CN100339133C - 纳米sod与纳米黄芪的组合物 - Google Patents
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Abstract
纳米SOD与黄芪或其提取物的组合物及其制备方法,纳米SOD 1—10万活性单位:纳米黄芪或其提取物1—50克,粒径≤10—80纳米。即纳米SOD与黄芪或其提取物纳米化的组合物联合应用,提高药物浓度及有效成份,抗氧化活性提高10倍以上,皮肤、粘膜吸收率达98%以上,半衰期延长两个数量级以上;能进入细胞内直接清除自由基,具有更强的抗脂质过氧化的作用,综合药效发挥更彻底,远非传统复方中药可比,用于防治感冒、治疗小儿支气管哮喘、治疗慢性乙型肝炎、治疗慢性肾炎、治疗病毒性心肌炎、治疗消化性溃疡,还可用于神经系统,适合运动员、急症病人、外伤创伤人员使用,吸收速度极快,药效比SOD提高3—5倍,比黄芪提高5—10倍,是对人类医药事业的一大贡献。
Description
所属领域
本发明涉及超氧化物歧化酶SOD与中草药黄芪,特别是纳米SOD与黄芪或其提取物的组合物及其制备方法。将SOD与黄芪或其提取物的组合物纳米化,是利用两者相辅相成的功用,消除体内多余的超氧化物阴离子自由基和羟自由基,稳定细胞膜及抗酶活性,用于防治感冒、治疗小儿支气管哮喘、治疗慢性乙型肝炎、治疗慢性肾炎、治疗病毒性心肌炎、治疗消化性溃疡、用于视网膜脱离术后视力恢复、治疗鼻炎、治疗流行性出血热、治疗晚期血吸虫病、治疗软组织性腰腿痛,还可用于神经系统,能满足人类健康长寿之需要。
背景技术
中草药黄芪为豆科植物蒙古黄芪和膜荚黄芪的根。多年生草本,高50-150cm。根直而长,圆柱形,稍带木质,长20-50cm,根头部径1.5-3cm,表面淡棕黄色至深棕色。茎直立,上部有分枝,被长柔毛;药理:1.对免疫系统的影响(1)对非特异性免疫功能的影响。(2)对体液免疫的作用。(3)对细胞免疫的作用。(4)对自然杀伤(NK)细胞的影响。(5)对诱生干扰素的影响。(6)对红细胞免疫功能和影响;2.对机体代谢的影响(1)延缓衰老作用。(2)抗氧化作用。(3)对核酸代谢的影响。(4)对环核苷酸的影响。(5)对蛋白质及其他代谢的影响;3.对造血功能的影响;4.对心血管系统的作用;5.抗病毒作用;6.抗癌作用;7.其他作用;药性味甘,性温。归肺、脾经;功能与主治:益气升阳,固表止汗,利水消肿,托毒生肌。主治内伤劳倦,脾虚咳嗽,脱肛,子宫下垂,吐血,便血崩漏,自汗,水肿,血痹、痈疽难溃或久溃不敛,及一切气虚血亏之证;用于脾肺气虚,中气下陷之证、用于气虚而致自汗、用于水肿、用于气血不足之疮痈、肢体麻木、疼痛、半身不遂。此外,黄芪还可与茯神、栝楼、甘草、麦门冬、干地黄配用,以益气生津止渴,治疗消渴,与火麻仁、白密等润肠通便药同用,治疗血气不足,肠燥便秘,与糯米、川芎同用,以益气安胎,治疗胎动不安;与茯苓同用以益气健脾,利湿泄浊,治疗白浊;现代临床研究:防治感冒、治疗小儿支气管哮喘、治疗慢性乙型肝炎、治疗慢性肾炎、治疗病毒性心肌炎、治疗消化性溃疡、用于视网膜脱离术后视力恢复、治疗鼻炎、治疗流行性出血热、治疗晚期血吸虫病、治疗软组织性腰腿痛。
作为一种功效成分,纳米SOD的生理功效可概括为:清除机体代谢过程中产生过量的超氧阴离子自由基,延缓由于自由基侵害而出现的衰老现象,如延缓皮肤衰老和脂褐素沉淀的出现;提高人体对由于自由基侵害而诱发疾病的抵抗力,包括肿瘤、炎症、肺气肿、白内障和自身免疫疾病等;提高人体对自由基外界诱发因子的抵抗力,如烟雾、辐射、有毒化学品和有毒医药品等,增强机体对外界环境的适应力;减轻肿瘤患者在进行化疗、放疗时的疼痛及严重的副作用,如骨髓损伤及白细胞减少等;消除机体疲劳,增强对超负荷大运动量的适应力。在生物体内,纳米SOD可影响某些非酶的有机分配位体的结构,参与体内各种物质与能量的代谢,从而显示出它所具有的生理功效:为体内多种金属酶的组成成分;保护稳定生物膜;促进机体的生长发育和组织再生;调节免疫功能;影响内分泌系统;改善味觉并促进食欲;促进维生素A的正常代谢和视觉功能;保护皮肤和骨骼的正常功能;促进智力发育。
影响SOD临床应用的主要因素有:生物半衰期;异体蛋白免疫原性;细胞膜的通透性和稳定性。这表明修饰SOD进入体循环后,消除速率变慢,但分布速率仍较快;与游离SOD相比,修饰SOD在肝和肾中含量高,在脑中含量也较高;游离SOD在组织中的分布顺序趋势是胃、肠、肌肉、肺、脑、肝、脑、肾、脾、心和睾丸,结果证明修饰酶的代谢途径发生了变化,这与酶对细胞膜的通透性有关,修饰酶在脑里组织中的含量较高,说明修饰酶能够通过血脑屏障,这对于治疗脑外伤是有意义的。目前国内外主要集中在抗辐射,抗肿瘤,抗衰老及自身免疫性疾病上,治疗的病种有:缺血再灌流综合征、氧中毒、辐射损伤、皮肤病、骨关节炎、类风湿关节炎、烧伤、老年性白内障、家族性肌肉萎缩病等,由于目前使用的SOD均为异源蛋白,且分子量都大于30000,因此人体对其耐受性是应用中极为关注的问题,说明SOD无副作用,人对其有较强的耐受力;重组SOD是毒性和副作用很小的生物大分子,但作为抗原,多次注入体内仍可诱发免疫反应,故最理想的方法是将SOD基因克隆和表达人的SOD;或者纳米化使大分子肽变为小肽,利于人体吸收,这都是我们已解决的课题。
传统的中草药医用少为单味,多为复方,讲究君臣佐使,往往以一、二味君药为主治疗疾病,但由于中草药成份复杂,除有效成份外,还有大量杂质,甚至对人体有害的物质,产生副作用,以致毒害,需要其他臣药佐使来消除影响,帮助吸收,因而方剂容积过大,不利使用,还存在消此复彼的毒副作用,以及相互抵消,降低药效,难以发挥主药的真正作用,特别是吸收慢、药效低,亟待改进。
发明内容
本发明针对现有技术不足,利用现代生化技术及中医药学理论,提供一种纳米SOD与黄芪或其提取物的组合物及其制备方法,即纳米SOD与黄芪或其提取物纳米化的组合物联合应用,提高药物浓度及有效成份,抗氧化活性提高10倍以上,皮肤、粘膜吸收率达98%以上,半衰期延长两个数量级以上;能进入细胞内直接清除自由基,具有更强的抗脂质过氧化的作用,综合药效发挥更彻底,远非传统复方中药可比,用于提高抗缺氧能力,发挥抗疲劳功效,提高运动耐力,适合运动员、急症病人、外伤创伤人员使用,吸收速度极快,药效比SOD提高3-5倍,比黄芪提高5-10倍,是对人类医药事业的一大贡献。
纳米SOD与黄芪或其提取物的组合物,其配比为:纳米SOD 1-10万活性单位:纳米黄芪或其提取物1-50克,粒径≤10-80纳米。
纳米SOD与黄芪或其提取物的组合物制备方法,在于SOD与黄芪或其提取物的组合物组合后纳米化;或者纳米SOD与纳米黄芪或其提取物的组合。所述纳米SOD与黄芪或其提取物的组合物为上述两种组合物。纳米SOD黄芪,先单体纳米化再组合;或者组合后再纳米化,效果相当。
SOD可为植物或动物提取的SOD成份。
黄芪可为中草药葛根或提取物蒙古黄芪的黄芪甙I、II、IV,大豆皂甙,酸性多糖及近二十多种微量元素,其中钙、磷、镁、铁等含量较高;膜荚黄芪的黄芪甙I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII,含21种游离氨基酸,其中天冬酰胺,刀豆氨酸,游离氨基酸总量约为1.26%及近二十种微量元素,其中含量较高的有钙、磷、镁、铁等。
纳米是一个长度单位,1纳米等于1米的十亿分之一。纳米技术是近年发展起来的高新技术。它通常是指在0.1-100纳米空间尺寸内操纵原子和分子,对物质进行研究或对材料进行加工,从而制备具有特定功能的新产品。当一种物质被不断切割至一定程度,其粒子小至纳米量级即为纳米材料。纳米材料往往会产生一些新的理化特性。超微粉碎是将物料粉碎至10um以下粒度的单元操作,常用气流式粉碎。在功能性食品制造上,由于功效成分的使用量通常很小,需超微粉碎至足够细小,才能保证它的均匀分布。将纳米技术应用到医药技术方面,克服了某些传统药物和工艺上无法解决的难题,为促进药物在体内输送等提供了崭新的技术。
纳米化方法、微乳化方法、脂质体化方法及超音速射流方法,是当代物理化学技术在生物学、医药学领域中可以采纳的高新技术,使纳米SOD黄芪有一定的脂溶性,因此能保护生物膜脂质免受自由基损伤,具有更强的抗脂质过氧化作用;由于粒度小,克服了蛋白质的抗原性问题,解决了生物膜透过性和提高了避免蛋白酶破坏的稳定性。
纳米SOD黄芪是一种球形乳状液,根据内相与外相的性质,乳状液分为两种类型:一类是油分散在水中,称水包油型乳浊液,用O/W表示;另一类是水分散油中,简称油包水型乳浊液,用W/O表示。那么乳化剂也相应分为两种类型,即油包水型乳化剂和水包油型乳化剂。乳化剂是否容易溶解于水,也就是亲水性的大小,对于合理应用乳化剂是一个重要的指标。因为乳化剂同时含有亲水基和亲油基,这两个基间又互相影响,为了比较乳化剂的亲水性就用HLB值来表示,这是一个很重要的经验方法。HLB值就是亲水亲油平衡值,为了得到稳定的乳浊液必须选择适当的乳化剂。乳化剂的HLB值的含义是:HLB值的乳化剂亲水性百分比HLB值大约在0-20之间。如HLB值为0,则表示亲水性为0,HLB值为20表示亲水性为100%。HLB越大,表示亲水性作用越大;其值越小表示亲油性越大。纳米SOD黄芪也可以是干粉。纳米SOD黄芪粒径可控制在≤10-80纳米范围内,必要时可以进一步细化或粗化。
纳米SOD黄芪是自由基清道夫,清除病人的多余自由基(病人往往自由基比正常人多),在药物被人体吸收前进入药效时,用纳米SOD将体内自由基清除,使药物被人体全面吸收,发挥最大的药效,以往由于自由基对药物的药效直接影响,使药效大打折扣,这就是药物不能发挥最大作用的原因,只好增大药量,一方面对付自由基的侵害;另一方面对疾病发挥效力,如今没有了自由基的副作用,药力就大大增强了。长期服用纳米SOD黄芪既可清除自由基,使自由基消失或者减少,治病时用药其量已大大减少了,药效比复方药更好,这是药物发挥效力的最好途径,是一种全新理念,必将为人类健康事业做出重大贡献,这正是本发明的一大特点,必将引起药物学、生物学、药理学、药效学的一次革命,引发治疗疾病的新思维。
纳米SOD与黄芪合并使用的治疗方法,利用两者相辅相成的功用,可以改变两者分别使用疗效不够最佳的不足。
近年来在国际上传统中药的使用愈来愈普遍,中药与天然物包括抗氧化剂的销售量每年均似倍数增长;我们提出以中药天然物代替或辅助西药治疗,取得了良好的效果,在国内、泰国、日本、美国以及欧洲越来越得到普遍重视。
通过实验证实:
1、抗氧化活性实验:检测方法化学发光、蛋白电泳、生化测定、紫外扫描。胶囊内纳米SOD黄芪容物重量:0.35±0.05g/粒;抗氧化活性,每粒胶囊抗氧化活力相当于32000活力单位;样品在60℃加热2小时后其抗氧化活力相当于6500活力单位;蛋白含量测定:样品在日立全自动生化分析仪上测定总蛋白会含量9.5mg/粒,白蛋白含量<2mg/粒;蛋白电泳分析:取样品(浓度为50mg/ml)和牛血清白蛋白(25mg/ml),标准条件下电泳,结果显示样品无蛋白带,标准质控血清及牛血清白蛋白的显色均十分清晰;样品中金属离子测定:表明每粒胶囊含镁0.25mg,未测到钙、磷、铁等离子;紫外扫描:表明样品无论加热与否其最大吸光度均恒定在260nm处,小结:该样品中含有抗氧化活性物质,比黄芪提高10倍。
2、抗辐射实验:对照组NS;试验组玉米纳米SOD黄芪,外周血白细胞计数实验,数据处理及结果判定,白细胞数为计量资料,采用方差分析,但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验,方差齐,计算P值,P值<0.05,结论:试验组与对照组之间差异有显著性,P<0.05照射前的外周血白细胞计数,用于各组白细胞数目的均衡性检验,剂量组与辐射模型对照组比较,差异无显著性,继续进行照射及后续实验。照射后3天辐射模型对照组的白细胞数分别与照射前进行自身比较,差异有显著性,辐射损伤模型成立,照射后第5天、第14天剂量组与辐射模型对照组比较,白细胞总数增多,差异有显著性,该实验阳性。
辐射前后白细胞数比较:
C(0) | C(5) | C(14) | T(0) | Y(5) | T(14) | |
M纳米SOD黄芪P | 7.551.58 | 0.68831.31 | 2.20000.18 | 7.280.480.80 | 1.381.370.0044 | 2.840.530.0479 |
3、抗疲劳实验:药物配制(0.5ml/只/次),试验组B,12mg/ml P+L(2/3-100ml);试验组C,12mg/ml P+L(2/3-100ml);玉米纳米SOD黄芪(40000U/ml);试验组D16mg/ml甲鱼胶;试验组E80mg/ml甲鱼胶,缓解体力疲劳功能。血清中的尿素室温下可稳定24h,在4-6℃可稳定7天以上。血乳酸与对照组相比,试验组B、C、D、E与对照组A比较,P值分别为0.04、0.84、0.17、0.19。差异有显著性,该实验阳性。
血清中的尿素比较:
A | B | C | D | E | |
UNP | 9.2±0.9 | 8.5±1.30.2467 | 7.7±1.00.0083☆ | 9.4±0.90.6052 | 8.5±1.20.2135 |
小鼠负重游泳时间比较:
A | B | C | D | E | |
MN纳米SOD黄芪p | 8820.74825 | 11431.487140.055799 | 11628.21010.028482 | 9526.963680.516779 | 10313.623510.084634 |
4、纳米SOD黄芪吸收实验:
(1)、胃酸耐受性结果表明,纳米SOD黄芪在小鼠模拟胃酸中37℃保持150min,活力仍残存91%。
(2)、模拟胃肠道蛋白酶和胰酶对纳米SOD黄芪的酶解结果表明,在37℃下保持300min其活力残存分别为92%和94%。
(3)、离体小肠结扎后纳米SOD黄芪的透出量随时间的变化而变化,10h后小肠外纳米SOD黄芪的总活性接近试验时加入小肠的总活性,这表明纳米SOD黄芪可透过小肠从肠膜一侧到达另一侧。
(4)、小鼠经口摄入纳米SOD黄芪后2h,血中纳米SOD黄芪活性达到最高值,与对照组相比机体内纳米SOD活性提高40%%~50%,因此口服纳米SOD黄芪能明显提高血中的纳米SOD黄芪水平。
(5)、用异硫氰酸荧光素(PITC)标记纳米SOD黄芪的试验表明,小鼠口服1h后血中标记物明显增加,2h后达到最高峰。
试验结果证实,经口摄取的纳米SOD黄芪能够进入体内。用纳米SOD黄芪给小鼠灌胃,2h后在血中达最高峰,大部分纳米SOD黄芪分布在血浆中,小部分进入血细胞中,纳米SOD黄芪在组织中的分布顺序是胃、肠、肌肉、肺、脑、肝、脑、肾、脾、心和睾丸。
5、纳米SOD黄芪抗疲劳实验:
小鼠负重游泳试验
组别 | 剂量(g/kg) | 动物数(只) | 游泳时间X±S | P值 |
阴性对照组SOD黄芪组纳米SOD黄芪组 | 08080 | 101010 | 88±20.42103±14148±32 | 0.050.001 |
实验结果表明,受试物中SOD黄芪和纳米SOD黄芪组小鼠游泳时间与阴性对照组比较,SOD黄芪明显延长(P<0.05),纳米SOD黄芪组的平均游泳时间则显著延长(P<0.001)。小鼠负重游泳试验结果为阳性。两种SOD黄芪均具有抗疲劳功能,而纳米SOD黄芪的抗疲劳作用更为明显。
根据一氧化氮、超氧化物自由基和超氧化歧化酶的互相关系,纳米SOD黄芪可能作为口服制剂的有效成分之一。它可用于防治消化道的慢性炎症,并可预防或辅助治疗消化道内癌症。高新工程技术酶工程是利用酶的催化作用进行物质转化的技术,是将生物体内具有特定催化功能的酶分离,结合化工技术,在液体介质中固定在特定的固相载体上,作为催休生化反应的反应器,以及对酶进行化学修饰,或采用多肽链结构上的改造,使酶化学稳定性、催化性能甚至抗原性能发生改变,以达到特定目的的工程技术。酶工程在功能性食品的应用广泛,诸如功能性低聚糖、肽、氨基酸、维生素等功效成成分的制造。纳米SOD是生物体内防御氧化损伤的一种重要的酶,能催化超氧自由基发生歧化反应,维持细胞内超大型氧自由基处于无害的低水平状态。
我们应用自由基生物学、自由基医学、中医中药学与营养学,在黄芪或其提取物中加入含有抗氧化剂纳米SOD及抗氧化维生素为主的复合剂,成为纳米SOD黄芪或其提取物的组合物,经过一系列实验,证明它是一种高效的药品或保健品。纳米SOD黄芪在人体小肠内的通透性极大提高;释放速率提高;功效和有效利用率大大提高,可有效突破机体生物屏障对药物食品作用的限制,使药物食品更好地进入血液循环,人体有许多保护机体不受损害的天然生物屏障,如血脑屏障,血眼屏障,细胞生物膜屏障等,一般药物很难通过这些机体生物屏障,纳米SOD黄芪微粒则可穿过这些屏障,对病灶部位起到治疗作用。
纳米SOD黄芪,利用现代生化技术及现代中医药学理论,即纯化的SOD与黄芪提取物的纳米化组合应用,而非SOD与原始中草药黄芪的直接应用,提高药物浓度及有效成份,抗氧化活性提高10倍以上,皮肤、粘膜吸收率达98%以上,半衰期延长两个数量级以上;能进入细胞内直接发挥清除自由基,具有更强的抗脂质过氧化的作用,综合药效发挥更彻底,远非传统中药可比,用于改善呼吸功能,提高抗缺氧能力,发挥抗疲劳功效,提高运动耐力,该技术克服了目前SOD等生物蛋白酶以及中草药的应用限制和不足,为其广泛应用打开了新的大门,是对人类医药事业的一大创举,宜于普及推广。
附图说明
本发明附图1为纳米SOD与黄芪结合示意图,附图2为抗疲劳实验结果示意图。
具体实施方式:
实施例1
纳米SOD与黄芪或其提取物组合物,配比为:纳米SOD1万活性单位:纳米黄芪1克,粒径50纳米。
实施例2
我们采用一种玉米超氧化物歧化酶SOD复合酶大规模制造方法,制取的SOD纳米化,纳米SOD母液可达到6000-10000活性单位/克;纳米SOD干粉可达到40000-60000活性单位/克。
实施例3
用于治疗慢性乙型肝炎药:纳米SOD母液6克,60000活性单位、纳米黄芪6克。
实施例4
用于治疗病毒性心肌炎药:纳米SOD干粉3克,48000活性单位、纳米黄芪甙1.5克。
实施例5
在于以纯化SOD与黄芪乳液按重量比2∶1混合均质,置于纳米对撞机中,压力200Mpa,纳米通道10nm纳米。
实施例6
在于以纳米SOD与纳米黄芪甙按配比混合后的液体与甘油或其它油性液体及表面活性剂混合,配比为1-10∶1-10∶1-5;形成乳状液后,向其中滴加表面活性剂(如正丁醇),滴加到一定数量时体系变为澄清透明的油包水(W/O)微乳液。
实施例7
在于纳米SOD与黄芪或其提取物组合物作为中间体,用于食品、保健品、药品、化妆品、日用化工制品、烟酒制品的载体。
实施例8
在于纳米SOD与黄芪或其提取物组合物,作为软胶囊、胶囊、乳剂、片剂、注射液或其它剂型的载体。
实施例9
在于纳米SOD与黄芪或其提取物组合物,可根据不同目的加入各种药物,作为多种配方的载体。
Claims (2)
1、纳米SOD与纳米黄芪的组合物,其特征在于配比为:纳米SOD1-10万活性单位,纳米黄芪1-50克,粒径10-80纳米。
2、根据权利要求1所述的组合物,其特征在于配比为:纳米SOD1万活性单位,纳米黄芪1克,粒径50纳米。
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