CN117757698A - 一株枯草芽孢杆菌dyf4-3及其在降解多种霉菌毒素中的应用 - Google Patents
一株枯草芽孢杆菌dyf4-3及其在降解多种霉菌毒素中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117757698A CN117757698A CN202410104098.9A CN202410104098A CN117757698A CN 117757698 A CN117757698 A CN 117757698A CN 202410104098 A CN202410104098 A CN 202410104098A CN 117757698 A CN117757698 A CN 117757698A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dyf4
- bacillus subtilis
- degradation
- medium
- mycotoxins
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 title claims abstract description 22
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 title claims abstract description 22
- 231100000678 Mycotoxin Toxicity 0.000 title claims description 26
- 239000002636 mycotoxin Substances 0.000 title claims description 26
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 title abstract description 17
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 title abstract description 17
- MBMQEIFVQACCCH-UHFFFAOYSA-N trans-Zearalenon Natural products O=C1OC(C)CCCC(=O)CCCC=CC2=CC(O)=CC(O)=C21 MBMQEIFVQACCCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- MBMQEIFVQACCCH-QBODLPLBSA-N zearalenone Chemical compound O=C1O[C@@H](C)CCCC(=O)CCC\C=C\C2=CC(O)=CC(O)=C21 MBMQEIFVQACCCH-QBODLPLBSA-N 0.000 claims abstract description 19
- LINOMUASTDIRTM-QGRHZQQGSA-N deoxynivalenol Chemical compound C([C@@]12[C@@]3(C[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1C=C(C([C@@H](O)[C@@]13CO)=O)C)C)O2 LINOMUASTDIRTM-QGRHZQQGSA-N 0.000 claims abstract description 6
- LINOMUASTDIRTM-UHFFFAOYSA-N vomitoxin hydrate Natural products OCC12C(O)C(=O)C(C)=CC1OC1C(O)CC2(C)C11CO1 LINOMUASTDIRTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229930195730 Aflatoxin Natural products 0.000 claims abstract description 5
- XWIYFDMXXLINPU-UHFFFAOYSA-N Aflatoxin G Chemical compound O=C1OCCC2=C1C(=O)OC1=C2C(OC)=CC2=C1C1C=COC1O2 XWIYFDMXXLINPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000005409 aflatoxin Substances 0.000 claims abstract description 5
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract description 20
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 12
- OQIQSTLJSLGHID-WNWIJWBNSA-N aflatoxin B1 Chemical compound C=1([C@@H]2C=CO[C@@H]2OC=1C=C(C1=2)OC)C=2OC(=O)C2=C1CCC2=O OQIQSTLJSLGHID-WNWIJWBNSA-N 0.000 abstract description 11
- 229930020125 aflatoxin-B1 Natural products 0.000 abstract description 11
- 101100449517 Arabidopsis thaliana GRH1 gene Proteins 0.000 abstract description 9
- 101100434479 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) AFB1 gene Proteins 0.000 abstract description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 abstract description 9
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 abstract description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 37
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 28
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 28
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 21
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N coumarin Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 6
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 6
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 6
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- AWMVMTVKBNGEAK-UHFFFAOYSA-N Styrene oxide Chemical compound C1OC1C1=CC=CC=C1 AWMVMTVKBNGEAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 4
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 229960000956 coumarin Drugs 0.000 description 3
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000002115 aflatoxin B1 Substances 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 2
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 239000012880 LB liquid culture medium Substances 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 1
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000002144 chemical decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000481 chemical toxicant Toxicity 0.000 description 1
- 229940099352 cholate Drugs 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 235000014571 nuts Nutrition 0.000 description 1
- RWQKHEORZBHNRI-BMIGLBTASA-N ochratoxin A Chemical compound C([C@H](NC(=O)C1=CC(Cl)=C2C[C@H](OC(=O)C2=C1O)C)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 RWQKHEORZBHNRI-BMIGLBTASA-N 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 1
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 210000004916 vomit Anatomy 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供了一种枯草芽孢杆菌DYF4‑3，该菌株保藏于武汉的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M 20232187。本发明提供的枯草芽孢杆菌DYF4‑3在短时间内具有优异的呕吐毒素，黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮降解效果，DYF4‑3处理48h后对浓度为20μg/mL的DON、AFB1和ZEN降解率分别为96.63％、90.59％、84.57％。并且，在pH＝2、3、4的培养基中存活率达到31.57％、67.64％、75.91％；在含有0.1％、0.3％、0.5％牛胆盐的培养基中存活率达到114.74％、77.19％、61.06％，证明其具有的较强的胃肠道生存能力。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一株枯草芽孢杆菌DYF4-3及其在降解多种霉菌毒素中的应用。
背景技术
真菌毒素是真菌或霉菌在生长和繁殖过程中产生的次生代谢物，对动物和人类具有慢性或急性毒性作用。现在已经确定了500多种真菌毒素，但最常见的真菌毒素是呕吐毒素(Deoxynivalenol，DON)、黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1，AFB1)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)和赭曲霉毒素A(Ochratoxin A，OTA)，它们广泛分布于饲料和食品中，如肉、蛋、牛奶、玉米、小麦、大米、豌豆、花生、小麦、大麦、坚果、油性饲料及其副产品，对全球食品和饲料安全构成挑战，对畜牧业产生严重威胁和人类健康威胁。然而常用的物理和化学降解方法会造成饲料和食品的营养损失、霉菌毒素的不完全消除、有毒化学溶剂残留和二次污染。因此迫切需要寻找对人类和动物没有负面影响和安全的降解方式来消除饲料和食品中的霉菌毒素。
生物降解尤其是微生物降解被认为是一种有前景的控制真菌毒素策略，因为其对霉菌毒素的特异性降解能力，同时对环境、饲料和食品安全没有危害以及提高动物产品质量具有积极影响，可以避免二次污染。但目前报道的大多数菌种停留在单一霉菌毒素的降解能力的研究，缺乏对多种霉菌毒素降解及其造成的危害的研究。因此筛选挖掘高效降解多种霉菌毒素的益生菌，是解决霉菌毒素污染问题，防止对畜牧业和人类健康产生的严重威胁的重要手段。
发明内容
本发明的目的在于提供一株枯草芽孢杆菌DYF4-3，可用于降解多种霉菌毒素。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一株枯草芽孢杆菌DYF4-3(Bacillus subtilis)，该菌株保藏于武汉的中国典型培养物保藏中心，保藏日期为：2023年11月10日，保藏编号为：CCTCC NO：M20232187。
本发明还提供了一种上述枯草芽孢杆菌DYF4-3在降解多种霉菌毒素中的应用。
进一步的，所述霉菌毒素包括呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素。
本发明提供的枯草芽孢杆菌DYF4-3在短时间内具有优异的呕吐毒素，黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮降解效果。菌株DYF4-3处理48h后对浓度为20μg/mL的DON、AFB1和ZEN降解率分别为96.63％、90.59％、84.57％，在饲料、食品的生物脱毒应用提供实质性的应用价值和重大意义。
并且，枯草芽孢杆菌DYF4-3在pH＝2的培养基中存活率达到31.57％，在pH＝3的培养基中存活率达到67.64％，在pH＝4的培养基中存活率达到75.91％；在含有0.1％牛胆盐的培养基中存活率达到114.74％，在0.3％牛胆盐的培养基中存活率达到77.19％，在0.5％牛胆盐的培养基中存活率达到61.06％，证明其具有的较强的胃肠道生存能力。
附图说明
图1为实施例1枯草芽孢杆菌DYF4-3的基因系统发育进化树；
图2为实施例2枯草芽孢杆菌DYF4-3在AFB1筛选固体培养基、DON筛选固体培养基、ZEN筛选固体培养基上的生长情况。
保藏说明
枯草芽孢杆菌DYF4-3，拉丁文为Bacillussubtilis，该菌株保藏于武汉的中国典型培养物保藏中心，保藏日期为：2023年11月10日，保藏编号为：CCTCC NO：M 20232187。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
枯草芽孢杆菌DYF4-3的分离：
(1)称取5g发酵饲料(浙江大学饲料科学研究所和浙江科盛饲料股份有限公司联合生产)，加入50mL无菌磷酸盐缓冲液(PBS)中，并使用旋转振荡器(n＝200rpm)混合1h。上清液用PBS稀释(10-1-10-9)后，取10mL上清稀释入到LB培养基，37℃，200r/min培养得到细菌富集液。
(2)富集培养结束后，用无菌水将富集培养基作梯度稀释(10-1-10-9)，将梯度稀释液分别涂布于YPD固体培养基上，在37℃下孵育48h后，待平板长出单菌落后，挑取代表性菌落于含10mLLB液体培养基中进行摇床培养48h得到菌液，用于后续实验。
(3)将步骤(2)的菌液划线于AFB1筛选固体培养基(含有2g/L的香豆素)，恒温培养箱37℃培养72h，待平板长出单菌落后，挑取代表性菌落于含10mL LB液体培养基中进行摇床培养48h后，重复之前步骤划线于AFB1筛选固体培养基(含有3g/L的香豆素)，取代表性菌落于含10mLLB液体培养基中进行摇床培养48h后，再重复之前步骤划线于AFB1筛选固体培养基(含有4g/L的香豆素)，挑取代表性菌落于含10mL LB液体培养基中进行摇床培养48h得到菌液。
(4)将步骤(3)的菌液划线于DON筛选固体培养基(每1L溶液含有2mL的98％氧化苯乙烯)，恒温培养箱37℃培养72h后，挑取代表性菌落接种于10mL LB液体培养基中进行摇床培养48h后，重复之前步骤划线于DON筛选固体培养基(每1L溶液含有3mL的98％氧化苯乙烯)，挑取代表性菌落接种于10mL LB液体培养基中进行摇床培养48h后，重复之前步骤划线于DON筛选固体培养基(每1L溶液含有4mL的98％氧化苯乙烯)，挑取代表性菌落于含10mLLB液体培养基中进行摇床培养48h得到菌液。
(5)将步骤(4)的菌液，划线于ZEN筛选固体培养基(20μg/mL)，恒温培养箱37℃培养72h后，挑取代表性菌落于含10mL LB液体培养基中进行摇床培养48h后，重复之前步骤划线于ZEN筛选固体培养基(30μg/mL)，取代表性菌落于含10mL LB液体培养基中进行摇床培养48h后，再重复之前步骤划线于ZEN筛选固体培养基(40μg/mL)，待平板长出单菌落后挑选得到枯草芽孢杆菌DYF4-3进行16s rDNA测序用于后续实验。
上述实验所用培养基的制备：
LB培养基的制备方法为：胰蛋白胨10g，酵母浸粉5g，氯化钠10g，pH值调节到7.2，加入蒸馏水定容至1L。
YPD固体培养基的制备方法为：酵母提取物10g、蛋白陈20g、葡萄糖20g、20g琼脂、加入蒸馏水定容至1L。
香豆素-无水乙醇溶液：配置0.10、0.15、0.20g/mL的香豆素-无水乙醇溶液，加热溶解后使用0.22μm注射器微孔滤膜过滤除菌。
培养基的制备：香豆素-无水乙醇溶液：配置0.10、0.15、0.20g/mL的香豆素-无水乙醇溶液，加热溶解后使用0.22μm注射器微孔滤膜过滤除菌。
AFB1筛选固体培养基的制备方法为：0.25g KH2PO4，1.0g NH4NO3，1.0gCaCl2，0.25gMgSO4·7H2O，1.0mg FeSO4·7H2O，20g琼脂，加入蒸馏水定容至1L，121℃高温灭菌20min后，添加香豆素-无水乙醇溶液20mL。
DON筛选固体培养基的制备方法为：(NH4)2SO42g，KH2PO41.5 g，K2HPO41.5 g，NaCl1.5g，CaCl20.01g，MgSO4·7H2O 0.2g，FeSO4·7H2O0.001g，玉米浆0.1g，20g琼脂。pH值调节到6.0，加入蒸馏水定容至1L，121℃高温灭菌20min后，梯度添加2，3，4mL 98％氧化苯乙烯。
ZEN筛选固体培养基的制备方法为：(NH4)2SO40.5g，MgSO4·7H2O 0.2g，Na2HPO42.44g,K2HPO41.52g，CaCl2·2H2O 0.066g，调pH至6.8，加蒸馏水定容至1L，高压蒸汽灭菌冷却后，梯度添加20，30，40mg ZEN，ZEN用无水乙醇溶解，浓度为10，15，20mg/mL，溶解后使用0.22μm注射器微孔滤膜过滤除菌。
菌株鉴定：
16s rDNA鉴定：设计用于扩增菌株DYF4-316s rDNA序列的一段通用引物：
序列SEQ ID NO.1：27F 5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’；
序列SEQ ID NO.2：1492R 5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’。
提取菌株DYF4-3的基因组DNA作为模版，进行PCR扩增，并对扩增产物进行测序。菌株DYF4-3的16s rDNA序列如SEQ ID NO.3所示，并将其序列在NCBI数据库中进行对比，确定菌株DYF4-3为枯草芽孢杆菌。菌株DYF4-3的基因系统发育进化树如图1所示。
实施例2
菌株DYF4-3的霉菌毒素降解能力鉴定
取实施例1得到的菌株DYF4-3，接种于含10mL LB液体培养基中进行摇床培养48h，得到DYF4-3菌液，将DYF4-3菌液按照实施例1的方法顺次接种至AFB1筛选固体培养基、DON筛选固体培养基、ZEN筛选固体培养基，检测其对呕吐毒素(DON)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、黄曲霉毒素(AFB1)的降解能力。结果如图2所示。
取ZEN筛选固体培养基(40μg/mL)平板上的菌落，接种于含10mL LB液体培养基中进行摇床培养48h，得到枯草芽孢杆菌DYF4-3菌液，将菌液接种于发酵培养基中，37℃，200rpm培养48h后，取1mL菌液用无菌水稀释(10-1-10-8)，涂板于LB培养基上，测定其活菌数，后统一菌液浓度为1ⅹ1010CFU/mL，得到DYF4-3菌株发酵菌液。分别取20μL 10mg/mLDON，AFB1，ZEN溶液(使用0.22μm注射器微孔滤膜过滤除菌)，另外加入980μLDYF4-3菌株发酵菌液，混匀(终浓度为20μg/mL)，对照组用未接种的发酵培养基代替。37℃，200rpm培养48h后，8000r/min条件下离心10min，去除菌体，上清液通过酶免呕吐毒素、黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮ELISA试剂盒测定霉菌毒素残留量，结果如表1所示。
霉菌毒素降解率＝(对照组霉菌毒素浓度-试验组霉菌毒素浓度)/对照组霉菌毒素浓度ⅹ100％，每个处理三个重复。
发酵培养基配方为：胰蛋白胨10g，酵母浸膏2.5g，葡萄糖3g，牛肉膏4g，氯化钠5g，Na2HPO43g，MgSO4·7H2O 1g，调pH至7.0-7.4，加蒸馏水定容至1L，结果如表1所示。
由表1可知在48h后对浓度为20μg/mL的DON、AFB1和ZEN降解率分别为96.63％、90.59％、84.57％。
表1DYF4-3对霉菌毒素的降解率
实施例3
菌株DYF4-3耐胆盐能力鉴定
取1mL实施例2得到的浓度为1ⅹ1010CFU/mL的DYF4-3菌株发酵菌液，于5000r/min条件下离心5min收集菌体，菌体悬浮于10mL含0.1％、0.3％、0.5％(m/v)牛胆盐的LB液体培养基(对照组为不含牛胆盐的LB液体培养基)中。37℃，200rpm培养3h后，然后菌液用无菌水稀释(10-1-10-7)，采用倾注平板法对样品中的活菌数进行计数。倾注后的平板于37℃培养24h。结果如表2所示。
菌株的耐胆盐能力计算公式为：存活率(％)＝试验组测试样品的活菌数/对照组测试样品的活菌数，每个处理六个重复。
由表2可知，菌株在DYF4-3在含有0.1％牛胆盐的培养基中存活率达到114.74％，在0.3％牛胆盐的培养基中存活率达到77.19％，在0.5％牛胆盐的培养基中存活率达到61.06％。
表2DYF4-3的耐胆盐能力
菌株DYF4-3耐酸能力鉴定
取1mL实施例2得到的浓度为1ⅹ1010CFU/mL的DYF4-3菌株发酵菌液，于5000r/min条件下离心5min收集菌体，菌体悬浮于10mLpH＝2、pH＝3、pH＝4的LB液体培养基(对照组为未进行pH调节的LB液体培养基)中。37℃，200rpm培养3h后，然后菌液用无菌水稀释(10-1-10-7)，采用倾注平板法对样品中的活菌数进行计数。倾注后的平板于37℃培养24h。结果如表3所示。
菌株的耐胆盐能力计算公式为：存活率(％)＝试验组测试样品的活菌数/对照组测试样品的活菌数，每个处理六个重复。
由表3可知，菌株在DYF4-3在pH＝2的培养基中存活率达到31.57％，在pH＝3的培养基中存活率达到67.64％，在pH＝4的培养基中存活率达到75.91％。
表3DYF4-3的耐酸能力
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (3)
1.一株枯草芽孢杆菌DYF4-3(Bacillus subtilis)，该菌株保藏于武汉的中国典型培养物保藏中心，保藏日期为：2023年11月10日，保藏编号为：CCTCC NO：M 20232187。
2.一种权利要求1所述枯草芽孢杆菌DYF4-3在降解多种霉菌毒素中的应用。
3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述霉菌毒素包括呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410104098.9A CN117757698B (zh) | 2024-01-25 | 一株枯草芽孢杆菌dyf4-3及其在降解多种霉菌毒素中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410104098.9A CN117757698B (zh) | 2024-01-25 | 一株枯草芽孢杆菌dyf4-3及其在降解多种霉菌毒素中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117757698A true CN117757698A (zh) | 2024-03-26 |
| CN117757698B CN117757698B (zh) | 2024-06-11 |
Family
ID=
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105462839A (zh) * | 2016-01-18 | 2016-04-06 | 浙江大学 | 一种抗致病菌芽胞杆菌的快速筛选方法 |
| WO2017083964A1 (en) * | 2015-11-16 | 2017-05-26 | Mycotox Solutions Inc. | Uses of mycotoxin-detoxifying antibodies |
| CN107348323A (zh) * | 2017-06-27 | 2017-11-17 | 湖北华大瑞尔科技有限公司 | 一种枯草芽孢杆菌、脱霉剂及脱霉剂的应用 |
| CN111315235A (zh) * | 2017-10-31 | 2020-06-19 | 诺力益维公司 | 抗真菌毒素组合物 |
| CN111440744A (zh) * | 2020-04-17 | 2020-07-24 | 内蒙古中能生物科技有限公司 | 一种利用枯草芽孢杆菌降解饲料霉菌毒素的试验方法 |
| CN114292828A (zh) * | 2020-10-08 | 2022-04-08 | 爱尔伯股份公司 | 具有提高的温度稳定性的四聚体α/β水解酶变体及其使用和生产方法 |
| CN115305213A (zh) * | 2021-11-02 | 2022-11-08 | 河北农业大学 | 一株枯草芽孢杆菌及其培养方法和应用 |
| CN115948305A (zh) * | 2023-01-16 | 2023-04-11 | 焦作市佰役安生物工程有限公司 | 一株高效降解多种霉菌毒素的枯草芽孢杆菌及其应用 |
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017083964A1 (en) * | 2015-11-16 | 2017-05-26 | Mycotox Solutions Inc. | Uses of mycotoxin-detoxifying antibodies |
| CN105462839A (zh) * | 2016-01-18 | 2016-04-06 | 浙江大学 | 一种抗致病菌芽胞杆菌的快速筛选方法 |
| CN107348323A (zh) * | 2017-06-27 | 2017-11-17 | 湖北华大瑞尔科技有限公司 | 一种枯草芽孢杆菌、脱霉剂及脱霉剂的应用 |
| CN111315235A (zh) * | 2017-10-31 | 2020-06-19 | 诺力益维公司 | 抗真菌毒素组合物 |
| CN111440744A (zh) * | 2020-04-17 | 2020-07-24 | 内蒙古中能生物科技有限公司 | 一种利用枯草芽孢杆菌降解饲料霉菌毒素的试验方法 |
| CN114292828A (zh) * | 2020-10-08 | 2022-04-08 | 爱尔伯股份公司 | 具有提高的温度稳定性的四聚体α/β水解酶变体及其使用和生产方法 |
| CN115305213A (zh) * | 2021-11-02 | 2022-11-08 | 河北农业大学 | 一株枯草芽孢杆菌及其培养方法和应用 |
| CN115948305A (zh) * | 2023-01-16 | 2023-04-11 | 焦作市佰役安生物工程有限公司 | 一株高效降解多种霉菌毒素的枯草芽孢杆菌及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110591938B (zh) | 一种高抗逆性凝结芽孢杆菌突变株及应用 | |
| CN110157645B (zh) | 一种唾液乳杆菌y4及其应用 | |
| CN110878265B (zh) | 一株降解黄曲霉毒素的枯草芽孢杆菌及其应用 | |
| CN107201322A (zh) | 用于降解黄曲霉毒素b1的枯草芽孢杆菌及其应用 | |
| CN111808765B (zh) | 一株高效降解呕吐毒素的枯草芽孢杆菌及其应用 | |
| CN107502566B (zh) | 一株赖氨酸芽孢杆菌及其在降解玉米赤霉烯酮中的应用 | |
| CN113040390A (zh) | 一株益生、耐盐约氏乳杆菌及其在畜禽水产养殖中防治病原菌的应用 | |
| CN110607251B (zh) | 一种降解呕吐毒素的海洋杆菌及其应用 | |
| CN110028560B (zh) | 一种凝结芽孢杆菌产的细菌素及其应用 | |
| CN111304119A (zh) | 一种降解伏马毒素的饲用枯草芽孢杆菌及其应用 | |
| CN107779422B (zh) | 一株高效抑制黄曲霉合成黄曲霉毒素的非脱羧勒克菌生防菌株 | |
| CN113367232A (zh) | 一株黄曲霉拮抗菌的应用 | |
| CN110452849B (zh) | 一种益生植物乳杆菌 | |
| CN117757698B (zh) | 一株枯草芽孢杆菌dyf4-3及其在降解多种霉菌毒素中的应用 | |
| CN115851512B (zh) | 一种枯草芽孢杆菌沙漠亚种及其应用 | |
| CN114085789B (zh) | 戊糖片球菌ma.wtpqj01及其应用 | |
| CN117757698A (zh) | 一株枯草芽孢杆菌dyf4-3及其在降解多种霉菌毒素中的应用 | |
| CN113604387B (zh) | 一株耐盐、耐高温罗伊氏乳杆菌及其在畜禽水产养殖中防治病原菌的应用 | |
| CN112592851B (zh) | 一株对水产病原菌有广谱拮抗作用的嗜酸乳杆菌及其应用 | |
| CN111040969B (zh) | 一种复合乳杆菌剂及其在水牛青贮饲料中的应用 | |
| CN110862944B (zh) | 一种地衣芽孢杆菌及其在去除玉米赤霉烯酮中的应用 | |
| CN110343636B (zh) | 一种斯塔普氏属菌株及其在玉米赤霉烯酮降解中的应用 | |
| CN118126868A (zh) | 一株枯草芽孢杆菌zmf7-2及其在降解多种霉菌毒素、胆固醇上的应用 | |
| CN109161500B (zh) | 暹罗芽孢杆菌zj-2018-1及降解霉菌毒素的菌剂和应用 | |
| CN118028151A (zh) | 一株地衣芽孢杆菌alz1-7及其在降解多种霉菌毒素、胆固醇上的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant |