CN1189176C - 黄芪甲甙组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及黄芪甲甙组合物及其制备方法。该组合物中的活性成分来自中药黄芪的三萜皂甙类化合物，且其中的有效成分为黄芪甲甙。该方法是先将黄芪用水等溶剂提取，经过分离纯化得到粗制黄芪总皂甙，然后经皂甙水解及重结晶得到高含量的黄芪甲甙组合物。本发明操作过程简单，转化率高，成本低，适合工业化生产。

Description

黄芪甲甙组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种黄芪甲甙组合物及其制备方法。

背景技术

黄芪是豆科植物蒙古黄芪或膜夹黄芪的干燥根，临床上主要用于气虚乏力，食少便溏，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿，痈疽难溃，久溃不敛，血虚瘘黄，内热消渴，慢性肾炎蛋白尿，糖尿病，心脑血管病，抗病毒等疾病，其主要活性成分是以黄芪甲甙为主的三萜皂甙类化合物。

目前，制备黄芪总皂甙的方法是，将黄芪用乙醇提取，提取液浓缩回收乙醇完全，残渣加水混悬，然后用正丁醇萃取，分取正丁醇液蒸干，得黄芪总皂甙。通过这种方法制备的黄芪总皂甙，其所含的黄芪甲甙只有10-20％。为了获得高含量的黄芪总皂甙，通常是将粗制黄芪总皂甙再上硅胶或氧化铝柱，经溶剂梯度洗脱，收集含黄芪甲甙的洗脱液蒸干即得。与本发明相比，传统方法存在明显的不足，如含量低，溶剂消耗大，工艺复杂，周期长，成本高，不适合工业化生产。

由于黄芪中黄芪甲甙的含量很低，通常在0.1％左右，用普通的方法很难获得高含量的黄芪甲甙组合物。只有通过将黄芪中部分皂甙水解转化为黄芪甲甙，才能够获得高含量的黄芪甲甙组合物。

发明内容

本发明的目的在于克服传统工艺的不足，省去了正丁醇有机溶剂，避免了层析柱梯度洗脱，提供了一种高效、简单的方法并获得高含量的黄芪甲甙组合物。

本发明的另一目的是通过提取、分离、水解转化等手段提供一种高含量的黄芪甲甙组合物及其制备方法。

高含量的黄芪甲甙组合物使杂质减少，不但改善了中成药常有的剂量大，易吸潮性，而且在治疗心脑血管等疾病药效显著，避免有些杂质所导致的副作用。

从黄芪中得到的粗制黄芪总皂甙包括乙酰黄芪皂甙、异黄芪皂甙、黄芪皂甙等，它们的基本结构通式如下列(I)式所示，而黄芪甲甙的结构式如下列(II)式所示。

式中：R₁、R₂、R₃为Ac或H

凡R₁、R₂、R₃位具有Ac基的化合物，碱都能使其酯键断裂脱去酰基，所以式(I)的化合物经碱水解，可以得到结构式为(II)的黄芪甲甙。

因此，本发明采用的技术方案是：

取粗制黄芪总皂甙，用碱水溶解完全，经温度60-100℃的水浴加热0.5-3小时，使其水解，可见白色沉淀析出，自然冷却后过滤，经干燥得白色沉淀，即为黄芪甲甙含量大于50％，尤其是大于75％的黄芪甲甙组合物。为了进一步制得高含量的黄芪甲甙组合物，将上述白色沉淀用甲醇加热回流溶解后，自然冷却或加水重结晶，得到黄芪甲甙含量大于90％的组合物。

本发明黄芪甲甙组合物，主要由从中药黄芪干燥根经提取、分离、精制的黄芪甲甙组成，该组合物中黄芪甲甙的含量在50％以上，其制备方法包括如下步骤：

(1)取黄芪原料，用水作溶剂加热回流提取；

(2)提取液过滤后直接上大孔树脂柱，上柱完成后，用水冲洗干净，改用70-95％的乙醇洗脱，至检测洗脱液中无黄芪总皂甙(通常以黄芪甲甙计)；

(3)洗脱液在60℃-75℃减压浓缩至干膏，得粗制黄芪总皂甙；

(4)将粗制黄芪总皂甙用碱水充分溶解，经温度60-100℃的水浴加热0.5-3小时，使其水解，可见白色沉淀析出，自然冷却后过滤，经干燥得白色沉淀。

上述第(1)步骤中，提取溶剂可改用甲醇、乙醇或正丁醇，从生产成本角度考虑，优先使用水作溶剂进行提取，提取方法可以是渗漉、回流或其他可行的操作方式。为保证提取的完全，水的用量可适当增大，通常用原料重量的10-20倍的水进行热回流提取。

为有利于有效成分的分离，水提取液需要分散在适当的载体上，例如本发明的技术方案中是使用了HPD-100、300、400、500、600，或D101、1300、AB-8大孔树脂(不排除其他可行的载体物质)，从上样量、吸附率、解吸速度考虑，优选HPD-100大孔树脂。上柱完成后，用清水冲洗干净，然后使用乙醇洗脱。根据本发明优选的技术方案，将事先处理好的大孔树脂装柱，对所用层析柱的规格和材质无特殊要求，可根据实际生产的需要选定，并按常规操作方法装填，装柱量通常不少于柱高的2/3，最好选用直径与柱高比在1∶5-1∶6的柱。乙醇的洗脱速度优选为1000-1500毫升/分钟。

收集的洗脱液在75℃以下减压回收乙醇至干膏，优选65-70℃。所得干膏经皂甙碱水解进一步精制得到所述的黄芪甲甙组合物。本发明所用的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、氨水，从成本角度考虑，优选氢氧化钠。

根据本发明的技术方案，将该组合物制成一定形式的药物制剂，该制剂除活性成分外，还添加固体或液体赋形剂。其特征在于：含有上述黄芪甲甙组合物的片剂、胶囊、滴丸、软胶囊、粉针或大、小针剂。

本发明通过科学可行的方法从黄芪中经提取、分离、水解转化等一系列步骤，特别是碱水解转化这一关键步骤，制得黄芪甲甙含量大于50％，尤其是大于75％的黄芪甲甙组合物，符合国家药品监督管理局《新药审批办法》规定的中药二类的原料标准，并进一步将该组合物制成各种可用的制剂。

本发明提供了一种含量高、成分明确、质量可控、药效确切、副作用小的黄芪甲甙组合物及其制备方法，该组合物在治疗慢性肾炎蛋白尿、糖尿病、心脑血管病等效果明显。本发明的制备工艺已经通过多批生产验证，证明其重复性、稳定性都好，原料的得率高，适合工业化生产。

具体实施方式

实施例中，所用的提取用水为自来水，所用乙醇为药用级，氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾为工业级。黄芪药材产地为山东烟台；大孔树脂购自河北沧州宝恩化工有限公司及南开大学化工厂；黄芪总皂甙的检测通常是以黄芪甲甙计，薄层色谱法检测黄芪甲甙的方法在本领域是公知的，在此不作限定，不予详述。

黄芪总皂甙中黄芪甲甙的含量测定采用高效液相色谱(HPLC)外标法，液相条件为：

流动相：乙氰∶水＝36∶64

检测器：蒸发光散射检测器

流速：0.8L/分钟

色谱柱：C18柱，250cm×4.6mm，粒径5μm

柱温：30℃

1、标准曲线

准确称取黄芪甲甙标准品10.0mg，以甲醇溶解转移至10mL容量瓶并定容至刻度，从中精密量取0.6，0.8，1.0，1.4，1.8，2.5mL，分别置于10mL容量瓶中用甲醇定容至刻度，分别从中精密吸取20μL注入高效液相色谱仪，作出谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，可绘制标准曲线：

线性范围：60-250μg/mL

回归方程：Y＝1.0019+2.0206X

相关系数：r＝0.9991

2、黄芪总皂甙中黄芪甲甙的测定

准确称取黄芪总皂甙20.0mg，以甲醇溶解转移至100mL容量瓶并定容至刻度，作为供试品溶液。从中精密吸取20μL注入高效液相色谱仪，求出峰面积代入回归方程算出黄芪甲甙的含量。

实施例一：

取干燥的黄芪原料切成1-3mm的薄片，装入热回流提取罐，用10倍量的水浸泡1h，然后加热回流提取4h，放出提取液，过滤，收集滤液。

取1/2药材量的HPD-100大孔树脂，水湿法装柱，乙醇冲洗至洗脱液加水不产生浑浊止，然后改用水冲洗至无乙醇残留。将上述滤液通过大孔树脂柱，上柱完成后，用水冲洗干净，稍后改用75％乙醇洗脱，洗脱速度为1000毫升/分钟，收集洗脱液，随时检测，至洗脱液中不含黄芪总皂甙成分(通常以黄芪甲甙计)，将洗脱液于70℃下减压浓缩至干，得棕黄色粗制黄芪总皂甙。

将上述粗制黄芪总皂甙用1％的氢氧化钠溶液溶解，经温度60℃的水浴加热3h，使其水解，可见白色沉淀析出，自然冷却后过滤，经80℃干燥得白色沉淀，高效液相测定该白色沉淀中黄芪甲甙的含量为80％。将该白色沉淀加30倍量的甲醇热回流溶解，乘热过滤，滤液自然冷却，析出白色针晶，干燥，测定其中黄芪甲甙的含量95％。

实施例二：

取干燥的黄芪原料药切成1-3mm的薄片，装入热回流提取罐，用15倍量的水浸泡1h，然后加热回流提取4h，放出提取液，过滤，收集滤液。

取1/2药材量的HPD-300大孔树脂，乙醇湿法装柱，乙醇冲洗至洗脱液加水不产生浑浊止，然后改用水冲洗至无乙醇残留。将上述滤液通过大孔树脂柱，上柱完成后，用水冲洗干净，稍后改用80％乙醇洗脱，洗脱速度为1200毫升/分钟，收集洗脱液，随时检测，至洗脱液中不含黄芪皂甙成分(通常以黄芪甲甙计)，将洗脱液于65℃下减压浓缩至干，得棕黄色粗制黄芪总皂甙。

将上述粗制黄芪总皂甙用3％的氢氧化钠溶液溶解，经温度70℃的水浴加热2h，使其水解，可见白色沉淀析出，自然冷却后过滤，经80℃干燥得白色沉淀，高效液相测定该白色沉淀中黄芪甲甙的含量为75％。

实施例三：

取干燥的黄芪原料药切成1-3mm的薄片，装入热回流提取罐，用15倍量的水浸泡1h，然后加热回流提取4h，放出提取液，过滤，收集滤液。

取2/3药材量的HPD-400大孔树脂，乙醇湿法装柱，乙醇冲洗至洗脱液加水不产生浑浊止，然后改用水冲洗至无乙醇残留。将上述滤液通过大孔树脂柱，上柱完成后，用水冲洗干净，稍后改用90％乙醇洗脱，洗脱速度为1500毫升/分钟，收集洗脱液，随时检测，至洗脱液中不含黄芪皂甙成分(通常以黄芪甲甙计)，将洗脱液于75℃下减压浓缩至干，得棕黄色粗制黄芪总皂甙。

将上述粗制黄芪总皂甙用5％的氢氧化钠溶液溶解，经温度80℃的水浴加热2h，使其水解，可见白色沉淀析出，自然冷却后过滤，经80℃干燥得白色沉淀，高效液相测定该白色沉淀中黄芪甲甙的含量为76％。

实施例四：

取干燥的黄芪原料药切成1-3mm的薄片，装入热回流提取罐，用20倍量的水浸泡1h，然后加热回流提取4h，放出提取液，过滤，收集滤液。

取药材量的AB-8大孔树脂，乙醇湿法装柱，乙醇冲洗至洗脱液加水不产生浑浊止，然后改用水冲洗至无乙醇残留。将上述滤液通过大孔树脂柱，上柱完成后，用水冲洗干净，稍后改用95％乙醇洗脱，洗脱速度为1200毫升/分钟，收集洗脱液，随时检测，至洗脱液中不含黄芪皂甙成分(通常以黄芪甲甙计)，将洗脱液于75℃下减压浓缩至干，得棕黄色粗制黄芪总皂甙。

将上述粗制黄芪总皂甙用7％的氢氧化钠溶液溶解，经温度90℃的水浴加热1.5h，使其水解，可见白色沉淀析出，自然冷却后过滤，经80℃干燥得白色沉淀，高效液相测定该白色沉淀中黄芪甲甙的含量为77％。

实施例五：

取干燥的黄芪原料药切成1-3mm的薄片，装入热回流提取罐，用15倍量的水浸泡1h，然后加热回流提取4h，放出提取液，过滤，收集滤液。

取药材量的D-101大孔树脂，乙醇湿法装柱，乙醇冲洗至洗脱液加水不产生浑浊止，然后改用水冲洗至无乙醇残留。将上述滤液通过大孔树脂柱，上柱完成后，用水冲洗干净，稍后改用85％乙醇洗脱，洗脱速度为1200毫升/分钟，收集洗脱液，随时检测，至洗脱液中不含黄芪皂甙成分(通常以黄芪甲甙计)，将洗脱液于70℃下减压浓缩至干，得棕黄色粗制黄芪总皂甙。

将上述粗制黄芪总皂甙用3％的氢氧化钾溶液溶解，经温度100℃的水浴加热1h，使其水解，可见白色沉淀析出，自然冷却后过滤，经80℃干燥得白色沉淀，高效液相测定该白色沉淀中黄芪甲甙的含量为75％。

实施例六：

取干燥的黄芪原料药切成1-3mm的薄片，装入热回流提取罐，用15倍量的水浸泡1h，然后加热回流提取4h，放出提取液，过滤，收集滤液。

取药材量的1300大孔树脂，乙醇湿法装柱，乙醇冲洗至洗脱液加水不产生浑浊止，然后改用水冲洗至无乙醇残留。将上述滤液通过大孔树脂柱，上柱完成后，用水冲洗干净，稍后改用90％乙醇洗脱，洗脱速度为1200毫升/分钟，收集洗脱液，随时检测，至洗脱液中不含黄芪皂甙成分(通常以黄芪甲甙计)，将洗脱液于60℃下减压浓缩至干，得棕黄色粗制黄芪总皂甙。

将上述粗制黄芪总皂甙用5％的碳酸钾溶液溶解，经温度100℃的水浴加热1h，使其水解，可见白色沉淀析出，自然冷却后过滤，经80℃干燥得白色沉淀，高效液相测定该白色沉淀中黄芪甲甙的含量为75％。

实施例七：

黄芪甲甙组合物      10g

羧甲基纤维素钠      5g

PEG6000             80g

十二烷基硫酸钠      5g

将以上辅料粉碎混匀于150℃加热熔化，使之成为熔融状态，然后滴制成滴丸。

实施例八：

取黄芪甲甙组合物1000mg溶于20mL冰醋酸中，然后加水及其它附加剂，经脱碳过滤除菌，用无菌操作法制成5mg/100mL的250mL输液，低温保存(小于15℃)。

Claims (7)

1、一种黄芪甲甙组合物，主要由从中药黄芪干燥根经提取、分离、精制的黄芪甲甙组成，其特征在于：该组合物中黄芪甲甙的含量在50％以上，其制备方法包括如下步骤：

(1)取黄芪原料，用水作溶剂加热回流提取；

(2)提取液过滤后直接上大孔树脂柱，上柱完成后，用水冲洗干净，改用70-95％的乙醇洗脱，至检测洗脱液中无黄芪总皂甙；

(3)洗脱液在60℃-75℃减压浓缩至干膏，得粗制黄芪总皂甙；

(4)将粗制黄芪总皂甙用碱水充分溶解，经温度60-100℃的水浴加热0.5-3小时，使其水解，可见白色沉淀析出，自然冷却后过滤，经干燥得白色沉淀。

2、权利要求1所述黄芪甲甙组合物在制备治疗慢性肾炎蛋白尿、糖尿病、心脑血管病药物中的应用。

3、一种如权利要求1所述的黄芪甲甙组合物的制备方法，其特征在于该制备方法包括如下步骤：

(1)取黄芪原料，用水作溶剂加热回流提取；

(2)提取液过滤后直接上大孔树脂柱，上柱完成后，用水冲洗干净，改用70-95％的乙醇洗脱，至检测洗脱液中无黄芪总皂甙；

(3)洗脱液在60℃-75℃减压浓缩至干膏，得粗制黄芪总皂甙；

(4)将粗制黄芪总皂甙用碱水充分溶解，经温度60-100℃的水浴加热0.5-3小时，使其水解，可见白色沉淀析出，自然冷却后过滤，经干燥得白色沉淀。

4、根据权利要求3所述的方法，其特征在于所用的大孔树脂为HPD-100、300、400、500、600，或D101、1300、AB-8。

5、根据权利要求3所述的方法，其特征在于乙醇的洗脱速度为1000-1500毫升/分钟。

6、根据权利要求3所述的方法，其特征在于所用的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾或氨水。

7、根据权利要求3所述的方法，其特征在于其还包括将已得到的白色沉淀物经进一步精制的过程，所述进一步精制包括：将白色沉淀用甲醇加热回流溶解后，自然冷却或加水重结晶，得到的组合物经高效液相法测定黄芪甲甙含量在90％以上。