CN1256098C - 家畜动物脑脂类复合物药物的制备方法 - Google Patents

Abstract

一种家畜动物脑脂类复合物药物的制备方法，本发明以羊(牛等动物)脑为原料，去除胆固醇和饱和脂肪酸，保留多种脂类成份，如卵磷脂(PC)、脑磷脂(PE)、肌醇磷脂(PI)和磷脂酰丝氨酸(PS)、DHA、EPA等，所得脑脂类复合物经动物和临床实验证明具有增强记忆，治疗老年性痴呆的作用，消除了PS抗凝血作用及PE的凝血作用。所制软胶囊可直接为正常人和老年痴呆病人食用。

Description

家畜动物脑脂类复合物药物的制备方法

(一)技术领域：

本发明涉及一种家畜动物脑脂类复合物药物的制备方法，具体涉及具有神经保健治疗作用的羊、牛及其他家畜动物脑脂类的提取。

(二)背景技术：

羊(牛)脑或其他动物脑内含有胆固醇(CH)、卵磷脂(PC)、脑磷脂(PE)、肌醇磷脂(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酸(PA)、二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)等脂类。除胆固醇外，其他几种脂类均有抗动脉粥样硬化和降血脂的作用。PC是抗脂肪肝因子，PE是脑紊乱辅助治疗药。PI是细胞信号传导通路成分，PS、DHA、EPA可增强记忆，PC、PE、PI、PS均是脂质体的原料且均有不同程度的改善记忆，治疗老年性痴呆的作用。

从动物脑提取PC和CH已有报道，见吴梧桐主编《生物制药工艺学》，中国医药科技出版社，1992，403-415；商业部脏器生化制药情报中心站编著，《动物生化制药学》人民卫生出版社，1980，239-244。不同纯度的CH、PC、PE、PI的粗提方法也有报道，见张豁中、温玉麟等，《动物活性成份化学》，天津科学技术出版社1995，1224-1516。在增加记忆、抗老年性痴呆方面，以上各成分中，尤以PS效果最佳，这已被动物实验和临床所证实，参见鲁·根阿莫德塞，M.D等，“磷脂酰丝氨酸对阿尔茨海默病的治疗：多项临床研究结果”，精神药理学报，24(1)，1988(Luigi Amaducci，M.D等.Phosphatidylserinein the treatment of Alzheimer’s Disease：Results of a Multicenter study.Phychophar-Macology Bull 24(1)1988.)和扎诺蒂A等“长期磷脂酰丝氨酸处理可改善老龄鼠的空间记忆和被动躲避”，精神药理学报，99：316-321，1989(A.Zanotti等，chronic phosphatidylserine treatment improves spatial memory and passiveavoidance in aged rats.Psychopharmacology 99：316-321.1989)。而且来自动物脑的PS抗阿尔茨海默病(AD)效果好于植物提取的PS，参见阿建、布劳克兰德等“磷脂酰丝氨酸对中龄鼠的短期处理的认识强化特征：牛脑PS、蛋黄PS和大豆PS的比较”，基础营养，15(10)，779-783，1999(ARJAN Blokland等.Cognition-Enhancing properties ofsubchronic phosphatidyl serine(cps)Treatmeut in Middle-aged Rats：Comparisonof Bovine Cortex ps with egg ps and soybean ps.Basic Nutrition15(10)779-783.1999)。推测其主要原因是来自动物脑PS含有DHA和EPA。而植物来源PS无DHA和EPA。DHA有抗神经细胞调亡的作用，参见金喜泳等“二十二碳六烯酸神经细胞凋亡抑制作用”，生物化学杂志275(45)，35215-35223，2000(Hee-yong Kim等.Inhibition of Neuronal Apoptosis by Docosahexaenoic Acid(22：6n-3).The Journalof Biological chemistry 275(45)，35215-35223，2000)。

对于PS的提取大多数集中在分析和小样制备方面，参见苏晨等“从牛脑大批量制备高纯度磷脂酰丝氨酸的方法”，色谱学杂志B集，666：178-182，1995(Su chen等，Approachto the large-scale preparation of highly pure phosphatidylserine from bovinebrain.Journal of chromatography B.666：178-182，1995)和阿贝得S.L“磷脂酰丝氨酸的分离过程”(综述)，色谱学杂志B集，717：279-293(S.L.Abidi.Separationprocedures for phosphatedylserine(review.)Journal of chromatographyB.717：279-293.1998)

在生产上则大多采用酶法合成，即在磷脂酶D存在情况下，用大豆磷脂，鱼油和L-Serine合成，有的则采用Streptomyces sp.Strain(ATCC 55717)发酵产生磷脂酶D参见“一种工业化制备磷脂酰丝氨酸的工艺”，欧洲专利中清776976(A process forindustrial preparation of phosphatidylserine.European patent application 776976)和“磷脂酰丝氨酸的工业化制备工艺”，美国专利5700668(Process for the industrialpreparation of phosphatidylserine，us patent 5700668)。

对以上各成分分离纯化后，经动物和临床实验发现，PE具有明显的凝血活性，参见约瑟等，生物化学与生物物理杂志，28：71-80，1958(Rouser et al.Biochem.Biophys.Acta 28：71-80 1958)和特诺等，油脂研究杂志，4：52-56，1963(Turner D.L.et al.J.Lip Res.4：52-56.1963)。而PS具备抗凝血活性，参见马斯他得等，自然，196：1063-1065，1962(Mustard.et al.Nature，196：1063-1065，1962)。戴勒.维尔等(dellaValle et al)则将二者按比例合并使用来治疗神经系统紊乱，参见戴勒.维尔等，“治疗中枢神经系统有效而无凝血作用的、以磷脂酰丝氨酸为主要成分的药物及其制备方法”，美国专利，4595680(Pharmaceutical compositions and method for preparaingphosphatidylserine compositions useful in treating central neuvous systemdisorders without effects on blood coagulation，us patent 4595680)。资料表明脑内提取的PC、PE、PI和PS各成分均有延长寿命，增加记忆和抗AD作用(尤其血管性AD)。作为神经系统的保健治疗，采用这些脂类的混合物，既能相互屏蔽了负作用，又能在低于单PS治疗AD剂量情况下，增强其保健治疗效果。也使我国日益昌盛的养殖业副产品(动物脑)得以充分利用，提高经济效益。

(三)发明内容：

本发明针对现有技术的不足，提供一种家畜动物脑脂类复合物药物的制备方法。

本发明的技术方案步骤如下：

1、以羊、牛及其他家畜动物的脑为原料，以氯仿一甲醇-水三元提取体系，提取脑中脂类所有成分。

2、将1中所得提取物用丙酮萃取，残渣经干燥可获粉状脑磷脂复合物，丙酮液萃取走了胆固醇和脂肪酸。

3、上述2中丙酮液经蒸馏冷却得胆固醇结晶，除去胆固醇结晶，倾出丙酮液，蒸除丙酮得液体油脂肪酸，脂肪酸经皂化、酯化、尿素络合，脱色可得含DHA和EPA的不饱和脂肪酸。

4、上述2制得的脑磷脂复合物和上述3制得的DHA、EPA不饱和脂肪酸混合，酶法去残余微量蛋白和多肽，CO₂超临界脱溶，获得脑脂类复合物。

在上述步骤之后还可包括步骤5脑脂类复合物溶于色拉油或亚油酸，辅加脂溶性维生素A、D、E制成软胶囊。

上述脑脂类复合物可用于制备各种剂型的药物。有增强记忆，治疗老年性痴呆，消除PS抗凝血及PE凝血作用。例如经胶囊机制成软胶囊，口服。

上述1中，当动物脑为100重量份时，氯仿-甲醇-水三元体系是氯仿∶甲醇∶水＝2∶2∶1体积比。

上述2中，当提取物为50重量份时，按提取物∶丙酮＝1∶10；5；3；2重量比例萃取4次。

上述2中丙酮提取后的脑渣干燥后，按脑渣∶乙醚或氯仿＝1∶2.5～3重量比例浸泡萃取3次，合并乙醚或氯仿提取液，蒸去乙醚或氯仿得脑磷脂类复合物。

具体操作详细说明如下，但不限于此：

1)新鲜羊、牛等动物脑100g加入氯仿甲醇混合液(氯仿∶甲醇＝100ml∶200ml)，在组织捣碎器内打碎匀质，然后再加100ml氯仿，匀质30秒，加100ml蒸馏水均质30秒，滤纸过滤，静置分层得氯仿层。残渣再用氯仿萃取并洗滤纸，与以上滤液合并，蒸去氯仿得提取的脑中脂类复合物，蜡状。

2)取提取物脑中脂类复合物50g按脑中脂类复合物∶丙酮＝1∶10；1∶5；1∶3；1∶2重量比例萃取4次，先在容器内加入丙酮，80r/min磁力搅拌下逐渐加入脑中脂类复合物，搅拌萃取1h，置静分层，倾出上清液。最后一次将沉淀过滤，真空干燥(温度55℃，真空度为0.1)可得疏松磷脂粉状物。

3)将2)中多次合并的丙酮萃取液70～80℃沸腾蒸发回收丙酮，蒸至丙酮萃取液的1/10时停止加热，置冰箱中4-10℃冷放，可见胆固醇结晶出现。直接倒出丙酮液得胆固醇粗结晶品。再将丙酮液浓缩至1/10置-10℃--20℃，倒出丙酮液，得少量胆固醇粗品。蒸去剩余丙酮得液体油。

4)将得到的液体油加热至50℃左右，缓缓加入NaOH乙醇溶液，回流皂化后，回收乙醇。皂胶在60℃经盐酸溶液酸化调PH2-3，然后用去离子水洗涤至近中性，得到混合脂肪酸。混合脂肪酸在浓硫酸催化下加入过量乙醇进行回流酯化，反应结束后，回收乙醇。将酯化物用去离子水洗至中性，然后再精馏，可得含量在40％以上的DHA和EPA的乙酯浓缩物。该浓缩物在乙醇溶液中与尿素进行结合反应，回收乙醇，洗涤过量尿素后经真空蒸馏脱羧，1％活性白土脱色，可得浅黄色，澄清透明的DHA乙酯和EPA乙酯含量在80％左右的制品。

5)将2)制得的脑磷脂复合物和4)中DHA和EPA乙酯制品混合，取100g该混合物溶解在400ml甲苯中；另将中性蛋白酶0.5g放入250ml 50℃温水中制酶水溶液；将甲苯溶液缓慢倒入酶水溶液，慢搅拌30r/min50～50℃保温10h，酶解脂中所含微量蛋白，静置分层，取出上层甲苯层，下层含酶水溶液可作为下轮酶解实验用，也可90～100℃灭酶10分钟，经检测，脂中不再含有任何多肽和蛋白。蒸去甲苯得脑脂类复合物。

6)脑脂类复合物在压力为30Mpa，温度50℃，萃取脱溶时间为6h条件下CO₂超临界脱残留溶剂。

7)将脱溶的脑脂类复合物溶于色拉油或亚麻酸或亚油酸内，也可在配好的软胶囊内容物按每kg加入维生素V_A10万IU，VE 5-10G V_D 1-2g一种或组合，搅拌溶解后，倒入软胶囊机顶端料斗，经管道输送至滚动的明胶带之间由滚动的模具挤压成软胶囊。经40r/min转笼成型干燥。95％乙醇中一冲二洗除去胶囊表面油、冷风硬化成型，每粒软胶囊含脑脂类复合物500mg。经薄层层析扫描定量：脑脂复合物含PS 15～19％、PC 18～22％、PE 20～25％、PI 18～22％、PA 20～35％。

下面是本发明的脑脂类复合物的动物试验和临床试验情况。

脑脂类复合物对小鼠记忆障碍的改善作用实验

提取的脑脂类复合物是去除胆固醇及饱和脂肪酸后的多种磷脂及不饱和脂肪酸的复合物，采用跳台法，避暗法和水迷路法(除奇主编，中药药理研究方法学，人民卫生出版社892-896，1993)，以PS作对照，观察该脂类复合物对记忆障碍小鼠的改善作用其结果为：

1、跳台法：小鼠在铜栅箱内触电后跳上跳台可逃避电击，因此获得记忆，用M-胆碱受体阻滞剂-樟柳碱造成小鼠记忆获得障碍模型，表现触电潜伏期缩短，触电次数增加，用樟柳碱致小鼠记忆障碍后，PS和脑脂类复合物按表1中所给剂量给记忆障碍小鼠，5分钟内错误次数明显减少(P＜0.05、P＜0.05)，跳台潜伏期明显延长(P＜0.01、P＜0.01)。

表1  脑脂类复合物对樟柳碱所致小鼠记忆获得障碍的改善作用(n＝10，X±SD)

组别	给药(PO)(mg/kg)	樟柳碱(ip)(mg/kg)	测试潜伏期(S)	5min内错误次数(次)
					对照组模型组PS阳性对照组	对照液对照液350mg/60kg	盐水10药液10	241.40±123.65**77.40±96.76247.10±111.94***	0.20±0.41**1.40±1.080.30±0.66**
给药组1	350mg/60kg	药液10	235.8±147.2**	0.2±0.33**
					给药组2	400mg/60kg	药液10	248.2±105.1***	0.3±0.57**

^*示与模型组相比

与模型组相比潜伏期显著延长，5分钟内错误次数降低，说明其对记忆获得障碍有显著改善作用。

2、避暗法：小鼠放入暗箱，受电击后入明箱获得记忆，24h后重复实验。

表2  脑脂类复合物对东莨菪碱所致小鼠记忆获得障碍的改善作用(X±SD)

组别	给药	氢溴酸东莨菪碱(mg/kg)	潜伏期(S)	5min内错误次数
					对照组模型组PS阳性对照组	生理盐水(10ml/kg)生理盐水(10ml/kg)350mg/60kg	生理盐水22药液2	106.83±50.9055.00±32.96△△205.94±70.33**	0.3±0.152.1±0.3△△△0.2±0.14***
给药组1	350mg/60kg	药液2	160.2±58.7***	0.3±0.2***
					给药组2	400mg/60kg	药液2	189.5±80.4***	0.2±0.15***

记忆好的小鼠入暗箱潜伏期延长，钻洞次数减少，用M-胆碱受体阻滞剂东莨菪碱造成小鼠记忆损伤模型，以PS为对照，用本法检测脑脂类复合物对小鼠记忆障碍的保护作用。

发现PS和脑脂类复合物(按表中所给剂量)能明显减少5分钟内钻洞次数(P＜0.01，P＜0.01)，潜伏期明显延长(P＜0.01，P＜0.01)。

3、水迷路法：明暗道Y型小迷路装置，小鼠至明道抵达终端平台可得休息，经训练可获得记忆。用巴比妥钠造模使小鼠脑中枢受抑制，产生方向辨别障碍。实验以PS为对照，观察脑脂类复合物增强学习记忆的功效。实验所使用PS和脂类复合物剂量同表一，巴比妥钠造模剂量为皮下注射15mg/kg。

[结果]模型组与对照组相比，模型组每天正确反应百分率显著低于对照组(P＜0.01)，说明模型成功。PS阳性对照组小鼠正确反应百分率显著高于模型组，说明PS对巴比妥钠所致小鼠方向辨别障碍有保护作用(P＜0.01)。脑脂类复合物给药正确反应百分率显著高于模型组，组1(P＜0.05)，组2(P＜0.01)。

以上三种实验说明，所提取脑脂类复合物对记忆障碍小鼠有明显改善作用。表明了该提取物增强记忆的生理作用。

脑脂类复合物的临床实验

一、老年性痴呆症状及分期

0期，属痴呆前期。老年痴呆作为一种慢性进行性的脑器质精神障碍，在疾病的发生发展过程中有其一定的特征，在此阶段便可见到具有一定特征性的症状。

在疾病的最早期，仅可见到轻度的异常，主要表现为易疲劳，患者自觉哪儿都不舒服，类似神经衰弱的症状。

随疾病缓慢发展，患者的情感方面出现异常，积极性降低，有抑郁倾向、不安、情绪不佳，有时还会出现轻度的欣快感，进一步发展，多出现人格方面的改变，象原有的性格倾向较前明显，有夸大色彩，表现出性格的尖锐化趋势，偏执、缺乏耐性、易发怒等。

该阶段，病理学上，尚未出现神经细胞的脱落、坏死，可能是出现了神经突触功能的异常，因此，大体上还看不到脑萎缩，CT均无异常所见。这时是应用药物治疗和预防Alzheimer病的最佳时期，但此期间所出现的不安、抑郁及人格方面的改变，在正常老年人中均可见到，在有明确的痴呆症状之前，单凭这些非常特异性的症状难以确定诊断，若结合基因诊断及智能检测将会有利于早期诊断。

1期，为疾病的早期。该期以及记忆障碍为突出表现。外表看来，患者似健忘的正常老年人，记住新知识困难。然而随疾病的进一步发展，呈现病理性遗忘，患者反复问同一件事情，饭后马上又催促开饭。与对最近的事易忘记相比，对以前的事情记得较好，但对自己生活史中发生的事时间顺序混乱，把过去的事当作现在的事，并与他人愉快地谈论。此期的记忆力障碍，可影响到正常的工作和社交活动。不过，此时的患者尚能保持自身和周围环境的清洁卫生，判断能力基本正常，运动系统未受损害，脑电和CT均无异常改变，仍可以在自己家里独自生活，不需要特殊照顾，不必请专业人员护理。病程可持续1-3年。

2期，为疾病的中期，即中度痴呆期。大脑皮层明显受损，各方面的损害均加重。有明显的记忆力和定向力障碍，不知道现在是什么时候，无法区分白天和黑夜，把自己的家当作别人的家，不能进行简单的计算，极简单的工作也无法完成。表现出失语、失用、失认。情感方面，患者性情急躁、缺乏耐性、易怒、一天中总要吃饭等人格改变异常突出。行为上，患者无法安静，常无目的地外出，可出现幻觉、妄想，及不注意卫生等行为异常及精神症状。此时，患者不能独立生活，常会遇到意外事故，是本病看护中最困难的时期，需要多人看护，此期间的看护负担也最重。在此期间，用电背景波呈发作性漫波，CT正常或脑室扩大、脑沟加深。该期多持续在起病后的2-10年。

3期，病情极重，为疾病的终末期。此期大脑皮层功能丧失，患者智能崩溃，精神活动和运动功能变得不活跃，表情呆板，麻木，括约肌功能障碍，尿便失禁，四肢肌张力增高、屈曲挛缩，逐渐卧床，表现为：①无任何意识性活动；②不语、不动，不能注视；③二便失禁；④自发性或反向性去皮质强直，双上肢屈曲过胸，双下肢伸性强直；⑤基本的生命反射存在，呼吸、循环平稳，睡眠节律存在。最终，可因感染或全身多器官功能衰竭而死亡。此期间，脑电呈弥漫性慢波，CT示脑室扩大，脑沟增宽，呈现全脑萎缩，以额叶、颞叶更为明显。该期多在发病后的8-12年。

二、国内老年性痴呆诊断常用的MMSE表

简易精神状态检查表(Mini-Mental State Examination，MMSE)。MMSE的内容较为全面，检查方法简便，是各种检查方式中最为实用的一种(王德生、张守信主编，老年性痴呆，2D01，P306)。

精神状态检查表(MMSE)

	检查内容	回答	得分
				1(5分)	今年是哪一年？现在是什么季节？今天是星期几？今天是几月几日？	年星期月日	(  )(  )(  )(  )
2(5分)	这是哪个省？是什么市？这是哪一个医院？这是哪一层楼？这是属于哪一个地区？(如山东地区)	省市医院楼	(  )(  )(  )(  )(  )
				3(3分)	复述3个无关物品的名称。(如皮球、国旗、树木)检查者每隔1秒钟说出一个物品名，而后让患者复述。答对1个给1分。检查者可重复至患者全部复述出为止。(最多6次)并记下检查者一共重复几次：(  )次		(  )
4(5分)	100顺次减7，共减5次，答对1个给1分		(  )
				5(3分)	复述刚复述过的3个物品名称。复述对1个给1分		(  )
6(2分)	给患者看表，问患者：这是什么？给患者看铅笔，问：这是什么？答对一项给1分。		(  )
				7(1分)	复述一个句子：大家齐心合力一起拉绳子或四十四个石狮子。		(  )
8(3分)	按指令完成以下三个步骤的动作：用右手拿起纸将纸对折放在大腿上做对一步给1分		(  )(  )(  )
				9(1分)	按卡片上的指令做动作“闭上眼睛”		(  )

10(1分)	说一句完整的句子		(  )
				11(1分)	按下面的样子画图

                                             得分：(  )

注：总分为30分，得分在20分以下考虑为痴呆，其中14分以上为轻度智能障碍，6分到14分之间为中度智能减退，6分以下为重度痴呆。

三、脑脂类复合物对43例患者的临床应用结果

对脑脂类复合物确定含量，按表2剂量服用。0期和1期患者大多自己前来就诊，个别有陪伴。2期均有人陪伴，按MMES检查表和CT法诊断，一般服用6个月，3个月检查一次。0期3个月复查。

表2  脑脂类复合物临床应用结果

分期	MMES分	人数	剂量	服法(口服)	有效率
						0(疾病最早期)	20～18	8	1.2g/日	600mg/次2次/日	90％
1轻度智能障碍期(疾病早期)	18～14	19	2.4g/日	1200mg/次2次/日	75％
						2中度痴呆期	14～6	13	2.4g/日	1200mg/次2次/日	40％
3(重量痴呆：患者很少有能力进行MMES检查)(疾病终末期)	6～0	3	2.4g/日	1200mg/次2次/日	0％

注：效果评价：(1)复查时按MMES表检查，能从后一期进入前一期为效，即3期变2期、2期变1期、1期变0期、0期转为正常。(2)2期和3期均要有CT图片，脑明显扩大，脑沟增宽，经医生检查确定为脑萎缩。将CT图片和MMSE结合诊断。

服用脑脂类复合物3个月，约有50％的人痴呆症状减轻，嘱继续服用，患者连服6个月无明显不适，由统计可知，脑脂类复合物对早期痴呆更有效，对中度痴呆部分有效，对重度痴呆无效。

四、典型病例

刘建春，女，67岁，山东东阿县人，经山东省立二院CT检查，确诊为脑萎缩，MMES检查10分，能走动，但不稳，反应迟钝，有明显记忆和定向力障碍。吃饭需人照料帮助，有失用表现；常无目的外出，有时自己不能返回，失认；个别时候自己跌倒难以站起，患者独立生活困难，难以自理，有冠心病和轻度糖尿病，诊断为中度痴呆(2期)，服用脑脂类复合物2400mg/天，连服6个月，先是症状停止发展，3个月后有所好转，其家人也照顾细心、耐心、周到。服用脑脂类复合物3个月和6个月后，CT检查脑室未再扩大。MMES检查分数上升分别为12分和15分。反应，记忆，行动，精神状态均好转。

(四)具体实施方式：

实施例1：

1)新鲜羊脑100g加入氯仿甲醇混合液(氯仿∶甲醇＝100ml∶200ml)，在组织捣碎器内打碎匀质，然后再加100ml氯仿，匀质30秒，加100ml蒸馏水均质30秒，滤纸过滤，静置分层得氯仿层。残渣再用氯仿萃取并洗滤纸，与以上滤液合并，蒸去氯仿得脑中脂类复合物(蜡状)。

2)取脑中脂类复合物50g按脑脂类复合物∶丙酮＝1∶10；5；3；2比例萃取4次，先在容器内加入丙酮，80r/min磁力搅拌下逐渐加入脑脂类复合物，搅拌萃取1h，置静分层，倾出上清液。最后一次将沉淀过滤，真空干燥(温度55℃，真空度为0.1)可得疏松磷脂粉状物。

3)将2)中多次合并的丙酮萃取液70～80℃沸腾蒸发回收丙酮，蒸至丙酮萃取液的1/10时停止加热，置冰箱中4-10℃冷放，可见胆固醇结晶出现。直接倒出丙酮液得胆固醇粗结晶品。再将丙酮液浓缩至1/10置-10℃--20℃，倒出丙酮液，得少量胆固醇粗品。蒸去剩余丙酮得液体油。

4)将得到的液体油加热至50℃左右，缓缓加入NaOH乙醇溶液，回流皂化后，回收乙醇。皂胶在60℃经盐酸溶液酸化调PH2-3，然后用去离子水洗涤至近中性，得到混合脂肪酸。混合脂肪酸在浓硫酸催化下加入过量乙醇进行回流酯化，反应结束后，回收乙醇。将酯化物用去离子水洗至中性，然后再精馏，可得含量在40％以上的DHA和EPA的乙酯浓缩物。该浓缩物在乙醇溶液中与尿素进行结合反应，回收乙醇，洗涤过量尿素后经真空蒸馏脱羧，1％活性白土脱色，可得浅黄色，澄清透明的DHA乙酯和EPA乙酯含量在80％左右的制品。

5)将2)制得的磷脂复合物和4)中DHA和EPA乙酯制品混合，取100g该混合物溶解在400ml甲苯中；另将中性蛋白酶0.5g放入250ml 50℃温水中；将甲苯溶液缓慢倒入酶水溶液，慢搅拌30r/min50～50℃保温10h，酶解脂中所含微量蛋白，置静分层，取出上层甲苯层，下层含酶水溶液可作为下轮酶解实验用，也可90～100℃灭酶10分钟，经检测，脂中不再含有任何多肽和蛋白。蒸去甲苯得脑脂类复合物。

6)脑脂类复合物在压力为30Mpa，温度50℃，萃取脱溶时间为6h条件下CO₂超临界脱残留溶剂。得脑脂类复合物药物。

实施例2：如实施例1所述，所不同的是在得到脑脂类复合物药物后，将其制成软胶囊。

将脱溶的脑脂类复合物溶于色拉油、亚麻酸或亚油酸内也可在配好的软胶囊内容物按每kg加入V_A10万IU，VE 5-10G V_D1-2g(也可只加三种维生素中的一种，搅拌溶解后)，倒入软胶囊机顶端料斗，经管道输送至滚动的明胶带之间由滚动的模具挤压成软胶囊。经40r/min转笼成型干燥。95％乙醇中一冲二洗除去胶囊表面油、冷风硬化成型，每粒软胶囊含脑脂类复合物500mg。

实施例3：

新鲜牛脑切成片状，55℃温度下热风干燥，粉碎成米粒大小按脑粒重∶丙酮＝1∶10；5；5比例搅拌萃取3次得丙酮萃取液，以下DHA和EPA乙酯制法以及胆固醇制法按实施例1，而丙酮提取后的脑渣干燥后，按脑渣∶乙醚(或氯仿)＝1∶2.5～3浸泡萃取3次，合并乙醚(或氯仿)提取液，蒸去乙醚(或氯仿)得脑磷脂类复合物。

实施例4：

国内现已有生化原料厂，将牛脑烘干后提取胆固醇，如以此除胆固醇后的脑渣为原料，可按实施例2中乙醚(或氯仿)萃取方法制得脑磷脂类复合物。

实施例5：

原料为其他动物如猪、马、驴、狗、兔等动物的鲜脑、干脑或提取过胆固醇的脑，萃取方法同实施例1、2、3。提取的脂类复合物也具有较好的增强记忆和抗老年性痴呆的作用。

Claims (5)

1、家畜脑脂类复合物药物的制备方法，其特征在于，包括步骤如下：

(1)以羊、牛及其他家畜动物的脑为原料，以氯仿一甲醇—水三元提取体系，提取脑中脂类所有成分，

(2)将(1)中所得提取物用丙酮萃取，残渣经干燥可获粉状脑磷脂复合物，丙酮液萃取走了胆固醇和脂肪酸，

(3)上述(2)中丙酮液经蒸馏冷却得胆固醇结晶，除去胆固醇结晶，倾出丙酮液，蒸除丙酮得液体油脂肪酸，脂肪酸经皂化、酯化、尿素络合，脱色可得含DHA和EPA的不饱和脂肪酸，

(4)上述(2)制得的脑磷脂复合物和上述(3)制得的DHA、EPA不饱和脂肪酸混合，酶法去残余微量蛋白和多肽，CO₂超临界脱溶，获得脑脂类复合物。

2、如权利要求1所述的家畜脑脂类复合物药物的制备方法，其特征在于，所述(1)中，当动物脑为100重量份时，氯仿—甲醇—水三元体系是氯仿∶甲醇∶水＝2∶2∶1体积比。

3、如权利要求1所述的家畜脑脂类复合物药物的制备方法，其特征在于，所述(2)中，当提取物为50重量份时，按提取物∶丙酮＝1∶10∶5∶3∶2重量比例萃取4次。

4、如权利要求1所述的家畜脑脂类复合物药物的制备方法，其特征在于，所述(2)中丙酮提取后的脑渣干燥后，按脑渣∶乙醚或氯仿＝1∶2.5～3重量比例浸泡萃取3次，合并乙醚或氯仿提取液，蒸去乙醚或氯仿得脑磷脂类复合物。

5、如权利要求1所述的家畜脑脂类复合物药物的制备方法，其特征在于，还包括步骤(5)脑脂类复合物溶于色拉油、亚麻酸或亚油酸，辅加脂溶性维生素A、D、E制成软胶囊。