CN1278400A - 紫点杓兰种子无菌繁殖方法 - Google Patents

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胡虹
黄家林
王�华
李树云
罗桂芬
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Kunming Institute of Botany of CAS
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    • Y02P60/216—

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  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

提供一种杓兰属紫点杓兰种子无菌繁殖实生苗的方法,该方法包括种子的采集、预处理,培养基配制,播种,原球茎培养步骤,操作简单,大大缩短了实生苗成苗周期,实生苗粗壮,易移栽成活,种子萌发率高,易于大规模生产。

Description

紫点杓兰种子无菌繁殖方法
本发明属于生物技术领域，具体地，涉及杓兰属植物种子无菌繁殖方法。
杓兰属是著名的兰科(Orchidaceae)观赏属之一。该属全世界有47种，中国有32种，主要分布于中国西南的横断山区和北美。杓兰花色艳丽，花型奇特，其唇瓣呈拖鞋状，故有“拖鞋兰”之称，具有很高的观赏和开发价值。杓兰属是温带陆生兰，种子人工无菌萌发很困难，有些杓兰种类的种子萌发率还不到1％。紫点杓兰(Cypripedium guttatum Sw．)种子无菌繁殖在欧美等国家开展较多，但繁殖率并不十分理想，目前国内外尚未见紫点杓兰种子无菌繁殖实生苗的报道。
本发明的目的在于提供一种杓兰属紫点杓兰种子无菌繁殖实生苗的方法，该方法操作简单，种子萌发率高，易于大规模生产。
为了实现上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
紫点杓兰种子无菌繁殖方法，包括种子的采集、预处理，培养基配制，播种，原球茎培养步骤，采用Harvais培养基改良型，将Harvais培养基中的NH4NO3去除，添加2．0mg／甘氨酸，100mg／L谷氨酰胺，500mg／L酪蛋白水解物；原球茎培养将刚萌发形成的原球茎转移到Harvais培养基中培养，置于黑暗中23℃恒温培养，约培养一个月后，将原球茎转移到新的Harvais培养基中继续培养，当原球茎分化出芽和根，形成幼苗时，将幼苗转移到温度为5±2℃的培养箱中培养，低温处理幼苗4个月后，将幼苗转移到23℃培养箱中光下培养，光照强度为20001ux，待幼苗芽转绿，出瓶栽培。
与现有技术相比，本发明具有的有益效果和优异性在于：
1)进行了紫点杓兰种子无菌繁殖研究，成功得到实生苗；
2)采用的种子萌发培养基为发明人自己研制的改良型培养基，
紫点杓兰种子萌发率很高，可达70％以上；
3)采用本发明的种子萌发和原球茎培养技术，紫花杓兰原球茎
成苗过程不需要经过低温春化处理，与国外报道的杓兰属其
它种的成苗技术不同。大大缩短了实生苗成苗周期，实生苗
粗壮，易移栽成活。
下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但本发明的内容并不局限于此。
实施例1：1、种子的采集
采用人工授粉得到的紫点杓兰(Cypripedium guttatum Sw．)成熟蒴果或者野生杓兰成熟蒴果。2、种子的预处理1)剖开蒴果，取出种子，无菌条件下将种子置于0．1％升汞溶液中浸泡10分钟，无菌滤纸吸干，无菌水冲洗3次，无菌滤纸吸干。2)将种子置于0．5％NaClO溶液中处理15分钟，无菌水冲洗3次，无菌滤纸吸干。3、培养基配制1)培养基：Hatvais培养基(见附表1)改良型，即是将Harvais培养基中的NH4NO3去除。添加2．0mg／甘氨酸，100mg／L谷氨酰胺，500mg／L酪蛋白水解物。2)配制：改良型Harvais培养基＋20g／L葡萄糖＋2％土豆＋6．5g／L琼脂，pH值用1N的NaOH调节至5．5。将配好的培养基分装到100mL的玻璃三角瓶中，每瓶约30mL，用橡皮塞塞住瓶口。培养基在121℃，15个大气压条件下灭菌15分钟。冷却备用。4、播种无菌条件下将紫点杓兰种子播于改良型Harvais培养基中。置于黑暗中23℃恒温培养。5、原球茎培养1)将刚萌发形成的原球茎转移到Harvais培养基中培养，100mL玻璃三角瓶中每瓶约播原球茎10个。置于黑暗中23℃恒温培养。2)培养一个月后，将原球茎转移到新的Harvais培养基中继续培养。3)当原球茎分化出长约1．0cm的芽和1-3条根，形成幼苗时，将幼苗转移到温度为5±2℃的培养箱中培养。低温处理幼苗4个月后，将幼苗转移到23℃培养箱中光下培养，光照强度为20001ux。2周后幼苗的芽转绿，幼苗即可出瓶栽培。
附表1Harvais 培养基：大量元素：          每升培养基用量     母液
Ca(NO3)2·4H2O   400mg       4g／L
NH4NO3             1400mg      14g／L
KH2PO4             200mg        2g／L
MgSO4·7H2O       200mg        2g／L
KNO3                 200mg        2g／L
KCl                  100mg        1g／L微量元素：
H3BO3             0．5mg     500mg／L
CuSO4·5H2O      0．025mg    25mg／L
ZnSO4·7H2O      0．5mg      50mg／L
Na2MoO4·2H2O   0．02mg    20mg／L
Co(NO3)2·6H2O 0．025mg    25mg／L
KI                   0．1mg    100mg／L
MnSO4·H2O       1．54mg    1540mg／L柠檬酸铁盐：
(NH4)3C6H5O7   19mg     190mg／L
Fe(NH4)3(C6H5O7)225mg   250mg／L有机成分：
烟酸                 10mg        100mg／L
泛酸钙               5mg         50mg／L
维生素B1            5mg         50mg／L
土豆                 2％
葡萄糖               20g
琼脂                 6．5g
pH＝5．5

Claims (1)

1、紫点杓兰种子无菌繁殖方法，包括种子的采集、预处理，培养基配制，播种，原球茎培养步骤，其特征在于采用Harvais培养基改良型，将Harvais培养基中的NH4NO3去除，添加2．0mg／L甘氨酸，100mg／L谷氨酰胺，500mg／L 酪蛋白水解物；原球茎培养将刚萌发形成的原球茎转移到Harvais培养基中培养，置于黑暗中23℃恒温培养，培养一个月后，将原球茎转移到新的Harvais培养基中继续培养，当原球茎分化出芽和根，形成幼苗时，将幼苗转移到温度为5±2℃的培养箱中培养，低温处理幼苗4个月后，将幼苗转移到23℃培养箱中光下培养，光照强度为20001ux，待幼苗芽转绿，出瓶栽培。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101720672A (zh) * 2010-01-05 2010-06-09 中国科学院昆明植物研究所 密毛兜兰的无菌种子萌发和幼苗增殖方法
CN106577284A (zh) * 2016-12-15 2017-04-26 四川省自然资源科学研究院 一种黄花杓兰组培快繁及花期调控的方法
CN107711500A (zh) * 2017-10-25 2018-02-23 黄海民 一种兰花苗的培育方法
CN110786235A (zh) * 2018-08-02 2020-02-14 北京林业大学 紫点杓兰种子无菌萌发的方法
CN113924841A (zh) * 2021-10-20 2022-01-14 云南省林业和草原科学院 一种丽江杓兰种子非共生萌发方法
CN116584394A (zh) * 2023-06-21 2023-08-15 山西中医药大学 一种大花杓兰种子的非共生萌发、原球茎生根和成苗方法

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