CN1284443C - 马蔺组培快繁体系构建方法 - Google Patents
马蔺组培快繁体系构建方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1284443C CN1284443C CN 200310118477 CN200310118477A CN1284443C CN 1284443 C CN1284443 C CN 1284443C CN 200310118477 CN200310118477 CN 200310118477 CN 200310118477 A CN200310118477 A CN 200310118477A CN 1284443 C CN1284443 C CN 1284443C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- medium
- plant hormone
- callus
- differentiation
- shoot proliferation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明为马蔺组培快繁体系构建技术，涉及绿色地被植物领域，作为优良的绿化草种的马蔺，存在着硬实率高和发芽率、发芽势低的繁殖局限性，为了克服这些缺点，本发明研究出了在外植体制备，愈伤组织诱导，绿苗分化，继代增殖生根培养，和试管苗移栽过程中各环节的操作规程和培养基采用了在MS培养基的基本成分中添加了琼脂粉，蔗糖和多个过程中的专用植物激素，调节pH至6.0，本发明具有成活率高，达到95%以上，不受季节影响，可大批供应种苗，提前出芽丛节省时间，和简化程序，降低成本的特点。
Description
技术领域
本发明涉及绿色地被植物领域，尤其是种苗快繁的生物方法
技术背景
马蔺[Iris lacteal pall.var chinensis(Fisch.)]是鸢尾科鸢尾属多年生草本宿根植物，具有很强的抗旱，抗寒，耐盐碱，抗病虫能力，近年来逐渐被用作水保护坡、园林绿化观赏地被建设的优良材料。然而，由于存在马蔺种子硬实率高和常温培养条件下的发芽率与发芽势低的繁殖局限性，以及异型杂交使种子繁殖不能保证品种基因型一致的缺点，因此，非常迫切去寻求一套马蔺快速繁殖的技术体系，不仅可以加快马蔺繁殖速度，节约成本，不受季节限制成批上市，为马蔺种苗产业化提供技术保障，而且为城市园林绿化观赏地被建设和道路、河堤护坡等及时大量提供种苗奠定基础。这项技术是业内人士重视且呼吁迫切解决的重要技术问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种快速无性繁殖，成活率高，不受季节影响，大幅降低建植成本，在水保护坡和城市观赏地被建设中易于推广的马蔺组培快繁体系构建技术，包括整个过程中各环节的最佳培养基和操作过程。
实现发明的目的的技术方案如下：
马蔺组培快繁体系构建方法，包括外植体制备，愈伤组织诱导，绿苗分化，继代增殖，生根培养和试管苗移栽六个阶段的构建技术。
(1)外植体制备时将马蔺种子去除坚硬种皮后，经2.33％次氯酸钠溶液浸泡灭菌，再用无菌水清洗，
(2)愈伤组织诱导，将外植体接种到愈伤组织诱导培养基上，在无光条件下，室温24-26℃进行愈伤诱导，
(3)绿苗分化，将愈伤组织转移到分化芽培养基上，在光照强度为1000LX下进行24hr/d光照，24-26℃进行分化芽培养，
(4)继代增殖，将分化芽丛转移到增殖培养基上，在光照强度为1000LX下进行24hr/d光照，在室温24-26℃进行继代增殖，
(5)生根培养，将经过继代增殖培养的分化芽转移到生根培养基上，在光照强度为1000LX下进行24hr/d光照，24-26℃进行生根培养，
(6)试管苗移栽，当根密度平均达到3.33，根长6-10cm，平均株高9-10cm时，即可野外直接移栽，将组培苗移栽入土，保持土壤温润，并搭蓬保护，半月后拆蓬。
在整个繁殖过程中所涉及到的各种培养基制备方法如下：
愈伤组织诱导培养基是在MS培养基中加入6g/l琼脂粉，60g/l蔗糖，和植物激素，用INNaOH溶液调节PH至6.0再经高压蒸气消毒灭菌即可使用。MS培养基中硝酸铵在正常情况下，激素配方为2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)4mg/l+6-苄基腺嘌呤(BA)2-5mg/l，或2，4-D 2mg/l+6糠基腺嘌呤(KT)1.5mg/l；如MS培养基中硝酸铵含量加倍时，植物激素配方为：2，4-D 2-4mg/l+BA1-2mg/l，或2，4-D 4mg/l+KT 0.5-1.5mg/l。
分化芽培养基是在MS培养基中加入6g/l琼脂粉，30g/l蔗糖和植物激素，再用INNaOH溶液调节PH值至6.0，再经过高压蒸汽消毒灭菌。
当愈伤组织诱导培养基中生长素/分裂素(2，4-D∶KT)为1∶0.75时，植物激素配方为：BA4mg/l+奈乙酸(NAA)0.5mg/l，或BA2mg/l+NAA 0.5mg/l。
继代增殖培养基采用MS培养基本成分，再加入6g/l琼脂粉，30g/l蔗糖，及植物激素，再用INNaOH溶液调节PH至6.0，再经过高压蒸汽灭菌消毒后作为继代增殖培养基。如愈伤组织分化芽培养基中的植物激素组分为BA4mg/l+(NAA)0.5mg/l的，则继代增殖培养基中的植物激素采用BA2-4mg/l+NAA0-0.5mg/l：或采用BA2-4mg/l，再转入BA0.5-1mg/l+NAA 0-0.5mg/l；如愈伤组织分化芽培养基中的植物激素组分为BA2mg/l+NAA0.5mg/l的，则继代增殖培养基中的植物激素采用BA2mg/l+NAA0.1-0.2mg/l。
生根培养基是在1/2MS培养基中加入6g/l琼脂粉，30g/l蔗糖，用INNaOH溶液调节PH至6.0，再经高压蒸气消毒灭菌。
本发明具有下列特点：
(1)提前出苗，节省时间，种子经愈伤组织诱导后进行分化芽培养，经过1-2个月愈伤组织即可分化出芽丛，缩短了出芽丛时间。
(2)成活率高：用传统的种子繁殖方法，成活率低，一般＜50％，采用本发明后成活率提高到95％以上。
(3)不受季节的影响，适于全年繁殖，可大批量供应种苗。
(4)在试管苗移栽时，不需炼苗，采用直接出瓶移栽的方法，将组培苗移栽入土，简化了程序，降低了成本。
具体实施方式
现通过下述优选的实施方式对本发明作进一步的说明。
(1)选取成熟饱满的马蔺种子，去除硬种皮后，用纱布包好，经2.33％次氯酸钠溶液浸泡，搅动，消毒灭菌25分钟，在超净工作台上用无菌水清洗7次，每次2-3分钟。
(2)采用MS培养基基本成分，加入6g/l琼脂粉，60g/l蔗糖，和植物激素，用IN氢氧化钠溶液调节PH至6.0，置入培养皿或三角瓶中高压蒸气灭菌消毒后，作为愈伤组织诱导培养基。将外植体接种到培养基上，培养条件控制在黑暗无光，室温26℃下，诱导1个月左右即可出现良好的愈伤组织。
(3)将愈伤组织转移到激素含量分别是BA4mg/l+NAA(奈乙酸)0.5mg/l或BA2mg/l+NAA0.5mg/l的分化芽培养基上，培养条件控制在24hr/d光照，室温26℃下，光照强度1000lx下，经过1-2个月愈伤组织即可分化出芽丛。
(4)将经含有植物激素为BA4mg/l+NAA(奈乙酸)0.5mg/l的培养基中愈伤分化芽培养的转入含有BA 2-4mg/l+NAA 0-0.5mg/l；植物激素的继代增殖培养基中培养25天，在光照强度为1000LX下25hr/d光照，温度保持在24-26℃，得到良好的继代增殖。
(5)将经过继代增殖的分化芽丛转移到绿苗生根培养基上，以光照强度为1000LX条件下进行24hr/d光照，温度保持在24℃，经过一个月的再生苗生根。
(6)当再生苗生根的根密度平均达到3.33，根长6-10cm，平均株高9-10cm时，叶片生长茂密、健康，达到野外直接移栽标准。采用不需炼苗直接出瓶移栽的方法，将组培苗移栽入土，沙性土壤为佳，移栽后早春需搭建塑料大蓬或夏季需搭建遮阳蓬以模拟密闭环境，半月后拆蓬。期间要浇水保持土壤湿润。期成活率达95％以上。
Claims (1)
1.马蔺组培快繁体系构建方法，包括外植体制备，愈伤组织诱导，绿苗分化，继代增殖，生根培养和试管移栽，其特征为：
(1)外植体制备时将马蔺种子去除坚硬种皮后，经2.33％次氯酸钠溶液浸泡灭菌，再用无菌水清洗；
(2)愈伤组织诱导，将外植体接种到愈伤组织诱导培养基上，在无光条件下，室温24-26℃进行愈伤诱导；
(3)绿苗分化，将愈伤组织转移到分化芽培养基上，在光照强度为1000LX下进行24hr/d光照，24-26℃进行分化芽培养；
(4)继代增殖，将分化芽丛转移到增殖培养基上，在光照强度为1000LX下进行24hr/d光照，在室温24-26℃进行继代增殖；
(5)生根培养，将经过继代增殖培养的分化芽转移到生根培养基上，在光照强度为1000LX下进行24hr/d光照，24-26℃进行生根培养；
(6)试管苗移栽，当根密度平均达到3.33，根长6-10cm，平均株高9-10cm时，即可野外直接移栽，将组培苗移栽入土，保持土壤温润，并搭蓬保护，半月后拆蓬；
愈伤组织诱导培养基是在MS培养基中加入6g/l琼脂粉，60g/l蔗糖，和植物激素，用INNaOH溶液调节PH至6.0再经高压蒸气消毒灭菌；
分化芽培养基是在MS培养基中加入6g/l琼脂粉，30g/l蔗糖和植物激素，再用INNaOH溶液调节PH值至6.0，再经过高压蒸汽消毒灭菌；
继代增殖培养基采用MS培养基基本成分，再加入6g/l琼脂粉，30g/l蔗糖，及植物激素，再用INNaOH溶液调节PH至6.0，再经过高压蒸汽消毒灭菌；
生根培养基是在1/2MS培养基中加入6g/l琼脂粉，30g/l蔗糖，用INNaOH溶液调节PH至6.0，再经高压蒸气灭菌消毒；
愈伤组织诱导培养基中植物激素配方为：2，4-D2mg/l+KT1.5mg/l；
分化芽培养基中植物激素配方为：BA4mg/l+0.5mg/l，或BA2mg/l+NAA0.5mg/l；
分化芽培养基中植物激素配方为BA4mg/l+NAA0.5mg/l时，继代增殖培养基中植物激素配方为BA2-4mg/l+NAA0-0.5mg/l或先经含有植物激素BA2-4mg/l的培养基，再转入含有植物激素BA0.5-1mg/l+NAA0.5mg/l的培养基；
分化芽培养基中植物激素配方为BA2mg/l+NAA0.5mg/l时，继代增殖培养基中植物激素配方为BA2mg/l+NAA0.1-0.2mg/l。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200310118477 CN1284443C (zh) | 2003-12-18 | 2003-12-18 | 马蔺组培快繁体系构建方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200310118477 CN1284443C (zh) | 2003-12-18 | 2003-12-18 | 马蔺组培快繁体系构建方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1545862A CN1545862A (zh) | 2004-11-17 |
| CN1284443C true CN1284443C (zh) | 2006-11-15 |
Family
ID=34338028
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200310118477 Expired - Fee Related CN1284443C (zh) | 2003-12-18 | 2003-12-18 | 马蔺组培快繁体系构建方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1284443C (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101099422B (zh) * | 2007-07-25 | 2011-06-15 | 毕慧滨 | 一种提高马蔺种子发芽率的方法 |
| CN104429963B (zh) * | 2014-12-08 | 2016-08-24 | 周口师范学院 | 一种马蔺游离花粉培养方法 |
| CN104839019B (zh) * | 2015-04-29 | 2016-09-07 | 浙江农林大学 | 一种利用未成熟果实进行燕子花离体快速繁殖的方法 |
| CN108496800B (zh) * | 2018-04-10 | 2021-07-16 | 黑龙江省科学院自然与生态研究所 | 基于愈伤组织诱导建立马蔺高频再生体系方法 |
| CN108719072A (zh) * | 2018-06-21 | 2018-11-02 | 四川千草生物技术股份有限公司 | 羌活种子组培快速繁育技术 |
-
2003
- 2003-12-18 CN CN 200310118477 patent/CN1284443C/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1545862A (zh) | 2004-11-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101564008B (zh) | 一种铁皮石斛无菌苗的无激素培养及快速繁殖方法 | |
| CN100998311B (zh) | 山慈姑独蒜兰人工繁殖方法 | |
| CN101822220B (zh) | 一种春兰名品茎尖组织培养快速繁殖方法 | |
| CN102301952B (zh) | 一种甘菊繁殖方法 | |
| CN107047320A (zh) | 一种大花胡麻草组织培养方法 | |
| CN101897297B (zh) | 一种萱草组织培养两步成苗的快繁方法 | |
| CN1775003A (zh) | 大蒜茎尖培养结合冷处理生产脱毒种苗的方法 | |
| CN100425126C (zh) | 一种薰衣草快速再生方法 | |
| CN101810144B (zh) | 瓜叶菊的快速繁殖方法 | |
| CN106973796A (zh) | 一种毛叶山桐子的组织培养育苗方法 | |
| CN103155862A (zh) | 麻竹花药诱导体胚并获得再生植株的方法 | |
| CN101855995B (zh) | 川东灯台报春的组培繁殖方法 | |
| CN103548695B (zh) | 一种岩黄连组织培养快速繁殖方法 | |
| CN1284443C (zh) | 马蔺组培快繁体系构建方法 | |
| CN103155869A (zh) | 甜樱桃砧木Colt组织培养方法 | |
| CN100435626C (zh) | 叶下珠茎节和枝节腋芽组培苗的快繁 | |
| CN104686335A (zh) | 一种半夏组织培养快繁方法 | |
| CN109874669B (zh) | 一种荷花无菌苗走茎快速增殖方法 | |
| CN101743908A (zh) | 红花银桦组培快繁及栽培方法 | |
| CN100374012C (zh) | 花毛茛的组织培养与快速繁殖方法 | |
| CN108391591B (zh) | 一种黄花风铃木组织培养快繁方法 | |
| CN107484665A (zh) | 一种利用黑果枸杞休眠枝条成苗的方法 | |
| CN102948370A (zh) | 一种马比木的快速繁殖方法 | |
| CN111919750A (zh) | 一种温蒂椒草的组织培养方法 | |
| CN1379972A (zh) | 巴戟天组织培养方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C19 | Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |