CN1108944A - 用于保健和治疗的富硒微生物制剂及其生产方法 - Google Patents

Abstract

用于保健和治疗目的的富硒微生物组合物，是一 种经过微生物发酵而形成的含有光合细菌菌体蛋白 及其代谢分泌物，有机硒化合物和中草药发酵物的混 合物。它的制备方法是将含有淀粉、无机硒及中草药 提取物的混合物作为培养基，培养光合细菌而得的红 色细菌混悬物，进一步加工成各种食品和药物。

Description

本发明涉及一种利用微生物制备的保健、治疗制品及其生产方法，具体说是一种利用光合细菌生产含有有机硒和中药有效成份及光合细菌菌体蛋白的保健治疗制剂。

目前已知的合成有机硒的方法很多，主要分两种：一种为生物法，如硒酵母、硒蘑菇；另一种为生物化学法，如卡拉胶、硫代硫酸软骨素等，其硒转化率低，转化的产物单一，只含有硒蛋白或硒酸酯多糖，而象硒核酸，硒卜啉色素从未见报导。

本发明人经研究发现：利用光合细菌可以将无机硒转化为包括硒蛋白、硒酸酯多糖、硒核酸。硒卜啉色素等有机硒化合物。同时，光合细菌菌体蛋白含有18种氨基酸，多种维生素，其中B族维生素特别是B₁₂的含量远远高于酵母。另外，含有泛醌、卜啉色素及类胡萝卜色素等化合物及核酸片段，作为转化无机硒远优于酵母。

中药有多种加工方法。如水提、酒精提取，CN    93104737.4是利用食用菌发酵加工中草药。本发明人研究发现，光合细菌能利用中草药中的一些小分子，合成光合细菌的菌体蛋白，同时又不破坏药效成份，二者合起来，形成一种比中药成份更加丰富的药物。

本发明的目的是，提供一种利用微生物转化无机硒及加工中草药的方法，二者合二为一就形成一种利用微生物生产用于治疗和保健的富硒微生物制剂的方法。

本发明中所述的用于生产富硒微生物保健和治疗制剂的微生物为CGMCC    NO    0192光合细菌，于1993年2月22日已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）保藏，其中含有9株光合细菌，分别为Rhodospirillium1株Rhodopseudomonas2株Rodobacter2株Chromatium1株Chlorobium1株红硫细菌2株。

光合细菌混合培养物CGMCC NO 0192的培养方法为：1000ml蒸馏水中加入1gKH₂PO₄，0.5gMgCl₂.6H₂O，0.1gCaCl₂.2H₂O，1gNH₄Cl，3gNaHCO₃，0.7gNag₂SO₄，1gNaCl，1ml无硫酸盐微量元素溶液及1ml维生素溶液，在常规有机碳源条件下，调节最初PH为6.9，用光照厌氧法培养，光波为可见光偏长波，光照强度为1000-3000lux，培养物逐渐变红。其生长检测是测其培养物在630nm处的吸收光谱，随着菌液的生长，其0.D630nm的吸收逐渐增加。无硫酸盐微量元素溶液为：将1.8gFeCl₂.4H₂O、250mgCOCl₂.6H₂O，10mgNlCl₂.6H₂O，10mgCaCl₂.5H₂O，70mgMnCl₂.4H₂O，100mgZnCl₂，500mgH₃BO₃，30mgNa2MO₄2H₂O，10mgNa2SeO₃.5H₂O溶解1000ml蒸馏水中，溶液的PH值用HCL调节至2-3。

维生素溶液是100ml蒸馏水中含有10mg生物素，35mg烟酰胺，30mg二氧化硫胺素，20mg钙对一氨基苯甲酸，10mg盐酸吡哆醛，10mg泛酸钙，5mg维生素B₁₂。

本发明的实施方案是：10-30%（以重量计）的淀粉水溶液与10-30%的豆粉1：1混合，用1NHCl调PH为2，煮0.5-2小时，用NaOH调PH为中性；按每种中草药10g/10L培养基的量称取菊花、黄精、五加皮、地骨皮、蚤休、茯苓、地苓、桑粟肖、龟板、红花、牧枥、山芋、苟杞子、女贞子14种中草药，加10倍重量的水浸泡24小时，水煮抽提直至体积缩小到约一半为止，与糖化后的淀粉溶液混合，10-30℃进行酸化8-48小时，使PH至4-5，沉淀2小时取出上清液，加至400-800ppm的无机硒，用NaHCO₃调PH为中性，经加压1Kg，126℃灭菌30分钟，冷却至室温，无菌接入占液体总量20%的CGMCC NO 0192光合细菌培养混合物或其中的任何单一菌株培养物，在10-30℃，最好是28-30℃，溶氧为0.1～1PPm，最好是0.5PPm，光强为1000-3000Lux，最佳是2000Lux的条件下培养8-12天，即得红色富硒光合细菌保健和治疗剂，其中含有光合细菌菌体细胞为20×10⁸～80×10⁸个/ml，含有硒蛋白，硒酸酯多糖及硒核酸、硒卜啉类色素四类有机硒化合物，有机总硒含量为320～724mg/L，同时亦含有皂、胆碱、磷脂等多种药效成份。

本发明中的硒卜啉色素，是一类含有Se-C键的卜啉类化合物，将培养好的硒光合细菌，在5000rpm离心20分钟，取其沉淀物，悬于1：5体积的4mol/L的氢溴酸溶液中，超声波破碎，再在50℃充氮气的环境中水解50小时，再用体积比为1：5的四氯化碳抽提24小时，取出四氯化碳层，蒸干，即得硒卜啉色素。

本发明中的硒核酸，是一种含有硒的转移RNA（RNA），用常规的方法分离硒光合细菌的总RNA，每用DEAE-纤维素和苯甲酰纤维素（1：1）柱分离，其洗脱液为PH7.4的Tris-HCL缓冲液，洗脱速度为1-2ml/min。

发明中用于保健和治疗的富硒光合细菌制剂，能减少四氯化碳对肝的损伤，氮氧化物和硫氧化物对肺的损伤；减少X线引起的白细胞减少及染色体变异，增加小鼠的巨噬细胞吞噬量，抗小白鼠心肌缺氧和增强小鼠体力和抗应激作用，降低血糖和尿糖，因而对保护因化学毒物和辐射对机体的伤害。对心脏病、糖尿病，及免疫力低下均有疗效，对癌细胞亦表现出极大的抑制作用。经100人的临床观察表明，其对心脏病的有效率为81.2%；对糖尿病的有效率高达80.6%，也可以使68.8%的病人明显提高免疫力。

本发明的附图为工艺流程图，图中1（淀粉溶液）经IN的HCL调PH至2，水煮0.5-2小时得2（糖化液），3（中草药用水煮）抽提得4（抽提液），2、4混合得5（糖化抽提混合液），加入NaOH调至PH为中性，在10-30℃酸化4-48小时，用NaHCO₃调至中性，得6（中性营养液），7（加入亚硒酸钠），使液体硒含量为400-800ppm，高压灭菌后接入占液体总量20%的CGMCC NO 0192光合细菌，在10-30℃，DO为0.1-1ppm，光强为1000-3000Lux的条件下培养8-12天，即得8（红色的用于保健治疗的富硒光合细菌的制剂）。

实施例1

以占重量百分比15%的玉米和15%的黄豆用水浸泡8小时，粉碎其液体中用IN的HCL调PH为2，煮沸水解1小时后，用INaOH调至中性，菊花、黄精、五加皮、地骨皮、蚤休、茯苓、地苓、桑粟肖、龟板、红花、牧枥、山芋、苟杞子、女贞子14种中药分别按10g/L发酵液的量称取，用10倍重量的水浸泡24小时，水煮提取，直至体积减少一半为止，此时将中性的玉米、黄豆水解液加入中药液中，28℃酸化24小时，PH值降至4，沉淀2小时，取出上清液，加入600ppm的亚硒酸钠，用NaHCO调PH值为中性，在1Kg压力126℃灭菌30分钟，冷却后接入液体总重量20%的CGMCC    NO    0192中的Rhodopesudomonas,sphaeroides培养物，28℃溶氧为0.5ppm，光照为2000lux条件下培养10天，即得红色的用于保健和治疗的富硒光合细菌培养物，其中含有机硒400ppm，加入医用淀粉，将其制成胶囊，每粒胶囊0.3g，含硒100ug。该胶囊用于病人，每日两次，每次两粒，一个月为一疗程，其100人的临床结果如下：

病型        例数        显效        有效        无效        有效率

病型        例数        显效        有效        无效        有效率

心脏病        32        15        11        8        81.2%

糖尿病        36        19        10        7        80.6%

免疫力低下        32        14        8        10        68.8%

实施例2

以20%的黄豆浸泡，粉碎后，蒸沸5分钟，加入占液体重量2%的石膏粉，沉淀2小时，取其上清液，与实施例1中相同的方法提取中草药，豆浆上清液与中药水提液混合，在28℃条件下，酸化8小时，PH值为4.5，用IN的NaHCO₃调PH为中性，加入亚硒酸钠，使总液中硒含量达800ppm，高压灭菌后，接入占总重20%的CGMCC NO 0192光合细菌培养物，在0.5ppm溶氧，2000Lux光强，28℃培养12天，即得用于治疗和保健的光合菌制剂。

实施例3

实施例2中的亚硒酸钠换为二氧化硒，用同样的方法进行培养，得到的为光合细菌制剂，其硒含量为620mg/L，加工成胶囊，每粒0.3克，含硒147ug，其治疗效果为：心脏病有效率达74.3%，糖尿病有效率为81.3%，提高免疫效率为63.2%。

Claims (14)

1、一种用于保健和治疗的富硒微生物制剂的生产方法，其特征在于，将10-30%(以重量计)的淀粉水溶液糖化后，与中草药的水浸提液混合，加入微量的无机硒，在10-30℃厌氧酸化至PH4-5，调至中性，高压灭菌后，接入细菌培养物，在生长条件下发酵8-15天，所述的生长条件包括一种生理上可接受的PH、温度、溶氧和光照强度，即得红色微生物制剂。

2、通过权利要求1的方法生产的一种富硒微生物制剂，其特征在于所述富硒的微生物制剂，含有光合细菌菌体蛋白其及代谢物，有机硒化合物和中药药效成份。

3、根据权利要求1的方法，其中所述淀粉溶液以玉米淀粉加豆粉（1：1）混合为最佳。

4、根据权利要求1中的方法，其中所述的糖化是先用1N的HCL调PH为2，水煮0.5-2小时。

5、根据权利要求1中的方法，其中所述的中草药包括：菊花、黄精、五加皮、地骨皮、蚤体、茯苓、地苓、桑粟肖、龟板、红花、牧枥、山芋、苟杞子、女贞子或其中的任一种或几种药物，加入量为每种中草药10g/10L培养基。

6、根据权利要求1中的方法，其中中药水提液，是将权利要求5中的中药每种按10：1的水浸泡、煮沸直至体积缩小一半，即为中药水提液。

7、根据权利要求1中的方法，其中无机硒，可以是二氧化硒，也可以是亚硒酸钠，加入量为使总溶液中硒含量达200-800ppm。

8、根据权利要求1中的方法，其中高压灭菌温度为126℃，1Kg压力。

9、根据权利要求1中的方法，其中所用的细菌培养物为CGMCC    NO    0192光合细菌培养混合物，或用其中的任一菌株。

10、根据权利要求2中的富硒微生物制剂，其中光合细菌的菌体个数为20×10⁸～80×10⁸个/ml以及硒蛋白、硒酸酯多糖、硒核酸、硒卜啉类化合物。

11、一种利用微生物合成有机硒的方法。光合细菌利用权利要求7中的无机硒，通过权利要求1中的方法，将其转化为硒蛋白、硒酸酯多糖、硒核酸及硒卜啉类色素，得到的红色微生物制剂是一种富硒光合细菌制剂。

12、一种利用微生物加工中草药的方法。将权利要求5中的中草药或单一药的水提液，10-30℃自然酸化8-48小时，调PH至中性，接入占液体总重量20%的CGMCC    NO    0192光合细菌培养物或任一菌株培养物，在10-30℃，溶氧0.1-1ppm，光照为1000-3000Lux条件下培养8-12天，就得含有药效成份和光合细菌菌体的混合物。

13、一种生物合成硒卜啉色素的方法。通过权利要求12所述的方法制得的光合细菌菌体中含有大约占重量7%的硒卜啉色素，用特定方法可以提取纯的硒卜啉色素。

14、一种生物合成硒核酸的方法。通过权利要求12所述的方法制得的光合细菌体内，约含有占重量0.79%的硒核酸，用特定的方法可以提取纯的硒核酸。