CN117783404A - 一种西洋参产地溯源的方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及西洋参鉴定防伪技术领域，具体涉及一种西洋参产地溯源的方法与应用。本发明通过液相色谱‑质谱联用检测西洋参样品中人参皂苷的种类以及相对含量，采用正交偏最小二乘‑判别分析方法和单变量的非参数检验筛选人参皂苷类差异化合物，以任意两种人参皂苷类差异化合物的比值作为变量，进行非参数检验，获取质量标志物，获取测试样品中乙酰基‑人参皂苷Re与丙二酰基‑人参皂苷Re的比值、乙酰基‑人参皂苷Re与丙二酰基‑拟人参皂苷F11的比值和乙酰基‑人参皂苷Re与西洋参皂苷L9的比值，与质量标志物比较，对西洋参产地进行溯源。本发明提供的西洋参产地溯源的方法可以有效的鉴别国内以及国外的西洋参。
Description
技术领域
本发明涉及西洋参鉴定防伪技术领域，具体涉及一种西洋参产地溯源的方法与应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
西洋参为五加科人参属西洋参的干燥根，又名花旗参、洋参、美国参。西洋参是药食同源的植物，富含维生素、营养素等。西洋参能提神、延缓衰老，帮助抗癌，增强免疫系统，改善心脑血管状况；因此，它也被称为“绿色黄金”。
西洋参原产于北美洲的原始森林，美国康斯威星州和加拿大安大略省是其主产区。原产地气候温和，空气湿润，位于北纬41°～47°，适合西洋参的生长发育。自20世纪80年代，西洋参在我国东北、华北等地引种成功，辽宁、吉林和山东是其主产区。西洋参的产地决定了其药用价值和经济价值。西洋参市场需求量大，不同产地西洋参的功效和价格差异明显。因此，有必要对西洋参的产地进行鉴别。
中国药典中指出西洋参的质量评价指标为人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1，这三者的总量不少于2％。但是仅仅通过这三个皂苷难以对不同来源的西洋参样品进行鉴别。
发明内容
为了克服上述问题，本发明提供一种西洋参产地溯源的方法与应用。本发明提供的西洋参产地溯源的方法可以有效的鉴别国内以及国外的西洋参，鉴别可靠性高，避免以次充好、以假乱真的现象。
为实现上述技术目的，本发明采用如下技术方案：
本发明的第一个方面，提供一种西洋参产地溯源的方法，包括以下步骤：
(1)将不同产地的西洋参样品加入甲醇中，超声提取，过滤后得供试品溶液；
(2)通过液相色谱-质谱联用检测供试品溶液，获取不同产地的西洋参样品中人参皂苷的种类以及相对含量；
(3)采用正交偏最小二乘-判别分析方法和单变量的非参数检验筛选人参皂苷类差异化合物，以任意两种人参皂苷类差异化合物的比值作为变量，进行非参数检验，获取质量标志物，所述质量标志物包括：乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-人参皂苷Re的比值国外组为2.9～4.4，国内组为4.9～6.6；乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-拟人参皂苷F11的比值国外组为1.5～2.2，国内组为2.4～4.3；乙酰基-人参皂苷Re与西洋参皂苷L9的比值国外组为4.0～6.5，国内组为6.8～11.7；
(4)获取测试样品中乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-人参皂苷Re的比值、乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-拟人参皂苷F11的比值和乙酰基-人参皂苷Re与西洋参皂苷L9的比值，与步骤(3)中质量标志物比较，对西洋参产地进行溯源。
本发明的第二个方面，提供上述西洋参产地溯源的方法在进行西洋参品质检测中的应用。
本发明的有益效果在于：
本发明通过液相色谱-质谱联用检测西洋参样品中人参皂苷的种类以及相对含量，采用正交偏最小二乘-判别分析方法和单变量的非参数检验筛选人参皂苷类差异化合物，以任意两种人参皂苷类差异化合物的比值作为变量，进行非参数检验，获取质量标志物，获取测试样品中乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-人参皂苷Re的比值、乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-拟人参皂苷F11的比值和乙酰基-人参皂苷Re与西洋参皂苷L9的比值，与质量标志物比较，对西洋参产地进行溯源。本发明提供的西洋参产地溯源的方法可以有效的鉴别国内以及国外的西洋参，鉴别可靠性高，避免以次充好、以假乱真的现象。相比于其他的溯源方法，本发明的方法在满足分析准确的情况下，操作更简单，更易于应用。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为实施例1对于液相色谱-质谱检测方法的方法学考察结果，其中A为重复性考察结果，B为稳定性考察结果，C为日内考察结果，D为日间考察结果；
图2为基于液相色谱-质谱联用的西洋参样品中人参皂苷类化合物的提取离子谱图。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本发明使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
本发明的第一种典型的实施方式，提供一种西洋参产地溯源的方法，包括以下步骤：
(1)将不同产地的西洋参样品加入甲醇中，超声提取，过滤后得供试品溶液；
(2)通过液相色谱-质谱联用检测供试品溶液，获取不同产地的西洋参样品中人参皂苷的种类以及相对含量；
(3)采用正交偏最小二乘-判别分析方法和单变量的非参数检验筛选人参皂苷类差异化合物，以任意两种人参皂苷类差异化合物的比值作为变量，进行非参数检验，获取质量标志物，所述质量标志物包括：乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-人参皂苷Re的比值国外组为2.9～4.4，国内组为4.9～6.6；乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-拟人参皂苷F11的比值国外组为1.5～2.2，国内组为2.4～4.3；乙酰基-人参皂苷Re与西洋参皂苷L9的比值国外组为4.0～6.5，国内组为6.8～11.7；
(4)获取测试样品中乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-人参皂苷Re的比值、乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-拟人参皂苷F11的比值和乙酰基-人参皂苷Re与西洋参皂苷L9的比值，与步骤(3)中质量标志物比较，对西洋参产地进行溯源。
在一种或多种实施方式中，步骤(1)中，所述西洋参样品的质量与甲醇的体积比为19～21:1g/L，优选为20g/L。
在一种或多种实施方式中，步骤(1)中，超声提取的时间为25～45min。
在一种或多种实施方式中，步骤(2)中，液相色谱条件：Agilent SB-Aq柱色谱柱(100mm×2.1mm，1.8μm)，流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为0.1％甲酸的乙腈溶液，梯度洗脱，柱温为40℃，流速为0.3mL/min，进样量5μL。
优选的，梯度洗脱的条件为：0～5min，5％～20％ B，5～12min，20％～30％ B，12～17min，30％～40％ B，17～20min，40％～50％ B。
在一种或多种实施方式中，步骤(2)中，质谱条件：电喷雾离子源(ESI)，以负离子模式扫描采集数据；毛细管电压：3000V；干燥气流速：8L/min；雾化气压力：200kpa；干燥气温度：200℃；四极杆离子能量：3eV；碰撞池参数：碰撞能7eV，传输时间60μs，碰撞池射频电压振幅：750Vpp，脉冲前等待时间：5μs；质量数扫描范围：m/z 50～1500。
在一种或多种实施方式中，步骤(2)中，采用面积归一化法计算人参皂苷的相对含量。
在一种或多种实施方式中，步骤(3)中，采用偏最小二乘-判别分析方法获取和单变量的非参数检验筛选人参皂苷类差异化合物，以任意两种人参皂苷类差异化合物的比值作为变量，进行非参数检验，获取质量标志物的方法包括：
将国外与国内的西洋参样品进行分组，分为一组和二组，将一组和二组人参皂苷的相对含量进行正交偏最小二乘-判别分析方法进行多变量分析，得到变量重要性指标(VIP)，后通过对一组和二组人参皂苷的相对含量进行非参数检验，得到显著性指标p值，并对p值进行假阳性检验(FDR)，得到p(FDR)值，最后对一组和二组人参皂苷的相对含量进行比值计算，得到倍率B指标；以VIP>1，p(FDR)<0.05以及B>1.5作为筛选标准，筛选出11种人参皂苷类差异化合物，包括乙酰基-人参皂苷Re，丙二酰基-人参皂苷Rb1，丙二酰基-拟人参皂苷F11，越南人参皂苷R13，三七皂苷N，人参皂苷Ro，三七皂苷R1，三七皂苷ST5，珠子参皂苷R1，丙二酰基-人参皂苷Re，西洋参皂苷L9；
基于筛选出的这11种人参皂苷类差异化合物，计算其中任意两者的比值，共获得55组比值，以比值作为变量，对这55组比值进行非参数检验以及FDR检验，得到p(FDR)，筛选p(FDR)<0.05的变量(人参皂苷比值)为质量标志物。
本发明的第二种典型的实施方式，提供上述西洋参产地溯源的方法在进行西洋参品质检测中的应用。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本发明的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本发明的技术方案。
1、仪器与材料
1.1仪器
ACQUITY H-Class型超高效液相色谱仪(美国Waters公司)；ImpactⅡ飞行时间质谱仪(德国Bruker公司)；PX125DZH型分析天平(美国OHAUS公司)
1.2材料
色谱甲醇、色谱乙腈(德国Merck公司)；色谱甲酸(德国Honeywell公司)；超纯水由Milipore Direct-Q 8UV-R超纯水系统制备(美国Millipore公司)。人参皂苷Rh1对照品均购自成都乐美天医药科技有限公司，纯度均大于98％。
2、液相色谱-质谱条件
液相色谱条件：Agilent SB-Aq柱色谱柱(100mm×2.1mm，1.8μm)，流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱，柱温为40℃，流速为0.3mL/min，进样量5μL。
梯度洗脱的条件为：0～5min，5％～20％ B，5～12min，20％～30％ B，12～17min，30％～40％ B，17～20min，40％～50％ B。
质谱条件：电喷雾离子源(ESI)，以负离子模式扫描采集数据；毛细管电压：3000V；干燥气流速：8L/min；雾化气压力：200kpa；干燥气温度：200℃；四极杆离子能量：3eV；碰撞池参数：碰撞能7eV，传输时间60μs，碰撞池射频电压振幅：750Vpp，脉冲前等待时间：5μs；质量数扫描范围：m/z 50～1500。
3、样品信息
分别收集国外(加拿大、美国)和国内(山东省、辽宁省、吉林省)不同产区的西洋参样品，每个产区设置5个采样点。每个采样点的样品分别取10批次。
4供试品溶液的配置
准确称取500mg样品于50mL具塞三角瓶中，加入25mL 70％甲醇超声提取30分钟，补足失重，摇匀，过滤得上清液。将样品上清液稀释5倍加入Rh1标准品作为内标。
实施例1方法学考察
(1)重复性
平行处理6份同一样品，以考察方法的重复性。首先计算每个峰峰面积的相对标准偏差(RSD)，并计算不同RSD范围(0～5％、5％～10％、10％～15％、>15％)内的峰个数，以及相应的峰面积之和。计算不同RSD范围内的峰个数占比，以及累计峰面积占比。结果如图1中A所示，在负离子模式下，94.52％的峰的RSD在15％以内，峰面积占比为94.04％。说明该方法的重复性良好。
(2)稳定性
取同一份供试品溶液，每间隔6小时测定一次，考察分析方法48小时的稳定性。计算每个峰峰面积的相对标准偏差(RSD)，并统计不同RSD范围(0～5％、5％～10％、10％～15％、>15％)内的峰个数，以及相应的峰面积之和。计算不同RSD范围内的峰个数占比，以及累计峰面积占比。结果如图1中B所示，在负离子模式下，97.26％的峰的RSD在15％以内，峰面积占比为99.72％。说明该方法具有良好的稳定性。
(3)日内日间精密度
取同一份供试品溶液，在1天内连续进样6次，测定日内精密度。计算每个峰峰面积的相对标准偏差(RSD)，并统计不同RSD范围(0～5％、5％～10％、10％～15％、>15％)内的峰个数，以及相应的峰面积之和。计算不同RSD范围内的峰个数占比，以及累计峰面积占比。结果如图1中C所示，在负离子模式下，97.26％的峰的RSD在15％以内，峰面积占比为99.74％。结果说明方法的日内精密度良好。
每天进样6次连续测定3天，测定日间精密度。计算每个峰峰面积的相对标准偏差(RSD)，并统计不同RSD范围(0～5％、5％～10％、10％～15％、>15％)内的峰个数，以及相应的峰面积之和。计算不同RSD范围内的峰个数占比，以及累计峰面积占比。结果如图1中D所示，在负离子模式下，94.52％的峰的RSD在15％以内，峰面积占比为99.38％。结果说明方法的日间精密度良好。
实施例2
将每个产区的每个采样点收集的西洋参样品制备成供试品溶液后，利用液相色谱-质谱联用检测供试品溶液，在不同产地的西洋参样品中共检测出74种人参皂苷，其提取离子流图见图2。
将国外与国内的西洋参样品进行分组，分比为一组和二组，将一组和二组人参皂苷的相对含量进行正交偏最小二乘-判别分析方法(OPLS-DA)进行多变量分析，OPLS-DA模型的R2Y＝0.983，Q2＝0.825。200次置换检验结果为R2＝0.34，Q2＝-0.19，说明模型没有过拟合。得到变量重要性指标(VIP)，然后通过对一组和二组人参皂苷的相对含量进行非参数检验，得到显著性指标p值，并对p值进行假阳性检验(FDR)，得到p(FDR)值，最后对一组和二组人参皂苷的相对含量进行比值计算，得到倍率B指标。以VIP>1，p(FDR)<0.05以及B>1.5作为严格的筛选标准，筛选出11种人参皂苷类差异化合物，包括乙酰基-人参皂苷Re，丙二酰基-人参皂苷Rb1，丙二酰基-拟人参皂苷F11，越南人参皂苷R13，三七皂苷N，人参皂苷Ro，三七皂苷R1，三七皂苷ST5，珠子参皂苷R1，丙二酰基-人参皂苷Re，西洋参皂苷L9；
基于筛选出的这11种人参皂苷类差异化合物，计算其中任意两者的比值，共获得55组比值，以比值作为变量，对这55组比值进行非参数检验以及FDR检验，得到p(FDR)，筛选p(FDR)<0.05的变量(人参皂苷比值)为质量标志物。
最终获取的质量标志物包括：乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-人参皂苷Re的比值国外组为2.9～4.4，国内组为4.9～6.6；乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-拟人参皂苷F11的比值国外组为1.5～2.2，国内组为2.4～4.3；乙酰基-人参皂苷Re与西洋参皂苷L9的比值国外组为4.0～6.5，国内组为6.8～11.7；
在国内三个产地中，乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-人参皂苷Re的比值在吉林为6.0～6.4，在辽宁为4.9～6.0，在山东为5.1～6.6；乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-拟人参皂苷F11的比值在吉林为2.5～3.3，在辽宁为2.8～4.3，在山东为2.4～3.6；，乙酰基-人参皂苷Re与西洋参皂苷L9的比值在吉林为7.3～12.5，在辽宁为7.5～11.7，在山东为6.8～8.9。
实验例1
分别取10批次国内和国外的西洋参样品进行验证。其中5批次为国内样品(3批次山东、2批次辽宁、1批次吉林)，5批次为国外样品(3批次加拿大、2批次美国)。
检测并计算这10批次西洋参样品中乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-人参皂苷Re的比值、乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-拟人参皂苷F11的比值、乙酰基-人参皂苷Re与西洋参皂苷L9的比值。
经过检测计算后，乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-人参皂苷Re的比值在加拿大样品中分别为3.87、3.70和3.40；在美国样品中分别为3.61和4.57；在山东样品中分别是6.1和5.69，在辽宁样品中分别是5.65和5.44，在吉林样品中为6.19。
乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-拟人参皂苷F11的比值在加拿大样品中分别为1.65、1.70和2.00；在美国样品中分别为1.8和2.11；在山东样品中分别是2.59和3.10，在辽宁样品中分别是2.90和4.10，在吉林样品中为2.90。
乙酰基-人参皂苷Re与西洋参皂苷L9的比值在加拿大样品中分别为4.68、5.89和5.37；在美国样品中分别为5.17和6.00；在山东样品中分别是8.10和7.0，在辽宁样品中分别是7.91和8.20，在吉林样品中为9.0。
以上结果说明这三组物质可以实现在国内外样品中的准确鉴别。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种西洋参产地溯源的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将不同产地的西洋参样品加入甲醇中，超声提取，过滤后得供试品溶液；
(2)通过液相色谱-质谱联用检测供试品溶液，获取不同产地的西洋参样品中人参皂苷的种类以及相对含量；
(3)采用正交偏最小二乘-判别分析方法和单变量的非参数检验筛选人参皂苷类差异化合物，以任意两种人参皂苷类差异化合物的比值作为变量，进行非参数检验，获取质量标志物，所述质量标志物包括：乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-人参皂苷Re的比值国外组为2.9～4.4，国内组为4.9～6.6；乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-拟人参皂苷F11的比值国外组为1.5～2.2，国内组为2.4～4.3；乙酰基-人参皂苷Re与西洋参皂苷L9的比值国外组为4.0～6.5，国内组为6.8～11.7；
(4)获取测试样品中乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-人参皂苷Re的比值、乙酰基-人参皂苷Re与丙二酰基-拟人参皂苷F11的比值和乙酰基-人参皂苷Re与西洋参皂苷L9的比值，与步骤(3)中质量标志物比较，对西洋参产地进行溯源。
2.如权利要求1所述的西洋参产地溯源的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述西洋参样品的质量与甲醇的体积比为19～21:1g/L，优选为20g/L。
3.如权利要求1所述的西洋参产地溯源的方法，其特征在于，步骤(1)中，超声提取的时间为25～45min。
4.如权利要求1所述的西洋参产地溯源的方法，其特征在于，步骤(2)中，液相色谱条件：Agilent SB-Aq柱色谱柱(100mm×2.1mm，1.8μm)，流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为0.1％甲酸的乙腈溶液，梯度洗脱，柱温为40℃，流速为0.3mL/min，进样量5μL。
5.如权利要求1所述的西洋参产地溯源的方法，其特征在于，梯度洗脱的条件为：0～5min，5％～20％B，5～12min，20％～30％B，12～17min，30％～40％B，17～20min，40％～50％B。
6.如权利要求1所述的西洋参产地溯源的方法，其特征在于，步骤(2)中，质谱条件：电喷雾离子源(ESI)，以负离子模式扫描采集数据；毛细管电压：3000V；干燥气流速：8L/min；雾化气压力：200kpa；干燥气温度：200℃；四极杆离子能量：3eV；碰撞池参数：碰撞能7eV，传输时间60μs，碰撞池射频电压振幅：750Vpp，脉冲前等待时间：5μs；质量数扫描范围：m/z 50～1500。
7.如权利要求1所述的西洋参产地溯源的方法，其特征在于，步骤(2)中，采用面积归一化法计算人参皂苷的相对含量。
8.如权利要求1所述的西洋参产地溯源的方法，其特征在于，步骤(3)中，采用偏最小二乘-判别分析方法获取和单变量的非参数检验筛选人参皂苷类差异化合物，以任意两种人参皂苷类差异化合物的比值作为变量，进行非参数检验，获取质量标志物的方法包括：
将国外与国内的西洋参样品进行分组，分为一组和二组，将一组和二组人参皂苷的相对含量进行正交偏最小二乘-判别分析方法进行多变量分析，得到变量重要性指标(VIP)，后通过对一组和二组人参皂苷的相对含量进行非参数检验，得到显著性指标p值，并对p值进行假阳性检验(FDR)，得到p(FDR)值，最后对一组和二组人参皂苷的相对含量进行比值计算，得到倍率B指标；以VIP>1，p(FDR)<0.05以及B>1.5作为筛选标准，筛选出11种人参皂苷类差异化合物，包括乙酰基-人参皂苷Re，丙二酰基-人参皂苷Rb1，丙二酰基-拟人参皂苷F11，越南人参皂苷R13，三七皂苷N，人参皂苷Ro，三七皂苷R1，三七皂苷ST5，珠子参皂苷R1，丙二酰基-人参皂苷Re，西洋参皂苷L9；
基于筛选出的这11种人参皂苷类差异化合物，计算其中任意两者的比值，共获得55组比值，以比值作为变量，对这55组比值进行非参数检验以及FDR检验，得到p(FDR)，筛选p(FDR)<0.05的变量(人参皂苷比值)为质量标志物。
9.权利要求1～8任一项所述的西洋参产地溯源的方法在进行西洋参品质检测中的应用。
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106706790A (zh) * | 2016-12-27 | 2017-05-24 | 河北省药品检验研究院 | 一种西洋参中四种人参皂苷类成分的含量测定方法 |
| CN108564379A (zh) * | 2018-02-26 | 2018-09-21 | 中国医学科学院药用植物研究所 | 一种对象身份的溯源方法、终端设备及服务器 |
| CN108629604A (zh) * | 2018-05-08 | 2018-10-09 | 亳州中药材商品交易中心有限公司 | 基于西洋参dna的防伪溯源系统及防伪溯源方法 |
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| GR01 | Patent grant | ||
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