CN1418892A - 芦荟多糖的提取精制方法 - Google Patents
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Abstract
一种芦荟多糖的提取精制方法,其特征是包括以下步骤:将芦荟鲜叶切成小块状,在40~80℃用水提取,滤取提取液;将提取液离心,取上清液,在上清液中加入95%乙醇,使得溶液中乙醇含量达到50-80%,沉淀出粗芦荟多糖;将粗芦荟多糖溶于水,加入20~50%三氯乙酸或三氟乙酸,使得三氯乙酸或三氟乙酸的最终浓度达到2-6%,静置后离心去除沉淀得二次上清液;将二次上清液上大孔树脂柱床,并用水洗脱至流出液无色透明;合并流出液,并浓缩,加入95%乙醇,使溶液中乙醇含量达到55-85%,沉淀出多糖,冷冻干燥,即得精制的芦荟多糖。
Description
一、技术领域
本发明涉及从芦荟属植物[例如:斑纹芦荟(Aloe vern var.chinensis)、库拉索芦荟(Aloe barbadensis)、木立芦荟(Aloe arborescens)、好望角芦荟(Aloe ferox)、索科特芦荟(Aloe socotrina)、皂角芦荟(Aloe saponaria)等]中提取分离一种多糖的方法。
二、背景技术
芦荟是一种药用价值很高的植物,现代药理学研究表明它有广泛的药理活性,如致泻(参见:中药大辞典上海科学出版社,1986:1076)、抗肿瘤(参见:Phytotherapy Research,1993 Jul,7,s43-s47)、抗菌消炎(Glycobiology,1995 Jan,5,39-44)、促进免疫(Neuroscience Letters,1997 Nov,238(1-2),65-68)、促伤口愈合(参见:Journal of Ethnopharmacology,1998 Jan,59(3),195-201)、抗辐射(参见:Immunopharmacology,1997 Oct,37(2-3),153-162)、抗胃溃疡(参见:The Lancet,1999 Jul,354(9175),307)、保护肝脏(参见:Nutrition,1998 Nov,14(11-12),846-852)、降血糖(参见:Phytomedicine,1996 Mar,3,241-243)等作用。
芦荟叶凝胶系由糖类物质组成的混合物,该混合物主要含多糖。此多糖为葡萄糖缩甘露聚糖,是包含有1→4位连接的线性聚合物。并含少量阿拉伯糖(arabinose)、鼠李糖(rhamnose)、果糖(fructose)、蔗糖(sucrose)、木糖(xylose)、葡萄糖醛酸(glucuronic acid)等(参见:佛山科学技术学院学报(自然科学版),2000Jun,18(2):76-80)。芦荟的诸多药理作用(如对免疫系统的作用、抗自由基作用、抗辐射作用、抗胃溃疡、促进伤口愈合等)与芦荟所含多糖物质有关,但目前尚未见有芦荟多糖的提取精制方法。
本发明的目的在于提供一种芦荟多糖的规模化提取精制方法。
三、发明内容
本发明的技术方案如下:
一种芦荟多糖的提取精制方法,它包括以下步骤:
A.将芦荟鲜叶切成小块状,加入其重量的10~12倍的蒸馏水,在40~80℃提取1~3小时,提取3次,滤取提取液,将合并后的提取液浓缩至总体积的1/13~1/30;
B.将步骤A中的提取液离心,取上清液,在上清液中加入95%乙醇,使得溶液中乙醇含量达到50-80%,沉淀出粗芦荟多糖;
C.将粗芦荟多糖加蒸馏水溶解,蒸馏水的用量一般为粗芦荟多糖重量的20~25倍,加入20~50%三氯乙酸或其它有机酸溶液(例如三氟乙酸),使得三氯乙酸的最终浓度达到2-6%,4℃静置过夜后离心去除沉淀得二次上清液;
D.将二次上清液浓缩至粗芦荟多糖重量的5~10倍,上大孔树脂柱床,大孔树脂可以是AB-8型、X-5型、H107型、S-8型、D3520型、D4006型、D4020型、NKA-9型、XAD-2型、XAD-3型、HP型、SIP1300型、SIP1400型、M3型、ABD-4型、DM-130型、D101型、1300-型、1300-66型、100型、500型或者600型大孔树脂,收集流出液,待二次上清液完全进入树脂柱床后,再用蒸馏水洗脱至流出液呈无色透明;
E.合并流出液,浓缩至粗芦荟多糖重量的5~10倍后,加入95%乙醇,使得溶液中乙醇含量达到55-85%,沉淀出多糖,冷冻干燥后即得精制的芦荟多糖。
上述的提取精制方法中的步骤D和E可用以下步骤替代:
将二次上清液浓缩至粗芦荟多糖重量的5~10倍后,加入95%乙醇,使得溶液中乙醇含量达到55-75%,沉淀出多糖,再将多糖加多糖5~10倍的蒸馏水,加热溶解,再加入95%乙醇,使得溶液中乙醇含量达到60-85%,沉淀出多糖。如此重复几次,一般二次至三次能达到精制要求,最后将沉淀出的多糖冷冻干燥,即得到本发明的精制芦荟多糖。
本发明所得到的精制的芦荟多糖主要为β-(1→4)线性结构的葡萄糖缩甘露糖单元连接面成的多糖,分子量在50000~70000之间,其结构式如下:
本发明的芦荟多糖的提取精制方法简单、易行、能规模化生产。
四、具体实施方式
实施例1:大孔树脂的处理
①大孔树脂的预处理
本发明所用树脂型号有AB-8、X-5型、H107型、S-8型、D3520型、D4006型、D4020型、NKA-9型(以上为天津南开大学化工厂生产)、XAD-2型、XAD-3型、HP型(以上为天津制胶厂生产)、SIP1300型、SIP1400型、M3-型(以上为上海医药工业研究院生产)、ABD-4型、DM-130型(以上为济宁山东鲁抗医药股份有限公司生产)、D101型(天津农药厂生产)、1300-1型、1300-66型(扬州制药厂生产)、100型、500型、600型(沧州恩成化工有限公司生产)等。这些树脂的处理原理和步骤十分相似。兹以AB-8型大孔吸附树脂为例介绍如下:
新树脂使用前必须进行预处理,以去除树脂中含有的少量低聚物、有机物及有害离子。试验时,将市售AB-8型大孔吸附树脂,用95%乙醇加热回流洗脱,洗至洗脱液蒸干后无残留物。经95%乙醇洗净的树脂挥去溶剂后保存备用。
AB-8型大孔吸附树脂以乙醇湿法装柱,继续用95%乙醇在柱上流动清洗,不时检查流出的乙醇,至与水混合不呈白色混浊为止。然后以大量的蒸馏水洗去乙醇;再用2%盐酸溶液在柱上流动清洗,再用大量的蒸馏水在柱上流动清洗,直至洗出液的pH值呈中性;接着用5%氢氧化钠溶液在柱上流动清洗,然后以大量的蒸馏水在柱上流动清洗,直至洗出液的pH值呈中性。AB-8型树脂柱备用。
②大孔树脂柱的再生:
树脂柱再生时,用不同浓度的乙醇梯度洗脱,直至流出液呈无色即可,然后以大量水洗去醇,即可进行下一次的提取分离。
实施例2:芦荟粗多糖的制备
称取芦荟鲜叶300g,切成小块状,加入蒸馏水3500ml,40~80℃水浴提取2小时,提取三次。放冷后纱布滤去残渣,将合并后的提取液浓缩至300~800ml,离心,上清液中加入95%乙醇,使得溶液中乙醇含量达到50%~80%,沉淀出多糖,真空干燥,即得到芦荟粗多糖。
实施例3:芦荟粗多糖精制方法
将制备的芦荟粗多糖40g,溶解于1000ml蒸馏水中,加入20%~50%三氯乙酸溶液或其它有机酸溶液(例如,三氟乙酸等),使得三氯乙酸的最终浓度达到2%~6%,4℃静置过夜后离心去除沉淀。上清液浓缩至200~500ml,用滴管缓慢地将该上清液加样至大孔树脂柱床上(大孔树脂可以是AB-8型、X-5型、H107型、S-8型、D3520型、D4006型、D4020型、NKA-9型、XAD-2型、XAD-3型、HP型、SIP1300型、SIP1400型、M3-型、ABD-4型、DM-130型、D101型、1300-1型、-66型、100型、500型、或600型等,其精制结果雷同)。打开活塞,同时开始收集流出液。待样品液完全进入树脂柱床后,再用蒸馏水冲洗至流出液呈无色透明为止。试验中流速控制为50~60滴/min(约2~2.5ml/min)。合并流出液,浓缩至200~500ml,加入95%乙醇,使得溶液中乙醇含量达到55%~85%,沉淀出多糖,冷冻干燥后得到本发明的芦荟精制多糖。
实施例4:溶剂法提纯芦荟多糖
将制备的芦荟粗多糖40g,溶解于1000ml蒸馏水中,加入20%~50%三氯乙酸溶液或其它有机酸溶液(例如,三氟乙酸等),使得三氯乙酸的最终浓度达到2%~6%,4℃静置过夜后离心去除沉淀。合并上清液并浓缩至200~500ml,加入95%乙醇,使得溶液中乙醇含量达到55%~75%,沉淀出多糖。真空干燥后,多糖再置于适量的蒸馏水中,搅拌加热溶解,浓缩至200~500ml,加入95%乙醇,使得溶液中乙醇含量达到60%~85%,沉淀出多糖。如此反复几次,逐步提高沉淀多糖所需要的溶液中乙醇含量。最后将沉淀出的多糖冷冻干燥,即得到本发明的芦荟多糖。
Claims (3)
1.一种芦荟多糖的提取精制方法,其特征是包括以下步骤:
A.将芦荟鲜叶切成小块状,在40~80℃用水提取,滤取提取液;
B.将提取液离心,取上清液,在上清液中加入95%乙醇,使得溶液中乙醇含量达到50-80%,沉淀出粗芦荟多糖;
C.将粗芦荟多糖溶于水,加入20~50%三氯乙酸或三氟乙酸,使得三氯乙酸或三氟乙酸的最终浓度达到2-6%,静置后离心去除沉淀得二次上清液;
D.将二次上清液上大孔树脂柱床,并用水洗脱至流出液无色透明;
E.合并流出液,并浓缩,加入95%乙醇,使溶液中乙醇含量达到55-85%,沉淀出多糖,冷冻干燥,即得精制的芦荟多糖。
2.根据权利要求1所述的提取精制方法,其特征是步骤D中所说的大孔树脂是AB-8型、X-5型、H107型、S-8型、D3520型、D4006型、D4020型、NKA-9型、XAD-2型、XAD-3型、HP型、SIP1300型、SIP1400型、M3型、ABD-4型、DM-130型、D101型、1300-型、1300-66型、100型、500型或者600型大孔树脂。
3.根据权利要求1所述的提取精制方法,其特征是步骤D和E可用以下步骤替代:
将二次上清液浓缩至粗芦荟多糖重量的5~10倍后,加入95%乙醇,使得溶液中乙醇含量达到55-75%,沉淀出多糖,再将多糖加多糖重量5~10倍的蒸馏水,加热溶解,再加入95%乙醇,使得溶液中乙醇含量达到60-85%,沉淀出多糖。如此重复2~3次,最后将沉淀出的多糖冷冻干燥,即得到本发明的精制芦荟多糖。
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