CN1255374A - 一种治疗神经系统疾病的药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种新型治疗脑神经系统疾病的药物及其制备方法,它是以脑神经营养因子为主料,以三七、红花、麝香中草药为辅料制成。其过程为,将脑组织匀浆化,后反复冻溶,再酸解、中和、离心吸取上清液、分离纯化、合并生物活性组份,双滤除菌、冷藏,制得脑神经营养因子浓缩液;然后将三七、红花、麝香等原料粉碎,分别干馏提取挥发性成分,再用水煎提取水溶性成分,接着浓缩、醇析法去杂质以氯化钠、柠檬酸盐缓冲液配药,灭菌,并加入脑神经营养因子浓缩液,按临床需要,分装,封口。

Description

一种治疗神经系统疾病的药物及其制备方法

本发明涉及一种治疗神经系统疾病的药物，具体地说是一种以一种新型脑神经营养因子为主料，以中药为辅料的治疗神经系统疾病的药物，本发明还涉及上述药物的制备方法。

神经系统疾病是人的指挥中枢发生故障的疾病，是严重危害人类健康的常见多发病。据有关资料报导，我国脑神经疾病发病率占人口的18.4‰，弱智儿童发病率占22.2‰，老年病的发病率占老年人口的10％，偏头痛发病率占人口的3.5％。再加上外伤、肿瘤、脑卒中，我国神经系统疾病的总人数有上亿人口，并有逐年增加的趋势。

目前，流行的治疗神经系统疾病的临床用药是西药中的脑活素，这是近10年来发展起来的一种能够营养神经，激活神经生长的较好的药物，但该药物疗效进展缓慢，其价格昂贵，来源困难，还不能满足目前神经系统疾病临床治疗的需要。

本发明人长期从事药物的研究，从博大浩瀚的祖国医学宝库中吸取营养，力求发挥中、西药各自的长处，做到标本兼治。在多年的医学实验和临床发现，中成药中含有三七、红花，麝香等成分的药物对营养神经，兴奋神经具有一定的作用。将它们与西药中的神经营养因子，特别与脑神经营养因子结合的药物。可大大改善原有治疗神经系统疾病的西药的治疗效果，

本发明的目的在于提供一种以脑神经营养因子为核心，辅以中草药成分，在改善现有治疗神经系统疾病的前提下，又能大大的降低药物的成本。

本发明还提供了制备上述治疗神经系统疾病药物的方法。

本发明的一种治疗神经系统疾病的药剂，其特征在于它是由下述原料制成的药剂(以下均为重量比)：

干燥脑神经营养因子   0.5-3.5    三七     0.1-8

红花                 0.35-20    麝香酮   0.05-4

柠檬酸盐缓冲剂       5-300      氯化钠   0.045-4。

制备上述的治疗神经系统疾病的药剂优选原料配方为，

干燥脑神经营养因子   0.5-2.5    三七     0.1-5

红花                 0.35-17.5  麝香酮   0.05-2.5

柠檬酸盐缓冲剂       5-250      氯化钠   0.045-2.25。

制备上述的治疗神经系统疾病的药剂最佳原料配方为，

干燥脑神经营养因子   2.5    三七     5

红花                 17.5   麝香酮   2.5

柠檬酸盐缓冲剂       250    氯化钠   2.25。

所述的脑神经营养因子是由新鲜羊脑制得的脑神经营养因子。

所述的药剂是任何一种药剂学上所述的剂型。

所述药剂最好是注射液。

上述治疗神经系统疾病的药物的制备方法，依次按下述步骤进行：

(A)脑神经营养因子的制备

取新鲜羊脑，匀浆化后反复冻溶，再酸解、中和至PH7.4，离心吸取上清液，分离纯化，合并生物活性组分，滤膜除菌，冷藏；

B中成药辅剂的制备

取三七、红花、麝香分别粉碎、分装、减压干馏，分别得到三七、红花、麝香的干馏液后，混合，将其混合液蒸馏，精馏，将精馏液冷藏；再将上述干馏过的药楂，加水煎二次、滤过、合并滤液、浓缩、加入2倍量的乙醇、搅匀、加热回流至沸半小时、冷至室温、放入冰箱冷藏24小时以上，倾取上清液后，回收乙醇，重复上述醇析法后，用定性滤纸滤过，滤液回收乙醇得流浸膏状物；

C成品制备

将上述冷藏的中药精馏液加入氯化钠及柠檬酸缓冲剂(PH＝7)，在不断搅拌下缓慢加入上述中药辅剂流浸膏状物，调节PH＝7.4，加入0.3％活性炭抽滤，精滤，100℃高温灭菌30分钟后加入上述冷藏之脑神经营养因子，混匀，分装制得本发明的治疗神经性系统疾病的药物。

于新鲜羊脑制得的浓缩液顺序用5微米和2微米二次滤膜除菌。

本发明的一个重要特征是本发明的药物中含有丰富的促进神经细胞生长、止血、活血、止痛、促醒等功效的成分：经北京市×××××××测定，各剂量组主要成分如下：

名  称	5ml	100ml	250ml
				多肽	0.075	1.5	3.75
氨基酸	0.425	8.5	21.25
				三七素	0.01	0.2	0.5
红花黄色素II	0.015	0.3	0.75

红花黄色素III	0.015	0.3	0.75
				麝香酮	0.005	0.1	0.25
氯化钠	0.045	0.9	2.25

本发明的药物的化学特性在于由总匀浆经过酸解、中和离心获得的上清液组分粗产品的生物活性组分对胰蛋白酶是敏感的，表明该药物中肽类为主要成分。上述上清液提出物粗产品中存在的生物活性组分在SephadexG-50柱上洗脱下来，洗脱时间近似于细胞色素C，表明活性分子的等电位近似于细胞色素C，即约10-10.5。对所得到的生物活性组分进行SDS-PAGE电泳，由TSK-CM-3SW柱得到的生物活性物质的信号带的移动情况与标准溶菌酶相近，因而具有的大分子量约为10KD。

本发明的药物基于下述的药效原理：

1.促进神经营养：脑神经营养因子是一群属于自然生成，具有对脑神经特异作用的多肽，其主要作用在于促进神经元的分化(轴突和树突的形成)，保持神经细胞的完整性(特定传导物质的代谢)，和防止神经细胞的退化(免于损伤的保护)。脑神经营养因子对中枢和外周神经系统不同的神经细胞具有促进生长的功效，而此功效是随着该因子的多少而定。本发明药物是一种具有营养神经、刺激神经元再生的药物，它能诱导神经元的分化，保持神经元的存活，并保护神经细胞免受缺血和毒性的伤害，免疫组织化学方法揭示其作用是高度特异性的。实验显示，由外周注入，本发明药物可通过血脑屏障。多项实验证明，它可以达到以下功效：(1)防止自由基生成；(2)保护易受伤的海马CA1锥状细胞；(3)防止细胞性毒性水肿的生成；(4)稳定脑的微循环；(5)降低急性脑缺血的死亡率。

2.调节神经功能：电生理显示本发明药物对海马及皮质细胞具有持久的电生理效应(长期的电位增强效应)，而此电生理效应通常可作为判断学习过程的依据。组织学的研究显示，本发明药物可以明显促进海马锥状神经突触的形成。动物实验也显示，本发明药物可明显改善动物的学习能力。

3.调节神经代谢：脑组织切片和匀浆研究实验显示本发明药物可改善有氧性的能量代谢，此外还可提高蛋白质合成及改善细胞离子内的交换泵的功能，这些作用反对脑组织有特异性，而并不影响其它器官的效用，另外，在活体内本发明药物可明显降低脑内的乳酸的浓度，说明本发明药物对局部缺血或缺氧的突发事件具有保护作用，由于脑内的乳酸浓度降低，使氧自由基减少，因此神经元的线粒体不易受到损害。

我们对上述本发明的药物用动物进行了毒性或不良影响的实验，结果如下：

1.急性毒性实验：当使用本发明药物，大鼠口服灌胃至1200mg(药剂量)/Kg(鼠体重)，小鼠口服灌胃3000mg/kg时，3天内观察，均无任何不良反应；

2.长期毒性实验：用大鼠、小鼠、兔子分别进行静脉及肌肉注射本发明药物进行长期毒性实验，剂量为10、50、125mg/kg/天，连续20天，停1周后又连续用药20天，60天后处死动物，取血液分析，结果生化、尿样均正常，胃未见病变。用药组体重、脑重(用药30天，60天)较对照组增加快，组织病理学检查未见病变。兔子125mg/kg/天组发现肝功转氨酶(主要是血清谷丙及谷草转氨酶)升高及肝脏组织病理学的病变。而10mg/kg/天及50mg/kg/天组的兔子未发现对肝脏的毒性作用。而人的临床用药为0.3-0.6mg/kg/天(为兔子实验组的1/417分之一)，证明临床实验安全可靠。

3生殖毒性实验：大鼠怀孕6-17天时静脉注射给药剂量为5、15、45mg/kg，每天1次，除5mg/kg剂量组F₁乳鼠体重略有下降外，其它无任何不良影响。在另一实验中，兔子怀孕6-18天时，静脉5、15、45mg/kg，结果本发明药物对兔子无任何不良影响。证明本发明对动物及后代无任何影响，即无生殖毒性。

4.致癌毒性：本发明药物有促进神经细胞增殖的作用，但未发现任何一组有致癌性病变发生。

该药于1995年由北京×××××批准为内部制剂，在××××××及××××××二所医院经3年试用1000余例病人，年龄4-87岁不等，

其中：创伤性颅脑损伤                  421例

其它创伤性脑损伤(如出血、手术)        213例

脑梗塞                                197例

面瘫                                  17例

神经性耳聋                            5例

老年痴呆                              50例

偏头痛                                98例

其它神经性疾病                        21例

为了说明本发明疗效，特选择下列三组，第一组为实验组，使用传统的治疗方法(胞二磷胆碱、维生素、激素等)加用本发明的药物250ml/人/天进行治疗，第二组为对照组1用传统的治疗方法加用1994年12月从北京××××医药公司购得的由×××××生产的西药脑活素20ml/人/天(按其药物说明允许使用的最大剂量)治疗，静脉点滴，对照组2均单独使用传统的治疗方法进行对比；

1.偏瘫病人治疗对比：本组病人均为脑外伤或脑卒中造成的急性损伤，损伤时间均在30天以内，年龄在15-50岁，男女各半，各用药20天，测定其治疗前后肌力，比较如下：

表1  偏瘫病人治疗对比

组别	病例	用药前平均肌力	用药后平均肌力	平均增长(级)	治疗有效率％
						实验组	50	3.875	4.781	0.906	87
对照组1	50	3.911	3.998	0.087	4
						对照组2	50	3.883	3.887	0.004	2

2.昏迷病人治疗恢复情况对比：均选用脑外伤或脑卒中而突然昏迷病人各10例，年龄20-60岁，男女均有，发病3天内开始治疗。10天前后，用国际通用的Glassgow昏迷指数计分法，给予治疗前后测评：

表2  昏迷病人治疗对比

组别	病例	用药前Glas(分)	用药后Glas(分)	平均提高(分)	治疗有效率％
						实验组	10	7.8	14.2	6.4	90
对照组1	10	8.1	11.3	3.2	40
						对照组2	10	7.6	8.2	0.6	10

3.偏头痛病人治疗对比：各组20例，病史均为5年以上，年龄30-50岁，女多于男，入院时均有头痛发作，治疗10天，对比头痛症状消失人数。

表3  偏头痛病人治疗对比

组别	病例	用药前头痛发作人数	用药后症状消失人数	治疗有效率％
					实验组	20	20	17	85
对照组1	20	20	7	35
					对照组2	20	20	1	5

实验统计表明，本发明药物对各种神经系统疾病有明显的治疗效果。

经长期临床观察，病人的显效率与临床用药剂量有很大关系，当剂量控制在500ml(注射液)/天以下时，疗效和剂量成正比(用量在5-20ml/天时效果不明显，用量为100ml/天时可观察到好的效果，当用量在250-500ml/天时，效果显著)。当剂量超过500ml/天时，疗效未见到明显的递增增强。

上述用量均为成人用量。

实施例

(一)脑神经营养因子的制备

1.冻溶：将新鲜羊脑，每批制品约300克，用3倍体积的磷酸缓冲液打成匀浆，在-20℃冰冻后，在20℃条件下熔化。以上重复5次，以加速蛋白裂解。

2.酸解：冻溶后的匀浆物，用磷酸缓冲液稀释2倍，放置80℃水浴锅加热，加热过程中同时逐渐滴入5N的盐酸，并不停给予震动搅拌3-4小时，酸解；

3.中和：将酸解稀释液，先滴入1N氢氧化钠粗调，接近范围后再用0.1N的氢氧化钠将其中和至PH7.35。将中和液放置过夜自然冷却。

4.离心：将冷却的中和液离心(15000rpm，10分钟)吸取上清液；

5.分离纯化：先用Sephadex G-100的柱凝胶滤过，再用Sephadex G-50的柱超滤。用分光光度计在A280处监测，合并生物活性组分；

6.除菌：在除菌罐中，先后用0.5微米及0.2微米的滤膜除菌2次，用上法获得的150ml(约0.2千克)脑神经营养因子浓缩液，放置在0℃下保存。必要时可将其制备成干燥粉剂。

(二)中药辅剂的制备

取三七  0.4千克；红花  1.4千克；麝香酮  0.2千克；柠檬酸盐缓冲剂  20千克；氯化钠  0.20千克；

制备过程如下：

1.水蒸气干馏提取挥发组分：

取三七、红花、麝香分别粉碎、分装，减压干馏，分别得到三七、红花、麝香的干馏液后，混合，将其混合液蒸馏，精馏(精馏液为干馏液的1/3)，冷藏；

2.水煎提取水溶性成分：将上述干馏过的药楂，加水煎二次、滤过、合并滤液、浓缩至与上项等量。

3.醇沉除去杂质：向水煎浓缩液中加入二倍量的乙醇、搅匀、加热回流至沸半小时、凉至室温、放入冰箱冷藏24小时以上，倾取上清液后，回收乙醇至药液与2，3项等量，重复上述醇析法后，用定性滤纸滤过，滤液回收乙醇得流浸膏状物；

(三)配液

将上述冷藏的精馏液加入氯化钠及柠檬酸缓冲剂，在不断搅拌下缓慢加入上述流浸膏状物调节PH＝7.4，加入0.3％活性炭抽滤，精滤，100℃高温、30分钟灭菌后，加入上述冷藏之羊脑制得的脑神经营养因子，分装，封口，制得每支20ml本发明药物1000支。

Claims (10)

1.一种治疗神经系统疾病的药剂，其特征在于它是由下述原料制成的药剂：

干燥脑神经营养因子   0.5-3.5    三七    0.1-8

红花                 0.35-20   麝香酮  0.05-4

柠檬酸盐缓冲剂       5-300      氯化钠  0.045-4。

2.一种治疗神经系统疾病的药剂，其特征在于它是由下述原料制成的药剂：

干燥脑神经营养因子   0.5-2.5    三七    0.1-5

红花                 0.35-17.5 麝香酮  0.05-2.5

柠檬酸盐缓冲剂       5-250      氯化钠  0.045-2.25

3.一种治疗神经系统疾病的药剂，其特征在于它是由下述原料制成的药剂：

干燥脑神经营养因子   2.5         三七    5

红花                 17.5       麝香酮  2.5

柠檬酸盐缓冲剂       250         氯化钠  2.25。

4.根据权利要求1、2或3的治疗神经系统疾病的药物，其特征在于所述的脑神经营养因子是由新鲜羊脑制得的脑神经营养因子。

5.根据权利要求1、2或3的治疗神经系统疾病的药物，其特征在于所述的药剂是任何一种药剂学上所述的剂型。

6.根据权利要求5所述的治疗神经系统疾病的药物，其特征在于所述的药剂是注射液。

7.根据上述权利要求的任一种治疗神经系统疾病的药物的制备方法，依次按下述步骤进行：

(A)脑神经营养因子的制备

取新鲜羊脑，匀浆化后反复冻溶，再酸解、中和至PH7.4，离心吸取上清液，分离纯化，合并生物活性组分，滤膜除菌，冷藏；

B中成药辅剂的制备

取三七、红花、麝香分别粉碎、分装、减压干馏，分别得到三七、红花、麝香的干馏液后，混合，将其混合液蒸馏，精馏，将精馏液冷藏；再将上述干馏过的药楂，加水煎二次、滤过、合并滤液、浓缩、加入2倍量的乙醇、搅匀、加热回流至沸半小时、凉至室温、放入冰箱冷藏24小时以上，倾取上清液后，回收乙醇，重复上述醇析法后，用定性滤纸滤过，滤液回收乙醇得流浸膏状物；

C成品制备

将上述冷藏的中药精馏液加入氯化钠及柠檬酸缓冲剂(PH＝7)，在不断搅拌下缓慢加入上述中药辅剂流浸膏状物，调节PH＝7.4，加入0.3％活性炭抽滤，精滤，100℃高温灭菌30分钟后加入上述冷藏之脑神经营养因子，混匀，分装制得本发明的治疗神经性系统疾病的药物。

8.根据权利要求7的治疗神经系统疾病的药物的制备方法，其特征在于新鲜羊脑制得的浓缩液顺序用5微米和2微米滤膜二次除菌。

9.根据权利要求7和8的任一种制备治疗神经系统疾病药物的方法，其特征在于所述的药剂是任何一种药剂学上所述的剂型。

10.根据权利要求9所述的制备治疗神经系统疾病的药物的方法，其特征在于所述的药剂是注射液。