CN1278401A - 黄花杓兰种子无菌繁殖方法 - Google Patents

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CN00109999A
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Inventor
胡虹
黄家林
王�华
李树云
罗桂芬
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Kunming Institute of Botany of CAS
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    • Y02P60/216—

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  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

提供一种杓兰属黄花杓兰种子无菌繁殖实生苗的方法,该方法包括种子的采集、预处理,培养基配制,播种,原球茎培养步骤,操作简单,大大缩短了实生苗成苗周期,实生苗粗壮,易移栽成活,种子萌发率高,易于大规模生产。

Description

黄花杓兰种子无菌繁殖方法
本发明属于生物技术领域，具体地，涉及杓兰属植物种子无菌繁殖方法。
杓兰属是著名的兰科(Orchidaceae)观赏属之一。该属全世界有47种，中国有32种，主要分布于中国西南的横断山区和北美。杓兰花色艳丽，花型奇特，其唇瓣呈拖鞋状，故有“拖鞋兰”之称，具有很高的观赏和开发价值。杓兰属是温带陆生兰，种子人工无菌萌发很困难，有些杓兰种类的种子萌发率还不到1％。杓兰种子无菌繁殖在欧美等国家开展较多，但繁殖率并不十分理想，黄花杓兰(Cypripedium flavum P．F．Hunt et Summerh．)为中国特有种，目前国内外尚未见黄花杓兰种子无菌繁殖实生苗的报道。
本发明的目的在于提供一种黄花杓兰种子无菌繁殖实生苗的方法，该方法具有操作简单，种子萌发率高，易于大规模生产。
为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
黄花杓兰种子无菌繁殖方法，包括种子的采集、预处理，培养基的配制，播种，原球茎培养步骤，培养基采用Harvais培养基改良型，将Harvais培养基中的NH4NO3去除，添加2．0mg／L甘氨酸，100mg／L谷氨酰胺，500mg／L酪蛋白水解物；原球茎培养将刚萌发形成的原球茎转移到无激素的Harvais培养基中，置于黑暗中23℃恒温培养，培养一个月后，将原球茎转移到添加了0．5g／L活性炭的无激素Harvais培养基中继续培养，当原球茎分化出芽和根，形成幼苗时，将幼苗转移到光下培养，光照强度为2000lux，待幼苗叶片转绿，出瓶栽培。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果和优异性：
1)进行了黄花杓兰种子无菌繁殖研究，成功得到实生苗；
2)采用的种子萌发培养基为本研究首次研制的改良型培养基，
黄花杓兰种子萌发率很高，可达90％以上；
3)采用本发明的种子萌发和原球茎培养技术，黄花杓兰原球茎
成苗过程不需要经过低温春化处理，与国外报道的杓兰属其
它种的成苗技术不同。大大缩短了实生苗成苗周期，实生苗
粗壮，易移栽成活。
下面用实施例来进一步说明本发明的实质内容，但本发明的内容并不局限于此。
实施例1：1、种子的采集
采用人工授粉后第15周的黄花杓兰(Cypripedium flavum P．F．Hunt et Summerh．)蒴果。2、种子的预处理
1)将蒴果在自来水中冲洗干净，置于75％的酒精中浸泡0．5小时。
2)无菌条件下剖开蒴果，取出种子，将种子置于0．5％NaClO溶
液中处理10分钟，无菌水冲洗3次，无菌滤纸吸干。3、培养基配制
1)培养基：
Harvais培养基(见表1)改良型，即是将Harvais培养基中
的NH4NO3去除。添加2．0mg／L 甘氨酸，100mg／L 谷氨酰胺，
500mg／L酪蛋白水解物。
2)配制：
改良型Harvais培养基＋0．4mg／L激动素＋20g／L葡萄糖＋2％土
豆＋6．5g／L琼脂，pH值用1N的NaOH调节至5．5。
将配好的培养基分装到100mL的玻璃三角瓶中，每瓶约30mL，
用橡皮塞塞住瓶口。培养基在121℃，15个大气压条件下灭
菌15分钟。冷却备用。4、播种
无菌条件下将黄花杓兰种子播于改良型Harvais培养基中。置
于黑暗中23℃恒温培养。5、原球茎培养
1)将刚萌发形成的原球茎转移到无激素的Harvais培养基中培
养，100mL玻璃三角瓶中每瓶约播原球茎10个。置于黑暗中
23℃恒温培养。
2)约培养一个月后，将原球茎转移到添加了0．5g／L活性炭的无
激素Harvais培养基中继续培养。
3)当原球茎分化出长约1．0cm的芽和1-3条根，形成幼苗时，将幼苗转移到光下培养，光照强度为2000lux。2周后幼苗叶片转绿，即可出瓶栽培。
附表1Harvais培养基：大量元素：         每升培养基用量      母液Ca(NO3)2·4H2O 400mg        4g／LNH4NO3            1400mg       14g／LKH2PO4            200mg        2g／LMgSO4·7H2O      200mg        2g／LKNO3                200mg        2g／LKCl                 100mg        1g／L微量元素：H3BO3             0．5mg       500mg／LCuSO4·5H2O      0．025mg     25mg／LZnSO4·7H2O      0．5mg       50mg／LNa2MoO4·2H2O  0．02mg      20mg／LCo(NO3)2·6H2O 0．025mg     25mg／LKI                  0．1mg       100mg／LMnSO4．H2O       1．54mg      1540mg／L柠檬酸铁盐：(NH4)3C6H5O7   19mg       190mg／LFe(NH4)3(C6H5O7)225mg       250mg／L有机成分：烟酸                  10mg        100mg／L泛酸钙                5mg         50mg／L维生素B1              5mg        50mg／L土豆                  2％葡萄糖                20g琼脂                  6．5gpH＝5．5

Claims (1)

1、黄花杓兰种子无菌繁殖方法，包括种子的采集、预处理，培养基的配制，播种，原球茎培养步骤，其特征在于培养基采用Harvais培养基改良型，将Harvais培养基中的NH4NO3去除，添加2．0mg／L甘氨酸，100mg／L谷氨酰胺，500mg／L酪蛋白水解物；原球茎培养将刚萌发形成的原球茎转移到无激素的Harvais培养基中，置于黑暗中23℃恒温培养，培养一个月后，将原球茎转移到添加了0．5g／L活性炭的无激素Harvais培养基中继续培养，当原球茎分化出芽和根，形成幼苗时，将幼苗转移到光下培养，光照强度为20001ux，待幼苗叶片转绿，出瓶栽培。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101536629B (zh) * 2009-03-17 2011-07-27 北京市植物园 一种使大花杓兰种子萌发的方法
CN105961010A (zh) * 2016-06-08 2016-09-28 福建农林大学 利用兰花根菌栽培公石松的方法
CN106577284A (zh) * 2016-12-15 2017-04-26 四川省自然资源科学研究院 一种黄花杓兰组培快繁及花期调控的方法

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WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication