CN100554326C - 一种黄精免疫多糖、其组合物和它的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种从中药黄精中提取分离出的具有免疫活性的多糖，再经适当配比获得一种复合多糖组合物。该多糖及其多糖组合物均具有免疫促进作用，可作为肿瘤等免疫功能低下疾病的辅助治疗药物或作为具抗衰老作用的保健品。

Description

一种黄精免疫多糖、其组合物和它的用途
技术领域
本发明涉及一种免疫多糖，具体地说就是涉及一类从中药黄精中提取的黄精多糖及组合物，以及它们对机体的免疫作用。
背景技术
癌症是目前导致人类死亡的主要原因之一，更为严重的是虽然经过几十年的研究，对大多数癌症仍然没有专一性强、疗效好、副作用小的抗癌药物。现在临床上应用的抗癌药物主要为各种化疗剂，通常毒副作用较大，而且在使用的过程中通常会造成免疫抑制，从而不利于发挥机体自身的防御功能。上世纪九十年代后，免疫治疗已成为继手术、放疗、化疗之后的又一种治疗癌症的方法，它主要使用各种药物激活自身免疫防御系统，从而特异性地杀死体内的癌细胞，目前应用的免疫促进药物有多种，如多种细胞因子、免疫相关的细胞(如树突状细胞)、多糖类。本发明涉及的黄精复合多糖即属于多糖类，是一种免疫调节剂(或称为生物效应调节剂BRM)。
黄精是一种常用的中药，具有补气养阴、健脾、润肺、益肾的功效。其药材为百合科植物黄精Polygonatum sibiricum Red.经炮制后的干燥根茎。黄精主产于河北、内蒙古、陕西等省区，其化学成分主要有多种氨基酸和多糖，国内对于黄精多糖已有初步研究，已报道一种具有抗病毒作用的低分子量黄精多糖。(参考文献：吴荣，李友元，肖洒.申请号02102167公开号1363611黄精多糖的提取方法；中科院成都生物所 申请号96117736公开号1178799从中药黄精中提取黄精多糖的方法)。
发明内容
本发明的目的在于公开了从中药黄精中提取分离出的黄精多糖，以及黄精多糖的组合物；
本发明的另一目的在于公开了黄精多糖、及其组合物的生物活性和应用。
本发明所述的黄精多糖及其组合物是通过以下方法制备的：
1.黄精多糖粗品(PSW)的提取：将切成片状的黄精药材加入95％的乙醇至完全浸没，浸泡三周，每周更换一次乙醇。浸泡液弃去，黄精晾干，称重。然后用沸水进行数次提取，每次4-5小时。每次的提取液用苯酚-硫酸法检测，至糖反应不明显为止，共提取五次。将五次滤液合并，浓缩至小体积，对流动水透析两天。透析袋内液浓缩至小体积，离心。向上层清液中缓慢加入三倍体积的95％乙醇，同时不断进行搅拌，然后静置过夜，离心，收集沉淀。沉淀用无水乙醇洗涤两次，丙酮洗涤一次，真空干燥，得灰白色多糖粗品PSW。
2.去除多糖中的蛋白：用Lowry蛋白检测法检测显示PSW的蛋白质含量为24.6％。取PSW，溶于蒸馏水，配成2％的溶液，加入等体积的30％三氯乙酸于4℃反应2-3小时，离心除去沉淀，上清液用10％(w/v)NaOH溶液中和至pH值为7.0，透析两天，内液浓缩，冻干，得去蛋白的粗多糖PSWP。
3.黄精多糖的纯化：取PSWP加蒸馏水配成10％(w/v)溶液，离心，上清液用DEAE-纤维素柱(80cm×6cm，Cl-型)进行初步分离，分别用蒸馏水，0.2mol/L，0.5mol/L和0.8mol/L的NaCl溶液进行阶梯洗脱，分部收集，苯酚-硫酸法检测。将各峰位洗脱液分别浓缩，透析，冻干，依次得四个组分：PSW-1，PSW-2，PSW-3，PSW-4。
4.黄精多糖组合物的制备：取PSW-1，PSW-2，PSW-3，PSW-4四种多糖，以0～100∶0～100∶0～100∶0～100的比例(w/w)混合均匀，即得所要的多糖组合物。
上述黄精多糖各组分PSW-1，PSW-2，PSW-3，PSW-4分别经2mol/L三氟乙酸于110℃封管水解2h，水解得到的单糖经还原，乙酰化转化为糖醇乙酸酯，用气相色谱法分析，测得各组分中糖基的组成。(参考文献Dong Q，Ding SW，Yang X，Fang JN.Structural features of aheteroxylan from Sophora subprostrata roots.Phytochemistry，1999，50：81-84.)
其中：
PSW-1 由鼠李糖、木糖、甘露糖、半乳糖组成，摩尔比为0～0.05∶0～0.06∶0.10～0.30∶0.80～1.20。
PSW-2 由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖组成，摩尔比为0～0.20∶0～0.20∶0.80～1.20。
PSW-3 由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖组成，摩尔比为0.30～0.80∶0～0.50∶0.80～1.20。
PSW-4 由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、半乳糖组成，摩尔比为0.30～0.80∶0.20～0.60∶0.60～1.00∶0.80～1.20。
黄精多糖PSW-1，PSW-2，PSW-3，PSW-4及其多糖组合物的免疫促进作用：小鼠脾淋巴细胞增殖试验 取PSW-1，PSW-2，PSW-3，PSW-4及多糖组合物，溶于生理盐水，浓度为4mg/mL，使用时浓度稀释为10-3，10-2和10-1mg/mL。小鼠颈椎脱臼致死，无菌条件下取脾脏并分离脾细胞，以尼龙网过滤，蒸馏水破坏红细胞，调节至等渗，用蒸馏水洗涤三次后，计数，调节细胞浓度为5×106cell/mL。将上述细胞液加样于96孔板中，每孔100μL，设一对照组，再加入不同浓度的待测样品及T细胞丝裂原ConA(刀豆球蛋白，5μg/mL)或B细胞丝裂原LPS(脂多糖，10μg/mL)，置于37℃5％CO2培养箱中培养44h，用3H-TdR法进行T，B淋巴细胞增殖活性试验。加20μl MTT(N-甲基硫代四唑)继续培养4h，培养终止，向每孔中加入100μL三联液(二甲基甲酰胺和十二烷基磺酸钠)，并于37℃放置过夜。次日，测定每孔溶液于570nm处的吸光度。
试验结果显示，单独的黄精多糖组分PSW-1，PSW-2，PSW-3，PSW-4及组合物PSI～PSIVI均能显著促进T，B淋巴细胞的增殖，且活性呈剂量依赖关系。组合物PSI～PSIV在100μg/mL浓度时对B细胞的活性大于各单独组分的活性，显示混合后的组分产生协同效应。上述多糖组分及组合物可作为免疫促进药物或保健产品，用于增强机体的免疫防御机能，防治肿瘤、衰老等免疫机能退化或免疫性疾病。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。
实施例一：黄精多糖的制备
取3kg黄精，加入95％的乙醇至完全浸没，浸泡三周，每周更换一次乙醇。浸泡液弃去，黄精晾干，称重，得2.25kg。然后用沸水提取，每次加蒸馏水15L，提取时间为4小时，提取液用苯酚-硫酸法检测，至糖反应不明显为止，共提取五次。将五次滤液合并，浓缩至10L左右，对流动水透析两天。透析袋内液浓缩至3.5L，离心。取上层清夜，缓慢加入三倍体积(约10.3L)的95％乙醇，静置过夜，离心，收集沉淀。沉淀用无水乙醇洗涤两次，丙酮一次，常温真空干燥，得133g灰白色固体PSW。
Lowry法检测可知，PSW的蛋白含量分别为24.6％，用三氯乙酸法去蛋白。取40g PSW，加入2000mL蒸馏水，配成2％的粗糖溶液，加入等体积的30％三氯乙酸于4℃反应2.5小时，用10％的NaOH溶液中和至pH值为7。离心，上清液透析两天，浓缩至300mL左右，冻干，得灰白色固体PSW(33g)。取20.5g PSW，加蒸馏水配成10％的粗糖溶液(加热溶解)，离心，上清液用DEAE-cellulose柱(80cm×6cm)进行初步分离，分别用蒸馏水，0.2mol/L，0.5mol/L和0.8mol/L的NaCl溶液进行阶梯洗脱，自动分部收集，苯酚-硫酸法跟踪监测，根据检测结果合并相同组分，得四个组分。将洗脱液分别浓缩至适当体积，对蒸馏水透析两天。透析袋内液减压浓缩，冻干，得7.24g白色固体(PSW-1)，4.51g棕黄色固体(PSW-2)，5.09g棕褐色固体(PSW-3)，1.73g棕褐色固体(PSW-4)。
经2mol/L三氟乙酸于110℃封管水解2h，水解得到的单糖经还原，乙酰化转化为糖醇乙酸酯，用气相色谱法分析，测得各组分中糖基的组成为：
PSW-1 由鼠李糖、木糖、甘露糖、半乳糖组成，摩尔比为0.02∶0.05∶0.23∶1.00。
PSW-2 由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖组成，摩尔比为0.14∶0.17∶1.00。
PSW-3 由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖组成，摩尔比为0.59∶0.33∶1.00。
PSW-4 由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、半乳糖组成，摩尔比为0.64∶0.46∶0.89∶1.00。
实施例二：黄精多糖组合物PSI的制备
取PSW-1(1.0克)，PSW-2(1.0克)，PSW-3(1.0克)，PSW-4(1.0克)以(1∶1∶1∶1)比例混合均匀，即得所要的多糖组合物(4.0克)。
实施例三：黄精多糖组合物PSII的制备
取PSW-1(0.2克)，PSW-2(2克)，PSW-3(4克)，PSW-4(8克)以(1∶10∶20∶40)比例混合均匀，即得所要的多糖组合物(14.2克)。
实施例四：黄精多糖组合物PSIII的制备
取PSW-2(2.4克)，PSW-3(5.3克)，PSW-4(7.5克)以(24∶53∶75)比例混合均匀，即得所要的多糖组合物(15.2克)。
实施例五：黄精多糖组合物PSIV的制备
取PSW-3(8克)，PSW-4(2.7克)以(80∶27)比例混合均匀，即得所要的多糖组合物(10.7克)。
实施例六：黄精多糖组合物PSV的制备
取PSW-1(5.8克)，PSW-2(3.2克)以(29∶16)比例混合均匀，即得所要的多糖组合物(9.0克)。
实施例七：黄精多糖组合物PSVI的制备
取PSW-2(7.3克)，PSW-3(4.7克)以(73∶47)比例混合均匀，即得所要的多糖组合物(12克)。
实施例八：药理试验
黄精多糖各单独组分对小鼠脾脏淋巴细胞增殖活性如下表所示。
Figure C20041009929300071
实施方式中的几种多糖组合物对小鼠脾脏淋巴细胞增殖活性如下表所示。

Claims (2)

1、一种黄精多糖组合物，其特征在于由二种以上的多糖组成，所述多糖选自于PSW-1、PSW-2、PSW-3和PSW-4；
所述的PSW-1由鼠李糖、木糖、甘露糖和半乳糖糖基组成，摩尔比为0～0.05∶0～0.06∶0.10～0.30∶0.80～1.20；
所述的PSW-2由鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖糖基组成，摩尔比为0～0.20∶0～0.20∶0.80～1.20；
所述的PSW-3由鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖糖基组成，摩尔比为0.30～0.80∶0～0.50∶0.80～1.20；
所述的PSW-4由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖和半乳糖糖基组成，摩尔比为0.30～0.80∶0.20～0.60∶0.60～1.00∶0.80～1.20。
2、如权利要求1所述的黄精多糖组合物，在制备防治肿瘤、衰老及免疫机能退化疾病的免疫调节剂中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101456918B (zh) * 2009-01-16 2011-05-11 韩金光 黄精多糖及其制备方法以及黄精多糖在制备降血糖、降血脂药物中的应用
CN105218692B (zh) * 2014-06-05 2018-01-30 上海家化联合股份有限公司 一种黄精β‑半乳聚糖及其制备方法和抑制细胞凋亡的应用
CN104116755A (zh) * 2014-06-19 2014-10-29 无限极（中国）有限公司 一种具有调节肿瘤微环境功效的灵芝、枸杞及黄精复合多糖及其制备方法和应用
CN106243241B (zh) * 2015-06-03 2019-03-08 上海家化联合股份有限公司 一种黄精果胶类多糖的制备及应用
CN108164615A (zh) * 2018-02-12 2018-06-15 中南民族大学 一种黄精多糖的制备方法及应用
CN112062872B (zh) * 2020-10-15 2023-06-23 扬州大学 一种黄精均一多糖及制备方法和用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1178799A (zh) * 1996-10-08 1998-04-15 中国科学院成都生物研究所 从中药黄精中提取黄精多糖的方法
CN1363611A (zh) * 2002-01-06 2002-08-14 吴燊荣 黄精多糖的提取方法及其用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1178799A (zh) * 1996-10-08 1998-04-15 中国科学院成都生物研究所 从中药黄精中提取黄精多糖的方法
CN1363611A (zh) * 2002-01-06 2002-08-14 吴燊荣 黄精多糖的提取方法及其用途

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