CN1197116A - Dna内切酶片段多态性在中药材鉴别中的应用 - Google Patents

Dna内切酶片段多态性在中药材鉴别中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN1197116A
CN1197116A CN98100001.0A CN98100001A CN1197116A CN 1197116 A CN1197116 A CN 1197116A CN 98100001 A CN98100001 A CN 98100001A CN 1197116 A CN1197116 A CN 1197116A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dna
internally
illustrative plates
cut enzyme
collection
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN98100001.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1109760C (zh
Inventor
王骏
邵鹏柱
毕培曦
颜辉娥
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chinese University of Hong Kong CUHK
Original Assignee
王骏
邵鹏柱
毕培曦
颜辉娥
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 王骏, 邵鹏柱, 毕培曦, 颜辉娥 filed Critical 王骏
Publication of CN1197116A publication Critical patent/CN1197116A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1109760C publication Critical patent/CN1109760C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及用现代分子生物学技术鉴定和鉴别中药材。本发明的中药材鉴定方法包括如下步骤:a.从样品中提取DNA;b.以步骤a.提取的DNA为模板,以寡核酶酸作为PCR引物,扩增DNA的一部分,所用的引物采自相应DNA的保守区段;而被扩增的DNA则含有相应DNA的非保守区段。c.用适当的内切酶将步骤b.扩增的动物DNA水解成内切酶片段d.将步骤c.产生的内切酶片段电泳,形成内切酶片段图谱;e.将步骤d.所得的内切酶片段图谱与标准动物样品的图谱比较。

Description

DNA内切酶片段多态性在中药材鉴别中的应用
本发明涉及用现代分子生物学技术鉴定和鉴别中药材。传统的鉴定中药材的方法，主要是通过对产品形态的观察，凭经验作出判断。这对于鉴别形态相似的药材，或鉴定已经加工成片状或粉末状的产品难以适用。近年来，也有用化学成分分析法鉴定中药材的(Lang等，1993)。但该方法受材料年龄、生长状况和加工手段诸因素影响，检测结果难以一致可靠。
中药材有效的鉴别和鉴定，可以保障消费者的正当权益，减低不公平的商业竞争，防止误用赝品所引起的中毒或其他医疗事故。因此，寻找有效的中药材鉴别鉴定方法对中医药事业和药材工业的健康发展至关紧要。
植物核糖体脱氧核糖核酸(rDNA)以顺反子18S-ITS1-5.8S-ITS2-26S的形式存在。植物大多拥有该顺反子的重复序列，以头尾相连的方式聚集在染色体上。目前研究显示，18S、5.8S和26S等rDNA基因的碱基对序列非常保守，不同植物间的差别很小；而位于植物rDNA基因之间的ITS1(转录空隙区1)和ITS2(转录空隙区2)的碱基对序列则差别较大。同时由于基因转化和交换的作用，就同一品种植物而言，其rDNA序列大致雷同(Hillis和Dixon，1991)。动物之rDNA也有类似情形。
不同种的动植物，其rDNA序列有较大差异；而这种差别进而导致内切酶片段多态性(RFLP)。基于此，本发明阐述了一种可靠准确地鉴定，鉴别形态相似中药材的新方法。
本发明利用rDNA的遗传属性，取rDNA保守区段的DNA序列为DNA多聚酶引物，扩增相邻的rDNA非保守区段的DNA，然后选用适当的DNA内切酶将扩增之DNA水解，从而建立具有该品种特征的内切图谱，并根据该图谱进行动植物品种的鉴定与鉴别。本发明所述方法并不局限于产生rDNA之RFLP图谱，应可用于产生其他基因或DNA序列之RFLP。因此，本发明的鉴定方法包括下列步骤：(1)提取样品DNA；(2)取保守区段DNA序列为引物，选择性地扩增与之相邻非保守区段的DNA；(3)选择适当的内切酶水解扩增的DNA以形成RFLP图谱；(4)比较样品与真品之RFLP图谱以确定样品的真伪。
在本发明中ITS1-5.8S-ITS2区段的定义是(1)位处寡核苷酸引物18d和28cc(见图6)之间的DNA序列；或(2)位于18d相类似之引物和28cc相类似之引物之间的DNA序列。本发明的技术方案如下：A、提取动植物DNA：
植物DNA提取方法与Draper和Scott(Draper和Scott，1988)所述大致相同，简述如下：干燥的植物材料经70％乙醇和蒸馏水冲洗表面后，在乳钵中与液氮混合并研磨成粉末。粉末样品与12倍体积的CTAB混匀，在56℃水浴中保温30分钟，加入等量的氯仿--异戊醇(24∶1)，离心，取上清液，加0.1体积的10％CTAB溶液，室温放置10分钟后复用氯仿--异戊醇抽取一次，取上清液加等量的CTAB沉淀液，室温放置1小时后以13000g离心15分钟。DNA沉淀物经乙醇纯化后溶解于TE缓冲液(10mM Tris-HCl，pH7.5，1mM EDTA)备用。动物DNA之提取方法也大致相同。B、扩增ITS1-5.8S-ITS2 DNA：
ITS1-5.8S-ITS2 DNA系由PCR扩增得到。反应所用的引物为18d和28cc(Hillis和Dixon，1991)。18d采自植物18S保守区段：3’AGCCATCCTCGCTGCCCGCCACAC3’28cc采自植物26S保守区段5’ACTCGCCGTTACTAGGGGAA3’反应溶液包括：1ng植物DNA，1X Taq缓冲液(10mM Tris-HCl，pH8.3，0.001％明胶)，0.2mM dNTPs，1uM引物(18d和28cc)，以及1个单位的Taq DNA多聚。反应条件为：94℃，5分钟预处理，然后35循环：94℃，1分钟，60℃，1分钟，72℃，2分钟；最后72℃，10分钟延伸。动物rDNA扩增之引物另外设定。C、ITS1-5.8S-ITS2 DNA序列的测定
DNA碱基对序列测定以上述PCR扩增之植物DNA为模板，使用下列诸引物(Hillis和Dixon，1991)：18d：CACACCGCCCGTCGCTCCTACCGA5.8C：TTGCGTTCAAAGACTCGATG5.8d：AACCATCGAGTCTTTGAACGCA28CC：ACTCGCCGTTACTAGGGGAAD、RFLP图谱
使用引物18d和28cc扩增之ITS1-5.8S-ITS2植物DNA经琼胶电泳分离纯化后，选用适当的DNA限制性内切酶水解之。水解产物经苯酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)抽提去蛋白后溶解于20ul的蒸馏水中，然后行5％聚丙烯酰胺凝胶电泳，用硝酸银染色法显示RFLP图谱。以下以植物rDNA RFLP为例，说明本发明的优点
1、由于不同植物之18S和26S rDNA碱基对序列高度相似，而置于18S和26S rDNA之间的ITS1和ITS2之碱基对序列则差别较大，本发明可被广泛应用于植物的鉴定和鉴别；
2、本发明所述的方法重复性高，不受样品材料，物理状况，保存时间等环境因素的制约；
3、本发明所述的方法灵敏度高，数十毫克(mg)样品即能进行实验；
4、使用不同的内切酶可从同一动植物取得多款具有该样品特征的RFLP图谱，从而增加鉴定，鉴别的可靠性；
5、可测定样品的纯度和查验混杂于真品之中的赝品。
附图及其说明：图1：西洋参ITS1-5.8S-ITS2 DNA序列。图2：人参ITS1-5.8S-ITS2 DNA序列。图3：日本人参ITS1-5.8S-ITS2 DNA序列。图4：三七ITS1-5.8S-ITS2 DNA序列。图5：三叶参ITS1-5.8S-ITS2 DNA序列。图6：用于扩增rDNA ITS1-5.8S-ITS2区段之引物。
 18d：3’AGCCATCCTCGCTGCCCGCCACAC 5’
 28cc：5’ACTCGCCGTTACTAGGGGAA 3’图7：西洋参，人参及其赝品之Hinf1 RFLP图谱。M：DNA分子量标准，1：西洋参；2：人参；
3：紫茉莉；
4：商陆；
5-9：不同比例混合之人参，西洋参混合物；
5：西洋参和人参，9∶1；
6：西洋参和人参，7∶3；
7：西洋参和人参，1∶1；
8：西洋参和人参，3∶7；
9：西洋参和人参，1∶9。
图8：西洋参，人参及其赝品之Taq1 RFLP图谱，其余说明与图7同。
图9：西洋参，人参及其赝品之Sau3A RFLP图谱，其余说明与图7同。
现以鉴定西洋参和人参的鉴别为实例，具体阐述本发明如下：
西洋参采集自加拿大，人参采集自中国，紫茉莉和商陆取自香港。实验所用的植物(干品)为50mg。西洋参，人参，紫茉莉与商陆DNA之提取，ITS1-5.8S-ITS2 rDNA之扩增，DNA序列之确定以及内切图谱之产生均按前面所述。西洋参、人参混合物系按不同比例混合两者之粉末而成。西洋参，人参，三七，日本人参(P.japonicusC.A.Mey.)，三叶参(P.trifolius L.)之ITS1-5.8S-ITS2 rDNA碱基对序列已先经确定(见图1至图5)。从西洋参，人参的DNA序列可知两者ITS1-5.8S-ITS2区段存在内切Sau3A1，Hinf1及Taq1RFLP。内切水解rDNA PCR产物的条件如下：rDNA所用量为1.5ug/反应，反应体积为50ul。Taq1反应缓冲液含有100mM NaCl，10mM Tris-HCl，10mM MgCl2，10mM硫基乙醇，pH8.4，以及5ug牛血清清蛋白；反应条件是65℃，4小时。Sau3A1反应缓冲液含有100mMNaCl，10mM Tris-HCl，10mMMgCl2，pH7.3，以及5ug牛血清蛋白；反应条件是37℃，4小时。Hinf1反应缓冲液含有50mMNaCl，10mM Tris-HCl，10mM MgCl2，1mM二硫苏糖醇，pH7.9；反应条件与Sau3A1反应相同。
该三种内切酶作用于西洋参、人参、紫茉莉及商陆所形成的RFLP，载于图7至图9。如图所示该四种植物各有不同之Taq1，Hinf1和Sau3A1 RFLP图谱，互相之间的差异显著，容易辨认。同时RFLP图谱可显示真品的纯度和是否存在赝品，一如图7，图8及图9所示。

Claims (9)

1、如图1所示的西洋参ITS1-5.8S-ITS2 DNA序列。
2、如图2所示的人参ITS1-5.8S-ITS2 DNA序列。
3、如图3所示的日本人参ITS1-5.8S-ITS2 DNA序列。
4、如图4所示的三七ITS1-5.8S-ITS2 DNA序列。
5、如图5所示的三叶参ITS1-5.8S-ITS2 DNA序列。
6、一种鉴定和鉴别草木本中药材的方法，包括下列步骤：
a、从植物样品中提取DNA；
b、以步骤a.提取的DNA为模板，以寡核苷酸作为PCR引物，扩增ITS1-5.8S-ITS2区段DNA，所用的引物分别采自植物18S和26S的保守区段；
c、用适当的内切酶将步骤b.扩增之植物ITS1-5.8S-ITS2 DNA水解成内切酶片段；
d、将步骤c.产生的内切酶片段电泳，形成内切酶片段图谱；
e、将步骤d.所得的内切酶片段图谱与标准植物样品的图谱比较，
7、鉴定和鉴别源自动物中药材的方法，该方法包括下列步骤：
a、从动物样品中提取DNA；
b、以步骤a.提取之DNA为模板，以寡核酶酸作为PCR引物，扩增动物rDNA的一部分，所用的引物采自动物rDNA的保守区段；而所扩增的动物rDNA则含有rDNA的非保守区段。
c、用适当的内切酶将步骤b.扩增的DNA水解成内切酶片段；
d、将步骤c.产生的内切酶片段电泳，形成内切酶片段图谱；
e、将步骤d.所得的内切酶片段图谱与标准动物样品的图谱比较。
8、鉴定和鉴别植物中药材的方法，该方法包括下列步骤：
a、从植物样品中提取DNA；
b、以步骤a.提取之DNA为模板，以寡核酶酸作为PCR引物，扩增DNA的某一特定部分，所用的引物采自相应DNA的保守区段；而被扩增的DNA则含有相应DNA的非保守区段。
c、用适当的内切酶将步骤b.扩增的DNA水解成内切酶片段；
d、将步骤c.产生的内切酶片段电泳，形成内切酶片段图谱；
e、将步骤d.所得的内切酶片段图谱与标准植物样品的图谱比较。
9、鉴定和鉴别动物中药材的方法，该方法包括下列步骤：
a、从动物样品中提取DNA；
b、以步骤a.提取的DNA为模板，以寡核酶酸作为PCR引物，扩增DNA的某一特定部分，所用的引物采自相应DNA的保守区段；而被扩增的DNA则含有相应DNA的非保守区段。
c、用适当的内切酶将步骤b.扩增的动物DNA水解成内切酶片段
d、将步骤c.产生的内切酶片段电泳，形成内切酶片段图谱；
e、将步骤d.所得的内切酶片段图谱与标准动物样品的图谱比较。
CN98100001.0A 1997-01-03 1998-01-04 Dna内切酶片段多态性在中药材鉴别中的应用 Expired - Fee Related CN1109760C (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/778,912 1997-01-03
US08/778,912 US5876977A (en) 1997-01-03 1997-01-03 Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism test for the authentication of traditional chinese medicines
US08/778912 1997-01-03

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1197116A true CN1197116A (zh) 1998-10-28
CN1109760C CN1109760C (zh) 2003-05-28

Family

ID=25114747

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN98100001.0A Expired - Fee Related CN1109760C (zh) 1997-01-03 1998-01-04 Dna内切酶片段多态性在中药材鉴别中的应用

Country Status (2)

Country Link
US (1) US5876977A (zh)
CN (1) CN1109760C (zh)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102505045A (zh) * 2011-11-10 2012-06-20 中国医学科学院药用植物研究所 人参和西洋参快速鉴定方法
CN103339264A (zh) * 2010-08-30 2013-10-02 马来西亚沙捞越州政府 鉴定星毛米仔兰的方法
CN104611424A (zh) * 2015-01-13 2015-05-13 浙江医药高等专科学校 快速鉴别三叶青及其多种伪混品的pcr-rflp方法
CN104830971A (zh) * 2015-03-17 2015-08-12 中国医学科学院药用植物研究所 一种西洋参分子身份证及鉴定方法
CN107227347A (zh) * 2017-06-07 2017-10-03 苏州市李良济健康产业有限公司 一种用于鉴定中药人参的引物对及其应用
CN109182536A (zh) * 2018-09-25 2019-01-11 广东省生物资源应用研究所 一种广地龙的环介导等温扩增检测引物及基于lamp技术鉴定广地龙的方法
CN109295170A (zh) * 2018-09-25 2019-02-01 广东省生物资源应用研究所 一种基于pcr-rflp技术鉴定广地龙的方法

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6309840B1 (en) 1997-01-03 2001-10-30 The Chinese Univerisity Of Hong Kong Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism test for the authentication of herbal Chinese medicines
US6872523B1 (en) * 2000-05-30 2005-03-29 The Board Of Regents Of The University Of Nebraska Materials and methods for molecular detection of clinically relevant pathogenic fungal species
KR100416765B1 (ko) * 2000-07-06 2004-01-31 김형민 인삼의 감별 방법
KR100454913B1 (ko) * 2000-09-20 2004-11-08 변상요 한국산 산삼의 판별방법
US6803215B1 (en) * 2000-11-03 2004-10-12 The Chinese University Of Hong Kong Sequence characterized amplified region (SCAR) test for the authentication of traditional Chinese medicinal materials
JP4301789B2 (ja) * 2001-11-01 2009-07-22 ハウス食品株式会社 特定植物属の検出方法
KR100452087B1 (ko) * 2002-06-26 2004-10-12 주식회사 네오바이오 Ｄｎａ지문분석방법을 이용한 산삼확인법
KR20020074435A (ko) * 2002-08-27 2002-09-30 신순식 산삼의 감정 방법
WO2006016762A1 (en) * 2004-08-13 2006-02-16 Bio-Medic Research Center Daegu Hanny University A method for genetic identification of ginseng species and the kit using thereby
KR100610312B1 (ko) 2004-08-13 2006-08-10 대구한의대학교산학협력단 인삼의 종간 유전자 감별 키트
KR100673066B1 (ko) 2004-08-13 2007-01-22 대구한의대학교산학협력단 인삼의 종간 유전자 감별 방법
JP2009531464A (ja) 2006-03-29 2009-09-03 メリアル リミテッド 連鎖球菌に対するワクチン
US20070264638A1 (en) * 2006-05-10 2007-11-15 Sigma-Aldrich Co. Identification of ginseng and its imposters using genetic variations
CN110066878B (zh) * 2019-03-20 2023-06-02 中山大学 一种脑心通制剂中地龙药材的dna分子鉴别方法
CN110747290B (zh) * 2019-11-29 2022-05-17 中国医学科学院药用植物研究所 一种its2序列扩增通用引物、鉴定中药材的方法及试剂盒
CN110964844B (zh) * 2019-12-31 2023-01-03 星阵（广州）基因科技有限公司 一种用于定性参苓白术散的引物、试剂盒及方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4965188A (en) * 1986-08-22 1990-10-23 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences using a thermostable enzyme

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103339264A (zh) * 2010-08-30 2013-10-02 马来西亚沙捞越州政府 鉴定星毛米仔兰的方法
CN102505045A (zh) * 2011-11-10 2012-06-20 中国医学科学院药用植物研究所 人参和西洋参快速鉴定方法
CN104611424A (zh) * 2015-01-13 2015-05-13 浙江医药高等专科学校 快速鉴别三叶青及其多种伪混品的pcr-rflp方法
CN104830971A (zh) * 2015-03-17 2015-08-12 中国医学科学院药用植物研究所 一种西洋参分子身份证及鉴定方法
CN107227347A (zh) * 2017-06-07 2017-10-03 苏州市李良济健康产业有限公司 一种用于鉴定中药人参的引物对及其应用
CN109182536A (zh) * 2018-09-25 2019-01-11 广东省生物资源应用研究所 一种广地龙的环介导等温扩增检测引物及基于lamp技术鉴定广地龙的方法
CN109295170A (zh) * 2018-09-25 2019-02-01 广东省生物资源应用研究所 一种基于pcr-rflp技术鉴定广地龙的方法
CN109182536B (zh) * 2018-09-25 2021-11-05 广东省科学院动物研究所 一种广地龙的环介导等温扩增检测引物及基于lamp技术鉴定广地龙的方法

Also Published As

Publication number Publication date
US5876977A (en) 1999-03-02
CN1109760C (zh) 2003-05-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1197116A (zh) Dna内切酶片段多态性在中药材鉴别中的应用
Wang et al. A gene expression screen.
CN101365803B (zh) 采用高通量测序技术的改进的转录谱描述策略
CN110408716A (zh) 含有多种内标准基因特异片段的dna标准样品及其应用
CN101654709B (zh) 利用sts引物鉴定人参品种的方法
CN101348833B (zh) 金耳与粗毛韧革菌的its区序列组及用其鉴定金耳的方法
Bridge The history and application of molecular mycology
AU717453B2 (en) Extraction, amplification and sequential hybridization of fungal cell DNA and process for detection of fungal cells in clinical material
CN106947805B (zh) 基于ARMS-PCR法检测人外周血游离DNA中septin9基因甲基化的荧光PCR试剂盒及体系
CN105603106A (zh) 基于its序列位点的鉴别桃仁与苦杏仁的pcr方法及试剂盒
US5693501A (en) Compounds and methods to determine presence of Histoplasma capsulatum
CN110373488A (zh) 一种检测转基因成分的dna标准样品及其应用
Kowalczyk et al. Practical aspects of genetic identification of hallucinogenic and other poisonous mushrooms for clinical and forensic purposes
CN110184376B (zh) 高卢蜜环菌的pcr-rflp鉴别方法
US20240167076A1 (en) Selective enrichment
US6309840B1 (en) Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism test for the authentication of herbal Chinese medicines
EP1558758A2 (en) Molecular identification of aspergillus species
KR101974175B1 (ko) 인삼 속 7종의 엽록체 게놈 서열의 완전 해독 기반 종간 구별 snp 마커와 프라이머 세트 및 이의 용도
KR101272530B1 (ko) 엽록체 분자 마커 및 이를 이용한 한국산 대청부채 원산지 추적 방법
CN117925885B (zh) 一种鉴定药用芍药栽培品种的est-ssr标记引物及其应用
CN114164296B (zh) 一种用于检测寡雄腐霉菌的引物探针组合物、试剂盒及应用和检测方法
KR102268679B1 (ko) 산딸기속 식물의 종 구별용 조성물
KR100991219B1 (ko) 인삼과 화기삼의 구별을 위한 마커, 상기 마커를 증폭하기위한 프라이머, 및 이들의 용도
CN111518938B (zh) 鉴定长芒苋、糙果苋和沙地苋单粒种子的基于SNP位点的CAPs分子标记及其应用
Wardi et al. Molecular identification of Uncaria gambir [Hunter] Roxb. through DNA barcoding

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: THE CHINESE UNIV. OF HONG KONG

Free format text: FORMER OWNER: WANG JUN

Free format text: FORMER OWNER: SHAO PENGZHU; BI PEIXI; YAN HUIE

Effective date: 20030418

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20030418

Address after: Sha Tin, New Territories, Hongkong

Patentee after: The Chinese University of Hong Kong

Address before: 100026 Beijing Chaoyang District solidarity Hubei two

Co-patentee before: Shao Pengzhu

Patentee before: Wang Jun

Co-patentee before: Bi Peixi

Co-patentee before: Yan Huie

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20030528

Termination date: 20150104

EXPY Termination of patent right or utility model