CN100490829C - 治疗结肠炎、胃炎、胃癌的富硒猴头菌提取物制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种治疗结肠炎、胃炎、胃癌的富硒猴头菌提取物制剂,是以猴头菌作为富集硒元素的载体,采用液态深层发酵技术,在猴头菌的菌丝体和代谢产物生长过程中按照体积重量比加入10~50mg/100ml的亚硒酸钠(Na2SeO3·5H2O),使猴头菌培养产物中硒含量达到400~700μg/100g,按照常规工艺加入赋形剂,制成富硒猴头菌提取物制剂。该制剂具有保护胃粘膜,改善胃肠道营养状态,调节机体免疫功能,抑制细胞增生、DNA复制及蛋白质合成而直接影响肿瘤细胞的生长,从而起到增强机体免疫力和抗癌作用。该制剂疗效显著,与同类药物相比,具有治愈率高,无副作用等特点,其生产工艺简单,操作方便,富硒效果显著,具有潜在的应用和开发价值。
Description
技术领域
本发明属于猴头菌提取物制剂,具体涉及一种治疗结肠炎、胃炎、胃癌的富硒猴头菌提取物的制剂及其制备方法。
背景技术
硒是人体必需的微量元素,硒具有清除自由基、抗炎、抗肿瘤和抗脂质氧化作用,同时还具有延缓衰老,提高机体免疫力等功能。在药品和食物中直接添加无机硒盐,生物活性低,不但难以吸收,而且有毒副作用,使用效果不理想。目前人们主要依赖食物获得硒,生物源有机硒与无机硒相比,具有吸收利用率高,安全无毒等优点。我国有72%的地区属于缺硒地区,膳食结构中硒含量偏低,研究和开发富硒产品,是提高人民体质,增强抗病力的重要途径。
有关专家指出,硒能够参与生物体重要的代谢活动,具有保护细胞膜、提高免疫及抗癌的作用。提升血硒浓度能有效地治疗肿瘤,有机硒蛋白不仅能快速杀死肿瘤细胞,缩小病灶,还能“靶向”杀灭已经扩散到其它脏器、血液以及淋巴中的肿瘤细胞,杜绝肿瘤的转移复发,无任何毒副作用。
开发生物源有机硒,特别是生物转化能力强的菌类是给机体提供硒源的有效途径。不同食用菌对硒的耐受力是不同的。同样的食用菌,不同的硒含量对菌丝体的生长影响是不同的,硒浓度太大,会抑制生长,使产量急剧下降,使菌丝体处于生长停滞状态,甚至死亡;硒浓度太低,又达不到富硒的效果。选择耐受力强的菌种,提高菌株的富硒率是当前科研工作人员深入研究的课题之一。
猴头菌是一种珍贵的药食两用菌,其性平、味甘,利五脏,助消化,具有提高机体耐缺氧能力,提高心血输出量,加速血液循环等作用,对慢性胃炎、十二指肠溃疡、胃溃疡等多种消化道疾病有较好的疗效。由于猴头菌生长速度较慢,天然资源有限,目前生产单位多采用固体培养和液态深层培养技术生产猴头菌菌丝体及培养液,用以满足临床需要。
随着现代科学技术的发展和临床试验的反复证明,猴头菌的药用价值不断地被挖掘出新的内涵。国外对猴头菌做过研究的主要是日本,日本已从猴头菌子实体中提取了有效成分,开发研制了Cyathane制剂用于医药。国内对其在医药和食品工业方面的开发应用有一些报道,但用液态深层发酵这一生物技术生产猴头菌菌丝体用于医药、食品工业的报道还不多见,其实,经临床医药研究证实,菌丝体和子实体的效果完全相同,可借助于液态发酵这一生物技术进行猴头菌的纵深开发利用。
现国内已有富硒猴头菌培育的文献报道,但目前只停留在实验室的研究试验阶段。经国际、国内联机及光盘数据库检索,尚无富硒猴头菌提取物制剂工业化生产的相关报道。
发明内容
本发明的目的是以猴头菌作为富集硒元素的载体,采用液态深层发酵技术,在较短的时间内获得富硒的大量菌丝体和代谢产物,用以生产能够治疗结肠炎、胃炎、胃癌的富硒猴头菌提取物制剂。
猴头菌对硒的耐受力和转化率相对于一般菌种是比较高的。本发明从对硒的生物转化能力分析,选择富硒率高的猴头菌(Hericium erinaceus)作为菌种,菌种保藏单位:中国普通微生物菌种保藏管理中心。
本发明以猴头菌作为富集硒元素的载体,菌株代码:5.580,购于CGMCC,采用液态深层发酵技术,在猴头菌的菌丝体和代谢产物生长过程中按照体积重量比加入10~50mg/100ml的亚硒酸钠(Na2SeO3·5H2O),使猴头菌提取物中硒含量达到400~700μg/100g,按照常规工艺加入赋形剂,制成富硒猴头菌提取物制剂。
本发明治疗结肠炎、胃炎、胃癌的富硒猴头菌提取物制剂的制备方法:
A、斜面培养
培养基:PDA综合培养基+10~50mg/100ml的亚硒酸钠(Na2SeO3·5H2O),使培养基中的硒含量达到30-150μg/ml。
培养条件:25℃±1℃恒温条件下培养8-10天。
B、液体摇瓶种子培养:
培养基:麸皮4~6%、葡萄糖0.8~1.5%、蛋白胨0.05~0.3%、KH2PO40.1~0.3%、MgSO40.05~0.15%、VB1100μg/ml和10~50mg/100ml的亚硒酸钠(Na2SeO3·5H2O),补水到定体积,使培养基中的硒含量达到30-150μg/ml;其中麸皮煮沸30分钟后去渣取滤液。
培养条件:750ml摇瓶装量200ml,转速180转/分,温度25℃±1℃,在旋转式摇床上培养5~7天。
C、种子罐培养:
培养基:葡萄糖1~3%、黄豆粉0.5~1.5%、蛋白胨0.05~0.3%、KH2PO40.1~0.3%、MgSO40.05~0.15%、消沫油0.1~0.3%、VB1100μg/ml和10~50mg/100ml的亚硒酸钠(Na2SeO3·5H2O),补水到定体积,使培养基中的硒含量达到30-150μg/ml。
培养条件:150升种子罐投料100升,通气量1∶0.4~0.6V/V/分,温度26~28℃,培养5-7天。
D、发酵罐培养:
培养基:蔗糖2~4%、黄豆粉1~3%、蛋白胨0.1~0.5%、KH2PO40.1-0.3%、MgSO40.05-0.2%、消沫油0.1~0.3%和10~50mg/100ml的亚硒酸钠(Na2SeO3·5H2O),补水到定体积,使培养基中的硒含量达到30-150μg/ml。
培养条件:1500升或12000升发酵罐投料60~70%,通气量1∶0.6-0.8V/V/分,温度26-28℃,培养5-7天。
E、发酵液提取过程:
提取过程采用板框分离、双效浓缩、喷雾干燥,干燥后的富硒猴头菌提取物中硒含量达到400-700μg/100g;超微粉碎后按照常规工艺加入赋形剂,制成富硒猴头菌提取物制剂。
采用本发明的制备方法,猴头菌的富硒率可提高到7.86%,较现有资料中报道的猴头菌的富硒率有显著提高。本发明采用先进的生产工艺,使产品中含有的有效成份多糖、多肽及微量元素硒、锌、镁能较完整地保存下来,有效保护胃粘膜,改善胃肠道营养状态,调节机体免疫功能,抑制细胞增生、DNA复制及蛋白质合成而直接影响肿瘤细胞的生长,起到抗癌作用。本发明用富硒猴头菌提取物作为治疗结肠炎、胃炎、胃癌的制剂疗效显著,与同类药物相比,具有治愈率高,无副作用等特点。其生产工艺简单,操作方便,富硒效果显著,具有潜在的应用和开发价值。
具体实施方式
本发明选用的猴头菌,菌株编号:5.580,从中国普通微生物菌种保藏管理中心引进。采用三级深层发酵培养,发酵过程采用无菌操作,提取过程采用板框分离、双效浓缩、喷雾干燥,按照常规工艺加入赋形剂,制成富硒猴头菌提取物颗粒。
富硒猴头菌提取物的制备方法为:
A、斜面培养
培养基:PDA综合培养基+33.3mg/100ml的亚硒酸钠(Na2SeO3·5H2O),使培养基中的硒含量达到100μg/ml。
培养条件:25℃±1℃恒温条件下培养8-10天。
B、液体摇瓶培养:
培养基:麸皮5%、葡萄糖1%、蛋白胨0.1%、KH2PO40.15%、MgSO40.075%、VB1100μg/ml和33.3mg/100ml的亚硒酸钠(Na2SeO3·5H2O),补水到定体积,使培养基中的硒含量达到100μg/ml。其中麸皮煮沸30分钟后去渣取滤液。
培养条件:750ml摇瓶装量200ml,转速180转/分,温度25℃±1℃,在旋转式摇床上培养6天。
C、种子罐培养:
培养基:葡萄糖2%、黄豆粉1%、蛋白胨0.1%、KH2PO40.15%、MgSO40.075%、消沫油0.2%、VB1100μg/ml和33.3mg//100ml的亚硒酸钠(Na2SeO3·5H2O),补水到定体积,使培养基中的硒含量达到100μg/ml。
培养条件:150升种子罐投料100升,通气量1∶0.4-0.6V/V/分,温度27℃±1℃,培养4-5天。
D、发酵罐培养:
培养基:蔗糖3%、黄豆粉1.5%、蛋白胨0.4%、KH2PO40.15%、MgSO40.075%、消沫油0.3%和33.3mg//100ml的亚硒酸钠(Na2SeO3·5H2O),补水到定体积,使培养基中的硒含量达到100μg/ml。
培养条件:1500升发酵罐投料1000升或12000升发酵罐投料8000升,通气量1∶0.6-0.8V/V/分,温度26-28℃,培养6天。
E、发酵液提取过程:
提取过程采用板框分离、双效浓缩、喷雾干燥,干燥后的富硒猴头菌提取物中硒含量达到400-700μg/100g;经超微粉碎,细度在200目以上,按照常规工艺加入赋形剂,制成富硒猴头菌提取物颗粒。
按照本发明的制备方法,富硒猴头菌提取物还可以制成片剂、胶囊、口服液等多种剂型。
本发明用富硒猴头菌提取物颗粒治疗溃疡性结肠炎。经广东省惠州市中心人民医院临床疗效观察300例,治疗组服用富硒猴头菌提取物颗粒(山西康欣药业有限公司生产),对照组服用虎地胶囊(安徽古井集团九方制药有限公司生产),见“富硒猴头菌提取物颗粒”治疗溃疡性结肠炎的临床观察实验报告(附件一)。
临床疗效比较:治疗组150例,治愈130例(86.67%),好转17例(11.33%),无效3例(2.00%),总有效率98.00%。对照组150例,治愈99例(66.00%),好转20例(13.33%),无效31例(20.67%),总有效率79.33%。
服用“富硒猴头菌提取物颗粒”治疗结肠炎,临床痊愈率及总有效率均显著高于对照组。统计分析显示P<0.01,治疗组优于对照组。
经过对150例溃疡性结肠炎患者进行了为期一年的治疗观察与随访,总有效率达90%以上,愈后效果良好。结果表明:“富硒猴头菌提取物颗粒”治疗结肠炎较用虎地胶囊治疗溃疡性结肠炎疗效更好。其服用方便、复发率低,尚未发现不良反应,更适宜长期服用,是目前治疗溃疡性结肠炎的理想药物。
本发明用富硒猴头菌提取物颗粒治疗慢性萎缩性胃炎。经湖北省人民医院对慢性萎缩性胃炎临床观察300例,治疗组服用富硒猴头菌提取物颗粒(山西康欣药业有限公司生产),对照组服用胃复春(杭州胡庆余堂药业有限公司生产),见“富硒猴头菌提取物颗粒”治疗慢性萎缩性胃炎的的临床观察实验报告(附件二)。
临床疗效采用胃镜检查结果比较:治疗组150例,显效72例,有效67例,无效11例,显效率48%,总有效率为92.67%;对照组150例,显效39例,有效53例,无效58例,显效率26%,总有效率为61.33%。
服用“富硒猴头菌提取物颗粒”治疗慢性萎缩性胃炎显效率、总有效率均显著高于对照组,统计分析显示P<0.01,有显著性差异。
对150例慢性萎缩性胃炎患者进行了为期一年的治疗观察与随访,总有效率达90%以上,愈后效果良好。结果表明:“富硒猴头菌提取物颗粒”治疗慢性萎缩性胃炎方面较对照组胃复春疗效更好,并且服用方便、口感好,目前尚未发现有不良反应,适宜长期服用,是治疗慢性萎缩性胃炎的理想药物。
本发明用富硒猴头菌提取物颗粒治疗早期胃癌。经武汉大学中南医院对早期胃癌临床观察300例,治疗组服用富硒猴头菌提取物颗粒(山西康欣药业有限公司生产),对照组服用猴头菌片(山西康欣药业有限公司生产),见“富硒猴头菌提取物颗粒”治疗早期胃癌300例近期疗效观察(附件三)。
临床疗效比较:治疗组150例,有效117例,无效33例,有效率为78%;对照组150例,有效55例,无效95例,有效率36.67%。经卡方经验,X2=46.07,P<0.01,治疗组与对照组疗效差异有显著性,治疗组优于对照组。
用富硒猴头菌提取物颗粒对150例早期胃癌患者进行了为期半年的治疗观察与随访,与使用普通猴头菌片比较疗效显著。“富硒猴头菌提取物颗粒”采用液体深层发酵技术,提取猴头菌中有效成分猴头多糖、多肽,通过有效调节机体免疫和局部胃肠道免疫功能,改善胃肠道营养状态,对胃肠道肿瘤的治疗具有明显的效果;微量元素硒则通过提高机体的抗氧自由基的能力,调节机体免疫功能,抑制细胞增生、DNA复制及蛋白质合成而直接影响肿瘤细胞的生长,从而增强机体的抗癌作用。实验表明,“富硒猴头菌提取物颗粒”服用方便,疗效好、安全性高、适宜长期服用,值得临床推广使用。
Claims (2)
1、一种治疗结肠炎、胃炎、胃癌的富硒猴头菌提取物制剂的制备方法,其特征是:以猴头菌作为富集硒元素的载体,菌株代码5.580,购于CGMCC;
A、斜面培养:
培养基:PDA综合培养基+10~50mg/100ml的Na2SeO3·5H2O,使培养基中的硒含量达到30~150μg/ml;
培养条件:25℃±1℃恒温条件下培养8—10天;
B、液体摇瓶种子培养:
培养基:麸皮4~6%、葡萄糖0.8~1.5%、蛋白胨0.05~0.3%、KH2PO40.1~0.3%、MgSO40.05~0.1%、VB1 100μg/ml和10~50mg/100ml的Na2SeO3·5H20,补水到定体积,使培养基中的硒含量达到30~150μg/ml;其中麸皮煮沸30分钟后去渣取滤液;
培养条件:750ml摇瓶装量200ml,转速180转/分,温度25℃±1℃,在旋转式摇床上培养5~7天;
C、种子罐培养:
培养基:葡萄糖1~3%、黄豆粉0.5~1.5%、蛋白胨0.05~0.3%、KH2PO40.1~0.3%、MgSO40.05~0.15%、消沫油0.1~0.3%、VB1 100μg/ml和10~50mg/100ml的Na2SeO3·5H2O,补水到定体积,使培养基中的硒含量达到30~150μg/ml;
培养条件:150升种子罐投料100升,通气量1:0.4~0.6V/V/分,温度26~28℃,培养5—7天;
D、发酵罐培养:
培养基:蔗糖2~4%、黄豆粉1~3%、蛋白胨0.1~0.5%、KH2PO40.1~0.3%、MgSO40.05~0.2%、消沫油0.1~0.3%和10~50mg/100ml的Na2SeO3·5H2O,补水到定体积,使培养基中的硒含量达到30~150μg/ml;
培养条件:1500升或12000升发酵罐投料60~70%,通气量1:0.6~0.8V/V/分,温度26~28℃,培养5—7天;
E、发酵液提取过程:
提取过程采用板框分离、双效浓缩、喷雾干燥,干燥后的富硒猴头菌提取物中硒含量达到400—700μg/100g;经超微粉碎后按照常规工艺加入赋形剂,制成富硒猴头菌提取物制剂。
2、采用权利要求1所述的制备方法制成的治疗结肠炎、胃炎、胃癌的富硒猴头菌提取物制剂。
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四种食用菌富硒能力的比较研究. 尚德静等.食用菌学报,第6卷第3期. 1999 |
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