CN118079021A - 使用与抑胃肽受体（gipr）拮抗剂偶联的glp-1受体激动剂治疗或改善代谢紊乱 - Google Patents

使用与抑胃肽受体（gipr）拮抗剂偶联的glp-1受体激动剂治疗或改善代谢紊乱 Download PDF

Info

Publication number
CN118079021A
CN118079021A CN202410129086.1A CN202410129086A CN118079021A CN 118079021 A CN118079021 A CN 118079021A CN 202410129086 A CN202410129086 A CN 202410129086A CN 118079021 A CN118079021 A CN 118079021A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
light chain
variable region
chain variable
heavy chain
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202410129086.1A
Other languages
English (en)
Inventor
Y·程
C·内蒂罗加纳库尔
J·R·霍尔德
B·吴
J·R·法尔西
B·J·赫贝里希
K·沈
L·P·米兰达
S-C·卢
M·M·维念特-埃利森
S·斯塔尼斯劳斯
J·叶
J·徐
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Amgen Inc
Original Assignee
Amgen Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Amgen Inc filed Critical Amgen Inc
Publication of CN118079021A publication Critical patent/CN118079021A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6847—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a hormone or a hormone-releasing or -inhibiting factor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2869—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against hormone receptors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

提供了使用一种组合物治疗代谢疾病和病症的方法，该组合物包含与GLP‑1受体激动剂偶联的、对GIPR多肽具有特异性的抗原结合蛋白。在各种实施例中，该代谢疾病或病症是2型糖尿病、肥胖、血脂异常、葡萄糖水平升高、胰岛素水平升高和糖尿病性肾病。在某些实施例中，该组合物包含在一个或多个偶联位点处含有半胱氨酸的抗体或其功能片段，其中该GLP‑1受体激动剂经由该半胱氨酸残基的侧链偶联至该抗体或其功能片段。

Description

使用与抑胃肽受体(GIPR)拮抗剂偶联的GLP-1受体激动剂治 疗或改善代谢紊乱
本申请是原案申请日为2018年1月16日、申请号为201880005883.1(国际申请号为PCT/US2018/013918)、发明名称为“使用与抑胃肽受体(GIPR)拮抗剂偶联的GLP-1受体激动剂治疗或改善代谢紊乱”的专利申请的分案申请。
技术领域
本披露涉及使用与抑胃肽受体(gastric inhibitory peptide receptor，GIPR)的特异性抗原结合蛋白偶联的GLP-1受体激动剂治疗或改善代谢紊乱，例如2型糖尿病、葡萄糖水平升高、胰岛素水平升高、肥胖、非酒精性脂肪肝病、心血管疾病或糖尿病性肾病。其在给予具有代谢紊乱的症状的受试者时提供持续有益作用
背景技术
葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(Glucose-dependent insulinotropicpolypeptide，GIP)是由小肠(十二指肠和空肠)中的K细胞分泌的具有42个氨基酸的单肽。人类GIP是由加工前体GIP(proGIP)得到，前体GIP是由位于染色体17q的基因编码的具有153个氨基酸的前体(Inagaki等人，Mol Endocrinol 1989；3：1014-1021；Fehmann等人，Endocr Rev.1995；16：390-410)。GIP以前称为抑胃多肽。
GIP分泌由食物摄取诱导。GIP在组织中具有多种生理作用，包括促进脂肪细胞中的脂肪储存以及促进胰岛β细胞功能和葡萄糖依赖性胰岛素分泌。GIP和胰高血糖素样多肽-1(GLP-1)是已知的促胰岛素因子(“肠促胰岛素”)。完整GIP经DPPIV迅速降解成无活性形式。在2型糖尿病患者中，GIP的促胰岛素作用丧失，而GLP-1的肠促胰岛素作用保持完整(Nauck等人J.Clinc.Invest.[临床研究杂志]1993；91：301-307)。
GIP受体(GIPR)是胰泌素-胰高血糖素家族G蛋白偶联受体(GPCR)的成员，具有细胞外N-末端、七个跨膜结构域和细胞内C-末端。该家族受体的N-末端细胞外结构域通常被糖基化且形成该受体的识别和结合结构域。GIPR在多种组织，包括胰脏、肠、脂肪组织、心脏、垂体、肾上腺皮质和脑中高度表达(Usdin等人，Endocrinology.[内分泌学]1993，133：2861-2870)。人类GIPR包含466个氨基酸且由位于染色体19q13.3上的基因编码(Gremlich等人，Diabetes.[糖尿病]1995；44：1202-8；Volz等人，FEBS Lett.[欧洲生物化学学会联盟通讯]1995，373：23-29)。研究表明，在人类、大鼠和小鼠中，替代性mRNA剪接导致不同长度的GIP受体变体的产生。
GIPR基因敲除小鼠(Gipr-/-)对高脂肪饮食诱导的体重增加具有抗性且具有改善的胰岛素敏感性和脂质谱。(Yamada等人，Diabetes.[糖尿病]2006，55：S86；Miyawaki等人，Nature Med.[自然医学]2002，8：738-742)。此外，新颖小分子GIPR拮抗剂SKL-14959预防肥胖和胰岛素抗性。(Diabetologia[糖尿病学]2008，51：S373，44th EASD Annual meetingposter[第44届欧洲糖尿病研究协会年会海报])。
总体而言，这些与肥胖和胰岛素抗性的关联表明，抑制GIPR是一种有用的治疗性干预方法。
胰高血糖素样肽-1是由胰高血糖素原基因得到的具有31个氨基酸的肽。它是由肠L细胞分泌且响应于食物摄取而释放以诱导胰脏β细胞分泌胰岛素(Diabetes[糖尿病]2004，53：S3，205-214)。除肠促胰岛素作用外，GLP-1还减少胰高血糖素分泌，延迟胃排空并降低热量摄入(Diabetes Care[糖尿病护理]，2003，26(10)：2929-2940)。GLP-1通过活化GLP-1受体起作用，该受体属于B类G蛋白偶联受体(Endocrinology.[内分泌学]1993，133(4)：1907-10)。GLP-1的功能因被DPP-IV酶迅速降解而受到限制，导致其半衰期为约2分钟。近来，已开发出长效GLP-1受体激动剂(GLP-1 RA)，如艾塞那肽(exenatide)、利拉鲁肽(liraglutide)、度拉糖肽(dulaglutide)，且现正在临床上使用以改善2型糖尿病患者的血糖控制。另外，GLP-1RA还促进患者体重减轻以及血压和血浆胆固醇水平降低(Bioorg.Med.Chem.Lett[生物有机化学和医药化学通讯]2013，23：4011-4018)。
发明内容
在一个方面，本披露提供一种治疗患有代谢紊乱的受试者的方法，该方法包括向该受试者给予治疗有效量的组合物，该组合物包含特异性结合人GIPR的抗原结合蛋白，其中该抗原结合蛋白与GLP-1受体激动剂偶联。在一个实施例中，该代谢紊乱是葡萄糖代谢紊乱。在另一个实施例中，葡萄糖代谢紊乱包括高血糖症且给予该抗原结合蛋白降低了血糖。在另一个实施例中，葡萄糖代谢紊乱包括高胰岛素血症且给予该抗原结合蛋白减少血浆胰岛素。在另一个实施例中，葡萄糖代谢紊乱包括葡萄糖耐受不良且给予该抗原结合蛋白增加葡萄糖耐受性。在另一个实施例中，葡萄糖代谢紊乱包括胰岛素抗性且给予该抗原结合蛋白减小胰岛素抗性。在另一个实施例中，葡萄糖代谢紊乱包括糖尿病。在另一个实施例中，受试者肥胖。在另一个实施例中，给予该组合物减轻肥胖受试者的体重。在另一个实施例中，给予该组合物减小肥胖受试者的体重增加。在另一个实施例中，给予该组合物使肥胖受试者的脂肪量减少。在另一个实施例中，葡萄糖代谢紊乱包括胰岛素抗性且给予该组合物减小肥胖受试者的胰岛素抗性。在另一个实施例中，给予该组合物使肝脂肪变性增加的肥胖受试者的肝脏脂肪变性减轻。在另一个实施例中，给予该组合物使肝脂肪含量增加的肥胖受试者的肝脂肪含量减小。
在一个方面，该组合物包含特异性结合以下蛋白质的抗体或其功能片段，该蛋白质具有与人类GIPR的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该抗体或其功能片段在一个或多个偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代，这些偶联位点选自由以下组成的组：相对于参考序列SEQ ID NO：455，该抗体轻链的D70；相对于参考序列SEQ ID NO：612，该抗体重链的E276；以及相对于参考序列SEQ ID NO：612，该抗体重链的T363；并且该组合物包含GLP-1受体激动剂，其中该GLP-1受体激动剂经由在该一个或多个偶联位点处取代的半胱氨酸残基或非经典氨基酸残基的侧链偶联至该抗体或其功能片段。
在一个实施例中，该人类GIPR具有以下序列，该序列包含选自由SEQ ID NO：3141、SEQ ID NO：3143和SEQ ID NO：3145组成的组的序列。在一个实施例中，该抗体或其功能片段是单克隆抗体、重组抗体、人类抗体、人源化抗体、嵌合抗体、多特异性抗体、或其抗体片段。在一个实施例中，该抗体片段是Fab片段、Fab′片段或F(ab′)2片段。在一个实施例中，该抗体或其功能片段属于IgG1、IgG2、IgG3或IgG4类型。在一个实施例中，该抗体或其功能片段抑制GIP与人类GIPR细胞外部分的结合。
在一个实施例中，该GLP-1受体激动剂是GLP-1(7-37)或GLP-1(7-37)类似物。在一个实施例中，该GLP-1受体激动剂选自由以下组成的组：艾塞那肽、利拉鲁肽、利西拉肽(lixisenatide)、阿必鲁肽(albiglutide)、度拉糖肽、索马鲁肽(semaglutide)和他司鲁肽(taspoglutide)。在一个实施例中，该GLP-1受体激动剂选自由以下组成的组：GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3184)；GLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO：3185)；利拉鲁肽；阿必鲁肽；他司鲁肽；度拉糖肽；索马鲁肽；LY2428757；艾塞丁-4(Exendin-4)(SEQ ID NO：3163)；艾塞丁-3(Exendin-3)(SEQ ID NO：3164)；Leu14-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3165)；Leu14，Phe25-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3166)；Leu14，Ala19，Phe25-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3167)；艾塞丁-4(1-30)(SEQID NO：3168)；Leu14-艾塞丁-4(1-30)(SEQ ID NO：3169)；Leu14，Phe25-艾塞丁-4(1-30)(SEQID NO：3170)；Leu14，Ala19，Phe25-艾塞丁-4(1-30)(SEQ ID NO：3171)；艾塞丁-4(1-28)(SEQID NO：3172)；Leu14-艾塞丁-4(1-28)(SEQ ID NO：3173)；Leu14，Phe25-艾塞丁-4(1-28)(SEQID NO：3174)；Leu14，Ala19，Phe25-艾塞丁-4(1-28)(SEQ ID NO：3175)；Leu14，Lys17，20，Ala19，Glu21，Phe25，Gln28-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3176)；Leu14，Lys17，20，Ala19，Glu21，Gln28-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3177)；辛基Gly14，Gln28-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3178)；Leu14，Gln28，辛基Gly34-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3179)；Phe4，Leu14，Gln28，Lys33Glu34，Ile35，36，Ser37-艾塞丁-4(1-37)(SEQ ID NO：3180)；Phe4，Leu14，Lys17，20，Ala19，Glu21，Gln28-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3181)；Val11，Ile13，Leu14，Ala16，Lys21，Phe25-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3182)；艾塞丁-4-Lys40(SEQ ID NO：3183)；GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3184)；GLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO：3185)；Aib8，35，Arg26，34，Phe31-GLP-1(7-36)(SEQ ID NO：3186)；HXaa8EGTFTSDVSSYLEXaa22Xaa23AAKEFIXaa30WLXaa33Xaa34GXaa36Xaa37；其中Xaa8是A、V或G；Xaa22是G、K或E；Xaa23是Q或K；Xaa30是A或E；Xaa33是V或K；Xaa34是K、N或R；Xaa36是R或G；且Xaa37是G、H、P或不存在(SEQ ID NO：3187)；Arg34-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3188)；Glu30-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3189)；Lys22-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3190)；Gly8，36，Glu22-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3191)；Val8，Glu22，Gly36GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3192)；Gly8，36，Glu22，Lys33，Asn34-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3193)；Val8，Glu22，Lys33，Asn34，Gly36-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3194)；Gly8， 36Glu22，Pro37-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3195)；Val8，Glu22，Gly36，Pro37-GLP-1(7-37)(SEQID NO：3196)；Gly8，36，Glu22，Lys33，Asn34，Pro37-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3197)；Val8，Glu22，Lys33，Asn34，Gly36，Pro37-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3198)；Gly8，36，Glu22-GLP-1(7-36)(SEQ ID NO：3199)；Val8，Glu22，Gly36-GLP-1(7-36)(SEQ ID NO：3200)；Val8，Glu22，Asn34，Gly36-GLP-1(7-36)(SEQ ID NO：3201)；Gly8，36，Glu22，Asn34-GLP-1(7-36)(SEQ IDNO：3202)；GLP-1类似物(SEQ ID NO：3206)；GLP-1类似物(SEQ ID NO：3207)；[Ne-(17-羧基十七烷酸)Lys20]艾塞丁-4-NH2(SEQ ID NO：3208)；[Ne-(17-羧基十七烷酰基)Lys32]艾塞丁-4-NH2(SEQ ID NO：3209)；[脱氨基-His1，Ne-(17-羧基十七烷酰基)Lys20]艾塞丁-4-NH2(SEQ ID NO：3210)；[Arg12，27，NLe14，Ne-(17-羧基十七烷酰基)Lys32]艾塞丁-4-NH2(SEQ IDNO：3211)；[Ne-(19-羧基十九烷酰基氨基)Lys20]-艾塞丁-4-NH2(SEQ ID NO：3212)；[Ne-(15-羧基十五烷酰基氨基)Lys20]-艾塞丁-4-NH2(SEQ ID NO：3213)；[Ne-(13-羧基十三烷酰基氨基)Lys20]艾塞丁-4-NH2(SEQ ID NO：3214)；[Ne-(11-羧基-十一烷酰基-氨基)Lys20]艾塞丁-4-NH2(SEQ ID NO：3215)；艾塞丁-4-Lys40(e-MPA)-NH2(SEQ ID NO：3216)；艾塞丁-4-Lys40(e-AEEA-AEEA-MPA)-NH2(SEQ ID NO：3217)；艾塞丁-4-Lys40(e-AEEA-MPA)-NH2(SEQID NO：3218)；艾塞丁-4-Lys40(e-MPA)-白蛋白(SEQ ID NO：3219)；艾塞丁-4-Lys40(e-AEEA-AEEA-MPA)-白蛋白(SEQ ID NO：3220)；艾塞丁-4-Lys40(e-AEEA-MPA)-白蛋白(SEQ IDNO：3221)；脱氨基-His7，Arg26，Lys34(Nε-(γ-Glu(N-α-十六烷酰基)))-GLP-1(7-37)(如SEQID NO：3222披露的核心肽)(SEQ ID NO：3222)；脱氨基-His7，Arg26，Lys34(Nε-辛酰基)-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3223)；Arg26，34，Lys38(Nε-(ω-羧基十五烷酰基))-GLP-1(7-38)(SEQID NO：3224)；Arg26，34，Lys36(Nε-(γ-Glu(N-α-十六烷酰基)))-GLP-1(7-36)(以SEQ ID NO：3225披露的核心肽)(SEQ ID NO：3225)；[Aib8；Lys37]GLP-1_(7-37)(SEQ ID NO：3226)；[Aib8，Lys26]GLP-1_(7-37)(SEQ ID NO：3227)；[Aib8，22；Lys36]GLP-1(7-36)-酰胺(SEQ IDNO：3228)；[Aib8，22；BLeu32；Lys36]GLP-1(7-36)-酰胺(SEQ ID NO：3229)；[Aib8，22；Lys37]GLP-1(7-37)-酰胺(SEQ ID NO：3230)；[Aib8，22；BLeu32；Lys37]GLP-1(7-37)-酰胺(SEQ IDNO：3231)；[Aib8，22；aMeLeu32；Lys37]GLP-1(7-37)-酰胺(SEQ ID NO：3232)；[Aib8，22；AMEF12；Lys37]GLP-1(7-37)-酰胺(SEQ ID NO：3233)；[Aib8，22；BLeu16；Lys37]GLP-1(7-37)-酰胺(SEQ ID NO：3234)；[Aib8，22；Gly36；Lys37]GLP-1(7-37)-酰胺(SEQ ID NO：3235)；[Aib8，22；Lys33，37；Asn34；Gly36]GLP-1(7-37)-酰胺(SEQ ID NO：3236)；[Aib8，22；Lys33；Asn34；Gly36；Aeea37]GLP-1(7-37)-Aeea-Lys-酰胺(SEQ ID NO：3237)；[Aib8，22；Gly36]GLP-1(7-37)(SEQID NO：3238)；环[E23-K27][Aib8；Gly36]GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3239)；环[E22-K26][Aib8；Gly36；Lys37]GLP-1(7-37)-酰胺(SEQ ID NO：3240)；[Aib8，22]-GLP-1(7-22)-Ex4(17-39)(SEQ ID NO：3241)；[Gly8，36；Glu22]GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3242)；[Aib8；Glu22；Gly36]GLP-1(7-37)-酰胺(SEQ ID NO：3243)；[Aib8；Tyr16；Glu22；Gly36]GLP-1_(7-37)(SEQ IDNO：3244)；[Aib8；Lys18，33；Glu22，23，30；Va125；Arg26；Leu27；Asn34；Gly36]GLP-1(7-37)(SEQ IDNO：3245)；[Aib8；Lys18，33；Glu22，23，30；Leu27；Asn34；Gly36]GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3246)；[Aib8；Lys18；Glu22，23，30；Leu27；Gly36]GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3247)；[Aib8，22；Ile9；Gly36]GLP-1_(7-36)(SEQ ID NO：3248)；和[Aib8，22；Glu15；Gly36]GLP-1_(7-36)(SEQ ID NO：3249)。
在一个实施例中，该GLP-1(7-37)或GLP-1(7-37)类似物在对应于所述类似物的K26、K36、K37、K39或C-末端胺基团的残基处与该抗体或其片段偶联。
在一个实施例中，该GLP-1受体激动剂经由肽接头偶联至该抗体或其片段，该接头包含选自由以下组成的组的序列：(Gly3Ser)2、(Gly4Ser)2、(Gly3Ser)3、(Gly4Ser)3、(Gly3Ser)4、(Gly4Ser)4、(Gly3Ser)5、(Gly4Ser)5、(Gly3Ser)6和(Gly4Ser)6。
附图说明
图1.用于产生抗GIPR/GLP-1肽偶联物的反应方案
图2A-2T.GLP-1受体激动剂在CHOK1-GLP-1R H20重组细胞中的活性和GIPR拮抗剂在293HEK-GIPR#10重组细胞中的活性
图3A-3C.相比于仅表达GLP-1R的细胞(CHOK1hGLP1RH20)，在表达GLP-1R和GIPR这两者的细胞(CHOK1hGLP-1R/hGIPRM1)中2G10偶联物的GLP-1激动剂活性更有效
图4A-4R.体内活性-在db/db小鼠中的葡萄糖和体重影响
图5A-5D.在C57B16小鼠中5G12和2G10化学偶联物的GLP-1受体激动剂和GIPR拮抗剂的体内活性(葡萄糖耐量试验)
图6A-6B.在DIO小鼠中5G12和2G10化学偶联物的GLP-1受体激动剂和GIPR拮抗剂的体内活性(血糖和体重变化)
图7.GLP-1R-GIPR双特异性偶联物1273减轻雄性自发肥胖的食蟹猴的体重(％自基线的变化)
图8.GLP-1R-GIPR双特异性偶联物1273减少雄性自发肥胖的食蟹猴的总能量摄入(％自基线的变化)
图9.GLP-1R-GIPR双特异性偶联物1273减少雄性自发肥胖的食蟹猴的空腹胰岛素(％自基线的变化)
图10.GLP-1R-GIPR双特异性偶联物1273减少雄性自发肥胖的食蟹猴的空腹甘油三酯(％自基线的变化)
图11.GLP-1R-GIPR双特异性偶联物1273减少雄性自发肥胖的食蟹猴的空腹总胆固醇(％自基线的变化)
图12.GLP-1R-GIPR双特异性偶联物1264减轻雄性自发肥胖的食蟹猴的体重(％自基线的变化)
图13.GLP-1R-GIPR双特异性偶联物1264减少雄性自发肥胖的食蟹猴的总能量摄入(％自基线的变化)
图14.GLP-1R-GIPR双特异性偶联物1264减少雄性自发肥胖的食蟹猴的空腹胰岛素(％自基线的变化)
图15.GLP-1R-GIPR双特异性偶联物1264减少雄性自发肥胖的食蟹猴的空腹甘油三酯(％自基线的变化)
图16.GLP-1R-GIPR双特异性偶联物1264减少雄性自发肥胖的食蟹猴的空腹总胆固醇(％自基线的变化)
图17.GLP-1R-GIPR双特异性偶联物1248和1257减轻雄性自发肥胖的食蟹猴的体重(％自基线的变化)
图18.GLP-1R-GIPR双特异性偶联物1248和1257减少雄性自发肥胖的食蟹猴的总能量摄入(％自基线的变化)
图19.GLP-1R-GIPR双特异性偶联物1248和1257减少雄性自发肥胖的食蟹猴的空腹胰岛素(％自基线的变化)
图20.GLP-1R-GIPR双特异性偶联物1248和1257减少雄性自发肥胖的食蟹猴的空腹甘油三酯(％自基线的变化)
图21.GLP-1R-GIPR双特异性偶联物1248和1257减少雄性自发肥胖的食蟹猴的空腹胆固醇(％自基线的变化)
图22A-22B.抗GIPR/GLP-1R双特异性偶联物的结合亲和力
图23.抗GIPR/GLP-1R双特异性偶联物1248在表达GLP-1R和GIPR的细胞中促进强烈的GLP-1R和GIPR内化
图24A-24B.抗GIPR/GLP-1R双特异性偶联物在GLP-1R内化测定中的时程和剂量响应
图25A-25D.GLP-1R、GIPR和双特异性偶联物在内化时共定位
图26A-26B.受体内化的抑制减少了1248诱导的cAMP产生
图27A-27C.双特异性偶联物显示在FACS分析中与GLP-1R和GIPR结合
图28.抗GIPR/GLP-1R双特异性偶联物刺激钙通量
图29A-29B.抗GIPR/GLP-1R双特异性偶联物1248通过GLP-1R和GIPR这两个途径促进β-抑制蛋白募集
图30.抗GIPR/GLP-1R双特异性偶联物1248刺激人微型胰岛(pancreaticmicroislet)中的胰岛素分泌
具体实施方式
本披露提供一种通过阻断或干扰GIP的生物活性来治疗代谢紊乱，例如葡萄糖代谢紊乱(例如2型糖尿病、葡萄糖水平升高、胰岛素水平升高、血脂异常、代谢综合征(X综合征或胰岛素抗性综合征)、糖尿、代谢性酸中毒、糖尿病性神经病、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、糖尿病性心肌病、1型糖尿病、肥胖和因肥胖而恶化的病症)的方法。在一个实施例中，向有需要的受试者给予治疗有效量的与GLP-1受体激动剂偶联的经分离的人类GIPR结合蛋白。还提供了给予和递送的方法。
本文中，包括实例中使用的重组多肽和核酸的方法一般是Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual[分子克隆：实验室手册](Cold Spring HarborLaboratory Press[冷泉港实验室出版社]，1989)或Current Protocols in MolecularBiology[分子生物学现代方法](Ausubel等人编辑，Green Publishers Inc.[格林出版公司]以及Wiley and Sons[威利父子公司]1994)中陈述的方法，出于任何目的将这两个文献通过引用并入本文。
本文使用的章节标题皆仅出于组织目的，而不应解释为限制所描述的主题内容。
除非本文另作定义，否则结合本申请使用的科技术语应当具有本领域普通技术人员通常所了解的含义。另外，除非上下文另外需要，否则单数术语应包括复数形式，并且复数术语应包括单数形式。
总体而言，与本文所描述的细胞与组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白质与核酸化学和杂交学结合使用的命名法及其技术是本领域中众所周知并且常用的那些。除非另作指示，否则本申请的方法和技术一般是根据本领域熟知的常规方法且如本说明书全篇所引用和论述的各种通用和更具体的参考文献中所描述来进行。参见例如，Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual[分子克隆：实验室手册]，第3版，Cold Spring Harbor Laboratory Press[冷泉港实验室出版社]，冷泉港，纽约(2001)；Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology[分子生物学现代方法]，Greene Publishing Associates[格林出版联合公司](1992)；以及Harlow和LaneAntibodies：A Laboratory Manual[抗体：实验室手册]Cold Spring Harbor LaboratoryPress[冷泉港实验室出版社]，冷泉港，纽约(1990)，将其通过引用并入本文。酶促反应和纯化技术是根据制造商的说明，如本领域通常所实现或如本文中所描述进行的。与本文所描述的分析化学、合成有机化学以及医药和药物化学结合使用的术语及其实验方法与技术是本领域熟知且常用的那些。可以使用标准技术来进行化学合成、化学分析、药物制备、配制和递送以及患者的治疗。
应了解，本发明不局限于本文所描述的特定方法、方案和试剂等，且因此可以变化。本文所使用的术语仅出于描述特定实施例的目的，且不打算限制仅由权利要求书限定的所披露的范围。
除操作实例中或在另外指示的情况下以外，本文所使用的表示成分或反应条件的量的所有数字应当理解为在所有情况下被术语“约”修饰。当结合百分数使用时，术语“约”可以意指±1％。
按照惯例，除非另外具体指示，否则如本文所使用，“一个(种)(a/an)”意指“一个或多个(一种或多种)”。
如本文所使用，术语“氨基酸”和“残基”可互换，且当在肽或多肽的背景中使用时是指天然存在的氨基酸和合成氨基酸，以及氨基酸类似物、氨基酸模拟物和在化学上类似于天然存在的氨基酸的非天然存在的氨基酸。
“天然存在的氨基酸”是由遗传密码编码的氨基酸，以及由在合成后经修饰的遗传密码编码的氨基酸，例如羟基脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是与天然存在的氨基酸具有相同的基本化学结构(即α碳与氢、羧基基团、氨基基团和R基团结合)的化合物，例如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。此类类似物可具有经修饰的R基团(例如正亮氨酸)或经修饰的肽主链，但保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。
“氨基酸模拟物”是结构不同于氨基酸的一般化学结构，但以类似于天然存在的氨基酸的方式起作用的化合物。实例包括酰胺的甲基丙烯酰基或丙烯酰基衍生物、β-亚氨基酸、γ-亚氨基酸、δ-亚氨基酸(例如哌啶-4-甲酸)等。
“非天然存在的氨基酸”是与天然存在的氨基酸具有相同的基本化学结构，但并非通过翻译复合物并入正在生长的多肽链中的化合物。“非天然存在的氨基酸”还包括但不限于，通过修饰(例如翻译后修饰)天然编码的氨基酸(包括但不限于20种常见氨基酸)得到但自身并非通过翻译复合物天然并入正在生长的多肽链中的氨基酸。可以插入多肽序列中或取代多肽序列中的野生型残基的非天然存在的氨基酸的实例的非限制性列表包括β-氨基酸、高氨基酸、环状氨基酸和具有衍生化侧链的氨基酸。实例包括(呈L形式或D形式；括号中为缩写)：瓜氨酸(Cit)、高瓜氨酸(hCit)、Nα-甲基瓜氨酸(NMeCit)、Nα-甲基高瓜氨酸(Nα-MeHoCit)、鸟氨酸(Orn)、Nα-甲基鸟氨酸(Nα-MeOrn或NMeOrn)、肌氨酸(Sar)、高赖氨酸(hLys或hK)、高精氨酸(hArg或hR)、高谷氨酰胺(hQ)、Nα-甲基精氨酸(NMeR)、Nα-甲基亮氨酸(Nα-MeL或NMeL)、N-甲基高赖氨酸(NMeHoK)、Nα-甲基谷氨酰胺(NMeQ)、正亮氨酸(Nle)、正缬氨酸(Nva)、1，2，3，4-四氢异喹啉(Tic)、八氢吲哚-2-甲酸(Oic)、3-(1-萘基)丙氨酸(1-Nal)、3-(2-萘基)丙氨酸(2-Nal)、1，2，3，4-四氢异喹啉(Tic)、2-茚满基甘氨酸(IgI)、对碘代苯丙氨酸(pI-Phe)、对氨基苯丙氨酸(4AmP或4-氨基-Phe)、4-胍基苯丙氨酸(Guf)、甘氨酰赖氨酸(缩写为“K(Nε-甘氨酰)”或“K(甘氨酰)”或“K(gly)”)、硝基苯丙氨酸(硝基phe)、氨基苯丙氨酸(氨基phe或氨基-Phe)、苯甲基苯丙氨酸(苯甲基phe)、γ-羧基谷氨酸(γ-羧基glu)、羟基脯氨酸(羟基pro)、对羧基苯丙氨酸(Cpa)、α-氨基己二酸(Aad)、Nα-甲基缬氨酸(NMeVal)、N-α-甲基亮氨酸(NMeLeu)、Nα-甲基正亮氨酸(NMeNle)、环戊基甘氨酸(Cpg)、环己基甘氨酸(Chg)、乙酰基精氨酸(乙酰基arg)、α，β-二氨基丙酸(Dpr)、α，γ-二氨基丁酸(Dab)、二氨基丙酸(Dap)、环己基丙氨酸(Cha)、4-甲基-苯丙氨酸(MePhe)、β，β-二苯基丙氨酸(BiPhA)、氨基丁酸(Abu)、4-苯基-苯丙氨酸(或联苯丙氨酸；4Bip)、α-氨基异丁酸(Aib)、β-丙氨酸、β-氨基丙酸、哌啶酸、氨基己酸、氨基庚酸、氨基庚二酸、锁链素、二氨基庚二酸、N-乙基甘氨酸、N-乙基天冬氨酸、羟基赖氨酸、别羟基赖氨酸、异锁链素、别-异亮氨酸、N-甲基甘氨酸、N-甲基异亮氨酸、N-甲基缬氨酸、4-羟基脯氨酸(Hyp)、γ-羧基谷氨酸、ε-N，N，N-三甲基赖氨酸、ε-N-乙酰赖氨酸、O-磷酸丝氨酸、N-乙酰丝氨酸、N-甲酰基甲硫氨酸、3-甲基组氨酸、5-羟基赖氨酸、ω-甲基精氨酸、4-氨基-O-邻苯二甲酸(4APA)和其他类似氨基酸，以及具体列出的这些中任一种的衍生化形式。
术语“经分离的核酸分子”是指自5’至3’端读取的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸碱基的单链或双链聚合物(例如本文提供的GIPR核酸序列)或其类似物，其与当从源细胞分离总核酸时天然地跟该核酸一起发现的至少约50％的多肽、肽、脂质、碳水化合物、多核苷酸或其他物质分离。优选地，经分离的核酸分子基本上不含在该核酸的天然环境中发现的会干扰其在多肽生产中的用途或其治疗、诊断、预防或研究用途的任何其他污染性核酸分子或其他分子。
术语“经分离的多肽”是指以下多肽(例如本文所提供的GIPR多肽序列或本发明的抗原结合蛋白)，该多肽已与当从源细胞分离时天然地与该多肽一起发现的至少约50％的多肽、肽、脂质、碳水化合物、多核苷酸或其他物质分离。优选地，经分离的多肽基本上不含在其然环境中发现的会干扰其治疗、诊断、预防或研究用途的任何其他污染性多肽或其他污染物。
本发明的组合物包括直接或间接通过接头部分共价连接、附接或结合至本发明的另一抗GIPR抗原结合蛋白的本发明的GLP-1受体激动剂，或为“偶联物”或“偶联”分子，无论是否通过化学方式偶联(例如翻译后或合成后)。
术语“编码”是指多核苷酸序列编码一个或多个氨基酸。该术语不需要起始或终止密码子。
在两个或更多个核酸或多肽序列的背景下，术语“同一性”或百分比“同一性”是指相同的两个或更多个序列或子序列。“百分比同一性”意指比较的分子中氨基酸或核苷酸之间相同残基的百分比，并且是基于比较的最小分子的大小来计算的。对于这些计算，可以利用特定的数学模型或计算机程序(即，“算法”)解决比对中的空位(如果有的话)。可以用于计算所比对的核酸或多肽的同一性的方法包括以下所描述的那些：ComputationalMolecular Biology[计算分子生物学]，(Lesk，A.M.编辑)，(1988)纽约：OxfordUniversity Press[牛津大学出版社]；Biocomputing Informatics and Genome Projects[生物计算信息学和基因组计划]，(Smith，D.W.编辑)，1993，纽约：Academic Press[学术出版社]；ComputerAnalysis ofSequence Data[序列数据的计算机分析]，第I部分，(Griffin，
A.M.和Griffin，H.G.编辑)，1994，New Jersey[新泽西州]：Humana Press[胡马纳出版社]；von Heinje，G.，(1987)Sequence AnalysisinMolecular Biology[分子生物学序列分析]，纽约：Academic Press[学术出版社]；Sequence Analysis Primer[序列分析入门]，(Gribskov，M.和Devereux，J.编辑)，1991，纽约：M.StocktonPress[米斯托克顿出版社]；以及Carillo等人，(1988)SIAM J.[美国工业和应用数学学会杂志]Applied Math.[应用数学]48：1073。
在计算百分比同一性时，以实现各序列间最大匹配的方式比对所比较的序列。用于确定百分比同一性的计算机程序是GCG程序包，其包括GAP(Devereux等人，(1984)Nucl.Acid Res.[核酸研究]12：387；Genetics Computer Group[遗传学计算机公司]，威斯康星州麦迪逊市威斯康星大学(University of Wisconsin，Madison，WI))。计算机算法GAP是用来比对其百分比序列同一性待确定的两个多肽或多核苷酸。比对序列以使它们各自的氨基酸或核苷酸达到最佳匹配(如通过算法确定的“匹配范围”)。空位开放罚分(以3x对角线平均值计算，其中“对角线平均值”是所用比较矩阵的对角线的平均值；“对角线”是由特定比较矩阵赋予每一完美氨基酸匹配的评分或数字)和空位延伸罚分(通常为空位开放罚分的1/10倍)以及比较矩阵(例如PAM250或BLOSUM 62)与该算法结合使用。在某些实施例中，该算法还使用标准比较矩阵(有关PAM250比较矩阵，参见Dayhoff等人，(1978)Atlas ofProtein Sequence and Structure[蛋白质序列和结构图谱]5：345-352；有关BLOSUM 62比较矩阵，参见Henikoff等人，(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美国国家科学院院刊]89：10915-10919)。
用于使用GAP程序确定多肽或核苷酸序列的百分比同一性的推荐参数如下：
算法：Needleman等人，1970，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48：443-453；
比较矩阵：来自Henikoff等人，1992(同上)的BLOSUM 62；
空位罚分：12(但末端空位不罚分)
空位长度罚分：4
相似性阈值：0
用于比对两个氨基酸序列的某些比对方案可以导致这两个序列中仅较短区域匹配，且该较小比对区域可以具有非常高的序列同一性，即使这两个全长序列之间并无任何明显关系。因此，如果需要，可调整所选比对方法(例如GAP程序)以在靶多肽的至少50个连续氨基酸范围内进行比对。
术语“GIPR多肽”和“GIPR蛋白质”可互换使用，且意指在哺乳动物(例如人类或小鼠)中表达的天然存在的野生型多肽，并且包括天然存在的等位基因(例如人类GIPR蛋白质的天然存在的等位基因形式)。出于本披露的目的，术语“GIPR多肽”可互换地用于指任何全长GIPR多肽，例如SEQ ID NO：3141，其由466个氨基酸残基组成且由核苷酸序列SEQ ID NO：3142编码；或SEQ ID NO：3143，其由430个氨基酸残基组成且由核酸序列SEQ ID NO：3144编码；或SEQ ID NO：3145，其由493个氨基酸残基组成且由核酸序列SEQ ID NO：3146编码；或SEQ ID NO.3147，其由460个氨基酸残基组成且由核酸序列SEQ ID NO：3148编码；或SEQ IDNO.3149，其由230个氨基酸残基组成且由核酸序列SEQ ID NO：3150编码。
术语“GIPR多肽”还涵盖其中天然存在的GIPR多肽序列(例如SEQ ID NO：3141、3143或3145)已被修饰的GIPR多肽。此类修饰包括但不限于一个或多个氨基酸取代，包括被非天然存在的氨基酸、非天然存在的氨基酸类似物和氨基酸模拟物取代。
在各种实施例中，GIPR多肽包含与天然存在的GIPR多肽(例如SEQ ID NO：3141、3143或3145)具有至少约90％同一性的氨基酸序列。在其他实施例中，GIPR多肽包含与天然存在的GIPR多肽氨基酸序列(例如SEQ ID NO：3141、3143或3145)具有至少约95％、96％、97％、98或99％同一性的氨基酸序列。这类GIPR多肽优选地但未必具有野生型GIPR多肽的至少一种活性，例如结合GIP的能力。本发明还涵盖编码此类GIPR多肽序列的核酸分子。
术语“GIPR活性测定”(也称为“GIPR功能测定”)意指可以用于在细胞环境中测量GIP或GIP结合蛋白活性的测定。在一个实施例中，“活性”(或“功能”)测定可以为在GIPR表达细胞中进行的cAMP测定，在这些细胞中GIP可以诱导cAMP信号，且可以在存在/不存在GIP配体情况下测量GIP/GIPR结合蛋白的活性，其中可以获得IC50/EC50和抑制/活化程度(Biochemical and Biophysical Research Communications[生物化学与生物物理学研究通讯](2002)290：1420-1426)。在另一个实施例中，“活性”(或“功能”)测定可以为在胰脏β细胞中进行的胰岛素分泌测定，在这些细胞中GIP可以诱导葡萄糖依赖性胰岛素分泌，且可以在存在/不存在GIP配体情况下测量GIP/GIPR结合蛋白的活性，其中可以获得IC50/EC50和抑制/活化程度(Biochemical and Biophysical Research Communications[生物化学与生物物理学研究通讯](2002)290：1420-1426)。
术语“GIPR结合测定”意指可以用于测量GIP与GIPR的结合的测定。在一个实施例中，“GIPR结合测定”可以为使用FMAT或FACS进行的测定，该测定测量荧光标记的GIP与GIPR表达细胞的结合，且可以测量GIP/GIPR结合蛋白的活性来代替荧光标记的GIP与GIPR表达细胞的结合。在另一个实施例中，“GIPR结合测定”可以为测量放射性标记的GIP与GIPR表达细胞的结合的测定，且可以测量GIP/GIPR结合蛋白的活性来代替放射性标记的GIP与GIPR表达细胞的结合(Biochimica et Biophysica Acta[生物化学与生物物理学报](2001)1547：143-155)。
术语“GIP”、“抑胃多肽”、“葡萄糖依赖性促胰岛素肽”和“GIP配体”可互换使用且意指在哺乳动物(例如人类或小鼠)中表达的天然存在的野生型多肽，并且包括天然存在的等位基因(例如人类GIP蛋白的天然存在的等位基因形式)。出于本披露的目的，术语“GIP”可互换使用以指任何成熟的GIP多肽。
成熟人类GIP的42个氨基酸的序列是：
且由以下DNA序列编码：
成熟鼠类GIP的42个氨基酸的序列是：
且由以下DNA序列编码：
成熟大鼠GIP的42个氨基酸的序列是：
且由以下DNA序列编码：
“GIPR拮抗剂”是指降低或抑制GIPR的GIP活化的化合物。此类拮抗剂包括化学合成的小分子和抗原结合蛋白。
如本文所使用，“抗原结合蛋白”意指特异性结合指定靶抗原，例如GIPR多肽(例如人类GIPR多肽，例如SEQ ID NO：3141、3143或3145中提供的)的任何蛋白质。该术语涵盖包含至少两条全长重链和两条全长轻链的完整抗体，以及其衍生物、变体、片段和突变。抗体片段的实例包括Fab、Fab′、F(ab′)2和Fv片段。抗原结合蛋白还包括结构域抗体，例如如下文进一步描述的纳米抗体和scFv。
一般而言，当GIPR抗原结合蛋白基本上展现出与非GIPR分子结合的背景时，认为该抗原结合蛋白“特异性结合”其靶抗原GIPR。然而，特异性结合GIPR的抗原结合蛋白可以与来自不同物种的GIPR多肽交叉反应。典型地，如经由表面等离子体共振技术(例如BIACore，GE医疗集团(GE-Healthcare)，乌普萨拉(Uppsala)，瑞典)或动力学排阻测定(KinExA，Sapidyne，博伊西(Boise)，爱达荷州(Idaho))所测量的，当解离常数(KD)≤10-7M时，GIPR抗原结合蛋白特异性结合人类GIPR。如使用所述方法测量的，当KD≤5x 10-9M时，GIPR抗原结合蛋白以“高亲和力”特异性结合人类GIPR，且当KD≤5x 10-10M时，以“非常高亲和力”特异性结合人类GIPR。
“抗原结合蛋白”意指特异性结合指定抗原的蛋白质或蛋白质的一部分。例如，抗原结合蛋白中含有与抗原相互作用且赋予抗原结合蛋白对抗原的特异性和亲和力的氨基酸残基的部分被称为“抗原结合区”。抗原结合区典型地包括免疫球蛋白、单链免疫球蛋白或骆驼抗体的一个或多个“互补结合区”(“CDR”)。某些抗原结合区还包括一个或多个“框架”区。“CDR”是引起抗原结合特异性和亲和力的氨基酸序列。“框架”区可以帮助维持CDR的适当构象以促进抗原结合区与抗原之间的结合。
“重组蛋白”(包括重组GIPR抗原结合蛋白)是使用重组技术，即通过表达如本文所述的重组核酸而制备的蛋白质。用于产生重组蛋白的方法和技术是本领域中熟知的。
术语“抗体”是指任何同种型的完整免疫球蛋白，或其片段(该片段可以与完整抗体竞争特异性结合至靶抗原)，且包括例如嵌合抗体、人源化抗体、完全人抗体和双特异性抗体。因此，“抗体”是抗原结合蛋白的一个种类。完整抗体一般将包含至少两条全长重链和两条全长轻链。抗体可以仅源自单一来源，或者可以为“嵌合”的，即，抗体的不同部分可以源自两种不同的抗体，如下文进一步描述。抗原结合蛋白、抗体或结合片段可以在杂交瘤中通过重组DNA技术或通过酶裂解或化学裂解完整抗体产生。
如关于抗体或其片段使用的术语“轻链”包括全长轻链及其片段，该片段具有足以赋予结合特异性的可变区序列。全长轻链包括可变区结构域VL和恒定区结构域CL。轻链的可变区结构域是在多肽的氨基末端。轻链包括κ链和λ链。
如关于抗体或其片段使用的术语“重链”包括全长重链及其片段，该片段具有足以赋予结合特异性的可变区序列。全长重链包括可变区结构域VH，和三个恒定区结构域CH1、CH2和CH3。VH结构域是在多肽的氨基末端，且CH结构域是在羧基末端，其中CH3最接近多肽的羧基末端。重链可以属于任何同种型，包括IgG(包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4亚型)、IgA(包括IgA1和IgA2亚型)、IgM和IgE。
如本文所使用，术语抗体或免疫球蛋白链(重链或轻链)的“免疫功能片段”(或简称为“片段”)是包含抗体的一部分(不管该部分是如何获得或合成的)的抗原结合蛋白，该部分缺乏全长链中存在的至少一些氨基酸但能够特异性结合至抗原。此类片段具有生物活性，因为其特异性结合至靶抗原且能够与其他抗原结合蛋白(包括完整抗体)竞争特异性结合至给定表位。
这些生物活性片段可以通过重组DNA技术产生，或者可以通过酶裂解或化学裂解抗原结合蛋白(包括完整抗体)产生。免疫功能性免疫球蛋白片段包括但不限于Fab、Fab′和F(ab′)2片段。
在另一个实施例中，Fv、结构域抗体和scFv可以源自本发明的抗体。
另外，预期本文所披露的抗原结合蛋白的功能性部分(例如一个或多个CDR)可以与第二蛋白或与小分子共价结合以产生治疗剂，该治疗剂针对体内特定靶标、具有双功能治疗特性或具有延长的血清半衰期。
“Fab片段”由一条轻链以及一条重链的CH1和可变区构成。Fab分子的重链不能与另一重链分子形成二硫键。
“Fc”区含有包含抗体的CH2和CH3结构域的两个重链片段。这两个重链片段通过两个或更多个二硫键以及与CH3结构域的疏水相互作用保持在一起。
“Fab′片段”含有一条轻链以及一条重链的一部分，该重链的一部分含有VH结构域和CH1结构域以及在CH1与CH2结构域之间的区域，使得可以在两个Fab′片段的两条重链之间形成链间二硫键，从而形成F(ab′)2分子。
“F(ab′)2片段”含有两条轻链以及两条重链，这两条重链含有在CH1与CH2结构域之间的恒定区的一部分，使得在这两条重链之间形成链间二硫键。因此，F(ab′)2片段是由通过两条重链之间的二硫键保持在一起的两个Fab′片段构成。
“Fv区”包含来自重链和轻链两者的可变区，但缺乏恒定区。
“单链抗体”或“scFv”是其中重链与轻链可变区通过柔性接头连接形成单一多肽链由此形成抗原结合区的Fv分子。scFv详细论述于国际专利申请公开号WO 88/01649以及美国专利号4,946,778和5,260,203中，将这些披露通过引用而并入。
“结构域抗体”或“单链免疫球蛋白”是仅含重链可变区或轻链可变区的免疫功能性免疫球蛋白片段。结构域抗体的实例包括在一些情况下，两个或更多个VH区与肽接头共价接合以产生二价结构域抗体。二价结构域抗体的两个VH区可以靶向相同或不同的抗原。
“二价抗原结合蛋白”或“二价抗体”包含两个抗原结合区。在一些情况下，这两个结合区具有相同抗原特异性。二价抗原结合蛋白和二价抗体可以为双特异性的，参见下文。
“多特异性抗原结合蛋白”或“多特异性抗体”是靶向超过一种抗原或表位的抗原结合蛋白或抗体。
“双特异性”、“双重特异性”或“双功能性”抗原结合蛋白或抗体分别是具有两个不同抗原结合位点的杂合抗原结合蛋白或抗体。双特异性抗原结合蛋白和抗体是多特异性抗原结合蛋白或多特异性抗体的一个种类，且可以由多种方法，包括但不限于杂交瘤融合或连接Fab′片段产生。参见例如，Songsivilai和Lachmann，1990，Clin.Exp.Immunol.[临床和实验免疫学]79：315-321；Kostelny等人，1992，J.Immunol.[免疫学杂志]148：1547-1553。双特异性抗原结合蛋白或抗体的两个结合位点将结合至两个不同表位，这两个表位可以存在于相同或不同蛋白质靶标上。
当在抗原结合蛋白(例如抗体)的背景下使用时，术语“竞争”意指抗原结合蛋白之间的竞争是由以下测定而确定的，在该测定中，被测试的抗原结合蛋白(例如抗体或其免疫功能片段)阻止或抑制参考抗原结合蛋白与共同抗原(例如GIPR或其片段)的特异性结合。可以使用多种类型的竞争性结合测定，例如：直接或间接固相放射免疫测定(RIA)、直接或间接固相酶免疫测定(EIA)、夹心竞争测定(参见例如Stahli等人，1983，Methods inEnzymology[酶学方法]9：242-253)；直接固相生物素-抗生物蛋白EIA(参见例如Kirkland等人，1986，J.Immunol.[免疫学杂志]137：3614-3619)、直接固相标记测定、直接固相标记夹心测定(参见例如Harlow和Lane，1988，Antibodies[抗体]，A Laboratory Manual[实验室手册]，Cold Spring Harbor Press[冷泉港出版社])；使用I-125标记进行的直接固相标记RIA(参见例如Morel等人，1988，Molec.Immunol.[分子免疫学]25：7-15)；直接固相生物素-抗生物素蛋白EIA(参见例如Cheung等人，1990，Virology[病毒学]176：546-552)；以及直接标记的RIA(Moldenhauer等人，1990，Scand.J.Immunol.[斯堪的纳维亚免疫学杂志]32：77-82)。典型地，此类测定涉及使用与固体表面或细胞结合的纯化抗原，该固体表面或细胞带有未标记的测试抗原结合蛋白和经标记的参考抗原结合蛋白中的任一种。通过在测试抗原结合蛋白的存在下，测定结合至固体表面或细胞的标记的量来测量竞争性抑制。通常，测试抗原结合蛋白是过量存在的。有关用于确定竞争性结合的方法的其他细节提供于本文的实例中。通常，当竞争性抗原结合蛋白过量存在时，其将使参考抗原结合蛋白与共同抗原的特异性结合抑制至少40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％。在一些情况下，结合被抑制至少80％、85％、90％、95％或97％或更多。
术语“抗原”是指以下分子或分子的一部分，该分子能够经选择性结合剂(例如抗原结合蛋白(包括例如抗体))结合且还能够用于动物中以产生能够结合该抗原的抗体。抗原可以具有一个或多个表位，这些表位能够与不同的抗原结合蛋白(例如抗体)相互作用。
术语“表位”是经抗原结合蛋白(例如抗体)结合的分子的一部分。该术语包括能够特异性结合抗原结合蛋白(例如抗体)的任何决定子。表位可以为邻接或非邻接(不连续)的(例如就多肽而言，在该多肽序列中彼此不邻接的氨基酸残基，但在分子的背景下经抗原结合蛋白结合的氨基酸残基)。构象表位是存在于活性蛋白质构象内但不存在于变性蛋白质中的表位。在某些实施例中，表位可以为模拟物，因为它们构成与用于产生抗原结合蛋白的表位类似的三维结构，还不包含或仅包含在用于产生抗原结合蛋白的表位中发现的一些氨基酸残基。最常见的是，表位存在于蛋白质上，但在一些情况下可能存在于其他种类的分子(例如核酸)上。表位决定子可以包括具化学活性的表面分子群，例如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基，且可以具有特定三维结构特征和/或特定电荷特征。一般而言，对特定靶抗原具有特异性的抗原结合蛋白将优先识别在蛋白质和/或大分子的复杂混合物中的靶抗原上的表位。
如本文中所使用，“基本上纯的”意指所述分子种类是存在的主要种类，即，在摩尔基础上，它比相同混合物中的任何其他个体种类更丰富。在某些实施例中，基本上纯的分子是其中目标种类占存在的所有大分子种类中的至少50％(在摩尔基础上)的成分。在其他实施例中，基本上纯的成分将占该组合物中存在的所有大分子种类的至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％。在其他实施例中，目标种类经纯化至基本上均质，其中通过常规检测方法无法在该组合物中检测到污染种类并因此该组合物由单一可检测的大分子种类组成。
术语“治疗”是指成功治疗或改善损伤、病变或病症的任何征候，包括任何客观或主观参数，例如症状的消除、缓解、减轻，或使患者更能忍受损伤、病变或病症；减慢退化或衰退的速率；使退化终点不那么令人虚弱；改善患者的身体或心理健康。症状的治疗或改善可以基于客观或主观参数；包括体检、神经精神检查和/或精神评估的结果。例如，本文呈现的某些方法通过降低心血管疾病的发病率、使心血管疾病缓解和/或改善与心血管疾病相关的症状，成功地治疗心血管疾病，例如动脉粥样硬化。
“有效量”一般是足以降低症状的严重程度和/或频率，消除症状和/或潜在病因，预防症状和/或其潜在病因的发生，和/或改善或治愈由疾病状态(例如糖尿病、肥胖、血脂异常、葡萄糖水平升高、胰岛素水平升高或糖尿病性肾病)引起或与其相关的损伤的量。在一些实施例中，有效量是治疗有效量或预防有效量。“治疗有效量”是足以治疗疾病状态(例如动脉粥样硬化)或症状，特别是与疾病状态相关的状态或症状，或以其他方式预防、阻滞、延迟或逆转疾病状态或与该疾病以任何方式相关的任何其他不希望的症状的进展的量。“预防有效量”是当给予受试者时将具有预期的预防作用，例如预防或延迟疾病状态的发作(或复发)，或降低疾病状态或相关症状发作(或复发)的可能性的药物组合物的量。完全的治疗或预防作用未必通过给予一次剂量就发生，且可能只在给予一系列剂量之后发生。因此，可以一次或多次给予治疗或预防有效量。
如本文所使用，术语“治疗有效剂量”和“治疗有效量”意指在组织系统、动物或人类中引起研究人员、医师或其他临床医生所寻求的生物学或医学响应(其包括减轻或改善所治疗的疾病或障碍的症状)的GIPR结合蛋白的量，即，支持可观察水平的一种或多种所希望的生物学或医学响应的量，该响应例如降低血糖、胰岛素、甘油三酯或胆固醇水平；减轻体重；或改善葡萄糖耐量、能量消耗或胰岛素敏感性。
术语“多核苷酸”或“核酸”包括单链和双链核苷酸聚合物两者。构成多核苷酸的核苷酸可以为核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸，或任一类型核苷酸的修饰形式。修饰包括碱基修饰，例如溴代尿苷和肌苷衍生物；核糖修饰，例如2′，3′-双脱氧核糖；以及核苷酸间键联修饰，例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、苯胺磷酸硫醇酯(phosphoroanilothioate)、缩苯胺磷酸酯(phoshoraniladate)和氨基磷酸酯(phosphoroamidate)。
术语“寡核苷酸”意指包含200个或更少核苷酸的多核苷酸。在一些实施例中，寡核苷酸是10至60个碱基长度。在其他实施例中，寡核苷酸是12、13、14、15、16、17、18、19或20至40个核苷酸长度。寡核苷酸可以为单链或双链的，例如用于构建突变基因。寡核苷酸可以为有义或反义寡核苷酸。寡核苷酸可以包括标记(包括放射性标记、荧光标记、半抗原或抗原标记)以用于检测测定。寡核苷酸可以例如用作PCR引物、克隆引物或杂交探针。
“经分离的核酸分子”意指基因组DNA或RNA、mRNA、cDNA或合成起点或其一些组合，其与多核苷酸的全部或一部分相关联，其中经分离的多核苷酸在自然界中发现，或连接至其在自然界中未连接的多核苷酸。出于本披露的目的，应了解，“包含特定核苷酸序列的核酸分子”不包含完整染色体。“包含”指定核酸序列的经分离的核酸分子(除了所述指定序列外)还可包括多达十种或甚至多达二十种其他蛋白质或其部分的编码序列，或者可以包括可操作地连接的调控序列(其控制所述核酸序列的编码区的表达)，和/或可以包括载体序列。
除非另外说明，否则本文所论述的任何单链多核苷酸序列的左手端是5′端；双链多核苷酸序列的左手方向称为5′方向。新生RNA转录物的5′至3′添加方向称为转录方向；在与RNA转录物具有相同序列的DNA链上相对于RNA转录物的5′端位于5′的序列区称为“上游序列”；在与RNA转录物具有相同序列的DNA链上相对于RNA转录物的3′端位于3′的序列区称为“下游序列”。
术语“控制序列”是指可以影响其所连接的编码序列的表达和加工的多核苷酸序列。此类控制序列的性质可以取决于宿主生物体。在特定实施例中，原核生物的控制序列可以包括启动子、核糖体结合位点和转录终止序列。例如，真核生物的控制序列可以包括含一个或多个转录因子识别位点的启动子、转录增强子序列以及转录终止序列。“控制序列”可以包括前导序列和/或融合配偶体序列。
术语“载体”意指用于将蛋白质编码信息转移至宿主细胞中的任何分子或实体(例如核酸、质粒、噬菌体或病毒)。
术语“表达载体”或“表达构建体”是指适于转化宿主细胞的载体，且其含有指导和/或控制(与宿主细胞结合)一个或多个与其可操作地连接的异源编码区的表达的核酸序列。表达构建体可以包括但不限于影响或控制转录、翻译且在存在内含子时影响与其可操作地连接的编码区的RNA剪接的序列。
如本文所使用，“可操作地连接”意指，该术语所适用的组分处于允许其在合适条件下发挥其固有功能的关系中。例如，载体中“可操作地连接”至蛋白编码序列的控制序列与该蛋白编码序列连接，使得在与该控制序列的转录活性相配伍的条件下实现该蛋白编码序列的表达。
术语“宿主细胞”意指被核酸序列转化且因此表达目的基因的细胞。该术语包括亲本细胞的子代，无论该子代是否在形态或遗传组成上与原始亲本细胞相同，只要存在该目的基因即可。
术语“多肽”或“蛋白质”在本文中可互换使用，指氨基酸残基的聚合物。这些术语还适用于其中一个或多个氨基酸残基是相应天然存在的氨基酸的类似物或模拟物的氨基酸聚合物，且适用于天然存在的氨基酸聚合物。这些术语还可以涵盖例如通过添加碳水化合物残基形成糖蛋白而进行修饰或被磷酸化的氨基酸聚合物。多肽和蛋白质可以由天然存在的细胞和非重组细胞产生；或由遗传工程化的细胞或重组的细胞产生，且包含具有天然蛋白质的氨基酸序列的分子或具有天然序列的一个或多个氨基酸缺失、添加和/或取代的分子。术语“多肽”和“蛋白质”特别地涵盖GIPR抗原结合蛋白、抗体或具有抗原结合蛋白的一个或多个氨基酸缺失、添加和/或取代的序列。术语“多肽片段”是指相较于全长蛋白质，具有氨基-末端缺失、羧基-末端缺失和/或内部缺失的多肽。此类片段还可含有相较于全长蛋白质而被修饰的氨基酸。在某些实施例中，片段的长度是约五至500个氨基酸。例如，片段的长度可以为至少5、6、8、10、14、20、50、70、100、110、150、200、250、300、350、400或450个氨基酸。有用的多肽片段包括抗体的免疫功能片段，包括结合结构域。
术语“经分离的蛋白质”意指，主题蛋白质(1)不含至少一些通常与其一起被发现的其他蛋白质；(2)基本上不含来自相同来源，例如来自相同种类的其他蛋白质；(3)由来自不同物种的细胞表达；(4)已与至少约50％的在自然界与其缔合的多核苷酸、脂质、碳水化合物或其他物质分离；(5)与在自然界未与其缔合的多肽可操作地缔合(通过共价或非共价相互作用)；或(6)在自然界中不存在。典型地，“经分离的蛋白质”构成给定样品的至少约5％、至少约10％、至少约25％或至少约50％。合成来源的基因组DNA、cDNA、mRNA或其他RNA、或其任何组合可以编码此类经分离的蛋白质。优选地，经分离的蛋白质基本上不含在其然环境中发现的会干扰其治疗、诊断、预防、研究或其他用途的蛋白质或多肽或其他污染物。
多肽(例如抗原结合蛋白，例如抗体)的“变体”包含以下氨基酸序列，其中相对于另一多肽序列，一个或多个氨基酸残基被插入该氨基酸序列中、从该氨基酸序列缺失和/或取代到该氨基酸序列中。变体包括融合蛋白。
多肽的“衍生物”是以不同于插入变体、缺失变体或取代变体的某种方式，例如经由与另一化学部分偶联而被化学修饰的多肽(例如抗原结合蛋白，例如抗体)。
如本说明书通篇结合例如多肽、核酸、宿主细胞等生物材料使用的术语“天然存在”是指在自然界中发现的材料。
如本文所使用，“受试者”或“患者”可以为任何哺乳动物。在一个典型实施例中，受试者或患者是人类。
如本文所披露的，可以使用标准分子生物学方法工程化和/或产生本披露所描述的GIPR多肽。在各种实例中，可以使用适当寡核苷酸引物，从基因组DNA或cDNA分离和/或扩增编码GIPR的核酸序列，其可以包含SEQ ID NO：1、3或5的全部或一部分。引物可以根据标准(RT)-PCR扩增技术，基于本文所提供的核酸序列和氨基酸序列设计。然后，可以将扩增的GIPR核酸克隆至合适的载体中，并通过DNA序列分析进行表征。
在分离或扩增本文所提供的GIPR序列的全部或一部分时用作探针的寡核苷酸可以使用标准合成技术(例如自动DNA合成装置)设计和产生，或者可以从较长的DNA序列分离。
人类GIPR的466个氨基酸的序列是(Volz等人，FEBS Lett.[欧洲生化学会联盟通讯]373：23-29(1995)；NCBI参考序列：NP_0001555)：
且由以下DNA序列(NCBI参考序列：NM_000164)编码：
由自动计算分析预测的人类GIPR的430个氨基酸的同种型(同种型X1)具有以下序列(NCBI参考序列XP_005258790)：
且由以下DNA序列编码：
由替代性剪接产生的人类GIPR的493个氨基酸的同种型具有以下序列(Gremlich等人，Diabetes[糖尿病]44：1202-8(1995)；UniProtKB序列标识符：P48546-2)：
且由以下DNA序列编码：
鼠类GIPR的460个氨基酸的序列是(NCBI参考序列：NP_001074284；uniprotKB/Swiss-Prot Q0P543-1)；参见Vassilatis等人，PNAS USA 2003[美国国家科学院院刊]，100：4903-4908。
且由以下DNA序列(NCBI参考序列：NM_001080815)编码：
由替代性剪接产生的鼠类GIPR的230个氨基酸的同种型具有以下序列(Gerhard等人，Genome Res[基因组研究]，14：2121-2127(2004)；NCBI参考序列：AAI20674)：
且由以下DNA序列编码：
如本文所述，术语“GIPR多肽”涵盖天然存在的GIPR多肽序列，例如人类氨基酸序列SEQ ID NO：3141、3143或3145。然而，术语“GIPR多肽”还涵盖以下多肽，这些多肽包含与天然存在的GIPR多肽序列的氨基酸序列(例如SEQ ID NO：3141、3143或3145)相差一个或多个氨基酸的氨基酸序列，使得该序列与SEQ ID NO：3141、3143或3145具有至少90％同一性。GIPR多肽可以通过引入一个或多个保守或非保守氨基酸取代，并在GIPR多肽的特定位置使用天然或非天然存在的氨基酸来产生。
“保守氨基酸取代”可以涉及天然氨基酸残基(即，在野生型GIPR多肽序列的给定位置中发现的残基)被非天然残基(即，在野生型GIPR多肽序列的给定位置中未发现的残基)取代，使得对在该位置的氨基酸残基的极性或电荷具有极小影响或无影响。保守氨基酸取代还包括典型地通过化学肽合成而非通过生物系统中的合成而掺入的非天然存在的氨基酸残基。这些包括肽模拟物和氨基酸部分的其他反向或逆向形式。
基于共同的侧链特性可以将天然存在的残基分类：
(1)疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr；
(3)酸性：Asp、Glu；
(4)碱性：Asn、Gln、His、Lys、Arg；
(5)影响链取向的残基：Gly、Pro；以及
(6)芳族的：Trp、Tyr、Phe。
还可使用例如Creighton(1984)PROTEINS：STRUCTURE AND MOLECULARPROPERTIES[蛋白质：结构和分子特性](第2版，1993)，W.H.Freeman and Company[W.H.弗里曼公司]中所描述的原理制定氨基酸的其他组群。在一些情况下，基于此类特征中的两种或更多种进一步表征取代可能是有用的(例如用“较小极性”残基(例如Thr残基)进行的取代可以代表在适当环境下的高度保守取代)。
保守取代可以涉及这些种类之一中的成员被同一种类的另一成员替换。非保守取代可以涉及这些种类之一中的成员被另一种类的成员替换。
已知与上述分组的氨基酸残基具有类似物理化学特性的合成氨基酸残基、稀少氨基酸残基或经修饰的氨基酸残基可以用作序列中的特定氨基酸残基的“保守”取代。例如，D-Arg残基可以充当典型L-Arg残基的取代物。可以关于以上所述种类中的两种或更多种来描述特定取代也正是此情形(例如，用较小且疏水性残基取代意指一个氨基酸被在上述种类中的两类或本领域中已知与满足这两个定义的残基具有类似物理化学特性的其他合成残基、稀少残基或经修饰的残基中所见的一个或多个残基取代)。
编码本文所提供的GIPR多肽(包括与SEQ ID NO：3141、3143或3145具有简并性的多肽)的核酸序列，以及编码SEQ ID NO：3141、3143或3145的多肽变体的核酸序列形成本披露的其他方面。
为了表达本文所提供的GIPR核酸序列，根据本领域已知的标准克隆和表达技术(例如，如Sambrook，J.，Fritsh，E.F.和Maniatis，T.Molecular Cloning：A LaboratoryManual[分子克隆：实验室手册]第2版，Cold Spring Harbor Laboratory[冷泉港实验室]，Cold Spring Harbor Laboratory Press[冷泉港实验室出版社]，冷泉港，纽约，1989中所描述)，可以将适当编码序列(例如SEQ ID NO：3141、3143或3145)克隆至合适的载体中且在引入合适的宿主中之后，可以表达该序列以产生编码多肽。本发明还涉及包含根据本发明的核酸序列的此类载体。
“载体”是指一种递送媒介，其(a)促进编码多肽的核酸序列的表达；(b)促进由其产生多肽；(c)促进用其转染/转化靶细胞；(d)促进核酸序列的复制；(e)促进核酸的稳定性；(f)促进核酸和/或被转化/转染的细胞的检测；和/或(g)以其他方式赋予编码多肽的核酸有利的生物和/或物理化学功能。载体可以为任何合适的载体，包括染色体载体、非染色体载体和合成核酸载体(包含一组合适的表达控制元件的核酸序列)。此类载体的实例包括SV40的衍生物、细菌质粒、噬菌体DNA、杆状病毒、酵母质粒、来源于质粒与噬菌体DNA的组合的载体、以及病毒核酸(RNA或DNA)载体。
重组表达载体可以设计成用于在原核细胞(例如大肠杆菌)或真核细胞(例如使用杆状病毒表达载体的昆虫细胞，酵母细胞或哺乳动物细胞)中表达GIPR蛋白。在一个实施例中，宿主细胞是非人哺乳动物宿主细胞。代表性宿主细胞包括典型地用于克隆和表达的那些宿主，包括大肠杆菌菌株TOP10F′、TOP10、DH10B、DH5a、HB101、W3110、BL21(DE3)和BL21(DE3)pLysS、BLUESCRIPT(Stratagene)；哺乳动物细胞系CHO、CHO-K1、HEK293、293-EBNApIN载体(Van Heeke和Schuster，J.Biol.Chem.[生物化学杂志]264：5503-5509(1989))；pET载体(Novagen，威斯康星州麦迪逊市(Madison Wis.))。可替代地，可以在体外，例如使用T7启动子调控序列和T7聚合酶以及体外翻译系统来转录并翻译该重组表达载体。优选地，该载体在含有编码该多肽的核酸序列的克隆位点上游包含启动子。可以打开和关闭的启动子的实例包括lac启动子、T7启动子、trc启动子、tac启动子和trp启动子。
因此，本文提供包含编码GIPR的核酸序列的载体，这些载体有利于重组GIPR的表达。在各种实施例中，载体包含可操作地连接的、调控GIPR的表达的核苷酸序列。载体可以包含或缔合任何合适的启动子、增强子和其他促进表达的元件。此类元件的实例包括强表达启动子(例如人类CMV IE启动子/增强子、RSV启动子、SV40启动子、SL3-3启动子、MMTV启动子或HIV LTR启动子、EF1α启动子、CAG启动子)、有效的聚(A)终止序列、大肠杆菌中质粒产物的复制起点、作为可选择标记物的抗生素抗性基因、和/或方便的克隆位点(例如多聚接头)。载体还可包含与组成型启动子(例如CMV IE)相反的诱导型启动子。在一个方面，提供包含编码GIPR多肽的序列的核酸，该核酸可操作地连接至组织特异性启动子，该启动子促进代谢相关组织(例如肝或胰脏组织)中该序列的表达。
在本发明的另一方面中，提供包含本文所披露的GIPR核酸和载体的宿主细胞。在各种实施例中，将载体或核酸整合至宿主细胞基因组中，在其他实施例中，该载体或核酸是在染色体外。
提供包含此类核酸、载体或其任一种或两种的组合的重组细胞，例如酵母、细菌(例如大肠杆菌)和哺乳动物细胞(例如永生化哺乳动物细胞)。在各种实施例中，提供包含非整合性核酸(例如质粒、粘粒、噬菌粒或线性表达元件)的细胞，该核酸包含用于表达GIPR多肽的编码序列。
可以通过转化或通过转染将包含编码本文所提供的GIPR多肽的核酸序列的载体引入宿主细胞中。用表达载体转化细胞的方法是熟知的。
GIPR编码核酸可以经由病毒载体安置于和/或递送至宿主细胞或宿主动物中。任何合适的病毒载体都能以这种能力使用。病毒载体可以包含单独或组合一种或多种病毒蛋白质的任何数目的病毒多核苷酸，这些多核苷酸促进本发明的核酸在所需宿主细胞中的递送、复制和/或表达。病毒载体可以为构成病毒基因组的全部或一部分的多核苷酸、病毒蛋白/核酸偶联物、病毒样粒子(VLP)或包含病毒核酸和GIPR多肽编码核酸的完整病毒粒子。病毒粒子病毒载体可以包含野生型病毒粒子或经修饰的病毒粒子。病毒载体可以为需要存在另一载体或野生型病毒以进行复制和/或表达的载体(例如病毒载体可以为辅助依赖性病毒)，例如腺病毒载体扩增子。典型地，此类病毒载体由以下组成：野生型病毒粒子，或其蛋白质和/或核酸内含物被修饰成增加转基因容量或帮助核酸转染和/或表达的病毒粒子(此类载体的实例包括疱疹病毒/AAV扩增子)。典型地，病毒载体类似于和/或来源于通常感染人类的病毒。就这一点而言，合适的病毒载体粒子包括例如腺病毒载体粒子(包括属于腺病毒科病毒或来源于腺病毒科病毒的任何病毒)、腺相关病毒载体粒子(AAV载体粒子)或其他细小病毒属和细小病毒载体粒子、乳头瘤病毒载体粒子、黄病毒载体、α病毒载体、疱疹病毒载体、痘病毒载体、逆转录病毒载体(包括慢病毒载体)。
如本文所述表达的GIPR多肽可以使用标准蛋白质纯化方法分离。GIPR多肽可以自天然表达其的细胞分离，或者其可以自经工程化以表达GIPR的细胞(例如不天然表达GIPR的细胞)分离。
可以用于分离GIPR多肽的蛋白质纯化方法、以及相关材料和试剂是本领域已知的。可以用于分离GIPR多肽的其他纯化方法可以见于以下参考文献中，例如Bootcov MR，1997，Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]94：11514-9；Fairlie WD，2000，Gene[基因]254：67-76。
本文提供结合GIPR(包括人类GIPR(hGIPR))的拮抗剂抗原结合蛋白。在一个实施例中，人类GIPR具有如SEQ ID NO：3141中所示的序列。在另一个实施例中，人类GIPR具有如SEQ ID NO：3143中所示的序列。在另一个实施例中，人类GIPR具有如SEQ ID NO：3145中所示的序列。
在一个方面，本发明涉及一种组合物，该组合物包含特异性结合人类GIPR的抗体或其功能片段，其中该抗体或其功能片段在一个或多个偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代；并且该组合物包含GLP-1受体激动剂，其中该GLP-1受体激动剂经由在该一个或多个偶联位点处取代的半胱氨酸残基或非经典氨基酸残基的侧链偶联至该抗体或其功能片段。
所提供的抗原结合蛋白是嵌入和/或接合有一个或多个如本文所描述的互补决定区(CDR)的多肽。在一些抗原结合蛋白中，CDR嵌入“框架”区中，该框架区确定CDR取向使得实现CDR的适当抗原结合特性。本文所描述的某些抗原结合蛋白是抗体或来源于抗体。在其他抗原结合蛋白中，CDR序列是嵌入不同类型的蛋白质骨架中。以下进一步描述各种结构。
本文所披露的抗原结合蛋白具有多种效用。这些抗原结合蛋白例如可用于特异性结合测定、GIPR的亲和纯化以及用于鉴别其他GIPR活性拮抗剂的筛选测定中。抗原结合蛋白的其他用途包括例如诊断GIPR相关疾病或病症，以及确定GIPR存在或不存在的筛选测定。鉴于所提供的抗原结合蛋白是拮抗剂，故GIPR抗原结合蛋白还可用于治疗方法中，在这些方法中，其可用于减小体重增加，甚至同时维持或增加食物摄入，增加脂肪量％和增加瘦肉量％，提高葡萄糖耐量，降低胰岛素水平，降低胆固醇和甘油三酯水平。因此，抗原结合蛋白在治疗和预防糖尿病(例如2型糖尿病)、肥胖、血脂异常、葡萄糖水平升高或胰岛素水平升高方面有效用。
提供可用于调节GIPR活性的多种选择性结合剂。这些结合剂包括例如含有抗原结合结构域(例如scFv、结构域抗体和具有抗原结合区的多肽)且特异性结合至GIPR多肽(特别是人类GIPR)的抗原结合蛋白。这些结合剂中的一些例如可用于增强GIPR的活性，且可以活化一种或多种与GIPR有关的活性。
一般而言，提供的抗原结合蛋白典型地包含一个或多个(例如1、2、3、4、5或6个)如本文所描述的CDR。在一些情况下，抗原结合蛋白包含(a)多肽结构，以及(b)插入和/或接合至该多肽结构的一个或多个CDR。多肽结构可以呈多种不同的形式。例如，其可以为或包含天然存在的抗体、或其片段或变体的框架，或者可以本质上是完全合成的。下文进一步描述各种多肽结构的实例。
在某些实施例中，抗原结合蛋白的多肽结构是抗体或来源于抗体。因此，所提供的某些抗原结合蛋白的实例包括但不限于单克隆抗体、双特异性抗体、微型抗体、结构域抗体(例如)、合成抗体(在本文中有时称为“抗体模拟物”)、嵌合抗体、人源化抗体、人类抗体、抗体融合物、以及其各自的部分或片段。在一些情况下，抗原结合蛋白是完整抗体的免疫片段(例如Fab、Fab′、F(ab′)2)。在其他情况下，抗原结合蛋白是使用来自本发明抗体的CDR的scFv。
如本文所提供的抗原结合蛋白特异性结合人类GIPR。在一个具体实施例中，抗原结合蛋白特异性结合包含SEQ ID NO：3141的氨基酸序列或由其组成的人类GIPR。在一个具体实施例中，抗原结合蛋白特异性结合包含SEQ ID NO：3143的氨基酸序列或由其组成的人类GIPR。在一个具体实施例中，抗原结合蛋白特异性结合包含SEQ ID NO：3145的氨基酸序列或由其组成的人类GIPR。
所提供的抗原结合蛋白是拮抗剂且典型地具有以下特征中的一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个或全部八个：
(a)能够预防或减少GIP与GIPR的结合，其中结合程度可以例如通过如放射性标记的或荧光标记的配体结合研究等方法、或通过本文所描述的方法(例如cAMP测定或其他功能测定)测量。在可比较的条件下，该减少可以为相对于SEQ ID NO：3141、3143或3145的预处理程度的至少10％、25％、50％、100％或更高。
(b)能够降低血糖；
(c)能够增加葡萄糖耐量；
(d)能够增加胰岛素敏感性；
(e)能够减轻体重或减少体重增加；
(f)能够减少脂肪量或减少脂肪组织的炎症；
(g)能够降低空腹胰岛素水平；
(h)能够降低循环的胆固醇水平；
(i)能够降低循环的甘油三酯水平；
(j)能够减少肝脂肪变性或降低肝中甘油三酯水平；
(k)降低AST、ALT和/或ALP水平。
在一个实施例中，GIPR抗原结合蛋白具有以下活性中的一种或多种：
(a)结合人类GIPR，使得例如如经由表面等离子体共振或动力学排除测定技术所测量的，KD≤200nM、≤150nM、≤100nM、≤50nM、≤10nM、≤5nM、≤2nM或≤1nM。
(b)在人血清中的半衰期是至少3天。
如例如以下所述所测量的，所提供的一些抗原结合蛋白对于GIPR的缔合速率(on-rate，ka)是至少104/Mx秒、至少105/Mx秒或至少106/Mx秒。所提供的某些抗原结合蛋白具有较慢解离速率(dissociation rate/off-rate)。一些抗原结合蛋白的kd(解离速率)例如是1x 10-2s-1、或1x 10-3s-1、或1x 10-4s-1、或1x 10-5s-1。在某些实施例中，抗原结合蛋白的KD(平衡结合亲和力)小于25pM、50pM、100pM、500pM、1nM、5nM、10nM、25nM或50nM。
在另一方面，所提供的抗原结合蛋白在体外或体内(例如当给予人类受试者时)的半衰期是至少一天。在一个实施例中，抗原结合蛋白的半衰期是至少三天。在各种其他实施例中，抗原结合蛋白的半衰期是4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50或60天或更长。在另一个实施例中，抗原结合蛋白被衍生化或被修饰，使得其半衰期长于未衍生化或未修饰的抗体。在另一个实施例中，抗原结合蛋白含有增加血清半衰期的点突变。下文提供了有关此类突变体和衍生化形式的其他详情。
所提供的抗原结合蛋白中的一些具有典型地与天然存在的抗体相关的结构。这些抗体的结构单元典型地包含一个或多个四聚体，每个四聚体由两对相同的多肽链构成，不过一些哺乳动物物种还产生仅具有单一重链的抗体。在典型抗体中，每对包括一条全长“轻”链(在某些实施例中约25kDa)和一条全长“重”链(在某些实施例中约50-70kDa)。每条个体免疫球蛋白链由若干“免疫球蛋白结构域”构成，每个免疫球蛋白结构域由约90至110个氨基酸组成且表达特有折叠模式。这些结构域是所构成的抗体多肽的基本单元。每条链的氨基末端部分典型地包括负责抗原识别的可变结构域。羧基末端部分在进化上比该链另一端更保守且称为“恒定区”或“C区”。人类轻链一般分类为κ和λ轻链，且其各自含有一个可变结构域和一个恒定结构域。重链典型地分类为μ、δ、γ、α或ε链，且其分别将抗体同种型定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。IgG具有若干亚型，包括但不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。IgM亚型包括IgM和IgM2。IgA亚型包括IgA1和IgA2。在人类中，IgA和IgD同种型含有四条重链和四条轻链；IgG和IgE同种型含有两条重链和两条轻链；且IgM同种型含有五条重链和五条轻链。重链C区典型地包含一个或多个可以负责效应子功能的结构域。重链恒定区结构域的数量将取决于同种型。IgG重链例如各自含有三个C区结构域，称为CH1、CH2和CH3。所提供的抗体可以具有这些同种型和亚型中的任一种。在某些实施例中，GIPR抗体属于IgG1、IgG2或IgG4亚型。术语“GIPR抗体”和“抗GIPR抗体”在整个本申请和附图中可互换使用。这两个术语均指结合GIPR的抗体。
在全长轻链和重链中，可变区和恒定区通过约十二个或更多氨基酸的“J”区接合，且重链还包括约十个或更多个氨基酸的“D”区。参见例如Fundamental Immunology[基础免疫学]，第2版，第7章(Paul，W.编辑)1989，纽约：Raven Press[雷文出版社](出于所有目的，通过引用以其全文特此并入)。每个轻链/重链对的可变区典型地形成抗原结合位点。
对于本文所提供的抗体，免疫球蛋白链的可变区一般展现相同的整体结构，包含由三个高变区(更通常称为“互补决定区”或CDR)接合的相对保守的框架区(FR)。来自以上提及的各重链/轻链对的两条链的CDR通过框架区进行对准以形成特异性结合GIPR上的特定表位的结构。自N-末端至C-末端，天然存在的轻链和重链可变区典型地符合以下这些元件的次序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。已设计出编号系统用于指定在这些结构域的每一个中占据位置的氨基酸的编号。该编号系统定义于Kabat Sequences of Proteinsof Immunological Interest[免疫学感兴趣的蛋白质序列](1987和1991，美国国家卫生研究院(NIH)，贝塞斯达(Bethesda)，马里兰州(Md.))，或Chothia和Lesk，1987，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]196：901-917；Chothia等人，1989，Nature[自然]342：878-883中。
有关如以下实例中所述制备和鉴定的特定抗体的序列信息概述于表1中。因此，在一个实施例中，抗原结合蛋白是具有如表1中各列之一所指明的CDR、可变结构域以及轻链和重链序列的抗体。
已指定本发明抗体及其片段的可变轻链、可变重链、轻链、重链、CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2和CDRH3序列的SEQ ID NO并显示于表1中。还已指定编码本发明抗体及其片段的可变轻链、可变重链、轻链、重链、CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2和CDRH3序列的多核苷酸的SEQ ID NO并显示于表2中。本发明的抗原结合蛋白可以由SEQ ID NO以及构建体名称(例如2C2.005)或标识符编号(例如iPS：336175)识别。下表1-5中标识的抗原结合蛋白可以基于构建体名称分为数个家族。例如，“4B1家族”包括构建体4B1、4B1.010、4B1.011、4B1.012、4B1.013、4B1.014、4B1.015和4B1.016。
本文提供的各种轻链和重链可变区描述于表3中。这些可变区各自可以附接至重链或轻链恒定区以分别形成完整抗体重链和轻链。此外，由此产生的重链和轻链序列各自可以组合形成完整抗体结构。
在一个实施例中，该抗体或其片段包括包含选自由SEQ ID NO：1-157组成的组的序列的轻链可变区和包含选自由SEQ ID NO：158-314组成的组的序列的重链可变区，其中该抗体或其功能片段在一个或多个选自由以下组成的组的偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代：相对于参考序列SEQ ID NO：455，抗体轻链的D70；相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的E276；以及相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的T363。
在一个实施例中，该抗体或其片段包含选自由以下组成的组的轻链可变区与重链可变区的组合：包含SEQ ID NO：1的轻链可变区和包含SEQ ID NO：158的重链可变区；包含SEQ ID NO：2的轻链可变区和包含SEQ ID NO：159的重链可变区；包含SEQ ID NO：3的轻链可变区和包含SEQ ID NO：160的重链可变区；包含SEQ ID NO：4的轻链可变区和包含SEQ IDNO：161的重链可变区；包含SEQ ID NO：5的轻链可变区和包含SEQ ID NO：162的重链可变区；包含SEQ ID NO：6的轻链可变区和包含SEQ ID NO：163的重链可变区；包含SEQ ID NO：7的轻链可变区和包含SEQ ID NO：164的重链可变区；包含SEQ ID NO：8的轻链可变区和包含SEQ ID NO：165的重链可变区；包含SEQ ID NO：9的轻链可变区和包含SEQ ID NO：166的重链可变区；包含SEQ ID NO：10的轻链可变区和包含SEQ ID NO：167的重链可变区；包含SEQID NO：11的轻链可变区和包含SEQ ID NO：168的重链可变区；包含SEQ ID NO：12的轻链可变区和包含SEQ ID NO：169的重链可变区；包含SEQ ID NO：13的轻链可变区和包含SEQ IDNO：170的重链可变区；包含SEQ ID NO：14的轻链可变区和包含SEQ ID NO：171的重链可变区；包含SEQ ID NO：15的轻链可变区和包含SEQ ID NO：172的重链可变区；包含SEQ ID NO：16的轻链可变区和包含SEQ ID NO：173的重链可变区；包含SEQ ID NO：17的轻链可变区和包含SEQ ID NO：174的重链可变区；包含SEQ ID NO：18的轻链可变区和包含SEQ ID NO：175的重链可变区；包含SEQ ID NO：19的轻链可变区和包含SEQ ID NO：176的重链可变区；包含SEQ ID NO：20的轻链可变区和包含SEQ ID NO：177的重链可变区；包含SEQ ID NO：21的轻链可变区和包含SEQ ID NO：178的重链可变区；包含SEQ ID NO：22的轻链可变区和包含SEQID NO：179的重链可变区；包含SEQ ID NO：23的轻链可变区和包含SEQ ID NO：180的重链可变区；包含SEQ ID NO：24的轻链可变区和包含SEQ ID NO：181的重链可变区；包含SEQ IDNO：25的轻链可变区和包含SEQ ID NO：182的重链可变区；包含SEQ ID NO：26的轻链可变区和包含SEQ ID NO：183的重链可变区；包含SEQ ID NO：27的轻链可变区和包含SEQ ID NO：184的重链可变区；包含SEQ ID NO：28的轻链可变区和包含SEQ ID NO：185的重链可变区；包含SEQ ID NO：29的轻链可变区和包含SEQ ID NO：186的重链可变区；包含SEQ ID NO：30的轻链可变区和包含SEQ ID NO：187的重链可变区；包含SEQ ID NO：31的轻链可变区和包含SEQ ID NO：188的重链可变区；包含SEQ ID NO：32的轻链可变区和包含SEQ ID NO：189的重链可变区；包含SEQ ID NO：33的轻链可变区和包含SEQ ID NO：190的重链可变区；包含SEQ ID NO：34的轻链可变区和包含SEQ ID NO：191的重链可变区；包含SEQ ID NO：35的轻链可变区和包含SEQ ID NO：192的重链可变区；包含SEQ ID NO：36的轻链可变区和包含SEQID NO：193的重链可变区；包含SEQ ID NO：37的轻链可变区和包含SEQ ID NO：194的重链可变区；包含SEQ ID NO：38的轻链可变区和包含SEQ ID NO：195的重链可变区；包含SEQ IDNO：39的轻链可变区和包含SEQ ID NO：196的重链可变区；包含SEQ ID NO：40的轻链可变区和包含SEQ ID NO：197的重链可变区；包含SEQ ID NO：41的轻链可变区和包含SEQ ID NO：198的重链可变区；包含SEQ ID NO：42的轻链可变区和包含SEQ ID NO：199的重链可变区；包含SEQ ID NO：43的轻链可变区和包含SEQ ID NO：200的重链可变区；包含SEQ ID NO：44的轻链可变区和包含SEQ ID NO：201的重链可变区；包含SEQ ID NO：45的轻链可变区和包含SEQ ID NO：202的重链可变区；包含SEQ ID NO：46的轻链可变区和包含SEQ ID NO：203的重链可变区；包含SEQ ID NO：47的轻链可变区和包含SEQ ID NO：204的重链可变区；包含SEQ ID NO：48的轻链可变区和包含SEQ ID NO：205的重链可变区；包含SEQ ID NO：49的轻链可变区和包含SEQ ID NO：206的重链可变区；包含SEQ ID NO：50的轻链可变区和包含SEQID NO：207的重链可变区；包含SEQ ID NO：51的轻链可变区和包含SEQ ID NO：208的重链可变区；包含SEQ ID NO：52的轻链可变区和包含SEQ ID NO：209的重链可变区；包含SEQ IDNO：53的轻链可变区和包含SEQ ID NO：210的重链可变区；包含SEQ ID NO：54的轻链可变区和包含SEQ ID NO：211的重链可变区；包含SEQ ID NO：55的轻链可变区和包含SEQ ID NO：212的重链可变区；包含SEQ ID NO：56的轻链可变区和包含SEQ ID NO：213的重链可变区；包含SEQ ID NO：57的轻链可变区和包含SEQ ID NO：214的重链可变区；包含SEQ ID NO：58的轻链可变区和包含SEQ ID NO：215的重链可变区；包含SEQ ID NO：59的轻链可变区和包含SEQ ID NO：216的重链可变区；包含SEQ ID NO：60的轻链可变区和包含SEQ ID NO：217的重链可变区；包含SEQ ID NO：61的轻链可变区和包含SEQ ID NO：218的重链可变区；包含SEQ ID NO：62的轻链可变区和包含SEQ ID NO：219的重链可变区；包含SEQ ID NO：63的轻链可变区和包含SEQ ID NO：220的重链可变区；包含SEQ ID NO：64的轻链可变区和包含SEQID NO：221的重链可变区；包含SEQ ID NO：65的轻链可变区和包含SEQ ID NO：222的重链可变区；包含SEQ ID NO：66的轻链可变区和包含SEQ ID NO：223的重链可变区；包含SEQ IDNO：67的轻链可变区和包含SEQ ID NO：224的重链可变区；包含SEQ ID NO：68的轻链可变区和包含SEQ ID NO：225的重链可变区；包含SEQ ID NO：69的轻链可变区和包含SEQ ID NO：226的重链可变区；包含SEQ ID NO：70的轻链可变区和包含SEQ ID NO：227的重链可变区；包含SEQ ID NO：71的轻链可变区和包含SEQ ID NO：228的重链可变区；包含SEQ ID NO：72的轻链可变区和包含SEQ ID NO：229的重链可变区；包含SEQ ID NO：73的轻链可变区和包含SEQ ID NO：230的重链可变区；包含SEQ ID NO：74的轻链可变区和包含SEQ ID NO：231的重链可变区；包含SEQ ID NO：75的轻链可变区和包含SEQ ID NO：232的重链可变区；包含SEQ ID NO：76的轻链可变区和包含SEQ ID NO：233的重链可变区；包含SEQ ID NO：77的轻链可变区和包含SEQ ID NO：234的重链可变区；包含SEQ ID NO：78的轻链可变区和包含SEQID NO：235的重链可变区；包含SEQ ID NO：79的轻链可变区和包含SEQ ID NO：236的重链可变区；包含SEQ ID NO：80的轻链可变区和包含SEQ ID NO：237的重链可变区；包含SEQ IDNO：81的轻链可变区和包含SEQ ID NO：238的重链可变区；包含SEQ ID NO：82的轻链可变区和包含SEQ ID NO：239的重链可变区；包含SEQ ID NO：83的轻链可变区和包含SEQ ID NO：240的重链可变区；包含SEQ ID NO：84的轻链可变区和包含SEQ ID NO：241的重链可变区；包含SEQ ID NO：85的轻链可变区和包含SEQ ID NO：242的重链可变区；包含SEQ ID NO：86的轻链可变区和包含SEQ ID NO：243的重链可变区；包含SEQ ID NO：87的轻链可变区和包含SEQ ID NO：244的重链可变区；包含SEQ ID NO：88的轻链可变区和包含SEQ ID NO：245的重链可变区；包含SEQ ID NO：89的轻链可变区和包含SEQ ID NO：246的重链可变区；包含SEQ ID NO：90的轻链可变区和包含SEQ ID NO：247的重链可变区；包含SEQ ID NO：91的轻链可变区和包含SEQ ID NO：248的重链可变区；包含SEQ ID NO：92的轻链可变区和包含SEQID NO：249的重链可变区；包含SEQ ID NO：93的轻链可变区和包含SEQ ID NO：250的重链可变区；包含SEQ ID NO：94的轻链可变区和包含SEQ ID NO：251的重链可变区；包含SEQ IDNO：95的轻链可变区和包含SEQ ID NO：252的重链可变区；包含SEQ ID NO：96的轻链可变区和包含SEQ ID NO：253的重链可变区；包含SEQ ID NO：97的轻链可变区和包含SEQ ID NO：254的重链可变区；包含SEQ ID NO：98的轻链可变区和包含SEQ ID NO：255的重链可变区；包含SEQ ID NO：99的轻链可变区和包含SEQ ID NO：256的重链可变区；包含SEQ ID NO：100的轻链可变区和包含SEQ ID NO：257的重链可变区；包含SEQ ID NO：101的轻链可变区和包含SEQ ID NO：258的重链可变区；包含SEQ ID NO：102的轻链可变区和包含SEQ ID NO：259的重链可变区；包含SEQ ID NO：103的轻链可变区和包含SEQ ID NO：260的重链可变区；包含SEQ ID NO：104的轻链可变区和包含SEQ ID NO：261的重链可变区；包含SEQ ID NO：105的轻链可变区和包含SEQ ID NO：262的重链可变区；包含SEQ ID NO：106的轻链可变区和包含SEQ ID NO：263的重链可变区；包含SEQ ID NO：107的轻链可变区和包含SEQ ID NO：264的重链可变区；包含SEQ ID NO：108的轻链可变区和包含SEQ ID NO：265的重链可变区；包含SEQ ID NO：109的轻链可变区和包含SEQ ID NO：266的重链可变区；包含SEQ ID NO：110的轻链可变区和包含SEQ ID NO：267的重链可变区；包含SEQ ID NO：111的轻链可变区和包含SEQ ID NO：268的重链可变区；包含SEQ ID NO：112的轻链可变区和包含SEQ ID NO：269的重链可变区；包含SEQ ID NO：113的轻链可变区和包含SEQ ID NO：270的重链可变区；包含SEQ ID NO：114的轻链可变区和包含SEQ ID NO：271的重链可变区；包含SEQ ID NO：115的轻链可变区和包含SEQ ID NO：272的重链可变区；包含SEQ ID NO：116的轻链可变区和包含SEQ ID NO：273的重链可变区；包含SEQ ID NO：117的轻链可变区和包含SEQ ID NO：274的重链可变区；包含SEQ ID NO：118的轻链可变区和包含SEQ ID NO：275的重链可变区；包含SEQ ID NO：119的轻链可变区和包含SEQ ID NO：276的重链可变区；包含SEQ ID NO：120的轻链可变区和包含SEQ ID NO：277的重链可变区；包含SEQ ID NO：121的轻链可变区和包含SEQ ID NO：278的重链可变区；包含SEQ ID NO：122的轻链可变区和包含SEQ ID NO：279的重链可变区；包含SEQ ID NO：123的轻链可变区和包含SEQ ID NO：280的重链可变区；包含SEQ ID NO：124的轻链可变区和包含SEQ ID NO：281的重链可变区；包含SEQ ID NO：125的轻链可变区和包含SEQ ID NO：282的重链可变区；包含SEQ ID NO：126的轻链可变区和包含SEQ ID NO：283的重链可变区；包含SEQ ID NO：127的轻链可变区和包含SEQ ID NO：284的重链可变区；包含SEQ ID NO：128的轻链可变区和包含SEQ ID NO：285的重链可变区；包含SEQ ID NO：129的轻链可变区和包含SEQ ID NO：286的重链可变区；包含SEQ ID NO：130的轻链可变区和包含SEQ ID NO：287的重链可变区；包含SEQ ID NO：131的轻链可变区和包含SEQ ID NO：288的重链可变区；包含SEQ ID NO：132的轻链可变区和包含SEQ ID NO：289的重链可变区；包含SEQ ID NO：133的轻链可变区和包含SEQ ID NO：290的重链可变区；包含SEQ ID NO：134的轻链可变区和包含SEQ ID NO：291的重链可变区；包含SEQ ID NO：135的轻链可变区和包含SEQ ID NO：292的重链可变区；包含SEQ ID NO：136的轻链可变区和包含SEQ ID NO：293的重链可变区；包含SEQ ID NO：137的轻链可变区和包含SEQ ID NO：294的重链可变区；包含SEQ ID NO：138的轻链可变区和包含SEQ ID NO：295的重链可变区；包含SEQ ID NO：139的轻链可变区和包含SEQ ID NO：296的重链可变区；包含SEQ ID NO：140的轻链可变区和包含SEQ ID NO：297的重链可变区；包含SEQ ID NO：141的轻链可变区和包含SEQ ID NO：298的重链可变区；包含SEQ ID NO：142的轻链可变区和包含SEQ ID NO：299的重链可变区；包含SEQ ID NO：143的轻链可变区和包含SEQ ID NO：300的重链可变区；包含SEQ ID NO：144的轻链可变区和包含SEQ ID NO：301的重链可变区；包含SEQ ID NO：145的轻链可变区和包含SEQ ID NO：302的重链可变区；包含SEQ ID NO：146的轻链可变区和包含SEQ ID NO：303的重链可变区；包含SEQ ID NO：147的轻链可变区和包含SEQ ID NO：304的重链可变区；包含SEQ ID NO：148的轻链可变区和包含SEQ ID NO：305的重链可变区；包含SEQ ID NO：149的轻链可变区和包含SEQ ID NO：306的重链可变区；包含SEQ ID NO：150的轻链可变区和包含SEQ ID NO：307的重链可变区；包含SEQ ID NO：151的轻链可变区和包含SEQ ID NO：308的重链可变区；包含SEQ ID NO：152的轻链可变区和包含SEQ ID NO：309的重链可变区；包含SEQ ID NO：153的轻链可变区和包含SEQ ID NO：310的重链可变区；包含SEQ ID NO：154的轻链可变区和包含SEQ ID NO：311的重链可变区；包含SEQ ID NO：155的轻链可变区和包含SEQ ID NO：312的重链可变区；包含SEQ ID NO：156的轻链可变区和包含SEQ ID NO：313的重链可变区；以及包含SEQ ID NO：157的轻链可变区和包含SEQ ID NO：314的重链可变区，其中该抗体或其功能片段在一个或多个选自由以下组成的组的偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代：相对于参考序列SEQ ID NO：455，抗体轻链的D70；相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的E276；以及相对于参考序列SEQ IDNO：612，抗体重链的T363。
在一个实施例中，该抗体或其片段包含由选自由SEQ ID NO：1571-1727组成的组的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由选自由SEQ ID NO：1728-1884组成的组的多核苷酸序列编码的重链可变区，其中该抗体或其功能片段在一个或多个选自由以下组成的组的偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代：相对于参考序列SEQ ID NO：455，抗体轻链的D70；相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的E276；以及相对于参考序列SEQID NO：612，抗体重链的T363。
在一个实施例中，该抗体或其片段包含选自由以下组成的组的轻链可变区与重链可变区的组合：由包含SEQ ID NO：1571的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1728的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1572的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1729的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1573的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1730的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1574的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1731的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1575的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1732的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1576的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1733的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1577的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1734的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1578的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1735的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1579的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1736的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1580的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1737的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1581的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1738的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1582的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1739的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1583的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1740的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1584的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1741的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1585的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1742的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1586的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1743的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1587的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1744的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1588的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1745的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1589的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1746的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1590的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1747的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1591的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1748的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1592的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1749的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1593的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1750的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1594的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1751的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1595的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1752的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1596的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1753的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1597的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1754的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1598的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1755的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1599的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1756的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1600的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1757的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1601的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1758的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1602的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1759的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1603的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1760的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1604的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1761的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1605的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1762的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1606的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1763的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1607的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1764的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1608的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1765的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1609的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1766的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1610的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1767的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1611的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1768的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1612的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1769的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1613的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1770的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1614的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1771的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1615的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1772的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1616的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1773的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1617的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1774的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1618的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1775的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1619的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1776的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1620的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1777的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1621的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1778的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1622的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1779的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1623的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1780的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1624的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1781的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1625的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1782的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1626的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1783的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1627的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1784的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1628的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1785的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1629的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1786的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1630的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1787的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1631的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1788的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1632的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1789的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1633的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1790的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1634的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1791的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1635的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1792的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1636的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1793的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1637的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1794的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1638的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1795的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1639的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1796的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1640的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1797的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1641的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1798的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1642的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1799的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1643的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1800的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1644的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1801的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1645的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1802的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1646的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1803的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1647的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1804的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1648的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1805的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1649的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1806的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1650的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1807的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1651的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1808的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1652的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1809的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1653的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1810的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1654的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1811的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1655的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1812的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1656的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1813的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1657的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1814的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1658的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1815的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1659的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1816的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1660的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1817的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1661的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1818的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1662的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1819的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1663的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1820的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1664的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1821的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1665的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1822的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1666的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1823的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1667的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1824的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1668的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1825的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1669的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1826的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1670的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1827的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1671的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1828的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1672的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1829的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1673的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1830的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1674的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1831的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1675的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1832的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1676的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1833的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1677的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1834的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1678的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1835的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1679的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1836的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1680的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1837的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1681的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1838的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1682的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1839的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1683的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1840的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1684的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1841的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1685的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1842的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1686的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1843的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1687的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1844的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1688的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1845的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1689的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1846的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1690的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1847的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1691的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1848的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1692的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1849的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1693的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1850的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1694的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1851的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1695的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1852的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1696的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1853的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1697的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1854的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1698的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1855的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1699的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1856的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1700的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1857的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1701的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1858的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1702的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1859的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1703的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1860的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1704的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1861的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1705的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1862的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1706的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1863的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1707的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1864的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1708的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1865的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1709的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1866的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1710的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1867的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1711的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1868的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1712的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1869的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1713的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1870的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1714的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1871的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1715的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1872的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1716的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1873的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1717的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1874的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1718的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1875的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1719的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1876的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1720的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1877的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1721的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1878的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1722的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1879的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1723的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1880的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1724的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ IDNO：1881的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ ID NO：1725的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1882的多核苷酸序列编码的重链可变区；由包含SEQ IDNO：1726的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1883的多核苷酸序列编码的重链可变区；以及由包含SEQ ID NO：1727的多核苷酸序列编码的轻链可变区和由包含SEQ ID NO：1884的多核苷酸序列编码的重链可变区，其中该抗体或其功能片段在一个或多个选自由以下组成的组的偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代：相对于参考序列SEQ ID NO：455，抗体轻链的D70；相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的E276；以及相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的T363。
本发明涉及一种组合物，其包含具有至少一个偶联位点的抗GIPR抗原结合蛋白。该偶联位点必须适于通过确定的偶联化学，经该偶联位点处的氨基酸残基的侧链偶联另外的官能部分(例如GLP-1受体激动剂)。实现与根据本发明的抗GIPR抗原结合蛋白的高选择性、位点特异性偶联需要考虑多种不同的设计标准。首先，须确定或预先确定优选的偶联或偶合化学。官能部分(例如GLP-1受体激动剂)可以经由本领域中已知的不同偶联化学分类偶联或偶合至选定的抗GIPR抗原结合蛋白的偶联位点。例如，靶向抗GIPR抗原结合蛋白上可接近的半胱氨酸硫醇的马来酰亚胺活化的偶联配偶体是一个实施例，而且根据本发明，可以采用靶向抗GIPR抗原结合蛋白序列中的经典或非经典(例如非天然的)氨基酸的侧链的多种偶联或偶合化学。
化学选择性偶联的化学包括：铜(I)催化的叠氮化物-炔[3+2]偶极环加成；道丁格连接反应(Staudinger ligation)；其他酰基转移方法(S→N；X→N)；肟化反应；腙键形成；以及其他合适的有机化学反应，例如使用水溶性铂催化剂的交叉偶合反应。(例如，Bong等人，Chemoselective Pd(0)-catalyzed peptide coupling in water[化学选择性Pd(0)催化的肽在水中偶合]，Organic Letters[有机物通讯]3(16)：2509-11(2001)；Dibowski等人，Bioconjugation of peptides by palladium-catalyzed C-C cross-coupling inwater[通过在水中的钯催化的C-C交叉偶合进行肽的生物偶联]，Angew.Chem.Int.Ed.[应用化学国际版]37(4)：476-78(1998)；DeVasher等人，Aqueous-phase，palladium-catalyzed cross-coupling of aryl bromides under mild conditions，using water-soluble，sterically demanding alkylphosphines[使用水溶性、空间上需要的烷基膦在温和条件下进行芳基溴化物的水相、钯催化的交叉偶合]，J.Org.Chem.[有机化学杂志]69：7919-27(2004)；Shaugnessy等人，J.Org.Chem[有机化学杂志]，2003，68，6767-6774；Prescher，JA和Bertozzi CR，Chemistry in living system[生命系统中的化学]，NatureChemical Biology[自然化学生物学]1(1)；13-21(2005))。
如以上所提及，经由在偶联位点处的氨基酸残基(例如但不限于半胱氨酰基残基)的侧链进行与抗GIPR抗原结合蛋白的偶联(或共价结合)。选择的在内部偶联位点处的氨基酸残基(例如半胱氨酰基残基)可以为在天然Fc结构域序列中占据相同氨基酸残基位置的残基，或该氨基酸残基可以通过取代或插入而被工程化到Fc结构域序列中。
在本发明方法和物质组合物的一些实施例中，特别适用作偶联位点的非天然氨基酸残基的其他实例包括：包含叠氮基的氨基酸残基，例如叠氮高丙氨酸、对-叠氮基-苯丙氨酸；包含酮基的氨基酸残基，例如对-乙酰基-苯丙氨酸；包含炔烃的氨基酸残基，例如对-乙炔基苯丙氨酸、高炔丙基甘氨酸、对-(丙-2-炔基)-酪氨酸；包含烯烃的氨基酸残基，例如高烯丙基甘氨酸；包含芳基卤化物的氨基酸残基，例如对-碘苯丙氨酸、对-溴苯丙氨酸；以及包含1，2-氨基硫醇的氨基酸残基。
非经典氨基酸残基可以通过氨基酸取代或插入来掺入。非经典氨基酸残基可以通过化学肽合成而非通过生物系统中的合成(例如重组表达细胞)而掺入肽中，或者可替代地技术人员可以采用使用重组表达细胞的蛋白质工程的已知技术。(参见例如，Link等人，Non-canonical amino acids in protein engineering[蛋白质工程中的非经典氨基酸]，Current Opinion in Biotechnology[当代生物技术观点]，14(6)：603-609(2003)；Schultz等人，In vivo incorporation of unnatural amino acids[体内掺入非天然氨基酸]，美国专利号7,045,337)。
在整个抗GIPR抗原结合蛋白中偶联位点放置的选择是选择根据本发明的内部偶联位点的另一重要方面。抗GIPR抗原结合蛋白上的任何暴露的氨基酸残基均可潜在地作为有用偶联位点，并且如果在抗GIPR抗原结合蛋白序列中选定的偶联位点处不存在时，可以被突变成半胱氨酸或一些其他的反应性氨基酸用于位点选择性偶合。然而，该方法未考虑可能干扰偶联配偶体的活性或限制工程化的突变的反应性的潜在空间限制。
在一个实施例中，抗GIPR抗原结合蛋白是抗体或其功能片段。在一个实施例中，抗GIPR抗体或其功能片段在一个或多个偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代。偶联位点可以基本上在抗原结合蛋白的任何残基上。在某些实施例中，偶联位点位于抗体或其功能片段的CL、CH1、CH2或CH3区内。在某些实施例中，偶联位点选自由以下组成的组：相对于参考序列SEQ ID NO：455，抗体轻链的D70；相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的E276；以及相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的T363。为简洁起见，“相对于参考序列SEQ ID NO：455，抗体轻链的D70”是与抗体5G12.006的轻链的AHo位置D88以及抗体5G12.006的轻链的Kabat位置D70相同的取代位点；“相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的E276”是与抗体5G12.006的重链的AHo位置E384和抗体5G12.006的重链的Kabat位置E285相同的取代位点；并且“相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的T363”是与抗体5G12.006的重链的AHo位置T487和抗体5G12.006的重链的Kabat位置T382相同的取代位点。
一些抗原结合蛋白包含如有关表3中所列抗体之一的各列中的一列所列的可变轻链结构域和可变重链结构域。在一些情况下，抗原结合蛋白包含来自表3中所列抗体之一的两个相同可变轻链结构域和两个相同可变重链结构域。所提供的一些抗原结合蛋白包含如有关表3中所列的抗体之一的各列中的一列所列的可变轻链结构域和可变重链结构域，不过这些结构域中的一个或两个与该表中指定的序列仅相差1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基，其中此类序列差异各自独立地为单一氨基酸缺失、插入或取代，其中这些缺失、插入和/或取代引起相对于表3中指定的可变结构域序列有仅1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸变化。在一个实施例中，抗原结合蛋白包含来自表3的可变区序列，但其中N-末端甲硫氨酸缺失。其他抗原结合蛋白还包含如有关表3中所列抗体之一的各列中的一列所列的可变轻链结构域和可变重链结构域，不过这些结构域中的一个或两个与该表中指定的序列的差异在于，该重链可变结构域和/或轻链可变结构域包含与表3中指定的重链可变结构域或轻链可变结构域序列的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，或由其组成。
在另一方面，抗原结合蛋白仅由来自表3中所列抗体的可变轻链结构域或可变重链结构域组成。在另一方面，抗原结合蛋白包含来自表3中所列结构域的两个或多个相同可变重链结构域或者两个或多个相同可变轻链结构域。此类结构域抗体可以经由接头融合在一起或接合，如下文更详细地描述。结构域抗体还可与一个或多个分子(例如PEG或白蛋白)融合或连接以延长半衰期。
所提供的其他抗原结合蛋白是通过组合表3中所显示的重链与轻链而形成的抗体变体，并且包含各自与这些链的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的轻链和/或重链。在一些情况下，此类抗体包括至少一条重链和一条轻链，而在其他情况下，变体形式含有两条相同轻链和两条相同重链。
重链可变区的各种组合可以与轻链可变区各种组合中的任一种组合。
在另一个实施例中，本文提供的经分离的抗原结合蛋白是包含如表3中所示的序列的人类抗体且属于IgG1、IgG2、IgG3或IgG4类型。
本文所披露的抗原结合蛋白是移植、插入和/或接合有一个或多个CDR的多肽。抗原结合蛋白可以具有1、2、3、4、5或6个CDR。因此，抗原结合蛋白可以具有例如一个重链CDR1(“CDRH1”)、和/或一个重链CDR2(“CDRH2”)、和/或一个重链CDR3(“CDRH3”)、和/或一个轻链CDR1(“CDRL1”)、和/或一个轻链CDR2(“CDRL2”)、和/或一个轻链CDR3(“CDRL3”)。一些抗原结合蛋白包括CDRH3和CDRL3两者。具体的轻链和重链CDR分别标识于表4A和4B中。
给定抗体的互补决定区(CDR)和框架区(FR)可以使用Kabat等人，在Sequences ofProteins of Immunological Interest[免疫学感兴趣的蛋白质序列]，第5版，美国卫生与人类服务部(US Dept.of Health and Human Services)，美国公共卫生署(PHS))，美国国家卫生研究院(NIH)，NIH公开号91-3242，1991中所描述的系统进行鉴别。本文所披露的某些抗体包含一个或多个与表4A和4B中所呈现的一个或多个CDR的氨基酸序列相同或具有较大序列同一性的氨基酸序列。这些CDR使用上述Kabat等人所描述的系统。
上文已经描述了天然存在的抗体内的CDR的结构和特性。简言之，在传统抗体中，CDR嵌入重链和轻链可变区的框架内，在此情况下，它们构成负责抗原结合和识别的区域。可变区包含在框架区(称为框架区1-4，即FR1、FR2、FR3和FR4，参见Kabat等人，1991，同上；还参见Chothia和Lesk，1987，同上)内的至少三个重链或轻链CDR，参见，同上(Kabat等人，1991，Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫学感兴趣的蛋白质序列]，美国国家卫生研究院公共卫生署(Public Health Service N.I.H.)，贝塞斯达(Bethesda)，马里兰州(MD)；还参见Chothia和Lesk，1987，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]196：901-917；Chothia等人，1989，Nature[自然]342：877-883)。然而，本文所提供的CDR不仅可以用于确定传统抗体结构的抗原结合结构域，而且可以嵌入多种其他多肽结构中，如本文所描述。
在一个实施例中，该抗体或其片段包含CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中该抗体或其功能片段在一个或多个选自由以下组成的组的偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代：相对于参考序列SEQ ID NO：455，抗体轻链的D70；相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的E276；以及相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的T363。在一个实施例中，该抗体或其片段包含CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2和CDRH3各自分别包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO：629、SEQ ID NO：786、SEQ ID NO：943、SEQ ID NO：1100、SEQ ID NO：1257和SEQ ID NO：1414；SEQ ID NO：630、SEQ ID NO：787、SEQ ID NO：944、SEQ ID NO：1101、SEQ ID NO：1258和SEQ ID NO：1415；SEQ ID NO：631、SEQ ID NO：788、SEQ ID NO：945、SEQ ID NO：1102、SEQ ID NO：1259和SEQ ID NO：1416；SEQ ID NO：632、SEQ ID NO：789、SEQ ID NO：946、SEQ ID NO：1103、SEQ ID NO：1260和SEQ ID NO：1417；SEQ ID NO：633、SEQ ID NO：790、SEQ ID NO：947、SEQ ID NO：1104、SEQ ID NO：1261和SEQ ID NO：1418；SEQ ID NO：634、SEQ ID NO：791、SEQ ID NO：948、SEQ ID NO：1105、SEQ ID NO：1262和SEQ ID NO：1419；SEQ ID NO：635、SEQ ID NO：792、SEQ ID NO：949、SEQ ID NO：1106、SEQID NO：1263和SEQ ID NO：1420；SEQ ID NO：636、SEQ ID NO：793、SEQ ID NO：950、SEQ IDNO：1107、SEQ ID NO：1264和SEQ ID NO：1421；SEQ ID NO：637、SEQ ID NO：794、SEQ ID NO：951、SEQ ID NO：1108、SEQ ID NO：1265和SEQ ID NO：1422；SEQ ID NO：638、SEQ ID NO：795、SEQ ID NO：952、SEQ ID NO：1109、SEQ ID NO：1266和SEQ ID NO：1423；SEQ ID NO：639、SEQ ID NO：796、SEQ ID NO：953、SEQ ID NO：1110、SEQ ID NO：1267和SEQ ID NO：1424；SEQ ID NO：640、SEQ ID NO：797、SEQ ID NO：954、SEQ ID NO：1111、SEQ ID NO：1268和SEQ ID NO：1425；SEQ ID NO：641、SEQ ID NO：798、SEQ ID NO：955、SEQ ID NO：1112、SEQID NO：1269和SEQ ID NO：1426；SEQ ID NO：642、SEQ ID NO：799、SEQ ID NO：956、SEQ IDNO：1113、SEQ ID NO：1270和SEQ ID NO：1427；SEQ ID NO：643、SEQ ID NO：800、SEQ ID NO：957、SEQ ID NO：1114、SEQ ID NO：1271和SEQ ID NO：1428；SEQ ID NO：644、SEQ ID NO：801、SEQ ID NO：958、SEQ ID NO：1115、SEQ ID NO：1272和SEQ ID NO：1429；SEQ ID NO：645、SEQ ID NO：802、SEQ ID NO：959、SEQ ID NO：1116、SEQ ID NO：1273和SEQ ID NO：1430；SEQ ID NO：646、SEQ ID NO：803、SEQ ID NO：960、SEQ ID NO：1117、SEQ ID NO：1274和SEQ ID NO：1431；SEQ ID NO：647、SEQ ID NO：804、SEQ ID NO：961、SEQ ID NO：1118、SEQID NO：1275和SEQ ID NO：1432；SEQ ID NO：648、SEQ ID NO：805、SEQ ID NO：962、SEQ IDNO：1119、SEQ ID NO：1276和SEQ ID NO：1433；SEQ ID NO：649、SEQ ID NO：806、SEQ ID NO：963、SEQ ID NO：1120、SEQ ID NO：1277和SEQ ID NO：1434；SEQ ID NO：650、SEQ ID NO：807、SEQ ID NO：964、SEQ ID NO：1121、SEQ ID NO：1278和SEQ ID NO：1435；SEQ ID NO：651、SEQ ID NO：808、SEQ ID NO：965、SEQ ID NO：1122、SEQ ID NO：1279和SEQ ID NO：1436；SEQ ID NO：652、SEQ ID NO：809、SEQ ID NO：966、SEQ ID NO：1123、SEQ ID NO：1280和SEQ ID NO：1437；SEQ ID NO：653、SEQ ID NO：810、SEQ ID NO：967、SEQ ID NO：1124、SEQID NO：1281和SEQ ID NO：1438；SEQ ID NO：654、SEQ ID NO：811、SEQ ID NO：968、SEQ IDNO：1125、SEQ ID NO：1282和SEQ ID NO：1439；SEQ ID NO：655、SEQ ID NO：812、SEQ ID NO：969、SEQ ID NO：1126、SEQ ID NO：1283和SEQ ID NO：1440；SEQ ID NO：656、SEQ ID NO：813、SEQ ID NO：970、SEQ ID NO：1127、SEQ ID NO：1284和SEQ ID NO：1441；SEQ ID NO：657、SEQ ID NO：814、SEQ ID NO：971、SEQ ID NO：1128、SEQ ID NO：1285和SEQ ID NO：1442；SEQ ID NO：658、SEQ ID NO：815、SEQ ID NO：972、SEQ ID NO：1129、SEQ ID NO：1286和SEQ ID NO：1443；SEQ ID NO：659、SEQ ID NO：816、SEQ ID NO：973、SEQ ID NO：1130、SEQID NO：1287和SEQ ID NO：1444；SEQ ID NO：660、SEQ ID NO：817、SEQ ID NO：974、SEQ IDNO：1131、SEQ ID NO：1288和SEQ ID NO：1445；SEQ ID NO：661、SEQ ID NO：818、SEQ ID NO：975、SEQ ID NO：1132、SEQ ID NO：1289和SEQ ID NO：1446；SEQ ID NO：662、SEQ ID NO：819、SEQ ID NO：976、SEQ ID NO：1133、SEQ ID NO：1290和SEQ ID NO：1447；SEQ ID NO：663、SEQ ID NO：820、SEQ ID NO：977、SEQ ID NO：1134、SEQ ID NO：1291和SEQ ID NO：1448；SEQ ID NO：664、SEQ ID NO：821、SEQ ID NO：978、SEQ ID NO：1135、SEQ ID NO：1292和SEQ ID NO：1449；SEQ ID NO：665、SEQ ID NO：822、SEQ ID NO：979、SEQ ID NO：1136、SEQID NO：1293和SEQ ID NO：1450；SEQ ID NO：666、SEQ ID NO：823、SEQ ID NO：980、SEQ IDNO：1137、SEQ ID NO：1294和SEQ ID NO：1451；SEQ ID NO：667、SEQ ID NO：824、SEQ ID NO：981、SEQ ID NO：1138、SEQ ID NO：1295和SEQ ID NO：1452；SEQ ID NO：668、SEQ ID NO：825、SEQ ID NO：982、SEQ ID NO：1139、SEQ ID NO：1296和SEQ ID NO：1453；SEQ ID NO：669、SEQ ID NO：826、SEQ ID NO：983、SEQ ID NO：1140、SEQ ID NO：1297和SEQ ID NO：1454；SEQ ID NO：670、SEQ ID NO：827、SEQ ID NO：984、SEQ ID NO：1141、SEQ ID NO：1298和SEQ ID NO：1455；SEQ ID NO：671、SEQ ID NO：828、SEQ ID NO：985、SEQ ID NO：1142、SEQID NO：1299和SEQ ID NO：1456；SEQ ID NO：672、SEQ ID NO：829、SEQ ID NO：986、SEQ IDNO：1143、SEQ ID NO：1300和SEQ ID NO：1457；SEQ ID NO：673、SEQ ID NO：830、SEQ ID NO：987、SEQ ID NO：1144、SEQ ID NO：1301和SEQ ID NO：1458；SEQ ID NO：674、SEQ ID NO：831、SEQ ID NO：988、SEQ ID NO：1145、SEQ ID NO：1302和SEQ ID NO：1459；SEQ ID NO：675、SEQ ID NO：832、SEQ ID NO：989、SEQ ID NO：1146、SEQ ID NO：1303和SEQ ID NO：1460；SEQ ID NO：676、SEQ ID NO：833、SEQ ID NO：990、SEQ ID NO：1147、SEQ ID NO：1304和SEQ ID NO：1461；SEQ ID NO：677、SEQ ID NO：834、SEQ ID NO：991、SEQ ID NO：1148、SEQID NO：1305和SEQ ID NO：1462；SEQ ID NO：678、SEQ ID NO：835、SEQ ID NO：992、SEQ IDNO：1149、SEQ ID NO：1306和SEQ ID NO：1463；SEQ ID NO：679、SEQ ID NO：836、SEQ ID NO：993、SEQ ID NO：1150、SEQ ID NO：1307和SEQ ID NO：1464；SEQ ID NO：680、SEQ ID NO：837、SEQ ID NO：994、SEQ ID NO：1151、SEQ ID NO：1308和SEQ ID NO：1465；SEQ ID NO：681、SEQ ID NO：838、SEQ ID NO：995、SEQ ID NO：1152、SEQ ID NO：1309和SEQ ID NO：1466；SEQ ID NO：682、SEQ ID NO：839、SEQ ID NO：996、SEQ ID NO：1153、SEQ ID NO：1310和SEQ ID NO：1467；SEQ ID NO：683、SEQ ID NO：840、SEQ ID NO：997、SEQ ID NO：1154、SEQID NO：1311和SEQ ID NO：1468；SEQ ID NO：684、SEQ ID NO：841、SEQ ID NO：998、SEQ IDNO：1155、SEQ ID NO：1312和SEQ ID NO：1469；SEQ ID NO：685、SEQ ID NO：842、SEQ ID NO：999、SEQ ID NO：1156、SEQ ID NO：1313和SEQ ID NO：1470；SEQ ID NO：686、SEQ ID NO：843、SEQ ID NO：1000、SEQ ID NO：1157、SEQ ID NO：1314和SEQ ID NO：1471；SEQ ID NO：687、SEQ ID NO：844、SEQ ID NO：1001、SEQ ID NO：1158、SEQ ID NO：1315和SEQ ID NO：1472；SEQ ID NO：688、SEQ ID NO：845、SEQ ID NO：1002、SEQ ID NO：1159、SEQ ID NO：1316和SEQ ID NO：1473；SEQ ID NO：689、SEQ ID NO：846、SEQ ID NO：1003、SEQ ID NO：1160、SEQ ID NO：1317和SEQ ID NO：1474；SEQ ID NO：690、SEQ ID NO：847、SEQ ID NO：1004、SEQID NO：1161、SEQ ID NO：1318和SEQ ID NO：1475；SEQ ID NO：691、SEQ ID NO：848、SEQ IDNO：1005、SEQ ID NO：1162、SEQ ID NO：1319和SEQ ID NO：1476；SEQ ID NO：692、SEQ IDNO：849、SEQ ID NO：1006、SEQ ID NO：1163、SEQ ID NO：1320和SEQ ID NO：1477；SEQ IDNO：693、SEQ ID NO：850、SEQ ID NO：1007、SEQ ID NO：1164、SEQ ID NO：1321和SEQ ID NO：1478；SEQ ID NO：694、SEQ ID NO：851、SEQ ID NO：1008、SEQ ID NO：1165、SEQ ID NO：1322和SEQ ID NO：1479；SEQ ID NO：695、SEQ ID NO：852、SEQ ID NO：1009、SEQ ID NO：1166、SEQ ID NO：1323和SEQ ID NO：1480；SEQ ID NO：696、SEQ ID NO：853、SEQ ID NO：1010、SEQID NO：1167、SEQ ID NO：1324和SEQ ID NO：1481；SEQ ID NO：697、SEQ ID NO：854、SEQ IDNO：1011、SEQ ID NO：1168、SEQ ID NO：1325和SEQ ID NO：1482；SEQ ID NO：698、SEQ IDNO：855、SEQ ID NO：1012、SEQ ID NO：1169、SEQ ID NO：1326和SEQ ID NO：1483；SEQ IDNO：699、SEQ ID NO：856、SEQ ID NO：1013、SEQ ID NO：1170、SEQ ID NO：1327和SEQ ID NO：1484；SEQ ID NO：700、SEQ ID NO：857、SEQ ID NO：1014、SEQ ID NO：1171、SEQ ID NO：1328和SEQ ID NO：1485；SEQ ID NO：701、SEQ ID NO：858、SEQ ID NO：1015、SEQ ID NO：1172、SEQ ID NO：1329和SEQ ID NO：1486；SEQ ID NO：702、SEQ ID NO：859、SEQ ID NO：1016、SEQID NO：1173、SEQ ID NO：1330和SEQ ID NO：1487；SEQ ID NO：703、SEQ ID NO：860、SEQ IDNO：1017、SEQ ID NO：1174、SEQ ID NO：1331和SEQ ID NO：1488；SEQ ID NO：704、SEQ IDNO：861、SEQ ID NO：1018、SEQ ID NO：1175、SEQ ID NO：1332和SEQ ID NO：1489；SEQ IDNO：705、SEQ ID NO：862、SEQ ID NO：1019、SEQ ID NO：1176、SEQ ID NO：1333和SEQ ID NO：1490；SEQ ID NO：706、SEQ ID NO：863、SEQ ID NO：1020、SEQ ID NO：1177、SEQ ID NO：1334和SEQ ID NO：1491；SEQ ID NO：707、SEQ ID NO：864、SEQ ID NO：1021、SEQ ID NO：1178、SEQ ID NO：1335和SEQ ID NO：1492；SEQ ID NO：708、SEQ ID NO：865、SEQ ID NO：1022、SEQID NO：1179、SEQ ID NO：1336和SEQ ID NO：1493；SEQ ID NO：709、SEQ ID NO：866、SEQ IDNO：1023、SEQ ID NO：1180、SEQ ID NO：1337和SEQ ID NO：1494；SEQ ID NO：710、SEQ IDNO：867、SEQ ID NO：1024、SEQ ID NO：1181、SEQ ID NO：1338和SEQ ID NO：1495；SEQ IDNO：711、SEQ ID NO：868、SEQ ID NO：1025、SEQ ID NO：1182、SEQ ID NO：1339和SEQ ID NO：1496；SEQ ID NO：712、SEQ ID NO：869、SEQ ID NO：1026、SEQ ID NO：1183、SEQ ID NO：1340和SEQ ID NO：1497；SEQ ID NO：713、SEQ ID NO：870、SEQ ID NO：1027、SEQ ID NO：1184、SEQ ID NO：1341和SEQ ID NO：1498；SEQ ID NO：714、SEQ ID NO：871、SEQ ID NO：1028、SEQID NO：1185、SEQ ID NO：1342和SEQ ID NO：1499；SEQ ID NO：715、SEQ ID NO：872、SEQ IDNO：1029、SEQ ID NO：1186、SEQ ID NO：1343和SEQ ID NO：1500；SEQ ID NO：716、SEQ IDNO：873、SEQ ID NO：1030、SEQ ID NO：1187、SEQ ID NO：1344和SEQ ID NO：1501；SEQ IDNO：717、SEQ ID NO：874、SEQ ID NO：1031、SEQ ID NO：1188、SEQ ID NO：1345和SEQ ID NO：1502；SEQ ID NO：718、SEQ ID NO：875、SEQ ID NO：1032、SEQ ID NO：1189、SEQ ID NO：1346和SEQ ID NO：1503；SEQ ID NO：719、SEQ ID NO：876、SEQ ID NO：1033、SEQ ID NO：1190、SEQ ID NO：1347和SEQ ID NO：1504；SEQ ID NO：720、SEQ ID NO：877、SEQ ID NO：1034、SEQID NO：1191、SEQ ID NO：1348和SEQ ID NO：1505；SEQ ID NO：721、SEQ ID NO：878、SEQ IDNO：1035、SEQ ID NO：1192、SEQ ID NO：1349和SEQ ID NO：1506；SEQ ID NO：722、SEQ IDNO：879、SEQ ID NO：1036、SEQ ID NO：1193、SEQ ID NO：1350和SEQ ID NO：1507；SEQ IDNO：723、SEQ ID NO：880、SEQ ID NO：1037、SEQ ID NO：1194、SEQ ID NO：1351和SEQ ID NO：1508；SEQ ID NO：724、SEQ ID NO：881、SEQ ID NO：1038、SEQ ID NO：1195、SEQ ID NO：1352和SEQ ID NO：1509；SEQ ID NO：725、SEQ ID NO：882、SEQ ID NO：1039、SEQ ID NO：1196、SEQ ID NO：1353和SEQ ID NO：1510；SEQ ID NO：726、SEQ ID NO：883、SEQ ID NO：1040、SEQID NO：1197、SEQ ID NO：1354和SEQ ID NO：1511；SEQ ID NO：727、SEQ ID NO：884、SEQ IDNO：1041、SEQ ID NO：1198、SEQ ID NO：1355和SEQ ID NO：1512；SEQ ID NO：728、SEQ IDNO：885、SEQ ID NO：1042、SEQ ID NO：1199、SEQ ID NO：1356和SEQ ID NO：1513；SEQ IDNO：729、SEQ ID NO：886、SEQ ID NO：1043、SEQ ID NO：1200、SEQ ID NO：1357和SEQ ID NO：1514；SEQ ID NO：730、SEQ ID NO：887、SEQ ID NO：1044、SEQ ID NO：1201、SEQ ID NO：1358和SEQ ID NO：1515；SEQ ID NO：731、SEQ ID NO：888、SEQ ID NO：1045、SEQ ID NO：1202、SEQ ID NO：1359和SEQ ID NO：1516；SEQ ID NO：732、SEQ ID NO：889、SEQ ID NO：1046、SEQID NO：1203、SEQ ID NO：1360和SEQ ID NO：1517；SEQ ID NO：733、SEQ ID NO：890、SEQ IDNO：1047、SEQ ID NO：1204、SEQ ID NO：1361和SEQ ID NO：1518；SEQ ID NO：734、SEQ IDNO：891、SEQ ID NO：1048、SEQ ID NO：1205、SEQ ID NO：1362和SEQ ID NO：1519；SEQ IDNO：735、SEQ ID NO：892、SEQ ID NO：1049、SEQ ID NO：1206、SEQ ID NO：1363和SEQ ID NO：1520；SEQ ID NO：736、SEQ ID NO：893、SEQ ID NO：1050、SEQ ID NO：1207、SEQ ID NO：1364和SEQ ID NO：1521；SEQ ID NO：737、SEQ ID NO：894、SEQ ID NO：1051、SEQ ID NO：1208、SEQ ID NO：1365和SEQ ID NO：1522；SEQ ID NO：738、SEQ ID NO：895、SEQ ID NO：1052、SEQID NO：1209、SEQ ID NO：1366和SEQ ID NO：1523；SEQ ID NO：739、SEQ ID NO：896、SEQ IDNO：1053、SEQ ID NO：1210、SEQ ID NO：1367和SEQ ID NO：1524；SEQ ID NO：740、SEQ IDNO：897、SEQ ID NO：1054、SEQ ID NO：1211、SEQ ID NO：1368和SEQ ID NO：1525；SEQ IDNO：741、SEQ ID NO：898、SEQ ID NO：1055、SEQ ID NO：1212、SEQ ID NO：1369和SEQ ID NO：1526；SEQ ID NO：742、SEQ ID NO：899、SEQ ID NO：1056、SEQ ID NO：1213、SEQ ID NO：1370和SEQ ID NO：1527；SEQ ID NO：743、SEQ ID NO：900、SEQ ID NO：1057、SEQ ID NO：1214、SEQ ID NO：1371和SEQ ID NO：1528；SEQ ID NO：744、SEQ ID NO：901、SEQ ID NO：1058、SEQID NO：1215、SEQ ID NO：1372和SEQ ID NO：1529；SEQ ID NO：745、SEQ ID NO：902、SEQ IDNO：1059、SEQ ID NO：1216、SEQ ID NO：1373和SEQ ID NO：1530；SEQ ID NO：746、SEQ IDNO：903、SEQ ID NO：1060、SEQ ID NO：1217、SEQ ID NO：1374和SEQ ID NO：1531；SEQ IDNO：747、SEQ ID NO：904、SEQ ID NO：1061、SEQ ID NO：1218、SEQ ID NO：1375和SEQ ID NO：1532；SEQ ID NO：748、SEQ ID NO：905、SEQ ID NO：1062、SEQ ID NO：1219、SEQ ID NO：1376和SEQ ID NO：1533；SEQ ID NO：749、SEQ ID NO：906、SEQ ID NO：1063、SEQ ID NO：1220、SEQ ID NO：1377和SEQ ID NO：1534；SEQ ID NO：750、SEQ ID NO：907、SEQ ID NO：1064、SEQID NO：1221、SEQ ID NO：1378和SEQ ID NO：1535；SEQ ID NO：751、SEQ ID NO：908、SEQ IDNO：1065、SEQ ID NO：1222、SEQ ID NO：1379和SEQ ID NO：1536；SEQ ID NO：752、SEQ IDNO：909、SEQ ID NO：1066、SEQ ID NO：1223、SEQ ID NO：1380和SEQ ID NO：1537；SEQ IDNO：753、SEQ ID NO：910、SEQ ID NO：1067、SEQ ID NO：1224、SEQ ID NO：1381和SEQ ID NO：1538；SEQ ID NO：754、SEQ ID NO：911、SEQ ID NO：1068、SEQ ID NO：1225、SEQ ID NO：1382和SEQ ID NO：1539；SEQ ID NO：755、SEQ ID NO：912、SEQ ID NO：1069、SEQ ID NO：1226、SEQ ID NO：1383和SEQ ID NO：1540；SEQ ID NO：756、SEQ ID NO：913、SEQ ID NO：1070、SEQID NO：1227、SEQ ID NO：1384和SEQ ID NO：1541；SEQ ID NO：757、SEQ ID NO：914、SEQ IDNO：1071、SEQ ID NO：1228、SEQ ID NO：1385和SEQ ID NO：1542；SEQ ID NO：758、SEQ IDNO：915、SEQ ID NO：1072、SEQ ID NO：1229、SEQ ID NO：1386和SEQ ID NO：1543；SEQ IDNO：759、SEQ ID NO：916、SEQ ID NO：1073、SEQ ID NO：1230、SEQ ID NO：1387和SEQ ID NO：1544；SEQ ID NO：760、SEQ ID NO：917、SEQ ID NO：1074、SEQ ID NO：1231、SEQ ID NO：1388和SEQ ID NO：1545；SEQ ID NO：761、SEQ ID NO：918、SEQ ID NO：1075、SEQ ID NO：1232、SEQ ID NO：1389和SEQ ID NO：1546；SEQ ID NO：762、SEQ ID NO：919、SEQ ID NO：1076、SEQID NO：1233、SEQ ID NO：1390和SEQ ID NO：1547；SEQ ID NO：763、SEQ ID NO：920、SEQ IDNO：1077、SEQ ID NO：1234、SEQ ID NO：1391和SEQ ID NO：1548；SEQ ID NO：764、SEQ IDNO：921、SEQ ID NO：1078、SEQ ID NO：1235、SEQ ID NO：1392和SEQ ID NO：1549；SEQ IDNO：765、SEQ ID NO：922、SEQ ID NO：1079、SEQ ID NO：1236、SEQ ID NO：1393和SEQ ID NO：1550；SEQ ID NO：766、SEQ ID NO：923、SEQ ID NO：1080、SEQ ID NO：1237、SEQ ID NO：1394和SEQ ID NO：1551；SEQ ID NO：767、SEQ ID NO：924、SEQ ID NO：1081、SEQ ID NO：1238、SEQ ID NO：1395和SEQ ID NO：1552；SEQ ID NO：768、SEQ ID NO：925、SEQ ID NO：1082、SEQID NO：1239、SEQ ID NO：1396和SEQ ID NO：1553；SEQ ID NO：769、SEQ ID NO：926、SEQ IDNO：1083、SEQ ID NO：1240、SEQ ID NO：1397和SEQ ID NO：1554；SEQ ID NO：770、SEQ IDNO：927、SEQ ID NO：1084、SEQ ID NO：1241、SEQ ID NO：1398和SEQ ID NO：1555；SEQ IDNO：771、SEQ ID NO：928、SEQ ID NO：1085、SEQ ID NO：1242、SEQ ID NO：1399和SEQ ID NO：1556；SEQ ID NO：772、SEQ ID NO：929、SEQ ID NO：1086、SEQ ID NO：1243、SEQ ID NO：1400和SEQ ID NO：1557；SEQ ID NO：773、SEQ ID NO：930、SEQ ID NO：1087、SEQ ID NO：1244、SEQ ID NO：1401和SEQ ID NO：1558；SEQ ID NO：774、SEQ ID NO：931、SEQ ID NO：1088、SEQID NO：1245、SEQ ID NO：1402和SEQ ID NO：1559；SEQ ID NO：775、SEQ ID NO：932、SEQ IDNO：1089、SEQ ID NO：1246、SEQ ID NO：1403和SEQ ID NO：1560；SEQ ID NO：776、SEQ IDNO：933、SEQ ID NO：1090、SEQ ID NO：1247、SEQ ID NO：1404和SEQ ID NO：1561；SEQ IDNO：777、SEQ ID NO：934、SEQ ID NO：1091、SEQ ID NO：1248、SEQ ID NO：1405和SEQ ID NO：1562；SEQ ID NO：778、SEQ ID NO：935、SEQ ID NO：1092、SEQ ID NO：1249、SEQ ID NO：1406和SEQ ID NO：1563；SEQ ID NO：779、SEQ ID NO：936、SEQ ID NO：1093、SEQ ID NO：1250、SEQ ID NO：1407和SEQ ID NO：1564；SEQ ID NO：780、SEQ ID NO：937、SEQ ID NO：1094、SEQID NO：1251、SEQ ID NO：1408和SEQ ID NO：1565；SEQ ID NO：781、SEQ ID NO：938、SEQ IDNO：1095、SEQ ID NO：1252、SEQ ID NO：1409和SEQ ID NO：1566；SEQ ID NO：782、SEQ IDNO：939、SEQ ID NO：1096、SEQ ID NO：1253、SEQ ID NO：1410和SEQ ID NO：1567；SEQ IDNO：783、SEQ ID NO：940、SEQ ID NO：1097、SEQ ID NO：1254、SEQ ID NO：1411和SEQ ID NO：1568；SEQ ID NO：784、SEQ ID NO：941、SEQ ID NO：1098、SEQ ID NO：1255、SEQ ID NO：1412和SEQ ID NO：1569；以及SEQ ID NO：785、SEQ ID NO：942、SEQ ID NO：1099、SEQ ID NO：1256、SEQ ID NO：1413和SEQ ID NO：1570，其中该抗体或其功能片段在一个或多个选自由以下组成的组的偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代：相对于参考序列SEQ ID NO：455，抗体轻链的D70；相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的E276；以及相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的T363。
在一个实施例中，该抗体或其片段包含由多核苷酸编码的CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中该抗体或其功能片段在一个或多个选自由以下组成的组的偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代：相对于参考序列SEQ ID NO：455，抗体轻链的D70；相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的E276；以及相对于参考序列SEQ IDNO：612，抗体重链的T363。在一个实施例中，该抗体或其片段包含CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中该抗体或其功能片段在一个或多个选自由以下组成的组的偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代：相对于参考序列SEQ ID NO：455，抗体轻链的D70；相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的E276；以及相对于参考序列SEQ IDNO：612，抗体重链的T363；其中CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2和CDRH3各自分别由选自由以下组成的组的序列编码：SEQ ID NO：2199、SEQ ID NO：2356、SEQ ID NO：2513、SEQ IDNO：2670、SEQ ID NO：2827和SEQ ID NO：2984；SEQ ID NO：2200、SEQ ID NO：2357、SEQ IDNO：2514、SEQ ID NO：2671、SEQ ID NO：2828和SEQ ID NO：2985；SEQ ID NO：2201、SEQ IDNO：2358、SEQ ID NO：2515、SEQ ID NO：2672、SEQ ID NO：2829和SEQ ID NO：2986；SEQ IDNO：2202、SEQ ID NO：2359、SEQ ID NO：2516、SEQ ID NO：2673、SEQ ID NO：2830和SEQ IDNO：2987；SEQ ID NO：2203、SEQ ID NO：2360、SEQ ID NO：2517、SEQ ID NO：2674、SEQ IDNO：2831和SEQ ID NO：2988；SEQ ID NO：2204、SEQ ID NO：2361、SEQ ID NO：2518、SEQ IDNO：2675、SEQ ID NO：2832和SEQ ID NO：2989；SEQ ID NO：2205、SEQ ID NO：2362、SEQ IDNO：2519、SEQ ID NO：2676、SEQ ID NO：2833和SEQ ID NO：2990；SEQ ID NO：2206、SEQ IDNO：2363、SEQ ID NO：2520、SEQ ID NO：2677、SEQ ID NO：2834和SEQ ID NO：2991；SEQ IDNO：2207、SEQ ID NO：2364、SEQ ID NO：2521、SEQ ID NO：2678、SEQ ID NO：2835和SEQ IDNO：2992；SEQ ID NO：2208、SEQ ID NO：2365、SEQ ID NO：2522、SEQ ID NO：2679、SEQ IDNO：2836和SEQ ID NO：2993；SEQ ID NO：2209、SEQ ID NO：2366、SEQ ID NO：2523、SEQ IDNO：2680、SEQ ID NO：2837和SEQ ID NO：2994；SEQ ID NO：2210、SEQ ID NO：2367、SEQ IDNO：2524、SEQ ID NO：2681、SEQ ID NO：2838和SEQ ID NO：2995；SEQ ID NO：2211、SEQ IDNO：2368、SEQ ID NO：2525、SEQ ID NO：2682、SEQ ID NO：2839和SEQ ID NO：2996；SEQ IDNO：2212、SEQ ID NO：2369、SEQ ID NO：2526、SEQ ID NO：2683、SEQ ID NO：2840和SEQ IDNO：2997；SEQ ID NO：2213、SEQ ID NO：2370、SEQ ID NO：2527、SEQ ID NO：2684、SEQ IDNO：2841和SEQ ID NO：2998；SEQ ID NO：2214、SEQ ID NO：2371、SEQ ID NO：2528、SEQ IDNO：2685、SEQ ID NO：2842和SEQ ID NO：2999；SEQ ID NO：2215、SEQ ID NO：2372、SEQ IDNO：2529、SEQ ID NO：2686、SEQ ID NO：2843和SEQ ID NO：3000；SEQ ID NO：2216、SEQ IDNO：2373、SEQ ID NO：2530、SEQ ID NO：2687、SEQ ID NO：2844和SEQ ID NO：3001；SEQ IDNO：2217、SEQ ID NO：2374、SEQ ID NO：2531、SEQ ID NO：2688、SEQ ID NO：2845和SEQ IDNO：3002；SEQ ID NO：2218、SEQ ID NO：2375、SEQ ID NO：2532、SEQ ID NO：2689、SEQ IDNO：2846和SEQ ID NO：3003；SEQ ID NO：2219、SEQ ID NO：2376、SEQ ID NO：2533、SEQ IDNO：2690、SEQ ID NO：2847和SEQ ID NO：3004；SEQ ID NO：2220、SEQ ID NO：2377、SEQ IDNO：2534、SEQ ID NO：2691、SEQ ID NO：2848和SEQ ID NO：3005；SEQ ID NO：2221、SEQ IDNO：2378、SEQ ID NO：2535、SEQ ID NO：2692、SEQ ID NO：2849和SEQ ID NO：3006；SEQ IDNO：2222、SEQ ID NO：2379、SEQ ID NO：2536、SEQ ID NO：2693、SEQ ID NO：2850和SEQ IDNO：3007；SEQ ID NO：2223、SEQ ID NO：2380、SEQ ID NO：2537、SEQ ID NO：2694、SEQ IDNO：2851和SEQ ID NO：3008；SEQ ID NO：2224、SEQ ID NO：2381、SEQ ID NO：2538、SEQ IDNO：2695、SEQ ID NO：2852和SEQ ID NO：3009；SEQ ID NO：2225、SEQ ID NO：2382、SEQ IDNO：2539、SEQ ID NO：2696、SEQ ID NO：2853和SEQ ID NO：3010；SEQ ID NO：2226、SEQ IDNO：2383、SEQ ID NO：2540、SEQ ID NO：2697、SEQ ID NO：2854和SEQ ID NO：3011；SEQ IDNO：2227、SEQ ID NO：2384、SEQ ID NO：2541、SEQ ID NO：2698、SEQ ID NO：2855和SEQ IDNO：3012；SEQ ID NO：2228、SEQ ID NO：2385、SEQ ID NO：2542、SEQ ID NO：2699、SEQ IDNO：2856和SEQ ID NO：3013；SEQ ID NO：2229、SEQ ID NO：2386、SEQ ID NO：2543、SEQ IDNO：2700、SEQ ID NO：2857和SEQ ID NO：3014；SEQ ID NO：2230、SEQ ID NO：2387、SEQ IDNO：2544、SEQ ID NO：2701、SEQ ID NO：2858和SEQ ID NO：3015；SEQ ID NO：2231、SEQ IDNO：2388、SEQ ID NO：2545、SEQ ID NO：2702、SEQ ID NO：2859和SEQ ID NO：3016；SEQ IDNO：2232、SEQ ID NO：2389、SEQ ID NO：2546、SEQ ID NO：2703、SEQ ID NO：2860和SEQ IDNO：3017；SEQ ID NO：2233、SEQ ID NO：2390、SEQ ID NO：2547、SEQ ID NO：2704、SEQ IDNO：2861和SEQ ID NO：3018；SEQ ID NO：2234、SEQ ID NO：2391、SEQ ID NO：2548、SEQ IDNO：2705、SEQ ID NO：2862和SEQ ID NO：3019；SEQ ID NO：2235、SEQ ID NO：2392、SEQ IDNO：2549、SEQ ID NO：2706、SEQ ID NO：2863和SEQ ID NO：3020；SEQ ID NO：2236、SEQ IDNO：2393、SEQ ID NO：2550、SEQ ID NO：2707、SEQ ID NO：2864和SEQ ID NO：3021；SEQ IDNO：2237、SEQ ID NO：2394、SEQ ID NO：2551、SEQ ID NO：2708、SEQ ID NO：2865和SEQ IDNO：3022；SEQ ID NO：2238、SEQ ID NO：2395、SEQ ID NO：2552、SEQ ID NO：2709、SEQ IDNO：2866和SEQ ID NO：3023；SEQ ID NO：2239、SEQ ID NO：2396、SEQ ID NO：2553、SEQ IDNO：2710、SEQ ID NO：2867和SEQ ID NO：3024；SEQ ID NO：2240、SEQ ID NO：2397、SEQ IDNO：2554、SEQ ID NO：2711、SEQ ID NO：2868和SEQ ID NO：3025；SEQ ID NO：2241、SEQ IDNO：2398、SEQ ID NO：2555、SEQ ID NO：2712、SEQ ID NO：2869和SEQ ID NO：3026；SEQ IDNO：2242、SEQ ID NO：2399、SEQ ID NO：2556、SEQ ID NO：2713、SEQ ID NO：2870和SEQ IDNO：3027；SEQ ID NO：2243、SEQ ID NO：2400、SEQ ID NO：2557、SEQ ID NO：2714、SEQ IDNO：2871和SEQ ID NO：3028；SEQ ID NO：2244、SEQ ID NO：2401、SEQ ID NO：2558、SEQ IDNO：2715、SEQ ID NO：2872和SEQ ID NO：3029；SEQ ID NO：2245、SEQ ID NO：2402、SEQ IDNO：2559、SEQ ID NO：2716、SEQ ID NO：2873和SEQ ID NO：3030；SEQ ID NO：2246、SEQ IDNO：2403、SEQ ID NO：2560、SEQ ID NO：2717、SEQ ID NO：2874和SEQ ID NO：3031；SEQ IDNO：2247、SEQ ID NO：2404、SEQ ID NO：2561、SEQ ID NO：2718、SEQ ID NO：2875和SEQ IDNO：3032；SEQ ID NO：2248、SEQ ID NO：2405、SEQ ID NO：2562、SEQ ID NO：2719、SEQ IDNO：2876和SEQ ID NO：3033；SEQ ID NO：2249、SEQ ID NO：2406、SEQ ID NO：2563、SEQ IDNO：2720、SEQ ID NO：2877和SEQ ID NO：3034；SEQ ID NO：2250、SEQ ID NO：2407、SEQ IDNO：2564、SEQ ID NO：2721、SEQ ID NO：2878和SEQ ID NO：3035；SEQ ID NO：2251、SEQ IDNO：2408、SEQ ID NO：2565、SEQ ID NO：2722、SEQ ID NO：2879和SEQ ID NO：3036；SEQ IDNO：2252、SEQ ID NO：2409、SEQ ID NO：2566、SEQ ID NO：2723、SEQ ID NO：2880和SEQ IDNO：3037；SEQ ID NO：2253、SEQ ID NO：2410、SEQ ID NO：2567、SEQ ID NO：2724、SEQ IDNO：2881和SEQ ID NO：3038；SEQ ID NO：2254、SEQ ID NO：2411、SEQ ID NO：2568、SEQ IDNO：2725、SEQ ID NO：2882和SEQ ID NO：3039；SEQ ID NO：2255、SEQ ID NO：2412、SEQ IDNO：2569、SEQ ID NO：2726、SEQ ID NO：2883和SEQ ID NO：3040；SEQ ID NO：2256、SEQ IDNO：2413、SEQ ID NO：2570、SEQ ID NO：2727、SEQ ID NO：2884和SEQ ID NO：3041；SEQ IDNO：2257、SEQ ID NO：2414、SEQ ID NO：2571、SEQ ID NO：2728、SEQ ID NO：2885和SEQ IDNO：3042；SEQ ID NO：2258、SEQ ID NO：2415、SEQ ID NO：2572、SEQ ID NO：2729、SEQ IDNO：2886和SEQ ID NO：3043；SEQ ID NO：2259、SEQ ID NO：2416、SEQ ID NO：2573、SEQ IDNO：2730、SEQ ID NO：2887和SEQ ID NO：3044；SEQ ID NO：2260、SEQ ID NO：2417、SEQ IDNO：2574、SEQ ID NO：2731、SEQ ID NO：2888和SEQ ID NO：3045；SEQ ID NO：2261、SEQ IDNO：2418、SEQ ID NO：2575、SEQ ID NO：2732、SEQ ID NO：2889和SEQ ID NO：3046；SEQ IDNO：2262、SEQ ID NO：2419、SEQ ID NO：2576、SEQ ID NO：2733、SEQ ID NO：2890和SEQ IDNO：3047；SEQ ID NO：2263、SEQ ID NO：2420、SEQ ID NO：2577、SEQ ID NO：2734、SEQ IDNO：2891和SEQ ID NO：3048；SEQ ID NO：2264、SEQ ID NO：2421、SEQ ID NO：2578、SEQ IDNO：2735、SEQ ID NO：2892和SEQ ID NO：3049；SEQ ID NO：2265、SEQ ID NO：2422、SEQ IDNO：2579、SEQ ID NO：2736、SEQ ID NO：2893和SEQ ID NO：3050；SEQ ID NO：2266、SEQ IDNO：2423、SEQ ID NO：2580、SEQ ID NO：2737、SEQ ID NO：2894和SEQ ID NO：3051；SEQ IDNO：2267、SEQ ID NO：2424、SEQ ID NO：2581、SEQ ID NO：2738、SEQ ID NO：2895和SEQ IDNO：3052；SEQ ID NO：2268、SEQ ID NO：2425、SEQ ID NO：2582、SEQ ID NO：2739、SEQ IDNO：2896和SEQ ID NO：3053；SEQ ID NO：2269、SEQ ID NO：2426、SEQ ID NO：2583、SEQ IDNO：2740、SEQ ID NO：2897和SEQ ID NO：3054；SEQ ID NO：2270、SEQ ID NO：2427、SEQ IDNO：2584、SEQ ID NO：2741、SEQ ID NO：2898和SEQ ID NO：3055；SEQ ID NO：2271、SEQ IDNO：2428、SEQ ID NO：2585、SEQ ID NO：2742、SEQ ID NO：2899和SEQ ID NO：3056；SEQ IDNO：2272、SEQ ID NO：2429、SEQ ID NO：2586、SEQ ID NO：2743、SEQ ID NO：2900和SEQ IDNO：3057；SEQ ID NO：2273、SEQ ID NO：2430、SEQ ID NO：2587、SEQ ID NO：2744、SEQ IDNO：2901和SEQ ID NO：3058；SEQ ID NO：2274、SEQ ID NO：2431、SEQ ID NO：2588、SEQ IDNO：2745、SEQ ID NO：2902和SEQ ID NO：3059；SEQ ID NO：2275、SEQ ID NO：2432、SEQ IDNO：2589、SEQ ID NO：2746、SEQ ID NO：2903和SEQ ID NO：3060；SEQ ID NO：2276、SEQ IDNO：2433、SEQ ID NO：2590、SEQ ID NO：2747、SEQ ID NO：2904和SEQ ID NO：3061；SEQ IDNO：2277、SEQ ID NO：2434、SEQ ID NO：2591、SEQ ID NO：2748、SEQ ID NO：2905和SEQ IDNO：3062；SEQ ID NO：2278、SEQ ID NO：2435、SEQ ID NO：2592、SEQ ID NO：2749、SEQ IDNO：2906和SEQ ID NO：3063；SEQ ID NO：2279、SEQ ID NO：2436、SEQ ID NO：2593、SEQ IDNO：2750、SEQ ID NO：2907和SEQ ID NO：3064；SEQ ID NO：2280、SEQ ID NO：2437、SEQ IDNO：2594、SEQ ID NO：2751、SEQ ID NO：2908和SEQ ID NO：3065；SEQ ID NO：2281、SEQ IDNO：2438、SEQ ID NO：2595、SEQ ID NO：2752、SEQ ID NO：2909和SEQ ID NO：3066；SEQ IDNO：2282、SEQ ID NO：2439、SEQ ID NO：2596、SEQ ID NO：2753、SEQ ID NO：2910和SEQ IDNO：3067；SEQ ID NO：2283、SEQ ID NO：2440、SEQ ID NO：2597、SEQ ID NO：2754、SEQ IDNO：2911和SEQ ID NO：3068；SEQ ID NO：2284、SEQ ID NO：2441、SEQ ID NO：2598、SEQ IDNO：2755、SEQ ID NO：2912和SEQ ID NO：3069；SEQ ID NO：2285、SEQ ID NO：2442、SEQ IDNO：2599、SEQ ID NO：2756、SEQ ID NO：2913和SEQ ID NO：3070；SEQ ID NO：2286、SEQ IDNO：2443、SEQ ID NO：2600、SEQ ID NO：2757、SEQ ID NO：2914和SEQ ID NO：3071；SEQ IDNO：2287、SEQ ID NO：2444、SEQ ID NO：2601、SEQ ID NO：2758、SEQ ID NO：2915和SEQ IDNO：3072；SEQ ID NO：2288、SEQ ID NO：2445、SEQ ID NO：2602、SEQ ID NO：2759、SEQ IDNO：2916和SEQ ID NO：3073；SEQ ID NO：2289、SEQ ID NO：2446、SEQ ID NO：2603、SEQ IDNO：2760、SEQ ID NO：2917和SEQ ID NO：3074；SEQ ID NO：2290、SEQ ID NO：2447、SEQ IDNO：2604、SEQ ID NO：2761、SEQ ID NO：2918和SEQ ID NO：3075；SEQ ID NO：2291、SEQ IDNO：2448、SEQ ID NO：2605、SEQ ID NO：2762、SEQ ID NO：2919和SEQ ID NO：3076；SEQ IDNO：2292、SEQ ID NO：2449、SEQ ID NO：2606、SEQ ID NO：2763、SEQ ID NO：2920和SEQ IDNO：3077；SEQ ID NO：2293、SEQ ID NO：2450、SEQ ID NO：2607、SEQ ID NO：2764、SEQ IDNO：2921和SEQ ID NO：3078；SEQ ID NO：2294、SEQ ID NO：2451、SEQ ID NO：2608、SEQ IDNO：2765、SEQ ID NO：2922和SEQ ID NO：3079；SEQ ID NO：2295、SEQ ID NO：2452、SEQ IDNO：2609、SEQ ID NO：2766、SEQ ID NO：2923和SEQ ID NO：3080；SEQ ID NO：2296、SEQ IDNO：2453、SEQ ID NO：2610、SEQ ID NO：2767、SEQ ID NO：2924和SEQ ID NO：3081；SEQ IDNO：2297、SEQ ID NO：2454、SEQ ID NO：2611、SEQ ID NO：2768、SEQ ID NO：2925和SEQ IDNO：3082；SEQ ID NO：2298、SEQ ID NO：2455、SEQ ID NO：2612、SEQ ID NO：2769、SEQ IDNO：2926和SEQ ID NO：3083；SEQ ID NO：2299、SEQ ID NO：2456、SEQ ID NO：2613、SEQ IDNO：2770、SEQ ID NO：2927和SEQ ID NO：3084；SEQ ID NO：2300、SEQ ID NO：2457、SEQ IDNO：2614、SEQ ID NO：2771、SEQ ID NO：2928和SEQ ID NO：3085；SEQ ID NO：2301、SEQ IDNO：2458、SEQ ID NO：2615、SEQ ID NO：2772、SEQ ID NO：2929和SEQ ID NO：3086；SEQ IDNO：2302、SEQ ID NO：2459、SEQ ID NO：2616、SEQ ID NO：2773、SEQ ID NO：2930和SEQ IDNO：3087；SEQ ID NO：2303、SEQ ID NO：2460、SEQ ID NO：2617、SEQ ID NO：2774、SEQ IDNO：2931和SEQ ID NO：3088；SEQ ID NO：2304、SEQ ID NO：2461、SEQ ID NO：2618、SEQ IDNO：2775、SEQ ID NO：2932和SEQ ID NO：3089；SEQ ID NO：2305、SEQ ID NO：2462、SEQ IDNO：2619、SEQ ID NO：2776、SEQ ID NO：2933和SEQ ID NO：3090；SEQ ID NO：2306、SEQ IDNO：2463、SEQ ID NO：2620、SEQ ID NO：2777、SEQ ID NO：2934和SEQ ID NO：3091；SEQ IDNO：2307、SEQ ID NO：2464、SEQ ID NO：2621、SEQ ID NO：2778、SEQ ID NO：2935和SEQ IDNO：3092；SEQ ID NO：2308、SEQ ID NO：2465、SEQ ID NO：2622、SEQ ID NO：2779、SEQ IDNO：2936和SEQ ID NO：3093；SEQ ID NO：2309、SEQ ID NO：2466、SEQ ID NO：2623、SEQ IDNO：2780、SEQ ID NO：2937和SEQ ID NO：3094；SEQ ID NO：2310、SEQ ID NO：2467、SEQ IDNO：2624、SEQ ID NO：2781、SEQ ID NO：2938和SEQ ID NO：3095；SEQ ID NO：2311、SEQ IDNO：2468、SEQ ID NO：2625、SEQ ID NO：2782、SEQ ID NO：2939和SEQ ID NO：3096；SEQ IDNO：2312、SEQ ID NO：2469、SEQ ID NO：2626、SEQ ID NO：2783、SEQ ID NO：2940和SEQ IDNO：3097；SEQ ID NO：2313、SEQ ID NO：2470、SEQ ID NO：2627、SEQ ID NO：2784、SEQ IDNO：2941和SEQ ID NO：3098；SEQ ID NO：2314、SEQ ID NO：2471、SEQ ID NO：2628、SEQ IDNO：2785、SEQ ID NO：2942和SEQ ID NO：3099；SEQ ID NO：2315、SEQ ID NO：2472、SEQ IDNO：2629、SEQ ID NO：2786、SEQ ID NO：2943和SEQ ID NO：3100；SEQ ID NO：2316、SEQ IDNO：2473、SEQ ID NO：2630、SEQ ID NO：2787、SEQ ID NO：2944和SEQ ID NO：3101；SEQ IDNO：2317、SEQ ID NO：2474、SEQ ID NO：2631、SEQ ID NO：2788、SEQ ID NO：2945和SEQ IDNO：3102；SEQ ID NO：2318、SEQ ID NO：2475、SEQ ID NO：2632、SEQ ID NO：2789、SEQ IDNO：2946和SEQ ID NO：3103；SEQ ID NO：2319、SEQ ID NO：2476、SEQ ID NO：2633、SEQ IDNO：2790、SEQ ID NO：2947和SEQ ID NO：3104；SEQ ID NO：2320、SEQ ID NO：2477、SEQ IDNO：2634、SEQ ID NO：2791、SEQ ID NO：2948和SEQ ID NO：3105；SEQ ID NO：2321、SEQ IDNO：2478、SEQ ID NO：2635、SEQ ID NO：2792、SEQ ID NO：2949和SEQ ID NO：3106；SEQ IDNO：2322、SEQ ID NO：2479、SEQ ID NO：2636、SEQ ID NO：2793、SEQ ID NO：2950和SEQ IDNO：3107；SEQ ID NO：2323、SEQ ID NO：2480、SEQ ID NO：2637、SEQ ID NO：2794、SEQ IDNO：2951和SEQ ID NO：3108；SEQ ID NO：2324、SEQ ID NO：2481、SEQ ID NO：2638、SEQ IDNO：2795、SEQ ID NO：2952和SEQ ID NO：3109；SEQ ID NO：2325、SEQ ID NO：2482、SEQ IDNO：2639、SEQ ID NO：2796、SEQ ID NO：2953和SEQ ID NO：3110；SEQ ID NO：2326、SEQ IDNO：2483、SEQ ID NO：2640、SEQ ID NO：2797、SEQ ID NO：2954和SEQ ID NO：3111；SEQ IDNO：2327、SEQ ID NO：2484、SEQ ID NO：2641、SEQ ID NO：2798、SEQ ID NO：2955和SEQ IDNO：3112；SEQ ID NO：2328、SEQ ID NO：2485、SEQ ID NO：2642、SEQ ID NO：2799、SEQ IDNO：2956和SEQ ID NO：3113；SEQ ID NO：2329、SEQ ID NO：2486、SEQ ID NO：2643、SEQ IDNO：2800、SEQ ID NO：2957和SEQ ID NO：3114；SEQ ID NO：2330、SEQ ID NO：2487、SEQ IDNO：2644、SEQ ID NO：2801、SEQ ID NO：2958和SEQ ID NO：3115；SEQ ID NO：2331、SEQ IDNO：2488、SEQ ID NO：2645、SEQ ID NO：2802、SEQ ID NO：2959和SEQ ID NO：3116；SEQ IDNO：2332、SEQ ID NO：2489、SEQ ID NO：2646、SEQ ID NO：2803、SEQ ID NO：2960和SEQ IDNO：3117；SEQ ID NO：2333、SEQ ID NO：2490、SEQ ID NO：2647、SEQ ID NO：2804、SEQ IDNO：2961和SEQ ID NO：3118；SEQ ID NO：2334、SEQ ID NO：2491、SEQ ID NO：2648、SEQ IDNO：2805、SEQ ID NO：2962和SEQ ID NO：3119；SEQ ID NO：2335、SEQ ID NO：2492、SEQ IDNO：2649、SEQ ID NO：2806、SEQ ID NO：2963和SEQ ID NO：3120；SEQ ID NO：2336、SEQ IDNO：2493、SEQ ID NO：2650、SEQ ID NO：2807、SEQ ID NO：2964和SEQ ID NO：3121；SEQ IDNO：2337、SEQ ID NO：2494、SEQ ID NO：2651、SEQ ID NO：2808、SEQ ID NO：2965和SEQ IDNO：3122；SEQ ID NO：2338、SEQ ID NO：2495、SEQ ID NO：2652、SEQ ID NO：2809、SEQ IDNO：2966和SEQ ID NO：3123；SEQ ID NO：2339、SEQ ID NO：2496、SEQ ID NO：2653、SEQ IDNO：2810、SEQ ID NO：2967和SEQ ID NO：3124；SEQ ID NO：2340、SEQ ID NO：2497、SEQ IDNO：2654、SEQ ID NO：2811、SEQ ID NO：2968和SEQ ID NO：3125；SEQ ID NO：2341、SEQ IDNO：2498、SEQ ID NO：2655、SEQ ID NO：2812、SEQ ID NO：2969和SEQ ID NO：3126；SEQ IDNO：2342、SEQ ID NO：2499、SEQ ID NO：2656、SEQ ID NO：2813、SEQ ID NO：2970和SEQ IDNO：3127；SEQ ID NO：2343、SEQ ID NO：2500、SEQ ID NO：2657、SEQ ID NO：2814、SEQ IDNO：2971和SEQ ID NO：3128；SEQ ID NO：2344、SEQ ID NO：2501、SEQ ID NO：2658、SEQ IDNO：2815、SEQ ID NO：2972和SEQ ID NO：3129；SEQ ID NO：2345、SEQ ID NO：2502、SEQ IDNO：2659、SEQ ID NO：2816、SEQ ID NO：2973和SEQ ID NO：3130；SEQ ID NO：2346、SEQ IDNO：2503、SEQ ID NO：2660、SEQ ID NO：2817、SEQ ID NO：2974和SEQ ID NO：3131；SEQ IDNO：2347、SEQ ID NO：2504、SEQ ID NO：2661、SEQ ID NO：2818、SEQ ID NO：2975和SEQ IDNO：3132；SEQ ID NO：2348、SEQ ID NO：2505、SEQ ID NO：2662、SEQ ID NO：2819、SEQ IDNO：2976和SEQ ID NO：3133；SEQ ID NO：2349、SEQ ID NO：2506、SEQ ID NO：2663、SEQ IDNO：2820、SEQ ID NO：2977和SEQ ID NO：3134；SEQ ID NO：2350、SEQ ID NO：2507、SEQ IDNO：2664、SEQ ID NO：2821、SEQ ID NO：2978和SEQ ID NO：3135；SEQ ID NO：2351、SEQ IDNO：2508、SEQ ID NO：2665、SEQ ID NO：2822、SEQ ID NO：2979和SEQ ID NO：3136；SEQ IDNO：2352、SEQ ID NO：2509、SEQ ID NO：2666、SEQ ID NO：2823、SEQ ID NO：2980和SEQ IDNO：3137；SEQ ID NO：2353、SEQ ID NO：2510、SEQ ID NO：2667、SEQ ID NO：2824、SEQ IDNO：2981和SEQ ID NO：3138；SEQ ID NO：2354、SEQ ID NO：2511、SEQ ID NO：2668、SEQ IDNO：2825、SEQ ID NO：2982和SEQ ID NO：3139；以及SEQ ID NO：2355、SEQ ID NO：2512、SEQID NO：2669、SEQ ID NO：2826、SEQ ID NO：2983和SEQ ID NO：3140。
在另一方面，抗原结合蛋白包括表4A和4B中所列CDR的1、2、3、4、5或6种变体形式，其各自与表4A和4B中所列的CDR序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。一些抗原结合蛋白包括表4A和4B中所列CDR中的1、2、3、4、5或6种，其各自或全体与该表中所列CDR相差不超过1、2、3、4或5个氨基酸。
在各种其他实施例中，抗原结合蛋白来源于此类抗体。例如，在一个方面，抗原结合蛋白包含有关表4A和4B中所列任一特定抗体的各列中的一列所列CDR中的1、2、3、4、5个或全部6个。在另一方面，抗原结合蛋白包括有关表4A和4B中所列抗体的各列中的一列所列CDR的1、2、3、4、5或6种变体形式，各CDR与表4A和4B中所列CDR序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。一些抗原结合蛋白包括表4A和4B的各列中的一列所列CDR中的1、2、3、4、5或6个，其各自与这两个表中所列CDR相差不超过1、2、3、4或5个氨基酸。在另一方面，抗原结合蛋白包含表4A和4B的一列中所列的全部6个CDR且这些CDR中氨基酸变化的总数总计不超过1、2、3、4或5个氨基酸。
在一个实施例中，该抗体或其片段包括包含选自由SEQ ID NO：472-628组成的组的序列的轻链和包含选自由SEQ ID NO：472-628组成的组的序列的重链，其中该抗体或其功能片段在一个或多个选自由以下组成的组的偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代：相对于参考序列SEQ ID NO：455，抗体轻链的D70；相对于参考序列SEQ IDNO：612，抗体重链的E276；以及相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的T363。在一个实施例中，该抗体或其片段包含选自由以下组成的组的轻链与重链的组合：包含SEQ ID NO：315的轻链和包含SEQ ID NO：472的重链；包含SEQ ID NO：316的轻链和包含SEQ ID NO：473的重链；包含SEQ ID NO：317的轻链和包含SEQ ID NO：474的重链；包含SEQ ID NO：318的轻链和包含SEQ ID NO：475的重链；包含SEQ ID NO：319的轻链和包含SEQ ID NO：476的重链；包含SEQ ID NO：320的轻链和包含SEQ ID NO：477的重链；包含SEQ ID NO：321的轻链和包含SEQ ID NO：478的重链；包含SEQ ID NO：322的轻链和包含SEQ ID NO：479的重链；包含SEQ ID NO：323的轻链和包含SEQ ID NO：480的重链；包含SEQ ID NO：324的轻链和包含SEQID NO：481的重链；包含SEQ ID NO：325的轻链和包含SEQ ID NO：482的重链；包含SEQ IDNO：326的轻链和包含SEQ ID NO：483的重链；包含SEQ ID NO：327的轻链和包含SEQ ID NO：484的重链；包含SEQ ID NO：328的轻链和包含SEQ ID NO：485的重链；包含SEQ ID NO：329的轻链和包含SEQ ID NO：486的重链；包含SEQ ID NO：330的轻链和包含SEQ ID NO：487的重链；包含SEQ ID NO：331的轻链和包含SEQ ID NO：488的重链；包含SEQ ID NO：332的轻链和包含SEQ ID NO：489的重链；包含SEQ ID NO：333的轻链和包含SEQ ID NO：490的重链；包含SEQ ID NO：334的轻链和包含SEQ ID NO：491的重链；包含SEQ ID NO：335的轻链和包含SEQ ID NO：492的重链；包含SEQ ID NO：336的轻链和包含SEQ ID NO：493的重链；包含SEQID NO：337的轻链和包含SEQ ID NO：494的重链；包含SEQ ID NO：338的轻链和包含SEQ IDNO：495的重链；包含SEQ ID NO：339的轻链和包含SEQ ID NO：496的重链；包含SEQ ID NO：340的轻链和包含SEQ ID NO：497的重链；包含SEQ ID NO：341的轻链和包含SEQ ID NO：498的重链；包含SEQ ID NO：342的轻链和包含SEQ ID NO：499的重链；包含SEQ ID NO：343的轻链和包含SEQ ID NO：500的重链；包含SEQ ID NO：344的轻链和包含SEQ ID NO：501的重链；包含SEQ ID NO：345的轻链和包含SEQ ID NO：502的重链；包含SEQ ID NO：346的轻链和包含SEQ ID NO：503的重链；包含SEQ ID NO：347的轻链和包含SEQ ID NO：504的重链；包含SEQ ID NO：348的轻链和包含SEQ ID NO：505的重链；包含SEQ ID NO：349的轻链和包含SEQID NO：506的重链；包含SEQ ID NO：350的轻链和包含SEQ ID NO：507的重链；包含SEQ IDNO：351的轻链和包含SEQ ID NO：508的重链；包含SEQ ID NO：352的轻链和包含SEQ ID NO：509的重链；包含SEQ ID NO：353的轻链和包含SEQ ID NO：510的重链；包含SEQ ID NO：354的轻链和包含SEQ ID NO：511的重链；包含SEQ ID NO：355的轻链和包含SEQ ID NO：512的重链；包含SEQ ID NO：356的轻链和包含SEQ ID NO：513的重链；包含SEQ ID NO：357的轻链和包含SEQ ID NO：514的重链；包含SEQ ID NO：358的轻链和包含SEQ ID NO：515的重链；包含SEQ ID NO：359的轻链和包含SEQ ID NO：516的重链；包含SEQ ID NO：360的轻链和包含SEQ ID NO：517的重链；包含SEQ ID NO：361的轻链和包含SEQ ID NO：518的重链；包含SEQID NO：362的轻链和包含SEQ ID NO：519的重链；包含SEQ ID NO：363的轻链和包含SEQ IDNO：520的重链；包含SEQ ID NO：364的轻链和包含SEQ ID NO：521的重链；包含SEQ ID NO：365的轻链和包含SEQ ID NO：522的重链；包含SEQ ID NO：366的轻链和包含SEQ ID NO：523的重链；包含SEQ ID NO：367的轻链和包含SEQ ID NO：524的重链；包含SEQ ID NO：368的轻链和包含SEQ ID NO：525的重链；包含SEQ ID NO：369的轻链和包含SEQ ID NO：526的重链；包含SEQ ID NO：370的轻链和包含SEQ ID NO：527的重链；包含SEQ ID NO：371的轻链和包含SEQ ID NO：528的重链；包含SEQ ID NO：372的轻链和包含SEQ ID NO：529的重链；包含SEQ ID NO：373的轻链和包含SEQ ID NO：530的重链；包含SEQ ID NO：374的轻链和包含SEQID NO：531的重链；包含SEQ ID NO：375的轻链和包含SEQ ID NO：532的重链；包含SEQ IDNO：376的轻链和包含SEQ ID NO：533的重链；包含SEQ ID NO：377的轻链和包含SEQ ID NO：534的重链；包含SEQ ID NO：378的轻链和包含SEQ ID NO：535的重链；包含SEQ ID NO：379的轻链和包含SEQ ID NO：536的重链；包含SEQ ID NO：380的轻链和包含SEQ ID NO：537的重链；包含SEQ ID NO：381的轻链和包含SEQ ID NO：538的重链；包含SEQ ID NO：382的轻链和包含SEQ ID NO：539的重链；包含SEQ ID NO：383的轻链和包含SEQ ID NO：540的重链；包含SEQ ID NO：384的轻链和包含SEQ ID NO：541的重链；包含SEQ ID NO：385的轻链和包含SEQ ID NO：542的重链；包含SEQ ID NO：386的轻链和包含SEQ ID NO：543的重链；包含SEQID NO：387的轻链和包含SEQ ID NO：544的重链；包含SEQ ID NO：388的轻链和包含SEQ IDNO：545的重链；包含SEQ ID NO：389的轻链和包含SEQ ID NO：546的重链；包含SEQ ID NO：390的轻链和包含SEQ ID NO：547的重链；包含SEQ ID NO：391的轻链和包含SEQ ID NO：548的重链；包含SEQ ID NO：392的轻链和包含SEQ ID NO：549的重链；包含SEQ ID NO：393的轻链和包含SEQ ID NO：550的重链；包含SEQ ID NO：394的轻链和包含SEQ ID NO：551的重链；包含SEQ ID NO：395的轻链和包含SEQ ID NO：552的重链；包含SEQ ID NO：396的轻链和包含SEQ ID NO：553的重链；包含SEQ ID NO：397的轻链和包含SEQ ID NO：554的重链；包含SEQ ID NO：398的轻链和包含SEQ ID NO：555的重链；包含SEQ ID NO：399的轻链和包含SEQID NO：556的重链；包含SEQ ID NO：400的轻链和包含SEQ ID NO：557的重链；包含SEQ IDNO：401的轻链和包含SEQ ID NO：558的重链；包含SEQ ID NO：402的轻链和包含SEQ ID NO：559的重链；包含SEQ ID NO：403的轻链和包含SEQ ID NO：560的重链；包含SEQ ID NO：404的轻链和包含SEQ ID NO：561的重链；包含SEQ ID NO：405的轻链和包含SEQ ID NO：562的重链；包含SEQ ID NO：406的轻链和包含SEQ ID NO：563的重链；包含SEQ ID NO：407的轻链和包含SEQ ID NO：564的重链；包含SEQ ID NO：408的轻链和包含SEQ ID NO：565的重链；包含SEQ ID NO：409的轻链和包含SEQ ID NO：566的重链；包含SEQ ID NO：410的轻链和包含SEQ ID NO：567的重链；包含SEQ ID NO：411的轻链和包含SEQ ID NO：568的重链；包含SEQID NO：412的轻链和包含SEQ ID NO：569的重链；包含SEQ ID NO：413的轻链和包含SEQ IDNO：570的重链；包含SEQ ID NO：414的轻链和包含SEQ ID NO：571的重链；包含SEQ ID NO：415的轻链和包含SEQ ID NO：572的重链；包含SEQ ID NO：416的轻链和包含SEQ ID NO：573的重链；包含SEQ ID NO：417的轻链和包含SEQ ID NO：574的重链；包含SEQ ID NO：418的轻链和包含SEQ ID NO：575的重链；包含SEQ ID NO：419的轻链和包含SEQ ID NO：576的重链；包含SEQ ID NO：420的轻链和包含SEQ ID NO：577的重链；包含SEQ ID NO：421的轻链和包含SEQ ID NO：578的重链；包含SEQ ID NO：422的轻链和包含SEQ ID NO：579的重链；包含SEQ ID NO：423的轻链和包含SEQ ID NO：580的重链；包含SEQ ID NO：424的轻链和包含SEQID NO：581的重链；包含SEQ ID NO：425的轻链和包含SEQ ID NO：582的重链；包含SEQ IDNO：426的轻链和包含SEQ ID NO：583的重链；包含SEQ ID NO：427的轻链和包含SEQ ID NO：584的重链；包含SEQ ID NO：428的轻链和包含SEQ ID NO：585的重链；包含SEQ ID NO：429的轻链和包含SEQ ID NO：586的重链；包含SEQ ID NO：430的轻链和包含SEQ ID NO：587的重链；包含SEQ ID NO：431的轻链和包含SEQ ID NO：588的重链；包含SEQ ID NO：432的轻链和包含SEQ ID NO：589的重链；包含SEQ ID NO：433的轻链和包含SEQ ID NO：590的重链；包含SEQ ID NO：434的轻链和包含SEQ ID NO：591的重链；包含SEQ ID NO：435的轻链和包含SEQ ID NO：592的重链；包含SEQ ID NO：436的轻链和包含SEQ ID NO：593的重链；包含SEQID NO：437的轻链和包含SEQ ID NO：594的重链；包含SEQ ID NO：438的轻链和包含SEQ IDNO：595的重链；包含SEQ ID NO：439的轻链和包含SEQ ID NO：596的重链；包含SEQ ID NO：440的轻链和包含SEQ ID NO：597的重链；包含SEQ ID NO：441的轻链和包含SEQ ID NO：598的重链；包含SEQ ID NO：442的轻链和包含SEQ ID NO：599的重链；包含SEQ ID NO：443的轻链和包含SEQ ID NO：600的重链；包含SEQ ID NO：444的轻链和包含SEQ ID NO：601的重链；包含SEQ ID NO：445的轻链和包含SEQ ID NO：602的重链；包含SEQ ID NO：446的轻链和包含SEQ ID NO：603的重链；包含SEQ ID NO：447的轻链和包含SEQ ID NO：604的重链；包含SEQ ID NO：448的轻链和包含SEQ ID NO：605的重链；包含SEQ ID NO：449的轻链和包含SEQID NO：606的重链；包含SEQ ID NO：450的轻链和包含SEQ ID NO：607的重链；包含SEQ IDNO：451的轻链和包含SEQ ID NO：608的重链；包含SEQ ID NO：452的轻链和包含SEQ ID NO：609的重链；包含SEQ ID NO：453的轻链和包含SEQ ID NO：610的重链；包含SEQ ID NO：454的轻链和包含SEQ ID NO：611的重链；包含SEQ ID NO：455的轻链和包含SEQ ID NO：612的重链；包含SEQ ID NO：456的轻链和包含SEQ ID NO：613的重链；包含SEQ ID NO：457的轻链和包含SEQ ID NO：614的重链；包含SEQ ID NO：458的轻链和包含SEQ ID NO：615的重链；包含SEQ ID NO：459的轻链和包含SEQ ID NO：616的重链；包含SEQ ID NO：460的轻链和包含SEQ ID NO：617的重链；包含SEQ ID NO：461的轻链和包含SEQ ID NO：618的重链；包含SEQID NO：462的轻链和包含SEQ ID NO：619的重链；包含SEQ ID NO：463的轻链和包含SEQ IDNO：620的重链；包含SEQ ID NO：464的轻链和包含SEQ ID NO：621的重链；包含SEQ ID NO：465的轻链和包含SEQ ID NO：622的重链；包含SEQ ID NO：466的轻链和包含SEQ ID NO：623的重链；包含SEQ ID NO：467的轻链和包含SEQ ID NO：624的重链；包含SEQ ID NO：468的轻链和包含SEQ ID NO：625的重链；包含SEQ ID NO：469的轻链和包含SEQ ID NO：626的重链；包含SEQ ID NO：470的轻链和包含SEQ ID NO：627的重链；以及包含SEQ ID NO：471的轻链和包含SEQ ID NO：628的重链，其中该抗体或其功能片段在一个或多个选自由以下组成的组的偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代：相对于参考序列SEQ ID NO：455，抗体轻链的D70；相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的E276；以及相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的T363。
在一个实施例中，该抗体或其片段包括由选自由SEQ ID NO：1885-2014组成的组的多核苷酸序列编码的轻链和包含选自由SEQ ID NO：2042-2198组成的组的序列的重链，其中该抗体或其功能片段在一个或多个选自由以下组成的组的偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代：相对于参考序列SEQ ID NO：455，抗体轻链的D70；相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的E276；以及相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的T363。在一个实施例中，该抗体或其片段包含轻链与重链的组合，其中该抗体或其功能片段在一个或多个选自由以下组成的组的偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代：相对于参考序列SEQ ID NO：455，抗体轻链的D70；相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的E276；以及相对于参考序列SEQ ID NO：612，抗体重链的T363；该轻链与重链的组合选自由以下组成的组：由包含SEQ ID NO：1885的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQID NO：2042的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1886的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2043的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1887的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2044的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ IDNO：1888的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2045的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1889的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2046的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1890的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ IDNO：2047的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1891的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2048的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1892的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2049的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1893的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2050的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1894的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2051的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1895的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2052的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1896的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2053的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1897的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2054的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1898的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2055的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1899的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2056的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1900的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2057的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1901的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2058的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1902的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2059的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1903的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2060的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQID NO：1904的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2061的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1905的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2062的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1906的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ IDNO：2063的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1907的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2064的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1908的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2065的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1909的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2066的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1910的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2067的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1911的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2068的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1912的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2069的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1913的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2070的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1914的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2071的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1915的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2072的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1916的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2073的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1917的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2074的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1918的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2075的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1919的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2076的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQID NO：1920的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2077的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1921的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2078的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1922的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ IDNO：2079的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1923的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2080的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1924的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2081的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1925的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2082的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1926的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2083的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1927的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2084的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1928的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2085的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1929的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2086的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1930的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2087的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1931的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2088的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1932的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2089的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1933的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2090的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1934的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2091的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1935的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2092的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQID NO：1936的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2093的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1937的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2094的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1938的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ IDNO：2095的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1939的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2096的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1940的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2097的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1941的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2098的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1942的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2099的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1943的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2100的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1944的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2101的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1945的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2102的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1946的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2103的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1947的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2104的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1948的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2105的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1949的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2106的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1950的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2107的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1951的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2108的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQID NO：1952的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2109的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1953的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2110的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1954的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ IDNO：2111的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1955的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2112的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1956的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2113的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1957的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2114的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1958的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2115的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1959的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2116的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1960的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2117的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1961的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2118的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1962的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2119的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1963的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2120的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1964的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2121的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1965的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2122的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1966的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2123的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1967的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2124的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQID NO：1968的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2125的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1969的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2126的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1970的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ IDNO：2127的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1971的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2128的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1972的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2129的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1973的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2130的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1974的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2131的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1975的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2132的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1976的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2133的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1977的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2134的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1978的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2135的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1979的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2136的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1980的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2137的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1981的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2138的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1982的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2139的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1983的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2140的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQID NO：1984的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2141的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1985的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2142的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1986的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ IDNO：2143的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1987的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2144的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1988的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2145的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1989的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2146的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1990的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2147的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1991的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2148的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1992的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2149的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1993的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2150的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1994的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2151的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1995的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2152的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1996的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2153的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1997的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2154的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1998的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2155的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：1999的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2156的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQID NO：2000的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2157的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2001的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2158的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2002的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ IDNO：2159的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2003的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2160的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2004的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2161的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2005的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2162的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2006的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2163的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2007的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2164的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2008的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2165的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2009的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2166的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2010的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2167的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2011的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2168的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2012的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2169的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2013的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2170的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2014的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2171的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2015的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2172的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQID NO：2016的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2173的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2017的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2174的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2018的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ IDNO：2175的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2019的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2176的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2020的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2177的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2021的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2178的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2022的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2179的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2023的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2180的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2024的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2181的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2025的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2182的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2026的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2183的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2027的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2184的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2028的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2185的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2029的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2186的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2030的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2187的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2031的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2188的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQID NO：2032的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2189的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2033的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2190的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2034的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ IDNO：2191的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2035的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2192的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2036的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2193的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2037的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2194的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2038的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2195的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2039的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2196的多核苷酸序列编码的重链；由包含SEQ ID NO：2040的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2197的多核苷酸序列编码的重链；以及由包含SEQ ID NO：2041的多核苷酸序列编码的轻链和由包含SEQ ID NO：2198的多核苷酸序列编码的重链。
在另一方面，抗原结合蛋白包含如有关表5中所列抗体之一的各列中的一列所列的全长轻链和全长重链。所提供的一些抗原结合蛋白包含如有关表5中所列抗体之一的各列中的一列所列的全长轻链和全长重链，不过这些链中的一条或两条与表中指定的序列仅相差1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基，其中此类序列差异各自独立地为单一氨基酸缺失、插入或取代，其中这些缺失、插入和/或取代引起相对于表5中指定的全长序列有仅1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸变化。在一个实施例中，抗原结合蛋白包含N-末端甲硫氨酸缺失的、来自表5的全长轻链和/或全长重链。在一个实施例中，抗原结合蛋白包含C-末端赖氨酸缺失的、来自表5的全长轻链和/或全长重链。其他抗原结合蛋白还包含如有关表5中所列抗体之一的各列中的一列所列的全长轻链和全长重链，不过这些链中的一条或两条与该表中指定的序列的差异在于，该轻链和/或重链包含与表5中指定的轻链或重链序列的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，或由其组成。
在另一个实施例中，抗原结合蛋白仅由表5中所示的轻链或重链多肽组成。
在又另一方面，含有表3、4A、4B和5中所列CDR、可变结构域和/或全长序列的抗原结合蛋白是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人类抗体、多特异性抗体、或前述的抗体片段。在另一个实施例中，本文提供的经分离的抗原结合蛋白的抗体片段是基于具有表5中所列序列的抗体的Fab片段、Fab′片段、F(ab′)2片段、Fv片段、双抗体或scFv。
在又一方面，表5中所提供的经分离的抗原结合蛋白可以与标记基团偶合，并且可与本文所提供的经分离的抗原结合蛋白中的一种抗原结合蛋白竞争结合GIPR。
在另一个实施例中，提供了抗原结合蛋白，这些抗原结合蛋白与上述示例性抗体或功能片段之一竞争特异性结合人类GIPR(例如SEQ ID NO：3141)。此类抗原结合蛋白可以结合与本文所述的抗原结合蛋白之一相同的表位，或结合重叠表位。预期与示例性抗原结合蛋白竞争的抗原结合蛋白和片段显示出类似的功能特性。示例性抗原结合蛋白和片段包括以上所述的那些，包括具有表3、4A、4B和5中包括的重链和轻链、可变区结构域和CDR的那些抗原结合蛋白和片段。因此，作为一个具体实例，所提供的抗原结合蛋白包括与以下抗体竞争的那些，该抗体具有：
有关表4A和4B中所列任何抗体列出的全部6个CDR；
有关表3中所列任何抗体列出的VH和VL；或
如有关表5中所列任何抗体所指定的两条轻链和两条重链。
所提供的抗原结合蛋白包括结合GIPR的单克隆抗体。单克隆抗体可以使用本领域中已知的任何技术产生，例如通过在完成免疫程序之后使从转基因动物收获的脾细胞永生化。可以使用本领域中已知的任何技术来使脾细胞永生化，例如通过使脾细胞与骨髓瘤细胞融合以产生杂交瘤。用于在产生杂交瘤的融合方法中使用的骨髓瘤细胞优选地是非抗体产生的，具有高融合效率以及使得它们不能在某些选择性培养基中生长的酶缺陷，所述培养基仅支持所希望的融合细胞(杂交瘤)的生长。适用于小鼠融合中的细胞系的实例包括Sp-20、P3-X63/Ag8、P3-X63-Ag8.653、NS1/1.Ag41、Sp210-Ag14、FO、NSO/U、MPC-11、MPC11-X45-GTG 1.7和S194/5XXOBul；用于大鼠融合中的细胞系的实例包括R210.RCY3、Y3-Ag1.2.3、IR983F和4B210。可用于细胞融合的其他细胞系是U-266、GM1500-GRG2、LICR-LON-HMy2和UC729-6。
在一些情况下，通过以下方式产生杂交瘤细胞系：用GIPR免疫原使动物(例如具有人类免疫球蛋白序列的转基因动物)免疫；从经免疫的动物收获脾细胞；使收获的脾细胞与骨髓瘤细胞系融合，由此产生杂交瘤细胞；由这些杂交瘤细胞产生杂交瘤细胞系；和鉴别产生结合GIPR多肽的抗体的杂交瘤细胞系。此类杂交瘤细胞系和由其产生的抗GIPR单克隆抗体属于本申请的方面。
由杂交瘤细胞系分泌的单克隆抗体可以使用本领域已知的任何技术纯化。可以对杂交瘤或mAb进行进一步筛选以鉴别具有特定特性(例如增加GIPR活性的能力)的mAb。
还提供基于前述序列的嵌合抗体和人源化抗体。用作治疗剂的单克隆抗体可以在使用前通过各种方式修饰。一个实例是嵌合抗体，嵌合抗体是由来自不同抗体的蛋白质区段构成的抗体，这些蛋白质区段共价接合以产生功能性免疫球蛋白轻链或重链或者其免疫功能部分。一般而言，重链和/或轻链的一部分与来源于特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而该/这些链的其余部分与来源于另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源。有关涉及嵌合抗体的方法，参见例如美国专利号4,816,567；和Morrison等人，1985，Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]81：6851-6855，将它们通过引用特此并入。CDR移植描述于例如美国专利号6,180,370、5,693,762、5,693,761、5,585,089和5,530,101中。
一般而言，制备嵌合抗体的目的是产生嵌合体，在该嵌合体中，来自预期患者物种的氨基酸数量最大。一个实例是“CDR移植的”抗体，其中该抗体包含一个或多个来自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的互补决定区(CDR)，而该/这些抗体链的其余部分与来源于另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源。对于用于人类，通常将来自啮齿动物抗体的可变区或选择的CDR移植至人类抗体中，替代人类抗体的天然存在的可变区或CDR。
嵌合抗体的一种有用的类型是“人源化”抗体。一般而言，由最初在非人动物中产生的单克隆抗体生产人源化抗体。该单克隆抗体中的某些氨基酸残基(典型地来自该抗体的非抗原识别部分)被修饰成与相应同种型的人类抗体中的相应残基同源。人源化可以例如使用各种方法通过用人类抗体的相应区域取代至少一部分啮齿动物可变区来进行(参见例如，美国专利号5,585,089和5,693,762；Jones等人，1986，Nature[自然]321：522-525；Riechmann等人，1988，Nature[自然]332：323-27；Verhoeyen等人，1988，Science[科学]239：1534-1536)。
在一个方面，将本文所提供的抗体的轻链和重链可变区的CDR移植至来自相同或不同系统发生物种的抗体的框架区(FR)中。例如，可以将重链和轻链可变区VH1、VH2、VH3、VH4、VH5、VH6、VH7、VH8、VH9、VH10、VH11、VH12和/或VL1和VL2的CDR移植到共有人类FR中。为了产生共有人类FR，可以比对来自若干人重链或轻链氨基酸序列的FR以鉴别共有氨基酸序列。在其他实施例中，用来自不同重链或轻链的FR置换本文所披露的重链或轻链的FR。在一个方面，GIPR抗体的重链和轻链的FR中的稀有氨基酸未被置换，而其余FR氨基酸被置换。“稀有氨基酸”是一种特定的氨基酸，该氨基酸位于FR中通常未发现该特定氨基酸的位置中。可替代地，可以将来自一条重链或轻链的经移植的可变区与恒定区一起使用，该恒定区不同于如本文所披露的特定重链或轻链的恒定区。在其他实施例中，经移植的可变区是单链Fv抗体的一部分。
在某些实施例中，来自非人物种的恒定区可以与人类可变区一起使用以产生杂合抗体。
还提供完全人GIPR抗体。许多方法可用于制备对给定抗原具有特异性的完全人抗体，无需使人类暴露于该抗原(“完全人抗体”)。提供的用于产生完全人抗体的一种具体方式是小鼠体液免疫系统的“人源化”。将人类免疫球蛋白(Ig)基因座引入内源Ig基因失活的小鼠中是在小鼠中产生完全人单克隆抗体(mAb)的一种方式，小鼠是可以用任何所需抗原进行免疫的动物。使用完全人抗体可以最小化免疫原性反应和过敏反应，这些反应有时可能会因向人类给予作为治疗剂的小鼠mAb或小鼠源性mAb而引起。
可以通过使转基因动物(通常是小鼠)免疫来产生完全人抗体，所述转基因动物能够在不存在内源性免疫球蛋白产生的情况下产生人抗体库。用于此目的的抗原典型地具有六个或更多个连续氨基酸，且任选地与载体(例如半抗原)偶联。参见例如，Jakobovits等人，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]90：2551-2555；Jakobovits等人，1993，Nature[自然]362：255-258；以及Bruggermann等人，1993，Year in Immunol.[年度免疫学]7：33。在此类方法的一个实例中，通过使编码小鼠重链和轻链免疫球蛋白链的内源小鼠免疫球蛋白基因座失去能力，并将包含编码人类重链和轻链蛋白质的基因座的人类基因组DNA的较大片段插入小鼠基因组中来产生转基因动物。然后对具有少于人类免疫球蛋白基因座完全补体的部分修饰的动物进行杂交繁育，以获得具有全部所需免疫系统修饰的动物。当给予免疫原时，这些转基因动物产生对该免疫原具有免疫特异性、同时具有人类而非鼠类氨基酸序列(包括可变区)的抗体。有关此类方法的进一步详情，参见例如WO 96/33735和WO 94/02602。有关用于制备人类抗体的转基因小鼠的其他方法描述于美国专利号5,545,807、6,713,610、6,673,986、6,162,963、5,545,807、6,300,129、6,255,458、5,877,397、5,874,299和5,545,806；PCT公开WO 91/10741、WO 90/04036；以及EP 546073 B1和EP546073 A1中。
上述转基因小鼠在本文中称为“HuMab”小鼠，含有编码未重排人类重链([μ]和[γ])和[κ]轻链免疫球蛋白序列的人类免疫球蛋白基因微型基因座，以及使内源[μ]和[κ]链基因座失活的靶突变(Lonberg等人，1994，Nature[自然]368：856-859)。因此，小鼠展现了小鼠IgM或[κ]表达以及对免疫的响应降低，且使引入的人类重链和轻链转基因经历类别转换和体细胞突变以产生高亲和力人类IgG[κ]单克隆抗体(Lonberg等人，同上；Lonberg和Huszar，1995，Intern.Rev.Immunol.[国际免疫学研究]13：65-93；Harding和Lonberg，1995，Ann.N.Y Acad.Sci.[纽约科学院年刊]764：536-546)。HuMab小鼠的制备详细描述于以下中：Taylor等人，1992，Nucleic Acids Research[核酸研究]20：6287-6295；Chen等人，1993，International Immunology[国际免疫学]5：647-656；Tuaillon等人，1994，J.Immunol.[免疫学杂志]152：2912-2920；Lonberg等人，1994，Nature[自然]368：856-859；Lonberg，1994，Handbook of Exp.Pharmacology[实验药理学手册]113：49-101；Taylor等人，1994，International Immunology[国际免疫学]6：579-591；Lonberg和Huszar，1995，Intern.Rev.Immunol.[国际免疫学研究]13：65-93；Harding和Lonberg，1995，Ann.N.YAcad.Sci.[纽约科学院年刊]764：536-546；Fishwild等人，1996，Nature Biotechnology[自然生物技术]14：845-851；出于全部目的，将前述参考文献通过引用以其全文特此并入。另参见美国专利号5,545,806、5,569,825、5,625,126、5,633,425、5,789,650、5,877,397、5,661,016、5,814,318、5,874,299、和5,770,429；以及美国专利5,545,807；国际公开号WO93/1227、WO 92/22646、和WO 92/03918，出于全部目的将其所有的披露内容通过引用以其全文特此并入。用于在这些转基因小鼠中产生人类抗体的技术还披露于WO 98/24893和Mendez等人，1997，Nature Genetics[自然遗传学]15：146-156中，将其通过引用特此并入。例如，可以使用HCo7和HCo12转基因小鼠品系产生针对GIPR的人类单克隆抗体。下文提供了有关使用转基因小鼠产生人类抗体的其他详情。
使用杂交瘤技术，可以自转基因小鼠(例如以上所述的那些)产生和选择具有所需特异性的抗原特异性人类mAb。此类抗体可以使用合适载体和宿主细胞进行克隆和表达，或这些抗体可以从培养的杂交瘤细胞收获。
完全人抗体还可来源于噬菌体展示文库(如Hoogenboom等人，1991，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]227：381；和Marks等人，1991，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]222：581中所披露)。噬菌体展示技术经由将抗体库展示于丝状噬菌体的表面上且随后通过抗体与所选抗原的结合选择噬菌体来模拟免疫选择。一种此类技术描述于PCT公开号WO 99/10494(通过引用特此并入)中。
基于GIPR抗原结合蛋白的结构具有如上文所述的CDR、可变区和/或全长链，GIPR结合蛋白还可为变体、模拟物、衍生物或寡聚物。
在一个实施例中，例如，抗原结合蛋白是上文所披露的抗原结合蛋白的变体形式。例如，一些抗原结合蛋白在重链或轻链、可变区或CDR中的一个或多个中具有一个或多个保守氨基酸取代。
天然存在的氨基酸可以基于常见侧链特性分成以下各类：
1)疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
3)酸性：Asp、Glu；
4)碱性：His、Lys、Arg；
5)影响链取向的残基：Gly、Pro；以及
6)芳族的：Trp、Tyr、Phe。
保守氨基酸取代可以涉及这些类别之一的一个成员与同一类别的另一成员的交换。保守氨基酸取代可以涵盖典型地通过化学肽合成而非通过生物系统中的合成而掺入的非天然存在的氨基酸残基。这些包括肽模拟物以及氨基酸部分的其他反向或逆向形式。
非保守取代可以涉及以上类别之一的一个成员被来自另一类别的一个成员替换。此类经取代的残基可以引入与人类抗体同源的抗体区域中，或引入该分子的非同源区中。
在进行此类变化时，根据某些实施例中，可以考虑氨基酸的亲水性指数。通过对各氨基酸指定数字值(“亲水性指数”)然后沿多肽链对这些值重复求平均值来计算蛋白质的亲水特征。根据每种氨基酸的疏水性和荷电特性，确定了其亲水指数。它们为：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)；和精氨酸(-4.5)。
亲水性特征在赋予蛋白质相互作用性生物功能方面的重要性是本领域中所理解的(参见例如Kyte等人，1982，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]157：105-131。已知某些氨基酸可以取代具有类似亲水性指数或评分的其他氨基酸且仍保持类似生物活性。在基于亲水性指数进行变化时，在某些实施例中，包括亲水性指数在±2内的氨基酸取代。在一些方面，包括亲水性指数在±1内的氨基酸取代，且在其他方面，包括亲水性指数在±0.5内的氨基酸取代。
本领域还应理解，可以基于亲水性有效地进行相似氨基酸的取代，特别是在由此产生的生物学功能蛋白质或肽旨在用于免疫学实施例的情况下，如在本发明的情况下。在某些实施例中，如由相邻氨基酸的亲水性所控制的，蛋白质的最大局部平均亲水性与其免疫原性和抗原结合或免疫原性(即，与该蛋白质的生物特性)相关。
已对这些氨基酸残基指定以下亲水性值：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0±1)；谷氨酸(+3.0±1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)：谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；苏氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5±1)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)以及色氨酸(-3.4)。在基于类似亲水性值进行变化时，在某些实施例中，包括亲水性值在±2内的氨基酸取代，在其他实施例中，包括亲水性值在±1内的氨基酸取代，且在又其他实施例中，包括亲水性值在±0.5内的氨基酸取代。在一些情况下，还可基于亲水性鉴别来自一级氨基序列的表位。这些区域又称为“表位核心区”。
示例性保守氨基酸取代示于表6中。
表8：保守氨基酸取代
技术人员将能够使用熟知技术确定如本文所述的多肽的合适变体。本领域技术人员可以通过靶向认为对活性不重要的区域来鉴别可被改变而不破坏活性的合适分子区域。技术人员还将能够鉴别这些分子的在类似多肽中保守的残基和部分。在其他实施例中，对于生物活性或结构可能很重要的区域还可以经历保守氨基酸取代，而不破坏生物活性或不会对多肽结构域有不利影响。
另外，本领域技术人员可以评述结构-功能研究，该结构-功能研究鉴别类似多肽中对于活性或结构很重要的残基。鉴于这种比较，可以预测一种蛋白质中氨基酸残基的重要性，所述氨基酸残基对应于类似蛋白质中对活性或结构重要的氨基酸残基。本领域技术人员可以选择用化学上类似的氨基酸取代此类预测的重要氨基酸残基。
本领域技术人员还可分析类似多肽中的3维结构和与该结构有关的氨基酸序列。鉴于此信息，本领域技术人员可以预测抗体的氨基酸残基相对于其三维结构的比对。本领域技术人员可以选择不对预测处于蛋白质表面上的氨基酸残基进行彻底变化，因为这类残基可能参与与其他分子的重要相互作用。此外，本领域技术人员可以产生在每一所需氨基酸残基处含有单一氨基酸取代的测试变体。然后可以使用针对GIPR活性的测定来筛选这些变体，由此得到哪些氨基酸可被改变和哪些氨基酸不能改变的信息。换言之，基于由这类常规实验收集的信息，本领域技术人员可以容易地确定氨基酸位置，在这些氨基酸位置中应仅避免另外的取代或应避免另外的取代与其他突变的组合。
多种科技出版物已致力于预测二级结构。参见Moult，1996，Curr.Op.in Biotech.[当代生物技术观点]7：422-427；Chou等人，1974，Biochem.[生物技术]13：222-245；Chou等人，1974，Biochemistry[生物化学]113：211-222；Chou等人，1978，Adv.Enzymol.Relat.Areas Mol.Biol.[酶学和分子生物学相关领域的进展]47：45-148；Chou等人，1979，Ann.Rev.Biochem.[生物化学年鉴]47：251-276；以及Chou等人，1979，Biophys.J.[生物物理学杂志]26：367-384。此外，计算器程序当前可用于帮助预测二级结构。一种预测二级结构的方法是基于同源性建模。例如，序列同一性大于30％或相似性大于40％的两种多肽或蛋白质可以具有类似结构拓扑学。最近蛋白质结构数据库(PDB)的增长提供了增强的二级结构(包括多肽结构或蛋白质结构中潜在的折叠数)的可预测性。参见Holm等人，1999，Nucl.Acid.Res.[核酸研究]27：244-247。已提出(Brenner等人，1997，Curr.Op.Struct.Biol.[当代结构生物学观点]7：369-376)，在给定多肽或蛋白质中存在有限数量的折叠，且一旦解析出结构的临界值，结构预测将变得更加准确。
预测二级结构的其他方法包括“串线法(threading)”(Jones，1997，Curr.Opin.Struct.Biol.[当代结构生物学观点]7：377-387；Sippl等人，1996，Structure4：15-19)，“轮廓分析(profile analysis)”(Bowie等人，1991，Science[科学]253：164-170；Gribskov等人，1990，Meth.Enzym.[酶学方法]183：146-159；Gribskov等人，1987，Proc.Nat.Acad.Sci.[美国国家科学院院刊]84：4355-4358)，以及“进化性连锁(evolutionary linkage)”(参见Holm，1999，同上；和Brenner，1997，同上)。
在一些实施例中，进行氨基酸取代以：(1)降低对蛋白质水解的敏感性；(2)降低对氧化的敏感性；(3)改变结合亲和力以形成蛋白质复合物；(4)改变配体或抗原结合亲和力；和/或(4)赋予或改变此类多肽的其他物理化学或功能特性。例如，可以在天然存在的序列中进行单一个或多个氨基酸取代(在某些实施例中，保守氨基酸取代)。可以在抗体中处于形成分子间接触的结构域外的部分中进行取代。在此类实施例中，可以使用的保守氨基酸取代不会显著改变亲本序列的结构特征(例如，不会破坏表征亲本或天然抗原结合蛋白的二级结构的一个或多个置换氨基酸)。技术认可的多肽二级结构和三级结构的实例描述于以下中：Proteins，Structures and Molecular Principles[蛋白质、结构和分子原理](Creighton编辑)，1984，W.H.纽约：Freeman and Company[弗里曼公司]；Introduction toProtein Structure[蛋白质结构简介](Branden和Tooze编辑)，1991，纽约：GarlandPublishing[加兰出版社]；以及Thornton等人，1991，Nature[自然]354：105，将这些文献各自通过引用并入本文。
其他优选的抗体变体包括半胱氨酸变体，其中亲本或天然氨基酸序列中的一个或多个半胱氨酸残基缺失或被另一氨基酸(例如丝氨酸)取代。当抗体须重新折叠成生物活性构象时，半胱氨酸变体特别有用。半胱氨酸变体可以具有少于天然抗体的半胱氨酸残基，且典型地具有偶数个残基以最小化由未配对半胱氨酸引起的相互作用。
可以使用所披露的重链和轻链、可变区结构域和CDR制备含有能特异性结合至GIPR的抗原结合区的多肽。例如，可以将一个或多个CDR共价或非共价掺入分子(例如多肽)中以制备免疫黏附素。免疫黏附素可以作为较大多肽链的一部分掺入CDR中，可以将CDR共价连接至另一多肽链，或者可以非共价掺入CDR。CDR使免疫黏附素能够特异性结合至特定的目的抗原(例如GIPR多肽或其表位)。
还提供基于本文所述的可变区结构域和CDR的模拟物(例如“肽模拟物”或“模拟肽”)。这些类似物可以为肽、非肽或肽与非肽区的组合。Fauchere，1986，Adv.Drug Res.[药物研究进展]15：29；Veber和Freidinger，1985，TINS[神经科学趋势]第392页；以及Evans等人，1987，J.Med.Chem.[医药化学杂志]30：1229，出于任何目的将其通过引用并入本文。可以使用结构类似于治疗上有用的肽的肽模拟物产生类似治疗或预防作用。此类化合物通常借助于计算机化分子建模被开发。一般而言，仿真肽是以下蛋白质，这些蛋白质在结构上类似于展示所需生物活性(例如此处特异性结合GIPR的能力)但通过本领域熟知的方法具有一个或多个任选地选自以下的键置换的肽键：-CH2NH-、-CH2S-、-CH2-CH2-、-CH-CH-(顺式和反式)、-COCH2-、-CH(OH)CH2-和-CH2SO-。在某些实施例中，可以使用共有序列的一个或多个氨基酸被同一类型的D-氨基酸系统性取代(例如D-赖氨酸替代L-赖氨酸)来产生更稳定的蛋白质。此外，还可通过本领域已知的方法(Rizo和Gierasch，1992，Ann.Rev.Biochem.[生物化学年鉴]61：387，将其通过引用并入本文)，例如通过添加能够形成使肽环化的分子内二硫桥的内部半胱氨酸残基，产生包含共同序列或大体上相同的共同序列变化的受限肽。
还提供本文所述的抗原结合蛋白的衍生物。衍生化的抗原结合蛋白可以包含赋予抗体或片段所需特性(例如在特定应用中的增加的半衰期)的任何分子或物质。衍生化的抗原结合蛋白可以包含例如可检测(或标记)部分(例如放射性分子、发色分子、抗原分子或酶分子，可检测珠粒(例如磁性或电子致密(例如金)珠粒)，或结合至另一分子(例如生物素或链霉亲和素)的分子)，治疗或诊断部分(例如放射性、细胞毒性、药物活性部分)，或增加用于特定用途(例如给予受试者，例如人类受试者，或其他体内或体外用途)的抗原结合蛋白的适合性的分子。可以用于使抗原结合蛋白衍生化的分子的实例包括白蛋白(例如人血清白蛋白)和聚乙二醇(PEG)。可以使用本领域中熟知的技术制备抗原结合蛋白的白蛋白连接衍生物和聚乙二醇化衍生物。某些抗原结合蛋白包括如本文所述的聚乙二醇化的单链多肽。在一个实施例中，抗原结合蛋白偶联至或以其他方式连接至甲状腺素转运蛋白(TTR)或TTR变体。TTR或TTR变体可以用例如选自由以下组成的组的化学试剂进行化学修饰：葡聚糖、聚(n-乙烯吡咯烷酮)、聚乙二醇、丙二醇均聚物、环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙基化多元醇和聚乙烯醇。
其他衍生物包括GIPR抗原结合蛋白与其他蛋白质或多肽的共价或聚集性偶联物，例如通过表达包含与GIPR抗原结合蛋白N-末端或C-末端融合的异源多肽的重组融合蛋白。例如，偶联肽可以为异源信号(或前导)多肽(例如酵母α-因子前导肽)，或肽(例如表位标签)。含GIPR抗原结合蛋白的融合蛋白可以包含被添加用于促进GIPR抗原结合蛋白纯化或鉴别的肽(例如聚His)。如Hopp等人，1988，Bio/Technology[生物/技术]6：1204；和美国专利号5,011,912中所述，GIPR抗原结合蛋白还可连接至FLAG肽。FLAG肽具有高抗原性且提供经特定单克隆抗体(mAb)可逆结合的表位，由此能够快速测定和便于纯化所表达的重组蛋白。可用于制备FLAG肽与给定多肽融合的融合蛋白的试剂是可商购的(西格玛公司(Sigma)，圣路易斯(St.Louis)，密苏里州(MO))。
在一些实施例中，抗原结合蛋白包含一个或多个标记。术语“标记基团”或“标记”意指任何可检测的标记。合适标记基团的实例包括但不限于以下：放射性同位素或放射性核素(例如3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)，荧光基团(例如FITC、罗丹明、镧系元素磷光体)，酶基团(例如辣根过氧化酶、β-半乳糖苷酶、荧光素酶、碱性磷酸酶)，化学发光基团，生物素基基团，或由第二报告子识别的预定多肽表位(例如亮氨酸拉链对序列、二级抗体的结合位点、金属结合结构域、表位标签)。在一些实施例中，该标记基团经由各种长度的间隔子臂偶合至抗原结合蛋白以减小潜在空间位阻。各种用于标记蛋白质的方法是本领域已知的且可以在适合时使用。
术语“效应子基团”意指偶合至抗原结合蛋白以充当细胞毒性剂的任何基团。合适效应子基团的实例有放射性同位素或放射性核素(例如3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)。其他合适基团包括毒素、治疗性基团或化学治疗性基团。合适基团的实例包括加利车霉素(calicheamicin)、奥瑞他汀(auristatin)、格尔德霉素(geldanamycin)和美登素(maytansine)。在一些实施例中，效应子基团经由各种长度的间隔子臂偶合至抗原结合蛋白以减小潜在空间位阻。
一般而言，标记根据检测其的测定而被分为多个类别：a)同位素标记，其可以为放射性同位素或较重同位素；b)磁性标记(例如磁性粒子)；c)氧化还原活性部分；d)光学染料；酶基团(例如辣根过氧化酶、β-半乳糖苷酶、荧光素酶、碱性磷酸酶)；e)生物素化基团；和f)由第二报告子识别的预定多肽表位(例如亮氨酸拉链对序列、二级抗体的结合位点、金属结合结构域、表位标签等)。在一些实施例中，该标记基团经由各种长度的间隔子臂偶合至抗原结合蛋白以减小潜在空间位阻。用于标记蛋白质的各种方法是本领域中已知的。
特定标记包括光学染料，包括但不限于发色团、磷光体和荧光团，其中荧光团在许多情况下具有特异性。荧光团可以为“小分子”荧光或蛋白质荧光。
“荧光标记”意指可以经由固有荧光特性而被检测的任何分子。合适荧光标记包括但不限于荧光素、罗丹明、四甲基罗丹明、伊红、赤藓红、香豆素、甲基香豆素、芘、孔雀石绿、二苯乙烯、荧光黄(Lucifer Yellow)、瀑布蓝J(CascadeBlueJ)、德克萨斯红(TexasRed)、IAEDANS、EDANS、BODIPY FL、LC Red 640、Cy 5、Cy 5.5、LC Red 705、俄勒冈绿(Oregongreen)、Alexa-Fluor染料(Alexa Fluor 350、Alexa Fluor 430、Alexa Fluor 488、AlexaFluor 546、Alexa Fluor 568、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 633、Alexa Fluor 660、Alexa Fluor 680)、瀑布蓝(Cascade Blue)、瀑布黄(Cascade Yellow)和R-藻红素(PE)(分子探针公司(Molecular Probes)，尤金(Eugene)，俄勒冈州(OR))、FITC、罗丹明和德克萨斯红(皮尔斯公司(Pierce)，罗克福德(Rockford)，伊利诺伊州(IL))、Cy5、Cy5.5、Cy7(安玛西亚生命科学公司(Amersham Life Science)，匹兹堡(Pittsburgh)，宾夕法尼亚州(PA))。合适的光学染料(包括荧光团)描述于Richard P.Haugland的Molecular Probes Handbook[分子探针手册](通过引用明确并入本文)中。
合适蛋白质荧光标记还包括但不限于绿色荧光蛋白，包括海肾(Renilla)、海笔(Ptilosarcus)或水母物种的GFP(Chalfie等人，1994，Science[科学]263：802-805)，EGFP(克罗泰克实验有限公司(Clontech Labs.，Inc.)，Genbank登录号U55762)，蓝色荧光蛋白(BFP，Quantum Biotechnologies，Inc.，Quebec，Canada；Stauber，1998，Biotechniques[生物技术]24：462-471；Heim等人，1996，Curr.Biol.[当代生物学]6：178-182)，增强的黄色荧光蛋白(EYFP，克罗泰克实验有限公司)，荧光素酶(Ichiki等人，1993，J.Immunol.[免疫学杂志]150：5408-5417)，β半乳糖苷酶(Nolan等人，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美国国家科学院院刊]85：2603-2607)和海肾(WO 92/15673、WO 95/07463、WO 98/14605、WO 98/26277、WO 99/49019，美国专利号5292658、5418155、5683888、5741668、5777079、5804387、5874304、5876995、5925558)。
还提供编码本文所述的抗原结合蛋白的核酸或其部分，包括编码抗体或其片段、衍生物、突变蛋白或变体的一条或两条链的核酸；编码重链可变区或仅CDR的多核苷酸；足以用作杂交探针的多核苷酸；用于鉴别、分析、突变或扩增编码多肽的多核苷酸的PCR引物或测序引物；用于抑制多核苷酸表达的反义核酸；和前述各项的互补序列。这些核酸可以为任何长度。其可以为例如5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、125、150、175、200、250、300、350、400、450、500、750、1,000、1,500、3,000、5,000个或更多个核苷酸长度，和/或可以包含一个或多个另外的序列，例如调控序列，和/或作为一个更大核酸的一部分，例如载体。核酸可以为单链或双链且可以包含RNA和/或DNA核苷酸，及其人工变体(例如肽核酸)。本文提供的任何可变区均可以连接至这些恒定区以形成完整重链和轻链序列。然而，应了解，这些恒定区序列仅作为具体实例提供。在一些实施例中，可变区序列接合至本领域中已知的其他恒定区序列。
可以自被GIPR或其免疫原性片段免疫的小鼠的B细胞分离出编码某些抗原结合蛋白或其部分(例如全长抗体、重链或轻链、可变区结构域或CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2或CDRL3)的核酸。该核酸可以通过常规程序，例如聚合酶链反应(PCR)分离。噬菌体展示是已知可用于制备抗体和其他抗原结合蛋白的衍生物的技术的另一实例。在一种方法中，使作为目的抗原结合蛋白的组分的多肽在任何合适的重组表达系统中表达，且使表达的多肽组装形成抗原结合蛋白。
另一方面进一步提供在特定杂交条件下与其他核酸杂交的核酸。核酸杂交方法是本领域中熟知的。参见例如，Current Protocols in Molecular Biology[当代分子生物学方案]，John Wiley & Sons[约翰威利父子出版社]，纽约(1989)，6.3.1-6.3.6。如本文所定义，中等严格杂交条件使用含5x氯化钠/柠檬酸钠(SSC)、0.5％SDS、1.0mM EDTA(pH 8.0)的预洗涤溶液；具有约50％甲酰胺、6x SSC的杂交缓冲液；和55℃杂交温度(或其他类似的杂交溶液，例如含有约50％甲酰胺的杂交溶液，以及42℃杂交温度)，以及60℃下在0.5x SSC、0.1％SDS中的洗涤条件。严格杂交条件在45℃下于6xSSC中杂交，随后在68℃下于0.1xSSC、0.2％SDS中洗涤一次或多次。另外，本领域技术人员可以操作这些杂交和/或洗涤条件以增加或降低杂交的严格度，由此使包含彼此具有至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性的核苷酸序列的核酸典型地保持彼此杂交。
影响杂交条件的选择的基本参数以及有关设计合适条件的指导例如由Sambrook，Fritsch和Maniatis陈述(2001，Molecular Cloning：A Laboratory Manual[分子克隆：实验室手册]，Cold Spring Harbor Laboratory Press[冷泉港实验室出版社]，冷泉港，纽约，同上；以及Current Protocols in Molecular Biology[当代分子生物学方案]，1995，Ausubel等人编，John Wiley&Sons，Inc.[约翰威利父子公司]，第2.10和6.3-6.4部分)，且可以由本领域技术人员基于例如该核酸的长度和/或碱基组成容易地确定。
可以通过突变将变化引入核酸中，由此使该核酸编码的多肽(例如抗体或抗体衍生物)的氨基酸序列发生变化。突变可以使用本领域中已知的任何技术引入。在一个实施例中，使用例如定点诱变方案来改变一个或多个特定的氨基酸残基。在另一个实施例中，使用例如随机诱变方案使一个或多个随机选择的残基改变。不管如何进行改变，均可以使突变多肽表达且针对所需特性进行筛选。
可以将突变引入核酸中，而不显著改变该核酸编码的多肽的生物活性。例如，可以进行核苷酸取代，在非必需氨基酸残基处引起氨基酸取代。可替代地，可以将一个或多个突变引入核酸中以选择性改变其编码的多肽的生物活性。例如，突变可以定量或定性地改变生物活性。定量变化的实例包括增加、降低或消除该活性。定性变化的实例包括改变抗体的抗原特异性。在一个实施例中，可以使用本领域充分确定的分子生物学技术使编码本文所述任何抗原结合蛋白的核酸突变以改变氨基酸序列。
另一方面提供合适用作引物或杂交探针以检测核酸序列的核酸分子。核酸分子可以仅包含编码全长多肽的核酸序列的一部分，例如可以用作探针或引物的片段或编码多肽活性部分的片段。
可以使用基于核酸序列的探针检测核酸或类似核酸(例如编码多肽的转录物)。该探针可以包含标记基团，例如放射性同位素、荧光化合物、酶或辅因子。此类探针可以用于鉴别表达多肽的细胞。
另一方面提供包含编码多肽或其部分(例如含有一个或多个CDR或者一个或多个可变区结构域的片段)的核酸的载体。载体的实例包括但不限于质粒、病毒载体、非游离型哺乳动物载体和表达载体(例如重组表达载体)。重组表达载体可以包含呈适于在宿主细胞中表达核酸的形式的核酸。重组表达载体包括一个或多个根据待用于表达的宿主细胞而选择的调控序列，其可操作地连接至待表达的核酸序列。调控序列包括引导核苷酸序列在许多类型的宿主细胞中表达的序列(例如SV40早期基因增强子、劳斯氏肉瘤病毒(Roussarcoma virus)启动子和巨细胞病毒启动子)，引导核苷酸序列仅在某些宿主细胞中表达的序列(例如组织特异性调控序列，参见Voss等人，1986，Trends Biochem.Sci.[生物化学科学趋势]11：287；Maniatis等人，1987，Science[科学]236：1237，通过引用以其全文并入本文)，以及引导核苷酸序列响应特定处理或条件进行诱导性表达的序列(例如哺乳动物细胞中的金属硫蛋白以及在原核和真核系统中的tet反应性和/或链霉素反应性启动子(参见，同上))。本领域技术人员应理解，表达载体的设计可以取决于例如待转化的宿主细胞的选择、所需蛋白质的表达水平等因素。可以将表达载体引入宿主细胞中，由此产生由本文所述的核酸编码的蛋白质或肽，包括融合蛋白或肽。
另一方面提供引入有重组表达载体的宿主细胞。宿主细胞可以为任何原核细胞(例如大肠杆菌)或真核细胞(例如酵母、昆虫或哺乳动物细胞(例如CHO细胞))。可以经由常规转化或转染技术将载体DNA引入原核或真核细胞中。对于稳定转染哺乳动物细胞，已知取决于所用表达载体和转染技术，仅一小部分细胞可将外来DNA整合至其基因组中。为了鉴定和选择这些整合体，通常将编码可选择标记物的基因(例如抗生素抗性基因)与目的基因一起引入宿主细胞中。优选的可选择标记物包括赋予药物(例如G418、潮霉素和甲氨喋呤)抗性的那些。被引入的核酸稳定转染的细胞可以通过药物选择来鉴别(例如，已掺入可选择标记物基因的细胞将存活，而其他细胞死亡)。
本文还提供包含至少一种如上文所述的多核苷酸的呈质粒、表达载体、转录盒或表达盒形式的表达系统和构建体，以及包含这些表达系统或构建体的宿主细胞。
本文提供的抗原结合蛋白可以通过多种常规技术中的任一种制备。例如，可以使用本领域中已知的任何技术，由重组表达系统产生GIPR抗原结合蛋白。参见例如，Monoclonal Antibodies，Hybridomas：A New Dimension in Biological Analyses[单克隆抗体，杂交瘤：生物分析的新维度]，Kennet等人(编辑)Plenum Press[综合出版社]，纽约(1980)；以及Antibodies：A Laboratory Manual[抗体：实验室手册]，Harlow和Lane(编辑)，Cold Spring Harbor Laboratory Press[冷泉港实验室出版社]，冷泉港，纽约(1988)。
抗原结合蛋白可以在杂交瘤细胞系中表达(例如，特别地，抗体可以在杂交瘤中表达)或在除杂交瘤外的细胞系中表达。可以使用编码抗体的表达构建体转化哺乳动物、昆虫或微生物宿主细胞。转化可以使用已知用于将多核苷酸引入宿主细胞中的任何方法来进行，包括例如将多核苷酸包装于病毒或噬菌体中并通过本领域中已知的转染程序用构建体转导宿主细胞，如美国专利号4,399,216、4,912,040、4,740,461、4,959,455中所例示。所使用的最佳转化程序将取决于所转化的宿主细胞的类型。用于将异源多核苷酸引入哺乳动物细胞中的方法是本领域中众所周知的且包括但不限于葡聚糖介导的转染、磷酸钙沈淀、聚凝胺介导的转染、原生质体融合、电穿孔、多核苷酸封装于脂质体中、核酸与带正电荷的脂质混合、以及DNA直接显微注射至核中。
重组表达构建体典型地包含编码多肽的核酸分子，该多肽包含以下中的一种或多种：一个或多个本文所提供的CDR；轻链恒定区；轻链可变区；重链恒定区(例如CH1、CH2和/或CH3)；和/或GIPR抗原结合蛋白的另一骨架部分。使用标准连接技术，将这些核酸序列插入适当表达载体中。在一个实施例中，将重链或轻链恒定区附接至抗GIPR特异性重链或轻链可变区的C-末端且连接至表达载体中。典型地选择该载体在所使用的特定宿主细胞中具有功能(即，该载体与宿主细胞机制相容，由此能够进行基因的扩增和/或表达)。在一些实施例中，使用的载体采用了使用蛋白质报告子(例如二氢叶酸还原酶)的蛋白质-片段互补测定(参见例如，美国专利号6,270,964，其通过引用特此并入)。合适的表达载体可以购自例如英杰生命科技公司(Invitrogen Life Technologies)或BD生物科学公司(BDBiosciences)(先前为“克罗泰克公司(Clontech)”)。其他可用于克隆和表达抗体和片段的载体包括Bianchi和McGrew，2003，Biotech.Biotechnol.Bioeng.[生物技术与生物工程]84：439-44(通过引用特此并入)中所述的那些。其他合适的表达载体论述于例如MethodsEnzymol.[酶学方法]，第185卷(D.V.Goeddel编辑)，1990，纽约：Academic Press[学术出版社]中。
典型地，任一宿主细胞中所使用的表达载体将含有用于维持质粒以及用于外源核苷酸序列克隆和表达的序列。在某些实施例中，这类序列，统称为“侧接序列”，典型地将包括以下核苷酸序列中的一个或多个：启动子、一个或多个增强子序列、复制起点、转录终止序列、含有供体和受体剪接位点的完整内含子序列、编码用于多肽分泌的前导序列的序列、核糖体结合位点、聚腺苷酸化序列、用于插入编码待表达的多肽的核酸的多接头区和可选择标记物元件。下文论述了这些序列中的每一种。
任选地，载体可以含有“标签”编码序列，即，位于GIPR抗原结合蛋白编码序列的5′或3′端的寡核苷酸分子；该寡核苷酸序列编码聚His(例如六组氨酸)或另一“标签”，例如HA(血凝素流感病毒)或myc，存在针对该标签的可商购的抗体。该标签典型地在多肽表达时与该抗体融合，且可以用作一种从宿主细胞亲和纯化或检测GIPR抗原结合蛋白的方式。亲和纯化可以通过例如柱色谱法，使用针对标签的抗体作为亲和基质来实现。任选地，随后可以通过各种方式，例如使用某些用于裂解的肽酶，自纯化的GIPR抗原结合蛋白移除标签。
侧接序列可以为同源的(即，来自与宿主细胞相同的物种和/或品系)、异源的(即，来自与宿主细胞物种或品系不同的物种)、杂合的(即，来自超过一种来源的侧接序列的组合)、合成的或天然的。因此，侧接序列的来源可以为任何原核或真核生物体、任何脊椎动物或非脊椎动物生物体、或任何植物，其条件是该侧接序列在宿主细胞机器中起作用且可以被宿主细胞机制活化。
可用于载体中的侧接序列可以通过本领域中熟知的若干方法中的任一种获得。典型地，可用于本文中的侧接序列应预先通过定位和/或通过限制性核酸内切酶消化进行鉴别且因此可以使用适当限制性核酸内切酶自适当组织来源分离。在一些情况下，侧接序列的完全核苷酸序列可以是已知的。此处，侧接序列可以使用本文所述的核酸合成或克隆方法合成。
无论侧接序列的全部或仅一部分是否已知，其均可使用聚合酶链反应(PCR)和/或通过用合适探针(例如来自相同或另一物种的寡核苷酸和/或侧接序列片段)筛选基因组文库来获得。在侧接序列未知的情况下，则可以自可能含有例如编码序列或甚至另外一个或多个基因的较大DNA片段分离含有侧接序列的DNA片段。可以通过以下方法来实现分离：限制性核酸内切酶消化产生适当DNA片段，随后使用琼脂糖凝胶纯化、柱色谱法(查茨沃思(Chatsworth)，加利福尼亚州(CA))或技术人员已知的其他方法进行分离。本领域普通技术人员将易于了解实现此目的的合适酶的选择。
复制起点典型地是可商购的原核表达载体的一部分，且该起点有助于在宿主细胞中扩增载体。如果所选载体不含复制起点，则可以基于已知序列以化学方式合成，并将其连接至载体中。例如，来自质粒pBR322(新英格兰生物实验室(New England Biolabs)，贝弗利(Beverly)，马塞诸塞州(MA))的复制起点适用于大多数革兰氏阴性细菌，且各种病毒起点(例如SV40、多瘤病毒、腺病毒、水疱性口炎病毒(VSV)，或乳头瘤病毒(例如HPV或BPV))可用于在哺乳动物细胞中克隆载体。一般而言，哺乳动物表达载体不需要复制起点组分(例如，通常仅使用SV40起点，因为其还含有病毒早期启动子)。
转录终止序列典型地位于多肽编码区的3′端且用于终止转录。通常，原核细胞中的转录终止序列是富含G-C的片段，随后为聚T序列。尽管该序列易于自文库克隆或甚至作为载体的一部分商购得到，但其还可使用核酸合成方法(例如本文所述的方法)容易地合成。
可选择标记物基因编码在选择性培养基中生长的宿主细胞存活和生长所需的蛋白质。典型的选择标记物基因编码以下蛋白质，该蛋白质(a)赋予原核宿主细胞对抗生素或其他毒素(例如氨苄西林、四环素或卡那霉素)的抗性；(b)补充细胞的营养缺陷；或(c)供应无法从复合物培养基或成分确定的培养基获得的必要营养素。具体的可选择标记物是卡那霉素抗性基因、氨苄西林抗性基因和四环素抗性基因。有利的是，还可使用新霉素抗性基因用于在原核和真核宿主细胞中进行选择。
可以使用其他可选择基因扩增有待表达的基因。扩增是使生长或细胞存活必要的蛋白质的产生所需的基因在连续数代重组细胞的染色体内串联性复制的过程。适用于哺乳动物细胞的可选择标记物的实例包括二氢叶酸还原酶(DHFR)或无启动子的胸苷激酶基因。使哺乳动物细胞转化株处于选择压力下，其中由于载体中存在可选择基因，故仅转化株唯一适于存活。通过在连续增加培养基中选择剂的浓度的条件下培养经转化细胞，由此使可选择基因和编码另一基因(例如结合GIPR多肽的抗原结合蛋白)的DNA扩增来施加选择压力。因此，由扩增的DNA合成增加的量的多肽，例如抗原结合蛋白。
核糖体结合位点通常是mRNA翻译起始所必需的，且被表征为夏因-达尔加诺(Shine-Dalgarno序列)(原核生物)或科扎克(Kozak)序列(真核生物)。该元件典型地位于启动子的3′端且在待表达的多肽的编码序列的5′端。
在一些情况下，例如在真核宿主细胞表达系统中需要糖基化的情况下，可以操作各种前序列(pre-/pro-sequences)以改善糖基化或产率。例如，可以改变特定信号肽的肽酶裂解位点，或添加前序列，这些前序列还可影响糖基化。最终蛋白质产物可以在-1位(相对于成熟蛋白质的第一个氨基酸)具有一个或多个易于表达的另外的氨基酸，这些氨基酸可能未完全移除。例如，最终蛋白质产物可能具有一个或两个在肽酶裂解位点中发现的氨基酸残基，附接至氨基末端。可替代地，使用一些酶裂解位点可能产生所需多肽的略微截短的形式，如果该酶在成熟多肽内的此区域处切割。
表达和克隆典型地将含有被宿主生物体识别且可操作地连接至编码GIPR抗原结合蛋白的分子的启动子。启动子是位于结构基因的起始密码子上游(即，5′)(一般在约100至1000bp内)的非转录序列，其控制结构基因的转录。启动子按照惯例被分为以下两类之一：诱导型启动子和组成型启动子。诱导型启动子起始处于其控制下的DNA响应于培养条件的某种变化(例如营养素的存在或不存在，或者温度变化)以提高的水平转录。另一方面，组成型启动子一致地转录其可操作地连接的基因，即，对基因表达具有极小控制或无控制。由多种潜在宿主细胞识别的多种启动子是熟知的。通过限制性酶消化而从源DNA去除合适启动子并将所需启动子序列插入载体中，将该启动子可操作地连接至编码构成GIPR抗原结合蛋白的重链或轻链的DNA。
适用于酵母宿主的合适启动子还是本领域中熟知的。有利的是，酵母增强子与酵母启动子一起使用。适用于哺乳动物宿主细胞的启动子是熟知的且包括但不限于从病毒(例如多瘤病毒、禽痘病毒、腺病毒(例如腺病毒2)、牛乳头瘤病毒、禽肉瘤病毒、巨细胞病毒、逆转录病毒、B型肝炎病毒和猿猴病毒40(SV40))的基因组获得的启动子。其他合适的哺乳动物启动子包括异源哺乳动物启动子，例如热休克启动子和肌动蛋白启动子。
增强子序列可以插入载体中以增加高等真核生物中编码构成GIPR抗原结合蛋白的轻链或重链的DNA的转录。增强子是顺式作用DNA元件，通常为约10-300bp长度，作用于启动子以增加转录。增强子是取向和位置相对独立的，见于在转录单元的5′和3′端的位置处。已知可得自哺乳动物基因(例如球蛋白、弹性蛋白酶、白蛋白、α-胎蛋白和胰岛素)的若干增强子序列。然而，典型地使用来自病毒的增强子。本领域中已知的SV40增强子、巨细胞病毒早期启动子增强子、多瘤病毒增强子和腺病毒增强子是用于活化真核启动子的例示性强化元件。尽管增强子可以定位于载体中编码序列的5′或3′端，但其典型地位于启动子5′端的位点处。编码适当天然或异源信号序列(前导序列或信号肽)的序列可以掺入表达载体中，以促进抗体的细胞外分泌。信号肽或前导序列的选择取决于待产生抗体的宿主细胞的类型，且异源信号序列可以替代天然信号序列。在哺乳动物细胞中起作用的信号肽的实例包括以下：美国专利号4,965,195中所述的白细胞介素-7(IL-7)的信号序列；Cosman等人，1984，Nature[自然]312：768中所述的白细胞介素-2受体的信号序列；Ep专利号0367 566中所述的白细胞介素-4受体信号肽；美国专利号4,968,607中所述的I型白细胞介素-1受体信号肽；Ep专利号0 460 846中所述的II型白细胞介素-1受体信号肽。
在一个实施例中，前导序列包含SEQ ID NO：3157(MDMRVPAQLL GLLLLWLRGA RC)，其由SEQ ID NO：3158(atggacatga gagtgcctgc acagctgctg ggcctgctgc tgctgtggctgagaggcgcc agatgc)编码。在另一个实施例中，前导序列包含SEQ ID NO：3159(MAWALLLLTLLTQGTGSWA)，其由SEQ ID NO：3160(atggcctggg ctctgctgct cctcaccctc ctcactcagggcacagggtc ctgggcc)编码。
所提供的表达载体可以由起始载体(例如可商购的载体)构建。这些载体可含有或可不含所有所需侧接序列。在载体中不存在一个或多个本文所述的侧接序列的情况下，这些侧接序列可以独立地获得且连接至载体中。用于获得各侧接序列的方法是本领域技术人员熟知的。
在构建载体且将编码构成GIPR抗原结合序列的轻链、重链或轻链和重链的核酸分子插入载体的适当位点中之后，可以将完整载体插入合适宿主细胞中进行扩增和/或多肽表达。可以通过熟知的方法，包括转染、感染、磷酸钙共沈淀、电穿孔、显微注射、脂质转染、DEAE-葡聚糖介导的转染或其他已知技术将抗原结合蛋白的表达载体转化至所选宿主细胞中。所选方法将部分随所用宿主细胞的类型而变化。这些方法和其他合适的方法是技术人员熟知的，且陈述于例如Sambrook等人，2001，同上。
宿主细胞当在适当条件下培养时合成抗原结合蛋白，随后该抗原结合蛋白(如果宿主细胞将其分泌至培养基中)可以自培养基收集或直接自产生该抗原结合蛋白(如果其并非分泌的)的宿主细胞收集。适当宿主细胞的选择将取决于各种因素，例如所需表达水平、活性所希望的或必需的多肽修饰(例如糖基化或磷酸化)和折叠成生物活性分子的容易性。
可用作用于表达的宿主的哺乳动物细胞系是本领域中熟知的且包括但不限于可得自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)的永生化细胞系，包括但不限于中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、海拉(HeLa)细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞(例如Hep G2)和多种其他细胞系。在某些实施例中，可以经由确定具有高表达水平且组成性地产生具有GIPR结合特性的抗原结合蛋白的细胞系来选择细胞系。在另一个实施例中，可以自B细胞谱系选择不产生自身抗体但能够制备并分泌异源抗体的细胞系。
在一个实施例中，本发明涉及由表达表2、3、4和5中所标识的一种或多种多核苷酸的细胞产生的抗原结合蛋白。
在一个方面，给予GIPR结合蛋白进行慢性治疗。在另一方面，给予这些结合蛋白进行急性治疗。
还提供包含GIPR抗原结合蛋白的药物组合物且其可用于本文所披露的预防性方法和治疗性方法中的任一种中。在一个实施例中，还提供治疗有效量的一种或多种抗原结合蛋白以及药学上可接受的稀释剂、载体、增溶剂、乳化剂、防腐剂和/或佐剂。可接受的配制材料在所采用的剂量和浓度下对接受者无毒。
在某些实施例中，药物组合物可以含有用于改变、维持或保持例如该组合物的pH、渗量、黏度、透明度、颜色、等渗性、气味、无菌性、稳定性、解离或释放速率、吸附或渗透的配制材料。在此类实施例中，合适配制材料包括但不限于氨基酸(例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸)；抗微生物剂；抗氧化剂(例如抗坏血酸、亚硫酸钠或亚硫酸氢钠)；缓冲剂(例如硼酸盐、碳酸氢盐、Tris-HCl、柠檬酸盐、磷酸盐或其他有机酸)；膨胀剂(例如甘露醇或甘氨酸)；螯合剂(例如乙二胺四乙酸(EDTA))；络合剂(例如咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-环糊精或羟丙基-β-环糊精)；填充剂；单醣；二醣；和其他碳水化合物(例如葡萄糖、甘露糖或糊精)；蛋白质(例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白)；着色剂、调味剂和稀释剂；乳化剂；亲水性聚合物(例如聚乙烯吡咯烷酮)；低分子量多肽；成盐平衡离子(例如钠)；防腐剂(例如苯扎氯胺、苯甲酸、水杨酸、硫柳汞、苯乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、氯己定、山梨酸或过氧化氢)；溶剂(例如甘油、丙二醇或聚乙二醇)；糖醇(例如甘露醇或山梨醇)；悬浮剂；表面活性剂或润湿剂(例如普朗尼克(pluronics)，PEG，脱水山梨聚糖酯，聚山梨醇酯如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯，曲通(triton)，氨丁三醇，卵磷脂，胆固醇，泰洛沙泊(tyloxapal))；稳定性增强剂(例如蔗糖或山梨醇)；张力增强剂(例如碱金属卤化物，优选氯化钠或氯化钾、甘露醇、山梨醇)；递送媒剂；稀释剂；赋形剂和/或药用佐剂。REMINGTON′S PHARMACEUTICAL SCIENCES[雷明顿药物科学]，第18版(A.R.Genrmo编辑)，1990，Mack Publishing Company[麦克出版公司]提供可掺入药物组合物中的合适试剂的其他详情和选择。
在某些实施例中，最佳药物组合物将由本领域技术人员根据例如预期给予途径、递送形式和所需剂量来确定。参见例如，REMINGTON′S PHARMACEUTICAL SCIENCES[雷明顿药物科学]，同上。在某些实施例中，此类组合物可能会影响所披露的抗原结合蛋白的物理状态、稳定性、体内释放速率和体内清除速率。在某些实施例中，药物组合物中的主要媒剂或载体本质上可以为水性或非水性的。例如，合适媒剂或载体可以为注射用水或生理盐水溶液。在某些实施例中，可以通过将选择的具有所需纯度的组合物与任选的配制剂(REMINGTON′S PHARMACEUTICAL SCIENCES[雷明顿药物科学]，同上)混合来制备呈冻干饼状物或水溶液形式的GIPR抗原结合蛋白组合物以供储存。另外，在某些实施例中，可以使用适当赋形剂(例如蔗糖)来配制呈冻干产物的GIPR抗原结合蛋白。
可以选择药物组合物用于肠胃外递送。可替代地，可以选择组合物用于吸入或经消化道递送，例如口服。此类药学上可接受的组合物的制备在本领域技术人员的技术范围内。
配制品组分优选地以给予部位可接受的浓度存在。在某些实施例中，使用缓冲液将组合物维持在生理pH值或稍低的pH值，通常pH值范围为从约5至约8。
当考虑肠胃外给予时，可以提供呈无热原、肠胃外可接受的水溶液形式的治疗组合物，其包含在药学上可接受的媒剂中的所需人类GIPR抗原结合蛋白。特别适用于肠胃外注射的媒剂是无菌蒸馏水，其中GIPR抗原结合蛋白被配制为适当保存的无菌等渗溶液。在某些实施例中，该制备可以包括将所需分子与例如可注射微球体、生物可侵蚀颗粒、聚合化合物(例如聚乳酸或聚乙醇酸)、珠粒或脂质体等试剂一起配制，该试剂可以提供产物的控制释放或持续释放，该产物可以经由储库注射递送。在某些实施例中，也可以使用透明质酸，该透明质酸具有促进循环持续时间的作用。在某些实施例中，可以使用植入式药物递送装置引入所需抗原结合蛋白。
某些药物组合物被配制用于吸入。在一些实施例中，GIPR抗原结合蛋白被配制为可吸入的干粉形式。在具体实施例中，还可用推进剂配制GIPR抗原结合蛋白吸入溶液以递送气雾剂。在某些实施例中，可以使溶液雾化。肺给予和因此的配制方法进一步描述于国际专利申请号PCT/US 94/001875中，其通过引用而并入且描述了化学修饰的蛋白质的肺递送。一些配制品可以经口给予。以此方式给予的GIPR抗原结合蛋白可以在存在或不存在载体的情况下配制，这些载体常用于混配固体剂型(例如片剂和胶囊)。在某些实施例中，胶囊可以设计成在胃肠道某一点处释放配制品的活性部分，此时生物利用率达到最大且使体循环前降解最小化。可以包括其他试剂以促进GIPR抗原结合蛋白的吸收。还可采用稀释剂、调味剂、低熔点蜡、植物油、润滑剂、悬浮剂、片剂崩解剂和结合剂。
一些药物组合物包含有效量的一种或多种GIPR抗原结合蛋白与适于制造片剂的无毒赋形剂的混合物。通过将片剂溶解于无菌水或另一适当媒剂中，可以制备呈单位剂型的溶液。合适赋形剂包括但不限于惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠或碳酸氢钠、乳糖或磷酸钙；或结合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；或润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。
本领域技术人员将了解其他药物组合物，其包括呈持续递送或控制递送配制品形式的含GIPR结合蛋白的配制品。用于配制多种其他持续递送或控制递送方式的技术(例如脂质体载体、生物可侵蚀微粒或多孔珠粒和储库注射)也是本领域技术人员已知的。参见例如，国际专利申请号PCT/US 93/00829，其通过引用而并入且描述用于递送药物组合物的多孔聚合微粒的控制释放。持续释放制剂可以包括呈成型制品(例如膜或微胶囊)形式的半透性聚合物基质。持续释放基质可以包括聚酯、水凝胶、聚丙交酯(如美国专利号3,773,919和欧洲专利申请公开号EP 058481中所披露，其各自通过引用而并入)、L-谷氨酸与γ乙基-L-谷氨酰胺的共聚物(Sidman等人，1983，Biopolymers[生物聚合物]2：547-556)、聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)(poly(2-hydroxyethyl-inethacrylate)，Langer等人，1981，J.Biomed.Mater.Res.[生物医学材料研究杂志]15：167-277和Langer，1982，Chem.Tech.[化学技术]12：98-105)、乙烯乙酸乙烯酯(Langer等人，1981，同上)或聚-D(-)-3-羟丁酸(欧洲专利申请公开号EP 133,988)。持续释放组合物还可包括脂质体，这些脂质体可以通过本领域中已知的若干方法中的任一种制备。参见例如，Eppstein等人，1985，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美国国家科学院院刊]82：3688-3692；欧洲专利申请公开号EP 036,676、EP 088,046和EP 143,949，通过引用而并入。
用于体外给予的药物组合物典型地以无菌制剂形式提供。灭菌可以通过无菌过滤膜的过滤来实现。当冻干组合物时，使用该方法进行灭菌可以在冻干和复原之前或之后进行。肠胃外给予的组合物能以冻干形式或溶液形式储存。肠胃外组合物一般是放置在具有无菌进入孔的容器中，例如具有皮下注射针可刺穿的塞子的静脉内溶液袋或小瓶。
在某些配制品中，抗原结合蛋白的浓度是至少10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL或150mg/mL。在一个实施例中，药物组合物包含抗原结合蛋白、缓冲液和聚山梨醇酯。在其他实施例中，药物组合物包含抗原结合蛋白、缓冲液、蔗糖和聚山梨醇酯。药物组合物的实例是含有50-100mg/mL抗原结合蛋白、5-20mM乙酸钠、5％-10％w/v蔗糖和0.002％-0.008％w/v聚山梨醇酯的药物组合物。例如，某些组合物含有在9-11mM乙酸钠缓冲液、8％-10％w/v蔗糖和0.005％-0.006％w/v聚山梨醇酯中的65-75mg/mL抗原结合蛋白。某些此类配制品的pH值在4.5-6范围内。其他配制品的pH值为5.0-5.5(例如pH 5.0、5.2或5.4)。
一旦配制好药物组合物，即可将其以溶液、悬浮液、凝胶、乳液、固体、晶体或者脱水或冻干粉末形式储存于无菌小瓶中。此类配制品能以备用形式或需要在给予前复原的形式(例如冻干形式)储存。还提供用于产生单剂量给予单元的试剂盒。某些试剂盒含有具有干燥蛋白质的第一容器和具有水性配制品的第二容器。在某些实施例中，提供含有单室和多室预填充注射器(例如液体注射器和冻干注射器(lyosyringe))的试剂盒。所用的含治疗有效量的GIPR抗原结合蛋白的药物组合物将例如取决于治疗情况和对象。本领域技术人员应理解，用于治疗的适当剂量将部分根据所递送的分子、使用GIPR抗原结合蛋白的适应症、给予途径以及患者的体格(体重、体表面积或器官尺寸)和/或状况(年龄和一般健康状况)而变化。在某些实施例中，临床医生可以滴定剂量且改变给予途径以获得最佳治疗效果。
给药频率将取决于所用配制品中特定GIPR抗原结合蛋白的药代动力学参数。典型地，临床医生给予该组合物，直至达到获得所需效果的剂量。因此，该组合物能以单次剂量，或随时间以两次或更多次剂量(可以含有或可以不含相同量的所需分子)，或经由植入装置或导管连续输注来给予。经由使用适当剂量-响应数据可以确定适当剂量。在某些实施例中，可以在整个较长时间段内向患者给予抗原结合蛋白。在某些实施例中，每两周、每个月、每两个月、每三个月、每四个月、每五个月或每六个月给予抗原结合蛋白。
药物组合物的给予途径根据已知方法进行，例如口服；经由静脉内、腹膜内、脑内(薄壁组织内)、脑室内、肌肉内、眼内、动脉内、门内或病灶内途径注射；通过持续释放系统或通过植入装置给予。在某些实施例中，组合物可以通过推注或连续输注，或通过植入装置给予。
该组合物还可经由植入膜、纱布或其上吸收或封装有所需分子的另一适当材料局部给予。在使用植入装置的某些实施例中，该装置可以植入任何合适组织或器官中，且可以经由扩散、定时释放的推注或连续给予来递送所需分子。
离体使用所披露的GIPR抗原结合蛋白药物组合物还可为适合的。在此类情况下，使自患者取出的组织或器官暴露于GIPR抗原结合蛋白药物组合物，之后，将细胞、组织和/或器官植入回患者体内。
医师将能够根据特定患者的个别特征选择适当治疗指征和靶脂质水平。有关指导高脂血症治疗的一个普遍接受的标准是the Third Report of the NationalCholesterol Education Program(NCEP)Expert Panel on Detection，Evaluation，andTreatment of the High Blood Cholesterol in Adults(Adult Treatment Panel III)Final Report[国家胆固醇教育计划(NCEP)专家组对于成人(成人治疗组III)高血胆固醇的检测、评估和治疗的第三次报告，最终报告]，NationalInstitutes of Health[美国国立卫生研究院]，NIH出版号02-5215(2002)，将该印刷的出版物通过引用以其全文特此并入。
特定剂量的功效可以通过参照生物标记物或某些生理参数的改善来评估。合适生物标记物的实例包括游离胆固醇与血浆脂质的比率、游离胆固醇与膜蛋白的比率、磷脂酰胆碱与鞘磷脂的比率、或HDL-C水平。
还提供了包含GIPR抗原结合蛋白和一种或多种其他治疗剂的组合物，以及将此类药剂与GIPR抗原结合蛋白同时或依序给予以用于本文所披露的预防性和治疗性方法中的方法。该一种或多种其他药剂可以与GIPR抗原结合蛋白共配制或可以与GIPR抗原结合蛋白共给予。一般而言，还可将治疗方法、组合物和化合物与其他治疗剂组合使用以治疗各种疾病状态，其中同时给予这些其他药剂。
在一个方面，本发明涉及治疗患有代谢紊乱的受试者的方法，该方法包括向受试者给予包含抑制GIPR功能的GIPR拮抗剂和GLP-1受体激动剂的组合物，其中该GLP-1受体激动剂与该GIPR拮抗剂偶联。在一个实施例中，GIPR拮抗剂抑制GIP与GIPR结合。
在一个方面，本发明涉及治疗患有代谢紊乱的受试者的方法，该方法包括向受试者给予一种组合物，该组合物包含特异性结合人类GIPR的抗体或其功能片段，其中该抗体或其功能片段在一个或多个偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代；并且该组合物包含GLP-1受体激动剂，其中该GLP-1受体激动剂经由在该一个或多个偶联位点处取代的半胱氨酸残基或非经典氨基酸残基的侧链偶联至该抗体或其功能片段。
在一个方面，本发明涉及治疗患有代谢紊乱的受试者的方法，该方法包括向受试者给予治疗有效量的GLP-1受体激动剂和治疗有效量的特异性结合以下蛋白质的GIPR拮抗剂，该蛋白质具有与GIPR的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中该GIPR拮抗剂与该GLP-1受体激动剂偶联。此类偶联的分子可以称为“抗GIPR/GLP-1R双特异性偶联物”、“抗GIPR/GLP-1R肽偶联物”、“抗GIPR/GLP-1R偶联物”、或甚至“双特异性偶联物”。
在一个方面，本发明涉及通过向细胞给予与GLP-1受体激动剂偶联的GIPR拮抗剂来促进GIPR和GLP-1R内化到它们在其中共表达的细胞中的方法。在一个实施例中，GIPR和GLP-1R在内化时共定位。
在一个方面，本发明涉及通过向细胞给予与GLP-1受体激动剂偶联的GIPR拮抗剂来刺激细胞中钙通量的方法。
在一个方面，本发明涉及通过向细胞给予与GLP-1受体激动剂偶联的GIPR拮抗剂来促进细胞中β-抑制蛋白募集的方法。
在一个方面，本发明涉及通过向细胞给予与GLP-1受体激动剂偶联的GIPR拮抗剂来刺激自细胞分泌胰岛素的方法。在一个实施例中，该细胞是人微型胰岛细胞。
“GLP-1受体激动剂”是指具有GLP-1受体活性的化合物。此类例示性化合物包括艾塞丁、艾塞丁类似物、艾塞丁激动剂、GLP-1(7-37)、GLP-1(7-37)类似物、GLP-1(7-37)激动剂，和类似物。GLP-1受体激动剂化合物可以任选地经酰胺化。术语“GLP-1受体激动剂”和“GLP-1受体激动剂化合物”具有相同含义。
术语“艾塞丁”包括在大毒蜥(Gila monster)的唾液分泌中发现的天然存在的艾塞丁肽(或天然存在的艾塞丁肽的合成形式)。特别值得关注的艾塞丁包括艾塞丁-3和艾塞丁-4。用于本文所述的方法中的艾塞丁、艾塞丁类似物和艾塞丁激动剂可以任选地酰胺化，且还可呈该分子的酸形式、药学上可接受的盐形式或任何其他生理活性形式。
在一个实施例中，该GLP-1受体激动剂是GLP-1(7-37)或GLP-1(7-37)类似物。
在一个实施例中，该GLP-1受体激动剂选自由以下组成的组：艾塞那肽、利拉鲁肽、利西拉肽、阿必鲁肽、度拉糖肽、索马鲁肽和他司鲁肽。
在一个方面中，本发明涉及一种治疗方法，其包括向受试者给予治疗有效量的至少一种GLP-1受体激动剂与给予至少一种GIPR拮抗剂的组合，其中该GIPR拮抗剂与该GLP-1受体激动剂偶联，其在给予具有代谢紊乱的症状的受试者时提供持续有益作用。
在一个实施例中，给予至少一种GLP-1受体激动剂与给予至少一种GIPR拮抗剂的组合提供对代谢紊乱的至少一种症状的持续有益作用。
在一个实施例中，治疗有效量的GLP-1受体激动剂和GIPR拮抗剂是在给予受试者之前组合。
在一个实施例中，治疗有效量的GLP-1受体激动剂和GIPR拮抗剂是依序给予受试者。
在一个实施例中，GLP-1受体激动剂和GIPR拮抗剂的治疗有效量是协同有效量。
艾塞丁-4(HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(SEQ ID NO：3163))是在大毒蜥钝尾毒蜥(Heloderma suspectum)的唾液中发现的肽；且艾塞丁-3(HSDGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(SEQ ID NO：3164))是在死亡的蜥蜴珠毒蜥(Heloderma horridum)的唾液中发现的肽。艾塞丁与胰高血糖素样肽(GLP)家族的一些成员具有某种氨基酸序列相似性。例如，艾塞丁-4与胰高血糖素样肽-1(GLP-1)(7-37)(HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG(SEQ ID NO：3184))具有约53％序列同一性。然而，艾塞丁-4是由不同基因转录，并非表达GLP-1的哺乳动物原胰高血糖素基因的大毒蜥同源物。此外，艾塞丁-4不是GLP-1(7-37)的类似物，因为合成性艾塞丁-4肽的结构并非由连续修饰GLP-1的结构产生。Nielsen等人，Current Opinion in Investigational Drugs[当代研究性药物的观点]，4(4)：401-405(2003)。
合成艾塞丁-4，又称为艾塞那肽，是以(艾米林制药公司(AmylinPharmaceuticals，Inc.)和礼来公司(Eli Lilly and Company))可商购的。WO 2005/102293中描述一周一次艾塞那肽配制品，该案的披露内容通过引用并入本文。
“艾塞丁类似物”是指当通过此项技术已知的措施，例如受体结合和/或竞争研究(如例如Hatgrove等人，Regulatory Peptides[调控肽]，141：113-119(2007)，其披露内容通过引用并入本文)评价时引起艾塞丁参考肽的生物活性，优选地具有等于或优于艾塞丁参考肽(例如艾塞丁-4)的效力，或效力相较于艾塞丁参考肽在五个数量级(±)内的肽。优选地，艾塞丁类似物将在此类测定中以小于1μM的亲和力，且更佳小于3nM、小于1nM或小于0.1nM的亲和力结合。术语“艾塞丁类似物”还可称为“艾塞丁激动剂”。在一个优选实施例中，艾塞丁类似物是艾塞丁-4类似物。
艾塞丁类似物还包括本文所述的已经化学衍生化或改变的肽，例如具有非天然氨基酸残基(例如牛磺酸、β-氨基酸残基、γ-氨基酸残基和D-氨基酸残基)；C-末端官能基修饰，例如酰胺、酯和C-末端酮修饰；和N-末端官能基修饰，例如酰基化胺、希夫碱(Schiffbase)或如例如在氨基酸焦谷氨酸中所见的环化的肽。艾塞丁类似物还可含有其他化学部分，例如肽模拟物。
例示性艾塞丁和艾塞丁类似物艾塞丁-4(SEQ ID NO：3163)；艾塞丁-3(SEQ IDNO：3164)；Leu14-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3165)；Leu14，Phe25-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3166)；Leu14，Ala19，Phe25-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3167)；艾塞丁-4(1-30)(SEQ ID NO：3168)；Leu14-艾塞丁-4(1-30)(SEQ ID NO：3169)；Leu14，Phe25-艾塞丁-4(1-30)(SEQ ID NO：3170)；Leu14，Ala19，Phe25-艾塞丁-4(1-30)(SEQ ID NO：3171)；艾塞丁-4(1-28)(SEQ ID NO：3172)；Leu14-艾塞丁-4(1-28)(SEQ ID NO：3173)；Leu14，Phe25-艾塞丁-4(1-28)(SEQ IDNO：3174)；Leu14，Ala19，Phe25-艾塞丁-4(1-28)(SEQ ID NO：3175)；Leu14，Lys17，20，Ala19，Glu21，Phe25，Gln28-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3176)；Leu14，Lys17，20，Ala19，Glu21，Gln28-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3177)；辛基Gly14，Gln28-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3178)；Leu14，Gln28，辛基Gly34-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3179)；Phe4，Leu14，Gln28，Lys33，Glu34，Ile35，36，Ser37-艾塞丁-4(1-37)(SEQ ID NO：3180)；Phe4，Leu14，Lys17，20，Ala19，Glu21，Gln28-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3181)；Val11，Ile13，Leu14，Ala16，Lys21，Phe25-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3182)；艾塞丁-4-Lys40(SEQ ID NO：3183)；利西拉肽(赛诺菲-安万特公司(Sanofi-Aventis)/西兰岛制药公司(Zealand Pharma))；CJC-1134(化学偶联公司(ConjuChem，Inc.))；[Ne-(17-羧基十七烷酸)Lys20]艾塞丁-4-NH2(SEQ ID NO：3208)；[Ne-(17-羧基十七烷酰基)Lys32]艾塞丁-4-NH2(SEQ ID NO：3209)；[脱氨基-His1，Ne-(17-羧基十七烷酰基)Lys20]艾塞丁-4-NH2(SEQ IDNO：3210)；[Arg12，27，NLe14，Ne-(17-羧基-十七烷酰基)Lys32]艾塞丁-4-NH2(SEQ ID NO：3211)；[Ne-(19-羧基-十九烷酰基氨基)Lys20]-艾塞丁-4-NH2(SEQ ID NO：3212)；[Ne-(15-羧基十五烷酰基氨基)Lys20]-艾塞丁-4-NH2(SEQ ID NO：3213)；[Ne-(13-羧基十三烷酰基氨基)Lys20]艾塞丁-4-NH2(SEQ ID NO：3214)；[Ne-(11-羧基-十一烷酰基-氨基)Lys20]艾塞丁-4-NH2(SEQ ID NO：3215)；艾塞丁-4-Lys40(e-MPA)-NH2(SEQ ID NO：3216)；艾塞丁-4-Lys40(e-AEEA-AEEA-MPA)-NH2(SEQ ID NO：3217)；艾塞丁-4-Lys40(e-AEEA-MPA)-NH2(SEQID NO：3218)；艾塞丁-4-Lys40(e-MPA)-白蛋白(SEQ ID NO：3219)；艾塞丁-4-Lys40(e-AEEA-AEEA-MPA)-白蛋白(SEQ ID NO：3220)；艾塞丁-4-Lys40(e-AEEA-MPA)-白蛋白(SEQ IDNO：3221)；等。AEEA是指[2-(2-氨基)乙氧基)]乙酸。EDA是指乙二胺。MPA是指马来酰亚胺基丙酸。艾塞丁和艾塞丁类似物可任选地酰胺化。
在一个实施例中，GLP-1受体激动剂化合物是与艾塞丁-4(SEQ ID NO：3163)具有至少80％序列同一性；与艾塞丁-4(SEQ ID NO：3163)具有至少85％序列同一性；与艾塞丁-4(SEQ ID NO：3163)具有至少90％序列同一性；或与艾塞丁-4(SEQ ID NO：3163)具有至少95％序列同一性的艾塞丁-4类似物。
可用于本文所述的方法中的其他艾塞丁和艾塞丁类似物包括以下中描述者：WO98/05351；WO 99/07404；WO 99/25727；WO 99/25728；WO 99/40788；WO 00/41546；WO 00/41548；WO 00/73331；WO 01/51078；WO 03/099314；美国专利号6,956,026；美国专利号6,506,724；美国专利号6,703,359；美国专利号6,858,576；美国专利号6,872,700；美国专利号6,902,744；美国专利号7,157,555；美国专利号7,223,725；美国专利号7,220,721；美国公开号2003/0036504；和美国公开号2006/0094652，将其披露内容通过引用以其全文并入本文。
“GLP-1(7-37)类似物”是指当通过此项技术已知的措施，例如受体结合或体内血糖测定(如例如Hargrove等人，Regulatory Peptides[调控肽]，141：113-119(2007)，其披露内容通过引用并入本文)评价时引起与GLP-1(7-37)类似的生物活性的肽。在一个实施例中，术语“GLP-1(7-37)类似物”是指当与GLP-1(7-37)的氨基酸序列相比较时具有含1、2、3、4、5、6、7或8个氨基酸取代、插入、缺失或其中两个或多于两个的组合的氨基酸序列的肽。在一个实施例中，GLP-1(7-37)类似物是GLP-1(7-36)-NH2。GLP-1(7-37)类似物包括该分子的酰胺化形式、酸形式、药学上可接受的盐形式和任何其他生理活性形式。在一些实施例中，使用简单命名法描述GLP-1受体激动剂，例如[Aib8]GLP-1(7-37)表示在8位中的天然存在的Ala经Aib取代的GLP-1(7-37)类似物。
例示性GLP-1(7-37)和GLP-1(7-37)类似物包括GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3184)；GLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO：3185)；利拉鲁肽(来自诺和诺德公司(Novo Nordisk)的)；阿必鲁肽(来自葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline)的)；他司鲁肽(霍夫曼·罗氏公司(Hoffman La-Roche))；度拉糖肽(又称LY2189265；礼来公司)；LY2428757(礼来公司)；脱氨基-His7，Arg26，Lys34(Nε-(γ-Glu(N-α-十六烷酰基)))-GLP-1(7-37)(如SEQ ID NO：3222所披露的核心肽)；脱氨基-His7，Arg26，Lys34(Nε-辛酰基)-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3223)；Arg26，34，Lys38(Nε-(ω-羧基十五烷酰基))-GLP-1(7-38)(SEQ IDNO：3224)；Arg26，34，Lys36(Nε-(γ-Glu(N-α-十六烷酰基)))-GLP-1(7-36)(如SEQ ID NO：3225所披露的核心肽)；Aib8，35，Arg26，34，Phe31-GLP-1(7-36))(SEQ ID NO：3186)；HXaa8EGTFTSDVSSYLEXaa22Xaa23AAKEFIXaa30WLXaa33Xaa34GXaa36Xaa37，其中Xaa3是A、V或G；Xaa22是G、K或E；Xaa23是Q或K；Xaa30是A或E；Xaa33是V或K；Xaa34是K、N或R；Xaa36是R或G；且Xaa37是G、H、P或不存在(SEQ ID NO：3187)；Arg34-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3188)；Glu30-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3189)；Lys22-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3190)；Gly8，36，Glu22-GLP-1(7-37)(SEQID NO：3191)；Val8，Glu22，Gly36-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3192)；Gly8，36，Glu22，Lys33，Asn34-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3193)；Val8，Glu22，Lys33，Asn34，Gly36-GLP-1(7-37)(SEQ IDNO：3194)；Gly8，36，Glu22，Pro37-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3195)；Val8，Glu22，Gly36Pro37-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3196)；Gly8，36，Glu22，Lys33，Asn34，Pro37-GLP-1(7-37)(SEQ IDNO：3197)；Val8，Glu22，Lys33，Asn34，Gly36，Pro37-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3198)；Gly8，36，Glu22-GLP-1(7-36)(SEQ ID NO：3199)；Val8，Glu22，Gly36-GLP-1(7-36)(SEQ ID NO：3200)；Val8，Glu22，Asn34，Gly36-GLP-1(7-36)(SEQ ID NO：3201)；Gly8，36，Glu22，Asn34-GLP-1(7-36)(SEQ ID NO：3202)。GLP-1(7-37)和GLP-1(7-37)类似物各自可任选地被酰胺化。
本发明的物质组合物中的GLP-1受体激动剂还可在一个或多个氨基酸残基处经已知有机化学技术化学衍生化。“化学衍生物”或“化学衍生化”是指一个或多个残基通过官能侧基反应进行化学衍生化的主题肽。此类衍生化分子包括例如游离氨基经衍生化以形成胺盐酸盐、对甲苯磺酰基、苯甲氧羰基、第三丁氧羰基、氯乙酰基或甲酰基的分子。游离羧基可以经衍生化以形成盐、甲酯和乙酯或其他类型的酯或酰肼。游离羟基可以经衍生化以形成O-酰基或O-烷基衍生物。组氨酸的咪唑氮可以经衍生化以形成N-im-苯甲基组氨酸。还包括含有二十个经典氨基酸(无论是L-形式抑或D-形式)的一个或多个天然存在的氨基酸衍生物的肽作为化学衍生物。例如，4-羟基脯氨酸可以取代脯氨酸；5-羟基赖氨酸可以取代赖氨酸；3-甲基组氨酸可以取代组氨酸；高丝氨酸可以取代丝氨酸；且鸟氨酸可以取代赖氨酸。
在一些实施例中，有用的衍生化包括肽的氨基末端经化学阻断以防止在N-末端游离氨基处发生与媒剂的偶联的衍生化。此类修饰还可存在其他有益作用，例如降低毒素肽类似物对酶蛋白水解的敏感性。N-末端可以经酰基化或修饰成为经取代胺，或经另一官能基，例如芳族部分(例如吲哚酸、苄基(Bzl或Bn)、二苄基(DiBzl或Bn2)或苯甲氧羰基(Cbz或Z))、N，N-二甲基甘氨酸或肌氨酸衍生化。例如，在一些实施例中，酰基部分，例如但不限于甲酰基、乙酰基(Ac)、丙酰基、丁基、庚基、己酰基、辛酰基或壬酰基，可以共价连接至肽的N-末端，由此可以防止在媒剂与肽偶联期间发生不想要的副反应。其他例示性N-末端衍生物基团包括-NRR1(不为-NH2)、-NRC(O)R1、-NRC(O)OR1、-NRS(O)2R1、-NHC(O)NHR1、琥珀酰亚胺或苄氧基羰基-NH-(Cbz-NH-)，其中R和R1各自独立地为氢或低碳数烷基，且其中苯环可以被1至3个选自C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、氯和溴的取代基取代。
在一些实施例中，氨基酸残基之间的一个或多个肽基[-C(O)NR-]键联(肽键)可以经非肽基键联置换。例示性非肽基键联为-CH2-胺基甲酸酯[-CH2-OC(O)NR-]、膦酸酯、-CH2-磺酰胺[-CH2-S(O)2NR-]、脲[-NHC(O)NH-]、-CH2-第二胺和烷基化肽[-C(O)NR6-，其中R6是低碳数烷基]。
在一些实施例中，一个或多个个别氨基酸残基可经衍生化。已知各种衍生化试剂与所选侧链或末端残基特异性反应，如以下举例详述。
离胺酰基残基和氨基末端残基可以与琥珀酸酐或其他羧酸酐反应，由此逆转离胺酰基残基的电荷。用于使含α-氨基的残基衍生化的其他合适试剂包括酰亚胺酯，例如甲基吡啶亚胺甲酯；磷酸吡哆醛；吡哆醛；氯代硼氢化物；三硝基苯磺酸；O-甲基异脲；2，4-戊二酮；和转胺酶催化的与乙醛酸的反应。
精胺酰基残基可以通过与若干常规试剂中的任一种或组合反应进行修饰，这些试剂包括苯甲酰甲醛、2，3-丁二酮、1，2-环己二酮和茚三酮。使精胺酰基残基衍生化需要反应在碱性条件下进行，因为胍官能基的pKa较高。此外，这些试剂可以与赖氨酸的基团以及精氨酸ε-氨基反应。
已对酪胺酰基残基的特定修饰进行深入研究，其中特别值得关注的是，通过与芳族重氮鎓化合物或四硝基甲烷反应将光谱标记引入酪胺酰基残基中。最常见的是，使用N-乙酰咪唑和四硝基甲烷分别形成O-乙酰基酪胺酰基物种和3-硝基衍生物。
羧基侧链基团(天冬胺酰基或麸胺酰基)可以通过与碳化二亚胺(R′-N＝C＝N-R′)，例如1-环己基-3-(2-吗啉基-(4-乙基)碳化二亚胺或1-乙基-3-(4-氮杂鎓-4，4-二甲基戊基)碳化二亚胺反应进行选择性修饰。此外，天冬胺酰基和麸胺酰基可以通过与铵离子反应而转化成天冬酰胺酰基和麸酰胺酰基残基。
麸酰胺酰和天冬酰胺酰基残基可以脱酰胺基，得到相应的麸胺酰基和天冬胺酰基残基。可替代地，这些残基在弱酸性条件下脱酰胺。这些残基的任一形式均在本发明的范围内。
半胱氨酰基残基可以经氨基酸残基或其他部分置换以消除二硫键或相反，使交联稳定。(参见例如，Bhatnagar等人，J.Med.Chem.[医药化学杂志]，39：3814-3819(1996))。
其他可能的修饰包括脯氨酸和赖氨酸的羟基化；丝胺酰基或苏胺酰基残基的羟基的磷酸化；Cys中硫原子的氧化；赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链的α-氨基的甲基化。Creighton，Proteins：Structure and Molecule Properties[蛋白质：结构和分子特性](W.H.弗里曼公司(W.H.Freeman&Co.)，日金山)，79-86(1983)。
预期以上衍生化实例并非详尽处理，而仅为说明性的。
在一个实施例中，GLP-1(7-37)或GLP-1(7-37)类似物共价连接(直接或通过连接基团)至免疫球蛋白(例如IgG、IgE、IgG和类似物)的Fc部分。例如，SEQ ID NO：25-40中的任一个可以共价连接至包含以下序列的免疫球蛋白的Fc部分：AESKYGPPCPPCPAPXaa16Xaa17Xaa18GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFXaa80STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGXaa230；其中Xaa16是P或E；Xaa17是F、V或A；Xaa18是L、E或A；Xaa80是N或A；且Xaa230是K或不存在(SEQ IDNO：3203)。该连接基团可以为任何化学部分(例如氨基酸和/或化学基团)。在一个实施例中，连接基团是(-GGGGS-)x(SEQ ID NO：3204)，其中x是1、2、3、4、5或6；优选地为2、3或4；更优选地为3。在一个实施例中，共价连接至免疫球蛋白Fc部分的GLP-1(7-37)类似物包含氨基酸序列：HGEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKGGGGGGGSGGGGSGGGGSAESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG(SEQ ID NO：3205)。
在另一个实施例中，GLP-1(7-37)或GLP-1(7-37)类似物可以共价连接(直接或经由连接基团)至一个或两个聚乙二醇分子。例如，GLP-1(7-37)类似物可以包含氨基酸序列：HXaa8EGTFTSDVSSYLEXaa22QAAKEFIAWLXaa33KGGPSSGAPPPC45C46-Z，其中Xaa8是D-Ala、G、V、L、I、S或T；Xaa22是G、E、D或K；Xaa33是V或I；且Z是O或NH2(SEQ ID NO：3206)，且任选地，其中(i)一个聚乙二醇部分共价连接至C45，(ii)一个聚乙二醇部分共价连接至C46，或(iii)一个聚乙二醇部分连接至C45且一个聚乙二醇部分连接至C46。在一个实施例中，GLP-1(7-37)类似物是HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFI AWLIKGGPSSGAPPPC45C46-NH2(SEQ ID NO：3207)，且任选地，其中(i)一个聚乙二醇部分共价连接至C4，(ii)一个聚乙二醇部分共价连接至C46，或(iii)一个聚乙二醇部分连接至C45且一个聚乙二醇部分连接至C46。
可以提供一级胺部分进行偶联的GLP-1受体激动剂氨基酸残基包括赖氨酸、高赖氨酸、鸟氨酸、α，β-二氨基丙酸(Dap)、α，β-二氨基丙酮酸(α，β-diaminopropionoic acid，Dpr)和α，γ-二氨基丁酸(Dab)、氨基丁酸(Abu)和α-氨基-异丁酸(Aib)残基。多肽N-末端还提供与酰胺化多肽C-末端同样适用于偶联的α-氨基。在某些实施例中，该GLP-1(7-37)或GLP-1(7-37)类似物在对应于该类似物以下位置的残基处偶联至抗体或其片段：K26(SEQID NO：3184的20位)、K34(SEQ ID NO：3184的28位)、K36(SEQ ID NO：3184的30位；例如经由R36K突变)、K37(SEQ ID NO：3184的31位；例如经由G37K突变)、K39(例如，经由添加两个氨基酸至在39位具有赖氨酸的GLP-1(7-37)或GLP-1(7-37)类似物)或C-末端氨基。可以提供二级胺部分的氨基酸残基包括ε-N-烷基赖氨酸、α-N-烷基赖氨酸、δ-N-烷基鸟氨酸、α-N-烷基鸟氨酸或N-末端脯氨酸，其中烷基是C1至C6。
如本文所使用，“接头部分”是指共价结合至本发明组合物中所含毒素肽类似物或其他多肽链(例如免疫球蛋白HC或LC或者免疫球蛋白Fc结构域)的氨基酸残基的生物学上可接受的肽基或非肽基有机基团，该接头部分将该毒素肽类似物或其他多肽链共价接合或偶联至该组合物中的另一肽或多肽链，或半衰期延长部分。在该组合物的一些实施例中，如本文所描述的半衰期延长部分是偶联，还即直接共价结合至毒素肽类似物本身，或任选地直接共价结合至与该毒素肽类似物的氨基酸残基共价结合的肽基或非肽基接头部分(包括但不限于，芳族或芳基接头)。任何接头部分的存在均为可选的。当存在时，其化学结构并不重要，因为其主要用作间隔子以定位、接合、校正或优化一个官能部分相对于本发明组合物中的分子的一个或多个其他官能部分的表示或位置。接头部分的存在可用于优化本发明组合物的一些实施例的药理学活性。该接头当存在时，可以由经肽键连接在一起的氨基酸构成。接头部分当存在时，可以独立地与本发明组合物中可能存在的任何其他接头相同或不同。在一些实施例中，该接头可以为有助于多价展示本发明的毒素肽类似物的多价接头；此类生物活性化合物的多价展示可以增加接合亲和力和/或经由亲合力实现的效力。治疗剂的体内特性可以经由偶联至聚合物或蛋白质而变化(即，特异性靶向、半衰期延长、分配型态等)。
肽基接头.如上文所述，接头部分当存在时(无论是在毒素肽类似物的一级氨基酸序列内，抑或作为接头用于将半衰期延长部分连接至毒素肽类似物)，实质上均可为“肽基”(即，由经肽键连接在一起的氨基酸构成)且优选地由1至约40个氨基酸残基，更优选地由1至约20个氨基酸残基且最优选地由1至约10个氨基酸残基长度构成。优选地但非必需地，该接头中的氨基酸残基是来自该二十个经典氨基酸，更佳来自半胱氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和/或丝氨酸。甚至更优选地，肽基接头是主要由经肽键连接的无空间位阻的氨基酸(例如甘氨酸、丝氨酸和丙氨酸)构成。如果存在，还需要选择肽基接头，以避免在体内循环中快速蛋白水解转换。本领域技术人员应充分了解，这些氨基酸中有一些可以被糖基化。例如，构成唾液酸化位点的有用接头序列是X1X2NX4X5G(SEQ ID NO：3250)，其中X1、X2、X4和X5各自独立地为任何氨基酸残基。
在其他实施例中，肽基接头部分中的1至40个氨基酸选自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和赖氨酸。优选地，接头主要由无空间位阻的氨基酸(例如甘氨酸和丙氨酸)构成。因此，优选的接头包括聚甘氨酸、聚丝氨酸和聚丙氨酸，或其中任一种的组合。一些例示性肽基接头是聚(Gly)1-8，尤其是(Gly)3(SEQ ID NO：3251)、(Gly)4(SEQ ID NO：480)、(Gly)5(SEQ ID NO：3251)和(Gly)7(SEQ ID NO：3252)，以及GlySer和聚(Gly)4Ser，例如“L15”(GGGGSGGGGSGGGGS；SEQ ID NO：3253)、聚(Gly-Ala)2-4和聚(Ala)1-8。肽基接头的其他具体实例包括(Gly)5Lys(SEQ ID NO：3254)和(Gly)5LysArg(SEQ ID NO：3255)。有用肽基接头的其他实例为：有用肽基接头的其他实例为：
(Gly)3Lys(Gly)4(SEQ ID NO：3256)；
(Gly)3AsnGlySer(Gly)2(SEQ ID NO：3257)；
(Gly)3Cys(Gly)4(SEQ ID NO：3258)；和
GlyProAsnGlyGly(SEQ ID NO：3259)。
为了解释以上命名法，例如，(Gly)3Lys(Gly)4意指Gly-Gly-Gly-Lys-Gly-Gly-Gly-Gly(SEQ ID NO：3260)。Gly和Ala的其他组合也可是有用的。
其他优选接头是在本文中标识为“L5”(GGGGS；或“G4S”；SEQ ID NO：3261)、“L10”(GGGGSGGGGS；SEQ ID NO：3262)；“L20”(GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS；SEQ ID NO：3263)；“L25”(GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS；SEQ ID NO：3264)的接头以及下文操作实例中使用的任何接头。
在包含肽接头部分的本发明组合物的一些实施例中，酸性残基(例如谷氨酸或天冬氨酸残基)被放置在该接头部分的氨基酸序列中。实例包括以下肽接头序列：
WWEEEWW(SEQ ID NO：3278)；或
在其他实施例中，接头构成磷酸化位点，例如X1X2YX4X5G(SEQ ID NO：3280)，其中X1、X2、X4和X5各自独立地为任何氨基酸残基；X1X2SX4X5G(SEQ ID NO：3281)，其中X1、X2、X4和X5各自独立地为任何氨基酸残基；或X1X2TX4X5G(SEQ ID NO：3282)，其中X1、X2、X4和X5各自独立地为任何氨基酸残基。
此处显示的接头是例示性的；在本发明的范围内的肽基接头可能更长且可能包括其他残基。肽基接头可以含有例如半胱氨酸、另一硫醇或亲核试剂以与半衰期延长部分偶联。在另一个实施例中，接头含有半胱氨酸或高半胱氨酸残基，或其他2-氨基-乙硫醇或3-氨基-丙硫醇部分以偶联至马来酰亚胺、碘代乙酰胺或硫酯，即官能化半衰期延长部分。
另一有用的肽基接头是包含随机Gly/Ser/Thr序列，例如：GSGSATGGSGSTASSGSGSATH(SEQ ID NO：3283)或HGSGSATGGSGSTASSGSGSAT(SEQ ID NO：3284)的较大柔性接头，估计该接头为约1kDa PEG分子的大小。可替代地，有用肽基接头可以包含本领域中已知的形成刚性螺旋结构的氨基酸序列(例如刚性接头：-AEAAAKEAAAKEAAAKAGG-//SEQ ID NO：3285)。另外，肽基接头还可包含非肽基区段，例如具有式-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-的6碳脂族分子。这些肽基接头可以经改变以形成如本文所描述的衍生物。
非肽基接头.任选地，非肽基接头部分还可用于将半衰期延长部分偶联至半衰期延长部分偶联的毒素肽类似物的肽部分。例如，可以使用烷基接头，例如-NH-(CH2)s-C(O)-，其中s＝2-20。这些烷基接头可以进一步经任何无空间位阻的基团，例如低碳数烷基(例如C1-C6)低碳数酰基、卤素(例如Cl、Br)、CN、NH2、苯基等取代。例示性非肽基接头为PEG接头(例如，显示于下)：
其中n是使得该接头的分子量为约100至约5000道尔顿(Da)，优选地为约100至约500Da。
在一个实施例中，非肽基接头是芳基。这些接头可以经改变而以与本文所描述相同的方式形成衍生物。“芳基”是苯基或与饱和、部分饱和或不饱和3元、4元或5元碳桥邻位稠合的苯基，该苯基或桥被0、1、2或3个选自C1-8烷基、C1-4卤烷基或卤基的取代基取代。“杂芳基”是不饱和5、6或7元单环，或者部分饱和或不饱和6元、7元、8元、9元、10元或11元双环，其中至少一个环是不饱和的，这些单环和双环含有1、2、3或4个选自N、O和S的原子，其中该环被0、1、2或3个选自C1-8烷基、C1-4卤烷基和卤基的取代基取代。
本发明物质组合物的非肽部分，例如非肽基接头或非肽半衰期延长部分可以通过常规有机化学反应合成。
多价接头的其他实施例包含长度受控的刚性聚杂环核心。这些接头在任一端上经化学分化以适应邻位偶合化学(即，叠氮化物“点击(Click)”、酰胺偶合、通过经马来酰亚胺或卤代乙酰胺烷基化来形成硫醚、肟形成、还原胺化等)。
以上仅为说明性的且并非对可以任选地根据本发明使用的接头类别的详尽处理。
在一个实施例中，GLP-1受体激动剂化合物是与GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3184)具有至少80％序列同一性；与GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3184)具有至少85％序列同一性；与GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3184)具有至少90％序列同一性；或与GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3184)具有至少95％序列同一性的肽。
GLP-1受体激动剂化合物可以通过本领域中熟知的技术制备，例如，如Eng等人，J.Biol.Chem.[生物化学杂志]，265：20259-62(1990)中所描述的肽纯化法；如Raufman等人，J.Biol.Chem.[生物化学杂志]，267：21432-37(1992)中所描述的标准固相肽合成技术；如Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual[分子克隆：实验室手册]，第2版，Cold Spring Harbor(1989)中所描述的重组DNA技术；等。
表7.GLP-1受体激动剂序列的实例
AEEA是指[2-(2-氨基)乙氧基)]乙酸。
EDA是指乙二胺。
MPA是指马来酰亚胺基丙酸。
本发明还提供包含本文所描述的GLP-1受体激动剂化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。GLP-1受体激动剂化合物能以治疗有效量存在于药物组合物中且其存在量可以提供实现治疗功效所需的最低GLP-1受体激动剂化合物血浆水平。这些药物组合物是本领域中已知的且描述于例如美国专利号7,521,423、美国专利号7,456,254；WO 2000/037098、WO 2005/021022、WO 2005/102293、WO 2006/068910、WO 2006/125763、WO 2009/068910、美国公开号2004/0106547等中，其披露内容通过引用并入本文。
含有本文所描述的GLP-1受体激动剂化合物的药物组合物可以提供用于周围给予，例如肠胃外(例如皮下、静脉内、肌肉内)、连续输注(例如静脉内滴注、静脉内推注、静脉内输注)、表面、经鼻或经口给予。合适药学上可接受的载体及其配制品描述于标准配制论著，例如Martin的Remington′s Pharmaceutical Sciences[雷明顿药物科学]；和Wang等人，Journal of Parenteral Science and Technology[肠胃外科学与技术杂志]，Technical Report[技术报告]第10号，42：2S增补版(1988)中。本文所描述的GLP-1受体激动剂化合物可以提供于供注射或输注用的肠胃外组合物中。其可以例如悬浮于水；惰性油，例如植物油(例如芝麻油、花生油、橄榄油和类似油)；或其他药学上可接受的载体中。在一个实施例中，这些化合物悬浮于水性载体，例如pH值为约3.0至8.0或为约3.0至5.0的等渗缓冲溶液中。这些组合物可以通过常规灭菌技术灭菌或可以经无菌过滤。必要时，这些组合物可以含有药学上可接受的辅助物质以接近生理条件，例如pH缓冲剂。
有用的缓冲剂包括例如乙酸缓冲剂。可以使用储存式或“储集式”缓慢释放制剂以在皮下注射、经皮注射或其他递送方法之后，经数小时或数天将治疗有效量的制剂递送至血流中。所需等渗性可以使用氯化钠或其他药学上可接受的试剂，例如右旋糖、硼酸、酒石酸钠、丙二醇、多元醇(例如甘露醇和山梨醇)或其他无机或有机溶质实现。在有关静脉内输注的一个实施例中，该配制品可以包含(i)GLP-1受体激动剂化合物，(2)无菌水，和任选地(3)氯化钠、右旋糖或其组合。
还可使用载体或赋形剂促进GLP-1受体激动剂化合物的给予。载体或赋形剂的实例包括碳酸钙；磷酸钙；各种糖，例如乳糖、葡萄糖或蔗糖；或各类淀粉；纤维素衍生物；明胶；植物油；聚乙二醇；和生理上相容的溶剂。
GLP-1受体激动剂化合物还可配制为药学上可接受的盐(例如酸加成盐)和/或其复合物的形式。药学上可接受的盐是在其给予浓度下无毒的盐。药学上可接受的盐包括酸加成盐，例如包括硫酸盐、盐酸盐、磷酸盐、氨基磺酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、甲烷磺酸盐、乙烷磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、环己基氨基磺酸盐和奎宁酸盐等的酸加成盐。药学上可接受的盐可以由例如以下酸获得：盐酸、硫酸、磷酸、氨基磺酸、乙酸、柠檬酸、乳酸、酒石酸、丙二酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、环己基氨基磺酸和奎宁酸。这些盐可以通过例如以下方式制备：使该产物的游离酸或碱形式与一个或多个当量的适当碱或酸在不可溶解该盐的溶剂或介质中反应，或在例如水的溶剂中反应，随后在真空中或通过冷冻干燥或通过在合适离子交换树脂上将现有盐的离子交换成另一离子以移除溶剂。
GLP-1受体激动剂化合物的示例性药物配制品描述于美国专利号7,521，423、美国专利号7，456,254、美国公开号2004/0106547、WO 2006/068910、WO 2006/125763等，其披露内容通过引用并入本文。
用于本文所描述的方法中的本文所描述的GLP-1受体激动剂化合物的治疗有效量典型地将为约0.01μg至约5mg；约0.1μg至约2.5mg；约1μg至约1mg；约1μg至约50μg；或约1μg至约25μg。可替代地，GLP-1受体激动剂化合物的治疗有效量基于70kg患者的体重可以为约0.001μg至约100μg；或基于70kg患者的体重为约0.01μg至约50μg。取决于配制品，这些治疗有效剂量可以一天一次、一天两次、一天三次、一周一次、两周一次或一个月一次给予。待给予的确切剂量例如由配制品决定，例如立即释放的配制品或延长释放的配制品。对于经皮、经鼻或经口剂型，剂量可以增加约5倍至约10倍。
在某些实施例中，GLP-1受体激动剂将与GIPR抗原结合蛋白同时给予。在一个实施例中，GLP-1受体激动剂将在GIPR抗原结合蛋白之后给予。在一个实施例中，GLP-1受体激动剂将在GIPR抗原结合蛋白之前给予。在某些实施例中，受试者或患者在用GIPR抗原结合蛋白进一步治疗之前已用GLP-1受体激动剂治疗。
本文所提供的GIPR抗原结合蛋白可用于检测生物样品中的GIPR。例如，GIPR抗原结合蛋白可用于诊断测定，例如结合测定中，以检测和/或定量血清中表达的GIPR。
所描述的抗原结合蛋白可以用于诊断目的以检测、诊断或监测与GIPR相关的疾病和/或病症。所披露的抗原结合蛋白提供一种使用本领域技术人员已知的经典免疫组织方法检测样品中GIPR的存在的方式(例如Tijssen，1993，Practice and Theory of EnzymeImmunoassays[酶免疫分析的实践与理论]，第15卷(R.H.Burdon和P.H.van Knippenberg编辑，Elsevier[爱思唯尔出版公司]，阿姆斯特丹)；Zola，1987，Monoclonal Antibodies：AManual of Techniques[单克隆抗体：技术手册]，第147-158页(CRC出版公司(CRC Press，Inc.))；Jalkanen等人，1985，J.Cell.Biol.[细胞生物学杂志]101：976-985；Jalkanen等人，1987，J.Cell Biol.[细胞生物学杂志]105：3087-3096)。可以在体内或体外检测GIPR。
本文所提供的诊断应用包括使用这些抗原结合蛋白检测GIPR的表达。可用于检测GIPR的存在的方法的实例包括免疫测定，例如酶连免疫吸附剂测定(ELISA)和放射免疫测定(RIA)。
对于诊断应用，该抗原结合蛋白典型地将用可检测标记基团标记。合适标记基团包括但不限于以下：放射性同位素或放射性核素(例如3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)，荧光基团(例如FITC、罗丹明、镧系元素磷光体)，酶基团(例如辣根过氧化酶、β-半乳糖苷酶、荧光素酶、碱性磷酸酶)，化学发光基团，生物素基基团，或由第二报告子识别的预定多肽表位(例如亮氨酸拉链对序列、二级抗体的结合位点、金属结合结构域、表位标签)。在一些实施例中，该标记基团经由各种长度的间隔子臂偶合至抗原结合蛋白以减小潜在空间位阻。各种用于标记蛋白质的方法是本领域已知的且均可使用。
在一些实施例中，使用本领域中已知的技术分离和测量GIPR抗原结合蛋白。参见例如，Harlow和Lane，1988，Antibodies：A Laboratory Manual[抗体：实验室手册]，纽约：Cold SpringHarbor[冷泉港出版社](1991版和定期增补版)；John E.Coligan编辑，1993，Current Protocols In Immunology[当代免疫学方案]纽约：John WiIey&Sons[约翰威利父子出版社]。
本发明的另一方面提供检测与所提供的抗原结合蛋白竞争结合至GIPR的测试分子的存在。一种此类测定的实例涉及在存在或不存在测试分子下，检测含有一定量GIPR的溶液中游离抗原结合蛋白的量。游离抗原结合蛋白(即，未结合至GIPR的抗原结合蛋白)的量增加将指示该测试分子能够与该抗原结合蛋白竞争结合GIPR。在一个实施例中，该抗原结合蛋白经标记基团标记。可替代地，该测试分子经标记且在存在或不存在抗原结合蛋白的情况下，监测游离测试分子的量。
GIPR结合蛋白可以用于治疗、诊断或改善代谢病症或紊乱。在一个实施例中，待治疗的代谢紊乱是糖尿病，例如2型糖尿病。在另一个实施例中，代谢病症或紊乱是肥胖。在其他实施例中，代谢病症或紊乱是血脂异常、葡萄糖水平升高、胰岛素水平升高或糖尿病性肾病。例如，可以使用GIPR结合肽治疗或改善的代谢病症或紊乱包括人类受试者的空腹血糖水平为125mg/dL或更高，例如130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200或超过200mg/dL。血糖含量可以在饱腹或空腹状态下测定，或随机测定。代谢病症或紊乱还可包含受试者发展代谢病症的风险较高的病症。对于人类受试者，此类病症包括空腹血糖水平为100mg/dL。可以使用包含GIPR结合蛋白的药物组合物治疗的病症还可见于American Diabetes Association Standards of Medical Care in Diabetes Care-2011[美国糖尿病协会医疗护理标准，糖尿病护理-2011]，American Diabetes Association[美国糖尿病协会]，Diabetes Care[糖尿病护理]第34卷，第1期增刊，S11-S61，2010，通过引用并入本文。
在应用中，代谢紊乱或病症，例如2型糖尿病、葡萄糖水平升高、胰岛素水平升高、血脂异常、肥胖或糖尿病性肾病，可以通过向有需要的患者给予治疗有效剂量的GIPR结合蛋白进行治疗。该给予可以如本文所描述进行，例如通过静脉内注射、腹膜内(IP)注射、皮下注射、肌肉内注射或口服锭剂或液体配制品。在一些情况下，GIPR结合蛋白的治疗有效剂量或优选剂量可以由临床医生决定。GIPR结合蛋白的治疗有效剂量将特别取决于给予时程、给予的药剂的单位剂量、GIPR结合蛋白是否与其他治疗剂组合、免疫状态和接受者的健康状况。如本文所使用，术语“治疗有效剂量”意指在组织系统、动物或人类中引起研究人员、医师或其他临床医生所希望的生物或医学反应的GIPR结合蛋白的量，该反应包括减轻或改善所治疗的疾病或病症的症状，即，支持可观察水平的一种或多种所需生物或医学反应，例如降低血糖、胰岛素、甘油三酯或胆固醇水平；减轻体重；或改善葡萄糖耐量、能量消耗或胰岛素敏感性。
应注意，GIPR结合蛋白的治疗有效剂量还可随所希望的结果而变化。因此，例如，在指示血糖含量较低的情况下，GIPR结合蛋白的剂量将相应地高于需要相对较低血糖含量的剂量。相反，在指示血糖含量较高的情况下，GIPR结合蛋白的剂量将相应地低于需要相对较高血糖含量的剂量。
在各种实施例中，受试者是血糖含量为100mg/dL或更高的可以用GIPR结合蛋白治疗的人类。
在一个实施例中，本发明的方法包括先测量受试者体内例如葡萄糖、胰岛素、胆固醇、脂质的一种或多种代谢相关化合物的基线水平。接着向该受试者给予包含GIPR结合蛋白的药物组合物。在所需时间段后，再次测量受试者体内该一种或多种代谢相关化合物(例如血糖、胰岛素、胆固醇、脂质)的含量。接着，可以比较这两种含量以便确定受试者体内代谢相关化合物的相对变化。取决于该比较的结果，可以给予另一剂量的包含GIPR结合蛋白的药物组合物以达到一种或多种代谢相关化合物的所希望的水平。
应注意，包含GIPR结合蛋白的药物组合物可以与另一化合物共给予。与GIPR结合蛋白共给予的化合物的属性和特性将取决于待治疗或改善的病症的性质。可以与包含GIPR结合蛋白的医药组成物组合给予的化合物的实例的非限制性列表包括罗格列酮(rosiglitizone)、匹格列酮(pioglitizone)、瑞格列奈(repaglinide)、那格列奈(nateglitinide)、二甲双胍(metformin)、艾塞那肽、西格列汀(stiagliptin)、普兰林肽(pramlintide)、格列吡嗪(glipizide)、格列美脲阿卡波糖(glimeprirideacarbose)和米格列醇(miglitol)。
还提供用于实行所披露的方法的试剂盒。这些试剂盒可以包括含编码本文所提供的肽或蛋白质的核酸、含这些核酸的载体和细胞的药物组合物，例如本文所描述的药物组合物；以及包含这些含核酸化合物的药物组合物，这些药物组合物可以提供于无菌容器中。任选地，还可包括有关如何使用所提供的药物组合物治疗代谢紊乱的说明书，或供患者或医疗服务提供商使用。
在一个方面，试剂盒包含(a)含有治疗有效量的GIPR结合蛋白的药物组合物；和(b)该药物组合物的一个或多个容器。此类试剂盒还可包含有关其使用的说明书；这些说明书可以针对所治疗的精确代谢紊乱定制。这些说明书可以描述试剂盒中所提供的材料的使用和性质。在某些实施例中，试剂盒包括有关患者进行给予以治疗代谢紊乱，例如葡萄糖水平升高、胰岛素水平升高、肥胖、2型糖尿病、血脂异常或糖尿病性肾病的说明书。
说明书可以印刷于基底，例如纸或塑料等上，且可以作为包装插页、该试剂盒的容器的标签中或其组分(例如与包装相联)等存在于试剂盒中。在其他实施例中，说明书是以呈现于例如CD-ROM、磁盘等合适计算机可读存储媒体上的电子存储数据文件形式存在。在又其他实施例中，实际说明书不存在于试剂盒中，而是提供自远程源(例如经因特网)获得说明书的方式。该实施例的实例是包括网址的试剂盒，在该网址中，可以观看该说明书和/或可以下载说明书。
一个试剂盒的一些或全部组分包装在合适包装中以维持无菌性通常是合乎需要的。试剂盒各组分可以包装在试剂盒封闭元件中以形成单一、易于处理的单元，其中该试剂盒封闭元件(例如盒或类似结构)可以为或可以不为气密性容器，例如以进一步保持该试剂盒的一些或全部组分的无菌性。
实例1
产生双半胱胺封端的抗GIPR cvs mAb(2g规模)
用于产生抗GIPR/GLP-1偶联物的反应流程显示于图1中。将具有特定半胱氨酸突变的抗GIPR单克隆抗体(抗GIPR cys mAb，2g)与2.5mM胱胺和2.5mM半胱胺于40mM HEPES缓冲液pH 7.5-8.5中的800mL溶液一起孵育15-20小时。使用0.22μm过滤器过滤反应混合物，并在1200mL的100mM乙酸钠缓冲液pH 5中稀释。使用阳离子交换色谱法自反应混合物中纯化出双半胱胺封端的抗GIPR cys mAb。首先，将在100mM乙酸钠缓冲液pH 5中稀释的2L反应混合物以20mL/min装载至240mL SP HP柱上。用2柱体积的100mM乙酸钠pH5，随后0-20％梯度的含1.2M NaCl的100mM乙酸钠pH 5洗涤柱。收集含有双半胱胺封端的抗GIPR cys mAb的主峰且使用切向流过滤法将缓冲液交换成含9％蔗糖的10mM乙酸钠pH 5.2。
实例2
产生抗GIPR/GLP-1肽偶联物
在室温下，使用3-4当量的三(2-羧基乙基)膦(TCEP)部分还原双半胱胺封端的抗GIPR cys mAb(6mg/mL于含9％蔗糖的10mM乙酸钠中)，保持60-90分钟。移除TCEP，且将部分还原的cys mAb缓冲液交换成含2mM乙二胺四乙酸(EDTA)的50mM磷酸钠缓冲液pH 7.5。向部分还原的cys mAb中添加6-10当量的脱氢抗坏血酸(DHAA)，且在室温下进行氧化直至仅观察到痕量的部分还原的mAb物种(30-120分钟)。不移除dhAA，将3-8当量的溴代乙酰基-GLP-1肽添加至反应混合物中并在室温下孵育15-20小时。移除所有试剂，且使用旋转浓缩或切向流过滤将抗GIPR/GLP-1肽偶联物产物缓冲液交换成最终配制品。
实例3
体外和体内测定方法
GLP-1受体激动剂活性
在均相时间解析荧光(HTRF)测定(CISBIO，目录号62AM4PEJ)中使用稳定表达单独人类GLP-1R或GLP-1R与GIPR(M1)的CHOK1细胞测量肽/偶联物诱导的cAMP产生。在37℃下，将连续稀释的肽/偶联物(3x 10-7M-3x 10-14M)与40,000个细胞一起在测定缓冲液(0.1％BSA、500μM IBMX于F12培养基中)中培养15分钟。接着，用含有cAMP-d2和cAMP穴状物(CISBIO)的溶解缓冲液溶解细胞，并在室温下培养1小时，随后在Evision板读取器(铂金埃尔默公司(PerkinElmer))中测量。cAMP水平表示为665/620nm的荧光度比率且显示于图2A-2E和图3中。
实例4
GIPR拮抗剂活性
在HTRF测定(Cisbio，目录号62AM4PEJ)中，使用稳定表达人类GIPR的HEK293T细胞测量肽/偶联物诱导的cAMP产生。在37℃下，将连续稀释的偶联物或GIPR抗体(3x 10-6M-1x10-11M)与30,000个细胞一起在测定缓冲液(0.1％BSA、500μM IBMX于F12培养基中)中培养30分钟，随后用最终浓度为0.05nM的GIP处理。在37℃下将细胞培养30分钟，且接着，在室温下，在含有cAMP-d2和cAMP穴状物(CISBIO)的溶解缓冲液溶解1小时。在Evision板读取器(铂金埃尔默公司)中测量荧光度且cAMP水平表示为665/620nm的比率且显示于图2A-2E和图中。
实例5
用于双特异性小鼠的体内材料和方法
主要选择糖尿病小鼠，针对双特异性分子的GLP-1活性进行筛选。分子是基于其在注射后不同时间点降低血糖含量的潜力进行选择。此外，如图4A-4I中所示，还自各自共给予或自该双特异性分子测量体重减轻或体重增加抑制来指示GLP-1活性、GIPR抑制或二者的组合。自杰克逊实验室(Jackson Laboratories)(巴尔港(Bar Harbor)，缅因州(ME))获得雄性db/db小鼠(#642)且在8-9周龄时移交。在到达后，将小鼠以每笼四只分组圈养且维持于具有12小时亮(6：30AM-6：30PM)和暗循环(6：30PM-6：30AM)的控制环境条件中。给小鼠饲喂标准啮齿动物饲料(2020x Harlan Teklad)，并使其自由取用饮用水。
在其他研究中，使用葡萄糖耐测量试对GLP-1类似物的效力分级(图5A-5C)。使C57Bl6小鼠适应环境条件一至两周。在给药前，处理小鼠并获得体重测量值。在给药前一天，使用设计用于啮齿动物血浆的手持式血糖仪自有意识小鼠的眶后窦抽血以测量血糖。给药当天，获得基线血糖和体重测量值。使用血糖和体重的笼平均值将各笼分入治疗组。将小鼠维持在其饲养笼中。在给予测试物后，在各种时间点，在(1、3和6小时)或(4小时)测量血糖且之后每24小时取得血糖和体重测量值。测量血糖直至含量返回至接近基线水平且取得体重测量值直至体重增加速率类似于媒剂治疗的对照组。
还使用饮食诱导的肥胖小鼠(DIO)作为模型测量用不同分子治疗的体重减轻作用，如图6中所示。
自哈伦实验室(Harlan Laboratories)获得雄性c57bl6小鼠且在26天大时移交。将小鼠以每笼二至四只同窝小鼠分组圈养。适应环境一周后，小鼠开始高脂肪饮食饲喂方案(HFD：D12492，膳食研究公司(Research Diets)，新不伦瑞克(New Brunswick)，新泽西州(NJ))或继续标准啮齿动物饲料(2020x，哈伦实验室)。饲喂后12周，使单一圈养的小鼠适应常规处理、食物摄入测量和每日生理食盐水注射(IP)。自有意识DIO小鼠的眶后窦收集血液。将少量血液立即放在设计用于啮齿动物血浆的手持式血糖仪上且其余血液放在填有EDTA且含蛋白酶抑制剂混合液(罗氏诊断剂公司(Roche Diagnostics)，印第安纳波利斯(Indianapolis)，印第安纳州(IN))的收集管中。离心后，将血浆储存于-80℃。基于体重和血糖测量值将小鼠分入治疗组中。将小鼠用媒剂(Q3D)、GIPR Ab(2.5或10mg/kg，Q3D)、GLP-1肽(0.06mg/kg，QD)、度拉糖肽(1mg/kg，Q3D)或双特异性偶联物(2.5或10mg/kg，Q3D)治疗。另2组小鼠接受上述剂量和剂量频率的GLP-1与GIPR Ab的组合治疗(GIPR 2.5mg/kg+GLP-1肽和GIPR 2.5mg/kg+度拉糖肽)。除给予GLP-1肽的组外，所有其他小鼠在不给予其对应测试物时均注射生理食盐水。每天测量体重且对三天内的累积食物摄入量求平均值得到每天食物摄入量值。在研究第0天至第3天和第6天至第9天之间测量食物摄入量。在研究第9天，注射后1小时收集血液，且在研究第12天，前一测试物注射后1或3天，收集末梢血液。
用小鼠ELISA试剂盒，遵循制造商的说明书(ALPCO公司，塞勒姆(Salem)，新罕布什尔州(NH))测量血浆胰岛素。使用Olympus Au400e化学分析仪(美国奥林巴斯公司(OlympusAmerica)，森特瓦利(Center Valley)，宾夕法尼亚州(PA))测量血糖、胆固醇、甘油三酯、非酯化脂肪酸、AST和ALT。
实例6
用于双特异性食蟹猴的体内材料和方法
在研究开始前，使原生雄性自发肥胖食蟹猴(9-14岁)适应实验程序/针对实验程序进行训练，且将其分选至7个治疗组中，其中每组n＝10只猴，且各组中所有分选参数(体重和血液化学)均具有相同分布。接着，一周一次向猴注射媒剂或GLP-1R-GIPR偶联物(1264、1273、1248或1257)，持续6周。在6周治疗期后，猴经历4周洗脱期。在研究的训练/治疗/洗脱期间，每天监测总能量摄入；每周或隔周监测体重、血液化学和药物暴露情况，如图7-21中所示。
实例7
GIP和GLP-1放射性配体竞争结合测定的材料和方法
由过度表达hu GIPR和hu GLP-1R的哺乳动物细胞系制备膜且典型地储存于-80℃的测定缓冲液中：50mM HEPES(7.4)、5mM MgCl2、1mM CaCl2、0.2％BSA和蛋白酶抑制剂片剂“无EDTA”。未标记的GIP和GLP-1肽是自菲尼克斯药品公司(Phoenix Pharmaceuticals)获得且放射性标记的125I-GIP和125I-GLP-1是自铂金埃尔默公司订购。在96孔圆底细胞培养盘(科斯塔公司(Costar))中，在振荡下，在室温下进行主要反应2小时。细胞膜浓度固定在0.6mg/mL且所用放射性配体的浓度为0.1nM。一式两份，滴定六种浓度的测试物。两小时后，使用Filtermate收集器(铂金埃尔默公司)，用冰冷的50mM TRIS(pH 7.4)收集主要盘且将细胞膜捕捉于PEI处理的GF/C UniFilter板(铂金埃尔默公司)上。使用真空烘箱干燥盘15分钟，且向各孔中添加Microscint20，随后在Perkin Elmer TopCount NXT HTS仪器中计数。通过获取总计数与非特异性计数的差值来确定特异性结合。非特异性孔含有1μM冷配体。使用GraphPad Prism 7分析数据并作图，如图22中所示。
实例8
内化测定
在表达人GLP-1R和GIPR两者的CHOK1细胞中评估GLP-1R和GIPR内化。将细胞以25,000个细胞/孔的密度铺板在96孔板中，并在37℃、5％CO2下培养过夜。在处理之前，将细胞在含有0.1％BSA的F12培养基(赛默飞世尔公司(Thermo Fisher))中进行血清饥饿4小时。用20nM或剂量滴定的GLP-1、GIP或双特异性偶联物处理细胞30分钟或各图中的指定时间。洗涤细胞并用4％甲醛固定，并用0.1％曲通-X 100透化。为了检测GIPR或GLP-1R，首先在室温下用Odyssey封闭缓冲液(LiCor公司)封闭细胞1小时，并与2μg/ml小鼠抗人GLP-1R(R&D系统公司(R&D systems))或5μg/ml抗人GIPR抗体(R&D系统公司)在4℃一起孵育过夜，然后与AlexaFluor-555或Alexa-Fluor 647缀合的抗小鼠二级抗体(赛默飞世尔公司)一起孵育，以分别进行GLP-1R或GIPR检测。使用Operetta高内涵成像系统(铂金埃尔默公司)捕获图像(图23)，并使用Harmony软件(铂金埃尔默公司)进行分析以定量作为内化程度的读数参数的细胞内GLP-1R含量(总斑点面积)(图24)。
实例9
GLP-1R、GIPR和双特异性偶联物在内化时共定位
将表达GIPR和SNAP-GLP-1R的U2OS细胞以每孔15,000个细胞的密度铺板在96孔板中，并在37℃下在5％CO2下培养过夜。在处理之前，将细胞在含有0.1％BSA的McCoy’s 5A培养基(赛默飞世尔公司)中进行饥饿3.5小时。在处理之前，通过用SNAP-表面Alexa-fluor564底物(新英格兰实验室(New England Biolabs))孵育30分钟，用Alexa-Fluor 564标记U2OS细胞表面上的GLP-1R。然后洗涤细胞以除去过量的标记，并用5nM双特异性偶联物处理30分钟。洗涤3次后，用4％甲醛固定细胞，并用PBS中的0.1％曲通-X 100透化。对于GIPR检测，首先在室温下将细胞用Odyssey封闭缓冲液(LiCor公司)处理1小时，然后与5μg/ml小鼠抗人GIPR(R&d系统公司)在4℃下一起孵育过夜，然后与Alexa-Fluor647偶联的抗小鼠二级抗体(赛默飞世尔公司)在室温下一起孵育1小时。使用Alexa-Fluor标记的抗人Fc抗体检测双特异性偶联物。将Hoechst 33342(赛默飞世尔公司)用于细胞核检测。使用Operetta CLS高内涵成像系统(铂金埃尔默公司)捕获图像，如图25所示。
实例10
GloSensor cAMP测定
根据制造商的方案(普洛麦格公司(Promega))进行GloSensor cAMP测定。简言之，将ChoK1人GLP-1R/GIPR表达细胞以每孔15,000个细胞接种在96孔板中，并在潮湿的37℃、5％CO2培养箱中孵育16小时。使用FuGENE Hd，将细胞用100ng pGloSensor-22F cAMP质粒瞬时转染24小时。然后在室温下将细胞用在CO2非依赖性培养基(英杰公司)中的0.1％BSA、2％GloSensor cAMP试剂平衡2小时。将细胞与或不与0.43M蔗糖(西格玛公司)一起预孵育15分钟。在有或没有蔗糖的条件下加入1248之前，进行基础发光测量持续10分钟。在加入1248后立即使用每60秒0.1-1秒的积分时间测量动力学发光。使用GraphPad Prism软件分析数据并显示在图26中。
实例11
FACS分析
将CHOK1-GLP-1R H20、293T-GIPR克隆10和CHOK1-GLP-1R/GIPR细胞以1x106个细胞的密度悬浮于100ul的含有1％FBS、0.05％叠氮化钠的F12测定培养基中，并与10ug/ml的指定抗体或抗GIPR/GLP-1R双特异性偶联物在4℃下一起孵育1小时。将细胞用测定缓冲液洗涤一次，然后与10ug/ml的Alexa Fluor 647-山羊抗人Fc(杰克逊公司(Jackson))在4℃下一起孵育30分钟。使用BD LSR II流式细胞仪(BD生物科学公司)测量荧光并显示在图27中。
实例12
钙通量测定
将表达GIPR和GLP-1-R的CHOK1细胞以每孔30,000个细胞的密度铺板在96孔黑色透明底板中，并在37℃下在5％CO2下培养过夜。将细胞在含有20mM HEPES的F12培养基(赛默飞世尔公司)中进行血清饥饿2小时。然后将细胞加载含有钙敏感染料(BD生物科学公司)的缓冲液，并在室温下孵育1小时，然后用剂量滴定的GLP-1或双特异性偶联物处理。使用FLIPR(分子仪器公司(Molecular Devices))监测细胞内钙含量的变化。记录每个孔中的代表钙流入的最大峰高度，如图28所示。
实例13
β-抑制蛋白测定
将来自DiscoverX公司的、表达ProLinkTM标记的GLP-1R和GIPR的CHOK1Pathhunter细胞分别用未标记的GIPR或GLP-1R转染。将细胞以每孔20,000个细胞的密度铺板在测定培养基(F12/0.1％BSA)中，并在37℃下孵育过夜。用剂量滴定的GLP-1、GIP或双特异性偶联物处理细胞90分钟。然后将工作检测溶液(DiscoverX公司)加入细胞中并在室温下在黑暗中孵育60分钟。使用Envision测量代表β-抑制蛋白募集的化学发光信号，并显示在图29中。
实例14
人胰岛微组织葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)测定
96孔格式的人胰岛微组织购自InSphero公司。将微组织在InSphero测定培养基中孵育16小时。然后将它们用含2.8mM葡萄糖的新鲜KREBS缓冲液(129mM NaCl，4.8mM KCl，1.2mM KH2PO4，1.2mM MgSO4-7H2O，10mM HEPES，1.3mM CaCl2，0.5％BSA，pH 7.4)处理1小时。在2次KREBS缓冲液洗涤后，将它们与单独的KREBS缓冲液、含有或不含有GLP-1的KREBS缓冲液中的2.8mM或11mM葡萄糖(菲尼克斯药品公司)以及1248的剂量响应一起孵育16小时。收集上清液并根据制造商的方案(Mercodia公司)分析胰岛素分泌。在TECAN读板仪上读取450nm处的光密度，并显示在图30中。

Claims (21)

1.一种组合物，其包含
a)特异性结合人类GIPR的抗体或其功能片段，其中
该抗体或其功能片段在一个或多个偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代；和
b)GLP-1受体激动剂，其中该GLP-1受体激动剂经由在该一个或多个偶联位点处取代的半胱氨酸残基或非经典氨基酸残基的侧链偶联至该抗体或其功能片段。
2.如权利要求1所述的组合物，其中所述人类GIPR具有以下序列，该序列包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO：3141、SEQ ID NO：3143和SEQ ID NO：3145。
3.如权利要求1或2所述的组合物，其中所述抗体或其功能片段是单克隆抗体、重组抗体、人类抗体、人源化抗体、嵌合抗体、多特异性抗体、或其抗体片段。
4.如权利要求3所述的组合物，其中所述抗体片段是Fab片段、Fab′片段或F(ab′)2片段。
5.如权利要求3所述的组合物，其中所述抗体或其功能片段是人类抗体。
6.如权利要求3所述的组合物，其中所述抗体或其功能片段是单克隆抗体。
7.如权利要求3所述的组合物，其中所述抗体或其功能片段属于IgG1、IgG2、IgG3或IgG4类型。
8.如权利要求7所述的组合物，其中所述抗体或其功能片段属于IgG1或IgG2类型。
9.如权利要求3所述的组合物，其中所述抗体或其功能片段抑制GIP与人类GIPR的细胞外部分的结合。
10.如权利要求3所述的组合物，其中所述抗体包含CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中所述CDRL1包含选自由SEQ ID NO：629-785组成的组的序列；所述CDRL2包含选自由SEQ ID NO：786-942组成的组的序列；所述CDRL3包含选自由SEQ ID NO：943-1099组成的组的序列；所述CDRH1包含选自由SEQ ID NO：1100-1256组成的组的序列；所述CDRH2包含选自由SEQ ID NO：1257-1413组成的组的序列；且所述CDRH3包含选自由SEQ ID NO：1414-1570组成的组的序列，其中
该抗体或其功能片段在一个或多个选自由以下组成的组的偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代
相对于参考序列SEQ ID NO：455，该抗体轻链的D70，
相对于参考序列SEQ ID NO：612，该抗体重链的E276，以及
相对于参考序列SEQ ID NO：612，该抗体重链的T363。
11.如权利要求3所述的组合物，其中所述抗体包含CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2和CDRH3，其中CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2和CDRH3各自分别包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO：629、SEQ ID NO：786、SEQ ID NO：943、SEQ ID NO：1100、SEQ ID NO：1257和SEQ ID NO：1414；SEQ ID NO：630、SEQ ID NO：787、SEQ ID NO：944、SEQ ID NO：1101、SEQ ID NO：1258和SEQ ID NO：1415；SEQ ID NO：631、SEQ ID NO：788、SEQ ID NO：945、SEQ ID NO：1102、SEQ ID NO：1259和SEQ ID NO：1416；SEQ ID NO：632、SEQ ID NO：789、SEQ ID NO：946、SEQ ID NO：1103、SEQ ID NO：1260和SEQ ID NO：1417；SEQ ID NO：633、SEQ ID NO：790、SEQ ID NO：947、SEQ ID NO：1104、SEQ ID NO：1261和SEQ ID NO：1418；SEQ ID NO：634、SEQ ID NO：791、SEQ ID NO：948、SEQ ID NO：1105、SEQ ID NO：1262和SEQ ID NO：1419；SEQ ID NO：635、SEQ ID NO：792、SEQ ID NO：949、SEQ ID NO：1106、SEQID NO：1263和SEQ ID NO：1420；SEQ ID NO：636、SEQ ID NO：793、SEQ ID NO：950、SEQ IDNO：1107、SEQ ID NO：1264和SEQ ID NO：1421；SEQ ID NO：637、SEQ ID NO：794、SEQ ID NO：951、SEQ ID NO：1108、SEQ ID NO：1265和SEQ ID NO：1422；SEQ ID NO：638、SEQ ID NO：795、SEQ ID NO：952、SEQ ID NO：1109、SEQ ID NO：1266和SEQ ID NO：1423；SEQ ID NO：639、SEQ ID NO：796、SEQ ID NO：953、SEQ ID NO：1110、SEQ ID NO：1267和SEQ ID NO：1424；SEQ ID NO：640、SEQ ID NO：797、SEQ ID NO：954、SEQ ID NO：1111、SEQ ID NO：1268和SEQ ID NO：1425；SEQ ID NO：641、SEQ ID NO：798、SEQ ID NO：955、SEQ ID NO：1112、SEQID NO：1269和SEQ ID NO：1426；SEQ ID NO：642、SEQ ID NO：799、SEQ ID NO：956、SEQ IDNO：1113、SEQ ID NO：1270和SEQ ID NO：1427；SEQ ID NO：643、SEQ ID NO：800、SEQ ID NO：957、SEQ ID NO：1114、SEQ ID NO：1271和SEQ ID NO：1428；SEQ ID NO：644、SEQ ID NO：801、SEQ ID NO：958、SEQ ID NO：1115、SEQ ID NO：1272和SEQ ID NO：1429；SEQ ID NO：645、SEQ ID NO：802、SEQ ID NO：959、SEQ ID NO：1116、SEQ ID NO：1273和SEQ ID NO：1430；SEQ ID NO：646、SEQ ID NO：803、SEQ ID NO：960、SEQ ID NO：1117、SEQ ID NO：1274和SEQ ID NO：1431；SEQ ID NO：647、SEQ ID NO：804、SEQ ID NO：961、SEQ ID NO：1118、SEQID NO：1275和SEQ ID NO：1432；SEQ ID NO：648、SEQ ID NO：805、SEQ ID NO：962、SEQ IDNO：1119、SEQ ID NO：1276和SEQ ID NO：1433；SEQ ID NO：649、SEQ ID NO：806、SEQ ID NO：963、SEQ ID NO：1120、SEQ ID NO：1277和SEQ ID NO：1434；SEQ ID NO：650、SEQ ID NO：807、SEQ ID NO：964、SEQ ID NO：1121、SEQ ID NO：1278和SEQ ID NO：1435；SEQ ID NO：651、SEQ ID NO：808、SEQ ID NO：965、SEQ ID NO：1122、SEQ ID NO：1279和SEQ ID NO：1436；SEQ ID NO：652、SEQ ID NO：809、SEQ ID NO：966、SEQ ID NO：1123、SEQ ID NO：1280和SEQ ID NO：1437；SEQ ID NO：653、SEQ ID NO：810、SEQ ID NO：967、SEQ ID NO：1124、SEQID NO：1281和SEQ ID NO：1438；SEQ ID NO：654、SEQ ID NO：811、SEQ ID NO：968、SEQ IDNO：1125、SEQ ID NO：1282和SEQ ID NO：1439；SEQ ID NO：655、SEQ ID NO：812、SEQ ID NO：969、SEQ ID NO：1126、SEQ ID NO：1283和SEQ ID NO：1440；SEQ ID NO：656、SEQ ID NO：813、SEQ ID NO：970、SEQ ID NO：1127、SEQ ID NO：1284和SEQ ID NO：1441；SEQ ID NO：657、SEQ ID NO：814、SEQ ID NO：971、SEQ ID NO：1128、SEQ ID NO：1285和SEQ ID NO：1442；SEQ ID NO：658、SEQ ID NO：815、SEQ ID NO：972、SEQ ID NO：1129、SEQ ID NO：1286和SEQ ID NO：1443；SEQ ID NO：659、SEQ ID NO：816、SEQ ID NO：973、SEQ ID NO：1130、SEQID NO：1287和SEQ ID NO：1444；SEQ ID NO：660、SEQ ID NO：817、SEQ ID NO：974、SEQ IDNO：1131、SEQ ID NO：1288和SEQ ID NO：1445；SEQ ID NO：661、SEQ ID NO：818、SEQ ID NO：975、SEQ ID NO：1132、SEQ ID NO：1289和SEQ ID NO：1446；SEQ ID NO：662、SEQ ID NO：819、SEQ ID NO：976、SEQ ID NO：1133、SEQ ID NO：1290和SEQ ID NO：1447；SEQ ID NO：663、SEQ ID NO：820、SEQ ID NO：977、SEQ ID NO：1134、SEQ ID NO：1291和SEQ ID NO：1448；SEQ ID NO：664、SEQ ID NO：821、SEQ ID NO：978、SEQ ID NO：1135、SEQ ID NO：1292和SEQ ID NO：1449；SEQ ID NO：665、SEQ ID NO：822、SEQ ID NO：979、SEQ ID NO：1136、SEQID NO：1293和SEQ ID NO：1450；SEQ ID NO：666、SEQ ID NO：823、SEQ ID NO：980、SEQ IDNO：1137、SEQ ID NO：1294和SEQ ID NO：1451；SEQ ID NO：667、SEQ ID NO：824、SEQ ID NO：981、SEQ ID NO：1138、SEQ ID NO：1295和SEQ ID NO：1452；SEQ ID NO：668、SEQ ID NO：825、SEQ ID NO：982、SEQ ID NO：1139、SEQ ID NO：1296和SEQ ID NO：1453；SEQ ID NO：669、SEQ ID NO：826、SEQ ID NO：983、SEQ ID NO：1140、SEQ ID NO：1297和SEQ ID NO：1454；SEQ ID NO：670、SEQ ID NO：827、SEQ ID NO：984、SEQ ID NO：1141、SEQ ID NO：1298和SEQ ID NO：1455；SEQ ID NO：671、SEQ ID NO：828、SEQ ID NO：985、SEQ ID NO：1142、SEQID NO：1299和SEQ ID NO：1456；SEQ ID NO：672、SEQ ID NO：829、SEQ ID NO：986、SEQ IDNO：1143、SEQ ID NO：1300和SEQ ID NO：1457；SEQ ID NO：673、SEQ ID NO：830、SEQ ID NO：987、SEQ ID NO：1144、SEQ ID NO：1301和SEQ ID NO：1458；SEQ ID NO：674、SEQ ID NO：831、SEQ ID NO：988、SEQ ID NO：1145、SEQ ID NO：1302和SEQ ID NO：1459；SEQ ID NO：675、SEQ ID NO：832、SEQ ID NO：989、SEQ ID NO：1146、SEQ ID NO：1303和SEQ ID NO：1460；SEQ ID NO：676、SEQ ID NO：833、SEQ ID NO：990、SEQ ID NO：1147、SEQ ID NO：1304和SEQ ID NO：1461；SEQ ID NO：677、SEQ ID NO：834、SEQ ID NO：991、SEQ ID NO：1148、SEQID NO：1305和SEQ ID NO：1462；SEQ ID NO：678、SEQ ID NO：835、SEQ ID NO：992、SEQ IDNO：1149、SEQ ID NO：1306和SEQ ID NO：1463；SEQ ID NO：679、SEQ ID NO：836、SEQ ID NO：993、SEQ ID NO：1150、SEQ ID NO：1307和SEQ ID NO：1464；SEQ ID NO：680、SEQ ID NO：837、SEQ ID NO：994、SEQ ID NO：1151、SEQ ID NO：1308和SEQ ID NO：1465；SEQ ID NO：681、SEQ ID NO：838、SEQ ID NO：995、SEQ ID NO：1152、SEQ ID NO：1309和SEQ ID NO：1466；SEQ ID NO：682、SEQ ID NO：839、SEQ ID NO：996、SEQ ID NO：1153、SEQ ID NO：1310和SEQ ID NO：1467；SEQ ID NO：683、SEQ ID NO：840、SEQ ID NO：997、SEQ ID NO：1154、SEQID NO：1311和SEQ ID NO：1468；SEQ ID NO：684、SEQ ID NO：841、SEQ ID NO：998、SEQ IDNO：1155、SEQ ID NO：1312和SEQ ID NO：1469；SEQ ID NO：685、SEQ ID NO：842、SEQ ID NO：999、SEQ ID NO：1156、SEQ ID NO：1313和SEQ ID NO：1470；SEQ ID NO：686、SEQ ID NO：843、SEQ ID NO：1000、SEQ ID NO：1157、SEQ ID NO：1314和SEQ ID NO：1471；SEQ ID NO：687、SEQ ID NO：844、SEQ ID NO：1001、SEQ ID NO：1158、SEQ ID NO：1315和SEQ ID NO：1472；SEQ ID NO：688、SEQ ID NO：845、SEQ ID NO：1002、SEQ ID NO：1159、SEQ ID NO：1316和SEQ ID NO：1473；SEQ ID NO：689、SEQ ID NO：846、SEQ ID NO：1003、SEQ ID NO：1160、SEQ ID NO：1317和SEQ ID NO：1474；SEQ ID NO：690、SEQ ID NO：847、SEQ ID NO：1004、SEQID NO：1161、SEQ ID NO：1318和SEQ ID NO：1475；SEQ ID NO：691、SEQ ID NO：848、SEQ IDNO：1005、SEQ ID NO：1162、SEQ ID NO：1319和SEQ ID NO：1476；SEQ ID NO：692、SEQ IDNO：849、SEQ ID NO：1006、SEQ ID NO：1163、SEQ ID NO：1320和SEQ ID NO：1477；SEQ IDNO：693、SEQ ID NO：850、SEQ ID NO：1007、SEQ ID NO：1164、SEQ ID NO：1321和SEQ ID NO：1478；SEQ ID NO：694、SEQ ID NO：851、SEQ ID NO：1008、SEQ ID NO：1165、SEQ ID NO：1322和SEQ ID NO：1479；SEQ ID NO：695、SEQ ID NO：852、SEQ ID NO：1009、SEQ ID NO：1166、SEQ ID NO：1323和SEQ ID NO：1480；SEQ ID NO：696、SEQ ID NO：853、SEQ ID NO：1010、SEQID NO：1167、SEQ ID NO：1324和SEQ ID NO：1481；SEQ ID NO：697、SEQ ID NO：854、SEQ IDNO：1011、SEQ ID NO：1168、SEQ ID NO：1325和SEQ ID NO：1482；SEQ ID NO：698、SEQ IDNO：855、SEQ ID NO：1012、SEQ ID NO：1169、SEQ ID NO：1326和SEQ ID NO：1483；SEQ IDNO：699、SEQ ID NO：856、SEQ ID NO：1013、SEQ ID NO：1170、SEQ ID NO：1327和SEQ ID NO：1484；SEQ ID NO：700、SEQ ID NO：857、SEQ ID NO：1014、SEQ ID NO：1171、SEQ ID NO：1328和SEQ ID NO：1485；SEQ ID NO：701、SEQ ID NO：858、SEQ ID NO：1015、SEQ ID NO：1172、SEQ ID NO：1329和SEQ ID NO：1486；SEQ ID NO：702、SEQ ID NO：859、SEQ ID NO：1016、SEQID NO：1173、SEQ ID NO：1330和SEQ ID NO：1487；SEQ ID NO：703、SEQ ID NO：860、SEQ IDNO：1017、SEQ ID NO：1174、SEQ ID NO：1331和SEQ ID NO：1488；SEQ ID NO：704、SEQ IDNO：861、SEQ ID NO：1018、SEQ ID NO：1175、SEQ ID NO：1332和SEQ ID NO：1489；SEQ IDNO：705、SEQ ID NO：862、SEQ ID NO：1019、SEQ ID NO：1176、SEQ ID NO：1333和SEQ ID NO：1490；SEQ ID NO：706、SEQ ID NO：863、SEQ ID NO：1020、SEQ ID NO：1177、SEQ ID NO：1334和SEQ ID NO：1491；SEQ ID NO：707、SEQ ID NO：864、SEQ ID NO：1021、SEQ ID NO：1178、SEQ ID NO：1335和SEQ ID NO：1492；SEQ ID NO：708、SEQ ID NO：865、SEQ ID NO：1022、SEQID NO：1179、SEQ ID NO：1336和SEQ ID NO：1493；SEQ ID NO：709、SEQ ID NO：866、SEQ IDNO：1023、SEQ ID NO：1180、SEQ ID NO：1337和SEQ ID NO：1494；SEQ ID NO：710、SEQ IDNO：867、SEQ ID NO：1024、SEQ ID NO：1181、SEQ ID NO：1338和SEQ ID NO：1495；SEQ IDNO：711、SEQ ID NO：868、SEQ ID NO：1025、SEQ ID NO：1182、SEQ ID NO：1339和SEQ ID NO：1496；SEQ ID NO：712、SEQ ID NO：869、SEQ ID NO：1026、SEQ ID NO：1183、SEQ ID NO：1340和SEQ ID NO：1497；SEQ ID NO：713、SEQ ID NO：870、SEQ ID NO：1027、SEQ ID NO：1184、SEQ ID NO：1341和SEQ ID NO：1498；SEQ ID NO：714、SEQ ID NO：871、SEQ ID NO：1028、SEQID NO：1185、SEQ ID NO：1342和SEQ ID NO：1499；SEQ ID NO：715、SEQ ID NO：872、SEQ IDNO：1029、SEQ ID NO：1186、SEQ ID NO：1343和SEQ ID NO：1500；SEQ ID NO：716、SEQ IDNO：873、SEQ ID NO：1030、SEQ ID NO：1187、SEQ ID NO：1344和SEQ ID NO：1501；SEQ IDNO：717、SEQ ID NO：874、SEQ ID NO：1031、SEQ ID NO：1188、SEQ ID NO：1345和SEQ ID NO：1502；SEQ ID NO：718、SEQ ID NO：875、SEQ ID NO：1032、SEQ ID NO：1189、SEQ ID NO：1346和SEQ ID NO：1503；SEQ ID NO：719、SEQ ID NO：876、SEQ ID NO：1033、SEQ ID NO：1190、SEQ ID NO：1347和SEQ ID NO：1504；SEQ ID NO：720、SEQ ID NO：877、SEQ ID NO：1034、SEQID NO：1191、SEQ ID NO：1348和SEQ ID NO：1505；SEQ ID NO：721、SEQ ID NO：878、SEQ IDNO：1035、SEQ ID NO：1192、SEQ ID NO：1349和SEQ ID NO：1506；SEQ ID NO：722、SEQ IDNO：879、SEQ ID NO：1036、SEQ ID NO：1193、SEQ ID NO：1350和SEQ ID NO：1507；SEQ IDNO：723、SEQ ID NO：880、SEQ ID NO：1037、SEQ ID NO：1194、SEQ ID NO：1351和SEQ ID NO：1508；SEQ ID NO：724、SEQ ID NO：881、SEQ ID NO：1038、SEQ ID NO：1195、SEQ ID NO：1352和SEQ ID NO：1509；SEQ ID NO：725、SEQ ID NO：882、SEQ ID NO：1039、SEQ ID NO：1196、SEQ ID NO：1353和SEQ ID NO：1510；SEQ ID NO：726、SEQ ID NO：883、SEQ ID NO：1040、SEQID NO：1197、SEQ ID NO：1354和SEQ ID NO：1511；SEQ ID NO：727、SEQ ID NO：884、SEQ IDNO：1041、SEQ ID NO：1198、SEQ ID NO：1355和SEQ ID NO：1512；SEQ ID NO：728、SEQ IDNO：885、SEQ ID NO：1042、SEQ ID NO：1199、SEQ ID NO：1356和SEQ ID NO：1513；SEQ IDNO：729、SEQ ID NO：886、SEQ ID NO：1043、SEQ ID NO：1200、SEQ ID NO：1357和SEQ ID NO：1514；SEQ ID NO：730、SEQ ID NO：887、SEQ ID NO：1044、SEQ ID NO：1201、SEQ ID NO：1358和SEQ ID NO：1515；SEQ ID NO：731、SEQ ID NO：888、SEQ ID NO：1045、SEQ ID NO：1202、SEQ ID NO：1359和SEQ ID NO：1516；SEQ ID NO：732、SEQ ID NO：889、SEQ ID NO：1046、SEQID NO：1203、SEQ ID NO：1360和SEQ ID NO：1517；SEQ ID NO：733、SEQ ID NO：890、SEQ IDNO：1047、SEQ ID NO：1204、SEQ ID NO：1361和SEQ ID NO：1518；SEQ ID NO：734、SEQ IDNO：891、SEQ ID NO：1048、SEQ ID NO：1205、SEQ ID NO：1362和SEQ ID NO：1519；SEQ IDNO：735、SEQ ID NO：892、SEQ ID NO：1049、SEQ ID NO：1206、SEQ ID NO：1363和SEQ ID NO：1520；SEQ ID NO：736、SEQ ID NO：893、SEQ ID NO：1050、SEQ ID NO：1207、SEQ ID NO：1364和SEQ ID NO：1521；SEQ ID NO：737、SEQ ID NO：894、SEQ ID NO：1051、SEQ ID NO：1208、SEQ ID NO：1365和SEQ ID NO：1522；SEQ ID NO：738、SEQ ID NO：895、SEQ ID NO：1052、SEQID NO：1209、SEQ ID NO：1366和SEQ ID NO：1523；SEQ ID NO：739、SEQ ID NO：896、SEQ IDNO：1053、SEQ ID NO：1210、SEQ ID NO：1367和SEQ ID NO：1524；SEQ ID NO：740、SEQ IDNO：897、SEQ ID NO：1054、SEQ ID NO：1211、SEQ ID NO：1368和SEQ ID NO：1525；SEQ IDNO：741、SEQ ID NO：898、SEQ ID NO：1055、SEQ ID NO：1212、SEQ ID NO：1369和SEQ ID NO：1526；SEQ ID NO：742、SEQ ID NO：899、SEQ ID NO：1056、SEQ ID NO：1213、SEQ ID NO：1370和SEQ ID NO：1527；SEQ ID NO：743、SEQ ID NO：900、SEQ ID NO：1057、SEQ ID NO：1214、SEQ ID NO：1371和SEQ ID NO：1528；SEQ ID NO：744、SEQ ID NO：901、SEQ ID NO：1058、SEQID NO：1215、SEQ ID NO：1372和SEQ ID NO：1529；SEQ ID NO：745、SEQ ID NO：902、SEQ IDNO：1059、SEQ ID NO：1216、SEQ ID NO：1373和SEQ ID NO：1530；SEQ ID NO：746、SEQ IDNO：903、SEQ ID NO：1060、SEQ ID NO：1217、SEQ ID NO：1374和SEQ ID NO：1531；SEQ IDNO：747、SEQ ID NO：904、SEQ ID NO：1061、SEQ ID NO：1218、SEQ ID NO：1375和SEQ ID NO：1532；SEQ ID NO：748、SEQ ID NO：905、SEQ ID NO：1062、SEQ ID NO：1219、SEQ ID NO：1376和SEQ ID NO：1533；SEQ ID NO：749、SEQ ID NO：906、SEQ ID NO：1063、SEQ ID NO：1220、SEQ ID NO：1377和SEQ ID NO：1534；SEQ ID NO：750、SEQ ID NO：907、SEQ ID NO：1064、SEQID NO：1221、SEQ ID NO：1378和SEQ ID NO：1535；SEQ ID NO：751、SEQ ID NO：908、SEQ IDNO：1065、SEQ ID NO：1222、SEQ ID NO：1379和SEQ ID NO：1536；SEQ ID NO：752、SEQ IDNO：909、SEQ ID NO：1066、SEQ ID NO：1223、SEQ ID NO：1380和SEQ ID NO：1537；SEQ IDNO：753、SEQ ID NO：910、SEQ ID NO：1067、SEQ ID NO：1224、SEQ ID NO：1381和SEQ ID NO：1538；SEQ ID NO：754、SEQ ID NO：911、SEQ ID NO：1068、SEQ ID NO：1225、SEQ ID NO：1382和SEQ ID NO：1539；SEQ ID NO：755、SEQ ID NO：912、SEQ ID NO：1069、SEQ ID NO：1226、SEQ ID NO：1383和SEQ ID NO：1540；SEQ ID NO：756、SEQ ID NO：913、SEQ ID NO：1070、SEQID NO：1227、SEQ ID NO：1384和SEQ ID NO：1541；SEQ ID NO：757、SEQ ID NO：914、SEQ IDNO：1071、SEQ ID NO：1228、SEQ ID NO：1385和SEQ ID NO：1542；SEQ ID NO：758、SEQ IDNO：915、SEQ ID NO：1072、SEQ ID NO：1229、SEQ ID NO：1386和SEQ ID NO：1543；SEQ IDNO：759、SEQ ID NO：916、SEQ ID NO：1073、SEQ ID NO：1230、SEQ ID NO：1387和SEQ ID NO：1544；SEQ ID NO：760、SEQ ID NO：917、SEQ ID NO：1074、SEQ ID NO：1231、SEQ ID NO：1388和SEQ ID NO：1545；SEQ ID NO：761、SEQ ID NO：918、SEQ ID NO：1075、SEQ ID NO：1232、SEQ ID NO：1389和SEQ ID NO：1546；SEQ ID NO：762、SEQ ID NO：919、SEQ ID NO：1076、SEQID NO：1233、SEQ ID NO：1390和SEQ ID NO：1547；SEQ ID NO：763、SEQ ID NO：920、SEQ IDNO：1077、SEQ ID NO：1234、SEQ ID NO：1391和SEQ ID NO：1548；SEQ ID NO：764、SEQ IDNO：921、SEQ ID NO：1078、SEQ ID NO：1235、SEQ ID NO：1392和SEQ ID NO：1549；SEQ IDNO：765、SEQ ID NO：922、SEQ ID NO：1079、SEQ ID NO：1236、SEQ ID NO：1393和SEQ ID NO：1550；SEQ ID NO：766、SEQ ID NO：923、SEQ ID NO：1080、SEQ ID NO：1237、SEQ ID NO：1394和SEQ ID NO：1551；SEQ ID NO：767、SEQ ID NO：924、SEQ ID NO：1081、SEQ ID NO：1238、SEQ ID NO：1395和SEQ ID NO：1552；SEQ ID NO：768、SEQ ID NO：925、SEQ ID NO：1082、SEQID NO：1239、SEQ ID NO：1396和SEQ ID NO：1553；SEQ ID NO：769、SEQ ID NO：926、SEQ IDNO：1083、SEQ ID NO：1240、SEQ ID NO：1397和SEQ ID NO：1554；SEQ ID NO：770、SEQ IDNO：927、SEQ ID NO：1084、SEQ ID NO：1241、SEQ ID NO：1398和SEQ ID NO：1555；SEQ IDNO：771、SEQ ID NO：928、SEQ ID NO：1085、SEQ ID NO：1242、SEQ ID NO：1399和SEQ ID NO：1556；SEQ ID NO：772、SEQ ID NO：929、SEQ ID NO：1086、SEQ ID NO：1243、SEQ ID NO：1400和SEQ ID NO：1557；SEQ ID NO：773、SEQ ID NO：930、SEQ ID NO：1087、SEQ ID NO：1244、SEQ ID NO：1401和SEQ ID NO：1558；SEQ ID NO：774、SEQ ID NO：931、SEQ ID NO：1088、SEQID NO：1245、SEQ ID NO：1402和SEQ ID NO：1559；SEQ ID NO：775、SEQ ID NO：932、SEQ IDNO：1089、SEQ ID NO：1246、SEQ ID NO：1403和SEQ ID NO：1560；SEQ ID NO：776、SEQ IDNO：933、SEQ ID NO：1090、SEQ ID NO：1247、SEQ ID NO：1404和SEQ ID NO：1561；SEQ IDNO：777、SEQ ID NO：934、SEQ ID NO：1091、SEQ ID NO：1248、SEQ ID NO：1405和SEQ ID NO：1562；SEQ ID NO：778、SEQ ID NO：935、SEQ ID NO：1092、SEQ ID NO：1249、SEQ ID NO：1406和SEQ ID NO：1563；SEQ ID NO：779、SEQ ID NO：936、SEQ ID NO：1093、SEQ ID NO：1250、SEQ ID NO：1407和SEQ ID NO：1564；SEQ ID NO：780、SEQ ID NO：937、SEQ ID NO：1094、SEQID NO：1251、SEQ ID NO：1408和SEQ ID NO：1565；SEQ ID NO：781、SEQ ID NO：938、SEQ IDNO：1095、SEQ ID NO：1252、SEQ ID NO：1409和SEQ ID NO：1566；SEQ ID NO：782、SEQ IDNO：939、SEQ ID NO：1096、SEQ ID NO：1253、SEQ ID NO：1410和SEQ ID NO：1567；SEQ IDNO：783、SEQ ID NO：940、SEQ ID NO：1097、SEQ ID NO：1254、SEQ ID NO：1411和SEQ ID NO：1568；SEQ ID NO：784、SEQ ID NO：941、SEQ ID NO：1098、SEQ ID NO：1255、SEQ ID NO：1412和SEQ ID NO：1569；以及SEQ ID NO：785、SEQ ID NO：942、SEQ ID NO：1099、SEQ ID NO：1256、SEQ ID NO：1413和SEQ ID NO：1570，其中
该抗体或其功能片段在一个或多个选自由以下组成的组的偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代
相对于参考序列SEQ ID NO：455，该抗体轻链的D70，
相对于参考序列SEQ ID NO：612，该抗体重链的E276，以及
相对于参考序列SEQ ID NO：612，该抗体重链的T363。
12.如权利要求3所述的组合物，其中所述抗体或其功能片段是抗体或其片段，且其中所述抗体或其片段包括包含选自由SEQ ID NO：1-157组成的组的序列的轻链可变区和包含选自由SEQ ID NO：158-314组成的组的序列的重链可变区，其中
该抗体或其功能片段在一个或多个选自由以下组成的组的偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代
相对于参考序列SEQ ID NO：455，该抗体轻链的D70，
相对于参考序列SEQ ID NO：612，该抗体重链的E276，以及
相对于参考序列SEQ ID NO：612，该抗体重链的T363。
13.如权利要求3所述的组合物，其中所述抗体或其功能片段是抗体或其片段，且其中所述抗体或其片段包含选自由以下组成的组的轻链可变区与重链可变区的组合：包含SEQID NO：1的轻链可变区和包含SEQ ID NO：158的重链可变区；包含SEQ ID NO：2的轻链可变区和包含SEQ ID NO：159的重链可变区；包含SEQ ID NO：3的轻链可变区和包含SEQ ID NO：160的重链可变区；包含SEQ ID NO：4的轻链可变区和包含SEQ ID NO：161的重链可变区；包含SEQ ID NO：5的轻链可变区和包含SEQ ID NO：162的重链可变区；包含SEQ ID NO：6的轻链可变区和包含SEQ ID NO：163的重链可变区；包含SEQ ID NO：7的轻链可变区和包含SEQID NO：164的重链可变区；包含SEQ ID NO：8的轻链可变区和包含SEQ ID NO：165的重链可变区；包含SEQ ID NO：9的轻链可变区和包含SEQ ID NO：166的重链可变区；包含SEQ IDNO：10的轻链可变区和包含SEQ ID NO：167的重链可变区；包含SEQ ID NO：11的轻链可变区和包含SEQ ID NO：168的重链可变区；包含SEQ ID NO：12的轻链可变区和包含SEQ ID NO：169的重链可变区；包含SEQ ID NO：13的轻链可变区和包含SEQ ID NO：170的重链可变区；包含SEQ ID NO：14的轻链可变区和包含SEQ ID NO：171的重链可变区；包含SEQ ID NO：15的轻链可变区和包含SEQ ID NO：172的重链可变区；包含SEQ ID NO：16的轻链可变区和包含SEQ ID NO：173的重链可变区；包含SEQ ID NO：17的轻链可变区和包含SEQ ID NO：174的重链可变区；包含SEQ ID NO：18的轻链可变区和包含SEQ ID NO：175的重链可变区；包含SEQ ID NO：19的轻链可变区和包含SEQ ID NO：176的重链可变区；包含SEQ ID NO：20的轻链可变区和包含SEQ ID NO：177的重链可变区；包含SEQ ID NO：21的轻链可变区和包含SEQID NO：178的重链可变区；包含SEQ ID NO：22的轻链可变区和包含SEQ ID NO：179的重链可变区；包含SEQ ID NO：23的轻链可变区和包含SEQ ID NO：180的重链可变区；包含SEQ IDNO：24的轻链可变区和包含SEQ ID NO：181的重链可变区；包含SEQ ID NO：25的轻链可变区和包含SEQ ID NO：182的重链可变区；包含SEQ ID NO：26的轻链可变区和包含SEQ ID NO：183的重链可变区；包含SEQ ID NO：27的轻链可变区和包含SEQ ID NO：184的重链可变区；包含SEQ ID NO：28的轻链可变区和包含SEQ ID NO：185的重链可变区；包含SEQ ID NO：29的轻链可变区和包含SEQ ID NO：186的重链可变区；包含SEQ ID NO：30的轻链可变区和包含SEQ ID NO：187的重链可变区；包含SEQ ID NO：31的轻链可变区和包含SEQ ID NO：188的重链可变区；包含SEQ ID NO：32的轻链可变区和包含SEQ ID NO：189的重链可变区；包含SEQ ID NO：33的轻链可变区和包含SEQ ID NO：190的重链可变区；包含SEQ ID NO：34的轻链可变区和包含SEQ ID NO：191的重链可变区；包含SEQ ID NO：35的轻链可变区和包含SEQID NO：192的重链可变区；包含SEQ ID NO：36的轻链可变区和包含SEQ ID NO：193的重链可变区；包含SEQ ID NO：37的轻链可变区和包含SEQ ID NO：194的重链可变区；包含SEQ IDNO：38的轻链可变区和包含SEQ ID NO：195的重链可变区；包含SEQ ID NO：39的轻链可变区和包含SEQ ID NO：196的重链可变区；包含SEQ ID NO：40的轻链可变区和包含SEQ ID NO：197的重链可变区；包含SEQ ID NO：41的轻链可变区和包含SEQ ID NO：198的重链可变区；包含SEQ ID NO：42的轻链可变区和包含SEQ ID NO：199的重链可变区；包含SEQ ID NO：43的轻链可变区和包含SEQ ID NO：200的重链可变区；包含SEQ ID NO：44的轻链可变区和包含SEQ ID NO：201的重链可变区；包含SEQ ID NO：45的轻链可变区和包含SEQ ID NO：202的重链可变区；包含SEQ ID NO：46的轻链可变区和包含SEQ ID NO：203的重链可变区；包含SEQ ID NO：47的轻链可变区和包含SEQ ID NO：204的重链可变区；包含SEQ ID NO：48的轻链可变区和包含SEQ ID NO：205的重链可变区；包含SEQ ID NO：49的轻链可变区和包含SEQID NO：206的重链可变区；包含SEQ ID NO：50的轻链可变区和包含SEQ ID NO：207的重链可变区；包含SEQ ID NO：51的轻链可变区和包含SEQ ID NO：208的重链可变区；包含SEQ IDNO：52的轻链可变区和包含SEQ ID NO：209的重链可变区；包含SEQ ID NO：53的轻链可变区和包含SEQ ID NO：210的重链可变区；包含SEQ ID NO：54的轻链可变区和包含SEQ ID NO：211的重链可变区；包含SEQ ID NO：55的轻链可变区和包含SEQ ID NO：212的重链可变区；包含SEQ ID NO：56的轻链可变区和包含SEQ ID NO：213的重链可变区；包含SEQ ID NO：57的轻链可变区和包含SEQ ID NO：214的重链可变区；包含SEQ ID NO：58的轻链可变区和包含SEQ ID NO：215的重链可变区；包含SEQ ID NO：59的轻链可变区和包含SEQ ID NO：216的重链可变区；包含SEQ ID NO：60的轻链可变区和包含SEQ ID NO：217的重链可变区；包含SEQ ID NO：61的轻链可变区和包含SEQ ID NO：218的重链可变区；包含SEQ ID NO：62的轻链可变区和包含SEQ ID NO：219的重链可变区；包含SEQ ID NO：63的轻链可变区和包含SEQID NO：220的重链可变区；包含SEQ ID NO：64的轻链可变区和包含SEQ ID NO：221的重链可变区；包含SEQ ID NO：65的轻链可变区和包含SEQ ID NO：222的重链可变区；包含SEQ IDNO：66的轻链可变区和包含SEQ ID NO：223的重链可变区；包含SEQ ID NO：67的轻链可变区和包含SEQ ID NO：224的重链可变区；包含SEQ ID NO：68的轻链可变区和包含SEQ ID NO：225的重链可变区；包含SEQ ID NO：69的轻链可变区和包含SEQ ID NO：226的重链可变区；包含SEQ ID NO：70的轻链可变区和包含SEQ ID NO：227的重链可变区；包含SEQ ID NO：71的轻链可变区和包含SEQ ID NO：228的重链可变区；包含SEQ ID NO：72的轻链可变区和包含SEQ ID NO：229的重链可变区；包含SEQ ID NO：73的轻链可变区和包含SEQ ID NO：230的重链可变区；包含SEQ ID NO：74的轻链可变区和包含SEQ ID NO：231的重链可变区；包含SEQ ID NO：75的轻链可变区和包含SEQ ID NO：232的重链可变区；包含SEQ ID NO：76的轻链可变区和包含SEQ ID NO：233的重链可变区；包含SEQ ID NO：77的轻链可变区和包含SEQID NO：234的重链可变区；包含SEQ ID NO：78的轻链可变区和包含SEQ ID NO：235的重链可变区；包含SEQ ID NO：79的轻链可变区和包含SEQ ID NO：236的重链可变区；包含SEQ IDNO：80的轻链可变区和包含SEQ ID NO：237的重链可变区；包含SEQ ID NO：81的轻链可变区和包含SEQ ID NO：238的重链可变区；包含SEQ ID NO：82的轻链可变区和包含SEQ ID NO：239的重链可变区；包含SEQ ID NO：83的轻链可变区和包含SEQ ID NO：240的重链可变区；包含SEO ID NO：84的轻链可变区和包含SEQ ID NO：241的重链可变区；包含SEQ ID NO：85的轻链可变区和包含SEQ ID NO：242的重链可变区；包含SEQ ID NO：86的轻链可变区和包含SEQ ID NO：243的重链可变区；包含SEQ ID NO：87的轻链可变区和包含SEQ ID NO：244的重链可变区；包含SEQ ID NO：88的轻链可变区和包含SEQ ID NO：245的重链可变区；包含SEQ ID NO：89的轻链可变区和包含SEQ ID NO：246的重链可变区；包含SEQ ID NO：90的轻链可变区和包含SEQ ID NO：247的重链可变区；包含SEQ ID NO：91的轻链可变区和包含SEQID NO：248的重链可变区；包含SEQ ID NO：92的轻链可变区和包含SEQ ID NO：249的重链可变区；包含SEQ ID NO：93的轻链可变区和包含SEQ ID NO：250的重链可变区；包含SEQ IDNO：94的轻链可变区和包含SEQ ID NO：251的重链可变区；包含SEQ ID NO：95的轻链可变区和包含SEQ ID NO：252的重链可变区；包含SEQ ID NO：96的轻链可变区和包含SEQ ID NO：253的重链可变区；包含SEQ ID NO：97的轻链可变区和包含SEQ ID NO：254的重链可变区；包含SEQ ID NO：98的轻链可变区和包含SEQ ID NO：255的重链可变区；包含SEQ ID NO：99的轻链可变区和包含SEQ ID NO：256的重链可变区；包含SEQ ID NO：100的轻链可变区和包含SEQ ID NO：257的重链可变区；包含SEQ ID NO：101的轻链可变区和包含SEQ ID NO：258的重链可变区；包含SEQ ID NO：102的轻链可变区和包含SEQ ID NO：259的重链可变区；包含SEQ ID NO：103的轻链可变区和包含SEQ ID NO：260的重链可变区；包含SEQ ID NO：104的轻链可变区和包含SEQ ID NO：261的重链可变区；包含SEQ ID NO：105的轻链可变区和包含SEQ ID NO：262的重链可变区；包含SEQ ID NO：106的轻链可变区和包含SEQ ID NO：263的重链可变区；包含SEQ ID NO：107的轻链可变区和包含SEQ ID NO：264的重链可变区；包含SEQ ID NO：108的轻链可变区和包含SEQ ID NO：265的重链可变区；包含SEQ ID NO：109的轻链可变区和包含SEQ ID NO：266的重链可变区；包含SEQ ID NO：110的轻链可变区和包含SEQ ID NO：267的重链可变区；包含SEQ ID NO：111的轻链可变区和包含SEQ ID NO：268的重链可变区；包含SEQ ID NO：112的轻链可变区和包含SEQ ID NO：269的重链可变区；包含SEQ ID NO：113的轻链可变区和包含SEQ ID NO：270的重链可变区；包含SEQ ID NO：114的轻链可变区和包含SEQID NO：271的重链可变区；包含SEQ ID NO：115的轻链可变区和包含SEQ ID NO：272的重链可变区；包含SEQ ID NO：116的轻链可变区和包含SEQ ID NO：273的重链可变区；包含SEQ ID NO：117的轻链可变区和包含SEQ ID NO：274的重链可变区；包含SEQ ID NO：118的轻链可变区和包含SEQ ID NO：275的重链可变区；包含SEQ ID NO：119的轻链可变区和包含SEQ ID NO：276的重链可变区；包含SEQ ID NO：120的轻链可变区和包含SEQ ID NO：277的重链可变区；包含SEQ ID NO：121的轻链可变区和包含SEQ ID NO：278的重链可变区；包含SEQ ID NO：122的轻链可变区和包含SEQ ID NO：279的重链可变区；包含SEQ ID NO：123的轻链可变区和包含SEQ ID NO：280的重链可变区；包含SEQ ID NO：124的轻链可变区和包含SEQ ID NO：281的重链可变区；包含SEQ ID NO：125的轻链可变区和包含SEQ ID NO：282的重链可变区；包含SEQ ID NO：126的轻链可变区和包含SEQ ID NO：283的重链可变区；包含SEQ ID NO：127的轻链可变区和包含SEQ ID NO：284的重链可变区；包含SEQ ID NO：128的轻链可变区和包含SEQ ID NO：285的重链可变区；包含SEQ ID NO：129的轻链可变区和包含SEQ ID NO：286的重链可变区；包含SEQ ID NO：130的轻链可变区和包含SEQ ID NO：287的重链可变区；包含SEQ ID NO：131的轻链可变区和包含SEQ ID NO：288的重链可变区；包含SEQ ID NO：132的轻链可变区和包含SEQ ID NO：289的重链可变区；包含SEQ ID NO：133的轻链可变区和包含SEQ ID NO：290的重链可变区；包含SEQ ID NO：134的轻链可变区和包含SEQ ID NO：291的重链可变区；包含SEQ ID NO：135的轻链可变区和包含SEQ ID NO：292的重链可变区；包含SEQ ID NO：136的轻链可变区和包含SEQ ID NO：293的重链可变区；包含SEQ ID NO：137的轻链可变区和包含SEQ ID NO：294的重链可变区；包含SEQ ID NO：138的轻链可变区和包含SEQ ID NO：295的重链可变区；包含SEQ ID NO：139的轻链可变区和包含SEQ ID NO：296的重链可变区；包含SEQ ID NO：140的轻链可变区和包含SEQ ID NO：297的重链可变区；包含SEQ ID NO：141的轻链可变区和包含SEQ ID NO：298的重链可变区；包含SEQ ID NO：142的轻链可变区和包含SEQ ID NO：299的重链可变区；包含SEQ ID NO：143的轻链可变区和包含SEQ ID NO：300的重链可变区；包含SEQ ID NO：144的轻链可变区和包含SEQ ID NO：301的重链可变区；包含SEQ ID NO：145的轻链可变区和包含SEQ ID NO：302的重链可变区；包含SEQ ID NO：146的轻链可变区和包含SEQ ID NO：303的重链可变区；包含SEQ ID NO：147的轻链可变区和包含SEQ ID NO：304的重链可变区；包含SEQ ID NO：148的轻链可变区和包含SEQ ID NO：305的重链可变区；包含SEQ ID NO：149的轻链可变区和包含SEQ ID NO：306的重链可变区；包含SEQ ID NO：150的轻链可变区和包含SEQ ID NO：307的重链可变区；包含SEQ ID NO：151的轻链可变区和包含SEQ ID NO：308的重链可变区；包含SEQ ID NO：152的轻链可变区和包含SEQ ID NO：309的重链可变区；包含SEQID NO：153的轻链可变区和包含SEQ ID NO：310的重链可变区；包含SEQ ID NO：154的轻链可变区和包含SEQ ID NO：311的重链可变区；包含SEQ ID NO：155的轻链可变区和包含SEQ ID NO：312的重链可变区；包含SEQ ID NO：156的轻链可变区和包含SEQ ID NO：313的重链可变区；以及包含SEQ ID NO：157的轻链可变区和包含SEQ ID NO：314的重链可变区，其中
该抗体或其功能片段在一个或多个选自由以下组成的组的偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代
相对于参考序列SEQ ID NO：455，该抗体轻链的D70，
相对于参考序列SEQ ID NO：612，该抗体重链的E276，以及
相对于参考序列SEQ ID NO：612，该抗体重链的T363。
14.如权利要求3所述的组合物，其中所述抗体或其功能片段是抗体，且其中所述抗体包括包含选自由SEQ ID NO：315-471组成的组的序列的轻链和包含选自由SEQ ID NO：472-628组成的组的序列的重链，其中
该抗体或其功能片段在一个或多个选自由以下组成的组的偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代
相对于参考序列SEQ ID NO：455，该抗体轻链的D70，
相对于参考序列SEQ ID NO：612，该抗体重链的E276，以及
相对于参考序列SEQ ID NO：612，该抗体重链的T363。
15.如权利要求3所述的组合物，其中所述抗体或其功能片段是抗体，且其中所述抗体包含选自由以下组成的组的轻链与重链的组合：包含SEQ ID NO：315的轻链和包含SEQ IDNO：472的重链；包含SEQ ID NO：316的轻链和包含SEQ ID NO：473的重链；包含SEQ ID NO：317的轻链和包含SEQ ID NO：474的重链；包含SEQ ID NO：318的轻链和包含SEQ ID NO：475的重链；包含SEQ ID NO：319的轻链和包含SEQ ID NO：476的重链；包含SEQ ID NO：320的轻链和包含SEQ ID NO：477的重链；包含SEQ ID NO：321的轻链和包含SEQ ID NO：478的重链；包含SEQ ID NO：322的轻链和包含SEQ ID NO：479的重链；包含SEQ ID NO：323的轻链和包含SEQ ID NO：480的重链；包含SEQ ID NO：324的轻链和包含SEQ ID NO：481的重链；包含SEQ ID NO：325的轻链和包含SEQ ID NO：482的重链；包含SEQ ID NO：326的轻链和包含SEQID NO：483的重链；包含SEQ ID NO：327的轻链和包含SEQ ID NO：484的重链；包含SEQ IDNO：328的轻链和包含SEQ ID NO：485的重链；包含SEQ ID NO：329的轻链和包含SEQ ID NO：486的重链；包含SEQ ID NO：330的轻链和包含SEQ ID NO：487的重链；包含SEQ ID NO：331的轻链和包含SEQ ID NO：488的重链；包含SEQ ID NO：332的轻链和包含SEQ ID NO：489的重链；包含SEQ ID NO：333的轻链和包含SEQ ID NO：490的重链；包含SEQ ID NO：334的轻链和包含SEQ ID NO：491的重链；包含SEQ ID NO：335的轻链和包含SEQ ID NO：492的重链；包含SEQ ID NO：336的轻链和包含SEQ ID NO：493的重链；包含SEQ ID NO：337的轻链和包含SEQ ID NO：494的重链；包含SEQ ID NO：338的轻链和包含SEQ ID NO：495的重链；包含SEQID NO：339的轻链和包含SEQ ID NO：496的重链；包含SEQ ID NO：340的轻链和包含SEQ IDNO：497的重链；包含SEQ ID NO：341的轻链和包含SEQ ID NO：498的重链；包含SEQ ID NO：342的轻链和包含SEQ ID NO：499的重链；包含SEQ ID NO：343的轻链和包含SEQ ID NO：500的重链；包含SEQ ID NO：344的轻链和包含SEQ ID NO：501的重链；包含SEQ ID NO：345的轻链和包含SEQ ID NO：502的重链；包含SEQ ID NO：346的轻链和包含SEQ ID NO：503的重链；包含SEQ ID NO：347的轻链和包含SEQ ID NO：504的重链；包含SEQ ID NO：348的轻链和包含SEQ ID NO：505的重链；包含SEQ ID NO：349的轻链和包含SEQ ID NO：506的重链；包含SEQ ID NO：350的轻链和包含SEQ ID NO：507的重链；包含SEQ ID NO：351的轻链和包含SEQID NO：508的重链；包含SEQ ID NO：352的轻链和包含SEQ ID NO：509的重链；包含SEQ IDNO：353的轻链和包含SEQ ID NO：510的重链；包含SEQ ID NO：354的轻链和包含SEQ ID NO：511的重链；包含SEQ ID NO：355的轻链和包含SEQ ID NO：512的重链；包含SEQ ID NO：356的轻链和包含SEQ ID NO：513的重链；包含SEQ ID NO：357的轻链和包含SEQ ID NO：514的重链；包含SEQ ID NO：358的轻链和包含SEQ ID NO：515的重链；包含SEQ ID NO：359的轻链和包含SEQ ID NO：516的重链；包含SEQ ID NO：360的轻链和包含SEQ ID NO：517的重链；包含SEQ ID NO：361的轻链和包含SEQ ID NO：518的重链；包含SEQ ID NO：362的轻链和包含SEQ ID NO：519的重链；包含SEQ ID NO：363的轻链和包含SEQ ID NO：520的重链；包含SEQID NO：364的轻链和包含SEQ ID NO：521的重链；包含SEQ ID NO：365的轻链和包含SEQ IDNO：522的重链；包含SEQ ID NO：366的轻链和包含SEQ ID NO：523的重链；包含SEQ ID NO：367的轻链和包含SEQ ID NO：524的重链；包含SEQ ID NO：368的轻链和包含SEQ ID NO：525的重链；包含SEQ ID NO：369的轻链和包含SEQ ID NO：526的重链；包含SEQ ID NO：370的轻链和包含SEQ ID NO：527的重链；包含SEQ ID NO：371的轻链和包含SEQ ID NO：528的重链；包含SEQ ID NO：372的轻链和包含SEQ ID NO：529的重链；包含SEQ ID NO：373的轻链和包含SEQ ID NO：530的重链；包含SEQ ID NO：374的轻链和包含SEQ ID NO：531的重链；包含SEQ ID NO：375的轻链和包含SEQ ID NO：532的重链；包含SEQ ID NO：376的轻链和包含SEQID NO：533的重链；包含SEQ ID NO：377的轻链和包含SEQ ID NO：534的重链；包含SEQ IDNO：378的轻链和包含SEQ ID NO：535的重链；包含SEQ ID NO：379的轻链和包含SEQ ID NO：536的重链；包含SEQ ID NO：380的轻链和包含SEQ ID NO：537的重链；包含SEQ ID NO：381的轻链和包含SEQ ID NO：538的重链；包含SEQ ID NO：382的轻链和包含SEQ ID NO：539的重链；包含SEQ ID NO：383的轻链和包含SEQ ID NO：540的重链；包含SEQ ID NO：384的轻链和包含SEQ ID NO：541的重链；包含SEQ ID NO：385的轻链和包含SEQ ID NO：542的重链；包含SEQ ID NO：386的轻链和包含SEQ ID NO：543的重链；包含SEQ ID NO：387的轻链和包含SEQ ID NO：544的重链；包含SEQ ID NO：388的轻链和包含SEQ ID NO：545的重链；包含SEQID NO：389的轻链和包含SEQ ID NO：546的重链；包含SEQ ID NO：390的轻链和包含SEQ IDNO：547的重链；包含SEQ ID NO：391的轻链和包含SEQ ID NO：548的重链；包含SEQ ID NO：392的轻链和包含SEQ ID NO：549的重链；包含SEQ ID NO：393的轻链和包含SEQ ID NO：550的重链；包含SEQ ID NO：394的轻链和包含SEQ ID NO：551的重链；包含SEQ ID NO：395的轻链和包含SEQ ID NO：552的重链；包含SEQ ID NO：396的轻链和包含SEQ ID NO：553的重链；包含SEQ ID NO：397的轻链和包含SEQ ID NO：554的重链；包含SEQ ID NO：398的轻链和包含SEQ ID NO：555的重链；包含SEQ ID NO：399的轻链和包含SEQ ID NO：556的重链；包含SEQ ID NO：400的轻链和包含SEQ ID NO：557的重链；包含SEQ ID NO：401的轻链和包含SEQID NO：558的重链；包含SEQ ID NO：402的轻链和包含SEQ ID NO：559的重链；包含SEQ IDNO：403的轻链和包含SEQ ID NO：560的重链；包含SEQ ID NO：404的轻链和包含SEQ ID NO：561的重链；包含SEQ ID NO：405的轻链和包含SEQ ID NO：562的重链；包含SEQ ID NO：406的轻链和包含SEQ ID NO：563的重链；包含SEQ ID NO：407的轻链和包含SEQ ID NO：564的重链；包含SEQ ID NO：408的轻链和包含SEQ ID NO：565的重链；包含SEQ ID NO：409的轻链和包含SEQ ID NO：566的重链；包含SEQ ID NO：410的轻链和包含SEQ ID NO：567的重链；包含SEQ ID NO：411的轻链和包含SEQ ID NO：568的重链；包含SEQ ID NO：412的轻链和包含SEQ ID NO：569的重链；包含SEQ ID NO：413的轻链和包含SEQ ID NO：570的重链；包含SEQID NO：414的轻链和包含SEQ ID NO：571的重链；包含SEQ ID NO：415的轻链和包含SEQ IDNO：572的重链；包含SEQ ID NO：416的轻链和包含SEQ ID NO：573的重链；包含SEQ ID NO：417的轻链和包含SEQ ID NO：574的重链；包含SEQ ID NO：418的轻链和包含SEQ ID NO：575的重链；包含SEQ ID NO：419的轻链和包含SEQ ID NO：576的重链；包含SEQ ID NO：420的轻链和包含SEQ ID NO：577的重链；包含SEQ ID NO：421的轻链和包含SEQ ID NO：578的重链；包含SEQ ID NO：422的轻链和包含SEQ ID NO：579的重链；包含SEQ ID NO：423的轻链和包含SEQ ID NO：580的重链；包含SEQ ID NO：424的轻链和包含SEQ ID NO：581的重链；包含SEQ ID NO：425的轻链和包含SEQ ID NO：582的重链；包含SEQ ID NO：426的轻链和包含SEQID NO：583的重链；包含SEQ ID NO：427的轻链和包含SEQ ID NO：584的重链；包含SEQ IDNO：428的轻链和包含SEQ ID NO：585的重链；包含SEQ ID NO：429的轻链和包含SEQ ID NO：586的重链；包含SEQ ID NO：430的轻链和包含SEQ ID NO：587的重链；包含SEQ ID NO：431的轻链和包含SEQ ID NO：588的重链；包含SEQ ID NO：432的轻链和包含SEQ ID NO：589的重链；包含SEQ ID NO：433的轻链和包含SEQ ID NO：590的重链；包含SEQ ID NO：434的轻链和包含SEQ ID NO：591的重链；包含SEQ ID NO：435的轻链和包含SEQ ID NO：592的重链；包含SEQ ID NO：436的轻链和包含SEQ ID NO：593的重链；包含SEQ ID NO：437的轻链和包含SEQ ID NO：594的重链；包含SEQ ID NO：438的轻链和包含SEQ ID NO：595的重链；包含SEQID NO：439的轻链和包含SEQ ID NO：596的重链；包含SEQ ID NO：440的轻链和包含SEQ IDNO：597的重链；包含SEQ ID NO：441的轻链和包含SEQ ID NO：598的重链；包含SEQ ID NO：442的轻链和包含SEQ ID NO：599的重链；包含SEQ ID NO：443的轻链和包含SEQ ID NO：600的重链；包含SEQ ID NO：444的轻链和包含SEQ ID NO：601的重链；包含SEQ ID NO：445的轻链和包含SEQ ID NO：602的重链；包含SEQ ID NO：446的轻链和包含SEQ ID NO：603的重链；包含SEQ ID NO：447的轻链和包含SEQ ID NO：604的重链；包含SEQ ID NO：448的轻链和包含SEQ ID NO：605的重链；包含SEQ ID NO：449的轻链和包含SEQ ID NO：606的重链；包含SEQ ID NO：450的轻链和包含SEQ ID NO：607的重链；包含SEQ ID NO：451的轻链和包含SEQID NO：608的重链；包含SEQ ID NO：452的轻链和包含SEQ ID NO：609的重链；包含SEQ IDNO：453的轻链和包含SEQ ID NO：610的重链；包含SEQ ID NO：454的轻链和包含SEQ ID NO：61I的重链；包含SEQ ID NO：455的轻链和包含SEQ ID NO：612的重链；包含SEQ ID NO：456的轻链和包含SEQ ID NO：613的重链；包含SEQ ID NO：457的轻链和包含SEQ ID NO：614的重链；包含SEQ ID NO：458的轻链和包含SEQ ID NO：615的重链；包含SEQ ID NO：459的轻链和包含SEQ ID NO：616的重链；包含SEQ ID NO：460的轻链和包含SEQ ID NO：617的重链；包含SEQ ID NO：461的轻链和包含SEQ ID NO：618的重链；包含SEQ ID NO：462的轻链和包含SEQ ID NO：619的重链；包含SEQ ID NO：463的轻链和包含SEQ ID NO：620的重链；包含SEQID NO：464的轻链和包含SEQ ID NO：621的重链；包含SEQ ID NO：465的轻链和包含SEQ IDNO：622的重链；包含SEQ ID NO：466的轻链和包含SEQ ID NO：623的重链；包含SEQ ID NO：467的轻链和包含SEQ ID NO：624的重链；包含SEQ ID NO：468的轻链和包含SEQ ID NO：625的重链；包含SEQ ID NO：469的轻链和包含SEQ ID NO：626的重链；包含SEQ ID NO：470的轻链和包含SEQ ID NO：627的重链；以及包含SEQ ID NO：471的轻链和包含SEQ ID NO：628的重链，其中
该抗体或其功能片段在一个或多个选自由以下组成的组的偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代
相对于参考序列SEQ ID NO：455，该抗体轻链的D70，
相对于参考序列SEQ ID NO：612，该抗体重链的E276，以及
相对于参考序列SEQ ID NO：612，该抗体重链的T363。
16.如权利要求1-15中任一项所述的组合物，其中该GLP-1受体激动剂是GLP-1(7-37)或GLP-1(7-37)类似物。
17.如权利要求1-15中任一项所述的组合物，其中该GLP-1受体激动剂选自由以下组成的组：艾塞那肽、利拉鲁肽、利西拉肽、阿必鲁肽、度拉糖肽、索马鲁肽和他司鲁肽。
18.如权利要求16所述的组合物，其中该GLP-1受体激动剂选自由以下组成的组：GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3184)；GLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO：3185)；利拉鲁肽；阿必鲁肽；他司鲁肽；度拉糖肽；索马鲁肽；LY2428757；艾塞丁-4(SEQ ID NO：3163)；艾塞丁-3(SEQ ID NO：3164)；Leu14-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3165)；Leu14，Phe25-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3166)；Leu14，Ala19，Phe25-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3167)；艾塞丁-4(1-30)(SEQ ID NO：3168)；Leu14-艾塞丁-4(1-30)(SEQ ID NO：3169)；Leu14，Phe25-艾塞丁-4(1-30)(SEQ ID NO：3170)；Leu14，Ala19，Phe25-艾塞丁-4(1-30)(SEQ ID NO：3171)；艾塞丁-4(1-28)(SEQ ID NO：3172)；Leu14-艾塞丁-4(1-28)(SEQ ID NO：3173)；Leu14，Phe25-艾塞丁-4(1-28)(SEQ ID NO：3174)；Leu14，Ala19，Phe25-艾塞丁-4(1-28)(SEQ ID NO：3175)；Leu14，Lys17，20，Ala19，Glu21，Phe25，Gln28-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3176)；Leu14，Lys17，20，Ala19，Glu21，Gln28-艾塞丁-4(SEQID NO：3177)；辛基Gly14，Gln28-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3178)；Leu14，Gln28，辛基Gly34-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3179)；Phe4，Leu14，Gln28，Lys33，Glu34，Ile35，36，Ser37-艾塞丁-4(1-37)(SEQ ID NO：3180)；Phe4，Leu14，Lys17，20，Ala19，Glu21，Gln28-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3181)；Val11，Ile13，Leu14，Ala16，Lys21，Phe25-艾塞丁-4(SEQ ID NO：3182)；艾塞丁-4-Lys40(SEQ IDNO：3183)；GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3184)；GLP-1(7-36)-NH2(SEQ ID NO：3185)；Aib8，35，Arg26，34，Phe31-GLP-1(7-36)(SEQ ID NO：3186)；HXaa8EGTFTSDVSSYLEXaa22Xaa23AAKEFIXaa3 0WLXaa33Xaa34GXaa36Xaa37，其中Xaa8是A、V或G；Xaa22是G、K或E；Xaa23是Q或K；Xaa30是A或E；Xaa33是V或K；Xaa34是K、N或R；Xaa36是R或G；且Xaa37是G、H、P或不存在(SEQ ID NO：3187)；Arg34-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3188)；Glu30-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3189)；Lys22-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3190)；Gly8，36，Glu22-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3191)；Val8，Glu22，Gly36-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3192)；Gly8，36，Glu22，Lys33，Asn34-GLP-1(7-37)(SEQ IDNO：3193)；Val8，Glu22，Lys33，Asn34，Gly36-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3194)；Gly8，36，Glu22，Pro37-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3195)；Val8，Glu22，Gly36，Pro37-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3196)；Gly8，36，Glu22，Lys33，Asn34，Pro37-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3197)；Val8，Glu22，Lys33，Asn34，Gly36，Pro37-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3198)；Gly8，36，Glu22-GLP-1(7-36)(SEQ IDNO：3199)；Val8，Glu22，Gly36-GLP-1(7-36)(SEQ ID NO：3200)；Val8，Glu22，Asn34，Gly36-GLP-1(7-36)(SEQ ID NO：3201)；Gly8，36，Glu22，Asn34-GLP-1(7-36)(SEQ ID NO：3202)；GLP-1类似物(SEQ ID NO：3206)；GLP-1类似物(SEQ ID NO：3207)；[Ne-(17-羧基十七烷酸)Lys20]艾塞丁-4-NH2(SEQ ID NO：3208)；[Ne-(17-羧基十七烷酰基)Lys32]艾塞丁-4-NH2(SEQ IDNO：3209)；[脱氨基-His1，Ne-(17-羧基十七烷酰基)Lys20]艾塞丁-4-NH2(SEQ ID NO：3210)；[Arg12，27，NLe14，Ne-(17-羧基-十七烷酰基)Lys32]艾塞丁-4-NH2(SEQ ID NO：3211)；[Ne-(19-羧基-十九烷酰基氨基)Lys20]-艾塞丁-4-NH2(SEQ ID NO：3212)；[Ne-(15-羧基十五烷酰基氨基)Lys20]-艾塞丁-4-NH2(SEQ ID NO：3213)；[Ne-(13-羧基十三烷酰基氨基)Lys20]艾塞丁-4-NH2(SEQ ID NO：3214)；[Ne-(11-羧基-十一烷酰基-氨基)Lys20]艾塞丁-4-NH2(SEQ ID NO：3215)；艾塞丁-4-Lys40(e-MPA)-NH2(SEQ ID NO：3216)；艾塞丁-4-Lys40(e-AEEA-AEEA-MPA)-NH2(SEQ ID NO：3217)；艾塞丁-4-Lys40(e-AEEA-MPA)-NH2(SEQ ID NO：3218)；艾塞丁-4-Lys40(e-MPA)-白蛋白(SEQ ID NO：3219)；艾塞丁-4-Lys40(e-AEEA-AEEA-MPA)-白蛋白(SEQ ID NO：3220)；艾塞丁-4-Lys40(e-AEEA-MPA)-白蛋白(SEQ ID NO：3221)；脱氨基-His7，Arg26，Lys34(Nε-(γ-Glu(N-α-十六烷酰基)))-GLP-1(7-37)(如SEQ ID NO：3222披露的核心肽)(SEQ ID NO：3222)；脱氨基-His7，Arg26，Lys34(Nε-辛酰基)-GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3223)；Arg26，34，Lys38(Nε-(ω-羧基十五烷酰基))-GLP-1(7-38)(SEQ IDNO：3224)；Arg26，34，Lys36(Nε-(γ-Glu(N-α-十六烷酰基)))-GLP-1(7-36)(以SEQ ID NO：3225披露的核心肽)(SEQ ID NO：3225)；[Aib8；Lys37]GLP-1_(7-37)(SEQ ID NO：3226)；[Aib8，Lys26]GLP-1_(7-37)(SEQ ID NO：3227)；[Aib8，22；Lys36]GLP-1(7-36)-酰胺(SEQ IDNO：3228)；[Aib8，22；BLeu32；Lys36]GLP-1(7-36)-酰胺(SEQ ID NO：3229)；[Aib8，22；Lys37]GLP-1(7-37)-酰胺(SEQ ID NO：3230)；[Aib8，22；BLeu32；Lys37]GLP-1(7-37)-酰胺(SEQ IDNO：3231)；[Aib8，22；aMeLeu32；Lys37]GLP-1(7-37)-酰胺(SEQ ID NO：3232)；[Aib8，22；AMEF12；Lys37]GLP-1(7-37)-酰胺(SEQ ID NO：3233)；[Aib8，22；BLeu16；Lys37]GLP-1(7-37)-酰胺(SEQ ID NO：3234)；[Aib8，22；Gly36；Lys37]GLP-1(7-37)-酰胺(SEQ ID NO：3235)；[Aib8，22；Lys33，37；Asn34；Gly36]GLP-1(7-37)-酰胺(SEQ ID NO：3236)；[Aib8，22；Lys33；Asn34；Gly36；Aeea37]GLP-1(7-37)-Aeea-Lys-酰胺(SEQ ID NO：3237)；[Aib8，22；Gly36]GLP-1(7-37)(SEQID NO：3238)；环[E23-K27][Aib8；Gly36]GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3239)；环[E22-K26][Aib8；Gly36；Lys37]GLP-1(7-37)-酰胺(SEQ ID NO：3240)；[Aib8，22]-GLP-1(7-22)-Ex4(17-39)(SEQ ID NO：3241)；[Gly8，36；Glu22]GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3242)；[Aib8；Glu22；Gly36]GLP-1(7-37)-酰胺(SEQ ID NO：3243)；[Aib8；Tyr16；Glu22；Gly36]GLP-1_(7-37)(SEQ IDNO：3244)；[Aib8；Lys18，33；Glu22，23，30；Val25；Arg26；Leu27；Asn34；Gly36]GLP-1(7-37)(SEQ IDNO：3245)；[Aib8；Lys18，33；Glu22，23，30；Leu27；Asn34；Gly36]GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3246)；[Aib8；Lys18；Glu22，23，30；Leu27；Gly36]GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3247)；[Aib8，22；Ile9；Gly36]GLP-1_(7-36)(SEQ ID NO：3248)；和[Aib8，22；Glu15；Gly36]GLP-1_(7-36)(SEQ ID NO：3249)。
19.如权利要求16所述的组合物，其中该GLP-1(7-37)或GLP-1(7-37)类似物在对应于所述类似物的K26、K36、K37、K39或C-末端胺基团的残基处与该抗体或其片段偶联。
20.如权利要求1所述的组合物，其中该GLP-1受体激动剂经由肽接头偶联至该抗体或其片段，该肽接头包含选自由以下组成的组的序列：(Gly3Ser)2、(Gly4Ser)2、(Gly3Ser)3、(Gly4Ser)3、(Gly3Ser)4、(Gly4Ser)4、(Gly3Ser)5、(Gly4Ser)5、(Gly3Ser)6和(Gly4Ser)6。
21.一种治疗患有代谢紊乱的受试者的方法，该方法包括向该受试者给予一种组合物，该组合物包含特异性结合人类GIPR的抗体或其功能片段，其中该抗体或其功能片段在一个或多个偶联位点处包含半胱氨酸或非经典氨基酸的氨基酸取代；并且该组合物包含GLP-1受体激动剂，其中该GLP-1受体激动剂经由在该一个或多个偶联位点处取代的半胱氨酸残基或非经典氨基酸残基的侧链偶联至该抗体或其功能片段。
CN202410129086.1A 2017-01-17 2018-01-16 使用与抑胃肽受体（gipr）拮抗剂偶联的glp-1受体激动剂治疗或改善代谢紊乱 Pending CN118079021A (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762447332P 2017-01-17 2017-01-17
US62/447332 2017-01-17
CN201880005883.1A CN110662558B (zh) 2017-01-17 2018-01-16 使用与抑胃肽受体(gipr)拮抗剂偶联的glp-1受体激动剂治疗或改善代谢紊乱
PCT/US2018/013918 WO2018136440A1 (en) 2017-01-17 2018-01-16 Method of treating or ameliorating metabolic disorders using glp-1 receptor agonists conjugated to antagonists for gastric inhibitory peptide receptor (gipr)

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201880005883.1A Division CN110662558B (zh) 2017-01-17 2018-01-16 使用与抑胃肽受体(gipr)拮抗剂偶联的glp-1受体激动剂治疗或改善代谢紊乱

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN118079021A true CN118079021A (zh) 2024-05-28

Family

ID=61832572

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202410129086.1A Pending CN118079021A (zh) 2017-01-17 2018-01-16 使用与抑胃肽受体（gipr）拮抗剂偶联的glp-1受体激动剂治疗或改善代谢紊乱
CN201880005883.1A Active CN110662558B (zh) 2017-01-17 2018-01-16 使用与抑胃肽受体(gipr)拮抗剂偶联的glp-1受体激动剂治疗或改善代谢紊乱

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201880005883.1A Active CN110662558B (zh) 2017-01-17 2018-01-16 使用与抑胃肽受体(gipr)拮抗剂偶联的glp-1受体激动剂治疗或改善代谢紊乱

Country Status (25)

Country Link
US (2) US10905772B2 (zh)
EP (1) EP3570885B1 (zh)
JP (1) JP7175899B2 (zh)
KR (2) KR20240131457A (zh)
CN (2) CN118079021A (zh)
AR (1) AR110751A1 (zh)
AU (1) AU2018210858A1 (zh)
BR (1) BR112019014588A2 (zh)
CA (1) CA3049023A1 (zh)
CL (1) CL2019001963A1 (zh)
CO (1) CO2019007685A2 (zh)
CR (2) CR20230302A (zh)
EA (1) EA201991721A1 (zh)
IL (2) IL313587A (zh)
JO (1) JOP20190177A1 (zh)
MA (1) MA47314A (zh)
MX (1) MX2019008462A (zh)
NZ (1) NZ754937A (zh)
PE (1) PE20191467A1 (zh)
PH (1) PH12019501656A1 (zh)
SA (1) SA519402246B1 (zh)
SG (1) SG11201906525SA (zh)
TW (1) TWI708613B (zh)
UY (1) UY37568A (zh)
WO (1) WO2018136440A1 (zh)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA127495C2 (uk) 2015-12-23 2023-09-13 Амджен Інк. Виділений антигензв'язуючий білок, який специфічно зв'язується з поліпептидом рецептора шлункового інгібіторного пептиду (gipr) людини, та фармацевтична композиція, яка його містить
JOP20190177A1 (ar) 2017-01-17 2019-07-16 Amgen Inc طريقة لعلاج أو تحسين اضطرابات أيضية باستخدام مساعدات مستقبل glp-1 مقترنة بمناهضات لمستقبل ببتيد مثبط معوي (gipr)
JP7250706B2 (ja) * 2017-06-21 2023-04-03 アムジエン・インコーポレーテツド 胃抑制ペプチド受容体（ｇｉｐｒ）に対するアンタゴニスト結合タンパク質／ｇｌｐ－１受容体アゴニスト融合タンパク質を使用した代謝障害の治療又は寛解方法
EP3661562B1 (en) * 2017-08-04 2024-10-02 Amgen Inc. Method of conjugation of cys-mabs
MX2021010737A (es) 2019-03-08 2021-09-28 Amgen Inc Terapia de combinacion por factor de diferenciacion del crecimiento 15.
CN112521501A (zh) * 2019-09-18 2021-03-19 鸿运华宁（杭州）生物医药有限公司 Gipr抗体及其与glp-1的融合蛋白质，以及其药物组合物和应用
US12054551B2 (en) 2020-07-02 2024-08-06 Sanofi FGFR1/KLB targeting agonistic antigen-binding proteins and conjugates thereof with GLP-1R agonistic peptides
CA3191304A1 (en) * 2020-09-14 2022-03-17 Amy Han Antibody-drug conjugates comprising glp1 peptidomimetics and uses thereof
EP4351627A1 (en) 2021-05-21 2024-04-17 Yuhan Corporation Composition for combination therapy comprising growth differentiation factor-15 variant and glucagon-like peptide-1 receptor agonist
CN117480186A (zh) * 2021-06-09 2024-01-30 斯威夫特诺沃治疗股份有限公司 用于治疗或改善代谢紊乱的治疗剂和方法
AU2023231305A1 (en) * 2022-03-11 2024-09-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-GLP1r antibody-tethered drug conjugates comprising GLP1 peptidomimetics and uses thereof
CN117659189A (zh) * 2022-09-08 2024-03-08 鸿运华宁（杭州）生物医药有限公司 Gipr抗体及其与fgf21的融合蛋白，以及其药物组合物和应用
KR102679905B1 (ko) * 2022-10-12 2024-07-02 서울대학교병원 Gipr 마커를 이용한 설폰요소제 의존성 예측용 조성물 및 그 예측 방법
WO2024080650A1 (ko) * 2022-10-12 2024-04-18 서울대학교병원 Gipr 마커를 이용한 설폰요소제 의존성 예측용 조성물 및 그 예측 방법
WO2024102742A1 (en) * 2022-11-07 2024-05-16 Amgen Inc. Methods for treating obesity
WO2024209050A1 (en) 2023-04-05 2024-10-10 Antag Therapeutics Aps Gip activity modulators and orthostatic intolerance

Family Cites Families (132)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4263428A (en) 1978-03-24 1981-04-21 The Regents Of The University Of California Bis-anthracycline nucleic acid function inhibitors and improved method for administering the same
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
IE52535B1 (en) 1981-02-16 1987-12-09 Ici Plc Continuous release pharmaceutical compositions
EP0088046B1 (de) 1982-02-17 1987-12-09 Ciba-Geigy Ag Lipide in wässriger Phase
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
HUT35524A (en) 1983-08-02 1985-07-29 Hoechst Ag Process for preparing pharmaceutical compositions containing regulatory /regulative/ peptides providing for the retarded release of the active substance
EP0143949B1 (en) 1983-11-01 1988-10-12 TERUMO KABUSHIKI KAISHA trading as TERUMO CORPORATION Pharmaceutical composition containing urokinase
US4740461A (en) 1983-12-27 1988-04-26 Genetics Institute, Inc. Vectors and methods for transformation of eucaryotic cells
US4959455A (en) 1986-07-14 1990-09-25 Genetics Institute, Inc. Primate hematopoietic growth factors IL-3 and pharmaceutical compositions
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5260203A (en) 1986-09-02 1993-11-09 Enzon, Inc. Single polypeptide chain binding molecules
ATE87659T1 (de) 1986-09-02 1993-04-15 Enzon Lab Inc Bindungsmolekuele mit einzelpolypeptidkette.
US4912040A (en) 1986-11-14 1990-03-27 Genetics Institute, Inc. Eucaryotic expression system
US5011912A (en) 1986-12-19 1991-04-30 Immunex Corporation Hybridoma and monoclonal antibody for use in an immunoaffinity purification system
US4965195A (en) 1987-10-26 1990-10-23 Immunex Corp. Interleukin-7
US4968607A (en) 1987-11-25 1990-11-06 Immunex Corporation Interleukin-1 receptors
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
WO1990005183A1 (en) 1988-10-31 1990-05-17 Immunex Corporation Interleukin-4 receptors
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5683888A (en) 1989-07-22 1997-11-04 University Of Wales College Of Medicine Modified bioluminescent proteins and their use
US5292658A (en) 1989-12-29 1994-03-08 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Boyd Graduate Studies Research Center Cloning and expressions of Renilla luciferase
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6713610B1 (en) 1990-01-12 2004-03-30 Raju Kucherlapati Human antibodies derived from immunized xenomice
DE69120146T2 (de) 1990-01-12 1996-12-12 Cell Genesys Inc Erzeugung xenogener antikörper
US5545618A (en) 1990-01-24 1996-08-13 Buckley; Douglas I. GLP-1 analogs useful for diabetes treatment
AU651596B2 (en) 1990-06-05 1994-07-28 Immunex Corporation Type II interleukin-1 receptors
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US6300129B1 (en) 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
DK0814159T3 (da) 1990-08-29 2005-10-24 Genpharm Int Transgene, ikke-humane dyr, der er i stand til at danne heterologe antistoffer
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
WO1992015673A1 (en) 1991-03-11 1992-09-17 The University Of Georgia Research Foundation, Inc. Cloning and expression of renilla luciferase
US6565841B1 (en) 1991-03-15 2003-05-20 Amgen, Inc. Pulmonary administration of granulocyte colony stimulating factor
EP0590076A4 (en) 1991-06-14 1997-02-12 Dnx Corp Production of human hemoglobin in transgenic pigs
EP0593592B1 (en) 1991-07-08 1998-03-25 The University Of Massachusetts At Amherst Thermotropic liquid crystal segmented block copolymer
WO1993015722A1 (en) 1992-02-07 1993-08-19 Syntex (Usa) Inc. Controlled delivery of pharmaceuticals from preformed porous microparticles
CA2140638C (en) 1992-07-24 2010-05-04 Raju Kucherlapati Generation of xenogeneic antibodies
ATE400651T1 (de) 1993-09-10 2008-07-15 Univ Columbia Verwendung von grünem fluoreszenzprotein
WO1995021191A1 (en) 1994-02-04 1995-08-10 William Ward Bioluminescent indicator based upon the expression of a gene for a modified green-fluorescent protein
US5777079A (en) 1994-11-10 1998-07-07 The Regents Of The University Of California Modified green fluorescent proteins
EP1709970A1 (en) 1995-04-27 2006-10-11 Abgenix, Inc. Human antibodies against EGFR, derived from immunized xenomice
US5874304A (en) 1996-01-18 1999-02-23 University Of Florida Research Foundation, Inc. Humanized green fluorescent protein genes and methods
US5804387A (en) 1996-02-01 1998-09-08 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University FACS-optimized mutants of the green fluorescent protein (GFP)
US5876995A (en) 1996-02-06 1999-03-02 Bryan; Bruce Bioluminescent novelty items
US5925558A (en) 1996-07-16 1999-07-20 The Regents Of The University Of California Assays for protein kinases using fluorescent protein substrates
ES2359031T3 (es) 1996-08-08 2011-05-17 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Composición farmacéutica que comprende un péptido de exendina-4.
US5976796A (en) 1996-10-04 1999-11-02 Loma Linda University Construction and expression of renilla luciferase and green fluorescent protein fusion genes
US7091183B1 (en) 1996-12-03 2006-08-15 Boston Medical Center Corporation Specific antagonists for glucose-dependent insulinotropic polypeptide (GIP)
WO1998024464A1 (en) 1996-12-03 1998-06-11 Trustees Of Boston University Specific antagonists for glucose-dependent insulinotropic polypeptide (gip)
CA2273194C (en) 1996-12-03 2011-02-01 Abgenix, Inc. Transgenic mammals having human ig loci including plural vh and vk regions and antibodies produced therefrom
US6458547B1 (en) 1996-12-12 2002-10-01 Prolume, Ltd. Apparatus and method for detecting and identifying infectious agents
JP4798814B2 (ja) 1997-01-07 2011-10-19 アミリン・ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド 食物摂取低減用のエキセンジンおよびそのアゴニストの使用
CA2196496A1 (en) 1997-01-31 1998-07-31 Stephen William Watson Michnick Protein fragment complementation assay for the detection of protein-protein interactions
US6753165B1 (en) 1999-01-14 2004-06-22 Bolder Biotechnology, Inc. Methods for making proteins containing free cysteine residues
DK1019077T4 (da) 1997-08-08 2011-03-07 Amylin Pharmaceuticals Inc Hidtil ukendte exendinagonistforbindelser
US7157555B1 (en) 1997-08-08 2007-01-02 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Exendin agonist compounds
US6342220B1 (en) 1997-08-25 2002-01-29 Genentech, Inc. Agonist antibodies
US7223725B1 (en) 1997-11-14 2007-05-29 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Exendin agonist compounds
ATE381939T1 (de) 1997-11-14 2008-01-15 Amylin Pharmaceuticals Inc Neuartige exendin agonisten
US7220721B1 (en) 1997-11-14 2007-05-22 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Exendin agonist peptides
DK1032587T4 (da) 1997-11-14 2013-04-08 Amylin Pharmaceuticals Llc Hidtil ukendte exendinagonist-forbindelser
JP4677095B2 (ja) 1998-02-13 2011-04-27 アミリン・ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド エキセンジンおよびｇｌｐ−１の変力および利尿効果
US6703359B1 (en) 1998-02-13 2004-03-09 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Inotropic and diuretic effects of exendin and GLP-1
AU765703B2 (en) 1998-03-27 2003-09-25 Bruce J. Bryan Luciferases, fluorescent proteins, nucleic acids encoding the luciferases and fluorescent proteins and the use thereof in diagnostics, high throughput screening and novelty items
AU6294899A (en) 1998-10-07 2000-04-26 Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. Glucose-dependent insulinotropic peptide for use as an osteotropic hormone
PT1137666E (pt) 1998-12-07 2008-06-02 Sod Conseils Rech Applic Análogos de glp-1
CA2358107C (en) 1998-12-22 2011-08-23 Eli Lilly And Company Shelf-stable formulation of glucagon-like peptide-1
US20030087820A1 (en) 1999-01-14 2003-05-08 Young Andrew A. Novel exendin agonist formulations and methods of administration thereof
EP1140145B2 (en) 1999-01-14 2019-05-15 Amylin Pharmaceuticals, LLC Novel exendin agonist formulations and methods of administration thereof
WO2000041548A2 (en) 1999-01-14 2000-07-20 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Methods for glucagon suppression
CA2367856C (en) 1999-03-29 2013-10-15 Uutech Limited Analogs of gastric inhibitory peptide and their use for treatment of diabetes
US20050272652A1 (en) 1999-03-29 2005-12-08 Gault Victor A Peptide analogues of GIP for treatment of diabetes, insulin resistance and obesity
US6506724B1 (en) 1999-06-01 2003-01-14 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Use of exendins and agonists thereof for the treatment of gestational diabetes mellitus
US6833268B1 (en) 1999-06-10 2004-12-21 Abgenix, Inc. Transgenic animals for producing specific isotypes of human antibodies via non-cognate switch regions
US6528486B1 (en) 1999-07-12 2003-03-04 Zealand Pharma A/S Peptide agonists of GLP-1 activity
CA2396157A1 (en) 2000-01-10 2001-07-19 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Use of exendins and agonists thereof for modulation of triglyceride levels and treatment of dyslipidemia
EP1257577B1 (en) 2000-01-27 2004-04-21 Eli Lilly And Company Process for solubilizing glucagon-like peptide 1 (glp-1) compounds
KR20020093150A (ko) 2000-05-16 2002-12-13 가부시키가이샤산와카가쿠켄큐쇼 인슐린 저항성 및/또는 비만 예방제 혹은 개선제
CA2444098C (en) 2001-04-19 2016-06-21 The Scripps Research Institute Methods and composition for the production of orthogonal trna-aminoacyltrna synthetase pairs
US20050159379A1 (en) 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc RNA interference mediated inhibition of gastric inhibitory polypeptide (GIP) and gastric inhibitory polypeptide receptor (GIPR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
JP4566459B2 (ja) 2001-06-07 2010-10-20 株式会社日立製作所 表示装置
NZ534125A (en) 2002-02-20 2006-11-30 Emisphere Tech Inc A formulation comprising a GLP-1 compound and a delivery agent
US7081473B2 (en) 2002-05-22 2006-07-25 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co., Ltd. Agent for preventing/ameliorating obesity comprising methylidene hydrizide compound as active ingredient
CA2489323A1 (en) 2002-06-15 2003-12-24 Enteromed, Inc. Treatment of non-alcoholic fatty liver disease
JP2006213598A (ja) 2003-03-19 2006-08-17 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd ピラゾロピリミジン化合物及びその用途
PT1641823E (pt) 2003-06-12 2011-11-08 Lilly Co Eli Proteínas de fusão de análogos de glp-1
JP5518282B2 (ja) 2003-09-01 2014-06-11 ノヴォ ノルディスク アー／エス 安定なペプチドの製剤
WO2005077072A2 (en) 2004-02-11 2005-08-25 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Hybrid polypeptides with selectable properties
US7456254B2 (en) 2004-04-15 2008-11-25 Alkermes, Inc. Polymer-based sustained release device
US7991890B2 (en) 2004-09-30 2011-08-02 Microsoft Corporation Game console communication with a device
ZA200701792B (en) 2004-10-25 2008-12-31 Cytos Biotechnology Ag Gastric inhibitory polypeptide (GIP) antigen arrays and uses thereof
EP2168982A1 (en) 2004-12-22 2010-03-31 Eli Lilly & Company GLP-1 analog fusion protein formulations
US20060275288A1 (en) 2005-01-20 2006-12-07 Grihalde Nelson D GLP-1 receptor agonist and allosteric modulator monoclonal antibodies and uses thereof
AU2006213607A1 (en) 2005-02-11 2006-08-17 Amylin Pharmaceuticals, Llc GIP analog and hybrid polypeptides with selectable properties
US8263545B2 (en) 2005-02-11 2012-09-11 Amylin Pharmaceuticals, Inc. GIP analog and hybrid polypeptides with selectable properties
WO2006119905A1 (en) 2005-05-11 2006-11-16 Sanofi-Aventis Use of a gip promoter polymorphism
JP5235661B2 (ja) 2005-05-25 2013-07-10 ノボ・ノルデイスク・エー／エス 安定化ポリペプチド製剤
WO2007028633A2 (en) 2005-09-08 2007-03-15 Uutech Limited Treatment of diabetes related obesity
CN101432025B (zh) 2006-03-21 2012-04-04 安米林药品公司 肽-肽酶抑制剂结合物及其使用方法
CA2657103A1 (en) 2006-07-07 2008-01-10 The Texas A&M University System Novel belactosin derivatives as therapeutic agents/biological probes and their synthesis
US20090209469A1 (en) 2006-08-04 2009-08-20 Dennis Kim Use of Exendins and GLP-1 Receptor Agonists for Altering Lipoprotein Particle Size and Subclass Composition
EP2057188B1 (en) 2006-08-17 2013-07-31 Amylin Pharmaceuticals, LLC Dpp-iv resistant gip hybrid polypeptides with selectable properties
US8497240B2 (en) 2006-08-17 2013-07-30 Amylin Pharmaceuticals, Llc DPP-IV resistant GIP hybrid polypeptides with selectable properties
US20090098130A1 (en) * 2007-01-05 2009-04-16 Bradshaw Curt W Glucagon-like protein-1 receptor (glp-1r) agonist compounds
US20090144162A1 (en) 2007-11-29 2009-06-04 Neil Milne Transaction Security Method and Apparatus
GB0814068D0 (en) 2008-08-01 2008-09-10 Univ Ulster Active immunisation against GIP
CN103641906A (zh) 2008-08-07 2014-03-19 益普生制药股份有限公司 葡萄糖依赖性促胰岛素多肽类似物
WO2010016936A1 (en) 2008-08-07 2010-02-11 Ipsen Pharma S.A.S. Pharmaceutical compositions of analogues of glucose-dependent insulinotropic polypeptide
CN104829706A (zh) 2008-08-07 2015-08-12 益普生制药股份有限公司 糖依赖性胰岛素释放肽的类似物
WO2010016944A2 (en) 2008-08-07 2010-02-11 Ipsen Pharma S.A.S. Analogues of glucose-dependent insulinotropic polypeptide (gip) modified at n-terminal
JP2011530506A (ja) 2008-08-07 2011-12-22 イプセン ファルマ ソシエテ パール アクシオン サンプリフィエ グルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチドの切り詰められたアナログ
WO2011014680A2 (en) 2009-07-31 2011-02-03 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Gastric inhibitory peptide variants and their uses
US8551946B2 (en) 2010-01-27 2013-10-08 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon antagonist-GIP agonist conjugates and compositions for the treatment of metabolic disorders and obesity
US9023986B2 (en) 2010-10-25 2015-05-05 Hoffmann-La Roche Inc. Glucose-dependent insulinotropic peptide analogs
BR112013015389A2 (pt) 2010-12-22 2016-11-22 Univ Indiana Res & Tech Corp análogo de glucagon exibindo atividade de receptor gip
CA2828147A1 (en) 2011-03-08 2012-09-13 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co., Ltd. Analysis method
KR102002783B1 (ko) 2011-06-10 2019-07-24 베이징 한미 파마슈티컬 컴퍼니 리미티드 포도당 의존성 인슐리노트로핀 폴리펩타이드 유사물질, 이의 약학적 조성물 및 응용
US20160185837A1 (en) 2013-08-16 2016-06-30 Medimmune Limited Gip and glp-1 receptor dual-agonists for the treatment of diabetes
US20160297883A1 (en) * 2013-12-04 2016-10-13 Innovative Targeting Solutions, Inc. G-protein coupled receptor agonists and methods
WO2015086853A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Novo Nordisk Health Care Ag Method for thioether conjugation of proteins
BR112016014042A2 (pt) 2013-12-17 2017-12-05 Mhs Care Innovation Llc composições e métodos para tratar deposição de tecido adiposo
TWI622596B (zh) 2015-10-26 2018-05-01 美國禮來大藥廠 升糖素受體促效劑
UA127495C2 (uk) * 2015-12-23 2023-09-13 Амджен Інк. Виділений антигензв'язуючий білок, який специфічно зв'язується з поліпептидом рецептора шлункового інгібіторного пептиду (gipr) людини, та фармацевтична композиція, яка його містить
JOP20190177A1 (ar) 2017-01-17 2019-07-16 Amgen Inc طريقة لعلاج أو تحسين اضطرابات أيضية باستخدام مساعدات مستقبل glp-1 مقترنة بمناهضات لمستقبل ببتيد مثبط معوي (gipr)

Also Published As

Publication number Publication date
US20180311372A1 (en) 2018-11-01
IL313587A (en) 2024-08-01
TW201838648A (zh) 2018-11-01
PE20191467A1 (es) 2019-10-16
CO2019007685A2 (es) 2019-07-31
EA201991721A1 (ru) 2020-04-08
UY37568A (es) 2018-07-31
CN110662558B (zh) 2024-04-09
AR110751A1 (es) 2019-05-02
EP3570885A1 (en) 2019-11-27
BR112019014588A2 (pt) 2020-02-18
SG11201906525SA (en) 2019-08-27
WO2018136440A1 (en) 2018-07-26
CA3049023A1 (en) 2018-07-26
JP2020506900A (ja) 2020-03-05
IL267660B1 (en) 2024-07-01
CR20230302A (es) 2023-08-25
JOP20190177A1 (ar) 2019-07-16
MX2019008462A (es) 2019-11-21
PH12019501656A1 (en) 2019-10-28
US10905772B2 (en) 2021-02-02
MA47314A (fr) 2019-11-27
IL267660A (en) 2019-08-29
KR20190104158A (ko) 2019-09-06
TWI708613B (zh) 2020-11-01
US20210154318A1 (en) 2021-05-27
CR20190380A (es) 2019-11-07
CN110662558A (zh) 2020-01-07
JP2022184880A (ja) 2022-12-13
EP3570885B1 (en) 2024-09-18
AU2018210858A1 (en) 2019-07-18
NZ754937A (en) 2023-04-28
CL2019001963A1 (es) 2020-04-03
KR102697797B1 (ko) 2024-08-27
KR20240131457A (ko) 2024-08-30
JP7175899B2 (ja) 2022-11-21
SA519402246B1 (ar) 2023-02-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110662558B (zh) 使用与抑胃肽受体(gipr)拮抗剂偶联的glp-1受体激动剂治疗或改善代谢紊乱
US11046774B2 (en) Method of treating or ameliorating metabolic disorders using binding proteins for gastric inhibitory peptide receptor (GIPR) in combination with GLP-1 agonists
CN110831969B (zh) 使用抑胃肽受体（gipr）结合蛋白与glp-1激动剂的组合治疗或改善代谢障碍的方法
US20240261421A1 (en) Method of treating or ameliorating metabolic disorders using antagonistic binding proteins for gastric inhibitory peptide receptor (gipr)/glp-1 receptor agonist fusion proteins
JP7574253B2 (ja) 胃抑制ペプチド受容体（ｇｉｐｒ）に対するアンタゴニストにコンジュゲートされたｇｌｐ－１受容体アゴニストを使用して代謝障害を治療又は改善する方法
EA040374B1 (ru) Способ лечения или облегчения метаболических нарушений с использованием белков, связывающих рецептор желудочного ингибиторного пептида (gipr), в комбинации с агонистами glp-1

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination