KR100412116B1 - 아글루콘이소플라본풍부한식물성단백질추출물과단백질재료및제니스테인과다이드제인함량이높은재료및이들의제조방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 아글루콘 이소플라본 풍부한 식물성 단백질 추출물 및 단백질 재료뿐만 아니라 제니스테인 함량이 높은 재료와 다이드제인 함량이 높은 재료를 제공한다. 식물성 단백질 재료내의 이소플라본 복합제는 일정 온도와 pH에서 이소플라본 복합체를 이소플라본 글루코시드로 전환시키기에 충분한 시간동안 상기 식물성 재료를 처리하므로써 이소플라본 글루코시드로 전환된다. 상기 이소플라본 글루코시드는 효소 반응에 의해 글루코오즈 이소플라본으로 전환된다. 상기 식물성 재료는 상기 식물성 재료내의 단백질의 등전점 이상의 pH를 갖는 추출제로 추출하여 이소플라본 복합체의 이소플라본 글루코시드로의 전환 또는 이소플라본 글루코시드의 아글루콘 이소플라본으로의 전환 전 또는 후에 단백질 및 이소플라본을 추출한다. 아글루콘 이소플라본 풍부한 단백질 재료는 상기 단백질과 아글루콘 이소플라본을 상기 추출물로부터 침전시키므로써 생성된다. 제니스테인 함량인 높은 재료 또는 다이드제인 함량이 높은 재료는 상기 추출물 또는 단백질 재료로부터 제니스테인 함량이 높은 재료 또는 다이드제인 함량이 높은 재료를 분리하므로써 아글루콘 이소플라본 풍부한 단백질 재료 또는 아글루콘 이소플라본 풍부한 단백질 재료로부터 제조할 수 있다.
Description
본 발명은 아글루콘 이소플라본이 풍부한 식물성 단백질 추출물과 단백질 재료, 식물성 단백질 재료 내의 이소플라본 결합체를 아글루콘 이소플라본으로 전환시키는 2단계 공정을 수행하여 제공되는 방법과, 제니스테인(genistein)과 다이드제인(daidzein) 함량이 높은 재료 및 아글루콘 이소플라본이 풍부한 재료로부터 이들을 제공하는 방법에 관한 것이다.
이소플라본은 대두와 같은 식물성 단백질 재료를 포함하는 각종 콩과 식물에서 산출된다. 이들 화합물로는 다이드진, 6"-OAc 다이드진(daidzin), 6"-OMal 다이드진, 다이드제인, 제니스틴(genistin), 6"-OAc 제니스틴, 6"-OMal 제니스틴, 제니스테인, 글리시틴(glycitin), 6"-OAc-글리시틴, 6"-OMal 글리시틴, 글리시테인(glycitein), 비오카닌 A, 포르모노넨틴 및 쿠메스트롤 등이 있다. 전형적으로, 이들 화합물들은 대두 본연의 쓴 맛과 관련되어 있다.
식물성 단백질 재료 내의 이소플라본으로는 이소플라본 글루코시드(글루콘), 이소플라본 결합체 및 아글루콘 이소플라본을 포함한다. 이소플라본 글루코시드는이소플라본 부분에 부착된 글루코스 분자를 보유하고 있다. 이소플라본 결합체는 이소플라본 글루코시드의 글루코스 분자에 부착된 추가 부분을 보유하고 있는데, 예를 들어 6"-OAc 제니스틴은 제니스틴의 글루코스 분자의 6번 위치에 부착된 아세테이트 기를 함유하고 있다. 아글루콘 이소플라본은 전적으로 이소플라본 부분으로만 이루어져 있다.
콩은 상응하는 글루코시드, 결합체 및 아글루콘 구성원을 보유하는 3 부류("family")의 이소플라본 화합물, 즉 제니스틴류; 다이드제인류; 및 글리시테인류를 함유한다. 제니스테인류는 글루코시드 제니스틴: 결합체 6"-OMal 제니스틴(제니스틴의 6"-말로네이트 에스테르) 및 6"-OAc 제니스틴(제니스틴의 6"-아세테이트 에스테르); 및 아글루콘 제니스테인을 포함한다. 다이드제인류는 글루코시드 다이드진; 결합체 6"-OMal 다이드진 및 6"-OAc 다이드진; 및 아글루콘 다이드제인을 포함한다. 글리시테인류는 글루코시드 글리시틴; 결합체 6"-OMal 글리시틴, 및 아글루콘 글리시테인을 포함한다.
식물성 단백질 분리물 및 농축물과 같은 시판되는 제품의 제조에서 관건이 되는 문제는 이들 물질을 제거하는 것이다. 예를 들어, 대두 박편을 수성 알칼리 매체로부터 추출한 대두 단백질 분리물 또는 농축물을 제조하기 위한 종래 방법에서, 다량의 이소플라본은 대두 단백질과 함께 추출물 내에 용해된다. 단백질은 추출물을 산성화시켜 추출물로부터 침전시키고, 분리물이나 농축물로부터 분리한다. 이때, 다량의 용해된 이소플라본을 보유하는 훼이가 남게 된다. 산 침전된 단백질 내 남아있는 잔여 이소플라본은 통상적으로 철저히 세척하여 제거한다. 통상적으로, 훼이 및 세척물은 버린다.
최근 대두 같은 식물성 단백질 내에 함유된 이소플라본의 의학적 가치가 인식되고 있다. 모든 이소플라본이 의학적 평가의 대상이지만, 아글루콘은 가장 관심이 가는 특정 이소플라본이다. 제니스테인 및 다이드제인은 심혈관 위험 인자를 현저히 감소시킬 수 있다[참조: "Plant and Mammalian Estrogen Effects on Plasma Lipids of Female Monkeys" Circulation, vol. 90, p. 1259 (1994년 10월)] 또한, 제니스테인 및 다이드제인은 여성에서 내인성 에스트로겐의 레벨 감소 및 변경에 의해 야기되는 증상, 예를 들어 폐경기 또는 월경전 증후군의 징후를 감소시키는 것으로 생각된다. 또한, 최근에 확인된 바에 따르면, 아글루콘 이소플라본은 인간 암세포, 예를 들어 유방암 세포 및 전립선암 세포의 성장을 억제할 수 있다[참조: Peterson 및 Barnes, Biochemical and Biophysical Research, Communications, Vol. 179, No. 1, pp. 661-667 (1991. 8. 30)의 "Genistein Inhibition of the Growth of Human Breast Cancer Cells, Independence from Estrogen Receptors and the Multi-Drug Resistance Cene"이란 표제의 논문: Peterson 및 Barnes, The Prostate, Vol. 22, pp. 335-345 (1993)의 "Genistein and Biochanin A Inhibit the Crowth of Human Prostate Cancer Cells but not Epidermal Growth Factor Receptor Tyrosine Autophosphorylation"이란 표제의 논문: Barnes 등, Mutagens and Carcinogens in the Diet, pp. 239-253 (1990)의 "Soybeans Inhibit Mammary Tumors in Models of Breast Cancer"이란 표제의 논문].
이미 기술한 바와 같이, 아글루콘 이소플라본은 다이드제인, 제니스테인 및글리시테인 등을 포함한다. 아글루콘은 하기 화학식 1로 표시된다:
[화학식 1]
상기 식에서,
R1, R2, R3및 R4는 H, OH 및 OCH3으로 구성되는 군으로부터 선택할 수 있다. 제니스테인은 R1이 OH이고, R2가 H이고, R3이 OH이고, R4가 OH인 상기 화학식 1의 화합물이고, 다이드제인은 R1이 OH이고, R2가 H이고, R3이 H이고, R4가 OH인 상기 화학식 1의 화합물이며, 글리시테인은 R1이 OH이고, R2가 OCH3이고, R3이 H이고, R4가 OH인 상기 화학식 1의 화합물이다.
따라서, 본 발명은 아글루콘, 이들 화합물을 함유하는 식물성 단백질 추출물과 식물성 단백질 재료의 농축 및 제니스테인과 다이드제인을 다량 함유하는 재료에 관한 것이다. 본 발명은 또한, 아글루콘이 풍부한 식물성 단백질 추출물, 아글루콘 이소플라본이 풍부한 식물성 단백질 재료, 제니스테인과 다이드제인을 다량 함유하는 재료의 제조 방법에 관한 것이다.
식물성 단백질 이소플라본 결합체를 아글루콘 이소플라본으로 전환시키는 방법은 공지되어 있으며, 본 출원의 양수인의 소유인 현재 계류중인 미국 출원 번호제08/477,102호(1995년 6월 7일에 출원)에 기술되어 있다.
글루코시드를 아글루콘 이소플라본으로 전환시키는 방법은 잘 알려져 있다. 이소플라본 글루코시드를 아글루콘 이소플라본으로 전환시켜 아글루콘 이소플라본이 풍부한 식물성 단백질 추출물과 아글루콘 이소플라본이 풍부한 식물성 단백질 분리물을 제조하는 방법은 본 발명의 양수인 소유의 계류중인 PCT 특허 출원 제PCT/US94/10697호에 기재되어 있다.
이소플라본 글루코시드를 아글루콘 이소플라본으로 전환시키는 당업계에 공지된 다른 방법은, 예를 들어 일본 특허 출원 제258,669호(오바타 등)에 기술되어 있다. 이 방법들은 이소플라본 결합체를 아글루콘 이소플라본으로 전환시키지 않거나, 아글루콘이 풍부한 식물성 단백질 분리물로부터 유도된 제니스테인 함량이 높은 재료 또는 다이드제인 함량이 높은 재료를 제공하지 않는다. 또한, 이들 방법은 글루코시드를 아글루콘으로 전환시키는데 단지 중간 정도의 전환율을 획득할 수 있을 뿐이고, 이러한 중간 정도의 전환율을 획득하기 위해서도 상당한 시간이 필요하다. 따라서, 이러한 방법은 대규모 상업적 조작에는 바람직하지 못하다.
본 발명의 제1 목적은 아글루콘 이소플라본이 풍부한 식물성 단백질 추출물과 이를 제조하는 방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 제2 목적은 아글루콘 이소플라본이 풍부한 식물성 단백질 재료와 이를 제조하는 방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 제3 목적은 제니스테인 함량이 높은 재료와 다이드제인 함량이 높은 재료와 이를 아글루콘 이소플라본이 풍부한 식물성 단백질 재료로부터 제조하는 방법을 제공하는 데 있다.
본 발명은 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물 및 이소플라본 결합체와 단백질을 함유하는 식물성 물질로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 생성하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 식물성 재료내의 단백질의 등전점 이상의 pH를 갖는 수성 추출제를 사용하여 이소플라본 결합체를 함유하는 식물성 재료를 추출하는 단계를 포함한다. 수성 추출물은 이소플라본 결합체를 이소플라본 글루코시드로 전환하기에 충분한 pH 와 온도에서 일정 시간 동안 처리한다. 효소는 이소플라본 글루코시드를 아글루콘 이소플라본으로 전환하기에 충분한 일정 시간 동안 일정 pH와 온도에서 수성 추출물내의 이소플라본 글루코시드와 접촉시킨다.
본 발명의 한 구체예에서, 추출은 약 6 내지 약 10의 pH에서 수행한다. 추출제와 식물성 단백질 재료의 중량비는 약 8.1 내지 16:1이 바람직하다.
본 발명의 다른 구체예에서, 약 6 내지 약 13.5의 pH 및 약 2℃ 내지 약 121℃의 온도에서 수성 추출물을 처리함으로써, 이소플라본 결합체를 이소플라본 글루코시드로 전환시킨다. 바람직하게는 약 11의 pH, 약 5℃ 내지 약 50℃의 온도에서, 또는 약 9의 pH, 약 45℃ 내지 약 75℃의 온도에서 전환시킨다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 이소플라본 글루코시드는 약 3 내지 약 9의 pH 및 약 5℃ 내지 약 75℃의 온도에서, 수성 추출물 내에서 효소와 이소플라본 글루코시드를 접촉시킴으로써, 아글루콘 이소플라본으로 전환시킨다. 바람직한 효소는 1,4-글루코시드 결합을 절단할 수 있는 사카리다제 효소이다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물의 pH를 대략 추출물내의 단백질의 등전점으로 조정하여 단백질과 아글루콘 이소플라본을 함유하는 단백질 재료를 침전시킨다.
이소플라본 결합체의 이소플라본 글루코시드로의 높은 전환율 및 이소플라본 글루코시드의 아글루콘 이소플라본으로의 높은 전환율을 실현할 수 있다. 한 구체예에서, 이소플라본 결합체의 대부분, 바람직하게는 거의 모두를 아글루콘 이소플라본으로 전환시킨다.
다른 측면에서, 본 발명은 아글루콘 이소플라본 풍부한 단백질 재료 및 이소플라본 결합체와 단백질을 함유하는 식물성 재료로부터 유도된 이소플라본 글루코시드 풍부한 단백질 재료로부터 이를 제조하는 방법에 관한 것이다. 상기 식물성 재료는 대략 식물성 재료내의 단백질의 등전점 이상의 pH를 갖는 수성 추출제를 이용하여 추출한다. 수성 추출물은 이소플라본 결합체를 이소플라본 글루코시드로 전환하기에 충분한 시간 동안 일정 pH와 온도에서 처리한다. 이소플라본 글루코시드를 함유하는 단백질 재료는 추출물로부터 분리되고, 단백질 재료내의 이소플라본 글루코시드는 이소플라본 글루코시드를 아글루콘 이소플라본으로 전환하기에 충분한 기간동안 일정 pH와 온도에서 효소와 접촉시킨다.
다른 측면에서, 본 발명은 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물과 이소플라본 결합체 및 단백질을 함유하는 식물성 재료로부터 유도된 이소플라본 글루코시드 풍부한 식물성 재료로부터 이를 제조하는 방법에 관한 것이다. 수성 슬러리는 식물성 재료로 형성하고, 상기 슬러리는 이소플라본 결합체를 이소플라본 글루코시드로 전환시키기에 충분한 시간 동안 일정 pH와 온도에서 처리한다. 이어서, 이소플라본 글루코시드 풍부한 식물성 재료는 대략 식물성 재료 내의 단백질의 등전점 이상의 pH를 갖는 수성 추출제를 이용하여 추출한다. 추출물내의 이소플라본 글루코시드는 이소플라본 글루코시드를 아글루콘 이소플라본으로 전환시키기에 충분한 시간 동안 일정 pH와 온도에서 효소와 접촉시킨다.
바람직한 구체예에서, 추출물내의 이소플라본 글루코시드는 추출물에 유효량의 보충 효소를 첨가함으로써 효소와 접촉시키는데, 보충 효소는 1,4-글루코시드 결합을 절단할 수 있는 사카리다제 효소가 바람직하다.
다른 구체예에서, 아글루콘 이소플라본 풍부한 단백질 재료는 대략 단백질의 등전점으로 추출물의 pH를 조정하여 단백질과 아글루콘 이소플라본을 함유하는 단백질 재료를 침전시켜 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물로부터 형성한다.
다른 관점에서, 본 발명은 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료와, 이소플라본 결합체 및 단백질을 함유하는 식물성 재료로부터 유도된 이소플라본 글루코시드 풍부한 단백질 재료로부터 이를 제조하는 방법에 관한 것이다. 식물성 재료는 대략 단백질의 등전점 이상의 pH를 갖는 수성 추출제를 이용하여 추출한다. 이소플라본 결합체를 함유하는 단백질 재료는 대략 단백질의 등전점으로 추출물의 pH를 조정함으로써 추출물로부터 분리한다. 수성 슬러리는 단백질 재료로 형성되고, 상기 수성 슬러리는 이소플라본 결합체를 이소플라본 글루코시드로 전환시키기에 충분한 시간 동안 일정 pH와 온도에서 처리한다. 슬러리 내의 이소플라본 글루코시드는 이소플라본 글루코시드를 아글루콘 이소플라본으로 전환시키기에 충분한 시간 동안 일정 pH와 온도에서 효소와 접촉시킨다.
바람직한 구체예에서, 슬러리 내의 이소플라본 글루코시드는 슬러리에 유효량의 보충 효소를 첨가함으로써 효소와 접촉시키는데, 보충 효소는 1,4-글루코시드 결합을 절단할 수 있는 사카리다제 효소가 바람직하다.
또 다른 관점에서, 본 발명은 제니스테인 함량이 높은 재료와, 아글루콘 이소플라본 풍부한 식물성 단백질 재료로부터 이를 회수하는 방법에 관한 것이다. 아글루콘 이소플라본 풍부한 식물성 단백질 재료가 제공되며, 이를 수성 알코올 추출제로 추출하여 아글루콘 이소플라본 풍부한 추출물을 제조한다. 상기 추출물은 이 추출물로부터 제니스테인 함량이 높은 재료를 분리시키기에 충분한 시간 동안 흡착제와 접촉시킨다.
최종적인 관점에서, 본 발명은 다이드제인 함량이 높은 재료와, 아글루콘 이소플라본 풍부한 식물성 단백질 재료로부터 이를 제조하는 방법에 관한 것이다. 아글루콘 이소플라본 풍부한 식물성 단백질 재료가 제공되며, 이를 수성 알코올 추출제로 추출하여 아글루콘 이소플라본 풍부한 추출물을 제조한다. 상기 추출물은 이 추출물로부터 다이드제인 함량이 높은 재료를 분리시키기에 충분한 시간동안 흡착제와 접촉시킨다.
바람직한 구체예의 방법에서 출발 물질은 이소플라본 결합체 및 식물성 단백질을 함유하는 임의의 식물성 단백질 재료 또는 식물 재료이다. 바람직한 구체예에서, 상기 출발 물질은 대두 재료인데, 그 이유는 상기 방법이 대두 재료로부터 아글루콘 이소플라본 풍부한 추출물 및 단백질 재료를 제조하는데 특히 적합하기 때문이다. 본 명세서에서 사용한 "대두 재료(soybean material)"라는 용어는 대두 또는 임의 형태의 대두 유도체를 의미한다. 가장 바람직한 출발 물질은 당업계의 통상적인 방법에 따라 용매 추출에 의해 오일이 제거된 대두 박편이다. 본 발명의 방법은 통상적으로 콩 또는 대두 재료뿐 아니라 식물성 단백질 재료에까지 넓게 적용된다.
이소플라본 결합체를 함유하는 식물성 재료의 형태에 따라, 일부 경우에서는 식물 재료를 미분말 형태로 만드는 과정이 필요할 수도 있다. 상세하게 후술되는 바와 같이, 이 과정은 식물성 재료 내에 함유된 이소플라본 화합물이 각종 시약에 접근할 수 있도록 해준다. 상기 재료는 가루로 빻거나, 분쇄하거나 당업계에 공지된 통상적인 방법으로 처리한다. 어떤 식물의 작은 잎 부분과 같이 식물성 재료가, 이 식물 재료 내의 이소플라본 화합물이 외부 시약 또는 반응물에 용이하게 접근 가능한 상태로 존재하는 경우, 이러한 식물 재료는 상기한 바와 같은 처리를 수행할 필요가 없을 수 있다.
1차 단계 또는 조작에서, 이소플라본 결합체를 포함하는 식물성 단백질 및 이소플라본 화합물은 식물성 단백질 재료로부터 추출한다 상기 박편은 대략 상기 단백질 재료의 등전점 이상의 pH, 바람직하게는 약 6.0 내지 약 10.0의 pH, 가장 바람직하게는 약 6.7 내지 약 9.7의 pH를 갖는 수성 추출제를 이용하여 추출한다. 전형적으로 수산화나트륨, 수산화칼륨 및 수산화칼슘과 같은 알칼리성 시약을 필요에 따라 사용하여 수성 추출제의 pH를 상승시킬 수 있다. 바람직한 이소플라본 화합물 및 식물성 단백질은 상기 수성 추출물 내에 용해된다.
상기 수성 추출물 내에서 이들 화합물의 회수를 극대화하기 위해서는, 대두 박편 또는 기타 식물성 단백질 재료 대 추출제의 중량비를 특정 수준으로 조절하여 상기 식물성 재료 내의 이소플라본이 가능한 다량 용해되도록 하는 것이 바람직하다 단백질 및 이소플라본의 추출은, 식물성 단백질 재료의 역류 추출, 바람직하게는 수성 추출제 대 식물성 단백질 재료의 중량비를 약 8:1 내지 약 16:1로 하여 수행하는 추출을 비롯한 통상적인 추출 방법으로 수행할 수 있다. 상기 식물성 단백질 재료의 추출시, 추출제는 단백질과 이소플라본으로 이루어진 수성 추출물을 제공한다.
대안으로, 2 단계 추출법을 사용할 수도 있는데, 이때 초기 추출에서 추출제와 식물성 단백질 재료의 중량비는 약 10:1이 바람직하며, 두 번째 추출에서 추출제와 식물성 단백질 재료의 중량비는 약 6:1 이하가 바람직한데, 이렇게 하므로써 양 추출단계에서 추출제 대 식물성 단백질 재료의 연합 중량비는 약 16:1의 추출제 대 식물성 단백질 재료의 총 중량비를 초과하지 않게 된다. 또한, 추출제 대 식물성 단백질 재료의 중량비를 바람직하게는 16:1 또는 그 미만으로 한 기타 추출 적차를 사용할 수 있다.
1차 이소플라본 전환 단계 또는 조작에서, 수성 추출물 내의 이소플라본 결합체는 이소플라본 글루코시드로 전환되어 이소플라본 글루코시드가 풍부한 추출물을 생성한다. 상기 전환은 수성 추출물의 pH 및 온도에 좌우되는 것으로 확인되었다.
이소플라본 결합체의 이소플라본 글루코시드로의 전환을 위한 pH 범위는 약 6 내지 약 13.5 이다. 필요에 따라, 수성 추출물의 pH는 목적하는 pH로 조정해야 한다. 예를 들어, pH를 높이려면, 적합한 염기, 가성제 또는 염기성 시약을 이용하여 수성 추출물의 pH를 조정하고, pH를 낮추려면, 적합한 산 또는 산성 시약을 이용하여 상기 수성 추출물의 pH를 조정한다. 이소플라본 결합체의 이소플라본 글루코시드로의 전환은 염기에 의해 반응이 촉매되는 것으로 확인되었으며, 따라서 신속한 전환을 위해서는 높은 pH를 이용하는 것이 가장 바람직하다. 이소플라본 결합체의 이소플라본 글루코시드로의 전환을 위한 가장 바람직한 pH 범위는 약 9 내지 약 11 이다.
이소플라본 결합체를 이소플라본 글루코시드로 전환시키기 위한 온도 범위는 약 2℃ 내지 약 121℃ 이다. 용이하게 전환되는 온도 범위는 수성 추출물의 pH에 따라 신속하게 발생한다. 본 발명자들은 pH가 상대적으로 높은 경우에는 더 낮은 온도에서 용이하게 전환됨을 확인하였다. 예를 들어, pH가 약 11이면 약 5℃ 내지 약 50℃의 온도에서 신속하고, 효율적으로 전환되었다. pH가 약 9이면, 약 45℃ 내지 약 75℃의 온도 범위에서 효율적으로 전환되었다. 수성 추출물의 pH가 상대적으로 낮은 경우에는, 상기 전환은 더 높은 온도에서 발생한다. 예를 들어, pH가 약 6이면, 약 80℃ 내지 약 121℃의 온도 범위에서 전환되었다. 바람직한 구체예에서, 전환은 약 35℃의 온도 및 약 11의 pH에서 발생한다. 다른 바람직한 구체예에서, 전환은 약 73℃의 온도 및 약 9의 pH에서 일어난다.
제 1단계에서 이소플라본 결합체를 이소플라본 글루코시드로 전환시키는데필요한 시간은 주로 사용한 온도와 pH에 좌우된다. 상기 전환 시간은 전형적으로 약 15분 내지 수 시간 이상이다 더 높은 온도와 pH에서 더 신속하게 전환된다. p가 약 9이면, 37℃에서 약 4 시간 내지 약 6 시간 내에 전환이 거의 완료된다. 가장 바람직한 구체예에서, 상기 이소플라본 결합체는 약 11의 pH 및 약 35℃의 온도에서 약 30분 내지 약 1 시간, 바람직하게는 약 45 분내에 이소플라본 글루코시드로 전환된다.
제1 전환 단계는 수성 시스템에서 수행하는 것이 바람직하다. 기타 수혼화성 성분, 예컨데 저분자량 알코올 및 기타 수용성 성분도 상기 시스템 내에 존재할 수 있다.
1차 이소플라본 전환 단계는 적어도 대부분, 바람직하게는 거의 모든 이소플라본 결합체를 이소플라본 글루코시드로 전환시키는데 상당히 효과적이다. 전형적으로, 이소플라본 결합체의 약 80% 내지 약 100%가 이소플라본 글루코시드로 전환된다. 이미 기술한 바람직한 반응 변수를 이용하므로써 95% 이상의 전환율을 획득할 수 있다. 이들 높은 전환율은 대규모의 상업적 조작에 특히 유리하다.
제2 이소플라본 전환 단계 또는 조작에서, 제1 전환 단계에서 생성된 이소플라본 글루코시드 뿐만 아니라 수성 추출물 내에 이미 잔류하고 있던 이소플라본 글루코시드는 효소 반응에 의해 아글루콘 이소플라본으로 전환된다. 상기 전환은 이소플라본 글루코시드가 풍부한 추출물로부터 아글루콘 이소플라본 풍부한 추출물을 생성한다.
제2 전환 단계는 추출물 내에 존재하는 효소의 농도 및 이들의 특성에 좌우되는 것으로 확인되었다. 상기 전환을 수행하기 위해 필요한 효소는 이소플라본 부분과 이소플라본 글루코시드의 글루코스 분자 사이의 글루코시드 결합을 절단할 수 있는 효소이다. 바람직한 구체예에서, 상기 효소는 1,4-글루코시드 결합을 절단할 수 있는 사카리다제, 에스터라제 또는 글루코-아밀라제 효소이다.
이소플라본 글루코시드를 아글루콘 이소플라본으로 전환시키는데 필요한 효소의 농도는 상기 수성 추출물 내에 존재하는 효소의 유형, 효소 농도의 분포, 효소의 활성, 및 전환 과정에서 상기 추출물의 pH 및 온도를 비롯한 여러 가지 요인에 좌우된다. 효소는 식물성 단백질 재료로부터 추출된 추출물 내에 원래 존재하거나, 추출물 내에서 미생물 성장에 의해 존재할 수 있다. 본 명세서에서, 원래 존재하는 효소는 "잔류 효소"라 칭하고, 상기 추출물에 첨가된 효소는 "보충 효소"라 칭한다.
적어도 대부분, 바람직하게는 거의 모든 이소플라본 글루코시드를 아글루콘 이소플라본으로 전환시키기 위해서는 상기 추출물 내에 충분한 효소가 존재하여야 한다. 일반적으로, 추출물 내의 잔류 효소가 상기 전환을 수행하기에 불충분한 경우, 보충 효소를 추출물에 첨가하여야 한다. 바람직한 구체예에서, 보충 효소는 충분한 잔류 효소가 추출물 내에 존재하는가 여부와 무관하게 추출물에 첨가하여야 하는데, 그 이유는 보충 효소를 첨가하면 글루코시드에서 아글루콘으로의 거의 완전한 전환을 위해 필요한 시간을 현저히 감소시키기 때문이다. 보충 효소가 첨가되는 경우, 상기 보충 효소는 존재하는 총 효소 농도가 건조 중량을 기준으로 식물성 단백질 재료의 약 0.1 중량% 내지 약 10 중량%가 되도록 첨가하여야 한다.
보충 효소는 선택된 PH 및 온도 조건하에서의 최적 활성 및 비용에 따른 효율을 기초로 선택한다. 보충 효소는 이소플라본 글루코시드의 이소플라본 부분과 글루코스 분자사이의 결합을 절단할 수 있는 효소, 예를 들어 1,4-글루코시드 결합을 절단할 수 있는 사카리다제 및 글루코-아밀라아제 효소이다. 바람직한 보충 효소는 시판되는 알파- 및 베타-글루코시다제 효소, 알파-갈락토시다제 효소, 베타-갈락토시다제 효소, 글루코-아밀라제 효소 및 펙티나제 효소이다. 특히 바람직한 효소의 예로는 바이오펙티나제 100L(약 3 내지 약 6의 pH 에서 사용하는 것이 바람직함), 바이오펙티나제 300L(최적 pH는 약 3 내지 약 6임), 바이오펙티나제 OK 70L(최적 pH는 약 3 내지 약 6임), 바이오락타제 30,000(최적 pH는 약 3 내지 약 6 임), 뉴트랄 락타아제(최적 pH는 약 6 내지 약 8임)등이 있으며, 이들은 모두 미국 플로리다주 34243 사라소타 포스트 오피스 박스 3917 57번가 1833에 소재하는 퀘스트 인터내쇼날에서 입수가능하다. 또한, 특히 바람직한 효소는 미국 버지니아주 22974 트로이 포스트 오피스 박스 1000에 소재 하는 아마노 인터내쇼날 엔자임 컴퍼니 인코오포레이티드에서 시판되는 락타제 F(최적 pH는 약 4 내지 약 6 임) 및 락타제 50,000(최적 pH는 약 4 내지 약 6 임)이다. 기타 특히 바람직한 보충 효소로는 미국 뉴욕주 10121 뉴욕 스윗 2439 펜 플라자 2에 소재 하는 엔자임 디벨로프먼트 코오포레이숀에서 시판되는 G-자임 C990(최적 pH는 약 4 내지 약 6임) 및 엔제코 펑갈 락타제(최적 PH는 약 4 내지 약 6임), 미국 코네티컷주 06813 댄버리 터너 로드 33에 소재하는 노보 노르디스크 바이오인더스트리얼즈, 인코오포레이티드에서 시판되는 락토자임 3000L(약 6내지 8의 pH에서 사용되는 것이 좋음) 및 알파-갈 600L(약 4 내지 약 6.5의 pH에서 이용되는 것이 바람직함): 미국 펜실베니아주 19406 킹 오브 프러시아에 소재하는 지스트 브로케이즈 푸드 인그레디언츠, 인코오포레이티드에서 시판되는 막실락트 L2000(약 4 내지 약 6의 pH에서 사용되는 것이 바람직함): 및 미국 뉴욕주 10017 뉴욕 이스트 42번가 205에 소재하는 피쩌 푸드 사이언스 그룹에서 시판되는 뉴트랄 락타제(약 6 내지 약 8의 pH에서 사용되는 것이 바람직함)를 들 수 있다.
이소플라본 글루코시드를 아글루콘 이소플라본으로 전환시키는 pH 범위는 약 3 내지 약 9 이다 사용되는 pH는 주로 사용되는 효소의 종류에 좌우되기 때문에, 효소를 적절히 선택하여야만 한다. 추출물의 pH가 전환 과정에서 낮아질 것이라고 생각되지만, 잔류 효소는 약 7 내지 약 9의 pH 범위 내에서 활성을 나타낸다. 일부 특정 효소에서 확인된 바와 같이, 보충 효소는 상기 효소의 제조자가 지정한 최적 pH 범위 내에서 활성을 나타낸다. 전형적으로 보충 효소는 약 6 내지 약 8의 중성 pH 범위, 또는 약 3 내지 약 6의 산성 pH 범위 내에서 활성을 나타낸다.
pH는 2차 전환을 수행하는데 적합한 수치로 조정할 수 있다. 대부분의 경우, 1종 이상의 아세트산, 황산. 인산, 염산 또는 임의의 기타 적절한 시약을 첨가하여 제1 이소플라본 전환 단계의 비교적 높은 pH 또는 염기 PH를 감소시킨다.
제2 이소플라본 전환 단계의 온도 범위는 약 5℃ 내지 약 75℃이다. 상기 온도는 효소의 활성에 상당한 영향을 미치기 때문에, 전환율도 상기 온도에 영향을 받는다. 보충 효소는 약70℃ 이상에서 활성을 나타낼 수 있는데, 예를 들어 알파-갈 600L은 75℃에서 활성을 나타내지만, 효소의 불활성화를 피하기 위해 더 낮은온도에서 전환을 수행하는 것이 바람직하다. 바람직한 구체예에서, 상기 전환은 약 35℃ 내지 약 45℃에서 수행된다.
제2 이소플라본 전환 단계에 필요한 시간은 효소-관련 인자, 특히 농도와, 시스템의 온도 및 pH에 좌우된다. 대부분의 경우, 24 시간 내에 거의 완전히 전환시킬 수 있으나, 보충 효소를 첨가하여 반응율을 급격히 증가시키는 것이 바람직하다. 선택된 보충 효소, 효소 농도, pH 및 온도는 약 2 시간 내에 거의 완전한 전환을 유발하는 것이 바람직하며, 1 시간 내에 완전히 전환시키는 것이 가장 바람직하다.
상기 방법을 이용하여 상기 추출물 내에 존재하는 적어도 대부분, 바람직하게는 거의 모든 이소플라본 글루코시드를 아글루콘 형태로 전환시키는 고전환율을 얻을 수 있다. 본 명세서에서 사용한 용어 "대부분"은 이소플라본 글루코시드에서 아글루콘 이소플라본으로의 전환율이 약 50% 이상임을 의미한다. 본 명세서에서 사용한 용어 "거의 모든"은 이소플라본 글루코시드에서 아글루콘 이소플라본으로의 전환율이 약 80% 이상, 가장 바람직하게는 약 90% 이상임을 의미한다. 신뢰할 수 있는 베이스에 대한 이와 같이 높은 전환율은 현저하며, 상업적 적용 분야에 바람직하다.
아글루콘 이소플라본 풍부한 단백질 재료는 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물로부터 회수할 수 있다. 2차 이소플라본 전환 단계의 완료시, pH는 필요에 따라 산을 첨가하여 대략 식물성 단백질의 등전점으로 조정하는데, 일반적으로 콩단백질에 대해서는 약 4.0 내지 약 5.0, 바람직하게는 약 4.4 내지 약 4.6의 pH로조정한다. 단백질은 pH 조정된 추출물로부터 응고물(curd) 형태로 침전된다. 상부분의 아글루콘 이소플라본은 상기 응고물 내에 포집된다. 침전후, 응고물 또는 침전된 단백질은 추출물로부터 분리하여 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료를 형성한다. 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료는 원심분리 또는 여과에 의해 상기 추출물로부터 분리하는 것이 바람직하다.
가장 바람직한 구체예에서, 분리된 단백질 재료의 세척은 가급적 피하거나, 최소화하여 단백질 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 제거되는 것은 실질적으로 감소시킨다. 따라서, 물을 이용하는 단백질 재료의 세척은 전혀 수행하지 않거나, 물 대 단백질 재료의 중량비를 약 2:1 내지 약 6:1로 한 물을 이용한 단일 세척으로 제한한다. 더 광범위한 세척을 수행하여 낮은 회수율의 이소플라본을 얻을 수 있지만, 침전된 응고물을 세척하지 않으므로써 목적하는 레벨의 이소플라본이 풍부한 단백질 재료를 제공한다.
분리된 단백질 재료는 원심분리 또는 농축, 또는 원심분리와 농축을 병행하므로써 탈수시키고, 통상적인 방법으로 건조할 수 있다. 건조된 단백질 재료를 형성하기 위해 원심분리 및 분무 건조와 같은 통상적인 탈수 및 건조 기법을 이용하는 것이 바람직하지만, 바람직한 구체예를 특정 수단에 제한하려는 것은 아니다.
이미 기술한 특정 구체예의 방법은 추출물을 얻은 직후에 1차 및 2차 이소플라본 전환 단계를 이용한다. 또한, 본 발명은 이소플라본 결합체와 단백질을 함유하는 식물성 재료를 대략 단백질의 등전점 이상의 pH를 갖는 수성 추출제로 추출하는 단계; 상기 추출물에 대해 제1 이소플라본 전환 단계를 수행하는 단계; 이소플라본 글루코시드를 함유하는 단백질 재료를 상기 추출물로부터 분리하는 단계; 및 상기 단백질 재료에 대해 제2 이소플라본 전환 단계를 수행하는 단계로 이루어지는 방법을 포함한다. 상기 공정의 단계들은 이미 기술한 바와 같이 일반적인 방식으로 수행할 수 있다.
본 발명은 이소플라본 결합체와 단백질을 함유하는 식물성 재료로 이루어진 수성 슬러리를 형성하는 단계; 상기 수성 슬러리에 대해 제1 이소플라본 전환 단계를 수행하는 단계; 상기 식물성 재료를 대략 단백질의 등전점 이상의 pH를 갖는 수성 추출제로 추출하는 단계; 및 상기 추출물내의 이소플라본 글루코시드에 대해 제2 이소플라본 전환 단계를 수행하는 단계로 이루어지는 공정을 추가로 포함한다. 식물성 재료로 이루어진 수성 슬러리는 20 중량% 이하의 식물성 재료를 함유하는 것이 바람직하다. 상기 방법의 단계는 전술한 바와 같이 일반적인 방식으로 수행할 수 있다. 또한, 아글루콘 이소플라본을 함유하는 단백질 재료는 제2 이소플라본 전환 단계 후에 이미 기술한 방식으로 상기 추출물로부터 분리할 수 있다.
또한, 본 발명은 이소플라본 결합체와 단백질을 함유하는 식물성 단백질 재료를 대략 상기 단백질의 등전점 이상의 pH를 갖는 수성 추출제로 추출하는 단계; 이소플라본 결합체를 함유하는 단백질 재료를 추출물로부터 분리하는 단계; 단백질 재료로 이루어진 수성 슬러리를 형성하는 단계; 및 상기 단백질 재료로 이루어진 수성 슬러리에 대해 제1 및 제2 이소플라본 전환 단계를 수행하는 단계로 이루어진 공정을 포함한다. 상기 단백질 재료로 이루어진 수성 슬러리는 30 중량% 이하의 단백질 재료를 포함하는 것이 바람직하다. 상기 방법의 단계는 전술한 바와 동일한일반적인 방식으로 수행할 수 있다.
제1 및 제2 이소플라본 전환 단계는 이소플라본 결합체와 단백질을 함유하는 식물성 재료로 이루어진 수성 슬러리, 이러한 식물성 재료로 이루어진 추출물 및 이러한 추출물로부터 분리된 단백질 재료에 대해 수행할 수 있다. 본 발명은 전술한 단계 중 임의 단계의 조합으로 아글루콘 이소플라본 풍부한 추출물 또는 단백질 재료를 형성하는 것을 포함한다.
제니스테인 함량이 높은 재료 및 다이드제인 함량이 높은 재료는 회수된 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료로부터 제조할 수 있다. 본 명세서에서 사용한 용어 "제니스테인 함량이 높은 재료"는 40% 이상, 가장 바람직하게는 90% 이상의 제니스테인을 잔여 식물성 재료와 함께 함유하는 식물성 재료를 의미한다. 상기 잔여 식물성 재료는 제니스테인 함량이 높은 재료가 대두 재료로부터 회수되는 경우, 잔여 대두 재료이다. 다이드제인 함량이 높은 재료는 40% 이상의 다이드제인을 잔여 식물성 재료와 함께 함유하는데, 상기 다이드제인 함량이 높은 재료가 대두 재료로부터 회수되는 경우, 잔여 식물성 재료는 대두 재료이다.
아글루콘 이소플라본 풍부한 단백질 재료는 초기에 세척 및 여과하여 바람직하지 않은 염 및 당을 제거할 수 있다. 아글루콘 이소플라본 풍부한 단백질 재료는 물과 함께 혼합되는데, 이때 물은 단백질과 6:1의 비로 존재한다. 물은 냉각하여 아글루콘 이소플라본의 수중 용해도를 최소화하는 것이 바람직하며, 바람직한 수온은 약 5℃ 내지 약 30℃이다. 상기 단백질 재료는 약 15 내지 약 30분 동안 수중에서 혼합되고, 이어서 통상적인 임의의 여과 수단, 바람직하게는 통상적인 여과지를통한 혼합물의 여과를 이용하여 물로부터 여과한다. 상기 세척 및 여과 단계를 필요에 따라 생략하여 물 세척시 아글루콘 이소플라본의 가능한 손실을 최소화할 수 있다.
아글루콘 이소플라본 풍부한 단백질 재료는 수성 알코올 추출제로 추출하여 단백질 재료로부터 아글루콘 이소플라본을 제거하고, 아글루콘 이소플라본 추출물을 생성할 수 있다. 메탄올, 특히 에탄올과 같은 저분자량 알코올은 상기 추출제의 알코올 성분으로 바람직하다. 아글루콘 이소플라본은 상기 추출제의 거의 모든 알코올 농도에서 가용성인 것으로 확인되었다. 아글루콘 이소플라본은 상기 추출제가 약 30 내지 약 90% 알코올, 가장 바람직하게는 약 60 내지 약 80% 알코올을 함유하는 경우에 특히 가용성이다. 수성 알코올은 바람직한 용매이지만, 물, 아세토니트릴, 메틸렌 클로라이드, 아세톤 및 에틸 아세테이트 등의 기타 용매를 사용하여 상기 단백질 재료로부터 아글루콘 이소플라본의 추출을 수행할 수도 있다.
최소량의 추출제를 이용하여 추출한다. 추출제 대 아글루콘 이소플라본 풍부한 단백질 재료의 중량비는 11:1을 초과하지 않는 것이 바람직하다. 역류 추출 또는 이중 추출을 비롯한 임의의 통상적인 추출 기법을 이용하여 추출할 수 있는데, 이 경우 혼합된 추출물 대 단백질 재료의 중량비는 11:1을 초과하지 않는다.
바람직한 구체예에서, 단백질 재료는 80% 에탄올로 초기에 추출되는데, 이때 상기 추출제 대 단백질 재료의 중량비는 약 6:1이다. 추출제는 원심분리 또는 필터 압착과 같은 통상적인 분리 방법으로 상기 단백질 재료로부터 분리하며, 추출물은 수거한다. 상기 단백질 재료는 80% 에탄올로 재추출하는데, 이때 추출제와 단백질재료의 중량비는 약 4:1이다. 추출제를 다시 수거하고, 초기 수거된 추출물에 첨가한다. 이어서, 단백질 재료는 다량의 물로 세척하는데, 이때 물 대 단백질 재료의 중량비는 약 4:1이고, 물은 수거된 추출물에 첨가한다.
추출은 임의의 pH에서 수행할 수 있지만, 추출제의 pH는 약 7 내지 약 10이 바람직하다. 단백질 겔 형성은 바람직한 pH 범위에서는 일어나지 않으며, 단백질 재료가 아글루콘 이소플라본 추출물과 함께 회수되는 경우, 단백질 재료내의 바람직하지 않은 아미노산 부산물의 형성은 바람직한 pH 범위 내에서는 일어나지 않는다.
추출은 추출제의 비등점 이하의 임의의 온도에서 수행할 수 있으며, 약 25℃ 내지 약 70℃에서 수행하는 것이 바람직하다. 단백질 재료로부터 아글루콘 이소플라본을 최대로 제거하기 위해서는, 추출은 약 50℃ 내지 약 70℃, 가장 바람직하게는 약 60℃에서 수행하는 것이 바람직하다.
추출후, 제니스테인 함량이 높은 재료 및 다이드제인 함량이 높은 재료는, 제니스테인 함량이 높은 재료와 다이드제인의 함량이 높은 재료를 추출물로부터 분리하기 충분한 시간 동안 추출물과 흡착제를 접촉시켜 아글루콘 이소플라본 추출물로부터 분리할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 제니스테인 함량이 높은 재료와 다이드제인 함량이 높은 재료는 역상 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 이용하여 추출물로부터 분리한다. 제니스테인과 다이드제인은 화합물 특이적인 방식으로 제니스테인, 다이드제인, 기타 이소플라본 및 불순물이 분리 가능하게 결합되어 있는 흡착제 입자를 통해 상기 추출물을 용출시켜 화합물 각각을 분리시키므로써 추출물내의 기타 이소플라본 및 불순물로부터 분리한다.
아글루콘 이소플라본 추출물은 초기 여과되어 HPLC 칼럼을 막을 수 있는 불용성 물질을 제거한다. 추출물은 임의의 통상적인 여과법으로 여과할 수 있다. 가장 바람직하게는 추출물은, 추출물 내에 존재할 수 있는 잔류 단백질을 제거하는 통상적인 한외여과법으로 여과한다.
HPLC 칼럼은 화합물 특이적인 방식으로 제니스테인, 다이드제인, 기타 이소플라본 및 불순물에 분리 가능하게 결합할 미립자 흡착제 물질로 시판되는 종래의 HPLC 칼럼을 충전하므로써 제조한다. 상기 흡착제는 임의의 역상 HPLC 충전 물질일 수도 있으나, 바람직한 충전재는 적재 용량, 분리 효율성 및 비용의 기준을 고려하여 선택할 수 있다. 바람직한 충전재의 하나는 스웨덴에 소재하는 에카 노벨, 노벨 인더스트리즈에서 시판되는 크로마실 C18 16㎛ 100Å 비드이다.
여과된 추출물은 충전된 HPLC 칼럼의 모든 결합 위치가 이소플라본으로 와전히 포화될 때까지 컬럼에 통과시키며, 포화는 컬럼 유래의 용출제 중에서 이소플라본의 외관으로 검출한다. 이어서, HPLC 칼럼은 극성 용출제로 용출하여 분리한다. 바람직한 구체예에서, 상기 용출제는 수성 알코올이다. 수성 알코올 용출제의 알코올 함량은 약 30% 내지 약 90% 알코올, 바람직하게는 약 50%이며, 이는 이소플라본의 우수한 분리능 및 용해도를 제공한다. 상기 알코올은 메탄을 또는 에탄올이 바람직하며, 제니스테인 함량이 높은 재료 및 다이드제인 함량이 높은 재료를 식품 또는 약학적 용도로 사용하는 경우에는 에탄올이 바람직하다.
상기 제니스테인 함량이 높은 재료 및 다이드제인 함량이 높은 재료는 칼럼용출물로부터 수거한다. 먼저 칼럼으로부터 다이드제인을 함유하는 분획을 용출시킨 다음, 글리시테인 분획을 용출시키고, 더 극성인 제니스테인 분획을 용출시킨다. 다이드제인 및 제니스테인 분획은 이들이 칼럼으로부터 용출될 때 수거한다. 필요에 따라, 제니스테인 분획도 수거할 수 있다.
상기 분획 내의 알코올은 증발시켜 제거하고, 이어서 제니스테인 함량이 높은 재료와 다이드제인 함량이 높은 재료, 및 글리시테인 함량이 놓은 재료는 원심분리 또는 여과와 같은 통상적인 분리 방법에 의해 회수할 수 있다. 회수된 제니스테인 함량이 높은 재료는 40% 이상, 바람직하게는 90% 이상의 제니스테인을 잔류 식물성 재료와 함께 함유하는데, 제니스테인이 대두 훼이로부터 회수되는 경우, 상기 잔류 식물성 재료는 잔류 대두 재료이다. 회수된 다이드제인 함량인 높은 재료는 40% 이상의 다이드제인을 잔류 식물성 재료와 함께 함유한다.
실험
본 발명은 식물성 재료로 대두 재료를 이용하는 하기 실시예에 의해 더 구체적으로 예시된다. 하기 실시예는 예시적인 것이며, 어떤 형태로든 본 발명의 범위를 제한하려는 것으로 이해해서는 안된다.
이미 지적한 바와 같이, 대두 재료는 상응하는 글루코시드, 결합체, 및 아글루콘 구성원을 보유하는 이소플라본의 제니스테인, 다이드제인 및 글리시테인 "류"를 포함하며, 여기서 제니스테인류는 결합체 6"-OMal 제니스틴 및 6"-OAc 제니스틴, 글루코시드 제니스틴 및 아글루콘 제니스테인을 포함하며, 다이드제인류는 결합체 6''-OMal 다이드진 및 6"-OAc 다이드진, 글루코시드 다이드진 및 아글루콘 다이드제인을 함유하며; 글리시테인류는 결합체 6"-OMal 글리시틴, 글루코시드 글리시틴 및 아글루콘 글리시테인을 포함한다. 하기 표에서, 이소플라본의 상대 농도는 이소플라본류의 백분율로 측정된다. 예를 들어, 제니스테인류에서 %제니스틴 + %6"-OMal 제니스틴 + %6"-OAc 제니스틴 + %제니스테인 = 100%이다. 결합체에서 글루코시드로의 전환율과 글루코시드에서 아글루콘으로의 전환율은 이소플라본류 내의 각 종류의 화합물의 백분율을 비교하므로써 결정할 수 있다.
실시예 1
첫 번째 실험에서, 대두 추출물 내에서 이소플라본 결합체의 이소플라본 글루코시드로의 전환을 조사한다. 전환율은, 동일한 이소플라본류의 글루코시드의 상응하는 정량적인 백분율 증가와 관련된 이소플라본류의 말로네이트와 아세테이트 에스테르의 정량적인 백분율 감소에 의해 결정한다.
대두 추출물은 미분 탈지 대두 박편 400 g과 물 4000 g으로 이루어진 슬러리를 형성하므로써 제조한다. 슬러리의 pH는 수산화나트륨을 이용하여 9.7로 조정하며, 이어서 교반하면서 15분 동안 38℃로 가열한다. 이어서, 상기 슬러리를 원심분리하고, 추출물은 상청액으로 수거한다.
이소플라본 결합체에서 이소플라본 글루코시드로의 전환은 상이한 pH 및 온도 조건하에서 조사한다. 상기 추출물 샘플 600 g의 pH는 염산 및 수산화나트륨을 이용하여 6, 7, 9 및 11로 조정한다. 각 pH에서, 각각의 600 g 샘플은 300 g 샘플로 나누고, 이들 샘플은 45℃ 및 72.5℃에서 24 시간 동안 항온처리하였다. 0, 2, 4, 6 및 24 시간에서 샘플에 대해 주기 분석을 수행하여 샘플의 이소플라본 함량을결정하였다. 하기 표 1은 실험 과정에 전반에 대한 이소플라본의 변화 및 분포를 나타낸다.
6"-OMal 및 6"-OAc 이소플라본 결합체 화합물의 상대 농도의 감소 및 글루코시드 제니스테인, 다이드진 및 글리시틴의 상응하는 농도 증가에서 확인할 수 있는 바와 같이, 제1 전환 단계는 더 높은 pH, 즉 더 염기성 pH 조건 및 더 높은 온도 조건에서 가장 신속하게 완료된다. 이소플라본 결합체에서 이소플라본 글루코시드로의 완전한 전환은 45℃ 및 72.5℃, pH 9 및 pH 11 샘플에서 발생하였으나, 다이드진 및 글리시틴은 45℃ 및 72.5℃, pH 9 및 pH 11 샘플에서 분해되었으며, 다이드진 및 글리시틴은 pH 11, 72.5℃에서 분해되었다.
또한, 상기 전환은 72.5℃에서 pH 6 및 7 샘플에서 거의 완료되었다. 상기 추출물내의 잔류 효소에 의한 이소플라본 글루코시드에서 아글루콘 이소플라본으로의 실질적인 전환은 45℃에서 pH 6 및 7 샘플에서 발생하지만, 이소플라본 결합체의 이소플라본 글루코시드로의 전화은 이들 조건하에서 특히 효과적인 것은 아니다.
실시예 2
두 번째 실험에서, 이소플라본 글루코시드의 아글루콘 이소플라본으로의 전환을 조사한다. 전환율은 동일한 이소플라본류의 아글루콘 백분율의 상응하는 정량적인 증가와 관련이 있는 이소플라본류의 글루코시드 백분율의 정량적인 감소에 의해 결정한다.
이소플라본 글루코시드 풍부한 추출물은 약 35℃의 온도에서 약 1 시간 동안 대두 추출물의 pH를 약 11로 조정하므로써 대두 박편으로부터 제조한다. 첫 번째 샘플에서, 이소플라본 글루코시드의 아글루콘 이소플라본으로의 전환은 샘플의 pH를 pH 7.0 및 pH 9.0으로 조정하고 상기 샘플을 45℃에서 24 시간 동안 유지시키므로써 이소플라본 글루코시드가 풍부한 추출물 내에 존재하는 잔류 효소를 이용하여 수행한다. 이소플라본 글루코시드의 아글루콘 이소플라본으로의 전환은 하기 시판용 보충 효소를 이소플라본 글루코시드 풍부한 추출물의 샘플에 첨가하므로써 보충 효소를 이용하여 수행한다: 바이오락타제 30,000, 퀘스트 뉴트랄 락타제, 락타제 50,000, 바이오펙티나제 100L 및 알파 갈 600, 각각의 샘플에 첨가되는 효소의 양은 하기 표 2에 제시되어 있다. 각각의 샘플은 보충 효소가 활성을 나타내는 pH인 4.0, 4.5 또는 7.0으로 조정한다. 샘플을 35℃ 내지 75℃의 온도에서 항온처리한다. 선별된 시간에 샘플을 취하고, 이소플라본 함량을 측정한다.
제니스틴, 다이드진 및 글리시틴 각각을 제니스테인, 다이드제인 및 글리시테인 각각으로의 전환에서 확인할 수 있는 바와 같이, 이소플라본 글루코시드가 거의 완전히 아글루콘 이소플라본으로 전환된다. 선택된 보충 효소는 상기 추출물 내의 잔류 효소에 의한 전환과 비교하는 경우, 전환율을 현저히 증가시켰으며, 효과적인 농도, 온도 및 pH에서 1 시간 이내에 거의 완전히 전환시킨다.
실시예 3
다른 실험에서, 아글루콘 이소플라본 풍부한 단백질 재료는 아글루콘 이소플라본 풍부한 추출물로부터 회수하며, 통상적인 단백질 재료는 통상적인 추출물로부터 회수한다. 각각의 추출물의 회수된 단백질 재료내의 이소플라본 함량은 4.0, 4.5 및 5.0의 분리 pH에서 측정한다.
아글루콘 이소플라본 풍부한 대두 추출물은 1) 탈지 대두 박편을 알칼리성 수용액으로 추출하는 단계; 2) 추출물의 pH를 11로 조정하고, 상기 추출물을 35℃에서 1 시간 동안 유지하여 이소플라본 글루코시드 풍부한 추출물을 생성하는 단계; 및 3) 상기 이소플라본 풍부한 추출물내 고형분의 중량을 기준하여 0.1 %의 락타제 50,000(아마노 인터내쇼날 엔자임 컴퍼니)를 첨가하고, 이어서 50℃ 및 pH 4.5에서 1 시간 동안 처리하여 아글루콘 이소플라본 풍부한 추출물을 생성하는 단계로 제조한다. 통상적인 대두 추출물도 제조하는데, 통상적인 추출물은 탈지 대두 박편을 알칼리성 수용액으로 추출하므로써 제조한다.
고형분 10 g을 함유하고 있는 샘플을 각각의 추출물로부터 얻고, 그 pH를 4.5로 조정한다. 단백질 재료는 상기 샘플을 원심분리하고, 단백질 재료로부터 상청액 훼이를 경사분리하므로써 각각의 샘플로부터 분리한다. 이어서, 각각의 샘플로부터 분리된 단백질 재료의 이소플라본 함량을 측정한다. 하기 표 3은 샘플 1개당 총 이소플라본의 함량(mg) 및 각 샘플의 단백질 재료내에 존재하는 이소플라본류의 이소플라본의 각 형태의 백분율을 나타내고 있다.
아글루콘 이소플라본 풍부한 추출물로부터 분리한 단백질 재료의 이소플라본 함량과 통상적인 추출물로부터 분리한 단백질 재료의 이소플라본 함량을 비교하므로써, 아글루콘 이소플라본 풍부한 추출물로부터 분리한 단백질 재료가 통상적인 추출물로부터 분리한 단백질 재료보다 현저히 더 많은 양의 아글루콘 이소플라본, 특히 제니스테인 및 다이드제인을 함유하고 있는 것을 확인할 수 있었다. 통상적인 추출물로부터 분리한 단백질 재료는 아글루콘 이소플라본 풍부한 단백질 재료 내에는 없는 실질적인 양의 이소플라본 결합체를 함유하는데, 이는 아글루콘 이소플라본 풍부한 추출물 내에서 이소플라본 결합체가 아글루콘 이소플라본으로 전환되기때문이다.
상기 실시예에서, 6"-OMal-제니스틴, 6"-OAc-제니스틴, 6"-OMal-다이드진, 6"-OAc-다이드진, 글리시틴, 6"-OMal-글리시틴 및 글리시테인에 대해 나타낸 모든 백분율은 계산된 값이다. 제시된 백분율 또는 효소 농도는 각각의 샘플 내의 고형분 100 g 당 시판되는 효소 제제의 중량(g)으로부터 계산한 것이다. 이하, 대두 제품 내에서 이소플라본을 정량하는 방법을 기술한다. 이소플라본은 샘플(분무 건조 또는 미분말) 0.75 g과 80/20 메탄올/물 용매 50 ㎖를 혼합하므로써 대두 제품으로부터 추출한다. 상기 혼합물은 실온에서 2 시간 동안 오비탈 진탕기를 이용하여 진탕한다. 2 시간 후, 남아있는 비용해 재료를 와트만 42번 여과지를 통해 여과하여 제거한다. 여과물 5 ㎖를 물 4 ㎖와 메탄올 1 ㎖로 희석한다.
추출된 이소플라본은 휴렛 팩커드 C18 하이퍼실 역상 칼럼을 이용한 HPLC(고성능 액체 크로마토그래피)로 분리한다. 이소플라본을 상기 칼럼에 주입하고, 88% 메탄올, 10% 물 및 2% 빙초산으로 출발하고, 98% 메탄올 및 2% 빙초산으로 종결하는 용매 구배로 용출시킨다. 유속 0.4 ㎖/분에서 모든 이소플라본-제니스틴, 6"-O-아세틸제니스틴, 6"-O-말로닐제니스틴, 제니스테인, 다이드진, 6"-O-아세틸다이드진, 6" -O-말로닐다이드진, 다이드진, 글리시틴 및 그의 유도체와 글리시테인-은 명백히 용해된다. 피크 검출은 260 nm에서 UV 흡광도에 의해 수행하였다. 피크의 확인은 HPLC-질량 분광계로 수행한다.
정량은 미국 뉴저지주 서머빌에 소재하는 인도파인 케미칼 컴퍼니로부터 구입한 순수한 표준물(제니스틴, 제니스테인, 다이드진 및 다이드제인)을 이용하여수행한다. 반응 인자(적분 면적/농도)는 상기 화합물 각각에 대해 계산하며, 미공지 샘플을 정량하기 위해 사용한다. 순수한 표준물을 이용할 수 없는 결합체에 대해서는, 반응 인자는 모분자의 것으로 추정하였으나, 분자량 차이에 대해서는 보정하였다. 글리시틴에 대한 반응 인자는 분자량 차이에 대해 보정된 제니스테인의 것으로 추정하였다. 상기 방법은 개개의 이소플라본의 정량법을 제공한다. 편의를 위해 총 제니스테인, 총 다이드제인 및 총 글리시테인을 계산할 수 있으며, 이는 모든 결합체 형태가 각각의 비결합체 형태로 전환되는 경우, 이들 화합물의 응집체 중량을 의미하는 것이다. 또한, 이들 총량은 결합체 형태를 전환시키는 산 가수분해를 이용하는 방법으로 직접 측정할 수도 있다.
독점적인 소유권 및 특권을 청구하는 본 발명의 구체예는 하기 청구범의에 개시된 바와 같이 규정된다.
본 발명에 따라 이소플라본 결합체를 아글루콘 이소플라본으로 전환시키는 전환율이 높은 방법 및 이 방법에 따라 제조된 아글루콘 이소플라본이 풍부한 식물성 단백질 추출물 및 단백질 재료가 제공된다.
Claims (53)
- - 이소플라본 결합체와 단백질을 함유하는 식물성 재료를, pH가 6.0 내지 10.0 인 식물성 재료 내의 단백질의 수성 추출제로 추출하는 단계;-상기 수성 추출물을 2℃ 내지 121℃의 온도 및 6 내지 13.5의 pH에서 처하여 상기 이소플라본 결합체를 이소플라본 글루코시드로 전환시키는 단계; 및- 상기 수성 추출물 내의 이소플라본 글루코시드를 5℃ 내지 75℃의 온도와 3 내지 9의 pH에서 글루코시드 결합을 절단할 수 있는 효소와 접촉시켜서 상기 이소플라본 글루코시드를 아글루콘 이소플라본으로 전환시키기는 단계를 포함하는 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 제조하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 수성 추출물을 9의 pH 및 45℃ 내지 75℃의 온도에서 처리하여 이소플라본 결합체를 이소플라본 글루코시드로 전환시키는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 제조하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 수성 추출물을 11의 pH 및 5℃ 내지 50℃의 온도에서 처리하여 이소플라본 결합체를 이소플라본 글루코시드로 전환시키는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 제조하는 방법.
- 제1항에 있어서, 효소와 상기 이소플라본 글루코시드를 접촉시키는 단계가이소플라본 글루코시드를 함유하는 수성 추출물에 보충 효소를 첨가하는 단계를 포함하는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 제조하는 방법.
- 제4항에 있어서, 상기 보충 효소가 알파-갈락토시다제 효소, 베타-갈락토시다제 효소, 글루코-아밀라아제 효소, 펙티나제 효소 및 이의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 제조하는 방법.
- 제4항에 있어서, 상기 수성 추출물 내에 존재하는 효소의 총 농도가 건조 중량을 기준으로 식물성 재료의 0.1 중량% 내지 10 중량%가 되도록 보충 효소를 첨가하는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 제조하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 식물성 재료가 대두 재료를 포함하는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 제조하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 이소플라본 결합체 및 이소플라본 글루코시드의 50 내지 100% 가 아글루콘 이소플라본으로 전환되는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 제조하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 이소플라본 결합체 및 이소플라본 글루코시드의 80 내지 100% 가 아글루콘 이소플라본으로 전환되는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 제조하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물의 pH를 6.0 내지 10.0 으로 조정하여 단백질과 상기 아글루콘 이소플라본을 함유하는 단백질 재료를 침전시키는 단계를 추가로 포함하는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 제조하는 방법.
- 제10항에 있어서, 상기 단백질 재료의 세척 단계를 수행하지 않는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 제조하는 방법.
- 제10항에 있어서, 상기 단백질 재료를 침전된 단백질 재료 중량의 6배 중량 미만의 물로 세척하는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 제조하는 방법.
- - 이소플라본 결합체와 단백질을 함유하는 식물성 재료를, pH가 6.0 내지 10.0 인 식물성 재료 내의 단백질의 수성 추출제로 추출하는 단계;- 상기 수성 추출물을 2℃ 내지 121℃의 온도 및 6 내지 13.5의 pH에서 처하여 상기 이소플라본 결합체를 이소플라본 글루코시드로 전환시키기는 단계;- 상기 수성 추출물로부터 이소플라본 글루코시드를 함유하는 단백질 재료를 분리하는 단계; 및- 단백질 재료내의 상기 이소플라본 글리코시드를 5℃ 내지 75℃의 온도와 3 내지 9의 pH에서 글루코시드 결합을 절단할 수 있는 효소와 접촉시켜 상기 이소플라본 글루코시드를 아글루콘 이소플라본으로 전환시키기는 단계를 포함하는, 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료를 제조하는 방법.
- 제13항에 있어서, 상기 수성 추출물을 9 내지 11의 pH 및 5℃ 내지 75℃ 온도에서 처리하여 이소플라본 결합체를 이소플라본 글루코시드로 전환시키는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료를 제조하는 방법.
- 제13항에 있어서, 상기 수성 추출물로부터 이소플라본 글루코시드를 함유하는 단백질 재료를 분리하는 단계가, 수성 추출물의 pH를 6.0 내지 10.0 으로 조정여 상기 추출물로부터 단백질 재료를 침전시키는 단계를 추가로 포함하는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료를 제조하는 방법.
- 제13항에 있어서, 상기 단백질 재료내의 이소플라본 글루코시드와 효소를 접촉시키는 단계가 단백질 재료에 보충 효소를 첨가하는 단계를 포함하는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료를 제조하는 방법.
- 제16항에 있어서, 상기 보충 효소가 알파-갈락토시다제 효소, 베타-갈락토시다제 효소, 글루코-아밀라아제 효소, 펙티나제 효소 및 이의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료를 제조하는 방법.
- 제16항에 있어서, 상기 보충 효소를 건조 중량을 기준으로 단백질 재료의 0.1 중량% 내지 10 중량%의 농도로 단백질 재료에 첨가하는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료를 제조하는 방법.
- 제13항에 있어서, 상기 식물성 재료가 대두 재료인 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료를 제조하는 방법.
- 제13항에 있어서, 50 내지 100% 의 이소플라본 결합체가 아글루콘 이소플라본으로 전환되는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료를 제조하는 방법.
- 제13항에 있어서, 80 내지 100% 의 이소플라본 결합체가 아글루콘 이소플라본으로 전환되는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료를 제조하는 방법.
- - 단백질과 이소플라본 결합체를 함유하는 식물성 재료의 수성 슬러리를 형성하는 단계;- 상기 식물성 재료의 수성 슬러리를 2℃ 내지 121℃의 온도 및 6 내지 13의 pH에서 처리하여 상기 이소플라본 결합체를 이소플라본 글루코시드로 전환시키는 단계;- pH가 6.0 내지 10.0인 상기 식물성 재료 내의 단백질의 수성 추출제로 상기 식물성 재료를 추출하는 단계; 및- 상기 수성 추출물 내의 이소플라본 글루코시드를 5℃ 내지 75℃ 및 3 내지 9의 pH에서 글루코시드 결합을 절단할 수 있는 효소와 접촉시켜서 상기 이소플라본 글루코시드를 아글루콘 이소플라본으로 전환시키기는 단계를 포함하는, 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 제조하는 방법.
- 제22항에 있어서, 상기 수성 슬러리가 0.01 내지 20 중량% 의 식물성 재료 함유하는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 제조하는 방법.
- 제22항에 있어서, 상기 추출물 내의 이소플라본 글루코시드와 효소를 접촉시키는 단계가 보충 효소를 추출물에 첨가하는 단계를 포함하는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 제조하는 방법.
- 제24항에 있어서, 상기 보충 효소가 알파-갈락토시다제 효소, 베타-갈락토시다제 효소, 글루코-아밀라아제 효소, 펙티나제 효소 및 이의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 제조하는 방법.
- 제24항에 있어서. 상기 보충 효소를 건조 중량을 기준으로 식물성 재료의 0.1 중량% 내지 10 중량%의 농도로 추출물에 첨가하는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 제조하는 방법.
- 제22항에 있어서, 상기 식물성 재료가 대두 재료를 포함하는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 제조하는 방법.
- 제22항에 있어서 50 내지 100% 의 이소플라본 결합체가 아글루콘 이소플라본으로 전환되는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 제조하는 방법.
- 제22항에 있어서, 80 내지 100% 의 이소플라본 결합체가 아글루콘 이소플라본으로 전환되는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 제조하는 방법.
- 제22항에 있어서, 상기 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물의 pH를 6.0 내지 10.0 으로 조정하여 단백질과 상기 아글루콘 이소플라본을 함유하는 단백질 재료를 침전시키는 단계를 추가로 포함하는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 제조하는 방법.
- - 이소플라본 결합체와 단백질을 함유하는 식물성 재료를, pH가 6.0 내지 10.0 인 식물성 재료 내의 단백질의 수성 추출제로 추출하는 단계;- 상기 추출물로부터 이소플라본 결합체를 함유하는 단백질 재료를 분리하는 단계;- 상기 단백질 재료의 수성 슬러리를 형성하는 단계;- 약 2℃ 내지 약 121℃의 온도 및 약 6 내지 약 13.5의 pH에서 상기 이소플라본 결합체를 이소플라본 글루코시드로 전환시키기에 충분한 시간 동안 수성 슬러리를 처리하는 단계;- 상기 수성 슬러리 내의 이소플라본 글루코시드를 5℃ 내지 75℃의 온도와 3 내지 9의 pH에서 글루코시드 결합을 절단할 수 있는 효소와 접촉시켜서 상기 이소플라본 글루코시드를 아글루콘 이소플라본으로 전환시키기는 단계를 포함하는 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료를 제조하는 방법.
- 제31항에 있어서, 상기 단백질 재료는 추출물의 pH를 6.0 내지 10.0으로 조하여 추출물로부터 단백질 재료를 침전시킴으로써 상기 수성 추출물로부터 분리하는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료를 제조하는 방법.
- 제31항에 있어서, 상기 수성 슬러리가 0.01 내지 30 중량% 의 단백질 재료 함유하는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료를 제조하는 방법.
- 제31항에 있어서, 상기 수성 슬러리를 9 내지 11의 pH 및 5℃ 내지 75℃ 온도에서 처리하여 이소플라본 결합체를 이소플라본 글루코시드로 전환시키는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료를 제조하는 방법.
- 제31항에 있어서, 상기 수성 슬러리 내의 이소플라본 글루코시드를 효소와 접촉시키는 단계가 보충 효소를 슬러리에 첨가하는 단계를 포함하는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료를 제조하는 방법.
- 제35항에 있어서, 상기 보충 효소가 알파-갈락토시다제 효소, 베타-갈락토시다제 효소, 글루코-아밀라제 효소, 펙티나제 효소 및 이의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료를 제조하는 방법.
- 제35항에 있어서, 상기 보충 효소를 건조 중량을 기준으로 식물성 재료의 0 중량% 내지 10 중량%의 농도로 수성 슬러리에 첨가하는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료를 제조하는 방법.
- 제31항에 있어서, 상기 식물성 재료가 대두 재료로 구성된 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료를 제조하는 방법.
- 제31항에 있어서, 50 내지 100% 의 이소플라본 결합체가 아글루콘 이소플라본으로 전환되는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료를 제조하는 방법.
- 제31항에 있어서, 80 내지 100% 의 이소플라본 결합체가 아글루콘 이소플라본으로 전환되는 것이 특징인 식물성 재료로부터 아글루콘 이소플라본이 풍부한 단백질 재료를 제조하는 방법.
- - 아글루콘 이소플라본이 풍부한 식물성 단백질 재료를 제공하는 단계;- 상기 아글루콘 이소플라본이 풍부한 식물성 단백질 재료를 추출제로 추출하여 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 생성하는 단계;- 상기 추출물과 흡착제 물질을 접촉시켜 상기 추출물로부터 제니스테인 함량이 40 내지 100%인 재료를 분리하는 단계를 포함하는, 아글루콘이 풍부한 식물성 단백질 재료로부터 제니스테인 함량이 40 내지 100%인 재료를 회수하는 방법.
- 제41항에 있어서, 상기 추출제가 30% 알코올 내지 90% 알코올을 함유하는 수성 알코올인 것이 특징인 아글루콘이 풍부한 식물성 단백질 재료로부터 제니스테인 함량이 40 내지 100%인 재료를 회수하는 방법.
- 제41항에 있어서, 상기 추출제의 pH 값이 6.0 내지 10.0인 것이 특징인 아루콘이 풍부한 식물성 단백질 재료로부터 제니스테인 함량이 40 내지 100%인 재료를 회수하는 방법.
- 제41항에 있어서, 상기 아글루콘 이소플라본이 풍부한 식물성 단백질 재료를 상기 추출제로 추출하고, 이때 추출제 대 재료의 중량비가 약 11:1을 초과하지 않는 것이 특징인 아글루콘이 풍부한 식물성 단백질 재료로부터 제니스테인 함량이 40 내지 100%인 재료를 회수하는 방법.
- 제41항에 있어서, 상기 추출물은 이 추출물과 흡착제 물질이 접촉하도록 용출제를 이용하여 흡착제 물질을 통해 용출시켜 추출물 내의 제니스테인을 흡착제 물질에 차동 분리 가능하게 결합시킴으로써 추출물로부터 제니스테인 함량이 40 내지 100%인 재료를 분리하는 것이 특징인 아글루콘이 풍부한 식물성 단백질 재료로부터 제니스테인 함량이 40 내지 100%인 재료를 회수하는 방법.
- 제41항에 있어서, 상기 제니스테인 함량이 90 내지 100% 인 것이 특징인 회수방법.
- 제41항에 있어서, 상기 추출물로부터 잔류 식물성 단백질 재료를 제거하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
- - 아글루콘 이소플라본이 풍부한 식물성 단백질 재료를 제공하는 단계;- 상기 아글루콘 이소플라본이 풍부한 식물성 단백질 재료를 추출제로 추출하여 아글루콘 이소플라본이 풍부한 추출물을 생성하는 단계; 및- 상기 추출물과 흡착제 물질을 접촉시켜 상기 추출물로부터 다이드제인 함량이 40 내지 100%인 재료를 분리하는 단계를 포함하는, 아글루콘이 풍부한 식물성 단백질 재료로부터 다이드제인 함량이 40 내지 100%인 재료를 회수하는 방법.
- 제48항에 있어서, 상기 추출제가 30% 알코올 내지 90% 알코올을 함유하는 수성 알코올인 것이 특징인 아글루콘이 풍부한 식물성 단백질 재료로부터 다이드제인 함량이 40 내지 100%인 재료를 회수하는 방법.
- 제48항에 있어서, 상기 추출제의 pH 값이 6.0 내지 10.0인 것이 특징인 아루콘이 풍부한 식물성 단백질 재료로부터 다이드제인 함량이 40 내지 100%인 재료를 회수하는 방법.
- 제48항에 있어서, 상기 아글루콘 이소플라본이 풍부한 식물성 단백질 재료를 상기 추출제로 추출하고, 이때 추출제 대 재료의 중량비가 약 11:1을 초과하지 않는 것이 특징인 아글루콘이 풍부한 식물성 단백질 재료로부터 다이드제인 함량이 40 내지 100%인 재료를 회수하는 방법.
- 제48항에 있어서, 상기 추출물은 이 추출물과 흡착제 물질이 접촉하도록 용출제를 이용하여 상기 흡착제 물질을 통해 용출시켜 다이드제인을 흡착제 물질에 차동 분리 가능하게 결합시킴으로써 상기 추출물로부터 다이드제인 함량이 40 내지 100%인 재료를 분리하는 것이 특징인 아글루콘이 풍부한 식물성 단백질 재료로부터 다이드제인 함량이 40 내지 100%인 재료를 회수하는 방법.
- 제48항에 있어서, 상기 추출물로부터 잔류 식물성 단백질 재료를 제거하는 단계를 추가로 포함하는 것이 특징인 아글루콘이 풍부한 식물성 단백질 재료로부터다이드제인 함량이 40 내지 100%인 재료를 회수하는 방법.
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