CN1210407C - 富含配基异黄酮的植物蛋白提取物和蛋白物质，高染料木黄酮和黄豆苷原含量的物质的制备方法 - Google Patents

富含配基异黄酮的植物蛋白提取物和蛋白物质，高染料木黄酮和黄豆苷原含量的物质的制备方法 Download PDF

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Abstract

提供富含配基异黄酮的植物蛋白提取物和蛋白物质，以及高染料木黄酮含量的物质和高黄豆苷原含量的物质。在一定温度和pH下处理植物原料使其中异黄酮共轭物转化为异黄酮糖苷再经过酶促反应使异黄酮糖苷转化为配基异黄酮。在异黄酮共轭物转化为异黄酮糖苷或异黄酮糖苷转化为配基异黄酮之前或之后，植物原料用pH约高于蛋白质等电点的含水提取剂提取，以提取蛋白质和异黄酮。经分离，得到相应物质。

Description

富含配基异黄酮的植物蛋白提 取物和蛋白物质，高染料术黄酮 和黄豆苷原含量的物质的制备方法
发明领域
本发明涉及一种富含配基异黄酮的植物蛋白提取物和蛋白物质，通过两步法将植物蛋白物质中的异黄酮共轭物转化成配基异黄酮以制备这些物质的方法，以及高染料木黄酮含量的物质和高黄豆苷原含量的物质，和从富含配基异黄酮的蛋白物质中提取这些物质的方法。
发明背景
异黄酮存在于许多豆科植物中，包括植物蛋白原料，如大豆中。这些化合物包括黄豆苷，6”-OAc黄豆苷，6”-OMal黄豆苷，黄豆苷原，染料木苷，6”-OAc染料木苷，6”-OMal染料木苷，染料木黄酮，大豆异黄酮(glycitin)，6”-OAc大豆异黄酮，6”-OMal大豆异黄酮，黄豆黄素，生原禅宁A，7-羟-4’-甲氧异黄酮，拟雌内酯。通常这些合化物与大豆固有的苦味有关。
植物蛋白物质中的异黄酮包括异黄酮糖苷(glucones)、异黄酮共轭物和配基异黄酮。异黄酮糖苷具有连接到异黄酮部分的葡萄糖分子。异黄酮共轭物具有连接到异黄酮糖苷的葡萄糖分子上的另一部分。例如，6”-OAc染料木苷含有连接到染料木苷的葡萄糖分子六位的乙酯基。配基异黄酮仅由异黄酮部分构成。
大豆含有三“族”具有相应糖苷、共轭物和配基的异黄酮化合物：染料木黄酮族，黄豆苷原族，和黄豆黄素族。染料木黄酮苷族包括葡萄糖苷染料木苷；共轭物6”-OMal染料木苷(染料木苷的6”-丙二酸酯)和6”-OAc染料木苷(染料木苷的6”乙酸酯)；和配基染料木黄酮。黄豆苷原族包括糖苷黄豆苷；共轭物6”-OAc黄豆苷和6”-OMal黄豆苷；和配基黄豆苷原。黄豆黄素族包括糖苷大豆异黄酮；共轭物6”-OMal大豆异黄酮；和配基黄豆黄素。
在工业品的生产中，如植物蛋白分离物和浓缩物的生产中，其焦点一般是除去这些物质。例如，在生产大豆蛋白分离物或浓缩物传统方法中，豆饼用碱性含水介质提取，大部分异黄酮与大豆蛋白一起溶解在提取物中。通过提取物的酸化蛋白质从提取物中沉淀下来，经分离形成分离物或浓缩物，剩下的乳清保留有大量溶解的异黄酮。残留在酸性沉淀蛋白中的剩余的异黄酮，通常通过彻底洗涤除去。乳清和洗涤液一般被弃掉了。
最近已认识到含于植物蛋白，如大豆内的异黄酮具有药用价值。在药用评估方面，对所有异黄酮都感兴趣，配基是最感兴趣的特殊异黄酮。染料木黄酮和黄豆苷原可以明显降低心血管的危险系数，请参看“Plant andMammalian Estrogen Effects on Plasma Lipids of FemaleMonkeys”，Circulation，vol.90.p.1259(Oct.1994)。染料木黄酮和黄豆苷原还被认为能减少女性体内内源性雌激素水平下降或变动引起的病症，如绝经、经前综合症。此外，最近认识到配基异黄酮可以抑制人类癌细胞，如乳腺癌细胞和前列腺癌细胞的生长，这些被描述在如下论文中：Peterson和Barnes的“Genistein Inhibition of the Growth of HumanBreast Cancer Cells，Independence from Estrogen Receptors and theMulti-Drug Resistance Gene”， Biochemical and Biophysical Research. Communications，Vol.179，No.1，pp.661-667，Aug.30，1991；Peterson和Barnes的“Genistein and Biochanin A Inhibit the Growth of HumanProstrate Cancer Cells but not Epidermal Growth Factor ReceptorTyrosine Autophosphorylation”， The Prostate.Vol.22，pp.335-345(1993)；以及Barnes等人的“Soybeans Inhibit Mammary Tumors inModels of Breast Cancer”， Mutagens and Carcinogens in the Diet，pp.239-253(1990)。
正如上面提到的，配基异黄酮包括黄豆苷原、染料木黄酮和黄豆黄素。这些配基具有如下通式：
Figure C9712058600091
其中R1、R2、R3和R4可以选自H、OH和OCH3。具有如上通式的染料木黄酮，其中R1＝OH，R2＝H，R3＝OH，R4＝OH；具有如上通式的黄豆苷原，其中R1＝OH，R2＝H，R3＝H，R4＝OH；具有如上通式的黄豆黄素，其中R1＝OH，R2＝OCH3，R3＝H，R4＝OH。
因此本发明涉及配基和植物蛋白提取物的富集和含有这些化合物的植物蛋白物质，还涉及高染料木黄酮含量的物质和高黄豆苷原含量的物质。本发明还涉及富含配基的植物蛋白提取物、富含配基异黄酮植物蛋白物质、高染料木黄酮含量物质和高黄豆苷原含量物质的制备方法。
将植物蛋白异黄酮共轭物转化为配基异黄酮的一般方法是已知的，描述在本申请的受让人所有的、于1995年6月7日提交的，目前正处于待审的专利申请US 08/477,102中。
将糖苷转化为配基异黄酮的方法也是已知的，将异黄酮糖苷转化为配基异黄酮以生产富含配基异黄酮的植物蛋白提取物和富含配基异黄酮的植物蛋白分离物的方法描述在本发明的受让人所有的，目前正处于待审的PCT专利申请PCT/US94/10697中。
在现有技术中将异黄酮糖苷转化为配基异黄酮的其它技术也是已知的，如Obata等人的日本专利申请258,669。这些方法都未提出将异黄酮共轭物转化为配基异黄酮，或未提出从富含配基的植物蛋白分离物中得到的高染料木黄酮含量的物质或高黄豆苷原含量的物质。进一步说，这些方法仅仅是糖苷到配基的中等程度的转化，并且需要很长的时间才能达到这种中等程度的转化。因此，这些方法不是大规模工业操作所希望的。
本发明的一个目的是提供一种富含配基异黄酮的植物蛋白提取物及其生产方法。
本发明的再一目的是提供一种富含配基异黄酮的植物蛋白物质及其生产方法。
本发明的另一目的是提供一种高染料木黄酮含量的物质和高黄豆苷原含量的物质以及从富含配基异黄酮的植物蛋白物质生产它们的方法。
发明概述
本发明是一种富含配基异黄酮的提取物和从含有异黄酮共轭物和蛋白质的植物原料中生产这些物质的方法。该方法包括用pH大约高于植物原料中蛋白质等电点的含水提取剂提取含有异黄酮共轭物的植物原料。在一定的温度和pH下处理含水提取物足够长的时间，使异黄酮共轭物转化为异黄酮糖苷。在一定温度和pH下使酶与含水提取物中的异黄酮糖苷接触足够长的时间，使异黄酮糖苷转化为配基异黄酮，产生富含配基异黄酮的提取物。
在本发明的一个方案中，提取是在约6-约10的pH下进行的。
提取剂与植物蛋白物质的重量比优选为约8∶1-约16∶1。
在本发明的另一方案中，在约2℃-约121℃的温度和约6-约13.5的pH下，处理含水提取物，将异黄酮共轭物转化为异黄酮糖苷。优选地，这一转化是在约11的pH和约5℃-约50℃的温度下进行，或者在约9的pH和约45℃-约75℃的温度下进行。
在本发明的再一方案中，在约5℃-约75℃的温度和约3-约9的pH下，使异黄酮糖苷与含水提取物中的酶接触，将异黄酮糖苷转化为配基异黄酮。优选地，酶是可以断裂1，4-糖苷键的糖酶。
在本发明的又一方案中，富含配基异黄酮的提取物的pH被调节到大约提取物中的蛋白质的等电点以使含有蛋白质和配基异黄酮的蛋白物质沉淀出来。
实现了异黄酮共轭物向异黄酮糖苷和异黄酮糖苷向配基异黄酮的高转化率。在一个方案中，大部分，优选几乎所有异黄酮共轭物都转化为配基异黄酮。
另一方面，本发明是富含配基异黄酮的蛋白物质，以及从由含有异黄酮共轭物和蛋白质的植物原料得到的富含异黄酮糖苷的蛋白物质生产它们的方法。植物原料是用pH大约高于植物原料中蛋白质等电点的含水提取剂提取。在一定的温度和pH下，处理含水提取物足够长的时间，使异黄酮共轭物转化为异黄酮糖苷。从提取物中分离出含有异黄酮糖苷的蛋白物质，在一定温度和pH下使蛋白物质中的异黄酮糖苷与酶接触足够长的时间，使异黄酮糖苷转化为配基异黄酮。
在再一方面，本发明是富含配基黄酮的提取物，以及从富含异黄酮糖苷的植物原料中生产它们的方法，所述植物原料是从含有异黄酮共轭物和蛋白质的植物原料得到的。形成植物原料的含水浆料，在一定的pH和温度下，处理浆料足够长的时间，使异黄酮共轭物转化为异黄酮糖苷。然后，用pH大约高于植物原料中蛋白质等电点的含水提取剂提取富含异黄酮糖苷的植物原料。在一定的pH和温度下，提取物中的异黄酮糖苷与酶接触一定时间，使异黄酮糖苷转化为配基异黄酮。
在优选的方案中，通过向提取物中添加有效量的补充酶使提取物中的异黄酮糖苷与酶接触，其中补充酶优选是能断裂1，4-糖苷键的糖酶。
在另一方案中，富含配基异黄酮的蛋白物质是通过调节提取物的pH至蛋白质的等电点以沉淀含有蛋白质和配基异黄酮的蛋白物质从富含配基异黄酮的提取物形成的。
在再一方面，本发明是富含配基异黄酮的蛋白物质，以及从含有异黄酮共轭物和蛋白质的植物原料得到的蛋白物质生产它们的方法。植物原料用pH大约高于蛋白质等电点的含水提取剂提取。通过调节提取物的pH至约蛋白质的等电点从提取物中分离出含有异黄酮共轭物的蛋白物质。形成蛋白物质的水浆料，在一定的pH和温度下，处理水浆料足够长的时间，使异黄酮共轭物转化为异黄酮糖苷。在一定的pH和温度下，浆料中的异黄酮糖苷与酶接触足够长的时间，使异黄酮糖苷转化为配基异黄酮。
在优选的方案中，通过向浆料中添加有效量的补充酶使浆料中的异黄酮糖苷与酶接触，其中补充酶优选是能断裂1，4-糖苷键的糖酶。
在另一方面，本发明是高染料木黄酮含量的物质，以及从富含配基异黄酮的植物蛋白物质中回收它们的方法。提供富含配基异黄酮的植物蛋白物质，用含水醇提取剂提取，以生产富含配基异黄酮的提取物。提取物与吸附剂接触足够长的时间，从提取物中分离出高染料木黄酮含量的物质。
在最后一方面，本发明是高黄豆苷原含量的物质，以及从富含配基异黄酮的植物蛋白物质生产它们的方法。提供富含配基异黄酮的植物蛋白物质，并与含水醇提取剂接触，以生产富含配基异黄酮的提取物。提取物与吸附剂接触足够长的时间，从提取物分离出高黄豆苷原含量的物质。
优选方案的详细描述
优选方案的起始原料是含有异黄酮共轭物和植物蛋白的任何植物蛋白原料或植物原料。在优选的方案中，起始原料是大豆原料，因为该方法特别适合从大豆原料生产富含配基异黄酮的提取物和蛋白物质。在这里术语“大豆原料”是指大豆或任何种类的从大豆得到的物质。特别优选的起始原料是大豆饼粕，其中的油已用现有技术的传统溶剂萃取法除去。一般说来，本发明可以在大豆或黄豆原料以外的植物蛋白物质的宽范围内应用。
根据含有异黄酮共轭物植物原料的种类，在某些情况下，需要将植物原料加工成细分的形式。希望使包含在植物原料内的异黄酮化合物接近下面将详细描述的各种试剂。原料可以粉碎、破碎或用传统已知的其它方法加工。如果植物原料是处于这样的状态：植物原料中的异黄酮化合物容易接近外部试剂或反应剂，例如，某些植物的小叶状部分，就不必将植物原料进行这中加工了。
在第一步或第一个操作中，植物蛋白和包括异黄酮共轭物在内的异黄酮化合物被从植物蛋白物质中提取出来。饼粕用pH大约高于蛋白物质等电点，优选pH为约6.0-约10.0，特别优选约6.7-约9.7的含水提取剂提取。如果必要，通常可以使用碱性试剂，如氢氧化钠、氢氧化钾和氢氧化钙，提高含水提取剂的pH。所需要的异黄酮化合物和植物蛋白被溶于含水提取物中。
优选最大限度地回收含水提取物中的这些化合物，大豆饼粕或其它植物蛋白原料与提取剂的重量比率被控制在特定的水平以溶解植物原料中尽可能多的异黄酮。蛋白质和异黄酮的提取可以按传统提取方式进行，包括植物蛋白物质的逆流提取，含水提取剂对植物蛋白原料的重量比率优选为约8∶1-约16∶1。提取植物蛋白物质后，提取剂提供了蛋白质和异黄酮的含水提取物。
另外，可以使用两步提取法，在第一步提取中，提取剂与植物蛋白原料的重量比率优选约10∶1，在第二步提取中，提取剂对植物蛋白原料的比率优选约6∶1，或更小，因此在两步中提取剂对植物蛋白原料的总重量比率不超过16∶1。也可以使用提取剂对植物蛋白原料优选为16∶1或更小的其它提取方法。
在第一异黄酮转化步骤或操作中，含水提取物中异黄酮共轭物转化为异黄酮糖苷以生产富含异黄酮糖苷的提取物。转化率取决于含水提取物的pH和温度。
异黄酮共轭物向异黄酮糖苷转化的pH范围是约6-1约13.5。必要时，含水提取物的pH可以调节到所需的pH，如果需要提高pH，可使用合适的碱、苛性试剂、或碱试剂，如果需要降低pH，可以使用合适的酸或酸试剂。已发现异黄酮共轭物向异黄酮糖苷的转化可以碱催化，因此，特别优选使用高的pH以达到快速转化。对于异黄酮共轭物向异黄酮糖苷的转化，特别优选的pH是约9-约11。
异黄酮共轭物向异黄酮糖苷转化的温度范围优选约2℃-约121℃。易于发生转化的温度范围取决于含水提取物的pH。本发明人已发现当pH相对高时易于在低温下发生转化。例如，在pH为约11时转化能在约5℃-约50℃的温度下快速而有效地进行。在pH约9时，转化能在约45℃-约75℃的温度下有效地进行。当含水提取物的pH相对低时，转化要在较高的温度下进行。例如，当pH约6时，转化在约80℃-约121℃的温度下进行。在一优选方案中，转化在约35℃和约11的pH下进行。在另一优选方案中，转化在约73℃和约9的pH下进行。
在第一步中，异黄酮共轭物向异黄酮糖苷转化的时间主要取决于所用的pH和温度范围。这一转化时间通常是约15分钟至几小时或更长。在较高的温度和较高的pH下转化能更快地进行。在约9的pH和73℃下，转化在约4-约6个小时内基本上完成。在特别优选的方案中，在约11的pH和约35℃下，异黄酮共轭物在约30分钟至约1小时，优选约45分钟内转化为异黄酮糖苷。
第一步转化优选在水溶液体系中进行。在该体系中也可以存在其它与水相容的组分，如低分子量醇，和其它水溶性溶剂。
第一步转化是非常有效的，至少大部分，优选几乎所有异黄酮共轭物转化为异黄酮糖苷。通常是约80％-约100％的异黄酮共轭物转化为异黄酮糖苷。通过使用前面描述的反应参数，可以达到95％或更高的转化率。对于大规模工业操作，高转化速度是特别具有吸引力的。
在第二异黄酮转化步骤或操作中，通过酶促反应，在第一步中生产的异黄酮糖苷以及原来残留于含水提取物中的异黄酮糖苷转化为配基异黄酮。这一转化从富含异黄酮糖苷的提取物生产了富含配基异黄酮的提取物。
已发现，第二转化步骤取决于提取物中存在的酶的浓度以及其特性。进行转化所需的酶是能断裂异黄酮糖苷的异黄酮部分和葡萄糖分子之间的糖苷键的酶。在优选的方案中，是能断裂1，4-糖苷键的糖酶、酯酶或葡糖淀粉酶。
为使异黄酮糖苷转化为配基异黄酮，所需要的酶的浓度取决于各种因素，包括含水提取物中酶的种类、酶浓度的分布、酶的活性，以及转化期间提取物的pH和温度。酶可以是原来就存在于提取物中，或者来自植物蛋白原料或者来自于提取物中微生物的生长。在这里原来存在的酶称之为“残留”酶，添加到提取物中的称之为“补充”酶。
为使至少大部分，优选几乎所有异黄酮糖苷转化为配基异黄酮，在提取物中应存在足够量的酶。在一般情况下，如果提取物中的残留酶不足以实现转化，应当向提取物中添加补充酶。在优选的方案中，不管提取物中是否存在足够的残留酶，都向提取物中添加补充酶，因为补充酶显著地降低了基本完全将糖苷转化为配基所需的时间。如果添加了补充酶，以植物蛋白物质的干基重量为基准，酶的浓度应为约0.1％-约10％。
根据在所选pH和温度条件下的最大活性和成本有效性选择补充酶。补充酶是能断裂异黄酮糖苷的异黄酮部分与葡萄糖分子之间的键的酶，如能断裂1，4-糖苷键的糖酶、酯酶和葡糖淀粉酶。优选的补充酶是可从市场上购买的α-和β-葡糖苷酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶和果胶酶。特别优选的是Biopectinase 1001(优选在约3-约6的pH下使用)、Biopectinase 3001(优选在约3-约6的pH下使用)、Biopectinase OK 701(最优pH是约3-约6)、Biolactase 30,000(最优pH是约3-约6)、Neutral Lactase(最优pH是约6-约8)，所有这些都可以从Quest International，1833 57th Street，Post OfficeBox 3917，Sarasota，Florida 34243购得。特别优选的还有Lactase F(优选在约4-约6的pH下使用)、Lactase 50,000(最优pH是约4-约6)，两者都可以从Amano International Enzyme Co.Inc.，Post Office Box 1000，Troy，Virginia 22974购得。其它特别优选的补充酶包括从Enzyme DevelopmentCorporation，2 Penn Plaza.Suite 2439，New York，New York 10121购得的G-Zyme G990(最优pH是约4-约6)和Enzeco Fungal Lactase Concentrate(最优pH是约4-约6)；从Novo Nordisk Bioindustrials，Inc.，33 TurnerRoad，Danbury，Connecticut 06813购得的Lactozyme 3000L(优选在约6-约8的pH下使用)和Alpha-Gal 600L(优选在约4-约6.5的pH下使用)；从Gist Brocades Food Ingredients，Inc.，King of Prussia，Pennsylvania，19406购得的Maxilact L2000(优选在约4-约6的pH下使用)；以及从PfizerFood Science Group，205 East 42nd Street，New York，New York 10017购得的Neutral Lactase(优选在约6-约8的pH下使用)。
异黄酮糖苷转化为配基异黄酮的pH范围是约3-约9。所用pH主要取决于酶的种类，应相应选择。尽管相信pH在转化过程中会降低，但残留酶在约7-约9的pH下是有活性的。补充酶在酶的制造商说明的最优pH范围内是有活性的，正如在上面按特定酶所指出的。通常，补充酶在约6-约8的中性pH范围内是有活性的，在约3-约6的酸性pH范围内也是有活性的。
pH可以调节到进行第二异黄酮转化步骤的所需值。在大多数情况中，通过添加一种或多种合适的酸，如乙酸、硫酸、磷酸、盐酸或其它任何合适的试剂，pH从第一异黄酮转化步骤的相对高的或碱性pH下降。
第二异黄酮转化步骤的温度范围是从约5℃-75℃。温度显著地影响酶的活性，因此也影响转化率。补充酶在70℃以上是有活性的，例如，Alpha-Gal 600L在75℃是有活性的，然而，优选在较低的温度下进行转化，以避免酶的失活。在优选的方案中，转化是在约35℃-约45℃下进行。
第二异黄酮转化步骤所需的时间取决于与酶相关的因素，特别是浓度、温度和体系的pH。在大多数情形中，在24小时内可以达到完全转化，然而，优选添加补充酶以明显提高反应速度。选择的酶、酶浓度、pH和温度优选使转化在2小时内基本完成，特别优选在1小时内基本完成。
这种方法的高转化度是提取物中至少大部分，优选几乎所有异黄酮糖苷都转化为配基形式。术语“大部分”是指异黄酮糖苷向配基异黄酮的特化程度至少约为50％。术语“几乎所有”是指异黄酮糖苷向配基异黄酮的转化程度至少约为80％，特别优选至少约为90％。可靠基础上的高转化率对工业应用是重要的、也是所希望的。
富含配基异黄酮的蛋白物质可以从富含配基异黄酮的提取物中回收。为完成第二异黄酮转化步骤，必要时，通过添加酸将pH调节到约植物蛋白的等电点，对大豆蛋白，通常调节到约4.0-约5.0，优选约4.4-约4.6。由于调节提取物的pH，蛋白质以凝乳的形式沉淀下来。一部分配基异黄酮被收集在凝乳中。沉淀后，凝乳或沉淀蛋白被从提取物中分离出来以形成富含配基异黄酮的蛋白物质。富含配基异黄酮的蛋白物质优选用离心或过滤从提取物中分离。
在最优选的方案中，完全避免对分离出来的蛋白物质的洗涤，或尽量少洗涤，以显著减少配基异黄酮从蛋白物质中的流失。用水洗涤蛋白物质因而可以完全避免，或限于用水洗涤一次，其中水对蛋白物质的重量比为约2∶1-约6∶1。尽管进行更多的洗涤会回收更少量的异黄酮，但缺少对沉淀凝乳的洗涤提供了富含所需异黄酮水平的蛋白物质。
分离出来的蛋白物质可以通过离心或浓缩或其结合来脱水，并用常规的方式干燥。优选的方案并不限于特定的脱水方式，但优选使用常规脱水和干燥技术，如离心和喷雾干燥以形成干燥的蛋白物质。
在前面描述的优选具体方法中，就在获得提取物后使用了第一和第二异黄酮转化步骤。本发明还包括这样的方法：含有异黄酮共轭物和蛋白质的植物原料用pH大约高于蛋白质等电点的含水提取剂提取；第一异黄酮转化步骤在提取物中进行；将含有异黄酮糖苷的蛋白物质从提取物中分离出来；第二异黄酮转化步骤在蛋白物质中进行。这一方法中的步骤可以用上面描述的相同方式进行。
本发明进一步包括这样的方法：由含有异黄酮共轭物和蛋白质的植物原料形成含水浆料，第一异黄酮转化步骤在含水浆料中进行；植物原料用pH大约高于蛋白质等电点的含水提取剂提取；第二异黄酮转化步骤在提取物中的异黄酮糖苷进行。植物原料的含水浆料优选含有多至20％重量的植物原料。这一方法中的步骤可以用上面描述的相同方式进行。进一步说，在第二异黄酮转化步骤后，含有配基异黄酮的蛋白物质可以上面描述的方式从提取物中分离出来。
本发明还包括这样的方法：含有异黄酮共轭物和蛋白质的植物蛋白原料用pH大约高于蛋白质等电点的含水提取剂提取；将含有异黄酮共轭物的蛋白物质从提取物中分离出来；由蛋白物质形成含水浆料；第一和第二异黄酮转化步骤基于蛋白物质的含水浆料进行。蛋白物质的含水浆料优选含有多至30％重量的蛋白物质。这一方法中的步骤可以用上面描述的相同方式进行。
可以考虑第一和第二异黄酮转化步骤都在含有异黄酮共轭物和蛋白质的植物原料的浆料中，和这些植物原料的提取物中，以及从这一提取物中分离出来的蛋白物质中进行。本发明包括结合前述任何步骤以形成富含配基异黄酮的提取物或蛋白物质。
高染料木黄酮含量的物质和高黄豆苷原含量的物质可从回收的富含配基异黄酮的蛋白物质中生产。在这里，高染料木黄酮含量的物质是指除残留的植物材料外，植物物质含有至少40％的染料木黄酮，最优选含有至少90％的染料木黄酮，如果从大豆原料中回收高染料木黄酮含量的物质，则残留植物材料是残留的大豆物质。高黄豆苷原含量的物质除残留植物材料外，含有至少40％的黄豆苷原，如果从大豆原料中回收高黄豆苷原含量的物质，则残留植物材料是残留的大豆物质。
富含配基异黄酮的蛋白物质可以初步洗涤和过滤以除去不必要的盐和糖。富含配基异黄酮的蛋白物质与水混合，其中水对蛋白物质的比率多至6∶1。应使用冷水以使配基异黄酮在水中的溶解度最小，优选温度为约5℃-约30℃。蛋白物质与水混合约15-约30分钟，然后用任何常规的过滤装置从水中过滤出蛋白物质，优选使用常规的滤纸过滤混合物。必要时，为使配基异黄酮在洗涤水中的任何可能的损失最小，可以避免洗涤和过滤步骤。
富含配基异黄酮的蛋白物质可以用含水醇提取剂提取，以从蛋白物质中除去配基异黄酮，从而生产配基异黄酮的提取物。低分子量醇，如甲醇，特别是乙醇优选作为提取剂中的醇组分。已发现配基异黄酮可以在提取剂的几乎所有醇浓度下溶解。当提取剂含有约30％-约90％的醇时，特别是提取剂含有约60％-约80％的醇时，配基异黄酮是特别易溶的。尽管含水醇是优选的溶剂，但也可以使用包括水、乙腈、二氯甲烷、丙酮和乙酸乙酯的其它溶剂以完成从蛋白材料中提取配基异黄酮。
使用最小量的提取剂进行提取。提取剂对富含配基异黄酮的蛋白物质的重量比优选不超过11∶1。提取可用常规的提取方法进行，包括逆流提取或双重提取，其中总提取物对蛋白物质的重量比率不超过11∶1。
在优选的方案中，先用80％的乙醇提取蛋白物质，其中提取剂对蛋白物质的重量比率为约6∶1。用常规分离方法，如离心或压滤，将提取物从蛋白物质中分离出来，收集提取物。再用80％的乙醇提取蛋白物质，其中提取剂对蛋白物质的比率为约4∶1。再收集提取剂并与先收集的提取物合并。然后，蛋白物质用水冲洗，其中水对蛋白物质的重量比率为约4∶1，将水添加到收集的提取物中。
尽管提取可以在任何pH下进行，提取剂的pH优选约7-约10。在优选的pH范围内避免形成蛋白凝胶，如果蛋白物质和配基异黄酮提取物被一起回收，则在优选的pH范围内，可以避免蛋白物质中形成不必要的氨基酸副产物。
提取可以在高至提取剂的沸点温度下进行，优选在约25℃-约70℃的温度下进行。为了从蛋白物质中最大限度地除去配基异黄酮，优选在约50℃-约70℃的温度下，特别优选在约60℃的温度下进行提取。
提取后，通过使提取物与吸附剂接触足够长的时间，可以从配基异黄酮提取物中分离出高染料木黄酮含量的物质和高黄豆苷原含量的物质，以从提取物中分离出高染料木黄酮和高黄豆苷原含量的物质。在优选的方案中，高染料木黄酮和高黄豆苷原含量的物质可以用反相高效液相色谱(HPLC)从提取物中分离出来。通过使提取物流过吸附剂颗粒进行洗脱，将染料木黄酮和黄豆苷原与提取物中的其它异黄酮和杂质分离，所述吸附剂以化合物特异性的方式与染料木黄酮、黄豆苷原、其它异黄酮以及杂质可释放地结合，因此可以分离每一种化合物。
首先过滤配基异黄酮提取物以除去能堵塞HPLC柱的不溶物质。提取物可以用任何常规的过滤方法过滤。特别优选用常规的超滤方法过滤提取物，这样能除去可能残留在提取物中的蛋白质。
HPLC柱是用颗粒吸附剂填充能从市场上购得的HPLC柱制备的，颗粒吸附剂能以化合物特异性的方式可释放地结合染料木黄酮、黄豆苷原、其它异黄酮以及杂质。吸附剂可以是任何反相HPLC填充材料，然而，优选的填充可以根据装载容量、分离效率和成本来选择。一种优选的填充材料是从Fka Nobel，Nobel Industries，Sweden购得的Kromasil C18 16μm100微珠。
过滤后的提取物流过填充HPLC柱，直到柱中所有结合位点都被异黄酮完全饱和，这一点可以通过柱的流出液中出现异黄酮来检测。然后，可用极性洗脱剂洗脱HPLC柱从而实现分离。在优选方案中，洗脱剂是含水醇。含水醇洗脱剂的醇浓度可以是约30％-约90％，优选的醇含量是约50％以得到良好的分离和良好的异黄酮溶解度。醇优选是甲醇或乙醇，当高染料木黄酮或高黄豆苷原含量的产物要用作食品或药物时，乙醇是优选的。
高染料木黄酮和高黄豆苷原含量的物质从柱的流出液中收集。含有黄豆苷原的流出级分首先从柱中流出，然后是黄豆黄素级分，再接着是更极性的染料木黄酮级分。当黄豆苷原和染料木黄酮级分从柱中流出时被收集起来。必要时也可以收集黄豆黄素级分。
级分中的醇可以用蒸发来除去，之后，高染料木黄酮和高黄豆苷原含量的物质以及高黄豆黄素含量的物质可以通过常规分离方法，如离心或过滤，来回收。回收的高染料木黄酮含量物质含有至少40％，优选至少90％的染料木黄酮，以及残留植物材料，如果染料木黄酮是从大豆乳清中回收的，则残留植物材料为残留大豆原料。回收的高黄豆苷原含量的物质含有至少40％的黄豆苷原，以及残留的植物材料。
                           实验
本发明通过以下使用大豆原料作为植物原料的实施例进行了更详细的描述。这些实施例是描述性的，不应理解为对发明范围的任何形式的限制或限定。
正如上面所描述的，大豆原料含有染料木黄酮、黄豆苷原和黄豆黄素的异黄酮“族”，它们具有相应的糖苷、共轭物和配基，其中染料木黄酮族含有共轭物6”-OMal染料木苷和6”-OAc染料木苷、糖苷染料木苷和配基染料木黄酮；黄豆苷原族含有共轭物6”-OMal黄豆苷和6”-OAc黄豆苷、糖苷黄豆苷和配基黄豆苷原；黄豆黄素族含有共轭物6”-OMal大豆异黄酮、糖苷大豆异黄酮和配基黄豆黄素。在下表中异黄酮的相对浓度是以一个异黄酮族的百分数表示的。例如，对于染料木黄酮族：％染料木苷+％6”-OMal染料木苷+％6”-OAc染料木苷+％染料木黄酮＝100％。共轭物向糖苷和糖苷向配基的转化是通过比较一个异黄酮族中每一类型化合物的百分数来确定的。
                       实施例1
在第一个实验中，测定大豆提取物中异黄酮共轭物向异黄酮糖苷的转化率。转化率是通过异黄酮族的丙二酸酯和乙酸酯百分数的定量降低、同一异黄酮族的糖苷的百分数相应定量提高来确定的。
大豆提取物是通过将400g细粉碎的脱脂大豆饼粕和4000g水成浆制备的。用氢氧化钠将pH调节到9.7，搅拌下在15分钟内将浆料加热到38℃。然后，离心分离浆料，收集提取物作为上清液。
在不同pH和不同温度条件下测定异黄酮共轭物向异黄酮糖苷的转化。用盐酸或氢氧化钠将600g提取物样品调节到pH为6、7、9和11。对于每一pH，600g样品分成两个300g样品，这些样品在45℃和72.5℃下保温24小时。在0、2、4、6和24小时定期分析样品中异黄酮的含量。下面表1列出了在实验过程中异黄酮的变化和分布。
                                         表1
样品 染料 6”- 6”- 染料 黄豆 6”- 6”- 黄豆 大豆 6”- 黄豆
木苷 OMal OAc 木黄 苷 OMal OAc 苷原 异黄 OMal 黄素
染料 染料 酮 黄豆 黄豆 酮 大豆
木苷 木苷 苷 苷 异黄
酮
                                   百分数
pH6，45℃
t＝0       44    47    0    13    35    48    1    16    40    37    23
t＝10分钟  42    49    0    9     39    49    1    11    41    37    22
t＝2小时   29    51    0    19    27    49    1    22    37    36    27
t＝4小时   25    50    0    25    22    49    1    28    36    35    29
t＝6小时   23    50    0    27    19    48    1    31    35    35    30
t＝24小时  15    43    1    40    12    42    0    46    30    32    37
pH7，45℃
t＝0       44    47    0    13    35    48    1    16    40    37    23
t＝10分钟  43    48    0    9     40    48    1    11    42    36    22
t＝2小时   38    48    0    13    35    48    1    16    40    37    23
t＝4小时   37    47    0    16    32    47    1    20    41    36    23
t＝6小时   36    46    0    18    31    46    1    22    41    35    24
t＝24小时  18    42    0    39    13    41    0    46    31    34    35
pH9，45℃
t＝0       44    47    0    13    35    48    1    16    40    37    23
t＝10分钟  46    46    0    8     43    46    1    10    45    33    23
t＝2小时   51    41    0    8     49    40    1    10    49    30    21
t＝4小时   57    36    0    7     54    35    1    10    52    27    21
t＝6小时  60    33    0    7     58    31    0    10    54    25    21
t＝8小时  58    26    0    15    55    25    0    20    50    23    27
pH11，45℃
t＝0       44    47    0    13    35    48    1    16    40    37   23
t＝10分钟  73    20    0    8     71    19    0    10    62    19   19
t＝2小时   92    0     0    7     91    0     0    9     82    0    18
t＝4小时   93    0     0    7     90    0     0    10    82    0    18
t＝6小时   93    0     0    7     90    0     0    10    81    0    19
t＝24小时  95    0     0    5     87    0     0    13    78    0    22
pH6，72.5℃
t＝0       44    47    0    13    35    48    1    16    40    37    23
t＝10分钟  42    48    0    9     40    48    1    12    40    35    24
t＝2小时   50    41    0    9     47    40    1    12    47    29    24
t＝4小时   56    34    0    9     53    34    1    12    52    23    24
t＝6小时   61    30    0    9     58    29    2    12    53    23    25
t＝24小时  84    7     0    9     80    6     2    12    66    5     29
pH7，72.5℃
t＝0       44    47    0    13    35    48    1    16    40    37    23
t＝10分钟  45    40    0    9     41    47    1    11    43    36    22
t＝2小时   54    21    0    8     50    38    1    10    47    30    23
t＝4小时   61    11    0    8     58    30    1    10    52    24    24
t＝6小时   67    6     0    8     63    25    1    10    56    20    24
t＝24小时  90    0     0    5     85    4     1    9     68    4     28
pH9，72.5℃
t＝0       44    47    0    13    35    48    1    16    40    37    23
t＝10分钟  53    40    0    7    50    39    1    10    47    31    22
t＝2小时   73    21    0    6    70    20    0    9     58    22    20
t＝4小时   83    11    0    6    80    10    0    9     67    14    19
t＝6小时   88    6     0    5    85    6     0    9     73    8     19
t＝24小时  96    0     0    4    91    0     0    9     80    0     20
pH11，72.5℃
t＝0       44    47   0    13    35    48    1    16    40    37   23
t＝10分钟  89    3    0    8     87    3     0    9     79    3    18
t＝2小时   94    0    0    6     90    0     0    10    81    0    19
t＝4小时   94    0    0    6     87    0     0    13    75    3    22
t＝6小时   94    0    0    6     86    0     0    14    74    3    23
t＝24小时  95    0    0    3     78    0     2    20    70    4    27
可以看出，6”-OMal和6”-OAc异黄酮共轭物浓度相对下降，相应的糖苷染料木苷、黄豆苷和大豆异黄酮浓度升高，在较高的，或较碱性的pH条件和较高温度下第一转化步骤进行得最快最完全。在45℃和72.5℃下，pH9和pH11样品几乎所有的异黄酮共轭物完全转化成了异黄酮糖苷，然而，在pH11和72.5℃下，黄豆苷和大豆异黄酮会降解。在72.5℃下，pH6和pH7样品也能差不多完全进行转化。在45℃下，在pH6和pH7样品中，基本上能由提取物中的残留酶将异黄酮糖苷转化为配基异黄酮，但是在这一条件下异黄酮共轭物向异黄酮糖苷的转化则不是特别有效。
                      实施例2
在第二个实验中，测定异黄酮糖苷向配基异黄酮的转化。转化率通过一个异黄酮族的糖苷的百分数的定量下降，以及同一异黄酮族的配基的百分数的相应定量提高来确定的。
在35℃下，通过将大豆提取物的pH调节到约11，用大约1个小时从大豆饼粕制备富含异黄酮糖苷的提取物。在第一批样品中，使用富含异黄酮糖苷的提取物中的残留酶，通过调节样品的pH至pH7和pH9，在45℃下保持24小时，进行异黄酮糖苷向配基异黄酮的转化。使用补充酶，向富含异黄酮糖苷的提取物样品中投入以下从市场上购得的酶来进行异黄酮糖苷向配基异黄酮的转化。Biolactase 30,000、Quest Neutral Lactase、Lactase 50,000、Biopectinase 100L和Alpha Gal 600。添加到每一样品中的酶量列于下面表2中。每一样品都调节到补充酶有活性的pH下，4.0、4.5或7.0。样品在35℃-75℃下保温。在选择的时间采样并测定异黄酮的含量。
                                           表2
样品 染料 6”-OMal 6”-OAc 染料木黄 黄豆苷 6”-OMal 6”-OAc 黄豆苷原 大豆异黄 6”-OM 黄豆黄素
木苷 染料木苷 染料木苷 酮 黄豆苷 黄豆苷 酮 al大豆异黄酮
                                        百分数
残留酶，pH7.0，45℃
t＝0       94    1    1    5     93    1    0    6     75    2    23
t＝3小时   94    1    1    5     93    1    0    6     75    2    22
t＝6小时   84    1    1    14    86    1    1    13    73    3    24
t＝24小时  29    1    1    69    42    2    2    54    45    3    53
残留酶，pH9.0，45℃
t＝0       94    1    1    5    93    1    0    6    75    2    23
t＝3小时   93    1    1    5    94    1    0    6    74    2    24
t＝6小时   93    1    1    5    94    1    0    6    74    2    24
t＝24小时  0     1    0    99   1     1    4    93   18    5    77
Lactase 50,000 pH4.0，50℃
0.12g/100g提取物
t＝0      100    0    0    0    100   0    0    0   100   0    0
t＝1小时  6      0    0    94   30    0    0    70  40    19   41
Biolactase 30,000，pH4.5，35℃
0.05g/100g提取物
t＝0      93    4    0    4     93    3    0    5     100    0    0
t＝1小时  26    4    0    70    16    3    0    80    40     0    60
t＝2小时  10    4    0    85    4     3    0    92    26     0    74
t＝3小时   5    4    0    91    0    3    0    97    19   0    81
Alfpha Gal 600，pH4.5，75℃
10g/100g提取物
t＝0       91   0    0    9     89   0    0    11    78   0    22
t＝24小时  1    0    0    99    0    0    2    98    0    0    100
Biopectinase 100L，pH4.0，50℃
0.2g/100g提取物
t＝0       100  0    0    0     100  0    0    0     100  0    0
t＝1小时   67   0    0    33    58   0    0    42    87   13   0
Quest Neutral Lactase，pH7.0，35℃
0.05g/100g提取物
pH4.5
t＝0       93   4    0    4     93   3    0    5     100  0    0
t＝1小时   66   4    0    30    66   3    0    31    77   0    23
t＝2小时   50   4    0    46    51   3    0    46    67   0    33
t＝3小时   36   4    0    59    37   3    0    59    58   0    42
t＝24小时  1    4    0    95    0    3    0    97    0    0    100
分别如染料木苷、黄豆苷和大豆异黄酮向染料木黄酮、黄豆苷原和黄豆黄素的转化率所示，异黄酮糖苷基本完全转化成了配基异黄酮。与用提取物中的残留酶进行转化相比较，选择的补充酶大大地提高了转化速度，在有效的浓度、温度和pH下，在1小时内基本完全转化。
                         实例3
在另一实验中，从富含配基异黄酮的提取物中回收富含配基异黄酮的蛋白物质，从常规的提取物中回收常规的蛋白物质。在分离pH4.0、4.5和5.0下，确定从每一提取物回收的蛋白物质的异黄酮含量。
通过以下步骤制备富含配基异黄酮的大豆提取物：1)用碱性水溶液提取脱脂大豆饼粕；2)调节提取物的pH至11，提取物在35℃下保持1小时，生产富含异黄酮糖苷的提取物；3)向提取物中添加相当于富含异黄酮糖苷提取物中固体重量0.1％的Lactase 50,000(Amano InternationalEnzyme Co.)，然后在50℃和pH 4.5下处理1小时，生产富含配基异黄酮的提取物。同时制备常规的大豆提取物，常规提取物是用碱性水溶液提取脱脂大豆饼粕制备的。
从每一提取物得到含有10g固体的样品，每一提取物的样品都调节到pH4.5。通过样品离心并从蛋白物质滗析上清液乳清而从每一样品中分离出蛋白物质。然后测定从每一样品中分离出的蛋白物质的异黄酮含量。下表3列出了在每一样品中以毫克计的总异黄酮含量，以及在每一样品的蛋白物质中一个异黄酮族的每一种异黄酮的百分数。
                                        表3
样品 染料 6”- 6”- 染料 黄豆 6”- 6”- 黄豆 大豆 6”- 黄豆
木苷 OMal OAc 木黄 苷 OMal OAc 苷原 异黄 OMal 黄素
染料木苷 染料木苷 酮 黄豆苷 黄豆苷 酮 大豆异黄酮
                             mg/样品
富含配基异黄酮的蛋白物质，分离pH4.5
蛋白    1.4  0.0  0.0  9.7  0.0  0.0  0.0  5.8  0.4  0.0  0.5
常规蛋白物质，分离pH4.5
蛋白质  1.6  4.3  0.0  1.6  0.7  2.3  0.0  1.2  0.0  0.4  0.4
                             百分数
富含配基异黄酮的蛋白物质，分离pH4.5
蛋白    13   0    0    87   0    0    0    100  49   0    51
常规蛋白物质，分离pH4.5
蛋白    21   58   0    21   16   55   0    28   0    52   48
比较从富含配基异黄酮的提取物得到的蛋白物质和从常规提取物得到的蛋白物质的异黄酮含量，可以看出，与从常规提取物得到的蛋白物质相比，从富含配基异黄酮的提取物得到的蛋白物质含有高得多的配基异黄酮量，特别是染料木黄酮和黄豆苷原。从常规提取物得到的蛋白物质含有大量的异黄酮共轭物，而在富含配基异黄酮的蛋白物质中却没有，这是因为在富含配基异黄酮的提取物中异黄酮共轭物转化成了配基异黄酮。
在上面的实施例中，6”-OMal染料木苷、6”-OAc染料木苷、6”-OMal黄豆苷、6”-OAc黄豆苷、大豆异黄酮、6”-OMal大豆异黄酮和黄豆黄素的百分数都是计算值。所示的百分数或酶浓度是以商业酶制剂的克数对每一样品中100g固体计算的。以下是描述量化大豆产品中异黄酮的方法。通过混合0.75克样品(喷雾干燥或磨细的粉末)与50ml 80/20的甲醇/水溶剂，从大豆产品中提取异黄酮。采用定轨振荡器，在室温下振荡混合物2小时。2小时后，通过Whatman No.42滤纸过滤除去未溶解的残留物质。用4ml水和1ml甲醇稀释5ml滤液。
用Hewlett Packard C18 Hypersil反相柱通过HPLC(高效液体色谱)分离提取的异黄酮。异黄酮被注入柱中，并用溶剂梯度洗脱，起始时为88％的甲醇、10％的水和2％的冰醋酸，结束时为98％的甲醇和2％的冰醋酸。在0.4ml/min的流量下，所有异黄酮-染料木苷、6”-0-乙酰基染料木苷6”-O-丙二酰基染料木苷、染料木黄酮、黄豆苷、6”-O-乙酰基黄豆苷、6O-丙二酰基黄豆苷、黄豆苷、大豆异黄酮和其衍生物和黄豆黄素-都清晰地得到解析了。峰检测是在260mm下用UV吸收进行的。用HPLC-质谱仪辨认这些峰。
用从Indofine Chemical Company，Sommerville，NJ.购买的纯标准样品(染料木苷、染料木黄酮、黄豆苷和黄豆苷原)进行量化。对上述每一化合物计算出响应因子(积分面积/浓度)并用于定量未知样品。对不能买到纯标准样品的共轭物形式，假定其响应因子与其母体分子一样，但用分子量的差校正。假定大豆异黄酮的响应因子是用分子量差校正的染料木苷的响应因子。这一方法提供了各种异黄酮的量。为方便起见，如果所有的共轭物形式都转化成了相应非共轭物形式，则可以计算出所有染料木黄酮、所有黄豆苷原和所有黄豆黄素，代表这些化合物的总量。这些总量也可以通过采用酸水解转化为共轭物形式的方法直接测定。
要求保护所有权或特权的本发明方案的限定如下。

Claims (44)

1.一种从植物原料生产富含配基异黄酮提取物的方法，包括：
用pH大约高于所述植物原料中所述蛋白质等电点的含水提取剂提取含有异黄酮共轭物和蛋白质的植物原料；
在约2℃-约121℃的温度和约6-约13.5的pH下，处理所述含水提取物足够长的时间以使80％-100％的所述异黄酮共轭物转化为异黄酮糖苷；和
在约5℃-75℃的温度和约3-约9的pH下，使能断裂糖苷键的酶与所述含水提取物中的所述异黄酮糖苷接触足够长的时间以使所述异黄酮糖苷转化为配基异黄酮。
2.根据权利要求1的方法，其中所述提取是在约6-约10的pH下进行。
3.根据权利要求1的方法，其中所述含水提取物是在约9的pH和约45℃-约75℃的温度下处理以使所述异黄酮共轭物转化为异黄酮糖苷。
4.根据权利要求1的方法，其中所述含水提取物是在约11的pH和约5℃-约50℃的温度下处理以使所述异黄酮共轭物转化为异黄酮糖苷。
5.根据权利要求1的方法，其中酶与所述异黄酮糖苷的接触包括向所述含有异黄酮糖苷的含水提取物中添加有效量的补充酶。
6.根据权利要求5的方法，其中补充酶选自α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、果胶酶及其混合物。
7.根据权利要求5的方法，其中添加的所述补充酶使酶在所述含水提取物中的总浓度相对于所述植物原料的干基重量为约0.1％-约10％。
8.根据权利要求1的方法，其中所述植物原料包括大豆原料。
9.根据权利要求1的方法，其中大部分所述异黄酮共轭物和所述异黄酮糖苷转化为配基异黄酮。
10.根据权利要求1的方法，其中几乎所有所述异黄酮共轭物和所述异黄酮糖苷转化为配基异黄酮。
11.根据权利要求1的方法，进一步包括调节所述冨含配基异黄酮的提取物的pH至大约所述蛋白质的等电点以沉淀含有蛋白质和所述配基异黄酮的蛋白物质。
12.根据权利要求11的方法，其中避免洗涤所述蛋白物质。
13.根据权利要求11的方法，其中用小于所述沉淀蛋白物质重量约6倍的水洗涤所述蛋白物质。
14.一种从植物原料生产富含配基异黄酮蛋白物质的方法，包括：
用pH大约高于所述植物原料中所述蛋白质等电点的含水提取剂提取含有异黄酮共轭物和蛋白质的植物原料；
在约2℃-约121℃的温度和约6-约13.5的pH下，处理所述含水提取物足够长的时间以使80％-100％的所述异黄酮共轭物转化为异黄酮糖苷；
从所述含水提取物中分离含有所述异黄酮糖苷的蛋白物质；和
在约5℃-约75℃的温度和约3-约9的pH下，使所述蛋白物质中的所述异黄酮糖苷与能断裂糖苷键的酶接触足够长的时间以使所述异黄酮糖苷转化为配基异黄酮。
15.根据权利要求14的方法，其中所述提取是在约6-约10的pH下进行。
16.根据权利要求14的方法，其中所述含水提取物是在约9-约11的pH和约5℃-约75℃的温度下处理以使所述异黄酮共轭物转化为异黄酮糖苷。
17.根据权利要求14的方法，其中从所述含水提取物中分离含有所述异黄酮糖苷的蛋白物质进一步包括调节所述含水提取物的pH至约所述蛋白物质的等电点以从所述提取物中沉淀所述蛋白物质。
18.根据权利要求14的方法，其中所述蛋白物质中的所述异黄酮糖苷与酶的接触包括向所述蛋白物质中添加有效量的补充酶。
19.根据权利要求18的方法，其中补充酶选自α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、果胶酶及其混合物。
20.根据权利要求18的方法，其中添加到所述蛋白物质中的补充酶的浓度是所述蛋白物质干基重量的约0.1％-约10％。
21.根据权利要求14的方法，其中所述植物原料是大豆原料。
22.根据权利要求14的方法，其中大部分所述异黄酮共轭物转化为配基异黄酮。
23.根据权利要求14的方法，其中几乎所有所述异黄酮共轭物转化为配基异黄酮。
24.一种从植物原料生产富含配基异黄酮的提取物的方法，包括：
形成含有蛋白质和异黄酮共轭物的植物原料的含水浆料；
在约2℃-约121℃的温度和约6-约13.5的pH下，处理所述植物原料的含水浆料足够长的时间以使80％-100％的所述异黄酮共轭物转化为异黄酮糖苷；
用pH大约高于所述植物原料中所述蛋白质等电点的含水提取剂提取植物原料；
在约5℃-约75℃的温度和约3-约9的pH下，使所述含水提取物中的异黄酮糖苷与能断裂糖苷键的酶接触足够长的时间以使所述异黄酮糖苷转化为配基异黄酮。
25.根据权利要求24的方法，其中所述浆料含有多至20％重量的所述植物原料。
26.根据权利要求24的方法，其中所述提取是在约6-约10的pH下进行。
27.根据权利要求24的方法，其中所述提取物中的异黄酮糖苷与酶的接触包括向提取物中添加有效量的补充酶。
28.根据权利要求27的方法，其中补充酶选自α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、果胶酶及其混合物。
29.根据权利要求27的方法，其中添加到所述提取物中的补充酶的浓度是所述植物原料干基重量的约0.1％-约10％。
30.根据权利要求24的方法，其中所述植物原料包括大豆原料。
31.根据权利要求24的方法，其中大部分所述异黄酮共轭物转化为配基异黄酮。
32.根据权利要求24的方法，其中几乎所有所述异黄酮共轭物转化为配基异黄酮。
33.根据权利要求24的方法，进一步包括调节所述富含配基异黄酮的提取物的pH至约所述蛋白的等电点以沉淀含有蛋白和所述配基异黄酮的蛋白物质。
34.一种从植物原料生产富含配基异黄酮的蛋白物质的方法，包括：
用pH大约高于所述植物原料中所述蛋白质等电点的含水提取剂提取含有异黄酮共轭物和蛋白质的植物原料；
从所述提取物中分离出含有所述异黄酮共轭物的蛋白物质；
形成所述蛋白物质的含水浆料；
在约2℃-约121℃的温度和约6-约13.5的pH下，处理所述含水浆料足够长的时间以使80％-100％的所述异黄酮共轭物转化为异黄酮糖苷；和
在约5℃-约75℃的温度和约3-约9的pH下，使所述含水浆料中的异黄酮糖苷与能断裂糖苷键的酶接触足够长的时间以使所述异黄酮糖苷转化为配基异黄酮。
35.根据权利要求34的方法，其中所述提取是在约6-约10的pH下进行。
36.根据权利要求34的方法，其中所述蛋白物质是通过调节所述提取物的pH至约所述蛋白的等电点以从所述提取物中沉淀所述蛋白物质而从所述提取物中分离的。
37.根据权利要求34的方法，其中所述含水浆料含有多至约30％重量的蛋白物质。
38.根据权利要求34的方法，其中所述含水浆料是在约9-约11的pH和约5℃-约75℃的温度下处理以使所述异黄酮共轭物转化为异黄酮糖苷。
39.根据权利要求34的方法，其中所述含水浆料中的异黄酮糖苷与酶的接触包括向所述浆料中添加有效量的补充酶。
40.根据权利要求39的方法，其中补充酶选自α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、果胶酶及其混合物。
41.根据权利要求39的方法，其中添加到所述含水浆料中的补充酶的浓度是所述植物原料干基重量的约0.1％-约10％。
42.根据权利要求34的方法，其中所述植物原料包括大豆原料。
43.根据权利要求34的方法，其中大部分所述异黄酮共轭物转化为配基异黄酮。
44.根据权利要求34的方法，其中几乎所有所述异黄酮共轭物转化为配基异黄酮。
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