RU2152434C1 - Способ получения экстракта, обогащенного изофлавоновыми агликонами, из растительного материала (варианты), способ извлечения материала с высоким содержанием генистеина или дайдзеина из обогащенного изофлавоновыми агликонами материала - Google Patents
Способ получения экстракта, обогащенного изофлавоновыми агликонами, из растительного материала (варианты), способ извлечения материала с высоким содержанием генистеина или дайдзеина из обогащенного изофлавоновыми агликонами материала Download PDFInfo
- Publication number
- RU2152434C1 RU2152434C1 RU97115235/13A RU97115235A RU2152434C1 RU 2152434 C1 RU2152434 C1 RU 2152434C1 RU 97115235/13 A RU97115235/13 A RU 97115235/13A RU 97115235 A RU97115235 A RU 97115235A RU 2152434 C1 RU2152434 C1 RU 2152434C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- isoflavone
- extract
- protein
- plant
- glycosides
- Prior art date
Links
- CJWQYWQDLBZGPD-UHFFFAOYSA-N isoflavone Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC(OC)=C1C1=COC2=C(C=CC(C)(C)O3)C3=C(OC)C=C2C1=O CJWQYWQDLBZGPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 292
- 235000008696 isoflavones Nutrition 0.000 title claims abstract description 292
- 239000000463 material Substances 0.000 title claims abstract description 227
- GOMNOOKGLZYEJT-UHFFFAOYSA-N isoflavone Chemical compound C=1OC2=CC=CC=C2C(=O)C=1C1=CC=CC=C1 GOMNOOKGLZYEJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 185
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 114
- ZQSIJRDFPHDXIC-UHFFFAOYSA-N daidzein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=COC2=CC(O)=CC=C2C1=O ZQSIJRDFPHDXIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 92
- ZCOLJUOHXJRHDI-CMWLGVBASA-N genistein 7-O-beta-D-glucoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC(O)=C2C(=O)C(C=3C=CC(O)=CC=3)=COC2=C1 ZCOLJUOHXJRHDI-CMWLGVBASA-N 0.000 title claims abstract description 64
- 235000006539 genistein Nutrition 0.000 title claims abstract description 57
- TZBJGXHYKVUXJN-UHFFFAOYSA-N genistein Natural products C1=CC(O)=CC=C1C1=COC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O TZBJGXHYKVUXJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 57
- 229940045109 genistein Drugs 0.000 title claims abstract description 57
- 235000007240 daidzein Nutrition 0.000 title claims abstract description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 65
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title claims description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 122
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 122
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 claims abstract description 86
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 83
- -1 isoflavone glycosides Chemical class 0.000 claims abstract description 80
- 150000002515 isoflavone derivatives Chemical class 0.000 claims abstract description 45
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 115
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 78
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 77
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 44
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 44
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 44
- 108010064851 Plant Proteins Proteins 0.000 claims description 38
- 235000021118 plant-derived protein Nutrition 0.000 claims description 38
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 claims description 26
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 claims description 14
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 claims description 11
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 9
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 5
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 claims description 4
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 claims description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 claims description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 2
- 102000005840 alpha-Galactosidase Human genes 0.000 claims 1
- 108010030291 alpha-Galactosidase Proteins 0.000 claims 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 claims 1
- DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N teicoplanin aglycone Chemical compound N([C@H](C(N[C@@H](C1=CC(O)=CC(O)=C1C=1C(O)=CC=C2C=1)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)OC=1C=C3C=C(C=1O)OC1=CC=C(C=C1Cl)C[C@H](C(=O)N1)NC([C@H](N)C=4C=C(O5)C(O)=CC=4)=O)C(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@@H]3NC(=O)[C@@H]1C1=CC5=CC(O)=C1 DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N 0.000 abstract description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 abstract 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 70
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 38
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 29
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- ZCOLJUOHXJRHDI-FZHKGVQDSA-N Genistein 7-O-glucoside Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)c1cc(O)c2C(=O)C(c3ccc(O)cc3)=COc2c1 ZCOLJUOHXJRHDI-FZHKGVQDSA-N 0.000 description 17
- CJPNHKPXZYYCME-UHFFFAOYSA-N Genistin Natural products OCC1OC(Oc2ccc(O)c3OC(=CC(=O)c23)c4ccc(O)cc4)C(O)C(O)C1O CJPNHKPXZYYCME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- YCUNGEJJOMKCGZ-UHFFFAOYSA-N Pallidiflorin Natural products C1=CC(OC)=CC=C1C1=COC2=CC=CC(O)=C2C1=O YCUNGEJJOMKCGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 16
- ZWSNUPOSLDAWJS-QNDFHXLGSA-N 6,7-dihydroxy-3-[4-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyphenyl]chromen-4-one Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](Oc2ccc(cc2)-c2coc3cc(O)c(O)cc3c2=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O ZWSNUPOSLDAWJS-QNDFHXLGSA-N 0.000 description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 11
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 10
- DXYUAIFZCFRPTH-UHFFFAOYSA-N glycitein Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(C2=O)=C1OC=C2C1=CC=C(O)C=C1 DXYUAIFZCFRPTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- NNUVCMKMNCKPKN-UHFFFAOYSA-N glycitein Natural products COc1c(O)ccc2OC=C(C(=O)c12)c3ccc(O)cc3 NNUVCMKMNCKPKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 235000008466 glycitein Nutrition 0.000 description 10
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 10
- 108010059881 Lactase Proteins 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 9
- 229940116108 lactase Drugs 0.000 description 9
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical group CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 8
- GMTUGPYJRUMVTC-UHFFFAOYSA-N Daidzin Natural products OC(COc1ccc2C(=O)C(=COc2c1)c3ccc(O)cc3)C(O)C(O)C(O)C=O GMTUGPYJRUMVTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KYQZWONCHDNPDP-UHFFFAOYSA-N Daidzoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=C2C(=O)C(C=3C=CC(O)=CC=3)=COC2=C1 KYQZWONCHDNPDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010082495 Dietary Plant Proteins Proteins 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- OZBAVEKZGSOMOJ-MIUGBVLSSA-N Glycitein 7-O-glucoside Natural products COC1=CC(C(C(C=2C=CC(O)=CC=2)=CO2)=O)=C2C=C1O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O OZBAVEKZGSOMOJ-MIUGBVLSSA-N 0.000 description 5
- XJTZHGNBKZYODI-UHFFFAOYSA-N Glycitin Natural products OCC1OC(Oc2ccc3OC=C(C(=O)c3c2CO)c4ccc(O)cc4)C(O)C(O)C1O XJTZHGNBKZYODI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 235000020712 soy bean extract Nutrition 0.000 description 5
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WUADCCWRTIWANL-UHFFFAOYSA-N biochanin A Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C1=COC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O WUADCCWRTIWANL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 101000718529 Saccharolobus solfataricus (strain ATCC 35092 / DSM 1617 / JCM 11322 / P2) Alpha-galactosidase Proteins 0.000 description 2
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 2
- NNISLDGFPWIBDF-MPRBLYSKSA-N alpha-D-Gal-(1->3)-beta-D-Gal-(1->4)-D-GlcNAc Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC(=O)C)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 NNISLDGFPWIBDF-MPRBLYSKSA-N 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- ZZIALNLLNHEQPJ-UHFFFAOYSA-N coumestrol Chemical compound C1=C(O)C=CC2=C1OC(=O)C1=C2OC2=CC(O)=CC=C12 ZZIALNLLNHEQPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KYQZWONCHDNPDP-QNDFHXLGSA-N daidzein 7-O-beta-D-glucoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C2C(=O)C(C=3C=CC(O)=CC=3)=COC2=C1 KYQZWONCHDNPDP-QNDFHXLGSA-N 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 2
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 229940001941 soy protein Drugs 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- FRAUJUKWSKMNJY-UHFFFAOYSA-N 5-hydroxy-3-(4-hydroxyphenyl)-7-(6-malonyl-beta-D-glucopyranosyloxy)-4H-1-benzopyran-4-one Natural products OC1C(O)C(O)C(COC(=O)CC(O)=O)OC1OC1=CC(O)=C2C(=O)C(C=3C=CC(O)=CC=3)=COC2=C1 FRAUJUKWSKMNJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 108700041567 MDR Genes Proteins 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L Malonate Chemical compound [O-]C(=O)CC([O-])=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102100024295 Maltase-glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010036618 Premenstrual syndrome Diseases 0.000 description 1
- GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N Thermopsosid Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2Oc3c(c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c3)C(=O)C=2)c1 GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- DXWGBJJLEDQBKS-LDBVRRDLSA-N [(2r,3s,4s,5r,6s)-3,4,5-trihydroxy-6-[5-hydroxy-3-(4-hydroxyphenyl)-4-oxochromen-7-yl]oxyoxan-2-yl]methyl acetate Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COC(=O)C)O[C@H]1OC1=CC(O)=C2C(=O)C(C=3C=CC(O)=CC=3)=COC2=C1 DXWGBJJLEDQBKS-LDBVRRDLSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- DXWGBJJLEDQBKS-UHFFFAOYSA-N acetylgenistin Natural products OC1C(O)C(O)C(COC(=O)C)OC1OC1=CC(O)=C2C(=O)C(C=3C=CC(O)=CC=3)=COC2=C1 DXWGBJJLEDQBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012445 acidic reagent Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 description 1
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 239000005417 food ingredient Substances 0.000 description 1
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 1
- ADFCQWZHKCXPAJ-UHFFFAOYSA-N indofine Natural products C1=CC(O)=CC=C1C1CC2=CC=C(O)C=C2OC1 ADFCQWZHKCXPAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- NNQSGBRGJHSRFN-UHFFFAOYSA-N isoflavan Chemical class C1OC2=CC=CC=C2CC1C1=CC=CC=C1 NNQSGBRGJHSRFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- MTXMHWSVSZKYBT-UHFFFAOYSA-N malonyl daidzin Natural products OC1C(O)C(O)C(COC(=O)CC(O)=O)OC1OC1=CC=C2C(=O)C(C=3C=CC(O)=CC=3)=COC2=C1 MTXMHWSVSZKYBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTXMHWSVSZKYBT-ASDZUOGYSA-N malonyldaidzin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COC(=O)CC(O)=O)O[C@H]1OC1=CC=C2C(=O)C(C=3C=CC(O)=CC=3)=COC2=C1 MTXMHWSVSZKYBT-ASDZUOGYSA-N 0.000 description 1
- FRAUJUKWSKMNJY-RSEYPYQYSA-N malonylgenistin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COC(=O)CC(O)=O)O[C@H]1OC1=CC(O)=C2C(=O)C(C=3C=CC(O)=CC=3)=COC2=C1 FRAUJUKWSKMNJY-RSEYPYQYSA-N 0.000 description 1
- 230000009245 menopause Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000011340 peptidyl-tyrosine autophosphorylation Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N reserpine Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H]2C[C@@H]3C4=C(C5=CC=C(OC)C=C5N4)CCN3C[C@H]2C1)C(=O)OC)OC)C(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 229940071440 soy protein isolate Drugs 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N vitamin p Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003021 water soluble solvent Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
- A23J3/14—Vegetable proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
- A23J3/14—Vegetable proteins
- A23J3/16—Vegetable proteins from soybean
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L11/00—Pulses, i.e. fruits of leguminous plants, for production of food; Products from legumes; Preparation or treatment thereof
- A23L11/05—Mashed or comminuted pulses or legumes; Products made therefrom
- A23L11/07—Soya beans, e.g. oil-extracted soya bean flakes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L11/00—Pulses, i.e. fruits of leguminous plants, for production of food; Products from legumes; Preparation or treatment thereof
- A23L11/30—Removing undesirable substances, e.g. bitter substances
- A23L11/33—Removing undesirable substances, e.g. bitter substances using enzymes; Enzymatic transformation of pulses or legumes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L11/00—Pulses, i.e. fruits of leguminous plants, for production of food; Products from legumes; Preparation or treatment thereof
- A23L11/30—Removing undesirable substances, e.g. bitter substances
- A23L11/34—Removing undesirable substances, e.g. bitter substances using chemical treatment, adsorption or absorption
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Botany (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
Abstract
Изофлавоновые конъюгаты в растительном материале превращают в изофлавоновые гликозиды путем обработки растительного материала при температуре и pH и в течение периода времени, достаточных для осуществления превращения. Изофлавоновые гликозиды превращают в изофлавоновые агликоны путем ферментативной реакции. Растительный материал экстрагируют водным экстрагентом, имеющим pH выше изоэлектрической точки белка в растительном материале для того, чтобы экстрагировать белок и изофлавоны или до или после превращения изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые гликозиды или превращения изофлавоновых гликозидов в изофлавоновые агликоны. Обогащенный изофлавоновыми агликонами белковый материал получают путем осаждения белка и изофлавоновых агликонов из экстракта. Материал с высоким содержанием генистеина или материал с высоким содержанием дайдзеина может быть получен из обогащенного изофлавоновыми агликонами белкового экстракта или обогащенного изофлавоновыми агликонами белкового материала путем выделения материала с высоким содержанием генистеина, или экстракта, или белкового материала. Изобретение позволит получить белковый экстракт, обогащенный изофлавоновым агликоном. 3 с. и 24 з.п.ф-лы, 3 табл.
Description
Данное изобретение относится к обогащенному изофлавоновыми агликонами растительному белковому экстракту и белковому материалу и методам получения этих материалов путем осуществления двухстадийного способа превращения изофлавоновых конъюгатов в растительном белковом материале в изофлавоновые агликоны, и к материалу с высоким содержанием генистеина и материалу с высоким содержанием дайдзеина и способам получения этих материалов из обогащенного изофлавоновыми агликонами белкового вещества.
Изофлавоны встречаются в ряде бобовых растений, содержащих растительные белковые вещества, таких как соя. Эти соединения включают дайдзин, 6'' - OAx - дайдзин, 6'' - OMal - дайдзин, дайдзеин, генистин, 6'' - OAc - генистин, 6'' - OMal - генистин, генистеин, глицитин, 6'' - OAc - глицитин, 6'' - OMal - глицитин, глицетеин, биочанин A, формононентин и куместрол. Обычно эти соединения ассоциируются с присущим соевым бобам горьким вкусом.
Изофлавоны в растительном белковом материале включают изофлавоновые гликозиды (гликоны), изофлавоновые конъюгаты, и изофлавоновые агликоны. Изофлавоновые гликозиды имеют молекулу глюкозы, связанную с изофлавоновой частью. Изофлавоновые конъюгаты имеют дополнительные части, связанные с молекулой глюкозы изофлавонового гликозида, например, 6'' - OAc - генистин содержит ацетатную группу, связанную с молекулой глюкозы генистина в шестом положении. Изофлавоновые агликоны состоят только из изофлавоновой части.
Соя содержит три "семейства" изофлавоновых соединений, включающих соответствующий гликозид, конъюгат и представителей агликонов: семейство генистеина, семейство дайдзеина и семейство гдицитеина. Генистеиновое семейство включает гликозид генистин; конъюганты 6'' - OMal - генистина (6'' - малонатный эфир генистина) и 6'' - OAc - генистина (6'' - ацетатный эфир генистина) и агликон генистеин. Семейство даидзеина включает гликозид даидзин; конъюганты 6'' - OMal - даидзин и 6'' - OAc - даидзин и агликон дайдзеин. Глицитеиновое семейство включает гликозид глицитин; коньюгат 6'' - OMal - глицитин и агликон глицитеин.
При производстве коммерческих продуктов, таких как изоляты и концентраты растительного белка, основным было удаление этих веществ. Например, при обычном процессе производства изолята или концентрата соевого белка, при котором соевые хлопья экстрагируют с помощью водной щелочной среды, много изофлаванов солюбилизируется в экстракте вместе с соевым белком. Белок осаждается из экстракта путем подкисления экстракта и выделяется с образованием изолята или концентрата, причем остается сыворотка, в которой содержится много солюбилизированных изофлавонов. Осадочные изофлавоны, оставшиеся в осажденном кислотой белке, обычно удаляют путем исчерпывающего промывания. Сыворотку и промывные воды обычно отбрасывают.
Недавно было обнаружено, что изофлавоны, содержащиеся в растительных белках, таких как соевые, имеют медицинское значение. Хотя все изофлавоны представляют интерес по медицинской оценке, агликоны являются особыми изофлавонами, представляющими наибольший интерес. Генистеин и дайдзеин могут значительно снижать сердечно-сосудистые факторы риска. "Plant and Mammalian Estrogen Effect on Plasma Lipids of Female Monkeys", Circulation, vol. 90, p. 1259 (Oct. 1994). Генистеин и дайдзеин, как полагают, также снижает симптоматику при состояниях, вызванных сниженными или измененными уровнями эндогенных эстрогенов у женщин, таких как менопауза или предменструальный синдром. Кроме того, недавно было обнаружено, что изофлавоны агликонов могут подавлять рост человеческих раковых клеток, таких как клетки рака грудных желез и клетки рака простаты, как описано в следующих статьях: "Genistein Inhibition of the Growth of Human Breast Cancer Cells Independence from Estrogen Receptors and the Multi - Drug Resistance Gene" by Peterson and Barnes. Biochemical and Biophysical Research Communications. Vol. 179, N 1, pp. 661 - 667, Aug. 30, 1991; "Genistein and Biochanin A Inhibit the Growth of Human Prostate Cancer Cells but not Epidermal Growth Factor Receptor Tyrosine Autophosphorylation" by Peterson and Barnes, The Prostate, Vol. 22, pp. 335-345 (1993); и "Soybeans Inhibit Mammary Tumors in Models of Breast Cancer" by Barnes et al., Mutagens and Carcinogens in the Diet, pp. 239-253 (1990).
Как отмечено выше, изофлавоны включают даидзин, генистеин, и глицитеин. Эти агликоны имеют следующую общую формулу:
где R1, R2, R3 и R4 могут выбираться из группы, состоящей из H, ОН и OCH3.
где R1, R2, R3 и R4 могут выбираться из группы, состоящей из H, ОН и OCH3.
Генистеин имеет формулу, представленную выше, где R1 = ОН, R2 = H, R3 = ОН и R4 = ОН, дайдзеин имеет формулу, представленную выше, где R1 = ОН, R2 = H, R3 = H и R4 = ОН и глицитеин имеет формулу, представленную выше, где R1 = ОН, R2 = OCH3, R3 = H и R4=OH.
Поэтому данное изобретение направлено на агликоны и обогащение растительного белкового экстракта и растительного белкового материала этими соединениями, а также на материал с высоким содержанием генистеина и материал с высоким содержанием дайдзеина. Данное изобретение также направлено на способы получения обогащенного агликоном растительного белкового экстракта, обогащенного изофлавоновым агликоном растительного белкового материала, материала с высоким содержанием генистеина и материала с высоким содержанием дайдзеина. Основной способ превращения изофлавоновых конъюгатов растительного белка в изофлавоновые агликоны известен и представлен в рассматриваемой в настоящее время заявке США сер. N 08/477.102, поданной 7 июня 1995, принадлежащей Заявителю настоящей заявки.
Способы превращения гликозидов в изофлавоновые агликоны также известны. Способ превращения изофлавоновых гликозидов в изофлавоновые агликоны для получения обогащенного изофлавоновым агликоном растительного белкового экстракта и обогащенный изофлавоновым агликоном изолят растительного белка представлен в рассматриваемой в настоящее время Патентной заявке РСТ N PCT/US94/10697, принадлежащей владельцу данного изобретения.
Известны также и другие способы превращения изофлавоновых гликозидов в изофлавоновые агликоны в этой области технологии, такие как описанные в Японской патентной заявке 258669 Obata et al. Эти способы не обеспечивают превращение изофлавоновых конъюга- тов в изофлавоновые агликоны, не обеспечивают получение материала с высоким содержанием генистеина или материала с высоким содержанием дайдзеина, производимых из обогащенного агликоном растительного белкового изолята. Кроме того, при этих способах достигается только умеренная степень превращения гликозидов в агликоны и необходим существенный период времени для осуществления этой умеренной степени превращения. Поэтому такие процессы не желательны при крупномасштабных операциях промышленного значения.
Соответственно целью данного изобретения является получение обогащенного изофлавоновым агликоном растительного белкового экстракта и способ его производства.
Дополнительной целью данного изобретения является получение обогащенного изофлавоновым агликоном растительного белкового материала и способ производства этого материала.
Еще одной целью данного изобретения является получение материала с высоким содержанием генистеина и материала с высоким содержанием дайдзеина и процессы производства этих материалов из обогащенного изофлавоновым агликоном растительного белкового материала.
Изобретение представляет собой обогащенный изофлавоновым агликоном экстракт и способ его производства из растительного материала, содержащего изофлавоновые конъюгаты и белок. Этот способ включает экстрагирование растительного материала, содержащего изофлавоновые конъюгаты, с помощью водного экстрагента, имеющего pH выше примерно изоэлектрической точки белка, содержащегося в растительном материале. Водный экстракт обрабатывается при температуре, pH и в течение периода времени, достаточных для превращения изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые гликозиды. В водном экстракте с изофлавоновыми гликозидами контактирует фермент при температуре, pH и в течение периода времени, достаточного для превращения изофлавоновых гликозидов в изофлавоновые агликоны с получением обогащенного изофлавоновым агликоном экстракта.
В одном варианте осуществления этого изобретения экстрагирование осуществляется при pH от примерно 6 до примерно 10. Предпочтительно весовое отношение экстрагента к растительному белковому материалу составляет от примерно 8:1 до примерно 16:1.
В другом варианте осуществления изобретения изофлавоновые конъюгаты превращаются в изофлавоновые гликозиды путем обработки водного экстракта при температуре, равной примерно от 2oC до примерно 121oC, и значении pH, равном от примерно 6 до примерно 13,5. Предпочтительно превращение осуществляется при pH, равном 11, и температуре, равной от примерно 5oC до примерно 50oC, или же при pH, равном примерно 9, и температуре, равной от примерно 45oC до примерно 75oC.
В еще одном варианте осуществления этого изобретения изофлавоновые гликозиды превращаются в изофлавоновые агликоны путем контактирования изофлавоновых гликозидов с ферментом в водном экстракте при температуре между примерно от 5oC и примерно 75oC и значении pH между примерно 3 и примерно 9. Предпочтительно фермент является ферментом сахаридазой, способным к расщеплению 1,4-гликозидных связей.
В другом варианте осуществления изобретения pH обогащенного изофлавоновым агликоном экстракта доводится до примерно изоэлектрической точки белка в экстракте для осаждения белкового материала, содержащего белок и изофлавоновые агликоны.
Реализованы высокие скорости превращения изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые гликозиды и изофлавоновых гликозидов в изофлавоновые агликоны. В одном из вариантов изобретения большая часть, а предпочтительно по существу все изофлавоновые конъюгаты превращаются в изофлавоновые агликоны.
В другом аспекте это изобретение относится к обогащенному изофлавоновым агликоном белковому материалу и способу его получения из обогащенного изофлавоновым гликозидом белкового материала, получаемого из растительного материала, содержащего изофлавоновые конъюгаты и белок. Растительный материал экстрагируется водным экстрагентом, имеющим pH примерно выше изоэлектрической точки белка в растительном материале. Водный экстракт обрабатывается при температуре и pH в течение периода времени, достаточных для превращения изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые гликозиды. Белковый материал, содержащий изофлавоновые гликозиды, отделяется от экстракта, и изофлавоновые гликозиды в белковом материале контактируют с ферментом при pH и температуре и в течение периода времени, достаточных для превращения изофлавоновых гликозидов в изофлавоновые агликоны.
В еще одном аспекте изобретение относится к экстракту, обогащенному изофлавоновым агликоном, и способу его получения из обогащенного изофлавоновым гликозидом растительного материала, производимого из растительного материала, содержащего изофлавоновые конъюгаты и белок. Из растительного материала образуется водная суспензия, и эта суспензия обрабатывается при pH и температуре и в течение периода времени, достаточных для превращения изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые гликозиды. Обогащенный изофлавоновым гликозидом растительный материал затем экстрагируют водным экстрагентом, имеющим pH примерно выше изоэлектрической точки белка в растительном материале. Изофлавоновые гликозиды в экстракте контактируют с ферментом при температуре и pH и в течение периода времени, достаточных для превращения изофлавоновых гликозидов в изофлавоновые агликоны.
В предпочтительном варианте осуществления изофлавоновые гликозиды в экстракте контактируют с ферментом с помощью добавления эффективного количества дополнительного фермента к экстракту, где дополнительный фермент предпочтительно является ферментом сахаридазой, способным к расщеплению 1,4-гликозидных связей.
В другом варианте осуществления обогащенный изофлавоновым агликоном белковый материал формируется из обогащенного изофлавоновым агликоном экстракта путем доведения pH экстракта до примерно изоэлектрической точки белка для осаждения белкового материала, содержащего белок и изофлавоновые агликоны.
В еще одном аспекте это изобретение представляет собой обогащенный изофлавоновым агликоном белковый материал и способ его получения из белкового материала, производимого из растительного материала, содержащего изофлавоновые конъюгаты и белок. Растительный материал экстрагируется водным экстрагентом, имеющим pH примерно выше изоэлектрической точки этого белка. Белковый материал, содержащий изофлавоновые конъюгаты, отделяется от экстракта путем доведения pH экстракта до примерно изоэлектрической точки белка. Из белкового материала образуется водная суспензия, и водную суспензию обрабатывают при pH и температуре и в течение периода времени, достаточных для превращения изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые гликозиды. Изофлавоновые гликозиды в суспензии контактируют с ферментом при pH и температуре и в течение периода времени, достаточных для превращения изофлавоновых гликозидов в изофлавоновые агликоны.
В предпочтительном варианте осуществления изофлавоновые гликозиды в суспензии контактируют с ферментом при добавлении эффективного количества дополнительного фермента к суспензии, когда дополнительный фермент предпочтительно является ферментом сахаридазой, способным к расщеплению 1,4-гликозидных связей.
В еще одном аспекте это изобретение относится к материалу с высоким содержанием генистеина и процессу его выделения из обогащенного изофлавоновым агликоном растительного белкового материала. Получается обогащенный изофлавоновым агликоном растительный белковый материал и экстрагируется с помощью водно-спиртового экстрагента для получения обогащенного изофлавоновым агликоном экстракта. Экстракт контактирует с материалом адсорбента в течение периода времени, достаточного для выделения материала с высоким содержанием генистеина из экстракта.
В последнем аспекте изобретение относится к материалу с высоким содержанием дайдзеина и способу его получения из обогащенного изофлавоновым агликоном растительного белкового материала. Получается обогащенный изофлавоновым агликоном растительный белковый материал и экстрагируется водно-спиртовым экстрагентом с получением обогащенного изофлавоновым агликоном экстракта. Экстракт контактирует с материалом адсорбента в течение периода времени, достаточного для выделения из экстракта материала с высоким содержанием дайдзеина.
Исходным материалом для способа предпочтительного осуществления является любой растительный белковый материал или растительный материал, содержащий изофлавоновые конъюгаты, и растительный белок. В предпочтительном варианте осуществления исходным материалом является материал сои, так как осуществление способа производства обогащенных изофлавоновым агликоном экстрактов и белковых материалов особенно удобно из материала сои. Термин "материал сои", как он использован здесь, относится к соевым бобам или любому типу соевого сырья. Наиболее предпочтительным исходным материалом являются соевые хлопья, из которых было удалено масло путем экстракции растворителем по обычным в этой области технологии процедурам. Данный процесс в основном применим к широкому ряду растительных белковых материалов помимо материалов сои и соевых бобов.
В зависимости от типа вегетативного растительного материала, содержащего изофлавоновые конъюгаты, может быть необходимо в некоторых случаях перерабатывать растительный материал в тонко измельченную форму. Это может быть желательно для того, чтобы сделать изофлавоновые соединения, содержащиеся в растительном материале, доступными для различных реагентов, что описано более детально ниже. Материал может быть измельченным, истолченным (раздавленным) или обработанным иначе известными общепринятыми способами. Если растительный материал находится в таком состоянии, что изофлавоновые соединения в растительном материале доступны для реагентов или реактивов извне, таком например, как небольшие листовые части некоторых растений, может быть не нужно подвергать растительный материал подобной обработке.
На первой стадии или операции растительный белок и изофлавоновые соединения, включая изофлавоновые конъюгаты, экстрагируют из растительного белкового материала. Хлопья экстрагируют водным экстрагентом, имеющим pH выше примерно изоэлектрической точки белкового материала, предпочтительно при pH, равном примерно от 6,0 до примерно 10,0, и наиболее предпочтительно, при pH, равном от примерно 6,7 до примерно 9,7. Обычно, если необходимо, для повышения pH водного экстрагента можно использовать щелочные реагенты, такие как гидроксид натрия, гидроксид калия и гидроксид кальция. Желаемые изофлавоновые соединения и растительные белки солюбилизируются в водном экстракте.
Для того чтобы довести до максимума выделение этих соединений в водном экстракте, предпочтительно, чтобы весовое отношение соевых хлопьев или другого растительного белкового материала к экстрагенту регулировалось до определенных уровней, так чтобы солюбилизировать как можно больше изофлавонов в растительном материале. Экстракция белков и изофлавонов может проводиться с помощью обычных процедур экстрагирования, включая противоточное экстрагирование растительного белкового материала, предпочтительно при весовом отношении водного экстрагента к растительному белковому материалу от примерно 8: 1 до примерно 16:1. По завершении экстрагирования растительного белкового материала экстрагент дает водный экстракт белка и изофлавонов.
Альтернативно можно использовать двухстадийный процесс экстракции, когда весовое отношение экстрагента к растительному белковому материалу при первоначальном экстрагировании предпочтительно составляет примерно 10:1, а весовое отношение экстрагента к растительному белковому материалу при втором экстрагировании составляет примерно 6:1 или менее, так что в целом весовое отношение экстрагента к растительному белковому материалу при обоих экстрагированиях не превышает в целом весового отношения экстрагента к растительному белковому материалу, равного примерно 16:1. Могут также использоваться другие методы экстрагирования, при которых весовое отношение экстрагента к растительному белковому материалу составляет предпочтительно 16:1 или менее.
На первой стадии превращения изофлавона или при первой операции изофлавоновые конъюгаты в водном экстракте превращаются в изофлавоновые гликозиды с получением обогащенного изофлавоновыми гликозидами экстракта. Превращение, как было обнаружено, зависит от pH и температуры водного экстракта.
Интервал pH для превращения изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые глокозиды находится в пределах от примерно 6 до примерно 13,5. pH водного экстракта должен доводиться до желаемого pH, если необходимо, с помощью подходящего основания, щелочи или реагента с щелочными свойствами, если pH нужно повысить, или, если pH нужно понизить, с помощью подходящей кислоты или кислотного реагента. Превращение изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые гликозиды, как было обнаружено, катализируется основанием, и таким образом, наиболее предпочтительно использовать высокий pH для достижения быстрого превращения. Наиболее предпочтительным pH для превращения изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые гликозиды является pH, равный от примерно 9 до примерно 11.
Температурный интервал для превращения изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые гликозиды находится в пределах от примерно 2oC до примерно 121oC. Температурный интервал, при котором легко происходит превращение, зависит от pH водного экстракта. Изобретатели обнаружили, что превращение легко происходит при более низких температурах, когда pH относительно высок. Например, при pH, равном примерно 11, превращение происходит легко и эффективно в температурном интервале от примерно 5oC до примерно 50oC. При pH, равном примерно 9 эффективное превращение происходит в температурном интервале от примерно 45oC до примерно 75oC. Когда pH водного экстракта относительно низок, превращение происходит при более высоких температурах. Например, при pH, равном примерно 6, превращение происходит в температурном интервале от примерно 80oC до примерно 121oC. При предпочтительном осуществлении превращение производится при температуре примерно 35oC и pH, равном примерно 11. При другом предпочтительном осуществлении превращение производится при температуре, равной примерно 73oC и pH, равном примерно 9.
Период времени для превращения изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые гликозиды на первой стадии зависит непосредственно от используемых интервалов pH и температуры. Такие сроки превращения обычно находятся в интервале от примерно 15 минут до нескольких часов или более. Превращение происходит более быстро при более высоком pH и при более высокой температуре. При pH, равном примерно 9, превращение является по существу полным в течение от примерно 4 часов до примерно 6 часов при 73oC. При наиболее предпочтительном осуществлении изофлавоновые конъюгаты превращаются в изофлавоновые гликозиды в течение от примерно 30 минут до примерно 1 часа, предпочтительно, примерно 45 минут при pH, равном примерно 11 и при температуре, равной примерно 35oC.
Первая стадия превращения предпочтительно производится в водной системе. В системе могут также присутствовать другие совместимые с водой компоненты, такие как спирт с низким молекулярным весом и другие водорастворимые растворители.
Первая стадия изофлавонового превращения в высшей степени эффективна, причем превращается по крайней мере большая часть, а предпочтительно по существу все количество, изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые гликозиды. Обычно от примерно 80% до примерно 100% изофлавоновых конъюгатов превращается в изофлавоновые гликозиды. Путем использования предпочтительных параметров реакции, описанных выше, возможно достичь превращения, равного 95% или более. Эти высокие степени превращения особенно привлекательны для крупномасштабных процессов промышленного значения.
На второй стадии или операции превращения изофлавонов в изофлавоновые гликозиды, полученные на первой стадии, а также изофлавоновые гликозиды, ранее присутствовавшие в водном экстракте, превращаются в изофлавоновые агликоны с помощью ферментативной реакции. Это превращение производит обогащенный изофлавоновым агликоном экстракт из экстракта, обогащенного изофлавоновым гликозидом.
Вторая стадия превращения, как было обнаружено, зависит от концентрации ферментов, присутствующих в экстракте, и их характеристик. Ферментами, необходимыми для осуществления превращения, являются ферменты, способные к расщеплению гликозидной связи между изофлавоновой частью и молекулой глюкозы изофлавоновых гликозидов. При предпочтительном осуществлении ферментами являются ферменты сахаридаза, эстераза или глюкоамилаза, способные к расщеплению 1,4-гликозидных связей.
Концентрация ферментов, необходимая для превращения изофлавоновых гликозидов в изофлавоновые агликоны, зависит от ряда факторов, включая тип ферментов, присутствующих в водном экстракте, распределения концентраций ферментов, активности ферментов, pH и температуры экстракта во время превращения. Ферменты по природе могут присутствовать в экстракте и происходить или из растительного белкового материала или появляться в результате микробного роста в экстракте. Такие естественно присутствующие ферменты называются здесь "остаточными" ферментами, а ферменты, которые добавляют к экстракту, называются здесь "дополнительными" ферментами.
В экстракте должно присутствовать достаточно фермента, чтобы превратить по крайней мере большую часть, а предпочтительно, по существу все количество изофлавоновых гликозидов в изофлавоновые агликоны. Обычно, если остаточных ферментов в экстракте недостаточно для осуществления превращения, к экстракту должны быть добавлены дополнительные ферменты. В предпочтительном варианте осуществления дополнительные ферменты добавляются в экстракт независимо от того, достаточно ли остаточных ферментов присутствует в экстракте, так как добавление дополнительных ферментов заметно снижает время, необходимое для осуществления по существу полного превращения гликозидов в агликоны. Если добавляются дополнительные ферменты, эти дополнительные ферменты должны добавляться так, чтобы концентрация присутствующего фермента в целом составляла от примерно 0,1% до примерно 10% по весу от растительного белкового материала по сухому веществу.
Дополнительные ферменты выбираются на основе оптимальной активности при выбранных условиях pH и температуры и стоимостной эффективности. Дополнительные ферменты являются ферментами, способными к расщеплению связи между изофлавоновой частью и молекулой глюкозы изофлавоновых гликозидов, такими как ферменты сахаридаза, эстераза и глюкоамилаза, способными к расщеплению 1,4-гликозидных связей. Предпочтительными дополнительными ферментами являются коммерчески доступные ферменты - альфа- и бетаглюкозидазы, бетагалактозидазы, глюкоамилазы и пектиназы. Особенно предпочтительными ферментами являются такие, как биопектиназа 100L (которая предпочтительно используется при интервале pH от примерно 3 до примерно 6), биопектиназа 300L (оптимальный интервал pH от примерно 3 до примерно 6), биопектиназа OK 70L (оптимальный интервал pH от примерно 3 до примерно 6), биолактаза 30000 (оптимальный интервал pH от примерно 3 до примерно 6), нейтральная лактаза (оптимальный интервал pH от примерно 6 до примерно 8), все из которых доступны от Quest International, 1833, 57th Street, Office Box 3917, Sarasota, Florida 34243. Также особенно предпочтительными являются лактаза F (которая предпочтительно используется в интервале pH от примерно 4 до примерно 6) и лактаза 50000 (оптимальный интервал pH от примерно 4 до примерно 6), оба доступны от Amano International Enzyme Co., Inc., Post Office Box 1000, Troy, Virginia 22974. Другие особенно предпочтительные дополнительные ферменты включают G - зим G990 (оптимальный интервал pH от примерно 4 до примерно 6) и концентрат лактазы грибов Enzeco (оптимальный интервал pH от примерно 4 до примерно 6), доступный от Enzyme Development Corporation, 2 Penn Plaza, Suite 2439, New York, New York 10121; лактозим 3000L (который предпочтительно используется в интервале pH от примерно 6 до примерно 8) и альфа - Gal 600L (который предпочтительно используется в интервале pH от примерно 4 до примерно 6,5), доступные от Novo Nordisk Bioindustrials, Inc., 33 Turner Road, Danbury, Connecticut 0681; максипакт L2000 (который предпочтительно используется в интервале pH от примерно 4 до примерно 6), доступный от Gist Brocades Food Ingredients, Inc. , King of Prussia, Pennsylvania, 19406; и нейтральная лактаза (которая предпочтительно используется в интервале pH от примерно 6 до примерно 8), доступная от Pfizer Food Science Group, 205 East 42nd Street, New York, New York 10017.
Интервал pH для превращения изофлавоновых гликозидов в изофлавоновые агликоны составляет от примерно 3 до примерно 9. pH, который используется, зависит непосредственно от типа используемого фермента и должен выбираться в соответствии с этим. Остаточный фермент активен в интервале pH от примерно 7 до примерно 9, хотя полагают, что pH экстракта снижается в течение превращения. Дополнительные ферменты активны в оптимальном интервале pH, указываемом производителем фермента, как представлено выше для нескольких конкретных ферментов. Обычно дополнительные ферменты активны или в нейтральном интервале pH от примерно 6 до примерно 8, или в кислом интервале pH от примерно 3 до примерно 6.
Значение pH может быть доведено до желаемого значения для проведения второй стадии изофлавонового превращения. В большинстве случаев pH снижается с относительно высокого или основного pH первой стадии изофлавонового превращения путем добавления одной или более подходящих кислот, таких как уксусная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, хлористоводородная кислота или любой другой подходящий реагент.
Температурный интервал для второй стадии изофлавонового превращения составляет от примерно 5oC до примерно 75oC. Температура значительно влияет на активность ферментов и следовательно на скорость превращения. Дополнительные ферменты могут быть активны при температуре свыше 70oC, например Альфа - Gal 600L активен при 75oC, однако предпочтительно проводить превращение при более низких температурах, чтобы избежать дезактивации фермента. При предпочтительном осуществлении превращение производится в интервале температур от примерно 35oC до примерно 45oC.
Время, необходимое для второй стадии изофлавонового превращения, зависит от факторов, связанных с ферментом, в частности от концентрации и температуры и pH системы. В большинстве случаев возможно достичь полного превращения в течение 24 часов, однако предпочтительно, чтобы дополнительный фермент добавлялся до заметного увеличения скорости реакции. Избираемые дополнительный фермент, концентрация фермента, pH и температура, предпочтительно, вызывают по существу полное превращение в течение 2 часов, и наиболее предпочтительно, в течение 1 часа.
Очень высокие степени превращения в этом процессе являются такими, что по крайней мере большинство, а предпочтительно по существу все количество изофлавоновых гликозидов, присутствующих в экстракте, превращается в агликоновую форму. Термин "большая часть" (или "большинство") относится к степени превращения изофлавоновых гликозидов в изофлавоновые агликоны, равной по меньшей мере примерно 50%. Термин "по существу все количество" относится к степени превращения изофлавоновых гликозидов в изофлавоновые агликоны, равной по меньшей мере примерно 80%, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере 90%. Такие высокие степени превращения на надежной основе замечательны и желательны для применения в промышленном масштабе. Обогащенный изофлавоновым агликоном белковый материал может быть выделен из обогащенного изофлавоновым агликоном экстракта. По завершении второй стадии изофлавонового превращения pH, если необходимо, доводится добавлением кислоты до примерно изоэлектрической точки растительного белка, для белка сои обычно в интервале от примерно 4,0 до примерно 5,0, а предпочтительно в интервале между примерно 4,4 и примерно 4,6. Белок осаждается в результате изменения pH экстракта в виде творожистой массы. Значительная часть изофлавоновых агликонов захватывается этой творожистой массой. После осаждения творожистая масса, или осажденный белок, отделяется от экстракта в виде белкового материала, обогащенного изофлавоновыми агликонами. Предпочтительно, обогащенный изофлавоновым агликоном белковый материал отделяется от экстракта путем центрифугирования или фильтрации.
При наиболее предпочтительном осуществлении промывание выделенного белкового материала или полностью исключается или сводится к минимуму, чтобы существенно снизить удаление изофлавоновых агликонов из белкового материала. Промывание белкового материала водой может поэтому полностью исключаться или ограничиваться однократным промыванием водой, во время которого весовое отношение воды к белковому материалу составляет от примерно 2:1 до примерно 6: 1. Отсутствие промывания осажденной творожистой массы дает белковый материал, обогащенный желаемыми уровнями изофлавонов, хотя могло бы производиться и более интенсивное промывание с меньшим выходом изофлавонов.
Выделенный белковый материал может быть обезвожен путем центрифугирования или концентрирования или их сочетания и высушен обычным путем. Предпочтительное осуществление не предназначено для ограничения конкретных средств удаления воды, хотя предпочтительно использовать общепринятые методы обезвоживания и высушивания, такие как центрифугирование и распылительная сушка, для получения высушенного белкового материала.
В уже описанном способе предпочтительного осуществления используется как первая, так и вторая стадия изофлавонового превращения сразу же после получения экстракта. Данное изобретение также включает способ, при котором растительный материал, содержащий изофлавоновые конъюгаты и белок, экстрагируется водным экстрагентом, имеющим pH примерно выше изоэлектрической точки этого белка; первая стадия изофлавонового превращения производится в экстракте; белковый материал, содержащий изофлавоновые гликозиды, отделяется от экстракта; и вторая стадия изофлавонового превращения производится в белковом материале. Стадии в этом способе могут выполняться тем же общим способом, что и описанный выше.
Данное изобретение, кроме того, включает способ, при котором образуется густая водная суспензия из растительного материала, содержащего изофлавоновые конъюгаты и белок, причем первая стадия изофлавонового превращения производится в водной суспензии; растительный материал экстрагируется водным экстрагентом, имеющим pH выше примерно изоэлектрической точки белка; а вторая стадия изофлавонового превращения производится у флавоновых гликозидов в экстракте. Водная суспензия растительного материала предпочтительно содержит до 20% растительного материала по весу. Стадии этого способа могут выполняться тем же самым общим способом, что и описанный выше. Кроме того, белковый материал, содержащий изофлавоновые агликоны, можно выделять из экстракта после второй стадии изофлавонового превращения способом, описанным выше.
Данное изобретение также включает способ, в котором растительный белковый материал, содержащий изофлавоновые конъюгаты и белок, экстрагируется водным экстрактом, имеющим pH выше примерно изоэлектрической точки белка: белковый материал, содержащий изофлавоновые конъюгаты выделяется из экстракта; из белкового материала образуется густая водная суспензия, и первая и вторая стадии изофлавонового превращения производятся в густой водной суспензии белкового материала. Густая водная суспензия белкового материала предпочтительно содержит до 30% белкового материала по весу. Стадии этого процесса могут выполняться тем же самым общим способом, что и описанный выше.
Предполагают, что как первая, так и вторая стадии изофлавонового превращения могли бы выполняться в густой водной смеси растительного материала, содержащего изофлавоновые конъюгаты и белок, в экстракте такого растительного материала и в белковом материале, выделенном из такого экстракта. Данное изобретение включает комбинацию любых из предшествующих стадий с образованием обогащенного изофлавоновым агликоном экстракта белкового материала.
Материал с высоким содержанием генистеина и материал с высоким содержанием дайдзеина может производиться из полученного обогащенного изофлавоновым агликоном экстракта или белкового материала. Как он использован здесь, материал с высоким содержанием генистеина определяется как растительный материал, содержащий по меньшей мере 40% генистеина, а наиболее предпочтительно, по меньшей мере 90% генистеина, вместе с остаточным растительным материалом, который является остаточным соевым материалом, если материал с высоким содержанием генистеина получают из материала сои. Материал с высоким содержанием дайдзеина содержит по крайней мере 40% дайдзеина вместе с остаточным растительным материалом, который является соевым материалом, если материал с высоким содержанием дайдзеина получают из соевого материала.
Обогащенный изофлавоновым агликоном белковый материал можно сначала промыть и отфильтровать для удаления нежелательных солей и сахаров. Обогащенный изофлавоновым агликоном белковый материал смешивают с водой, причем вода присутствует в отношении до 6:1 к белковому материалу. Вода должна быть холодной, чтобы свести к минимуму растворение изофлавоновых агликонов в воде, а предпочтительно, имеет температуру от примерно 5oC до примерно 30oC. Белковый материал перемешивают с водой в течение от примерно 15 до примерно 30 минут и затем белковый материал отфильтровывают от воды, используя любые общепринятые средства фильтрования, предпочтительно, фильтрование смеси через обычную фильтровальную бумагу. Стадия фильтрования и промывания может быть исключена, если желательно, чтобы свести к минимуму любую потенциальную потерю изофлавоновых агликонов с промывной водой.
Обогащенный изофлавоновым агликоном белковый материал можно затем экстрагировать водно-спиртовым экстрагентом для удаления изофлавоновых агликонов из белкового материала и получения экстракта изофлавоновых агликонов. В качестве спиртового компонента экстрагента предпочтительны спирты с низким молекулярным весом, такие как метанол и особенно этанол. Было обнаружено, что изофлавоновые агликоны растворимы в экстрагенте с почти всеми концентрациями спирта. Изофлавоновые агликоны особенно хорошо растворимы, когда экстрагент содержит спирт в концентрации между примерно 30% и примерно 90%, и наиболее предпочтительно, когда экстрагент содержит спирт в концентрации между примерно 60% и примерно 80%. Хотя водно-спиртовой раствор является предпочтительным растворителем, для осуществления экстрагирования изофлавоновых агликонов из белкового материала можно использовать и другие растворители, включая воду, ацетонитрил, метиленхлорид, ацетон и этилацетат.
Экстрагирование производится с использованием минимального количества экстрагента. Предпочтительно, чтобы весовое отношение экстрагента к обогащенному изофлавоновым агликоном белковому материалу не превышало 11:1. Экстрагирование может производиться любым общепринятым методом экстрагирования, включая противоточную экстракцию или двойную экстракцию, когда весовое отношение объединенных экстрактов к белковому материалу не превышает 11:1.
При предпочтительном осуществлении белковый материал первоначально экстрагируется 80 %-ным этанолом, причем весовое отношение экстрагента к белковому материалу составляет примерно 6:1. Экстрагент отделяется от белкового материала с помощью общепринятых средств отделения, таких как центрифуга или фильтр-пресс, и экстракт собирают. Белковый материал экстрагируют снова 80%-ным этанолом, причем весовое отношение экстрагента к белковому материалу составляет примерно 4: 1. Экстрагент снова собирают и добавляют к первоначально собранному экстракту. Белковый материал затем промывают быстрым потоком воды, причем весовое отношение воды к белковому материалу составляет примерно 4:1, и вода добавляется к собранным экстрактам.
Хотя экстракция может проводиться при любом pH, предпочтительно, чтобы экстрагент имел pH от примерно 7 до примерно 10. Образование белкового геля исключается в предпочтительном интервале pH, и если белковый материал нужно возвратить в исходное состояние, также как и экстракт изофлавоновых агликонов, образование нежелательных аминокислотных побочных продуктов в белковом материале исключается в предпочтительном интервале pH.
Экстрагирование может проводиться при любой температуре вплоть до точки кипения экстрагента, и предпочтительно оно проводится в интервале между примерно 25oC и примерно 70oC. Чтобы осуществить максимальное выделение изофлавоновых агликонов из белкового материала, предпочтительно, чтобы экстрагирование проводилось при температуре от примерно 50oC до примерно 70oC, наиболее предпочтительно, при примерно 60oC.
После экстрагирования материал с высоким содержанием генистеина и материал с высоким содержанием дайдзеина можно выделить из экстракта изофлавоновых агликонов путем контакта экстракта с материалом адсорбента в течение времени, достаточного для выделения материала с высоким содержанием генистеина и высоким содержанием дайдзеина из экстракта. При предпочтительном осуществлении материалы с высоким содержанием генистеина и высоким содержанием дайдзеина выделяют из экстракта путем высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с обращенной фазой. Генистеин и дайдзеин отделяют от других изофлавонов и примесей в экстракте путем элюирования экстракта через частицы материала адсорбента, которые свободно связывают генистеин, дайдзеин, другие изофлавоны и примеси специфичным для соединения образом, тем самым обеспечивая возможность отделения каждого из соединений.
Экстракт изофлавоновых агликонов первоначально фильтруют для удаления нерастворимого материала, который может закупорить колонку для ВЭЖХ. Экстракт можно фильтровать обычным способом ультрафильтрации, при котором также удаляется остаточный белок, который может находиться в экстракте.
Колонку ВЭЖХ готовят путем заполнения обычной коммерчески доступной колонки ВЭЖХ конкретным адсорбентным материалом, который будет обратимо связывать генистеин, дайдзеин, другие изофлавоны и примеси специфичным для соединения образом. Адсорбентный материал может быть любым наполнителем для ВЭЖХ с обращенной фазой, однако предпочтительный наполнитель может быть выбран по критериям поглотительной способности, эффективности разделения и стоимости. Одним из таких наполнителей является кромасил C18 (Kromasil C18) 16 мкм, бусины 100 A, доступны от фирмы Eka Nobet, Nobel Industries, Sweden.
Отфильтрованный экстракт пропускают через заполненную колонку для ВЭЖХ до тех пор, пока все связывающие сайты колонки полностью насытятся изофлавонами, что определяется по появлению изофлавонов в вытекающем из колонки. Колонку для ВЭЖХ можно затем элюировать полярным элюентом для осуществления разделения. При предпочтительном осуществлении элюент является водным раствором спирта. Водно-спиртовой элюент может иметь содержание спирта, равное примерно 50% спирта, чтобы получить как хорошее разделение, так и хорошую растворимость изофлавонов. Спирт, предпочтительно, является метанолом или этанолом, причем этанол предпочтительнее, когда материалы с высоким содержанием генистеина или высоким содержанием дайдзеина должны использоваться для пищевых или лекарственных препаратов.
Материалы с высоким содержанием генистеина и высоким содержанием дайдзеина собирают из вытекающего с колонки. Фракция элюента, содержащая дайдзеин, вытекает из колонки первой, за ней следует фракция глицитеина, за которой следует фракция более полярного генистеина. Фракции дайдзеина и генистеина собирают по мере их элюирования из колонки. Можно также собрать фракцию глицетеина, если желательно.
Спирт из фракций может быть удален путем выпаривания, после чего материалы с высоким содержанием генистеина и высоким содержанием дайдзеина и материал с высоким содержанием глицетеина можно получить с помощью обычных методов выделения, таких как центрифугирование или фильтрование. Выделенный материал с высоким содержанием генистеина содержит по меньшей мере 40% генистеина, и предпочтительно, по меньшей мере 90% генистеина, вместе с остаточным растительным материалом, который является остаточным материалом сои, если генистеин выделяют из соевой сыворотки.
Выделенный материал с высоким содержанием дайдзеина содержит по меньшей мере 40% дайдзеина вместе с остаточным растительным материалом.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Данное изобретение иллюстрируется более детально следующими примерами с использованием соевого материала в качестве растительного материала. Примеры предназначены для иллюстрации и не должны интерпретироваться как лимитирование или ограничение объема изобретения каким-либо образом.
Данное изобретение иллюстрируется более детально следующими примерами с использованием соевого материала в качестве растительного материала. Примеры предназначены для иллюстрации и не должны интерпретироваться как лимитирование или ограничение объема изобретения каким-либо образом.
Как отмечено выше, соевый материал включает "семейства" изофлавонов генистеина, дайдзеина и глицитеина, имеющие соответствующих представителей гликозидов, конъюгатов и агликонов, причем семейство генистеина содержит конъюгаты 6' - OMal - генистин и 6'' - OAc - генистин, гликозид генистин и агликон генистеин, семейство дайдзеина содержит конъюгаты 6'' - OMal - дайдзин и 6'' - OAc - дайдзин, гликозид дайдзин и агликон дайдзеин; и семейство глицитеина содержит конъюгат 6''- OMal-глицитин, гликозид глицитин и агликон глицитеин. В следующих таблицах относительные концентрации изофлавонов определяются количественно в виде процента от всего семейства изофлавонов. Например, в семействе изофлавонов: % генистина + % 6'' - OMal-генистина +% 6'' - OAc-генистина +% генистеина = 100%. Степень превращения конъюгатов в гликозиды и гликозидов в агликоны может определяться сравнением процента каждого типа соединения в изофлавоновом семействе.
Пример 1
В первом эксперименте исследовано превращение изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые гликозиды в экстракте сои. Степень превращения определяется количественным снижением процента малонатных и ацетатных эфиров изофлавонового семейства в сочетании с соответствующим количественным повышением процента гликозида того же самого изофлавонового семейства.
В первом эксперименте исследовано превращение изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые гликозиды в экстракте сои. Степень превращения определяется количественным снижением процента малонатных и ацетатных эфиров изофлавонового семейства в сочетании с соответствующим количественным повышением процента гликозида того же самого изофлавонового семейства.
Экстракт сои приготовлен путем превращения в густую суспензию 400 г тонко растертых обезжиренных соевых хлопьев с помощью 4000 г воды. Показатель pH доводится до 9,7 гидроксидом натрия, и смесь нагревают до 38oC в течение 15 минут при перемешивании. Густую взвесь затем центрифугируют и экстракт собирают в виде супернатанта.
Превращение изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые гликозиды исследовано при условиях различных pH и разных температур. У 600 г образцов экстракта pH доводили до 6, 7, 9 и 11 с помощью хлористоводородной кислоты или гидроксида натрия. Для каждого pH отбирают образец в 600 г, и эти образцы инкубируют при 45oC и 72,5oC в течение 24 часов. Проводили периодический анализ каждого образца в сроки через 0, 2, 4, 6 и 24 часа для определения содержания изофлавонов в образцах. В таблице 1 показано изменение и распределение изофлавонов в течение эксперимента.
Как показано снижением относительных концентраций соединений изофлавоновых конъюгатов 6'' - OMAl и 6'' - OAc и соответствующим повышением концентраций гликозидов генистина, дайдзина и глицитина, первая стадия превращения происходит наиболее быстро и полно при более высоких, более основных условиях pH и более высоких температурах. По существу полное превращение изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые гликозиды происходит в образцах при pH 9 и 11 как при 45oC, так и при 72,5oC, однако дайдзин и глицетин разрушались в образце при pH 11 и 72,5oC. Превращение происходит почти до завершения в образцах при pH 6 и 7 при 72,5oC. Существенное превращение изофлавоновых гликозидов в изофлавоновые агликоны остаточным ферментом в экстракте происходит в образцах при pH 6 и 7 при 45oC, хотя превращение изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые гликозиды не особенно эффективно в этих условиях.
Пример 2
Во втором эксперименте исследовано превращение изофлавоновых гликозидов в изофлавоновые агликоны. Степень превращения определяется количественным снижением процента гликозида изофлавонового семейства в соединении с соответствующим количественным повышением процента агликона того же самого изофлавонового семейства.
Во втором эксперименте исследовано превращение изофлавоновых гликозидов в изофлавоновые агликоны. Степень превращения определяется количественным снижением процента гликозида изофлавонового семейства в соединении с соответствующим количественным повышением процента агликона того же самого изофлавонового семейства.
Обогащенный изофлавоновым гликозидом экстракт получают из соевых хлопьев путем доведения pH соевого экстракта до примерно 11 при температуре примерно 35oC в течение примерно 1 часа. В первых образцах превращения изофлавоновых гликозидов в изофлавоновые акликоны осуществляется с использованием остаточного фермента, присутствующего в обогащенном изофлавоновыми гликозидами экстракте, путем доведения pH образцов до pH 7,0 и pH 9,0 и выдерживания образцов при 45oС в течение 24 часов. Превращение изофлавоновых гликозидов в изофлавоновые акликоны осуществляется с использованием дополнительных ферментов путем введения в образцы обогащенного изофлавоновыми гликозидами экстракта дозы следующих коммерчески доступных ферментов: биолактазы 30000, искомой нейтральной лактазы (Quest Neutral Lactase), лактазы 50000, биопектиназы 1001 и альфа - Gal 600. Количество фермента, добавленного к каждому образцу, показано в таблице 2. У каждого образца pH доводится до такого показателя pH, при котором активен дополнительный фермент, или 4,0, или 4,5, или 7,0. Образцы инкубируют при температурах, меняющихся в интервале от 35oС до 75oC. Образцы отбирают через выбранные сроки и определяют в них содержание изофлавонов.
Как показано преобразованием генистина, дайдзина, и глицитина в генистеин, дайдзеин и глицитеин, соответственно, достигается практически полное преобразование изофлавоновых гликозидов в изофла-воновые агликоны. Выбранные дополнительные ферменты заметно повышают скорость превращения по сравнению с превращением остаточным в экстракте ферментом, производя по существу полное превращение в течение 1 часа при эффективных концентрации, температуре и pH.
Пример 3.
В другом эксперименте обогащенный изофлавоновым агликоном белковый материал выделяют из обогащенного изофлавоновым агликоном экстракта и обычный белковый материал выделяют из обычного экстракта. Содержание изофлавонов в выделенных из каждого экстракта белковых материалах определяется при выделении при pH 4,0, 4,5 и 5,0.
Обогащенный изофлавоновыми агликонами экстракт сои готовят путем: 1) экстрагирования обезжиренных соевых хлопьев водным щелочным раствором; 2) доведения pH экстракта до 11 и выдерживания экстракта при 35oC в течение 1 часа для получения обогащенного изофлавоновыми гликозидами экстракта и 3) добавления 0,1% (от веса твердых веществ в обогащенном изофлавоновыми гликозидами экстракте) лактазы 50000 (Amano International Enzyme Co.) в экстракт, который затем обрабатывают при 50oC и pH 4,5 в течение 1 часа, чтобы получить обогащенный изофлавоновым агликоном экстракт. Также готовят обычный соевый экстракт путем экстрагирования обезжиренных соевых хлопьев водным щелочным раствором.
Из каждого экстракта получают образец, содержащий 10 г твердых веществ, и pH каждого из образцов экстракта доводят до pH 4,5. Белковый материал выделяют из каждого образца путем центрифугирования и декантирования супернатантной сыворотки с белкового материала. Затем определяют содержание изофлавонов в выделенном из каждого образца белковом материале. В таблице 3 показано общее содержание изофлавонов в миллиграммах на образец и процент каждого типа изофлавона из изофлавонового семейства, присутствующего в белковом материале из каждого из образцов.
Сравнивая содержание изофлавонов в белковом материала из обогащенного изофлавоновыми агликонами экстракта и в белковом материале из обычного экстракта, можно видеть, что белковый материал из обогащенного изофлавоновыми агликонами экстракта содержит значительно более высокие количества изофлавоновых агликонов, особенно генистеина и дайдзеина, чем белковый материал из обычного экстракта. Белковый материал из обычного экстракта содержит существенные количества изофлавоновых конъюгатов, которые отсутствуют в обогащенном изофлавоновыми агликонами белковом материале благодаря превращению изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые агликоны в обогащенном изофлавоновыми агликонами экстракте.
В вышеприведенных примерах все проценты, указанные для 6''-OMal-генистина, 6''-OAc-генистина, 6''-OMal-дайдзина, 6''-OAc- дайдзина, глицитина, 6''-OMal-глицитина и глицитеина, являются рассчетными значениями. Указанные проценты или концентрация фермента рассчитаны на граммы коммерческого препарата фермента на 100 г твердого вещества в каждом образце. Нижеследующее является описанием метода количественного определения изофлавонов в соевых продуктах. Изофлавоны экстрагируются из соевых продуктов путем смешивания 0,75 г образца (высушенного распылением или тонко измельченного порошка) с 50 мл растворителя из метанола/воды 80/20. Смесь взбалтывается в течение 2 часов при комнатной температуре с помощью орбитального вибратора. Через 2 часа оставшийся нерастворенным материал удаляют фильтрованием через фильтровальную бумагу Ватман N 42. 5 мл фильтрата разводят 4 мл воды и 1 мл метанола.
Экстрагированные изофлавоны выделяют с помощью ВЭЖХ (высокоэффективной жидкостной хроматографии), используя колонку с обращенной фазой Hewlett Packard С 18 Hypersil. Изофлавоны наносят на колонку и элюируют градиентом растворителя, начиная с 88% метанола, 10% воды и 2% ледяной уксусной кислоты и заканчивая 98% метанола и 2% ледяной уксусной кислоты. При скорости потока, равной 0,4 мл/мин, все изофлавоны - генистин, 6''-O- ацетилгенистин, 6''-O-малонилгенистин, генистеин, дайдзин, 6''-O-ацетилдайдзин, 6''-O-малонилдайдзин, дайдзеин, глицитин и его производные и глицетеин - четко разделяются. Идентификация пиков производилась с помощью ВЭЖХ - масс-спектрометра.
Количественное определение достигается с помощью использования чистых стандартов (генистина, генистеина, дайдзина и дайдзеина), закупленных у Indofine Chemical Company, Sommerville, NJ. Для каждого из вышеуказанных соединений рассчитывают коэффициенты чувствительности (интегрированная область / концентрация) и используют для количественной оценки неизвестных образцов. Для конъюгированных форм, для которых не существуют доступных чистых стандартов, принимается, что коэффициенты чувствительности являются такими же, что и у вещества с родственными молекулами, но они корректируются по разнице молекулярного веса. Этим методом получают количества каждого отдельного изофлавона. Для удобства может быть рассчитано общее количество генистеина, общее количество дайдзеина и общее количество глицитеина и можно представить агрегатный вес этих соединений, если все конъюгированные формы превращаются в их соответствующие неконъюгированные формы. Это общее количество может быть измерено непосредственно методом с использованием кислотного гидролиза для превращения конъюгированных форм.
Осуществления этого изобретения, на которые заявляются права на исключительную собственность или привилегию, определяются нижеследующим.
Claims (27)
1. Способ получения экстракта, обогащенного изофлавоновыми агликонами, из растительного материала, включающий: (1) экстрагирование растительного материала, содержащего изофлавоновые конъюгаты и белок, водой или водной экстрагирующей жидкостью, имеющей pH выше изоэлектрической точки указанного белка в указанном растительном материале, (2) обработку водного экстракта при температуре от 2 до 121oC и pH от примерно 6 до примерно 13,5 в течение периода времени, достаточного для превращения большинства изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые гликозиды, и (3) контактирование фермента, способного к расщеплению гликозидных связей, с изофлавоновыми гликозидами в водном экстракте при температуре от 5 до 75oC и pH от примерно 3 до примерно 9 в течение периода времени, достаточного для превращения изофлавоновых гликозидов в изофлавоновые агликоны.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что дополнительно включает выделение белкового материала, содержащего указанные изофлавоновые гликозиды из водного экстракта после этапа (2), обработку изофлавоновых гликозидов, содержащихся в белковом материале, ферментом, как на этапе (3), и выделение белкового материала, обогащенного изофлавоновыми агликонами.
3. Способ получения экстракта, обогащенного изофлавоновыми агликонами, из растительного материала, включающий: образование водной суспензии указанного растительного материала, содержащей изофлавоновый конъюгат и белок, причем суспензию затем подвергают обработке, как на этапе превращения (2), затем преобразованную суспензию экстрагируют водой или водной экстрагирующей жидкостью с pH выше изоэлектрической точки указанного белка в растительном материале, а изофлавоновые гликозиды в водном экстракте подвергают обработке ферментами, как на этапе (3).
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что для получения обогащенного изофлавоновым агликоном белкового материала белковый материал, содержащий изофлавоновые конъюгаты, выделяют из водного экстракта после стадии (1), формируют водную суспензию белкового материала, содержащего изофлавоновые конъюгаты и в отношении суспензии белкового материала, содержащего изофлавоновые конъюгаты, применяют операции со стадии (2) и (3).
5. Способ по любому из пп.1 - 4, отличающийся тем, что экстрагирование осуществляют при pH от примерно 6 до примерно 10.
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что водный экстракт обрабатывают при значении pH примерно 9 и температуре от 45 до 75oC для превращения изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые гликозиды.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный водный экстракт обрабатывают при значении pH примерно 11 и температуре примерно от 5 до 50oC для превращения изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые гликозиды.
8. Способ по п.2, отличающийся тем, что указанный водный экстракт обрабатывают при значении pH примерно от 9 до примерно 11 и температуре примерно от 5 до 75oC для превращения изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые гликозиды.
9. Способ по любому из пп.1 - 4, отличающийся тем, что контактирование фермента с указанными изофлавоновыми гликозидами включает добавление эффективного количества дополнительного фермента к водной суспензии или экстракту, содержащему изофлавоновые гликозиды.
10. Способ по п.9, отличающийся тем, что дополнительный фермент выбирают из ферментов альфа-галактозидаз, ферментов бета-галактозидаз, ферментов глюкоамилаз, ферментов пектиназ и их комбинаций.
11. Способ по п.9, отличающийся тем, что дополнительный фермент добавляют так, чтобы суммарная концентрация фермента, присутствующего в водном экстракте, составляла от примерно 0,1 до примерно 10% по весу от растительного материала по сухой основе.
12. Способ по любому из пп.1 - 4, отличающийся тем, что растительный материал включает материал сои.
13. Способ по любому из пп.1 - 4, отличающийся тем, что способ осуществляют таким образом, чтобы большая часть изофлавоновых конъюгатов и изофлавоновых гликозидов перешла в изофлавоновые агликоны.
14. Способ по п.13, отличающийся тем, что способ осуществляют таким образом, что изофлавоновые конъюгаты и изофлавоновые гликозиды полностью перешли в изофлавоновые агликоны.
15. Способ по п.1 или 3, отличающийся тем, что дополнительно включает стадию доведения pH экстракта примерно до изоэлектрической точки указанного белка для осаждения белкового материала, содержащего белок и изофлавоновые агликоны.
16. Способ по п.15, отличающийся тем, что белковый материал промывается водой в весовом количестве меньше, чем 6-кратный вес осажденного белкового материала.
17. Способ по п.3, отличающийся тем, что водная суспензия содержит до 20% по весу указанного растительного материала.
18. Способ по п.4, отличающийся тем, что водная суспензия содержит до примерно 30% по весу указанного растительного материала.
19. Способ извлечения материала с высоким содержанием генистеина или дайдзеина из обогащенного изофлавоновыми агликонами материала, включающий: - экстрагирование обогащенного изофлавоновым агликоном растительного белкового материала экстрагентом для получения обогащенного изофлавоновым агликоном экстракта, и - контактирование указанного экстракта с адсорбентным материалом в течение времени, достаточного для выделения материала с высоким содержанием генистеина или дайдзеина, соответственно, из указанного обогащенного изофлавоновым агликоном экстракта.
20. Способ по п.19, отличающийся тем, что экстрагент является водным раствором спирта, содержащим от примерно 30 до примерно 90% спирта.
21. Способ по п.19, отличающийся тем, что экстрагент имеет значение pH, равное примерно изоэлектрической точке указанного белка в обогащенном изофлавоновым агликоном растительном белковом материале.
22. Способ по п. 19, отличающийся тем, что обогащенный изофлавоновым агликоном растительный белковый материал экстрагируется указанным экстрагентом, причем весовое отношение экстрагента к материалу не превышает примерно 11:1.
23. Способ по п.19, отличающийся тем, что обогащенный изофлавоновым агликоном экстракт пропускают через указанный адсорбентный материал с помощью элюента, чтобы указанный экстракт проконтактировал с адсорбентным материалом для выделения материала с высоким содержанием генистеина или, соответственно, дайдзеина, из указанного экстракта благодаря дифференциальному обратимому связыванию генистеина или, соответственно, дайдзеина, в указанном экстракте с адсорбентным материалом.
24. Способ по п.19, отличающийся тем, что дополнительно включает стадию удаления остаточного растительного белкового материала из экстракта.
25. Способ по п.19, отличающийся тем, что материал с высоким содержанием генистеина содержит, по крайней мере, 40% генистеина.
26. Способ по п.25, отличающийся тем, что материал с высоким содержанием генистеина содержит, по крайней мере, 90% генистеина.
27. Способ по п.19, отличающийся тем, что материал с высоким содержанием дайдзеина содержит, по крайней мере. 40% дайдзеина.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US08/709,026 | 1996-09-06 | ||
US08/709,026 US5726034A (en) | 1996-09-06 | 1996-09-06 | Aglucone isoflavone enriched vegetable protein extract and protein material, and high genistein and daidzein content materials and process for producing the same |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU97115235A RU97115235A (ru) | 1999-06-20 |
RU2152434C1 true RU2152434C1 (ru) | 2000-07-10 |
Family
ID=24848181
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU97115235/13A RU2152434C1 (ru) | 1996-09-06 | 1997-09-05 | Способ получения экстракта, обогащенного изофлавоновыми агликонами, из растительного материала (варианты), способ извлечения материала с высоким содержанием генистеина или дайдзеина из обогащенного изофлавоновыми агликонами материала |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5726034A (ru) |
EP (1) | EP0827698B2 (ru) |
JP (1) | JPH1099089A (ru) |
KR (1) | KR100412116B1 (ru) |
CN (1) | CN1210407C (ru) |
AT (1) | ATE192284T1 (ru) |
AU (1) | AU718810B2 (ru) |
BR (1) | BR9704589A (ru) |
CA (1) | CA2214665C (ru) |
DE (1) | DE69701842T3 (ru) |
DK (1) | DK0827698T4 (ru) |
ES (1) | ES2147660T5 (ru) |
PT (1) | PT827698E (ru) |
RU (1) | RU2152434C1 (ru) |
TW (1) | TW574225B (ru) |
Families Citing this family (64)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ATE275959T1 (de) | 1992-05-19 | 2004-10-15 | Graham Edmund Kelly | Verwendung von isoflavon phyto-östrogen extrakten von soja oder klee |
US6140469A (en) * | 1993-10-12 | 2000-10-31 | Protein Technologies International, Inc. | Protein isolate having an increased level of isoflavone compounds and process for producing the same |
US5827682A (en) * | 1995-06-07 | 1998-10-27 | Protein Technologies International, Inc. | Two-step conversion of vegetable protein isoflavone conjugates to aglucones |
US5821361A (en) * | 1996-06-11 | 1998-10-13 | Protein Technologies International, Inc. | Recovery of isoflavones from soy molasses |
US6579561B2 (en) | 1996-08-09 | 2003-06-17 | Protein Technologies International, Inc. | Aglucone isoflavone enriched vegetable flour and vegetable grit and process for making the same from a vegetable material containing isoflavone |
US6521282B1 (en) | 1996-08-09 | 2003-02-18 | Protein Technologies International, Inc. | Aglucone isoflavone enriched vegetable flour and grit |
AUPO203996A0 (en) * | 1996-08-30 | 1996-09-26 | Novogen Research Pty Ltd | Therapeutic uses |
JP3883018B2 (ja) * | 1997-02-06 | 2007-02-21 | キッコーマン株式会社 | イソフラボン化合物の製造方法 |
US6146668A (en) | 1997-04-28 | 2000-11-14 | Novogen, Inc. | Preparation of isoflavones from legumes |
CA2287965C (en) * | 1997-05-01 | 2009-10-20 | Graham Edmund Kelly | Treatment or prevention of menopausal symptoms and osteoporosis |
US5834605A (en) * | 1997-07-07 | 1998-11-10 | Liu; Yaguang | Safe pharmaceutical composition for treating and preventing alcohol abuse and increasing immune function |
US6369200B2 (en) | 1997-10-15 | 2002-04-09 | Central Soya Company, Inc. | Soy isoflavone concentrate process and product |
US6228993B1 (en) | 1998-10-12 | 2001-05-08 | Central Soya Company, Inc. | Soy isoflavone concentrate process and product |
US6320028B1 (en) | 1997-10-15 | 2001-11-20 | Central Soya Company, Inc. | Soy isoflavone concentrate process and product |
KR100413025B1 (ko) * | 1997-10-20 | 2004-04-29 | 솔레 엘엘씨 | 아글루콘이소플라본강화식물성단백질유장,유장단백질재료,아글루콘이소플라본재료,제니스테인함량이높은재료및디아드제인함량이높은재료및식물성단백질유장으로부터이들을제조하는방법 |
AUPP112497A0 (en) * | 1997-12-24 | 1998-01-22 | Novogen Research Pty Ltd | Compositions and method for protecting skin from UV induced immunosupression and skin damage |
US6132795A (en) * | 1998-03-15 | 2000-10-17 | Protein Technologies International, Inc. | Vegetable protein composition containing an isoflavone depleted vegetable protein material with an isoflavone containing material |
AUPP260798A0 (en) | 1998-03-26 | 1998-04-23 | Novogen Research Pty Ltd | Treatment of medical related conditions with isoflavone containing extracts of clover |
US5994508A (en) * | 1998-04-13 | 1999-11-30 | Protein Technologies International, Inc. | Isoflavone rich protein isolate and process for producing |
US6083553A (en) * | 1998-06-05 | 2000-07-04 | Protein Technologies International, Inc. | Recovery of isoflavones from soy molasses |
US6013771A (en) * | 1998-06-09 | 2000-01-11 | Protein Technologies International, Inc. | Isoflavone rich protein isolate and process for producing |
US6150399A (en) | 1998-06-30 | 2000-11-21 | Abbott Laboratories | Soy-based nutritional products |
CA2344458A1 (en) | 1998-09-30 | 2000-04-06 | Amano Enzyme Inc. | Novel enzyme composition and production method and use thereof |
US6703051B1 (en) | 1998-10-13 | 2004-03-09 | Solae, Llc | Process for separating and recovering protein and isoflavones from a plant material |
US6630178B1 (en) | 1998-11-25 | 2003-10-07 | Nutri Pharma Asa | Composition comprising soy protein, dietary fibres and a phytoestrogen compound and use thereof in the prevention and/or treatment of cardiovascular diseases |
EP1133307B1 (en) | 1998-11-25 | 2003-06-11 | Nutri Pharma ASA | Use of a composition comprising soy protein, dietary fibres and a phytoestrogen compound in the prevention and/or treatment of pulmonary diseases |
IL143173A0 (en) * | 1998-12-02 | 2002-04-21 | Cognis Corp | A process for the recovery of isoflavone values from natural sources |
US6544566B1 (en) | 1999-04-23 | 2003-04-08 | Protein Technologies International, Inc. | Composition containing plant sterol, soy protein and isoflavone for reducing LDL cholesterol |
US7285297B1 (en) | 1999-04-23 | 2007-10-23 | Archer-Daniels-Midland Company | Method of reducing low density liproprotein cholesterol concentration |
AUPQ266199A0 (en) * | 1999-09-06 | 1999-09-30 | Novogen Research Pty Ltd | Compositions and therapeutic methods involving isoflavones and analogues thereof |
US20090233999A1 (en) * | 1999-09-06 | 2009-09-17 | Novogen Research Pty Ltd | Compositions and therapeutic methods involving isoflavones and analogues thereof |
KR20010007901A (ko) * | 1999-10-20 | 2001-02-05 | 서주원 | 귀리 유래의 베타-글루코시다제 및 그를 이용한제니스테인 또는 다이드제인의 제조 방법 |
JP4763202B2 (ja) * | 1999-12-15 | 2011-08-31 | 株式会社アミノアップ化学 | 担子菌培養物由来の新規物質、その製造方法及び用途 |
EP1239743B1 (en) * | 1999-12-17 | 2009-09-16 | Mitsunori Ono | Water-soluble bean-based extracts |
DE60114151T2 (de) * | 2000-01-11 | 2006-07-20 | Maabarot Project Launching And Management Ltd. | Extraktion von flavonoiden |
AUPQ504300A0 (en) | 2000-01-11 | 2000-02-03 | Biorex Health Limited | Extraction of flavonoids |
AUPQ520300A0 (en) * | 2000-01-21 | 2000-02-17 | Novogen Research Pty Ltd | Food product and process |
KR100768681B1 (ko) | 2000-03-29 | 2007-10-23 | 아마노 엔자임 가부시키가이샤 | 디글리코시다제에 의한 아글리콘 및 아글리콘을 함유하는 풍미 개선 식품의 제조 방법 |
JP2001302689A (ja) * | 2000-04-19 | 2001-10-31 | Protein Technol Internatl Inc | 植物材料からタンパクおよびイソフラボン類を分離回収する方法 |
EP1174144A1 (en) * | 2000-07-20 | 2002-01-23 | Linnea S.A. | Dry extract rich in isoflavones and process of preparation |
AUPR363301A0 (en) * | 2001-03-08 | 2001-04-05 | Novogen Research Pty Ltd | Dimeric isoflavones |
AU2002344683B2 (en) * | 2001-06-29 | 2007-08-23 | Maabarot Project Launching And Management Ltd | "Flavonoid concentrates" |
AUPR602201A0 (en) * | 2001-06-29 | 2001-07-26 | Biorex Health Limited | Flavonoid concentrates |
US8668914B2 (en) * | 2002-07-24 | 2014-03-11 | Brigham Young University | Use of equol for treating skin diseases |
WO2004039327A2 (en) | 2002-10-29 | 2004-05-13 | Colorado State University Research Foundation | Use of equol for treating androgen mediated diseases |
EP1545206B1 (en) | 2002-07-24 | 2020-03-04 | Children's Hospital Medical Center | Compositions and products containing enantiomeric equol, and methods for their making |
CN1329411C (zh) * | 2002-08-05 | 2007-08-01 | 不二制油株式会社 | 大豆蛋白的制造方法 |
US8580846B2 (en) | 2002-10-29 | 2013-11-12 | Brigham Young University | Use of equol for ameliorating or preventing neuropsychiatric and neurodegenerative diseases or disorders |
KR100449887B1 (ko) * | 2003-10-31 | 2004-09-22 | 주식회사 렉스진바이오텍 | 이소플라본을 함유하는 괴각 추출물의 제조방법 |
EP2305272A1 (en) * | 2004-04-28 | 2011-04-06 | Brigham Young University | Use of equol for treating skin diseases |
US8782775B2 (en) | 2007-09-24 | 2014-07-15 | Apple Inc. | Embedded authentication systems in an electronic device |
US8600120B2 (en) | 2008-01-03 | 2013-12-03 | Apple Inc. | Personal computing device control using face detection and recognition |
US20090176871A1 (en) * | 2008-01-07 | 2009-07-09 | Schoenwetter Phillip E | Treatments for Domestic Animals Having Sex Hormone Deficiencies Using Soy Germ Isoflavones |
US9002322B2 (en) | 2011-09-29 | 2015-04-07 | Apple Inc. | Authentication with secondary approver |
US8769624B2 (en) | 2011-09-29 | 2014-07-01 | Apple Inc. | Access control utilizing indirect authentication |
US9898642B2 (en) | 2013-09-09 | 2018-02-20 | Apple Inc. | Device, method, and graphical user interface for manipulating user interfaces based on fingerprint sensor inputs |
US10482461B2 (en) | 2014-05-29 | 2019-11-19 | Apple Inc. | User interface for payments |
DK179186B1 (en) | 2016-05-19 | 2018-01-15 | Apple Inc | REMOTE AUTHORIZATION TO CONTINUE WITH AN ACTION |
KR102185854B1 (ko) | 2017-09-09 | 2020-12-02 | 애플 인크. | 생체측정 인증의 구현 |
KR102301599B1 (ko) | 2017-09-09 | 2021-09-10 | 애플 인크. | 생체측정 인증의 구현 |
US11170085B2 (en) | 2018-06-03 | 2021-11-09 | Apple Inc. | Implementation of biometric authentication |
US11100349B2 (en) | 2018-09-28 | 2021-08-24 | Apple Inc. | Audio assisted enrollment |
US10860096B2 (en) | 2018-09-28 | 2020-12-08 | Apple Inc. | Device control using gaze information |
CN112154728B (zh) * | 2020-08-20 | 2022-04-22 | 扬州大学 | 一种富含大豆异黄酮的大豆粉末及其制作方法与应用 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0714927B2 (ja) * | 1988-04-06 | 1995-02-22 | キッコーマン株式会社 | イソフラボン化合物の製造法 |
US5351384A (en) * | 1993-08-06 | 1994-10-04 | Chrysler Corporation | Method of installing instrument panel assemblies in automotive vehicle bodies |
US5320949A (en) * | 1993-10-12 | 1994-06-14 | Protein Technologies International, Inc. | Process for producing aglucone isoflavone enriched vegetable protein fiber |
CN1055932C (zh) * | 1993-10-12 | 2000-08-30 | 蛋白质技术国际公司 | 葡糖苷配基异黄酮富集的植物蛋白提取物和分离物及生产方法 |
JP3787844B2 (ja) * | 1993-10-12 | 2006-06-21 | アーチャー ダニエルズ ミッドランド カンパニー | アグルコンイソフラボン濃縮植物タンパク質乳漿,乳漿タンパク質,及びその製造方法 |
CN1055931C (zh) * | 1993-10-12 | 2000-08-30 | 蛋白质技术国际公司 | 富含糖苷配基异黄酮植物蛋白浓缩物及其制备方法 |
US5885632A (en) * | 1993-12-14 | 1999-03-23 | Nichimo Co., Ltd. | Process for preparing a product from a pulse crop as a starting material and a food containing the product prepared from a pulse crop as a starting material |
US5554519A (en) * | 1995-08-07 | 1996-09-10 | Fermalogic, Inc. | Process of preparing genistein |
-
1996
- 1996-09-06 US US08/709,026 patent/US5726034A/en not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-08-25 TW TW86112184A patent/TW574225B/zh not_active IP Right Cessation
- 1997-09-01 AU AU36755/97A patent/AU718810B2/en not_active Ceased
- 1997-09-02 BR BR9704589A patent/BR9704589A/pt active Search and Examination
- 1997-09-03 CA CA002214665A patent/CA2214665C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-09-05 EP EP97306893A patent/EP0827698B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-09-05 ES ES97306893T patent/ES2147660T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-09-05 KR KR1019970045912A patent/KR100412116B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-09-05 RU RU97115235/13A patent/RU2152434C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1997-09-05 DE DE69701842T patent/DE69701842T3/de not_active Expired - Fee Related
- 1997-09-05 DK DK97306893T patent/DK0827698T4/da active
- 1997-09-05 PT PT97306893T patent/PT827698E/pt unknown
- 1997-09-05 AT AT97306893T patent/ATE192284T1/de active
- 1997-09-05 CN CNB971205868A patent/CN1210407C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1997-09-08 JP JP9243184A patent/JPH1099089A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ATE192284T1 (de) | 2000-05-15 |
DE69701842T2 (de) | 2000-11-09 |
DE69701842D1 (de) | 2000-06-08 |
ES2147660T3 (es) | 2000-09-16 |
MX9706806A (es) | 1998-03-31 |
AU3675597A (en) | 1998-03-12 |
CN1210407C (zh) | 2005-07-13 |
PT827698E (pt) | 2000-10-31 |
DE69701842T3 (de) | 2008-10-23 |
CA2214665A1 (en) | 1998-03-06 |
EP0827698B2 (en) | 2008-04-09 |
EP0827698A3 (en) | 1998-04-08 |
CA2214665C (en) | 2005-04-12 |
EP0827698A2 (en) | 1998-03-11 |
JPH1099089A (ja) | 1998-04-21 |
KR19980024361A (ko) | 1998-07-06 |
TW574225B (en) | 2004-02-01 |
CN1183475A (zh) | 1998-06-03 |
ES2147660T5 (es) | 2008-10-16 |
BR9704589A (pt) | 1998-09-15 |
AU718810B2 (en) | 2000-04-20 |
KR100412116B1 (ko) | 2004-04-08 |
US5726034A (en) | 1998-03-10 |
EP0827698B1 (en) | 2000-05-03 |
DK0827698T4 (da) | 2008-08-18 |
DK0827698T3 (da) | 2000-08-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2152434C1 (ru) | Способ получения экстракта, обогащенного изофлавоновыми агликонами, из растительного материала (варианты), способ извлечения материала с высоким содержанием генистеина или дайдзеина из обогащенного изофлавоновыми агликонами материала | |
KR100412117B1 (ko) | 대두당밀로부터이소플라본을회수하는방법 | |
US5637562A (en) | Aglucone isoflavone enriched vegetable protein concentrate and process for producing | |
RU2180662C2 (ru) | Способ превращения изофлавоновых конъюгатов в изофлавоновые агликоны | |
US5851792A (en) | Aglucone isoflavone enriched vegetable protein whey whey protein material aglucone isoflavone material high genistein content material and high daidzein content material and process for producing the same from a vegetable protein whey | |
US6083553A (en) | Recovery of isoflavones from soy molasses | |
KR100413025B1 (ko) | 아글루콘이소플라본강화식물성단백질유장,유장단백질재료,아글루콘이소플라본재료,제니스테인함량이높은재료및디아드제인함량이높은재료및식물성단백질유장으로부터이들을제조하는방법 | |
JP3609273B2 (ja) | アグルコンイソフラボンの豊富な植物タンパク質抽出物及び単離物並びにそれらの製造方法 | |
RU2309603C2 (ru) | Способ получения растительного сывороточного материала, обогащенного аглюконизофлавоном (варианты), способ получения материала с высоким содержанием генистеина и даидзеина | |
AU735303B2 (en) | Aglucone isoflavone enriched vegetable protein whey, whey protein material, aglucone isoflavone material, high genistein content material, and high daidzein content material and process for producing the same from a vegetable protein whey | |
MXPA98000653A (en) | Serum of vegetable protein enriched with aglucone isoflavone, serum protein material, aglucone isoflavone material, genistein high content and material with high content of daidzein, and procedure to produce them from a vege protein serum | |
MXPA97006806A (en) | Extract of vegetable protein and protein material enriched with aglucon isoflavone, and high content genistein and daidzein materials and procedure to produce myself | |
MXPA98003598A (en) | An extract and isolated vegetable protein enriched with aglucone isoflavone, and procedure to produce |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD4A | Correction of name of patent owner | ||
PC4A | Invention patent assignment |
Effective date: 20070202 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090906 |