CN1251599C - 杀菌/消毒过乙酸组合物 - Google Patents

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Abstract

一种以过乙酸为主要成分的杀菌制剂，含有过乙酸、至少一种磷酸盐和至少一种非离子型表面活性剂。本杀菌制剂可稀释成含有过乙酸的工作液，其中的过乙酸浓度可以破坏细菌芽孢和抗酸性细菌，同时在至少7天内维持工作液浓度。

Description

杀菌/消毒过乙酸组合物
发明领域
本发明涉及除污染领域。更明确的说，本发明涉及一种杀菌剂/消毒剂，该制剂用于医疗器械和内窥镜等的医疗仪器、纱布及其它物品。
发明背景
现在，以戊二醛为活性成分的制剂普遍用于医疗器械的杀菌和消毒。然而，最近有报道称戊二醛制剂对抗酸菌的杀菌作用较弱。而且，用戊二醛制剂在西方国家经常发生过敏反应。因此，不含戊二醛的制剂已经逐渐被开发和销售。
高浓度的过乙酸会引起皮肤骚痒并有很难闻的气味，但是当稀释成实际使用的溶液(一般含有0.2-0.35％的过乙酸)时，所引起的皮肤骚痒和难闻气味会相对减弱。过乙酸的降解产物是乙酸、水和过氧化氢(进一步降解为水和氧气)，这些降解产物不仅无害，而且不会造成环境污染。因此，以过乙酸为活性成分的杀菌剂/消毒剂可以替代戊二醛制剂。
过乙酸一般是过乙酸溶液的形式，在使用前稀释。在日本，依照外国的先例，过乙酸一般在使用前配成终浓度为0.2w/v％到0.35w/v％的溶液。
美国专利5,077,008和日本专利公告7-84362中公开了一种一次性抗菌组合物，在使用前可用一种特殊的仪器STERIS SYSTEM 1(Steris公司制造)稀释成0.2w/v％的终浓度。在英国可在市场上买到的Nu-Cidex(Johnsonand Johnson medical Inc。)由过乙酸浓溶液、稳定剂和缓中剂组成，在使用前，用稳定剂和缓中剂将过乙酸浓溶液稀释成0.35w/v％。这种稀释好的溶液在配制后1到3天内有效。
有各种添加剂的过乙酸制剂是已知的。
日本专利公开8-311495中公开了一种过乙酸制剂，它包含有过乙酸水溶液和一种聚醚或类似的非离子型表面活性剂。这种过乙酸制剂可用作洗碗机或类似器械的漂白剂和消毒剂。该非离子型表面活性剂作为一种“漂洗剂”在清洗后可以防止“污渍”保留在碟子或类似器皿的表面。
国际专利公开WO 88/08667中公开了一种可稳定输送的含过乙酸的杀微生物剂。这种杀微生物剂包括例如山梨醇酐单棕榈酸酯和聚氧乙烯(2)十六醚这样的表面活性剂。添加该表面活性剂是为了提高该杀微生物剂的湿度和溶解作用。
国际专利公开第WO 91/15122中公开了一种抗腐蚀杀菌剂，含有过乙酸、以及脂肪醇和五氧化二磷和氢氧化钠的反应产物或全氟烷基磺酸钾。据此文描述，该杀菌剂在至少7天内具有杀菌活性。添加脂肪醇和五氧化二磷和氢氧化钠的反应产物或全氟烷基磺酸钾的目的是提高抗腐蚀的性能。
美国专利4,051,058和4,051,059公开了一种杀菌剂，包含有过乙酸以及磺酸盐和硫酸盐类的阳离子表面活性剂。
日本专利2523085公开了一种杀微生物剂，它包含有作为主要成分的过乙酸。这种杀微生物剂被用来在外科和牙科领域内对器械进行消毒。它具有不含表面活性剂的特点。
美国专利5,624,634公开了一种可用于含有金属组件的医疗设备的消毒剂组合物，其中的含有过乙酸的第一水性溶液与含有腐蚀抑制剂、过氧化氢稳定剂和/或过乙酸稳定剂的第二水性溶液相混合。该消毒剂可防止含有金属组件的医疗设备的腐蚀。美国专利5,624,634并未指出此消毒剂使用了非离子型表面活性剂。美国专利第5,624,634也未指出如何稳定过乙酸工作液中过乙酸的浓度。例如，据此文描述此消毒溶液每天均由新鲜溶液替换(第5栏，第21-22行)。
美国专利5,720,983和日本国家阶段PCT公开7-502988也公开了可用于含有金属组件的医疗设备的消毒剂组合物，但并未指出使用了非离子型表面活性剂。
美国专利5,489,706公开了一种通过加入0.1-5％的脂族醇乙氧基化物稳定过乙酸的方法。该脂族醇乙氧基化物既可以在过乙酸的生产过程中加入也可以在其生产后加入，从而可以增加过乙酸的稳定性(第2栏，第31-33行)。美国专利5,489,706并未指出其过乙酸组合物中含有磷酸盐。
美国专利5,545,374公开了在pH6.0或更高环境下使用的杀微生物剂组合物。此杀微生物剂组合物包含过乙酸和一种化学通式为R-(OCH2CH2)n-(OCH2CH2CH3)p-OH的非离子型表面活性剂，通式中的R代表含有至少6个碳原子的烷基，n和p各代表一个整数。美国专利5,545,374并未透露或指出其过乙酸配方中含有磷酸盐。此杀微生物剂组合物对白色念珠菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌均有效。
发明概述
上述的戊二醛制剂溶液(例如加缓冲剂稀释的2％工作液)的适用期为1-2周。与戊二醛制剂溶液相比较，以过乙酸为活性成分的杀菌剂/消毒剂很难通过稀释的方法维持其工作液中过乙酸的浓度。因此，传统的过乙酸溶液只可使用一次，如需在制备后储藏，则其适用期只有1-3天。工作液需在每次医疗器械灭菌或消毒前配制。因此为长期使用，需频繁以新鲜溶液更新过乙酸溶液，从而导致费用的增加。
本发明的创始人通过多年积极研究解决了上述传统过乙酸溶液存在的问题，从而发明了本发明的组合物，其稀释得到的工作液中过乙酸的浓度能保持稳定，并且其杀菌/消毒效果可长时间维持。
本发明涉及一种以过乙酸为主要成分的杀菌制剂。此杀菌制剂含有过乙酸、至少一种磷酸盐、和至少一种非离子型表面活性剂。此制剂可被稀释成工作液，其中的过乙酸浓度可以破坏细菌芽孢和抗酸细菌，同时可在至少7天内维持这一浓度。
优选的是，上述的磷酸盐选自正磷酸钠、正磷酸钾、焦磷酸钠、焦磷酸钾、多磷酸钠、多磷酸钾和它们的混合物。
优选的是，上述的非离子型表面活性剂选自聚乙烯/聚丙烯嵌段聚合物型表面活性剂、聚氧乙烯烷基苯基醚型表面活性剂、聚氧乙烯醚型表面活性剂、和聚氧乙烯山梨醇型表面活性剂。
优选的是，上述过乙酸的浓度范围是1％w/w到10％w/w。
优选的是，工作液中的磷酸盐的浓度范围是0.01％w/w到2％w/w。
优选的是，工作液中的非离子型表面活性剂的浓度范围是0.01％w/w到0.5％w/w。
优选的是，本发明提供了一种可以破坏细菌芽孢和抗酸细菌的杀菌制剂。本杀菌制剂含有第一反应剂包括过乙酸、过氧化氢、乙酸和水，和第二反应剂包括至少一种磷酸盐和至少一种非离子型表面活性剂。第一反应剂与第二反应剂在使用前混合并以水稀释。
优选的是，第一反应剂是一种含有5-7％w/w过乙酸，7-9％w/w过氧化氢，30-36％w/w乙酸和水的平衡溶液。
优选的是，第一反应剂包括稳定剂。
优选的是，该稳定剂选自正磷酸和焦磷酸。
优选的是，第一反应剂包括金属离子螯合剂或抗腐蚀剂。
优选的是，第二反应剂包括金属离子螯合剂，抗腐蚀剂或色素。
优选的是，第一反应剂包括至少一种磷酸盐和至少一种表面活性剂。
优选的是，第二反应剂是一种粉末状物质或固体物质。
更适宜地，第一反应剂和第二反应剂均以混合物形式。
附图的简要描述
图1显示了在加入了不同的非离子型表面活性剂的过乙酸溶液中过乙酸的浓度随时间的变化，此过乙酸溶液中含有焦磷酸钠并在室温下储存。
图2显示了在加入了不同的非离子型表面活性剂的过乙酸溶液中过乙酸的浓度随时间的变化，此过乙酸溶液中含有磷酸二钾并在室温下储存。
图3显示了在加入了一种非离子型表面活性剂和一种螯合剂的过乙酸溶液中过乙酸的浓度随时间的变化，此过乙酸溶液中含有磷酸二钾并在室温下储存。
图4显示了当一种非离子型表面活性剂以不同浓度加入到过乙酸溶液中并且以磷酸二钾调整过乙酸溶液pH值到4时，该溶液中过乙酸的浓度随时间的变化，该溶液在室温下储存。此变化以过乙酸残量百分比表示。
图5显示了当一种非离子型表面活性剂以不同浓度加入到过乙酸溶液中并且以磷酸二钾调整过乙酸溶液pH值到4时，该溶液中过乙酸的浓度随时间的变化，该溶液在较高温度储存(50℃)。此变化以过乙酸残量百分比表示。
图6显示了当一种非离子型表面活性剂以不同浓度加入到过乙酸溶液中并且以焦磷酸钠和乙酸钠调整过乙酸溶液pH值到4时，该溶液中过乙酸的浓度随时间的变化，该溶液在室温下储存。此变化以过乙酸残量百分比表示。
实施本发明的最佳方式
本发明涉及一种以过乙酸为主要成分的杀菌制剂。其中“过乙酸”是指分子量为76.04的化合物，其通常以过氧化氢、乙酸和水或乙酸的有机溶液的平衡混合物形式存在。高浓度的杀菌制剂包括浓度约为40％的过乙酸。低浓度的杀菌制剂包括浓度为1-15％的过乙酸。在日本，含有浓度为4％和6％的过乙酸制剂可通过商业渠道获得。本发明以过乙酸为主要成分的杀菌制剂用市售的DIAPOWER(Mltsubishi Gas Chemical Co.，Inc制造)的水或优选以蒸馏水稀释到过乙酸浓度为0.1w/v％至1w/v％而制成工作液。过乙酸有难闻的味道，因此稀释过程在装备有通风器的设备中进行。在稀释时，将0.01％w/w到1％w/w的至少一种磷酸盐和0.01％w/w到0.5％w/w的至少一种非离子型表面活性剂加入到过乙酸溶液中，搅拌并混合使其溶解。
优选的是，上述磷酸盐选自正磷酸钠，正磷酸钾、焦磷酸钠、焦磷酸钾、多磷酸钠、多磷酸钾和它们的混合物。
优选的是，上述非离子型表面活性剂选自聚乙烯/聚丙烯嵌段聚合物型表面活性剂、聚氧乙烯烷基苯基醚型表面活性剂、聚氧乙烯醚型表面活性剂，和聚氧乙烯山梨醇型表面活性剂。
如果过乙酸的浓度低于0.01％w/w，溶液将不再有迅速有效的杀菌/消毒效果。如果过乙酸的浓度超过1％w/w，溶液的难闻气味和其对眼睛和皮肤造成的刺激将会很明显。
如果磷酸盐的浓度低于0.01％w/w，过乙酸水溶液的pH值将会小于或等于3。在这种情况下螯合效果会降低，不利于腐蚀性增加。如果磷酸盐的浓度超过2％w/w，过乙酸水溶液的pH值将会大于或等于5。在这种情况下过乙酸将会不稳定并且其杀菌效果会下降。
如果非离子型表面活性剂的浓度低于0.01％w/w，过乙酸不是足够稳定。如果非离子型表面活性剂的浓度超过0.5％w/w，其稳定效果并不会显著改善，并且泡沫消失，不利于实际应用。
本发明以过乙酸为主要成分的杀菌制剂装在配有密封塞子的聚乙烯容器中。
另外，本发明提供了一种可以破坏细菌芽孢和抗酸细菌的杀菌制剂。该杀菌制剂包括含有过乙酸、过氧化氢、乙酸和水的第一反应剂，以及含有至少一种磷酸盐和至少一种非离子型表面活性剂的第二反应剂。第一反应剂与第二反应剂在使用前混合并以水稀释。
本发明的杀菌制剂优选应用于以中性清洁剂或其类似物洗刷和漂洗后的目的物品，例如医疗器械或医疗装备(例如，内窥镜)。例如，目的物品在以本杀菌制剂配制的工作液中浸泡5到10分钟后将会表现出杀菌/消毒效果。目的物品可在清水彻底漂洗后使用。
这里使用的“细菌芽孢”是指需氧枯草芽胞杆菌、厌氧梭状芽胞杆菌等在其生长期末形成的具抵抗能力的细胞。这里的“抗酸细菌”是指那些被专业人员熟知的抗酸染色阳性的细菌，包括分枝细菌属的细菌。
第一反应剂是一种含有5-7％w/w过乙酸，7-9％w/w过氧化氢，30-36％w/w乙酸和水的平衡混合物。市售低浓度过乙酸(例如，品名为“DIAPOWER”，Mitsubishi Gas Chemical Co.，Inc制造)可用来制备第一反应剂。第一反应剂可选择性的加入稳定剂。该稳定剂可以是正磷酸和焦磷酸。该稳定剂一般以0.2-1％w/w的浓度加入到第一反应剂中，经搅拌并混合后溶解。
第一反应剂可进一步选择性的含有金属离子螯合剂和抗腐蚀剂。它们一般以0.1-2％w/w的浓度分别加入到第一反应剂中，，经搅拌并混合后溶解。
第二反应剂可进一步选择性的含有金属离子螯合剂、抗腐蚀剂和色素。金属离子隔离剂、抗腐蚀剂和色素一般各自以0.001-0.005％w/w的浓度加入到第二反应剂中，经搅拌并混合后溶解。
第一反应剂可进一步选择性的含有至少一种磷酸盐和至少一种非离子型表面活性剂。
第一反应剂一般装在配有密封塞子的聚乙烯容器中。第二反应剂一般装在密封的聚乙烯容器中。或者，第一和第二反应剂可以混合物的形式装在一个单一的配有密封塞子的聚乙烯容器中。
除非另加说明，这里的“％”是指“％w/w”。
通过下述方法测定过乙酸浓度和杀菌剂/消毒剂的效果。
测定过乙酸浓度的方法
依照Sully，B.D.和Williams，P.L.，分析1962；87：653-657所述的方法测量样品溶液中过乙酸的浓度。
精确称量1克样品。样品加入到100ml预先制备的保持在5℃或更低温度下的0.1mmol/L乙酸溶液中。在以上获得的样品溶液中加入10ml 15％w/v的碘化钾测试溶液，并同时测量开始时间。在用淀粉测试溶液作为指示剂时，用0.2mol/L硫代硫酸钠滴定直到蓝色消失的方法可以测量游离碘。滴定应在加入碘化钾测试溶液后1到3分钟进行。此后，当蓝色重新出现时测量滴定量(X1 ml)和时间(t1秒)。2-4分钟后，重复同样操作并测量第二滴定量(X2ml)和时间(t2秒)。此后加入3滴3.7％w/v钼酸铵测试溶液并继续滴定直到终点维持稳定1分钟。在这时测量滴定量(X1 ml)。零时的滴定量、过乙酸的浓度(％)和过氧化氢的浓度(％)可通过下式计算得到：
零时的滴定量：X0＝X1-t1(X2-X1/t2-t1)
过乙酸的浓度(％)＝X0×0.2×f×E/(10×W1)
过氧化氢的浓度(％)＝0.2×f×(X1-X0)×17.01/(10×W1)
其中X0：零时的滴定量
    f：0.2mol/L硫代硫酸钠溶液的指数
    W1：样品量(g)
    E：过乙酸的当量
    P：过乙酸的浓度(％)
测定杀菌/消毒的效果的方法
使用枯草杆菌的芽孢测定过乙酸的消毒效果。
枯草杆菌(ATCC 6633)在液体肉汤培养基中培养24小时。依照Sterlinin，J.M.和Mandelstem，J.，生物化学杂志1969；113：29描述的方法制备芽孢。在无菌蒸馏水中悬浮芽孢。悬浮液在85℃加热10分钟以破坏植物细胞。获得的悬浮液在5℃保存。将该芽孢以106-107CFU/ml密度悬浮在无菌蒸馏水中制成芽孢样品悬浮液。测试溶液以1/10倍比稀释铺于肉汤琼脂培养基上，芽孢的数量可通过培养板上克隆的数目计算得到。
杀菌/消毒测试中，测试溶液以1/10倍比稀释铺于肉汤琼脂培养基上，芽孢的数量可通过该培养板上克隆的数目计算得到。
(实施例)
此后，将以实施例的方式描述本发明。以下实施例用于说明本发明。但本发明并不局限于这些实施例。
(实施例1)
制备0.33％的过乙酸水溶液(pH 4.0)，溶液中含有1％硫代硫酸钠和0.05％表1中非离子型表面活性剂中的一种。过乙酸水溶液置于玻璃烧杯中并于室温(25℃)下储存2周。在储存过程中按时间抽取过乙酸水溶液样本，并依照Sully，B.D.和Williams，P.L.，分析1962；87：653-657所述的方法测量样品溶液中过乙酸的浓度。
表1非离子型表面活性添加剂
  1.Newdet PE85(聚氧乙烯/聚氧丙烯嵌段聚合物，Sanyo Chemical Industries Co.，Ltd.)2.Ionet T-60C(聚氧乙烯山梨醇脂肪酸，Sanyo Chemical Industries Co.，Ltd.)3.Emulmin 70(聚氧乙烯基烷基醚，Sanyo Chemical Industries Co.，Ltd.)4.Nonipole 100(聚氧乙烯壬基苯基醚，Sanyo Chemical Industries Co.，Ltd.)5.Noygen ET-190(聚乙烯月桂基苯基醚，Daiichi Kogyo Seiyaku，Co.，Ltd.)6.Pluronic F-68(聚氧乙烯/聚氧丙烯嵌段聚合物，Adeka)7.Nonion OT-221(聚氧乙烯山梨醇单油酸酯，NOF Corporation)8.Nonion S-230(聚氧乙烯油基醚，NOF Corporation)9.Nonion S-207(聚氯乙烯硬脂基醚，NOF Corporation)
图1表示了每份样品中过乙酸浓度的测量结果。
如图1所示，1周后，不含非离子型表面活性剂的过乙酸溶液(对照)中的过乙酸浓度低于0.2％，但含有非离子型表面活性剂(1到9)的过乙酸溶液中过乙酸浓度可维持于0.2％或更高，只有加入Nonion S-207例外。
2周后，不含非离子型表面活性剂的过乙酸溶液(对照)中的过乙酸浓度低于0.05％，但含有非离子型表面活性剂(1到9)的过乙酸溶液中过乙酸浓度可维持于0.1％或更高。
(实施例2)
在0.3％过乙酸溶液中加入磷酸氢二钾使其终浓度为0.296％(pH 3.5)。制得的溶液分为6份，每份各加入表面活性剂、反应剂和其混合物(表2中①到⑥)制成测试溶液。测试溶液在室温下储存(25℃)。每天测量该测试溶液过乙酸的浓度和该测试溶液对细菌芽孢的作用效果。
表2添加剂
  ①无添加剂(对照1)②Newdet PE85 0.05％③Newpole PE64 0.05％④Nonipole 100 0.05％⑤Newdet PE85 0.05％+EDTA2Na 0.025％+EDTA4Na 0.025％⑥EDTA2Na 0.025％+EDTA4Na 0.025％(对照2)
图2和3表示了每份样品中过乙酸浓度的测量结果。
如图2和3所示，室温储存10天后，对照组1和2中的过乙酸浓度下降到约等于0.2％，但含有表面活性剂、反应剂和其混合物(2到5)的测试溶液中过乙酸浓度可维持于0.2％或更高。
金属离子对过乙酸的稳定性有负性的影响。因此，可加入金属离子螯合剂以去除实际情况中可能混入溶液中的金属离子。然而，金属离子螯合剂本身也会降低过乙酸稀释液的稳定性。但如图3所示，⑤比⑥更稳定。由此可知，由于添加了非离子型表面活性剂，即使有金属离子螯合剂存在，过乙酸仍趋于稳定。
测量了每个样品中对于细菌芽孢的杀菌/消毒效果。结果由表3显示。为测定杀菌/消毒效果检测了含有如表2中所述②Newdet PE85 0.05％，④Nonipole 100 0.05％，和⑤Newdet PE85 0.05％+EDTA2Na 0.025％+EDTA4Na 0.025％三种样品对于枯草杆菌芽孢的抗微生物活性。
表3过乙酸溶液的杀菌/消毒效果
  测试溶液作用时间             ②             ④           ⑤
  5分钟   10分钟   5分钟   10分钟   5分钟   10分钟
  制备后瞬间3天7天10天   ＞6.01＞6.01＞6.01＞6.01   ＞6.01＞6.01＞6.01＞6.01   ＞6.01＞6.01＞6.01＞6.01   ＞6.01＞6.01＞6.01＞6.01   ＞6.01＞6.01＞6.01＞6.01   ＞6.01＞6.01＞6.01＞6.01
表中的数值代表芽孢数目减去5到10分钟内各样品的接触芽孢数目后的对数值。
如表3所示各样品溶液均具有抗微生物活性致使储存10天后枯草杆菌减少106-ml或更多。
(实施例3)
制备了以下两种制剂：
第一反应剂
    过乙酸                                6％
    过氧化氢                              8％
    乙酸                                  32％
    磷酸盐型稳定剂                        0.2％
    水                                    平衡量
第二反应剂
    磷酸氢二钾                                          6％
    Newdet PE85(Sanyo Chemical Industries Co.，Ltd.)    1％
    EDTA2Na                                             0.5％
    EDTA4Na                                             0.5％
    水                                                  平衡量
第一和第二反应剂以相同量混合，并以10倍体积稀释制成测试溶液。该溶液含有约0.33％的过乙酸。
测试溶液用来灭菌和消毒内窥镜，此内窥镜使用了新近用于此目的的内窥镜自动清洗器。
使用于上消化道的柔软内窥镜的活检钳(Olympus GIF型XQ240；Olympus Optical Industries，Co.，Ltd.)由自动内窥镜清洗器(Olympus EW-30；Olympus Optical Industries，Co.，Ltd.)以下述方式清洗并消毒。设置自动内窥镜清洗器使得活检钳能用自来水清洗5分钟，用水漂洗1次，此后再用上述测试溶液于20℃清洗并消毒10分钟。将该测试溶液保留在自动内窥镜清洗器的液体消毒剂贮存池中。1天清洗并消毒6副内窥镜(每天6次循环)。对于第6副内窥镜，活检钳槽内壁污染了枯草杆菌芽孢以测试该溶液的杀菌/消毒效果。将100μl含107到109CFU/ml芽孢的枯草杆菌芽孢样品悬浮液应用于内窥镜活检钳槽内壁，并干燥。
每天6次循环后，抽取清洗器液体消毒剂贮存池内测试溶液的样品。通过计数测定样品中过乙酸的浓度和芽孢的数量。在起始天以后的7天内每天重复上述测定。以下述方法测定芽孢数量。用浸有5ml无菌复苏液的无菌棉填料擦拭活检钳槽内壁以复苏细菌。用5块无菌填料重复此过程。收集的复苏的细菌以1/10倍比稀释。稀释液铺板于Triptosoy琼脂培养基上。37℃培养24小时后，通过计数测量存活细菌数目。本测定进行2次。
测试结果如表4所示
表4过乙酸溶液的杀菌/消毒效果
  测试1   起始浓度   1天   2天   3天   4天   5天   6天   7天
  过乙酸浓度(％)   0.35   0.31   0.26   0.23   0.20   0.17   0.15   0.13
  过氧化氢浓度(％)   0.44   0.31   0.34   0.34   0.31   0.31   0.26   0.24
  过乙酸残量百分比   100％   88.6％   74.3％   65.7％   57.1％   48.6％   42.9％   37.1％
  累积循环次数   0   6   12   18   24   30   36   42
  样品细菌悬液中细菌数目的对数值   8.57   8.68   8.15   8.38   8.30   8.32   8.53
  复苏的细菌数目   -a)   -  -   -   1.40   1.40   -
  对数减少量   ＞7.87   ＞7.98   ＞7.45   ＞7.68   6.90   6.92   ＞7.83
  测试2   起始浓度   1天   2天   3天   4天   5天   6天   7天
  过乙酸浓度(％)   0.37   0.33   0.29   0.26   0.23   0.21   0.18   0.16
  过氧化氢浓度(％)   0.44   0.43   0.40   0.38   0.33   0.30   0.27   0.27
  过乙酸残量百分比   100％   89.2％   78.4％   70.3％   62.2％   56.8％   48.6％   43.2％
  累积循环次数   0   6   12   18   24   30   36   42
  样品细菌悬液中细菌数目的对数值   7.83   8.18   8.46   8.26   8.46   8.45   8.52
  复苏的细菌数目   -   -   -   1.40   1.40   -   2.00
  对数减少量   ＞7.13   ＞7.48   ＞7.76   6.86   7.06   ＞7.75   6.52
a)少于测量极限(＜5.0×100)
在测试进行的7天中随时间的推移，过乙酸的浓度由0.35％降到0.13％。由于设备结构的原因造成的漂洗水稀释效果部分地导致了浓度的下降。
在第一次测试中直到4天后，在第二次测试中直到3天后，芽孢数目少于或等于测量极限(＜5.0×100)。在第一次测试的第5和6天和第二次测试的第4、5、7天，每ml中有几十到一百个芽孢。因此在测试进行的全部数天内芽孢已减到1/106至1/107。这表明溶液维持了有效的过乙酸浓度。
上述载菌试验中，测试溶液对芽孢的杀菌/消毒效果表明在实际医疗诊断中，此测试溶液可以用来充分清洗和消毒内窥镜。这是因为芽孢是对杀菌剂/消毒剂抵抗力最强的微生物，并且可以认为，在应用于实际医疗诊断和治疗中内窥镜并不会污染如上述试验的大量芽孢。
(实施例4)
在0.3％w/v过乙酸水溶液中加入两种非离子型表面活性剂(Nonipole100和Newdet PE85)，使其浓度为0-0.5％，再用磷酸二氢钾调节pH值到4，从而制成测试溶液。测试溶液在室温(25℃)和高温(50℃)储存。测量过乙酸浓度随时间的变化。
在室温储存的情况下过乙酸浓度的变化由图4表示。高温储存下过乙酸浓度的变化由图5表示。
当各份测试溶液在室温储存时，第一天各份测试溶液中的过乙酸浓度均维持在约90％或更高。第4天，不含表面活性剂的对照测试溶液中过乙酸的浓度下降至原浓度的约74％，但是所有含有表面活性剂的测试溶液中的过乙酸浓度均维持在原浓度的约75％或更高。1周后，不含表面活性剂的对照测试溶液中过乙酸的浓度下降至原浓度的约61％，但是所有含有表面活性剂的测试溶液中的过乙酸浓度均维持在原浓度的约62％或更高。
当各份测试溶液在高温储存时，第一天各份测试溶液中的过乙酸浓度均维持在约74％或更高。第4天，不含表面活性剂的对照测试溶液中过乙酸的浓度下降至原浓度的约31％，但是所有含有表面活性剂的测试溶液中的过乙酸浓度均维持在原浓度的约34％或更高。1周后，不含表面活性剂的对照测试溶液中过乙酸的浓度下降至原浓度的约16％，但是所有含有表面活性剂的测试溶液中的过乙酸浓度均维持在原浓度的约17％或更高。
如上所述，无论在室温或高温下加入非离子型表面活性剂均可维持和稳定过乙酸的浓度。
(实施例5)
在0.3％w/v过乙酸水溶液中加入两种非离子型表面活性剂(NewdetPE85100和Nonipole PE64(聚氧乙烯/聚氧丙烯嵌段聚合物，Sanyo ChemicalIndustries Co.，Ltd.))，使其浓度为0.05％，再用焦磷酸钠或乙酸钠调节pH值到4，从而制成测试溶液。测试溶液在室温(25℃)储存。测量过乙酸浓度随时间变化。
过乙酸浓度随时间的变化由图6表示。
当用乙酸钠调节pH值到4时，即使溶液中有非离子型表面活性剂存在，7天后过乙酸浓度仍然降低到原浓度的一半左右。当用焦磷酸钠调节pH值到4时，在非离子型表面活性剂存在下，7天后约有80％的过乙酸存留。而不含非离子型表面活性剂，7天后约有75％的过乙酸存留。
(实施例6)
测试了本发明的过乙酸制剂对结核分枝杆菌和非典型分枝杆菌的杀菌效果。
试验中制备并使用了以下两种制剂：
第一反应剂
    过乙酸                        6％
    过氧化氢                      8％
    乙酸                          32％
    水                            平衡量
第二反应剂
    磷酸氢二钾                                          6％
    Newdet PE85(Sanyo Chemical Industries Co.，Ltd.)    1％
    水                                                  平衡量
第一和第二反应剂以相同量混合，并用无菌蒸馏水稀释成浓度分别为0.3％、0.2％和0.1％的过乙酸工作液。
使用市售戊二醛制剂，Stelihide(Maruishi Pharmaceutical Co.，Ltd.)作为对照。依照厂家说明书，在戊二醛制剂中加入缓冲剂制成2％戊二醛溶液，作为测试的对照。
同杀菌/消毒效果试验一样，使用以下结核分枝杆菌和非典型分枝杆菌作为实验对象：
结核分枝杆菌H37Rv、鸟分枝杆菌ATCC 15769、细胞内分枝杆菌ATCC 13950、Kansasii分枝杆菌ATCC 25414、结核分枝杆菌1号临床分离株、和结核分枝杆菌2号临床分离株。
上述样品细菌各自培养在1％Ogawa培养基上(Eiken Chemical Co.，Ltd.制造)(此后均成为Ogawa培养基)。将长出细菌斑的白金环放入一个带螺扣帽的试管中，试管中有5个直径为5mm的无菌玻璃珠和2滴无菌10％Tween80。使用自动混合器摇动混合试管内容物15秒。在试管中加入4ml 7H9肉汤培养基(Difco制造)制成各个样品细菌的均一悬液。使用分光光度计(Miniphoto518，TAITEC)在660nm的波长下测量悬液的吸光度。此后，以无菌水稀释悬液到0.30。制成的稀释液作为接种液。接种液中活细菌的数目估计如下。以1/102、1/103、1/104、1/105和1/106稀释接种液。接种100μl各稀释液于Ogawa培养基上，37℃培养。使用计数的方法测量生长克隆的数目。
于500μl上述过乙酸工作液或500μl对照的戊二醛溶液中加入并混合20μl接种液，并在室温静置一预定时间(30秒、1分钟、2.5分钟(3分钟)、5分钟和10分钟)从而使制剂与细菌接触。用定量白金环(Bioloop，ELKAY Co.，Ltd.制造)接种10μl制成的混合液于7H9肉汤培养上，37℃培养。4周后可观察到有无细菌生长。有细菌生长的样品定义为生长阳性(+)，而没有细菌生长的样品定义为生长阴性(-)。
结果由图5表示。如图5所示，虽然各抗酸菌型和菌株的敏感性各有不同，但在0.3％过乙酸溶液中所有的样品细菌均在30秒内被杀死。相反地，用2％戊二醛即使暴露10分钟后，仍有部分细菌未被杀死。因此，2％戊二醛的杀菌活性低于0.1％过乙酸溶液。
因此，正如以上观察到的，本发明的过乙酸制剂对载菌芽孢具有杀菌/消毒效果，并且即使在相对低浓度下仍有比戊二醛制剂更大的杀菌率。
表5过乙酸溶液对抗酸菌的杀菌/消毒效果
  菌株   对照                                过乙酸浓度0.3％
  15秒   30秒   1分   2.5分   5分   10分
  结核分枝杆菌H37Rv鸟分枝杆菌ATCC 15769细胞内分枝杆菌ATCC 13950Kansasii分枝杆菌ATCC 25414结核分枝杆菌1号临床分离株结核分枝杆菌2号临床分离株   +++++NT   ∽++-∽+-+NT   -----NT   -----NT   -----NT   -----NT   -----NT
  菌株   对照                           过乙酸浓度0.2％
  15秒   30秒   1分   2.5分   5分   10分
  结核分枝杆菌H37Rv鸟分枝杆菌ATCC 15769细胞内分枝杆菌ATCC 13950Kansasii分枝杆菌ATCC 25414结核分枝杆菌1号临床分离株结核分枝杆菌2号临床分离株   ++++++   +++-++   ∽+--++   -----   ------   ------   ------
  菌株   对照                  过乙酸浓度0.1％
  15秒   30秒   1分   2.5分  5分   10分
  结核分枝杆菌H37Rv鸟分枝杆菌ATCC 15769细胞内分枝杆菌ATCC 13980Kansasii分枝杆菌ATCC 25414结核分枝杆菌1号临床分离株结核分枝杆菌2号临床分离株   ++++++   ++++++   +++-∽+++   -∽+-∽+----   ------  ------   ------
  菌株   对照                          2％戊二醛
  15秒   30秒   1分   2.5分   5分   10分
  结核分枝杆菌H37Rv鸟分枝杆菌ATCC 15769细胞内分枝杆菌ATCC 13950Kansasii分枝干菌ATCC 25414结核分枝杆菌1号临床分离株结核分枝杆菌2号临床分离株   +++++NT   +++++NT   +++-∽++NT   -∽+++-+NT   -∽+-∽+---NT   -∽+-∽+---NT   --∽+---NT
工业实用性
本发明提供了一种过乙酸制剂，可用于对医疗器械和例如内窥镜，纱布等类似的医疗装备的杀菌或消毒。本发明的过乙酸制剂以稀释后工作液的形式在至少7天内，能稳定地维持有效破坏细菌芽孢的过乙酸浓度。本制剂可以替代以戊二醛为活性成分的制剂。

Claims (23)

1.一种包括过乙酸为主要成分的杀菌制剂，含有：
过乙酸；
至少一种磷酸盐；和
至少一种非离子型表面活性剂，
其中用水稀释杀菌制剂以提供工作液；
其中过乙酸是包含过乙酸、过氧化氢、乙酸和水的平衡浓度混合物的过乙酸溶液；
其中至少一种非离子型表面活性剂选自聚氧乙烯/聚氧丙烯嵌段聚合物型表面活性剂，和聚氧乙烯烷基醚型表面活性剂；以及
其中至少一种磷酸盐和至少一种非离子型表面活性剂以足以维持过乙酸在杀菌工作液中的浓度的量存在。
2.权利要求1的杀菌制剂，其中杀菌工作液能够破坏细菌芽孢和抗酸性细菌。
3.权利要求2的杀菌制剂，其中充分维持过乙酸在杀菌工作液中的浓度以在室温下破坏细菌芽孢和抗酸性细菌至少7天。
4.权利要求3的杀菌制剂，其中的磷酸盐选自正磷酸钠、正磷酸钾、焦磷酸钠、焦磷酸钾、多磷酸钠、多磷酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、和它们的混合物。
5.权利要求3的杀菌制剂，其中的过乙酸的浓度范围为1％w/w至10％w/w。
6.权利要求3的杀菌制剂，其中杀菌工作液中的过乙酸的浓度范围为0.1％w/w至1％w/w。
7.权利要求3的杀菌制剂，其中杀菌工作液中的磷酸盐的浓度范围为0.01％w/w至2％w/w。
8.权利要求3的杀菌制剂，其中杀菌工作液中的非离子型表面活性剂的浓度范围为0.01％w/w至0.5％w/w。
9.权利要求7的杀菌制剂，其中杀菌工作液的pH范围为3-5。
10.一种用于提供杀菌工作液的组合，该组合包含：
能够破坏细菌芽孢和抗酸性细菌的杀菌制剂，该制剂包含：
第一反应剂，该反应剂包含过乙酸溶液，该过乙酸溶液包含过乙酸、过氧化氢、乙酸和水的平衡浓度混合物；和
第二反应剂，该反应剂包含至少一种磷酸盐和至少一种非离子表面活性剂；
其中至少一种磷酸盐和至少一种非离子型表面活性剂以足以维持过乙酸在杀菌工作液中的浓度的量存在；
其中至少一种非离子型表面活性剂选自聚氧乙烯/聚氧丙烯嵌段聚合物型表面活性剂，聚氧乙烯烷基苯基醚型表面活性剂，和聚氧乙烯烷基醚型表面活性剂；
其中单独提供第一和第二反应剂；和
其中在使用前混合第一和第二反应剂并用水稀释。
11.权利要求10的组合，其中的第一反应剂是一种含有5-7％w/w过乙酸、7-9％w/w过氧化氢、30-36％w/w乙酸、和水的平衡组合物。
12.权利要求10的组合，其中的第一反应剂还含有稳定剂。
13.权利要求12的组合，其中的稳定剂选自正磷酸和焦磷酸。
14.权利要求10的组合，其中的第一反应剂含有金属离子螯合剂或抗腐蚀剂。
15.权利要求10的组合，其中的第二反应剂还含有金属离子螯合剂、抗腐蚀剂、或色素。
16.至少一种磷酸盐和至少一种非离子表面活性剂在维持过乙酸在杀菌工作液中的浓度的用途，其中杀菌工作液是通过用水稀释杀菌制剂而制备的；
其中杀菌制剂包括过乙酸作为主要成分，其包含：
过乙酸；
至少一种磷酸盐；和
至少一种非离子表面活性剂；
其中过乙酸是包含过乙酸、过氧化氢、乙酸和水的平衡浓度混合物的过乙酸溶液；
其中至少一种非离子型表面活性剂选自聚氧乙烯/聚氧丙烯嵌段聚合物型表面活性剂，聚氧乙烯烷基苯基醚型表面活性剂，和聚氧乙烯烷基醚型表面活性剂；以及
其中至少一种磷酸盐和至少一种非离子型表面活性剂以足以维持过乙酸在杀菌工作液中的浓度的量存在。
17.权利要求16的用途，其中杀菌工作液能够破坏细菌芽孢和抗酸性细菌。
18.权利要求17的用途，其中充分维持过乙酸在杀菌工作液中的浓度以在室温下破坏细菌芽孢和抗酸性细菌至少7天。
19.权利要求18的用途，其中的磷酸盐选自正磷酸钠、正磷酸钾、焦磷酸钠、焦磷酸钾、多磷酸钠、多磷酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、和它们的混合物。
20.权利要求18的用途，其中的过乙酸在杀菌工作液中的浓度范围为0.1％w/w至1％w/w。
21.权利要求18的用途，其中杀菌工作液中的磷酸盐的浓度范围为0.01％w/w至2％w/w。
22.权利要求18的用途，其中杀菌工作液中的非离子型表面活性剂的浓度范围为0.01％w/w至0.5％w/w。
23.权利要求21的用途，其中杀菌工作液的pH范围为3-5。
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