CN106577284A - 一种黄花杓兰组培快繁及花期调控的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种黄花杓兰组培快繁及花期调控的方法，整个过程无需投入过多的基础设施，经济适用，成本低，操作简单，易于掌握，成功率高。包括以下步骤：（1）蒴果采集及保存；（2）消毒；（3）接种；（4）继代培养；（5）春化处理；（6）移栽及病虫害防治；（7）花期控制。采用上述方法一颗成熟的蒴果可获得完整植株2000‑3000株，种子萌发率95%以上，通过该方法可实现黄花杓兰常年开花。

Description

一种黄花杓兰组培快繁及花期调控的方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体的，涉及一种黄花杓兰组培快繁及花期调控的方法。
背景技术
杓兰属是著名的兰科(Orchidaceae)观赏属之一，该属约50种，主要产东亚、北美、欧洲等温带地区和亚热带地区。中国是世界杓兰分布中心，有32个原生种，主要分布于中国西南的横断山区。杓兰因其唇瓣呈拖鞋状，也有“拖鞋兰”之称，具有很高的观赏和开发价值。黄花杓兰(Cypripedium flavum P.F.Hunt et Summerh.)花色艳丽，花型奇特，近年来由于人类活动的增加、生境片断化、过度采挖及放牧等导致黄花杓兰的野生种群及个体数量急速下降。黄花杓兰的种子细小，种子胚胎本身不带营养，在自然界只能靠共生真菌提供的营养萌发生长，自然条件下很难繁殖。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用黄花杓兰种子进行组培快繁以及进行花期调控的方法，该方法具有操作简单，操作性强，调控效果显著，易于大规模生产推广。为实现上述目的本发明提供的技术方案是：
一种使用成熟黄花杓兰种子进行组培快繁及花期调控的方法，包括如下步骤：
a. 黄花杓兰蒴果采集及保存：采集自然授粉或人工授粉结实、成熟的蒴果，在干燥清洁的室内，剔除花蒂清洗表面后用75%酒精擦拭干净，放置于干净滤纸上，将果实剥开抖出种子备用。如需暂时保存，将种子放置于密封的玻璃试管内4℃可保存2周，或放置于-20℃可以保存一年以上。
b. 消毒：用1%的次氯酸钠，20℃下消毒。方法为，用力震荡1分钟后置于振荡器上继续进行30分钟震荡消毒处理。将玻璃试管外部用75%酒精檫拭干净后放置于超净工作台上，无菌水洗5次。种子漂白处理过程不仅是对种子的消毒，也同时对种子胚胎外皮进行侵蚀，以除去黄花杓兰种子的萌芽障碍。
c. 接种：将消毒漂白处理后的种子植入灭菌的CFM1培养基上。播种完成后将培养瓶放置于20℃的环境里暗培养。
d. 继代培养：4-8周后种子开始萌芽并产生圆球茎。3-4个月后圆球茎长成为小苗，此时需要用CFM2培养基进行继代培养。每瓶移植约50个左右的圆球茎。继代培养3-4个月后再用CFM2培养基进行继代培养。每瓶转接10-20棵小苗。继续培养5-6个月，当瓶苗根长8-12cm时便可出瓶。
e. 春化处理：将基质清洗干净后放入干净的自封袋内包装。袋内可放入适量低倍抑菌液。将小苗放入4℃冰箱进行低温春化处理。经过至少3个月以上的春化处理后进行栽种。
f. 移栽及病虫害防治：栽种基质为4-5份珍珠岩：1份腐殖土：0.5份碎钙化石或白云石粉。移栽后再覆盖一层松针或其它针叶。最佳移栽种植时间为4-5月，栽种4-6周后或更短时间内，开始长叶。喷施叶肥，也可使用缓释肥。寒冷地区推荐使用2-3类型的缓释肥。黄花杓兰需要注意防治鼻涕虫、蜗牛类、卷叶蛾类的虫害。黄花杓兰抗病性强，尖孢镰刀菌类的病害未见发生。栽种3-4年后可达到开花尺寸。
g. 花期控制：开花大小的苗在秋天倒苗后放置于4℃冰箱内通过3个月以上的春化处理后可以随时取出栽培，经过2-3个月的栽种可开花，以此可达到黄花杓兰在不同月份开花的效果。
进一步的，步骤b中所述的次氯酸钠为国产分析纯，次氯酸钠溶液需现用现配，也可用10%安替佛民溶液配制。以每1cm3种子20ml 1%的次氯酸钠溶液的比例消毒处理。
进一步的，步骤c、d中所述的培养环境全为20℃的环境里暗培养，CFM1、CFM2培养基成分见附表1、2。
进一步的，步骤e中所述的低倍抑菌液为50%多菌灵可湿性粉剂800倍液。
进一步的，步骤f中所述的叶肥为含氮量0.5g/L的氮肥，缓释肥为2-3型的缓释肥，2型的为包膜缓释肥，3型的为添加脲酶抑制剂和硝化抑制剂的缓释肥。虫害的防治可喷施50％杀螟松乳油1000～1500倍液或50％西维因可湿性粉剂500～1000倍液等药剂。开花尺寸为苗高20-30cm。
本发明相比现有技术的有益效果是：
1、本发明所述的方法能够可达到黄花杓兰在不同月份开花的效果，调控黄花杓兰的花期，为市场或应用需求按时提供鲜花产品，不但可以丰富节日或满足日常的需要，而且通过人工调节花期，可缩短生产周期，周年供花，大大提高经济效益；
2、本发明选择黄花杓兰成熟蒴果的种子作为接种材料，经过诱导、继代、壮苗等步骤，使用特定的培养基，可使种子诱导萌发率达到95%以上，一颗果实可获得完整植株2000-3000株左右；
3、与一般杓兰使用青荚种子，播种时间只有1个星期左右的时段有很大局限不同，本发明采用成熟种子播种，可以在种子保存期内任何时间进行播种，另外通过调整低温春化处理的时间可有效调节黄花杓兰的花期，本发明所涉及的花期调控指从花苗达到20-30cm，4-5片功能叶开始到花器官分化完成的阶段。通过低温春化时间的调整及后续的大棚培养，可在不同月份获得开花的植株。
具体实施方式
实施例1
一种使用成熟黄花杓兰种子进行组培快繁及花期调控的方法，包括如下步骤：
a. 黄花杓兰蒴果采集及保存：采集自然授粉或人工授粉结实、成熟的蒴果，在干燥清洁的室内，剔除花蒂清洗表面后用75%酒精擦拭干净，放置于干净滤纸上，将果实剥开抖出种子备用。如需暂时保存，将种子放置于密封的玻璃试管内4℃可保存2周，或放置于-20℃可以保存一年以上。
b. 消毒：用1%的次氯酸钠，20℃下消毒。方法为，用力震荡1分钟后置于振荡器上继续进行30分钟震荡消毒处理。将玻璃试管外部用75%酒精檫拭干净后放置于超净工作台上，无菌水洗5次。种子漂白处理过程不仅是对种子的消毒，也同时对种子胚胎外皮进行侵蚀，以除去黄花杓兰种子的萌芽障碍。
c. 接种：将消毒漂白处理后的种子植入灭菌的CFM1培养基上。播种完成后将培养瓶放置于20℃的环境里暗培养。
d. 继代培养：4-8周后种子开始萌芽并产生圆球茎。3-4个月后圆球茎长成为小苗，此时需要用CFM2培养基进行继代培养。每瓶移植约50个左右的圆球茎。继代培养3-4个月后再用CFM2培养基进行继代培养。每瓶转接10-20棵小苗。继续培养5-6个月，当瓶苗根长8-12cm时便可出瓶。
e. 春化处理：将基质清洗干净后放入干净的自封袋内包装。袋内可放入适量低倍抑菌液。将小苗放入4℃冰箱进行低温春化处理。经过至少3个月以上的春化处理后进行栽种。
f. 移栽及病虫害防治：栽种基质为4-5份珍珠岩：1份腐殖土：0.5份碎钙化石或白云石粉。移栽后再覆盖一层松针或其它针叶。最佳移栽种植时间为4-5月，栽种4-6周后或更短时间内，开始长叶。喷施叶肥，也可使用缓释肥。寒冷地区推荐使用2-3类型的缓释肥。黄花杓兰需要注意防治鼻涕虫、蜗牛类、卷叶蛾类的虫害。黄花杓兰抗病性强，尖孢镰刀菌类的病害未见发生。栽种3-4年后可达到开花尺寸。
g. 花期控制：开花大小的苗在秋天倒苗后放置于4℃冰箱内通过3个月以上的春化处理后可以随时取出栽培，经过2-3个月的栽种可开花，以此可达到黄花杓兰在不同月份开花的效果。
进一步的，步骤b中所述的次氯酸钠为国产分析纯，次氯酸钠溶液需现用现配，也可用10%安替佛民溶液配制。以每1cm3种子20ml 1%的次氯酸钠溶液的比例消毒处理。
进一步的，步骤c、d中所述的培养环境全为20℃的环境里暗培养，CFM1、CFM2培养基成分见附表1、2。
进一步的，步骤e中所述的低倍抑菌液为50%多菌灵可湿性粉剂800倍液。
进一步的，步骤f中所述的叶肥为含氮量0.5g/L的氮肥，缓释肥为2-3型的缓控肥，2型的为包膜缓释肥，3型的为添加脲酶抑制剂和硝化抑制剂的缓释肥。虫害的防治可喷施50％杀螟松乳油1000～1500倍液或50％西维因可湿性粉剂500～1000倍液等药剂。开花尺寸为苗高20-30cm。
实施例2
(1)地址：其中蒴果组培快繁及春化处理地址为横断山生物技术有限公司成都双流基地，室外种植地址为海拔3200米的横断山黄龙基地及海拔498m的横断山生物技术有限公司成都双流基地。
(2)时间：蒴果组培开始时间为2010年9月1-2010年11月，出瓶春化时间为2011年10月1-2012年4月，移栽种植时间为2012年5月1-2015年9月，开花观测时间为2015年9月-2016年10月。
(3)材料：采自海拔3200-3500m黄龙沟的野生成熟蒴果及人工杂交结实的果实。
方案如下：
a. 黄花杓兰蒴果采集及保存：采集自然授粉或人工授粉结实、成熟的蒴果，在干燥清洁的室内，剔除花蒂清洗表面后用75%酒精擦拭干净，放置于干净滤纸上，将果实剥开抖出种子备用。
b. 消毒：用1%的次氯酸钠，20℃下震荡消毒处理30min。将玻璃试管外部用75%酒精檫拭干净后放置于超净工作台上，无菌水洗5次。
c. 接种：将消毒漂白处理后的种子植入灭菌的CFM1培养基上。播种完成后将培养瓶放置于20℃的环境里暗培养。
d. 继代培养：4-8周后种子开始萌芽并产生圆球茎。3-4个月后圆球茎长成为小苗，此时需要用CFM2培养基进行继代培养。每瓶移植约50个左右的圆球茎。继代培养3-4个月后再用CFM2培养基进行继代培养。每瓶转接10-20棵小苗。继续培养5-6个月，当瓶苗根长8-12cm时出瓶。
e. 春化处理：将基质清洗干净后放入干净的自封袋内包装。袋内放入适量50%多菌灵可湿性粉剂800倍液。将小苗放入4℃冰箱进行低温春化处理。经过至少3个月以上的春化处理后进行栽种。
f. 移栽及病虫害防治：栽种基质为珍珠岩：腐殖土：碎钙化石或白云石粉=4-5：1：0.5。移栽后上覆盖一层干松针叶或其它干针叶。最佳移栽种植时间为4-5月，栽种4-6周后或更短时间内，开始长叶。喷施叶肥，也可使用缓释肥。寒冷地区推荐使用2-3类型的缓释肥。同时防治病虫害。栽种3-4年后可达到20-30cm，4-5片功能叶。
g. 花期控制：开花大小的苗在秋天倒苗后放置于4℃冰箱内通过3个月以上的春化处理后可以随时取出栽培。每批次取200株，分别于4月，6月，8月三批次栽培于3200m的黄龙基地，2-3月后可开花，9月，3月栽培于海拔498m处的双流基地2-3月后可开花，开花比例达70-80%。
附表1:CFM1
成分 含量(g/L)
KNO3 0.404
CaCl2 2H2O 0.22
Mg(NO3)2 6H2O 0.128
NaH2PO4 0.12
Na2-EDTA 0.0373
FeSO4 7H2O 0.0278
酵母味素(Yeast extract) 0.4
MnSO4H2O 0.00845
H3BO3 0.0031
CoCl2 6H2O 0.0000125
CuSO4 5H2O 0.0000125
NaMoO4 2H2O 0.000125
KI 0.000415
ZnSO4 7H2O 0.0053
维生素C(Ascorbic acid/Vit.C) 0.1
肌醇(myo-Inositol) 0.3
激动素(Kinetin) 0.0005
葡萄糖(Glucose) 20
凝胶强度1200g/cm2的琼脂 5
附表2:CFM2

Claims (9)

1.一种黄花杓兰组培快繁及花期调控的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
a. 黄花杓兰蒴果采集及保存：采集自然授粉或人工授粉结实、成熟的蒴果，在干燥清洁的室内，剔除花蒂清洗表面后用酒精擦拭干净，放置于干净滤纸上，将果实剥开抖出种子备用；如需暂时保存，将种子放置于密封的玻璃试管内4℃可保存2周，或放置于-20℃可以保存一年以上；
b. 消毒：用次氯酸钠消毒种子；
c. 接种：将消毒漂白处理后的种子植入灭菌的CFM1培养基上培养；
d. 继代培养：4-8周后种子开始萌芽并产生圆球茎，3-4个月后圆球茎长成为小苗，此时需要用CFM2培养基进行继代培养，每瓶移植40~60个的圆球茎，继代培养3-4个月后再用CFM2培养基进行继代培养，此时每瓶转接10-20棵小苗，继续培养5-6个月，当瓶苗根长8-12cm时便可出瓶；
e. 春化处理：将基质清洗干净后放入干净的自封袋内包装，袋内放入低倍抑菌液，将小苗放入4℃冰箱进行低温春化处理，经过至少3个月以上的春化处理后进行栽种；
f. 移栽及病虫害防治：最佳移栽种植时间为4-5月，栽种4-6周后或更短时间内，开始长叶，喷施叶肥，或使用缓释肥，寒冷地区推荐使用2-3类型的缓释肥，并注意防治包括鼻涕虫、蜗牛类、卷叶蛾类在内的虫害，栽种3-4年后达到开花尺寸；
g. 花期控制：开花大小的苗在秋天倒苗后放置于4℃冰箱内通过3个月以上的春化处理后可以随时取出栽培，经过2-3个月的栽种可开花，以此可达到黄花杓兰在不同月份开花的效果。
2.根据权利要求1所述的黄花杓兰组培快繁及花期调控的方法，其特征在于，步骤b中所述的次氯酸钠溶液需现用现配，具体消毒处理为：以每1cm3种子20ml 1%的次氯酸钠溶液的比例消毒处理，用力震荡1分钟后置于振荡器上继续进行30分钟震荡消毒处理，将玻璃试管外部用酒精檫拭干净后放置于超净工作台上，无菌水洗3-5次。
3.根据权利要求1所述的黄花杓兰组培快繁及花期调控的方法，其特征在于，步骤c、d中所述的培养环境全为20℃的环境里暗培养。
4.根据权利要求1所述的黄花杓兰组培快繁及花期调控的方法，其特征在于，所述CFM1培养基成分为：
5.根据权利要求1所述的黄花杓兰组培快繁及花期调控的方法，其特征在于，所述CFM2培养基成分为：
成分 含量(g/L) KNO3 0.404 CaCl2 2H2O 0.22 Mg(NO3)2 6H2O 0.128 NaH2PO4 0.12 Na2-EDTA 0.0373 FeSO4 7H2O 0.0278 Yeast extract 0.3 MnSO4 H2O 0.00845 H3BO3 0.0031 CoCl2 6H2O 0.0000125 CuSO4 5H2O 0.0000125 NaMoO4 2H2O 0.000125 KI 0.000415 ZnSO4 7H2O 0.0053 Ascorbic acid (Vit. C) 0.1 myo-Inositol 0.3 NAA 0.0001 Glucose 20 Agar (Hengduagar：gel strength 1200g/cm2) 4
6.根据权利要求1所述的黄花杓兰组培快繁及花期调控的方法，其特征在于，步骤e中所述的低倍抑菌液为50%多菌灵可湿性粉剂800倍液。
7.根据权利要求1所述的黄花杓兰组培快繁及花期调控的方法，其特征在于，步骤f中所述栽种基质为：4-5份珍珠岩，1份腐殖土，0.5份碎钙化石或白云石粉，移栽后再覆盖一层松针或其它针叶。
8.根据权利要求1所述的黄花杓兰组培快繁及花期调控的方法，其特征在于，步骤f中所述的叶肥为含氮量0.5g/L的氮肥，缓释肥为2-3型的缓释肥，2型的为包膜缓释肥，3型的为添加脲酶抑制剂和硝化抑制剂的缓释肥。
9.根据权利要求1所述的黄花杓兰组培快繁及花期调控的方法，其特征在于，步骤f中所述虫害的防治喷施包括50％杀螟松乳油1000～1500倍液或50％西维因可湿性粉剂500～1000倍液在内的药剂，开花尺寸为苗高20-30cm。
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