液作溶剂进行提取，收集提取液；
c、将得到的溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩，相对密度不低于1.05；
d、将符合标准的浓缩药液加入澄清剂，澄清剂为壳聚糖、101果汁澄清剂或AB澄清剂，并可以混合使用，添加比例为0.01％-5％，加入澄清剂后充分搅拌并静置；
e、将澄清后的药液通过工业离心机去掉沉淀物得到符合标准的药液，打入雾化干燥车间，过雾化干燥设备得到干燥粉，然后按药物干粉7份、蔗糖2份、淀粉1份用一部制粒法制粒，然后干燥整粒，总混合时喷入挥发油，然后直接分装即得颗粒剂。
12.一种用于防治鸡传染性法氏囊炎的中药组合物的制备方法，其特征在于该方法为：
党参20-50重量份 黄芪40-80重量份 板蓝根30-60重量份 生地10-50重量份
当归1-30重量份 甘草10-30重量份 大青叶40-80重量份
蒲公英30-60重量份 猪苓20-60重量份 连翘10-50重量份
a、以上十味，将党参、黄芪、板蓝根、生地、当归、甘草、大青叶、蒲公英、猪苓、连翘分别粉碎成粗粉备用或混匀后直接分装；
b、取所述的粗粉放入多功能提取罐中，加入饮用水进行加热动态回流提取，减压低温浓缩，收集提取液及挥发油；
c、将得到的溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩至200ml，加入乙醇，使溶液含醇量为70％，静置12小时，滤过，回收滤液中的乙醇；
d、浓缩液加5％明胶溶液至无沉淀为止，冷藏12-24小时，滤过，滤液再加95％乙醇使溶液含醇量80％，静置12-24小时，滤过，回收滤液中的乙醇，浓缩至定量；
e、第三次加95％乙醇使溶液含醇量为90％以上，用20％氢氧化钠调节ph值至4.5-6.5，冷藏12-24小时后，滤过，回收滤液中乙醇，加注射用水至全量，加5g药用碳，煮沸20分钟，放冷，滤过至澄明，灌封、灭菌即得注射剂。
13.一种用于防治鸡传染性法氏囊炎的中药组合物的制备方法，其特征在于该方法为：
党参20-50重量份 黄芪40-80重量份 板蓝根30-60重量份 生地10-50重量份
当归1-30重量份 甘草10-30重量份 大青叶40-80重量份
蒲公英30-60重量份猪苓20-60重量份 连翘10-50重量份
a、以上十味，将党参、黄芪、板蓝根、生地、当归、甘草、大青叶、蒲公英、猪苓、连翘分别粉碎成粗粉备用或混匀后直接分装；
b、将所述的粗粉放入超声逆流提取罐中用乙醇水混合液作溶剂进行提取，收集提取液；
c、将得到的溶液打入双效蒸馏浓缩罐中进行浓缩至200ml，加入乙醇，使溶液含醇量为70％，静置12小时，滤过，回收滤液中的乙醇；
d、浓缩液加5％明胶溶液至无沉淀为止，冷藏12-24小时，滤过，滤液再加95％乙醇使溶液含醇量80％，静置12-24小时，滤过，回收滤液中的乙醇，浓缩至定量；
e、第三次加95％乙醇使溶液含醇量为90％以上，用20％氢氧化钠调节ph值至4.5-6.5，冷藏12-24小时后，滤过，回收滤液中乙醇，加注射用水至全量，加5g药用碳，煮沸20分钟，放冷，滤过至澄明，灌封、灭菌即得注射剂。
14.如权利要求1-3中任何一项所述的中药组合物在制备防治鸡传染性法氏囊炎的药物中的应用。
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