CN1281114C - 长筒石蒜快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种长筒石蒜繁殖方法，该方法以长筒石蒜带茎盘鳞片为外植体，采用“两步法”，即先诱导不定芽，进而诱导小鳞茎的发生。以MS为基本培养基，附加不同种类和浓度的植物生长调节物质诱导小鳞茎。通过本方法小鳞茎(芽)每20天增殖率可达480%，一年可生产百万个小鳞茎。
Description
一、技术领域
本发明涉及一种用组织培养快速繁殖长筒石蒜的方法，特别是一种用自制培养基先诱导长筒石蒜产生不定芽，进而诱导小鳞茎的发生。
二、背景技术
石蒜属植物约有20种，我国有15种，占全球总数的分四分之三。该属植物花色艳丽，花型奇特，是颇有发展前途的鲜切花材料；冬春地被凋零，一片枯黄，而石蒜属植物却茁壮生长，为大地盖上了一层绿色的地毯，在寒风中显得生机盎然，是长江中下游地区不可多得的冬春的地被植物，同时石蒜属植物鳞茎含有石蒜碱，是治疗老年痴呆疾病的良药。石蒜属植物的繁殖除种子繁殖外，主要依靠自然分球、鳞片繁殖等，繁殖系数较低，难以满足市场需求。
我国台湾省对当地分布的两个种，即忽地笑(Lycoris aurea_)和石蒜(L.radiata)研究较多，通过设施栽培进行工厂化生产，每年向日本和东南亚各地出口数以百万计的忽地笑和石蒜的鲜切花。黄丽春(1989)采用忽地笑双鳞片法为外植体，在MS+BA30mg/L+NAA30mg/L培养基上暗培养3个月，再继代于MS+BA10mg/L+NAA3mg/L的培养基上光培养，将小鳞茎转接至生根培养基上诱导生根形成完整小植株，培养时间长，增殖速度慢，未能进入规模化生产。
长筒石蒜(Lycoris longituba)为石蒜属植物的一个种，原产我国，花色和花型的变异在石蒜属植物中是最为丰富的，有的花大而形似百合，有的呈现长筒喇叭状，花色有白色、乳黄色、深黄色、淡紫色、淡绿色或白色带红条、紫色带蓝晕等，花梗粗壮挺拔，是理想的切花材料。本申请人已收集了大量的长筒石蒜的种质资源，并采用组织培养方法大量繁殖的鳞茎，为快速繁殖种球提供了有效途径。
三、发明内容
本发明的目的是提供一种能够快速生产小鳞茎的长筒石蒜繁殖方法。
本发明的技术方案是：一种长筒石蒜繁殖方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
1、将长筒石蒜鳞茎接种于含有6-苄基嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)的基本培养基MS(MuraShige Skoog)上诱导不定芽；
2、将已产生的不定芽长筒石蒜鳞茎转接于含有蔗糖、萘乙酸和6-苄基嘌呤的基本培养基或含有蔗糖、玉米素(ZT)和6-苄基嘌呤的基本培养基上诱导小鳞茎；
3、将已展叶的小鳞茎置于琼脂上，并光照下诱导生根；
4、将已生根的鳞茎即再生植株移栽于培养土上，喷水。
其中：在步骤1中所述诱导不定芽的培养基中6-苄基嘌呤的浓度为0.5-2.0mg/L，萘乙酸的浓度为0.01-0.5mg/L。
在步骤2中当将已产生的不定芽长筒石蒜鳞茎转接于含有蔗糖、萘乙酸和6-苄基嘌呤的基本培养基上时，6-苄基嘌呤的浓度为0.5-5.0mg/L，萘乙酸的浓度为0.1-0.5mg/L；转接于含有蔗糖、玉米素和6-苄基嘌呤的基本培养基上时，玉米素的浓度为0.1-1.0mg/L，6-苄基嘌呤的浓度为3.5-7.5mg/L。诱导小鳞茎的培养基中添加茉莉酸甲酯，其浓度为0.1-1.0mg/L。诱导小鳞茎的培养基中蔗糖浓度从3％增加到4-7.5％，提高培养基的渗透压。
在步骤3中所述琼脂的含量为0.5-0.7％，pH值为5.7-5.8。
在步骤4中所述的光照时间为14-16小时、光照强度1200-1300Lux，温度25～28℃。所述的光为红光和蓝光。
本发明与现有技术相比，其显著优点是：本发明以长筒石蒜带茎盘鳞片为外植体，采用“两步法”，即先诱导不定芽，进而诱导小鳞茎的发生。以MS为基本培养基，附加不同种类和浓度的植物生长调节物质诱导小鳞茎。通过本方法小鳞茎(芽)每20天增殖率可达480％，一年可生产百万个小鳞茎。
四、具体实施方式
下面的实施例可以使本领域技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1：选用生长健壮的长筒石蒜鳞茎，剥去鳞茎外褐色鳞皮及干鳞片，切除球颈及根系，流水冲洗1～2小时，置于75％乙醇灭菌1分钟，再用0.1％氯化汞溶液消毒15分钟，无菌水冲洗5次。将鳞茎分割成6份，每份分别以4片鳞片为单位(带有与鳞片基部相连接的基盘)接种于诱导不定芽的培养基MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L(BA浓度在0.5-2.0mg/L均可，NAA浓度在0.01-0.5mg/L均可)，不定芽产生后，转接到诱导小鳞茎的培养基MS+NAA0.1(可至0.5)mg/L+6-BA5.0(可至0.5)mg/L+6％蔗糖浓度；将已展叶的小鳞茎置于生根培养基诱导生根，琼脂0.6％(可在0.5-0.7％范围内)，pH5.7或5.8，每日光照14-16小时，光照强度1200-1300Lux，温度25～28℃。再生植株移栽于市售培养土，每日喷水两次，促进小苗生长。
实施例2：按所述相同步骤重复进行实施例1，但是将诱导小鳞茎的培养基更换为MS+ZT0.5(可在0.1-1.0范围内)mg/L+6-BA5.0(可在3.5-7.5范围内)mg/L+6％蔗糖浓度，可取得与实施例1相当的效果。
实施例3：促进小鳞茎迅速膨大是保证提早开花的重要条件。按所述相同步骤重复进行实施例1，在诱导小鳞茎阶段，在培养基中添加茉莉酸甲酯(浓度为0.1-1.0mg/L)等物质进行化学调控，可明显促进鳞茎膨大。
实施例4：按所述相同步骤重复进行实施例1，在诱导小鳞茎阶段，提高培养基的渗透压，可明显促进鳞茎膨大。将诱导小鳞茎的培养基中蔗糖浓度从3％增加到4-7.5％，以提高培养基的渗透压。
实施例5：按所述相同步骤重复进行实施例1，在诱导小鳞茎阶段，使用红光或蓝光进行光照，有利于小鳞茎的增大。
Claims (4)
1、一种长筒石蒜快速繁殖方法，其特征是该方法包括以下步骤：
(1)将长筒石蒜鳞茎接种于含有6-苄基嘌呤和萘乙酸的基本培养基MS上诱导不定芽；
(2)将已产生的不定芽长筒石蒜鳞茎转接于含有蔗糖、萘乙酸和6-苄基嘌呤的基本培养基或含有蔗糖、玉米素和6-苄基嘌呤的基本培养基上诱导小鳞茎；
(3)将已展叶的小鳞茎置于琼脂上，并光照下诱导生根；
(4)将已生根的鳞茎即再生殖株移载于培养土上，喷水；
在步骤(1)中，所述诱导不定芽的培养基中6-苄嘌呤的浓度为0.5-2.0mg/L，萘乙酸的浓度为0.01-0.5mg/L；
在步骤(2)中，当将已产生的不定芽长筒石蒜鳞茎转接于含有蔗糖、萘乙酸和6-苄基嘌呤的基本培养基上时，6-苄基嘌呤的浓度为0.5-5.0mg/L，萘乙酸的浓度为0.1-0.5mg/L；
在步骤(2)中，当将已产生的不定芽长筒石蒜鳞茎转接于含蔗糖、玉米素和6-苄基嘌呤的基本培养基上时，玉米素的浓度为0.1-1.0mg/L，6-苄基嘌呤的浓度为3.5-7.5mg/L；
在步骤(2)中，诱导小鳞茎的培养基中蔗糖浓度从3％增加到7.5％，提高培养的渗透压；
在步骤(3)中，所述琼脂的含量为0.5-0.7％，PH值为5.7-5.8。
2、根据权利要求1所述的长筒石蒜快速繁殖方法，其特征在于在步骤(2)中，诱导小鳞茎的培养基中添加茉莉酸甲酯，其浓度为0.1-1.0mg/L。
3、根据权利要求1所述的长筒石蒜快速繁殖方法，其特征在于在步骤(3)中，所述的光照时间为14-16小时，光照强度1200-1300Lux，温度25-28℃。
4、根据权利要求1所述的长筒石蒜快速繁殖方法，其特征在于在步骤(3)中，使用红光或蓝光进行光照。
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