CN1155621C - 芦荟多糖的提取精制方法 - Google Patents
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Abstract
一种芦荟多糖的提取精制方法，其特征是包括以下步骤：将芦荟鲜叶切成小块状，在40～80℃用水提取，滤取提取液；将提取液离心，取上清液，在上清液中加入95%乙醇，使得溶液中乙醇含量达到50-80%，沉淀出粗芦荟多糖；将粗芦荟多糖溶于水，加入20～50%三氯乙酸或三氟乙酸，使得三氯乙酸或三氟乙酸的最终浓度达到2-6%，静置后离心去除沉淀得二次上清液；将二次上清液上大孔树脂柱床，并用水洗脱至流出液无色透明；合并流出液，并浓缩，加入95%乙醇，使溶液中乙醇含量达到55-85%，沉淀出多糖，冷冻干燥，即得精制的芦荟多糖。
Description
一、技术领域
本发明涉及从芦荟属植物[例如：斑纹芦荟(Aloe vern var.chinensis)、库拉索芦荟(Aloe barbadensis)、木立芦荟(Aloe arborescens)、好望角芦荟(Aloe ferox)、索科特芦荟(Aloe socotrina)、皂角芦荟(Aloe saponaria)等]中提取分离一种多糖的方法。
二、背景技术
芦荟是一种药用价值很高的植物，现代药理学研究表明它有广泛的药理活性，如致泻(参见：中药大辞典上海科学出版社，1986：1076)、抗肿瘤(参见：Phytotherapy Research，1993 Jul，7，s43-s47)、抗菌消炎(Glycobiology，1995 Jan，5，39-44)、促进免疫(Neuroscience Letters，1997 Nov，238(1-2)，65-68)、促伤口愈合(参见：Journal of Ethnopharmacology，1998 Jan，59(3)，195-201)、抗辐射(参见：Immunopharmacology，1997 Oct，37(2-3)，153-162)、抗胃溃疡(参见：The Lancet，1999 Jul，354(9175)，307)、保护肝脏(参见：Nutrition，1998 Nov，14(11-12)，846-852)、降血糖(参见：Phytomedicine，1996 Mar，3，241-243)等作用。
芦荟叶凝胶系由糖类物质组成的混合物，该混合物主要含多糖。此多糖为葡萄糖缩甘露聚糖，是包含有1→4位连接的线性聚合物。并含少量阿拉伯糖(arabinose)、鼠李糖(rhamnose)、果糖(fructose)、蔗糖(sucrose)、木糖(xylose)、葡萄糖醛酸(glucuronic acid)等(参见：佛山科学技术学院学报(自然科学版)，2000Jun，18(2)：76-80)。芦荟的诸多药理作用(如对免疫系统的作用、抗自由基作用、抗辐射作用、抗胃溃疡、促进伤口愈合等)与芦荟所含多糖物质有关，但目前尚未见有芦荟多糖的提取精制方法。
本发明的目的在于提供一种芦荟多糖的规模化提取精制方法。
三、发明内容
本发明的技术方案如下：
一种芦荟多糖的提取精制方法，它包括以下步骤：
A.将芦荟鲜叶切成小块状，加入其重量的10～12倍的蒸馏水，在40～80℃提取1～3小时，提取3次，滤取提取液，将合并后的提取液浓缩至总体积的1/13～1/30；
B.将步骤A中的提取液离心，取上清液，在上清液中加入95％乙醇，使得溶液中乙醇含量达到50-80％，沉淀出粗芦荟多糖；
C.将粗芦荟多糖加蒸馏水溶解，蒸馏水的用量一般为粗芦荟多糖重量的20～25倍，加入20～50％三氯乙酸或其它有机酸溶液(例如三氟乙酸)，使得三氯乙酸的最终浓度达到2-6％，4℃静置过夜后离心去除沉淀，得二次上清液；
D.将二次上清液浓缩至粗芦荟多糖重量的5～10倍，上聚苯乙烯大孔吸附树脂柱床，聚苯乙烯大孔吸附树脂可以是AB-8型、X-5型、H107型、S-8型、D3520型、D4006型、D4020型、NKA-9型、XAD-2型、XAD-3型、HP型、SIP1300型、SIP1400型、M3型、ABD-4型、DM-130型、D101型、1300-1型、1300-66型、100型、500型或者600型大孔树脂，收集流出液，待二次上清液完全进入树脂柱床后，再用蒸馏水洗脱至流出液呈无色透明；
E.合并流出液，浓缩至粗芦荟多糖重量的5～10倍后，加入95％乙醇，使得溶液中乙醇含量达到55-85％，沉淀出多糖，冷冻干燥后即得精制的芦荟多糖。
上述的提取精制方法中的步骤D和E可用以下步骤替代：
将二次上清液浓缩至粗芦荟多糖重量的5～10倍后，加入95％乙醇，使得溶液中乙醇含量达到55-75％，沉淀出多糖，再将多糖加多糖5～10倍的蒸馏水，加热溶解，再加入95％乙醇，使得溶液中乙醇含量达到60-85％，沉淀出多糖。如此重复几次，一般二次至三次能达到精制要求，最后将沉淀出的多糖冷冻干燥，即得到本发明的精制芦荟多糖。
本发明所得到的精制的芦荟多糖主要为β-(1→4)线性结构的葡萄糖缩甘露糖单元连接面成的多糖，分子量在50000～70000之间，其结构式如下：
本发明的芦荟多糖的提取精制方法简单、易行、能规模化生产。
四、具体实施方式
实施例1：大孔树脂的处理
①大孔树脂的预处理
本发明所用树脂型号有AB-8、X-5型、H107型、S-8型、D3520型、D4006型、D4020型、NKA-9型(以上为天津南开大学化工厂生产)、XAD-2型、XAD-3型、HP型(以上为天津制胶厂生产)、SIP1300型、SIP1400型、M3-型(以上为上海医药工业研究院生产)、ABD-4型、DM-130型(以上为济宁山东鲁抗医药股份有限公司生产)、D101型(天津农药厂生产)、1300-1型、1300-66型(扬州制药厂生产)、100型、500型、600型(沧州恩成化工有限公司生产)等。这些树脂的处理原理和步骤十分相似。兹以AB-8型大孔吸附树脂为例介绍如下：
新树脂使用前必须进行预处理，以去除树脂中含有的少量低聚物、有机物及有害离子。试验时，将市售AB-8型大孔吸附树脂，用95％乙醇加热回流洗脱，洗至洗脱液蒸干后无残留物。经95％乙醇洗净的树脂挥去溶剂后保存备用。
AB-8型大孔吸附树脂以乙醇湿法装柱，继续用95％乙醇在柱上流动清洗，不时检查流出的乙醇，至与水混合不呈白色混浊为止。然后以大量的蒸馏水洗去乙醇；再用2％盐酸溶液在柱上流动清洗，再用大量的蒸馏水在柱上流动清洗，直至洗出液的pH值呈中性；接着用5％氢氧化钠溶液在柱上流动清洗，然后以大量的蒸馏水在柱上流动清洗，直至洗出液的pH值呈中性。AB-8型树脂柱备用。
②大孔树脂柱的再生：
树脂柱再生时，用不同浓度的乙醇梯度洗脱，直至流出液呈无色即可，然后以大量水洗去醇，即可进行下一次的提取分离。
实施例2：芦荟粗多糖的制备
称取芦荟鲜叶300g，切成小块状，加入蒸馏水3500ml，40～80℃水浴提取2小时，提取三次。放冷后纱布滤去残渣，将合并后的提取液浓缩至300～800ml，离心，上清液中加入95％乙醇，使得溶液中乙醇含量达到50％～80％，沉淀出多糖，真空干燥，即得到芦荟粗多糖。
实施例3：芦荟粗多糖精制方法
将制备的芦荟粗多糖40g，溶解于1000ml蒸馏水中，加入20％～50％三氯乙酸溶液或其它有机酸溶液(例如，三氟乙酸等)，使得三氯乙酸的最终浓度达到2％～6％，4℃静置过夜后离心去除沉淀。上清液浓缩至200～500ml，用滴管缓慢地将该上清液加样至大孔树脂柱床上(大孔树脂可以是AB-8型、X-5型、H107型、S-8型、D3520型、D4006型、D4020型、NKA-9型、XAD-2型、XAD-3型、HP型、SIP1300型、SIP1400型、M3-型、ABD-4型、DM-130型、D101型、1300-1型、-66型、100型、500型、或600型等，其精制结果雷同)。打开活塞，同时开始收集流出液。待样品液完全进入树脂柱床后，再用蒸馏水冲洗至流出液呈无色透明为止。试验中流速控制为50～60滴/min(约2～2.5ml/min)。合并流出液，浓缩至200～500ml，加入95％乙醇，使得溶液中乙醇含量达到55％～85％，沉淀出多糖，冷冻干燥后得到本发明的芦荟精制多糖。
实施例4：溶剂法提纯芦荟多糖
将制备的芦荟粗多糖40g，溶解于1000ml蒸馏水中，加入20％～50％三氯乙酸溶液或其它有机酸溶液(例如，三氟乙酸等)，使得三氯乙酸的最终浓度达到2％～6％，4℃静置过夜后离心去除沉淀。合并上清液并浓缩至200～500ml，加入95％乙醇，使得溶液中乙醇含量达到55％～75％，沉淀出多糖。真空干燥后，多糖再置于适量的蒸馏水中，搅拌加热溶解，浓缩至200～500ml，加入95％乙醇，使得溶液中乙醇含量达到60％～85％，沉淀出多糖。如此反复几次，逐步提高沉淀多糖所需要的溶液中乙醇含量。最后将沉淀出的多糖冷冻干燥，即得到本发明的芦荟多糖。
Claims (2)
1.一种芦荟多糖的提取精制方法，其特征是包括以下步骤：
A.将芦荟鲜叶切成小块状，加入其质量的10～12倍的蒸馏水在40-80℃用水提取1-3小时，提取3次，滤取提取液，将合并后的提取液浓缩至总体积的1/13-1/30；
B.将提取液离心，取上清液，在上清液中加入95％乙醇，使得溶液中乙醇含量达到50-80％，沉淀出粗芦荟多糖；
C.将粗芦荟多糖溶于水，加入20～50％三氯乙酸或三氟乙酸，使得三氯乙酸或三氟乙酸的最终浓度达到2-6％，4℃静置过夜后离心去除沉淀，得二次上清液；
D.将二次上清液上聚苯乙烯大孔吸附树脂柱床，并用水洗脱至流出液无色透明；
E.合并流出液，并浓缩至粗芦荟多糖质量的5-10倍后，加入95％乙醇，使溶液中乙醇含量达到55-85％，沉淀出多糖，冷冻干燥，即得精制的芦荟多糖。
2.根据权利要求1所述的提取精制方法，其特征是步骤D中所说的聚苯乙烯大孔吸附树脂是AB-8型、X-5型、H107型、S-8型、D3520型、D4006型、D4020型、NKA-9型、XAD-2型、XAD-3型、HP型、SIP1300型、SIP1400型、M3型、ABD-4型、DM-130型、D101型、1300-1型、1300-66型、100型、500型或者600型大孔吸附树脂。
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