CN1261162C - 制备植物水提取物的方法及由此获得的提取物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种生产植物性(vegetable)特别是植物水提取物的方法，该方法包含步骤a)净化植物，b)捣碎植物，c)用激光辐射处理捣碎的植物，d)将在步骤c)中获得的混合物悬浮于水中，e)浸解在步骤d)中获得的悬浮液，和f)分离结果所得的液体。本发明也提供了由本方法获得的组合物，其中的一些可应用于医疗，具体而应用于治疗免疫抑制疾病如癌、结核病、流行性感冒、普通感冒和AIDS，或者病毒疾病如肝炎。

Description

制备植物水提取物的方法及由此获得的提取物
                    发明领域
本发明涉及制备植物水提取物的方法及由此获得的水提取物，其中的一些可应用于药物，具体而言应用于对免疫抑制疾病的治疗或在对病毒疾病的治疗中。
                     发明背景
植物及通常的植物性的(vegetals)物质仍然是医药中应用的活性组合物和化合物的重要来源。新的植物、植物中存在的新化合物或甚至对存在于植物中的组合物的修饰对phitochemical工业具有潜在重要性。
在不仅考虑要获得的化合物的产量而且考虑可事实上获得的化合物的化学特性时，在植物性物质和植物中提取成分的方法是非常重要的。
在phitochemical工业中常用的方法是基于用水或蒸汽、用有机溶剂或用水和有机溶剂如水和乙醇的混合物对捣碎的植物或植物性的物质进行提取。包含浸解的步骤也为本领域所公知。最后，可通过常规的方法如倾析、离心或过滤来将水提取物与固相分离。也可实施额外的化学处理以修饰存在于植物中的化合物的结构。对于该主题的更多信息，参见Dr.Pio Font Quer，“医学植物。最新的Discorides(Medicinal Plants.The updated Discorides)”Ed.Labor，S.A.，12thEdition，1990。
法国专利FR 2733419描述了选自老鹳草属(Geranium)、车前属(Plantago)和金盏菊属(Calendula)的至少3种不同植物的混合物的提取物的制备，通过将300-400g新鲜的汉荭鱼腥草(Geraniumrobertanium)叶、10-50g干的长叶蒲公英(Plantago lanceolata)叶和10-50g干的金盏菊(Calendula officinalis)叶在3升水中于15-30℃浸泡3-15天而实现。根据FR 2733419，因而获得的组合物可用于对癌的治疗中。然而，这3中提取物已显示不令人满意的活性，如在下面的实施例中反映的。
欧洲专利EP0934746公开了从老鹳草属、车前属和金盏菊种制备植物水提取物，该提取物是将10-60g干的鼠掌老鹳草(Geraniumsibiricun)叶或者300-360克鲜鼠掌老鹳草叶、10-60g干的长叶蒲公英叶和10-60g干的金盏菊叶浸泡在300g水中而获得。生产所述水提取物的方法包括先在水中浸软捣碎的植物，然后将混合物抽滤，再进行过滤处理。根据ER 0934746A，该抽提物可用于对癌的治疗中。然而，其显示不令人满意的活性，如在下面的实施例中所反映的。
因而，在本领域中需要制备另一种植物提取物的方法，其提取物可用作治疗药剂，且最终可提供得到新化合物的途径。
                      发明概述
本发明提供制备植物性物质特别是植物的水提取物的方法，以及通过该方法获得的组合物，其中有些可用于医疗，特别治疗免疫抑制性疾病如癌、结核病、流行性感冒、普通感冒、变态反应、红斑狼疮、牛皮癣和AIDS，或治疗病毒疾病如肝炎。
因而本发明的一个方面涉及制备植物性物质特别是植物的水提取物的方法，该方法包括以下步骤：
a)净化植物。
b)捣碎植物。
c)用激光辐射处理捣碎的植物。
d)将在步骤c)中获得的混合物悬浮于水中。
e)浸解在步骤d)中获得的悬浮液。
f)分离结果所得的液体。
本发明的第二个方面涉及由本方法获得的组合物或水提取物(水解产物(hydrolate))。
本发明进一步的方面涉及本组合物作为治疗药剂在治疗免疫抑制疾病如癌、结核病、流行性感冒、普通感冒、变态反应、红斑狼疮、牛皮癣和AIDS中或治疗病毒疾病如肝炎中的用途。
本发明进一步的方面涉及包含通过本方法获得的水提取物的药物组合物。
本发明的方法与那些在现有技术中所引用的方法的区别在于该捣碎的植物用激光辐射处理。
如在下面的实施例中所证明的，用激光处理捣碎的植物导致提取物中新活性的存在或活性的意外的高度增加。因此，这样获得的提取物必然与那些通过不实施激光处理的方法获得的有差别。
                        发明详述
如上所述，本发明的第一个方面涉及制备植物性物质特别是植物的水提取物的方法，该方法包括步骤：
a)净化植物。
b)捣碎植物。
c)用激光辐射处理捣碎的植物。
d)将在步骤c)中获得的混合物悬浮于水中。
e)浸解在步骤d)中获得的悬浮液。
f)分离结果所得的液体。
关于术语“植物”应理解为相同物种的一个或几个单元，或不同物种的几个单元，或植物的部分或多个部分如茎、叶、花等。
净化(步骤a)通过用水洗涤植物来实施。在该步骤中所用的水量不具决定性作用，而可以依赖于植物污染的状态而有变化。尽管并不排除更高和更低的温度，但水温应该在10和40℃之间，优选在20和35℃之间，且最优选地为28℃。可采用洗涤通道(washing tunnel)来使该步骤便利。水的量和植物在洗涤通道中滞留时间不具决定性，且因此可依赖于植物的污染状态而有变化。该洗涤步骤可实施几次，在各步骤之间有干燥的步骤。该干燥步骤优选通过将植物放置在阳光下而实现。
一旦植物已经彻底净化，即通过常规方法如捣碎器或甚至人工地将它捣碎(步骤b)。尽管并不排除更高和更低的温度，但将植物捣碎的温度应该在10和40℃之间。
下一步将捣碎的植物进行激光辐射处理(步骤c)。作为激光辐射的来源，优选采用红线性激光器二极管(red linear laser diode)，该二极管能谐波(harmonic)生成150～810nm范围的波长的能力。激光辐射的波长更优选为200～400nm，且最优选为250nm。激光辐射的功率优选为1～60瓦特，更优选为10～30瓦特且最优选为20瓦特。斑点的直径优选为1～6mm，更优选为2～5mm且最优选为4mm。将捣碎的植物进行激光辐射处理以使得全部或大多数混合物都被照射。这通过人工将激光发生器移动过捣碎的植物或者使捣碎的植物在传送带上通过一套几个激光发生器而实现。优选使每千克捣碎的物质用激光辐射处理3～10分钟的时间，更优选为5分钟的时间。尽管并不排除更高和更低的温度，但将捣碎的植物用激光辐射处理的温度应该在10和40℃之间。
下一步将激光处理过的物质悬浮于水中(步骤d)。在该步骤可采用任何商品矿质水。使每升水中存在50～300，优选为100～250克激光处理过的物质而进行悬浮。尽管并不排除更高和更低的温度，但将捣碎的植物悬浮于水中的温度应该在10和40℃之间。
然后将悬浮液于2～10℃，优选为4～8℃的温度放置5～20天的时间，优选为7～15天，以使得混合物发生浸解(步骤e)。
最后，在离析步骤后，将液相同固相分离(步骤f)。可挤压该固体以助于分离。该分离可通过单独的倾析或优选倾析后过滤来实现。该过滤优选在压力下实施。最优选，用5μm、1μm和0.22μm的滤器实施3次连续的压滤。尽管并不排除更高和再低的温度，但实施分离的温度应该在10和40℃之间。
本发明的方法可应用于任何类型的植物，不论是单子叶植物还是双子叶植物。它可应用于不同植物的混合物。完整植物可采用本发明的方法，尽管优选叶和花。
可应用本发明的方法的植物科的非限制性实例为：菊科(Asteraceae)、蔷薇科(Rosaceae)、十字花科(Crucifrae)、唇形科(Labiatae)、木贼科(Equisetaceae)、虎耳草科(Saxifraganceae)、菊科(Compositae)、五加科(Araliaceae)和伞形科(Umbeliferae)。可应用本方法的植物物种的非限制性实例为：Mentha sativa、茴芹(Pimpinella anisum)、刺五加(Eleutherococcus senticosus)、Equinacea angustifolia、聚合草(Symphytum officinalis)和Equisetumarvensa。可应用本发明的方法的优选物种为金盏菊、欧洲龙牙草(Agrimonia eupatoria)、宽叶独行菜(Lepidium latifolium)和白花野芝麻(Lamium album)。
通过本发明的方法获得的水提取物(水解产物(hydrolates)或组合物)组成了本发明的第二个方面。因而，由本方法在非限制性实例：Mentha sativa、茴芹、刺五加、Equinacea angustifolia、聚合草和Equisetum arvensa中的应用而产生的组合物在本发明的范围之内。具有特殊重要性的是通过将本发明的方法应用于金盏菊和应用于欧洲龙牙草、宽叶独行菜和白花野芝麻的混合物所获得的水提取物，这也在本发明的范围之内。
已发现一些根据本发明的方法获得的水提取物可应用于医疗。这如上所述组成了本发明的第三个方面。
通过将本发明的方法应用于金盏菊所获得的水提取物和具体而言地通过将本发明的方法应用于该植物的花所获得的水提取物显示其作为免疫刺激物的活性。如在以下所示实施例所证明的，该活性之高出科意料。应相信本提取物发挥刺激淋巴细胞T、B和巨噬细胞的淋巴细胞转化活性的作用，尽管并不一定是这种理论。通过将本发明的方法应用于金盏菊所获得的提取物因而可应用于治疗免疫抑制性疾病。这些疾病的非限制性的实例为癌，如肝癌、肺癌、肾癌、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌或前列腺腺体癌；脑癌如星形细胞瘤和成胶质细胞瘤；宫颈癌和膀胱癌；结核病、流行性感冒、普通感冒、变态反应、红斑狼疮牛皮癣和AIDS。
此外，通过将本发明的方法应用于植物欧洲龙牙草、宽叶独行菜和白花野芝麻的混合物所获得的水提取物和尤其是通过将本发明的方法应用于植物欧洲龙牙草、宽叶独行菜和白花野芝麻的叶子的混合物所获得的水提取物意外地显示抗病毒活性。更具体地，该提取物尤其对甲型、乙型、丙型、丁型和戊型肝炎的病毒具有活性。如在下示实施例中所证明的，其活性极高。此外，该提取物也显示对转氨酶和胆红素草代谢的高的调节活性，以及作为肝细胞再生的刺激物的活性。因此，通过将本发明的方法应用于植物欧洲龙牙草、宽叶独行菜和白花野芝麻所获得的提取物可应用于对病毒疾病的治疗中。这些疾病的非限制性的实例为甲型、乙型、丙型、丁型和戊型肝炎。该提取物也可应用于与高水平转氨酶和胆红素相关的肝病理学的治疗中。这些疾病的非限制性的实例为甲型、乙型、丙型、丁型和戊型肝炎；肝硬变和肝癌。
根据本发明者所做的研究和实验，应相信激光处理催化了某些植物化合物之间的反应和/或促进了某些植物化合物的提取，因而这些化合物在提取物中的存在导致上述意料不到的活性，尽管并不一定符合该理论。
本发明的进一步的方面涉及包含由本发明的方法获得的水提取物的药物组合物。
根据本发明的水提取物可如此或者以冻干形式制备药物组合物。它可通过独立地作为水提取物或冻干形式给药，或者以药物组合物的形式给药。药物组合为处方剂(formulation)的形式，其中(1)单独含有根据本发明的提取物；(2)含有一或多种适当的粘合剂、载体和/或进一步的辅助材料；和(3)可进一步含有额外的治疗活性物质。
载体材料、粘合剂和/或辅助材料必须为药学和药理学可耐受的，这样以来它们可与处方剂或制剂的其他成分联合而不对治疗的生物施加不利作用。
该处方剂包括适合于口服或肠胃外(包括皮下、皮内、肌内和静脉内)给药的，即使最好的给药途径依赖于病人状况。
该处方剂可为单剂量的形式。该处方剂根据药理学领域公知的方法制备。适于给药的活性物质的适当量可作为特殊领域治疗的函数而变化。通常，在单剂量处方剂中活性物质的浓度为总处方剂的5％～95％。
由本申请提供的发明通过在下文给出的实施例来阐明。
实施例1：根据标准方法制备金盏菊花的水提取物(比较实施例)。
将500g的金盏菊的花置于洗涤通道中并用水于28℃彻底洗涤。下一步用捣碎器将花捣碎。将结果所得的500g捣碎的物质再悬浮在约20℃的2升水中。然后将悬浮液于4℃放置12天。最后将液相和固相分离，首先通过倾析液体(挤压固体以利于分离)，然后用5、1和0.22μm的滤器于20℃进行3次连续的压滤。该方法得到约1.7升的赭色溶液(水提取物)。
实施例2：根据本发明的方法制备金盏菊花的水提取物。
将500g的金盏菊的花置于洗涤通道中并用水于28℃彻底洗涤。下一步用捣碎器将花捣碎。将结果所得的500g捣碎的物质用红线性激光器二极管来处理，该二极管能谐波生成250nm的波长、20瓦特的功率和4mm直径的斑点。该处理通过人工地将激光发生器在2.5分钟内移动过捣碎的物质而实现，使得全部或大部分混合物被照射。将激光处理的物质再于约20℃悬浮于2升水中。然后将悬浮液于4℃放置12天。最后将液相和固相分离，首先通过倾析液体(挤压固体以利于分离)，然后用5、1和0.22μm的滤器于20℃进行3次连续的压滤。该方法得到了约1.7升的赭色溶液(水提取物)。
实施例3-14：
下列植物的水提取物根据实施例1和2的程序制备。用上述方法处理的植物部分在括弧中显示。Equisetum arvensa(茎)、聚合草(叶)、Equinacea angustifolia(叶和花)、刺五加(叶)、茴芹(叶和花)和Mentha sativa(叶)。
对在实施例1-14中获得的水提取物进行了检验以通过定量淋巴细胞转化活性(LTA)而确定其作为免疫刺激物的活性。关于淋巴细胞转化活性其意思指淋巴细胞从休眠状态转化为活性状态的事实，这是通过免疫机制抗击疾病或者恢复可能由不同因素而消弱的免疫系统所必需的。这些检验是根据参考文献Max，W.等人，天然产物杂志(Journal of Natural Products)，vol.54，no.6，pp.1531-1542(1991)，通过体外将提取物加入到从小鼠分离的淋巴细胞而进行。对代表DNA复制的胸腺嘧啶脱氧核苷的结合进行了监控。该结合指示了淋巴细胞数目增加和淋巴细胞活性增加两者。该结果总结如表1。
表1
  实施例   植物  增加LTA(％)(标准方法)   增加LTA(％)(包括激光处理的方法)
  1/2   金盏菊  +277   +1204
  3/4   Equisetum arvensa  +26   +123
  5/6   聚合草  +43   +211
  7/8   狭叶紫锥花(Echinaceaangustifolia)  +98   +270
  9/10   刺五加  +106   +280
  11/12   茴芹  +11   +26
  13/14   Mentha sativa  +12   +28
从在表1中显示的结果，可以清楚看出根据本发明的方法制备的水提取物比根据标准方法即无激光处理的方法获得的水提取物显示在淋巴细胞转化活性值中更高的增加。此外，实在令人惊讶的是根据本发明的方法获得的金盏菊提取物显示在淋巴细胞转化活性中极高的增加。
实施例15：根据标准方法制备植物欧洲龙牙草、宽叶独行菜和白花野芝麻的叶水提取物(比较的实施例)。
将250g欧洲龙牙草的叶、250g宽叶独行菜的叶和250g白花野芝麻的叶置于洗涤通道中并用水于28℃彻底洗涤。然后用捣碎器将叶捣碎。将结果所得的750g捣碎的物质再悬浮于约20℃的3升水中。然后将悬浮液于4℃放置12天。最后将液相和固相分离，首先通过倾析液体(挤压固体以利于分离)，然后用5、1和0.22μm的滤器于20℃进行3次连续的压滤。该方法得到了约2.7升的深绿色溶液(水提取物)。
实施例16：根据本发明的方法制备植物欧洲龙牙草、宽叶独行菜和白花野芝麻的叶水提取物。
将250g欧洲龙牙草的叶、250g宽叶独行菜的叶和250g白花野芝麻的叶置于洗涤通道中并用水于28℃彻底洗涤。再用捣碎器将叶捣碎。将结果所得的750g捣碎的物质用红线性激光器二极管来处理，该二极管能谐波生成250nm波长、20瓦特功率和4mm直径的斑点。该处理通过人工地将激光发生器在4分钟内移动过捣碎的物质而实现，使得全部或大多数混合物被照射了。将激光处理过的物质再于约20℃悬浮于3升水中。然后将悬浮液于4℃放置12天。最后将液相和固相分离，首先通过倾析液体(挤压固体以利于分离)，然后通过用5、1和0.22μm的滤器于20℃进行3次连续的压滤。该方法得到了约2.7升的暗绿色溶液(水提取物)。
将在实施例15和16中获得的水提取物应用于28个不同肝疾病的患者的临床检验，该28人因肝疾病而显示高的转氨酶(GOT、GPT、GGT)、胆红素的值和高的病毒负荷量。在3个月的治疗后，那些施用从实施例15中获得的提取物治疗的病人显示转氨酶的微小降低和病毒负荷量无变化。然而，那些施用从实施例16中获得的提取物治疗的病人在2个月的治疗后令人惊讶地显示症状的恢复、正常值的转氨酶和胆红素，以及病毒负荷量重要的降低，即使是在有丙型肝炎病毒株I-B和突变病毒的情况下。

Claims (42)

1.制备植物水性提取物的方法，该方法包括以下步骤：
a)净化植物，
b)捣碎植物，
c)用激光辐射处理捣碎的植物，其中激光辐射处理是用红色线性激光器二极管(red linear laser diode)实施的，该二极管能生成谐波，150～810nm波长，1～60瓦特功率，直径为1～6mm的斑点，
d)将在步骤c)中获得的混合物悬浮于水中，
e)浸解在步骤d)中获得的悬浮液，
f)分离所得的液体。
2.根据权利要求1的方法，其中该方法应用于相同物种的一个植物单元或几个植物单元，或应用于不同物种的几个植物单元。
3.根据权利要求1或2的方法，其中该方法应用于植物的一个部分或多个部分。
4.根据权利要求3的方法，其中该方法应用于植物的茎、叶和/或花。
5.根据权利要求1的方法，其中用水进行净化。
6.根据权利要求5的方法，其中在洗涤通道中实施该植物净化步骤。
7.根据权利要求1的方法，其中人工或用捣碎机实施捣碎。
8.根据权利要求1的方法，其中波长范围为200～400nm，功率为20瓦特且斑点直径为4mm。
9.根据权利要求8的方法，其中波长范围为250nm。
10.根据权利要求1的方法，其中使每千克捣碎的物质用激光辐射处理3～10分钟的时间。
11.根据权利要求10的方法，其中使每千克捣碎的物质用激光辐射处理5分钟的时间。
12.根据权利要求1的方法，其中使得在每升水中存在50～300克经激光处理过的物质而得到悬浮液。
13.根据权利要求12的方法，其中使得在每升水中存在100～250克经激光处理过的物质而得到悬浮液。
14.根据权利要求1的方法，其中将悬浮液于2～10℃的温度放置5～20天的时间，以使得浸解发生。
15.根据权利要求14的方法，其中将悬浮液在4-8℃的温度下放置。
16.根据权利要求14的方法，其中将悬浮液放置7-15天的时间。
17.根据权利要求1的方法，其中将液相与固相分离开的步骤是通过实施倾析并随后用5、1和0.22μm的滤器进行3次连续的压滤而实现的。
18.根据权利要求1的方法，其中该方法应用于单子叶或双子叶植物。
19.根据权利要求1的方法，其中所述植物属于下面的科：菊科(Asteraceae)、蔷薇科、十字花科、唇形科、木贼科(Equisetaceae)、虎耳草科、菊科(Compositae)、五加科和伞形科。
20.根据权利要求1的方法，其中所述植物选自下面的物种：Mentha sativa、茴芹、刺五加、Equinacea angustifolia、聚合草、Equisetum arvensa、金盏菊、欧洲龙牙草、宽叶独行菜和白花野芝麻。
21.根据权利要求20的方法，其中所述植物是金盏菊。
22.根据权利要求21的方法，其中该方法应用于金盏菊的花。
23.根据权利要求1的方法，其中该方法应用于欧洲龙牙草、宽叶独行菜和白花野芝麻的混合物。
24.根据权利要求23的方法，其中该方法应用于欧洲龙牙草、宽叶独行菜和白花野芝麻的叶。
25.可通过权利要求1-20中任一项所定义的方法获得的水性提取物。
26.根据权利要求25的水性提取物，它是冻干的。
27.可通过权利要求21或22中定义的方法获得的水性提取物。
28.根据权利要求27的水性提取物，它是冻干的。
29.可通过权利要求23或24中定义的方法获得的水性提取物。
30.根据权利要求29的水性提取物，它是冻干的。
31.根据权利要求25-30中任一项的水性提取物用于制造药物的用途。
32.根据权利要求27-30中任一项的水性提取物用于制造治疗免疫抑制疾病的药物的用途。
33.根据权利要求32的用途，其中所述药物用于治疗癌、结核病、流行性感冒、普通感冒、变态反应、红斑狼疮、牛皮癣和AIDS。
34.根据权利要求33的用途，其中所述药物用于治疗肝癌、肺癌、肾癌、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌或前列腺腺癌、脑癌、宫颈癌或膀胱癌。
35.根据权利要求34的用途，其中所述药物用于治疗星形细胞瘤和成胶质细胞瘤。
36.根据权利要求33或34的水性提取物用于制造治疗病毒疾病的药物的用途。
37.根据权利要求36的用途，其中所述药物用于治疗甲型、乙型、丙型、丁型和戊型肝炎。
38.根据权利要求33或34的水性提取物用于制造治疗与高水平的转氨酶和胆红素相关的病理状况的药物的用途。
39.根据权利要求38的用途，其中所述药物用于治疗肝硬化和肝癌。
40.根据权利要求33或34的水性提取物用于制造刺激肝细胞再生的药物的用途。
41.包含根据权利要求25-30中任一项的水性提取物的药物制剂。
42.根据权利要求41的药物制剂，其进一步包括药学可接受的载体。
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