CN1178799A - 从中药黄精中提取黄精多糖的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明是从中药黄精中提取黄精多糖的方法,该产品不含蛋白质,含糖量达100%,比旋光度为负值,水解产物主要为果糖,少量为葡萄糖,HPLC和凝胶电泳显示单一组分,分子量为4000左右。药理试验证明,黄精多糖制品对单疱病毒(HSV)Ⅰ型Ⅱ型有较高的活性,急毒、长毒及一般药理都安全有效。临床试验0.2%的黄精滴眼液治疗角膜炎比0.1%的无环鸟苷眼效果好。

Description

发明 从中药黄精中提取黄精多糖的方法
本发明属于从中草药中提取多糖药物的技术领域。
多糖具有多种生理功能，因而多糖药物研究近年来发展迅速。目前，从天然产物或发酵产物中分离制备多糖，国内外多采用物理、化学方法。一般将原药粉碎、脱脂后，用水、稀酸或稀碱抽提，抽提液浓缩后，先用三氯乙酸或氯仿-正丁醇法去除杂蛋白，然后透析去除小分子杂质，浓缩后冻干或用有机溶剂沉淀即获得多糖产物。多糖的精制多采用离子交换和凝胶过滤方法。上述多糖制备方法存在以下不足：①多糖中含有酚型化合物，因而具有较深的黄色、棕色。这些颜色用活性炭无法脱色，用氧化剂则容易使多糖降解；②提取程序复杂、时间长、成本高，向规模化产业化转化难度大；③精制多糖时用的离子交换介质多为纤维素和葡聚糖凝胶衍生物，本身就多糖，当受到微生物或某些化学因素作用时，多糖制品容易受到介质降解产物的污染。一句话，上述方法，不易获得高纯度的多糖。
建立一种新的以生药黄精为原料，提取工艺简单，可靠，既使收率高，成本低，又能得到高纯度的黄精多糖的方法是本发明的目的。
为达上述目的，本发明针对现有提取技术存在的问题，在技术上，着重解决了以下几个问题：
1.在原药干片加工过程中，采用蒸煮后的通风干燥，避免了制片过程中酚类物质氧化，解决了药材颜色发黄问题。
2.抽提液不用稀酸、稀碱，而用低级醇，并在室温下浸提。此步骤可使蛋白质、淀粉等杂质保留在固相中，使抽提物纯度大为提高。
3.在多糖精制过程中，离子交换介质采用大孔弱碱阴离子交换树脂，凝胶过滤介质选用聚丙烯酰胺凝胶系列，避免了多糖的污染。
具体的方法为，生黄精去须根、洗净蒸煮一段时间后，切成2-5mm厚的片，在60°±10℃温度下通风烘干，粉碎过筛后，细粉用低级醇进行二次抽提，使用的低级醇浓度第一次为80％-95％，第二次为40-60％，低级醇与黄精粉末的浸泡比：第一次为3-5∶1；第二次为7-15∶1。经第二次抽提过滤后的滤液加入2-4倍有机溶剂进行沉淀、过滤、烘干，得黄精多糖粗品。用本发明所得的黄精多糖粗品用缓冲液和水进行三次上柱层析，第一次，用20mMOL/L的Tris-Hcl缓冲液，PH为6.8～7.5，上样量为0.4-2倍柱床体积，离子交换柱用弱碱阴离子交换树脂；第二次溶解和洗涤仍用Tris-Hcl缓冲液，凝胶层析介质用聚丙烯酰胺凝胶系列，上样量为1～2％柱床体积；第三次溶剂和洗涤剂为蒸馏水，凝胶层析介质仍为聚丙烯酰胺凝胶系列，上样量为1-2％柱床体积，经三次层析后的溶液，经收集、浓缩、冻干即得黄精多糖精制品。上述方法中，所述的低级醇类为甲醇、乙醇、丙醇；所述的可与水互溶的有机溶剂为丙酮，二甲亚砜，二甲基甲酰胺及低级醇类。
用本发明的方法获得的黄精多糖粗品为白色粉末状，含糖量为95％左右，精制品为白色疏松状固体，含糖量为100％。黄精多糖精制品的比旋度为负值，红外显示果糖特征吸收峰，水解产物簿层分析为含果糖和少量葡萄糖。精制品HPLC分析和凝胶电泳显示为单一组份，分子量为4000左右。
药理试验表明：黄精多糖具有体外抗单疱病毒(HSV)I型和II型的作用。动物体内试验表明，0.2％的黄精多糖滴眼液治疗家兔眼实验性单疱病毒角膜炎，效果优于对照药物0.1％无环鸟苷眼液，临床治疗单疱病毒性角膜炎104例112眼，结果表明：0.2％黄精多糖滴眼液治疗效果优于0.1％无环鸟苷眼液。对其急毒、长毒及一般药理试验证明，本发明所制备的黄精多糖制品是安全，有效的。
实施例1
黄精多糖粗品的制备
75kg黄精生药，经洗净、蒸、切片、烘干、粉碎后得12.9kg粉料，此步收率为17.2％。
取粉料200g加入1200ml 85％乙醇，回流后200目尼龙布过滤。固形物中加45％乙醇，浸提、过滤得1.6L，清液中加3.2L乙醇后有大量白色沉淀产生，减压抽滤后，60℃通风干燥磨碎得白色粉状固体30.58g。从粉料到得粗黄精多糖，收率为15.3％，化学成份分析，含糖为94.8％，蛋白0.45％，水份5.42％。
实施例2
黄精多糖的精制
将40g粗多糖溶于PH7.2，20mMOL/LTris-HCL缓冲液500ml中作为上柱样品。离子交换柱规格为2.6×30cm，介质为CGB685树脂，预先用Tris缓冲剂平衡，柱体积为80ml。每次上样品40ml左右，UV206nm监测，Tris缓冲剂洗脱，收集洗脱第一峰，合并多次收集组份减压浓缩至8.4％，作为凝胶层析样品，凝胶层析柱为2.6×160cm，介质为Bio-Gel P6.柱体积800ml(先用Tris缓冲剂平衡)，每次上样12-15ml(Tris缓冲液洗脱)收集主要糖峰，合并多次收集组份，减压浓缩至8％浓度，作第二次凝胶层析样品。同上P6层析柱预先用蒸馏水平衡，每次上样10ml左右(蒸馏水洗脱)，收集糖峰。合并多次收集液减压浓缩至10％浓度，冷冻干燥成白色疏松状固体9.0g。从粗黄精多糖到精黄精多糖收率为22.5％。紫外分光光度计检测精制多糖280nm无吸收，即不含蛋白。用酚-硫酸法测定其含糖量为100％。

Claims (4)

  1. 一、从中药黄精中提取黄精多糖的方法，其特征是：先用通风干燥将生黄精制成黄精粉，再将黄精粉以低级醇为溶剂进行二次抽提，滤液浓缩、有机溶剂沉淀，干燥，得粗黄精多糖。将粗黄精多糖溶于20mMOL/L Tris-Hcl缓冲液上柱层析二次，再用蒸馏水进行第三次上柱层析、浓缩、冷冻干燥得黄精多糖精制品。
  2. 二、根据权利要求1所述的从黄精中提取黄精多糖的方法，其特征是：在提取黄精多糖粗品过程中，所使用的低级醇的浓度第一次为80-95％，第二次为40-60％，在第一次抽提时，低级醇与黄精粉的浸泡比为3～5∶1；第二次抽提时，低级醇与黄精粉固形物的体积比为7-15∶1；有机溶剂与样品液的体积比为2-4∶1。
  3. 三、根据权利要求2所述的从黄精中提取黄精多糖的方法，其特征是所述的低级醇为甲醇、乙醇、丙醇，所述的可与水互溶的有机溶剂为丙酮，二甲亚砜、二甲基酰胺及低级醇类。
  4. 四、根据权利要求1或3所述的从黄精中提取黄精多糖的方法，其特征是：精制黄精多糖的过程中，第一次抽提上柱的过滤介质为弱碱阴离子交换树脂，上样量为0.4～2倍柱床体积，第二次、第三次抽提上柱的过滤介质为聚丙烯酰胺凝胶系列，上样量均为1-2％柱床体积。
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