CN106456525B - 用于个人护理组合物的芦荟提取物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及用于增强皮肤细胞中的紧密连接的芦荟提取物的特定级分。本发明更具体涉及此类级分在皮肤、口腔和头发护理组合物中的用途。本发明的芦荟提取物包含60至95%的分子量为2至3 kDa的多糖;和小于5%的多酚,其中所述多糖被三氟乙酸水解。
Description
发明领域
本发明涉及用于增强皮肤细胞中的紧密连接的芦荟提取物的特定级分。本发明更具体涉及此类级分在皮肤、口腔和头发护理组合物中的用途。
发明背景
人们试图仔细护理他们的身体以及宠物的身体的外表面以实现良好的整体健康。人们关心的具体的与皮肤相关的问题包括无感染的良好的皮肤健康、良好的皮肤色调和足够的湿润。口腔是人们积极护理以维护的另一外表面。他们倾向于他们的口腔(包括牙龈和牙齿)没有诸如空洞、牙石、牙龈炎、龋齿和口腔异味(也称作口臭)以及牙斑的问题。头发和头皮护理也是人们关注的。人们通常倾向于具有稠密的长发以及最少的脱发。头皮屑是经常出现的头皮问题,其牵涉到真菌微生物。
包括皮肤、口腔和头皮的全部上述表面的卫生通常通过保持它们免于感染来实现。解决感染的一种方式是在感染开始后用抗微生物剂处理它们。另一手段是在表面上留下最少量的抗微生物活性物使得任何入侵微生物被杀死或灭活以最小化疾病蔓延。本发明人已经研究了又一种手段,其为改进所需表面的固有免疫力(innate immunity)的手段。
本发明人已经发现,芦荟提取物的特定级分增强皮肤细胞中细胞间的紧密连接,由此提供增强的皮肤湿润并降低皮肤感染的几率。本发明还涉及为了改进的牙龈健康在口腔护理组合物中使用这样的级分和为了改进头发纤维强度以及作为抗头皮屑剂在头发护理组合物中使用这样的级分。
FR 2932386 (Dohan David Marcel, 2009)公开了用于人或动物中的口腔、真皮或粘膜施用的基于天然提取物的组合物。该组合物包含至少三种原始天然生物活性(植物、动物或矿物的)化合物,该组合物可具有另外的成分,其中所述施用通过以下方式完成:在口腔组织上(优选在牙龈、面颊粘膜和舌头后部上)通过凝胶、牙膏、用于超声仪器的灌洗液(在牙科中)、漱口剂或锭剂或咀嚼片(chewable);在组织表面(皮肤、粘膜)上通过凝胶、膏霜、施用棒或冲洗溶液。
US 6436679 (UNIGEN INC, 2002)公开了用于从芦荟制备和分离生物活性多糖的方法。这包括活化的多糖混合物(在本文中称为"Immuno-10"),其由该发明的方法制备。所引用的技术还包括使用多糖作为免疫刺激剂(immunostimulating agent)、免疫调节剂和伤口愈合剂。所得的免疫调节复合物相比于使用现有技术醇沉淀方案分离的批量碳水化合物(bulk carbohydrates)具有更高的活性且更为稳定。
CN1948346 (Yunnan, 2007)公开了芦荟多糖的分级提取方法,其包括以下步骤:向浓缩芦荟产品中加入8-10倍的95%乙醇,混合后将其静置并沉淀,之后过滤,并收集芦荟粗多糖。此后加水并混合以溶解多糖,之后首先使其逐级通过截留分子量为200000-4000的超滤膜,然后使其通过纳滤膜以将其浓缩,以得到不同分子量的芦荟多糖。该出版物公开了与本发明相比更高分子量分数的芦荟级分,且因此未获得本发明的优点。
因此,本发明的一个目标在于制备为人体或动物体的局部表面提供增强的免疫力的活性物。
发明概述
本发明涉及芦荟提取物,其包含60至95wt%的分子量为2至3 kDa的多糖;和小于5wt%的多酚,其中所述多糖被三氟乙酸(TFA)水解。
本发明的一个优选方面涉及个人护理组合物,其包含0.1至10wt%的本发明的芦荟提取物;和化妆品上可接受的基料。
本发明的又一优选方面涉及为人体或动物体的外表面提供增强的免疫力的方法,所述方法包括施用本发明的组合物的步骤。
发明详述
从对以下详细描述和所附权利要求的阅读,这些和其他的方面、特征和优点将对本领域技术人员而言变得明确。为了避免疑惑,本发明的一个方面的任何特征可用于本发明的任何其他方面。词语“包含”旨在表示“包括”,但不必然是“由…组成”或“由…构成”。换言之,列出的步骤或选项不需要是穷举的。应注意,以下描述中给出的实施例旨在阐明本发明且不旨在将本发明限制在那些实施例本身。类似地,全部的百分比为重量/重量百分比,除非另行指明。除了在操作例和对比例中,或另行明确指明之处以外,本说明书中指明材料的量或反应条件、材料的物理特性和/或用途的全部数字将理解为被词语“约”所修饰。除非另行指定,以格式“x至y”表示的数值范围理解为包括x和y。当对于特定的特征以“x至y”的格式描述多个优选范围时,应理解也涉及组合不同端点的全部范围。
提取物表示从植物源提取的材料,包括经提取的材料的级分和衍生物。当用合适的溶剂(例如水)提取时,提取物最初通常为液体形式。但提取物可之后以固体形式通过将溶剂与提取物的液体形式分离来制备。
本文所用的“个人护理组合物”旨在包括用于局部施用至人体或动物体(优选人体,且包括皮肤、头皮、头发和口腔)的外表面的组合物。这样的组合物可通常被分类为驻留型或洗去型,且包括施用至人体也用于改进免疫力、外观、清洁、气味控制、湿润或整体美观的任何产品。所述组合物优选为驻留型产品。本发明的用于皮肤护理的组合物可为液体、护肤液、膏霜、凝胶或化妆水形式,且可用器具或经由面膜、垫剂或贴剂施用。优选所述组合物为膏霜、护肤液或凝胶形式。本文所用的“皮肤”旨在包括面部和身体(例如颈部、胸部、背部、手臂、腋下、手、腿和臀部)上的皮肤。
本发明的组合物还与头发和头皮上的施用相关。用于这样的在头皮或头发上的施用的产品通常提供为头发纤维提供强度的益处和抗头皮屑益处。头发护理组合物以发油、护发凝胶和膏霜形式以及以洗掉型产品如香波和护发素形式递送。
本发明的组合物也具有对口腔护理的益处。许多口腔护理产品如牙膏、牙粉、漱口剂为洗掉型,且除了这些类型的产品之外,本发明还可以用于牙齿和牙龈护理的驻留型的凝胶、膏霜和油膏形式配制。
本发明涉及芦荟提取物。
芦荟(也称作库拉索芦荟)属于百合科,其含有几百种物种。芦荟仅以栽培形式存在且不具有天然存在的种群。芦荟是无茎的或非常短茎的肉质植物,其生长直到约60至100cm的高度。叶子厚且肉质且表现为绿色至灰绿色颜色。许多与芦荟相关的健康益处归因于叶子的凝胶中含有的多糖。化学分析揭示了芦荟凝胶含有甘露糖聚合物与一些葡萄糖和其他糖,其中最为重要的是乙酰化甘露聚糖(Acemannan)。除了这些,也已知存在其他组分例如糖蛋白、酶、氨基酸、维生素和矿物质。来自芦荟的提取物广泛用于化妆品和替代药物工业中,由于具有活肤(rejuvenating)或舒缓(soothing)性质而市场化。
对于制备本发明的提取物而言,芦荟叶是尤其优选的。
对于在本发明中使用而言可用的芦荟提取物包含(i)60至95wt%的分子量为2至3kDa的多糖;和小于5%的多酚,其中所述多糖被三氟乙酸(TFA)水解。通常可得的芦荟的水提取物包含30至60wt%的分子量小于10 kD的多糖和10至20wt%的多酚。本发明人已经对该提取物进行分级以制备具有低分子量多糖和低得多的量的多酚的特定级分。本发明的提取物优选包含小于2wt%的多酚。他们已经通过三氟乙酸进一步选择性地水解该级分以基本上去除大部分的侧链单糖以制备甚至更为有效的活性物。可用于本发明目的选择性多糖优选包含以下聚合物骨架:
作为一个优选的方面,提取物的多糖级分包含高于30%的具有上述聚合物骨架的多糖。他们已经发现该级分在出于本发明目的的增强紧密连接方面是非常有效的。
进一步地,作为本发明的一个优选的方面,提供可使用包括以下步骤的方法获得的芦荟提取物:
(i)用水提取芦荟;
(ii)使提取物通过10 KD截留过滤器(cut-off filter)以获得低分子量级分;
(iii)通过添加乙醇使低分子量级分中的多糖沉淀;
(iv)用三氟乙酸水解多糖;
(v)去除过量的酸;和
(vi)使用乙醇使经水解的多糖沉淀;和
(vii)干燥沉淀以产生提取物。
优选使用蒸发法将三氟乙酸从混合物中去除。
不希望被理论所束缚,本发明人相信本发明的益处经由增强细胞间紧密连接(TJ)而存在。TJ在上皮中的存在使其能够充当屏障并阻止病原体和外来物质进入人体。TJ是由跨膜蛋白和胞浆蛋白组成的多蛋白复合物。TJ屏障被病原体破坏且病原体已经发展出不同策略来去除TJ和进入到宿主组织中。由病原体感染造成的TJ损失的主要影响可见于疾病如肠道中的腹泻和口腔中的牙周炎。口腔、肠和皮肤组织的健康和卫生取决于TJ的稳定性。本发明人已经制备了芦荟提取物的特定级分,该级分与TJ相互作用由此增强它们的稳定性和紧密性以提供上述益处。
根据本发明的一个优选方面,提供个人护理组合物,其包含(i)0.1至10wt%的本发明的提取物;和(ii)化妆品上可接受的基料。
所述组合物优选包含0.1至5wt%的提取物。化妆品上可接受的基料例如为了提供用于皮肤、口腔、头发或头皮护理的产品。
化妆品上可接受的基料,尤其是当以膏霜或护肤液形式制备时,优选包含脂肪酸和任选的脂肪酸皂。当脂肪酸存在时,其优选以组合物的1至25wt%,优选3至20wt%包含脂肪酸。当包含皂时,优选以0.1至10%,更优选0.1至3%添加。在用于本发明的组合物中的脂肪酸中,C12至C20脂肪酸是尤其优选的。进一步更优选的脂肪酸是C14至C18脂肪酸。在膏霜中,脂肪酸优选基本上为硬脂酸和棕榈酸的混合物。膏霜基料中的皂包括脂肪酸的碱金属盐,如钠盐或钾盐。所述皂优选为脂肪酸混合物的钾盐。雪花膏基料中的脂肪酸通常使用hystricacid来制备,所述hystric acid基本上(通常约90至95%)为硬脂酸和棕榈酸的混合物。因此,包含hystric acid及其皂来制备所述组合物在本发明的范围内。化妆品上可接受的基料通常为组合物的10至99.9wt%,优选50至99wt%。化妆品上可接受的基料优选包含水。优选以组合物的35至90wt%,更优选50至85wt%,还更优选50至80wt%包含水。
当以凝胶形式制备皮肤或头皮护理组合物时,其主要包含50至99%水的高量的水,用一种或多种聚合物将其增稠。可使用天然或合成来源的聚合物。当具有合成来源时,所述聚合物优选为聚丙烯酸酯聚合物。
根据本发明的皮肤或头皮护理组合物也可包含其他稀释剂。稀释剂充当用于组合物中存在的其他材料的分散剂或载体,以在将组合物施用至皮肤时促进它们的分布。除水之外的稀释剂可包括液体或固体润肤剂、溶剂、保湿剂、增稠剂和粉末。
本发明的组合物可包含宽范围的其他任选成分。The CTFA Cosmetic IngredientHandbook, Second Edition, 1992(通过引用将其全部内容并入本文)描述了通常在皮肤护理工业中使用的适合用于本发明的组合物中的各种各样的非限制性化妆品和药物成分。实例包括:抗氧化剂、粘合剂、生物添加剂、缓冲剂、着色剂、增稠剂、聚合物、收敛剂、香料、保湿剂、不透明剂、调理剂、去角质剂、pH调节剂、防腐剂、天然提取物、精油、皮肤感知剂(skin sensates)、皮肤舒缓剂和皮肤愈合剂。
当所述组合物涉及口腔护理应用时,化妆品上可接受的基料为口腔上可接受的基料。口腔上可接受的基料选自水、碳酸钙、二氧化硅或口腔上可接受的表面活性剂。优选的口腔上可接受的基料是水和表面活性剂的混合物。优选的口腔上可接受的表面活性剂是碱金属烷基硫酸盐或内铵盐。口腔上可接受的基料取决于口腔护理组合物的递送形式。本发明的组合物中包含的口腔上可接受的基料的量还取决于基料类型(如果包含基料),且该量通常在组合物的0.05至99.9wt%,优选1至90wt%,还更优选5至70wt%的宽范围内。根据本发明的组合物的合适形式为抗菌漱口剂、牙膏或牙粉,优选为牙膏或牙粉。
漱口剂
当将所述组合物配制为抗菌漱口剂时,口腔上可接受的基料是水和表面活性剂的混合物。本发明的抗微生物漱口剂组合物优选包含组合物的0.05至10wt%,更优选0.05至8wt%,最优选0.5至5wt%的表面活性剂。所述表面活性剂优选具有阳离子、阴离子或两性离子类别,最优选具有阳离子类别。当存在阴离子表面活性剂时,其优选选自烷基磺酸、脂肪酸或烷基醚硫酸盐的碱金属或碱土金属盐。当存在两性离子表面活性剂时,其优选选自内铵盐、磺基内铵盐、羟基磺基内铵盐或氨基羧酸盐。当存在阳离子表面活性剂时,其为苯扎氯铵、烷基氯化吡啶鎓(alkyl pyridinium chloride)或季铵型Gemini表面活性剂。
牙膏
本发明的组合物可以牙膏形式递送。当所述组合物是牙膏时,口腔上可接受的基料是可为碳酸钙或研磨型二氧化硅(abrasive silica)的磨料。当碳酸钙是磨料时,牙膏为不透明糊料形式。当使用研磨型二氧化硅时,牙膏通常以透明凝胶形式递送。牙膏也优选包含组合物的2至15wt%的表面活性剂。优选的表面活性剂在性质上为阴离子或两性的。阴离子表面活性剂优选为碱金属烷基硫酸盐,更优选月桂基硫酸钠(SLS)。也可使用阴离子表面活性剂的混合物。两性表面活性剂优选为内铵盐,更优选烷基酰胺基丙基内铵盐(其中烷基是直链C10~C18链),且最优选是椰油酰胺基丙基内铵盐(CAPB)。也可使用两性表面活性剂的混合物。在口腔护理应用中合适的表面活性剂浓度通常为总组合物的约2wt%至约15wt%,优选约2.2wt%至约10wt%,更优选约2.5至约5wt%。
不透明牙膏
当碳酸钙是磨料时,其通常以组合物的15至70wt%,更优选30至60wt%存在。
除了碳酸钙之外,为了增强研磨作用在不透明牙膏中也可包含研磨型二氧化硅。可以4至15%,优选6至12%,且还更优选7至10%包含研磨型二氧化硅。或者,可以组合物的0.0.1至2 wt%,优选0.1至0.8wt%,还更优选0.3至0.7 wt%包含珍珠岩。
在这些牙膏中通常以组合物的15至40wt%,优选20至30wt%包含水。
优选的组合物包含保湿剂,例如木糖醇、甘油或山梨醇。甘油和山梨醇是特别优选的。优选地,所述组合物包含0.1至20 wt%的保湿剂。更优选的组合物包含1至15 wt%的保湿剂,而进一步优选的组合物包含5至13 wt%的保湿剂。
凝胶牙膏
制备凝胶牙膏的优选的组合物包含研磨型二氧化硅。它们优选具有1.41-1.47,优选1.435-1.445的低折射率,更优选具有5至15微米的重量平均粒度,10至100 m2/g的BET(氮)表面积和约70 - 150 cm3/100 g的吸油量。这些二氧化硅在组合物中的量通常为2-60wt%,经常为2-20wt%,且更优选5至12 wt%。
也可将增稠二氧化硅并入到凝胶牙膏中。它们通常以组合物的4至12 wt%,优选5至10wt%并入。在这些牙膏中通常以组合物的8至14wt%,优选8至10wt%包含水。这些水的量不包括从其他成分(例如山梨醇)的水溶液并入组合物中的水。
用于任何类型的牙膏(不透明或凝胶型)的组合物也可包含抗龋齿剂、粘合剂、增稠剂、调味剂、稳定剂、聚合物、维生素、缓冲剂和抗牙结石剂。
根据本发明的又一方面,提供为人体或动物体外表面提供增强的免疫力的方法,所述方法包括施用本发明的组合物的步骤。增强的免疫力表示免疫力好于由常规芦荟水提取物所提供的免疫力。
根据本发明的的又一方面,提供包含0.1至10%的本发明的提取物和化妆品上可接受的基料的个人护理组合物,其用于为人体或动物体的外表面提供增强的免疫力。
根据本发明的的又一方面,提供所述提取物用于赋予人体或动物体的外表面增强的免疫力的用途。
根据本发明的的又一方面,提供本发明的提取物在制备本发明的个人护理组合物中的用途。
所述用途优选为非治疗性的。
现将借助于以下非限制性实施例来举例说明本发明。
实施例
实施例A至D和1,2:各种芦荟级分在增强细胞间紧密连接中的功效
如下文所述制备各种芦荟级分:
制备芦荟级分:
从商业来源获得经喷雾干燥的芦荟叶凝胶粉末(水提取物)。然后将其溶解在水中。然后通过尺寸排阻(size exclusion)和离心来制备小于10KD的级分。然后浓缩该级分以减小体积(约5ml至1ml)并向溶液添加5倍体积的乙醇以沉淀出多糖。然后将溶液静置30分钟以完全沉淀。对溶液离心以收集沉淀。用乙醇重复洗涤沉淀(3次)并然后干燥以获得芦荟多糖级分(F1)。
在回流条件下使用三氟乙酸(TFA) (1g的F1在2.5ml 2M TFA中)水解F1级分2小时。水解后,将溶液浓缩至干。通过添加甲苯/甲醇重复脱除来完全去除TFA。
向经干燥的材料添加1.5ml水以完全溶解材料。添加5倍体积的乙醇以沉淀出部分水解的多糖。通过离心将多糖从该溶液中分离,用乙醇重复洗涤并然后干燥以获得最优选的级分,将其命名为级分F2。
实施例-A:指示无任何处理情况下的细胞的“对照”样品。
实施例-B:用500μg/ml浓度的溶解在水中的芦荟凝胶粉末的水提取物处理的细胞。
实施例-C:用500μg/ml浓度的溶解在水中的芦荟凝胶粉末的<10KD级分处理细胞。
实施例-D:用500μg/ml浓度的级分F1(制备其的程序为本文上文中所描述的)处理细胞。该级分的分子量为约2KDa。
实施例-1:用本文上文中所描述的500μg/ml浓度的级分F2处理细胞。该级分的分子量为约2KDa。测得该级分中多糖的百分比为约91%。该级分中的多酚含量小于2%。
使用以下程序针对上述样品增强细胞间紧密连接的能力对其进行分析:
TEER的测量:
TEER代表跨上皮细胞电阻。其测量紧密连接屏障的稳定性。程序如下:
1. 将Millipore细胞培养插件(cell culture inserts)(Millipore;商品目录号:PIHT12R48)放置在24孔板中。
2. 将500µl培养基分配在孔内空间中但在插件外。
3. 将在KGM(LONZA,商品目录号:CC3111)中的Keratinocytes (LONZA,商品目录号192907)胰蛋白酶化并再悬浮。将80,000细胞/孔(在500µl培养基中)接种到插件中并在37℃下在5% CO2中孵育。
4. 在第1天,测量每个孔中的跨上皮细胞电阻(使用来自Millipore的MillicellERS-2 Voltohmmeter)。
5. 用新鲜KGM/活性物(腔室内200 µl和腔室外800 µl)替代来自孔的用过的培养基并在37℃下在5% CO2中孵育。
6. 重复步骤4-5直到第5天。
7. 通过添加次氯酸钠(作为安全处置细胞的一部分)终止实验。
表中的数据显示在第5天的TEER值,其与在第5天结束时的屏障稳定性相关。
使用TEER值测量的关于功效的数据总结在表-1中。
表-1
实施例 | 在第5天的TEER值 | S.D. |
A. | 99 | 2 |
B. | 1159 | 15 |
C. | 1271 | 10 |
D. | 1270 | 13 |
1 | 3156 | 116 |
表1中的数据表明根据本发明的芦荟级分(实施例-1)相比于各个其他级分提供极其增强的象征改进的免疫力的紧密连接增强。
如下文所公开的,进行另一组实验以将本发明的级分的益处与其他级分进行区分。
实施例E:用500 μg/ml浓度的用纤维素酶水解的F1级分(如上所述)来处理细胞。为此,用与上文所述相同浓度下的纤维素酶(Sigma, 产品目录号C1184)代替TFA。
实施例F:用500 μg/ml浓度的在去除如前面部分所描述的小于10KD的级分之后获得的芦荟凝胶水提取物(大于10KD的级分)来处理细胞。
实施例2:用500μg/ml浓度的本文上文中所描述的级分F2处理细胞。该级分的分子量为约2KDa。测得该级分中多糖的百分比为约91%。该级分中的多酚含量小于2%。
实验实施方案和TEER值的测量与上文所提及的相同。
这些实验的结果总结在下表2中。
实施例 | 第5天的TEER值 | S.D. |
对照 (仅细胞,无级分) | 126 | 5.0 |
E | 247 | 16.8 |
F | 378 | 2.16 |
2 | <u>701</u> | 3.95 |
从上表明确的是根据本发明的芦荟级分(实施例2,其包含TFA水解的多糖)当与实施例E、F和G相比时提供大为增强的紧密连接增强。
Claims (7)
1.芦荟提取物,其包含
(i)60至95wt%的分子量为2至3kDa的经水解的多糖;和
(ii)小于5wt%的多酚;
其中所述多糖被三氟乙酸(TFA)水解。
2.根据权利要求1所述的提取物,其包含小于2wt%的多酚。
3.根据权利要求1或2所述的提取物,其中高于30wt%的所述多糖包含以下聚合物骨架:
4.根据权利要求1或2所述的芦荟提取物,所述提取物可使用包括以下步骤的方法获得:
(i)用水提取芦荟;
(ii)使提取物通过10KD截留过滤器以获得低分子量级分;
(iii)通过添加乙醇使低分子量级分中的多糖沉淀;
(iv)用三氟乙酸水解多糖;
(v)去除过量的酸;和
(vi)使用乙醇使经水解的多糖沉淀;和
(vii)干燥沉淀以产生提取物。
5.根据权利要求4所述的提取物,其中使用芦荟叶。
6.个人护理组合物,其包含
(i)0.1至10wt%的根据前述权利要求中任一项所述的提取物;和
(ii)化妆品上可接受的基料。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的提取物用于制备赋予人体或动物体的外表面增强的免疫力的组合物中的用途。
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