CN1327742A - 一种溶葡萄球菌复合酶消毒剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种溶葡萄球菌复合酶消毒剂。能有效杀灭革兰氏阳性菌,尤其对耐药性金黄色葡萄球菌的杀菌效果显著。本发明的消毒剂为生物型消毒剂,无毒副作用,无环境污染,制备方法简便、宜于规模型工业化生产。

Description

一种溶葡萄球菌复合酶消毒剂

本发明涉及生物制剂，具体涉及溶葡萄球菌复合酶消毒剂。

通常用的消毒剂主要有以下几类：

1、凝固蛋白类的消毒剂：

它是通过使蛋白变性达到消毒目的。如酚、来苏、酸类、醇类。上述试剂一般用于食品、水果、实验器材、医院、皮肤等的消毒。

2、溶解蛋白类的消毒剂

可使微生物溶解进而起到杀灭作用。如氢氧化钠、石灰等。

3、氧化蛋白类的消毒剂

是通过氧化剂的强氧化作用把病原体杀死。包括漂白粉、过氧乙酸等。一般用于外周环境、水、居室及物品的消毒。

4、阳离子表面活性消毒剂：

此类药物主要为季胺盐，此药物在高浓度时凝固蛋白，低浓度时抑制细菌的代谢，该类药物对革兰氏阳性菌和阴性菌均有效。

5、其它

福尔马林：可与蛋白的氨基结合，使蛋白变性，起到杀菌消毒的作用。常用于消毒毛皮制品。

戊二醛：其醛基可与微生物的蛋白反应，以达到消毒目的。对病毒、细菌的繁殖型、结核杆菌、真菌、芽孢均有较好的杀菌效果。

环氧乙烷：是一种穿透力很强、具有较强杀菌能力的杀菌剂。可对皮毛、纤维等进行消毒。

洗必泰，安尔碘：是国产消毒剂，具有消毒效果好，用法简便，是目前较好的消毒剂之一，它对革兰氏阳性菌有较强的杀菌作用。

但以上消毒剂均为化学消毒剂。化学类消毒剂对环境有一定的污染，临床消毒中会带来很大的毒副作用，如对皮肤粘膜刺激、对血流伤口及血污创面刺激等。这些都影响化学类消毒剂的杀菌消毒的应用。

本发明的目的在克服上述消毒剂的不足之处，研制一种无毒副作用，不易产生耐药性，高效的生物型消毒剂。

本发明提供了一种生物型消毒剂，具体是一种溶葡萄球菌复合酶消毒剂。能高效杀灭革兰氏阳性菌，尤其对金黄色葡萄球菌的杀菌效果显著，最小抑杀菌浓度MIC为0.045u/ml(≈0.001μg)。

本发明的溶葡萄球菌复合酶消毒剂是由下列配方组成(重量百分比)：

主要成分：(1)溶葡萄球菌酶(lysostaphin)    25-35％

          (2)溶菌酶(lysozyme)             50-65％

辅料：    (3)磷酸钾(potassium phosphate)  7-10％

(4)氯化钠(sodium chloride)    0.5-1％

(5)甲壳素(chitin)             0.2-0.3％

本发明的溶葡萄球菌复合酶消毒剂的杀毒原理如下：

溶葡萄球菌酶是一种革兰氏阳性菌的溶菌素。组成该类革兰氏阳性菌(例如金黄色葡萄球菌)细胞壁肽聚糖的四肽侧链的氨基酸，依次为L—丙氨酸，D—谷氨酸，L—赖氨酸，D—丙氨酸；而首位的L—丙氨酸通过一个酰胺键与胞壁酸相连，该聚糖链四肽侧链第3位的L—赖氨酸，通过五肽(五个甘氨酸)交联桥联结到相邻聚糖链四肽侧链D—丙氨酸羧基上。由此纵横交叉，左右联结构成十分坚韧的三维立体多孔结构，并聚合成较厚的肽聚糖层。溶葡萄球菌酶可切断肽聚糖中的Gly-Gly键，而溶葡球菌复合酶中另一种生物酶可切断N—乙酰胞壁酸和N-乙酰葡萄糖胺之间的键，从而使杀菌活性更强，达到溶解并杀死细菌的目的，并可避免细菌耐药性的产生。

由于溶葡萄球菌酶独特的杀菌机理，使其不同于一般的抗生素。耐药性金黄色葡萄球菌的耐药机制复杂，除产生β-内酰胺酶外，还存在其它耐药机制。据临床观察MRSA对常用抗菌药物，如青霉素、苯唑青霉素一、三代头孢类抗生素及某些新喹诺酮抗菌药物也有较多的耐药菌株。从上述情况看，虽然有新的抗生素不断研制和投入使用，但在很短时间内就会有新的耐药菌株产生，这是因为大多数抗菌素只抑制细菌生长，促使细菌产生新的耐药质粒或新酶来阻止抗菌素的作用。溶葡萄球菌酶的作用机理不同于一般抗生素，抗生素的作用仅是抑制细菌生长，而该酶则是裂解细菌杀死细菌，并对耐甲氧苯青霉素(MRSA)的金黄色葡萄球菌同样有较强的杀菌能力。

溶葡萄球菌酶能水解革兰氏阳性细菌细胞壁肽聚糖产生溶菌现象，从而彻底杀死细菌，避免了细菌耐药性的产生。上海市华山医院抗生素研究所、第二军医大学长海医院检验科、上海市第六人民医院检验科、上海市第九人民医院检验科等单位曾将临床各科收集到的400多株细菌进行了溶葡萄球菌酶的抑杀菌实验。实验结果表明：溶葡萄球菌酶对革兰氏阳性菌，如临床上常见的金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌、肺炎双球菌、D群肠球菌、四联球菌、产单核李斯特菌、链球菌以及胃幽门螺旋杆菌等均有明显的抑杀作用。

实验还证明溶葡萄球菌酶对耐药性菌株，如目前医学临床上最感棘手的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，耐药性肺炎双球菌、嗜麦芽窄食单孢菌的效果更优于常用抗生素。

本发明的溶葡萄球菌复合酶消毒剂(FE复合酶消毒剂I)的杀菌效果经上海市卫生防疫站检验结果如下：一、试验方法：菌株：金黄色葡萄球菌(ATCC6538)染菌载体：1.0cm×1.0cm的脱脂平纹白布染菌方法为滴染法。TE酶消毒剂的配制：

准确称取FE酶消毒剂320mg(酶比活性900u/g)，加入灭菌蒸馏水100ml，配成酶比活性2.88u/ml的消毒液，混匀，适当稀释后备用。

试验分别观察了20℃±2和37℃±2条件下FE消毒剂对金黄色葡萄球菌杀菌效果，试验采用载体法，试验时，消毒液经预温，并按每一染菌片5ml消毒液，将样片加入消毒液中，作用至规定时间，再将样片移入5ml中和剂溶液的试管中，中和10分钟，取中和后悬液1ml作普通营养琼脂倾注接种，一式二份，置37℃温箱内培养48小时，观察最终结果。二、结果：

            两种温度下对金黄色葡萄球菌的杀灭率试验温度    消毒剂浓度    作用不同时间(min)的平均杀灭率(％)(℃)       (酶比活性u/ml)

                     5        10      15      3020           2.88       99.82    99.87   99.98   99.99

          1.44       99.53    99.83   99.92   99.95

          0.72       98.99    99.70   99.83   99.9332           2.88       99.96    99.99   99.99   99.99

          1.44       99.93    99.98   99.99   99.99

          0.72       99.84    99.89   99.94   99.98注：对照组平均菌数    20℃条件    7.7×10⁵cfu/片

                  37℃条件    6.5×10⁵cfu/片附中和剂试验：

中和剂：0.02％十二烷基硫酸钠PBS

菌株：金黄色葡萄球菌

组别                      存活菌落数(cfu/片)

消毒剂＋菌片               40

(消毒剂＋菌片)＋中和剂     1.1×10⁴

中和剂＋菌片               1.5×10⁴

(消毒剂＋中和剂)＋菌片     1.4×10⁴

PBS＋菌片                  1.5×10⁴

试验用PBS                             0

试验用中和剂                          0

试验用培养基                          0

本发明的溶葡萄球菌复合酶消毒剂的毒性经上海市化学品毒性检定所测试结果如下：一、对皮肤刺激测试：测试结果：

阳性对照组部分皮肤有红斑反应，平均刺激指数破损皮肤为2.3，完整皮肤为0.6，阴性组与样品组均无红斑水肿反应见表

         破损皮肤反应计分     完整皮肤反应计分组别            红肿/水肿             红肿/水肿

         1    24   48(天)     1    24    48(天)

    1    0/0  0/0   0/0       0/0  0/0   0/0阴性对照2    0/0  0/0   0/0       0/0  0/0   0/0

    3    0/0  0/0   0/0       0/0  0/0   0/0

    1    0/0  0/0   0/0       0/0  0/0   0/0样品    2    0/0  0/0   0/0       0/0  0/0   0/0

    3    0/0  0/0   0/0       0/0  0/0   0/0结果评价：

该样品对完整和破损皮肤平均原发刺激指数为0。符合标准要求。测试项目：原发性皮肤刺激试验送检单位：上海高科生物工程有限公司送检样品：FE复合酶消毒剂样品一般性状和用途：试验方法：

参照WS5-1-87《医用热硫化甲基乙烯基硅橡胶》中有关方法要求

受试动物：新西兰家兔，每组3只

受试样品：送检样品用生理盐水配成200u/ml。以生理盐水为阴性对照，3％甲醛为阳性对照。

试验方法：试验前24小时背部剃毛，于去毛区划出3×3cm²，试验区四块对角二块用消毒刀片划破皮肤成#形伤口，各组动物在备皮区(含破损皮肤)涂布样品液，生理盐水和3％甲醛溶液，涂后立即用消毒纱布等覆盖并固定，24小时后清洁样品涂布区，并观察试验部位的红斑，水肿皮肤反应。

测试结果：在观察期内，注射20u/ml小鼠1小时出现活动减少，体重稍有下降，2u/ml小鼠未见明显中毒症状和死亡。体重与阴性对照组无差别。

     小鼠腹腔注射前后体重变化(克)组别           注射前               注射后

                       24         48        72(h)

       1     20        22         23        25

       2     20        21         22        24阴性对照组 3     21        22         23.5      25

       4     22        22         23        24

       5     21        22         23        23.5

       1     21        19         18.5      19.5

       2     23.5      21.5       19        20.520u/ml     3     22        21         21        21.5

       4     22.5      20         20.5      22

       5     21.5      20         19.5      21

       1     21        21         21.5      22

       2     21        21         21.5      232u/ml      3     20        22.5       24        26

       4     22        23         23.5      25

       5     22.5      23         23        24.5

在72小时观察期内，2u/ml样品组动物的反应不大于对照组动物。符合标准要求。二、腹腔注射毒性试验：测试项目：腹腔注射性试验送检单位：上海高科生物工程有限公司送检样品：FE复合酶消毒剂样品一般性状和用途：试验方法：

参照GB/T16175—1996《医用有机硅材料生物学评价试验方法》中有关方法要求进行。受试动物：清洁级昆明种小鼠，体重20～23克。受试样品：送检样品用生理盐水配成20u/ml，2u/ml。试验方法：不同浓度试样品于37℃恒温箱内恒温1小时，按50ml/kg量作腹腔注射，观察记录注射后即刻及24、48、72小时内出现症状并称重。测试结果：测得平均吸光度样品组为0.016，阴性为0.007，阳性为0.767，计算溶血率为1.2％。结果评价：本品溶血率为1.2％，符合生物材料和制品的生物学评价标准＜5％的要求。三、溶血试验：测试项目：溶血试验送检单位：上海高科生物工程有限公司送检样品：FE复合酶消毒剂样品一般性状和用途：试验方法：参照GB/T16175-1996《医用有机硅材料生物学评价试验方法》中有关方法要求进行。受试样品：送检样品用生理盐水配成200u/ml。试验方法：按标准要求采集新鲜抗凝兔血稀释待用。

样品组用受试样品1ml+生理盐水9ml，阴性对照组用生理盐水10ml，阳性对照组用蒸馏水10ml，每组做平行样品3管，然后各组试管于37℃恒温箱保温30分钟后，在各管中加入经稀释的新鲜抗凝兔血0.2ml，继续37℃保温60分钟后离心，取上清液于545nm波长下测吸光度。测试结果：

每20u/ml测试样品，细胞形态观察及细胞计数见表：

组别     细胞形态          细胞计数

       2    4    7(天)    2    4    7(天)

       1                  25   54   87阴性对照组 2形态正常 生长良好 23   57   83

       3                  20   53   88

       1                  17   43   77样品       2形态正常 生长良好 20   47   79

       3                  16   45   74

       1阳性对照   2全部死亡                0

       3 $\mathrm{RGR}\frac{77+79+74}{87+83+88}\×100=89\%$

根据反应分级表相对增殖度为89％属I级。结果评价：细胞形态正常，贴壁生长良好，细胞相对增殖度属I级，符合标准要求。四、细胞毒性试验：测试项目：细胞毒性试验送检单位：上海高科生物工程有限公司送检样品：FE复合酶消毒剂样品一般性状和用途：试验方法：参照GB/T16175-1996医用有机硅材料生物学评价试验方法。细胞株：L929成纤维细胞由中科院细胞生物研究所提供，传代培养2次，配制成浓度为4万/ml的细胞悬液。受试样品：送检样品用细胞培养液配制成20u/ml。阴性对照组：15％小牛血清细胞培养液。阳性对照组：含6.4％苯酚的小牛血清的细胞培养液。试验方法：细胞增殖度法。五、本发明消毒剂经上海第二军医大学毒性试验及致热源试验：

            急性毒性试验1、药品名称：FE酶消毒剂(由上海高科生物工程有限公司提供)。2、试验方法：(1)本实验采用昆明种小白鼠60只，雌雄各半，体重33.5±0.25g，由第二军医大学实验动物中心提供。(2)FE按10u/kg剂量每日一次连续7天经肌注小白鼠，观察动物在最大剂量下毒性反应。(3)试验结果：动物经肌注FE7天后，无异常反应，活动正常，经7天观察，60只小白鼠全部存活。(4)试验结论：本实验昆明种小白鼠以10u/kg剂量每日肌注连续给药7天，未发现异常反应，FE无毒性反应。

             刺激性及致热源试验1、药品名称：FE酶消毒剂(由上海高科生物工程有限公司提供)2、眼刺激反应：(1)试验方法：本实验采用第二军医大学实验动物中心提供的新西兰兔3只，将FE原液(1000u/ml)，滴入兔右眼一滴，以左眼为对照，分别观察1h，12h，24h，48h，72h的变化。(2)判断标准：结膜充血，水肿情况。(3)试验结果：FE眼刺激3只新西兰兔后无异常反应，均为阴性。3、皮肤刺激反应：(1)试验方法：将兔背柱右侧剃毛5cm²为试验面积，左侧为对照，在受试面积上涂0.1mlFE原液(1000u/ml)观察1h，2h，24h，48h皮肤反应情况。(2)判断标准：皮肤红肿，是否有炎性反应。(3)试验结果：3只新西兰兔经FE皮肤刺激实验，均无任何异常反应，全部阴性。4、致热源试验：(1)药品：FE酶消毒剂原液(1000u/ml)由高科生物工程制品有限公司提供。(2)动物：新西兰兔3只，雌性体重2.35±0.1kg，由第二军医大学实验动物中心提供。(3)试验方法：取新西兰兔3只，测定其盲肠正常体温后，自耳缘静脉缓缓注入FE原液，剂量为330u/kg体重，每隔1小时测量体温一次，共测三次，观其体温变化情况。(4)试验结果：3只新西兰兔经静脉注射FE后，测定其注射前后的体温，均无显著差异。

兔号	体重(kg)	正常体温(℃)	注射后体温℃1h      2h      3h
				1	2.4	39.7	39.6    39.8    39.8
2	2.25	39.8	39.7    39.7    39.7
				3	2.5	39.8	39.7    39.7    39.8

六、本发明消毒剂经上海长海医院测试杀菌效果如下：FE复合酶消毒剂对小鼠烧伤创面金黄色葡萄球菌杀灭效果的观察样品名称：FE复合酶消毒剂送检单位：上海高科生物工程有限公司送检日期：1991年4月样品来源：上海高科生物工程有限公司检测项目：测定FE复合酶消毒剂对小鼠烧伤创面金黄色葡萄球菌杀灭效果

                方法一、烧伤感染模型：动物为昆明种小白鼠，雌雄各半，体重25—30g。动物随机分为三组，以直径2.6cm圆形烙铁造成小鼠背部皮肤III度烧伤(75℃，15秒)，烧伤面积(约5cm²)约占小鼠体表面积的6—7％，伤后30分钟，创面接种浓度为10cfu/ml的金黄色葡萄球菌菌液0.1ml，菌株为金黄色葡萄球菌ATCC25923。二、烧伤创面的消毒处理

在烧伤创面接种金黄色葡萄球菌后3—4小时，用无菌棉拭子沾取含0.02％十二烷基硫酸钠的生理盐水，涂擦创面作消毒前采样，然后用酶活浓度为2μ/ml的FE复合酶消毒剂，敷贴烧伤创面(1—2ml/只)。消毒作用30分钟，再作消毒后采样。经振荡洗涤，取样液0.1ml作涂抹琼脂平板接种，每一样液接种2个平板，于37℃温箱内培养48小时，观察最终结果。

                 结果

结果证明，经FE复合酶消毒剂消毒的24小时，只有2只有金黄色葡萄球菌检出，而对照组19只小鼠则全部有金黄色葡萄球菌检出(附表)。

附表FE复合酶消毒剂对烧伤创面金黄色葡萄球菌消毒效果

组别	检测动物数(只)	阳性动物数(只)	阳性率(％)
				FE复合酶消毒剂	24	2	8.30
对照组	19	19	100.00

经FE复合酶消毒剂消毒后2只检测阳性小鼠，其金黄色葡萄球菌菌数分别为2.2×10⁴cfu/cm²和9.8×10³cfu/cm²，而对照组小鼠金黄色葡萄球菌数在0.98×10⁵cfu/cm²-1.82cfu/cm²之间，远高于使用FE复合酶消毒剂处理组。

                 结语

经24只人工烧伤小鼠模拟消毒试验证明，FE酶消毒剂对人工污染烧伤创面的金黄色葡萄球菌有较好的杀灭作用。

                检测报告样品名称：FE复合酶消毒剂送检单位：上海高科生物工程有限公司样品来源：上海高科生物工程有限公司样品性质：白色粉末，无味，易溶于水检测项目：FE复合酶消毒剂对烧伤创面金黄色葡萄球菌实用消毒效果的测定

               方法一、FE复合酶消毒剂的配制

准确称取FE复合酶消毒剂用无菌蒸馏水配成浓度为2.0u/ml的

消毒液，置于4℃下保存备用。二、实用消毒试验

试验用FE复合酶消毒剂中FE酶比活浓度为2.0u/ml，所用中和剂为含0.02％十二烷基硫酸钠的生理盐水。消毒前，用无菌棉拭子在含中和剂生理盐水的试管中浸湿，并于试管内壁挤干后，在患者烧伤创面划定的采样区内涂擦采样，采样面积为1cm²，采样后，将棉拭子放回原采样液试管内，作为消毒前对照。消毒时，用浓度2.0u/ml的FE复合酶消毒剂敷贴患者烧伤创面，消毒作用2小时后，作消毒采样，采样液经敲打洗涤，取样液原液或进行适当稀释后，作高盐甘露醇琼脂倾注接种，每皿0.1ml，一式二份，置37℃温箱内培养48h，观察最终结果。

              结果

以11例烧伤患者实用消毒试验证明，经FE复合酶消毒剂对烧伤创面敷贴消毒后，创面金黄色葡萄球菌数由1850—55650cfu/cm²下降为0—2250cfu/cm²，杀灭率范围为91.66—100.00％。对患者烧伤创面的金黄色葡萄球菌的杀灭率达98.00％以上，表明FE复合酶消毒剂用于金黄色葡萄球菌感染的烧伤创面有明显的消毒效果(附表)。

附表对烧伤创面金黄色葡萄球菌的效果

试验序号	消毒前菌数(cfu/cm2)	消毒后菌数(cfu/cm2)	杀灭率(％)
				1	24500	250	98.97
2	27000	2250	91.66
				3	10750	0	100.00
4	2000	0	100.00
				5	1850	0	100.00
6	45250	0	100.00
				7	29625	287	99.03
8	3765	60	98.41
				9	29850	410	98.63
10	27460	650	97.63
				11	55650	580	98.96

                  结语

FE酶消毒剂用于冲洗烧伤创面，对创面金黄色葡萄球菌有较好的杀灭效果，其平均杀灭率可达98.00％以上。七、本发明消毒剂经中国人民解放军总后工程总队医院测定消毒效果如下：样品名称：FE消毒剂送检单位：上海高科生物工程有限公司送检日期：1997年4月10日样品来源：上海高科生物工程有限公司样品性质：白色粉末，无味，易溶于水检测项目：FE酶消毒剂对烧伤创面金黄色葡萄球菌实用消毒效果的测定

              方法一、FE酶消毒剂的配制

准确称取FE酶消毒剂用无水菌蒸馏水配成酶活性浓度为2.88u/ml，所用中和剂为含0.02％十二烷基硫酸钠的生理盐水。消毒前，用无菌棉拭子在含中和剂生理盐水的试管中浸湿，并于试管内壁挤干后，在患者烧伤创面划定的采样区内涂擦采样，采样面积为2×2cm²，采样后，将棉拭子放回原采样液试管内，作为消毒前对照。消毒时，用酶活性浓度2.88u/ml的FE酶消毒剂冲洗患者烧伤创面，作用2小时进行消毒后采样，采样液经敲打洗涤，取采样液原液或作适当稀释后，作高糖甘露醇琼脂倾注接种，每皿0.1ml，一式二分，置37℃温箱培养48h，观察最终结果。

             结果

经30例患者的实用消毒试验证明，经FE酶消毒剂对烧伤面冲洗消毒后，创面金黄色葡萄球菌检出数由消毒前987～41000cfu/cm²下降为0～1630cfu/cm²，杀灭率范围为94.24～100.00％。表明FE酶消毒剂用于金黄色葡萄球菌感染的烧伤创面有明显的消毒效果(附表)。

            结语

FE酶消毒剂用于烧伤创面冲洗消毒，对金黄色葡萄球菌的杀灭率可达94.24％以上。

附表对烧伤创面金黄色葡萄球菌的杀灭效果

试验序号	消毒前菌数(cfu/cm2)	消毒后菌数(cfu/cm2)	杀灭率(％)
				1	4800	230	95.20
2	9500	530	94.42
				3	1050	0	100.00
4	1450	0	100.00
				5	1500	100	93.33
6	9750	0	100.00
				7	9650	210	94.73
8	3790	160	95.28
				9	18500	240	98.70
10	24550	750	96.94
				11	35600	580	98.37
12	35750	410	98.85
				13	46500	378	99.18

14	17500	290	96.13
				15	16500	950	94.24
16	27300	398	98.54
				17	18350	5	99.97
18	32140	1560	95.15
				19	2880	67	97.67
20	1930	3	99.84
				21	24610	300	98.78
22	29360	1630	94.45
				23	29120	9	99.96
24	1850	0	100.00
				25	2010	19	99.05
26	3570	20	99.43
				27	27530	375	98.63
28	1370	0	100.00
				29	987	0	100.00
30	11000	538	98.68

八、本发明消毒剂经无锡市第三人民医院测定消毒效果如下：样品名称：FE复合酶消毒剂送检单位：上海高科生物工程有限公司样品日期：1997年7月10日样品来源：上海高科生物工程有限公司样品性质：白色粉末，无味，易溶于水检测项目：FE复合酶消毒剂对烧伤创面金黄色葡萄球菌实用消毒效果的测定

                方法一、FE复合酶消毒剂的配制

准确称取FE复合酶消毒剂用无菌蒸馏水配成浓度2.0u/ml的消

毒液，置于4℃下保存备用。二、实用消毒试验

试验用FE复合酶消毒剂中FE酶比活浓度为2.0u/ml，所用中和剂为含0.02％十二烷基硫酸钠的生理盐水。消毒前，用无菌棉拭子在含中和剂生理盐水的试管中浸湿，并于试管内壁挤干后，在患者烧伤创面划定的采样区内涂擦采样，采样面积为1cm²，采样后，将棉拭子放回原采样液试管内，作为消毒前对照。消毒时，用浓度2.0u/ml的FE复合酶消毒剂敷贴患者烧伤创面，消毒作用2小时，作消毒后采样，采样液经敲打洗涤，取样液原液或进行适当稀释后，作高盐甘露醇琼脂倾注接种，每皿0.1ml，一式二份，置37℃温箱内培养48h，观察最终结果。

              结果

经10例烧伤患者实用消毒试验证明，经FE复合酶消毒剂对烧伤创面敷贴消毒后，创面金黄色葡萄球菌数由22000—340000cfu/cm²下降为0—2720cfu/cm²，杀灭率范围为96—100％。表明FE复合酶消毒剂用于金黄色葡萄球菌感染的烧伤创面有明显的消毒效果(附表)。

       附表  对烧伤创面金黄色葡萄球菌的杀灭效果试验序号  消毒前菌数(cfu/cm²) 消毒后菌数(cfu/cm²) 杀灭率(％)

1         35000                 0                   100

2         42000                 0                   100

3         22000               440                  98.0

4         38000               418                  98.9

5         75000              2250                  97.0

6         49000              1960                  96.0

7         52000               676                  98.7

8         67000              2000                  97.0

9         340000             2720                  99.210         85000               340                  99.6

                  结语

FE酶消毒剂用于冲洗烧伤创面，对创面金黄色葡萄球菌有较好的杀灭效果，其平均杀灭率可达96％以上。

本发明的另一目的是提供了溶葡萄球菌复合酶消毒剂的制备方法，该方法是在无菌室或超净工作台中，将溶葡萄球菌酶(从美国Sigma公司购买)，溶菌酶，磷酸钾，氯化钠，甲壳素，按比例依次加入洁净的玻璃或不锈钢盛具中，轻轻搅拌，充分混和均匀后，封装于纸质袋中，入库，室温保存即可。

本发明的溶葡萄球菌酶消毒剂的主要成份是溶葡萄球菌酶和溶菌酶，它们是蛋白质，不会对皮肤和粘膜产生刺激，不对机体产生任何毒副作用，并可通过代谢彻底降解，没有残留，不影响环保。其优点如下：

1)特效性。溶葡萄球菌复合酶消毒剂(I)在杀灭耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方面，显示出特效。杀菌效果极佳。

2)杀菌谱更广。溶葡萄球菌复合酶消毒剂(II)和溶葡萄球菌复合酶口腔喷雾剂不仅能杀灭耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，而且可以有效杀灭大肠杆菌、白色念珠菌、溶血性链球菌、厌氧菌、绿脓杆菌等常见致病细菌。

3)杀菌活性和稳定性大大高于溶葡萄球菌酶。由于溶葡萄球菌复合酶是以溶葡萄球菌酶(lysostaphin)为主要成分，配以稳定剂、增效剂等有效生物成分复合而成，比纯的溶葡萄球菌酶具有更大的稳定性，在温度60℃以下活性保持稳定，PH适应范围3-14，冻干粉三年酶活性保持稳定。

本发明溶葡球菌复合酶消毒剂对医院内的交叉感染、烧伤和手术病人的革兰氏阳性菌感染特别是耐药性金黄色葡萄球菌特别有效，其他消毒剂和药物无法与之相提并论。

目前，耐药性金黄色葡萄球菌MRSA的院内感染很难治疗，该类细菌对除万古霉素以外的大多数抗生素都有抗药性。但万古霉素毒副作用很大，病人用后，肝肾毒性大。另外，万古霉素不能外用，临床常用的SD-Ag和洗必泰对破损皮肤刺激性强，对MRSA基本无作用。而且最近已有人报道发现抗万古霉素的耐药性金黄色葡萄球菌。所以临床尤其是烧伤急需能杀死耐药性金黄色葡萄球菌的外用制剂。上海高科生物工程有限公司研制生产的溶葡球菌复合酶消毒剂能水解革兰氏阳性菌特别是耐药性金黄色葡萄球菌的肽聚糖甘氨酸键而产生溶菌，从而彻底杀死细菌，不易产生耐药性菌株，又无任何皮肤刺激作用，故该品是一种很有前景的皮肤外用消毒剂。

临床上MRSA感染的创面大多是愈合困难的晚期残余创面，外用溶葡球菌复合酶消毒剂后分泌物明显减少，创面开始愈合。连续三次使用后，绝大部分创面MRSA转阴，总杀菌率达98％以上，促进创面愈合，减少院内交叉感染。

实例：每制造1克溶葡萄球菌酶消毒剂(I)的配制方法。a.分别将溶葡萄球菌酶0.3克，溶菌酶0.4克，磷酸钾0.088克，氯化钠0.01克，甲壳素0.002克混匀封装。b.分别将溶葡萄球菌酶0.35克，溶菌酶0.55克，磷酸钾0.09克，氯化钠0.007克，甲壳素0.003克混匀封装。该配方对金黄色葡萄球菌杀菌率99.1％c.分别将溶葡萄球菌酶0.25克，溶菌酶0.64克，磷酸钾0.10克，氯化钠0.008，甲壳素0.002克混匀封装。该配方对金黄色葡萄球菌杀菌率99.0％。

Claims (2)

1、一种溶葡萄球菌复合酶消毒剂，其特征在于该消毒剂是由下列配方组成(重量百分比)：

主要成份： (1)溶葡萄球菌酶    25～35％

          (2)溶菌酶          50～65％

辅料      (3)磷酸钾          7～10％

          (4)氯化钠          0.5～1％

          (5)甲壳素          0.2～0.3％

2、一种溶葡萄球菌复合酶消毒剂的制备方法，其特征在于该方法是在无菌室或超净工作台中，将溶葡萄球菌酶、溶菌酶、磷酸钾、氯化钠、甲壳素，按比例依次加入洁净的玻璃或不锈钢盛具中，轻轻搅拌，充分混和均匀后，封装于纸质袋中。