CN113367232A - 一株黄曲霉拮抗菌的应用 - Google Patents
一株黄曲霉拮抗菌的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113367232A CN113367232A CN202110878778.2A CN202110878778A CN113367232A CN 113367232 A CN113367232 A CN 113367232A CN 202110878778 A CN202110878778 A CN 202110878778A CN 113367232 A CN113367232 A CN 113367232A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bwl1
- aspergillus flavus
- pantoea vagans
- feed
- bacterium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000228197 Aspergillus flavus Species 0.000 title claims abstract description 53
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 30
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 title claims abstract description 25
- 230000000443 biocontrol Effects 0.000 claims abstract description 25
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 20
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 7
- 101100449517 Arabidopsis thaliana GRH1 gene Proteins 0.000 abstract description 17
- 101100434479 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) AFB1 gene Proteins 0.000 abstract description 17
- OQIQSTLJSLGHID-WNWIJWBNSA-N aflatoxin B1 Chemical compound C=1([C@@H]2C=CO[C@@H]2OC=1C=C(C1=2)OC)C=2OC(=O)C2=C1CCC2=O OQIQSTLJSLGHID-WNWIJWBNSA-N 0.000 abstract description 17
- 229930020125 aflatoxin-B1 Natural products 0.000 abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 15
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 abstract description 14
- 241001480343 Pantoea vagans Species 0.000 description 56
- 239000005409 aflatoxin Substances 0.000 description 26
- 229930195730 Aflatoxin Natural products 0.000 description 25
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 21
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 21
- XWIYFDMXXLINPU-UHFFFAOYSA-N Aflatoxin G Chemical compound O=C1OCCC2=C1C(=O)OC1=C2C(OC)=CC2=C1C1C=COC1O2 XWIYFDMXXLINPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 19
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 19
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 17
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 17
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 15
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 15
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 15
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 12
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 101150035600 atpD gene Proteins 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 6
- 101150079601 recA gene Proteins 0.000 description 6
- 201000002909 Aspergillosis Diseases 0.000 description 5
- 208000036641 Aspergillus infections Diseases 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 230000004763 spore germination Effects 0.000 description 5
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 4
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 101150099875 atpE gene Proteins 0.000 description 3
- 101150048329 atpH gene Proteins 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 3
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 2
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 2
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 2
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 2
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 2
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 1
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241001465180 Botrytis Species 0.000 description 1
- 241000123650 Botrytis cinerea Species 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 241000207199 Citrus Species 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010019670 Hepatic function abnormal Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 231100000678 Mycotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 208000031320 Teratogenesis Diseases 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229910052785 arsenic Inorganic materials 0.000 description 1
- RQNWIZPPADIBDY-UHFFFAOYSA-N arsenic atom Chemical compound [As] RQNWIZPPADIBDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 1
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000012994 industrial processing Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000002636 mycotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 1
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 1
- NNFCIKHAZHQZJG-UHFFFAOYSA-N potassium cyanide Chemical compound [K+].N#[C-] NNFCIKHAZHQZJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
- A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
一株黄曲霉拮抗菌的应用,将含有生防菌Pantoea vagans BWL1的微生物制剂与饲料混合均匀;所述生防菌Pantoea vagans BWL1,已于2021年1月4日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC),保藏编号为CCTCC NO:M2021001。经过发明方法处理饲料,黄曲霉病受到显著抑制,AFB1产生量降低约90%。
Description
技术领域
本发明涉及一种株黄曲霉拮抗菌的应用,属于农产品贮藏技术领域。
背景技术
黄曲霉会侵染一些重要粮食和经济作物,例如玉米、花生、豆类等,并且在储藏、运输等过程中,产生大量的致癌性剧毒化合物-黄曲霉毒素,造成大量粮食和饲料等损失。
黄曲霉毒素对畜禽和人类的健康存在巨大威胁。黄曲霉毒素(aflatoxin,AFT)是一种真菌毒素,由黄曲霉产生。黄曲霉毒素为剧毒物质,其毒性是氰化钾的10倍,砒霜的68倍,已被证实具有致癌、致畸、致细胞突变的作用,被国际癌症研究机构评定为Ι类致癌物质,是肝癌的主要致癌物质。研究表明全球有5亿以上的发展中国家的人口长期受到黄曲霉毒素的威胁。畜禽采食黄曲霉毒素污染的饲料会导致中毒、疾病甚至死亡,给畜牧业造成巨大的经济损失,而奶牛采食被黄曲霉污染的饲料,不但产奶性能降低,肝功能受损,免疫力下降,而且毒素还会转移到牛奶中,对人类健康造成严重威胁。黄曲霉毒素主要分为B1,B2,G1, G2,M1和M26亚型,其中B1(Aflatoxin,AFB1)毒性最强。研究表明我国饲料中AFB1 的污染很普遍;其中,饼粕类中的AFB1超标率最高,为13.2%,其含量超过国家规定的限量标准1倍以上,存在较高的安全隐患。此外,黄曲霉毒素具有非常稳定的理化性质,工业加工、日常烹饪及巴氏消毒均不能有效地去除黄曲霉毒素,这使得黄曲霉毒素在食物链中持续存在而长期威胁公众的身体健康。因此,为了保护动物和人类健康,需要采取措施降低饲料黄曲霉毒素污染。
现有的黄曲霉毒素防控手段主要包括化学防控和生物防控。化学防控是通过采用化学试剂控制黄曲霉菌生长或破坏黄曲霉毒素。但利用自然界天然存在的拮抗微生物的生物防控手段被认为是很有潜力、吸引力、有很好的可控效果的。同时,生物防控技术得到了广泛的认可,特别是在环境保护上,可以替代很多人工合成的化学试剂的使用,减少了环境污染。
发明内容
本发明的目的在于提供一株黄曲霉拮抗菌的应用。
为实现上述目的及其他相关目的,本发明提供的技术方案是:一株黄曲霉拮抗菌的应用,将含有生防菌Pantoea vagans BWL1的微生物制剂与饲料混合均匀;所述生防菌Pantoea vagans BWL1,已于2021年1月4日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC),保藏地址:中国武汉,武汉大学。保藏编号为CCTCC NO:M2021001。
优选的技术方案为:所述微生物制剂的生防菌Pantoea vagans BWL1的活菌数大于或等于108CFU/mL。
优选的技术方案为:微生物制剂与饲料的质量比例为1:500-1000。
由于上述技术方案运用,本发明与现有技术相比具有的优点是:
1、本发明筛选得到一株生防菌Pantoea vagans BWL1,能够高效拮抗青霉菌和灰霉菌。
2、经过发明方法处理饲料,黄曲霉病受到显著抑制,AFB1产生量降低约90%。
附图说明
图1为Pantoea vagans BWL1形态。标尺=50μm。
图2为Pantoea vagans BWL1对黄曲霉生长的抑制作用。通过平板对峙法可见Pantoea vagans BWL1能有效抑制黄曲霉菌丝生长。
图3为Pantoea vagans对黄曲霉菌的孢子萌发、芽管伸长的抑制作用。标尺=20μm。
图4为Pantoea vagans BWL1对花生黄曲霉病的抑制效果。
图5为Pantoea vagans BWL1对花生黄曲霉素AFB1产生量的抑制效果。
图6为Pantoea vagans BWL1对玉米黄曲霉病的抑制效果。
图7为Pantoea vagans BWL1对玉米黄曲霉素AFB1产生量的抑制效果。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式,熟悉此技术的人士可由本实施例所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
实施例1:一株黄曲霉拮抗菌的应用
一株高效拮抗黄曲霉菌的生防菌Pantoea vagans BWL1,已于2021年1月4日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M2021001。生防菌Pantoea vagansBWL1,分离自健康柑橘果实表面,是果实习居菌,采用平板对峙法,发现生防菌Pantoeavagans BWL1 对黄曲霉菌具有显著抑制作用。生防菌Pantoea vagans BWL1分离、筛选、鉴定方法如下。
(1)拮抗菌的分离
取市售健康柑橘,放入已灭菌的500mL烧杯中,加入灭菌水200mL,150r/min振荡1h。取悬浮培养液稀释成10-1、10-2、10-3后,取100μL涂布到LB固体平板上,25℃倒置静止培养24h。挑取单菌落到新的LB固体平板进行划线培养,对获得的单克隆菌株第二次划线培养,获得纯种菌株。
获得的菌株保藏于30%的甘油中,置于-80℃低温环境中。
所述的LB培养基,其制作方法为:在950mL的去离子水中加入酵母提取物5g,胰蛋白胨10g,NaCl 10g,溶解后以5N的NaOH调节pH至7.0,定容至1L,121℃高压蒸汽灭菌 20min后备用。
(2)拮抗菌的筛选
菌株的抑菌效果测试采用平板对峙法。将黄曲霉菌菌丝块接种于PDA平板上,25℃培养 7天,此时黄曲霉菌大约长到2/3-3/4盘,以打孔器从平板上靠近菌丝边缘位置取直径0.5cm 的黄曲霉菌菌饼,接种到新的PDA平板上,25℃培养3-5天;将已纯化的细菌接种于液体 LB培养基中,25℃培养过夜,以接种环蘸取菌液在黄曲霉菌平板上划线,25℃培养3天后观察抑菌效果。
所述的PDA培养基,即常用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。
(3)拮抗菌的鉴定
选取有抑制效果的菌株,通过对16s rDNA、ATP synthase(atpD)和recombinase(recA)基因进行扩增并测序,在NCBI(美国国家生物技术信息中心)数据库中进行比对,将菌株鉴定为 Pantoea vagans,并将菌株编号为BWL1。16s rDNA、atpD和recA基因扩增片段已提交至NCBI 数据库,序列号依次为MW133037、MW221267和MW221265。
鉴定所用引物、PCR反应条件以及扩增片段序列如下:
16SrDNA基因扩增片段测序结果:
5’-GCAGTCGGACGGTAGCACAGAGAGCTTGCTCTTGGGTGACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAAT GTCTGGGGATCTGCCCGATAGAGGGGGATAACCACTGGAAACGGTGGCTAATACCGCATAACGTCGC AAGACCAAAGAGGGGGACCTTCGGGCCTCTCACTATCGGATGAACCCAGATGGGATTAGCTAGTAGG CGGGGTAATGGCCCACCTAGGCGACGATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGCCACACTGGAAC TGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGA TGCAGCCATGCCGCGTGTATGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGTACTTTCAGCGGGGAGGAAGGCG ATGCGGTTAATAACCGCGTCGATTGACGTTACCCGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCA GCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTC TGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTTAACCTGGGAACTGCATTTGAAACTGGCAGGCTTGAGTC TTGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCTGGAGGAATACCGGTGG CGAAGGCGGCCCCCTGGACAAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAG ATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTTGGAGGTTGTTCCCTTGAGGAGTGGCTTCCGG AGCTAACGCGTTAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGG GGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTACTCTTG ACATCCACGGAATTTGGCAGAGATGCCTTAGTGCCTTCGGGAACCGTGAGACAGGTGCTGCATGGCT GTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATCCTTTGTTGC CAGCGATTCGGTCGGGAACTCAAAGGAGACTGCCGGTGATAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGT CAAGTCATCATGGCCCTTACGAGTAGGGCTACACACGTGCTACAATGGCGCATACAAAGAGAAGCAA CCTCGCGAGAGCAAGCGGACCTCACAAAGTGCGTCGTAGTCCGGATCGGAGTCTGCAACTCGACTCC GTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTGGATCAGAATGCCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCAAAAGAAGTAGGTAGCTTAACCTCGGAGGCGCT-3’。
atpD基因扩增片段测序结果:
5’-AGTATGAATGGTGATGCGCGTCTGGTGCTGGAAGTTCAGCAACAGCTCGGCGGCGGCGTAGTA CGTACCATCGCAATGGGTACGTCTGACGGCCTGAAGCGTGGTCTGAGCGTCAACGACCTGCAGAAAC CGATTCAGGTACCCGTCGGTAAAGCGACCCTGGGCCGTATCATGAACGTTCTCGGCGAGCCAATCGAT ATGAAAGGCGAGCTGAAAGAAGAAGATGGCAGCGCAGTAGAGATCGCCTCTATTCACCGCGCAGCCC CTTCTTATGAAGATCAGTCTAACTCGCAGGAACTGCTGGAAACCGGCATCAAGGTTATCGACCTGATG TGTCCGTTTGCTAAAGGCGGTAAAGTCGGTCTGTTCGGTGGTGCGGGTGTAGGTAAAACCGTCAACA TGATGGAACTGATCCGTAACATCGCGGCTGAACACTCAGGTTACTCAGTGTTTGCCGGTGTGGGTGAG CGTACTCGTGAGGGTAACGACTTCTACCACGAAATGACTGACTCTAACGTTATCGATAAAGTTGCACT GGTCTATGGCCAGATGAACGAGCCGCCGGGTAACCGTCTGCGCGTAGCACTGACCGGTCTGACCATG GCGGAAAAATTCCGTGATGAAGGCCGCGACGTTCTGCTGTTCATCGATAACATCTACCGTTATACCCTG GCCGGTACAGAAGTTTCTGCACTGCTGGGTCGTATGCCATCTGCGGTAGGTTACCAGCCAACGCTGGCAGAAGAGATGGGTGTGTTGCAGGAGCGTATTACCTCCACCAAGACCGGTTCAATCACCTCCGTACAG GCCGTTTACGTCCCTGCGGATGACCTGACTGACCCATCACCAGCAACTACCTTTGCGCACTTAGACTC AACGGTAACGCTGAGCCGTCAGATCGCCTCTCTGGGTATCTACCCGGCCGTTGACCCGCTGGACTCTA CCAGCCGTCAGCTGGATCCGCTGGTTGTCGGTCAGGAGCACTATGATGTTGCACGTGGCGTTCAGTCA CTGCTGCAGCGTTATCAGGAACTGAAAGACATCATCGCCATCCTCGGTATGGATGAGCTGTCTGAAGA AGACAAACTGCTGGTGGCACGTGCGCGTAAGATTCAGCGCTTCCTGTCTCAGCCGTTCTTCGTTGCAG AAGTATTCACCGGTTCACCGGGCAAATACGTGACGCTGAAAGACACTATCCGTGGCTTTAAAGGCATC ATGGAAGGTGAGTTTGACCACCTGCCAAGAGC-3’。
recA基因扩增片段测序结果:
5’-GCGTAAGGTAAACCTGTGCCTTTATCGATGCCGAGCATGCGCTTGATCCGGTTTACGCCAAGA AACTCGGCGTAGACATTGATAACCTGCTCTGCTCTCAGCCAGACACTGGTGAGCAGGCGCTGGAAAT TTGTGATGCGCTGGCGCGCTCTGGTGCCGTTGACGTGATCATCGTCGACTCCGTCGCGGCGCTGACGC CTAAAGCGGAAATCGAAGGTGAAATCGGTGACTCACACATGGGCCTCGCGGCACGTATGATGAGCCA GGCGATGCGTAAACTGGCCGGTAACCTGAAGCAGTCCAATACCCTGCTGATTTTCATCAACCAGATCC GTATGAAAATTGGTGTGATGTTTGGTAACCCGGAAACCACCACTGGTGGTAACGCGCTGAAGTTCTAC GCCTCTGTCCGTCTTGATATCCGCCGTATCGGTGCAATCAAAGAGGGCGATAACGTGGTCGGCAGTGA GACCCGCGTTAAAGTGGTGAAAAACAAAATCGCCGCGCCATTCAAACAGGCTGAGTTCCAGATCATG TACGGCGAAGGTATCAATACCTTTGGTGAGCTGGTCGACCTGGGCGTGAAGCACAAGCTGATTGAAA AAGCGGGTGCATGGTACAGCTACAATGGCGACAAG-3’。
PCR扩增体系:
组分名称 | 添加量 |
10×LA Taq Buffer II(Mg<sup>2+</sup>Plus) | 5μL |
dNTPs(2.5mM) | 9μL |
引物F(1μM) | 2μL |
引物R(1μM) | 2μL |
DNA模板 | 0.5μL |
高保真Taq酶 | 0.5μL |
ddH<sub>2</sub>O | 31μL |
表中所列为扩增生防菌Pantoea vagans BWL1菌株16s rDNA、ATP synthase(atpD)和 recombinase(recA)基因序列所用的PCR体系。
基因引物和PCR条件:
表中所列为扩增生防菌Pantoea vagans BWL1菌株16s rDNA、ATP synthase(atpD)和 recombinase(recA)基因序列所用的引物以及PCR扩增时的退火温度和延伸时间。PCR具体条件为:预变性95℃×4min、[95℃×20s、退火温度×20s、72℃×1延伸时间]×35循环、 72℃×10min。PCR结束后,凝胶电泳验证片段大小无误后,将PCR产物送测序公司进行测序。
一株高效拮抗黄曲霉菌的生防菌及其在动物饲料中的应用,包括以下技术步骤。
(1)制作生防菌Pantoea vagans BWL1的微生物制剂
生防菌Pantoea vagans BWL1的微生物制剂,Pantoea vagans BWL1活菌数不少于108 CFU/mL。该菌制剂由以下方法配制:
(1.1)采用LB培养基,以接种环蘸取少量Pantoea vagans BWL1接种于LB培养基后于25℃摇床中培养12-18h;
(1.2)取(1)中菌液,按5-10%(v/v)接种于新鲜LB培养基进行扩大培养;
(1.3)6000×g离心5min,弃上清,加入1/5体积磷酸盐缓冲液(0.5M,pH7.0)重悬浮;
(1.4)加入10%(w/v)羧甲基纤维素钠、0.5%(w/v)糊精、0.2%(w/v)海藻酸钠,搅拌均匀,真空低温干燥(真空表压-0.05~-0.100MPa、温度20~30℃),粉碎并且过300目筛。所制得菌剂2-20℃保存。
(2)拮抗菌制剂的使用方法
(2.1)制得的生物抗菌剂按1:500-1000比例,拌于饲料中,100g菌剂可处理50-100kg 饲料;
(2)饲料经处理后,按常规方法保存。
经过发明方法处理饲料,黄曲霉病受到显著抑制,AFB1产生量降低约90%。
(一)拮抗菌对青霉菌和灰霉菌的孢子萌发和芽管伸长的影响
黄曲霉菌孢子悬浮液的制备。采用PDA培养基(平板或斜面)分别对黄曲霉菌菌株进行活化培养,25℃培养7天,刮下菌丝,加入含20mL无菌水的三角瓶中,震荡1min,双层灭菌纱布过滤去除菌丝,通过血球计数板检测孢子浓度,即得到黄曲霉菌孢子悬浮液。
将Pantoea vagans BWL1接种于LB培养基(胰蛋白胨10g/L,酵母提取物5g/L,NaCl5 g/L,pH7.0)中,25℃培养过夜,10000×g离心10min,取上清液,按10%加入PDA培养基(购自杭州百思生物科技有限公司)中,倒平板,每皿含10mL培养基。将100μL黄曲霉菌孢子悬浮液涂布于该平板上,25℃培养12h后,检测孢子萌发率和芽管长度。每个重复包含9个平行,每个平行包含100个孢子。同时设置不作任何处理的PDA以及添加10%LB培养基的PDA对照。
由图3可知,Pantoea vagans BWL1发酵液对黄曲霉孢子萌发率及芽管长度有显著抑制作用。添加发酵液后,孢子萌发率降低17.0%(p<0.05),芽管长度下降71.0%(p<0.05)。这表明,Pantoea vagans BWL1处理可显著抑制黄曲霉菌孢子的萌发。
(二)拮抗菌对花生黄曲霉病和AFB1产生量的抑制作用
将Pantoea vagans BWL1接种于LB培养基中,25℃培养过夜,6000g离心10min,去上清,加入50mM磷酸盐缓冲液(pH 7.0)重悬,使菌浓度达到108CFU/ml,选择无损伤、无病害的花生,剥去花生衣,去除胚芽,用清水清洗后,以1%次氯酸钠表面消毒3min后以无菌水冲洗干净,置于Pantoea vagans BWL1菌悬液中浸泡1min,对照组中以10μL磷酸盐缓冲液代替BWL1菌悬液。取出花生粒,置于超净台中晾干,在花生表面均匀喷洒黄曲霉菌孢子悬浮液(105个/mL),在超净台中晾干后,在灭菌培养皿中放置一张灭菌圆片滤纸,加灭菌水使滤纸湿润,在滤纸上均匀摆放处理后的花生粒,盖上培养皿盖,放置于28℃培养箱中培养6天。每个重复含6个重复,每个重复含3个平行,每个平行含6粒花生。
由图4可知,对照组(只接种黄曲霉孢子)花生表面长满黄曲霉菌丝和孢子,而处理组(接种黄曲霉孢子和Pantoea vagans BWL1菌液)花生几乎未发病。表明Pantoea vagansBWL1 可显著抑制花生黄曲霉污染。
收集接种发病后的花生,于研钵中加液氮研磨成粉,提取黄曲霉毒素,并采用HPLC法测定黄曲霉毒素AFB1含量(毒素提取、净化及测定方法参照GB5009.22-2016之柱前衍生法)。测定结果显示,经Pantoea vagans BWL1处理后,花生样品中黄曲霉毒素AFB1含量下降88%(图5)。
(三)拮抗菌对玉米黄曲霉病和AFB1产生量的抑制作用
将Pantoea vagans BWL1接种于LB培养基中,25℃培养过夜,6000g离心10min,去上清,加入50mM磷酸盐缓冲液(pH 7.0)重悬,使菌浓度达到108CFU/ml,选择无损伤、无病害的玉米粒,浸泡8h后,以1%次氯酸钠表面消毒3min后以无菌水冲洗干净,剥去表皮,去除胚芽,切成小颗粒,置于Pantoea vagans BWL1菌悬液中浸泡1min,对照组中以10μL 磷酸盐缓冲液代替BWL1菌悬液。取出玉米碎粒,置于超净台中晾干,在玉米随粒表面均匀喷洒黄曲霉菌孢子悬浮液(105个/mL),在超净台中晾干后,在灭菌培养皿中放置一张灭菌圆片滤纸,加灭菌水使滤纸湿润,在滤纸上均匀摆放处理后的玉米碎粒,盖上培养皿盖,放置于28℃培养箱中培养9天。每个重复含6个重复,每个重复含3个平行,每个平行含15 粒玉米碎粒。
由图6可知,对照组(只接种黄曲霉孢子)玉米碎粒表面长满黄曲霉菌丝和孢子,而处理组(接种黄曲霉孢子和Pantoea vagans BWL1菌液)几乎未发病。表明Pantoea vagansBWL1 可显著抑制玉米黄曲霉污染。
收集接种发病后的玉米碎粒,于研钵中加液氮研磨成粉,提取黄曲霉毒素,并采用HPLC 法测定黄曲霉毒素AFB1含量(毒素提取、净化及测定方法参照GB5009.22-2016之柱前衍生法)。测定结果显示,经Pantoea vagans BWL1处理后,玉米样品中黄曲霉毒素AFB1含量下降91%(图7)。
由于玉米、花生是饲料成分中最容易发生黄曲霉污染的成分,故以玉米、花生为材料开展的试验结果能反映Pantoea vagans BWL1拮抗菌在饲料中的应用效果。
图1为Pantoea vagans BWL1形态。标尺=50μm。Pantoea vagans BWL1在25℃、LB培养基上生长1天后,形成黄色、凸起、边缘光滑的菌落,颜色由起初的淡黄色逐渐变成明亮的黄色。通过显微镜观察可知,菌体为短杆状,近似椭圆,长度10-12μm。
图2为Pantoea vagans BWL1对黄曲霉生长的抑制作用。通过平板对峙法可见Pantoea vagans BWL1能有效抑制黄曲霉菌丝生长。
图3为Pantoea vagans对黄曲霉菌的孢子萌发、芽管伸长的抑制作用。标尺=20μm。A 为黄曲霉菌孢子萌发照片;B为黄曲霉菌孢子萌发率和芽管长度数据。由图可知,在含Pantoea vagans BWL1发酵液的PDA平板上(BWL1),黄曲霉菌孢子萌发率和芽管长度均显著低于对照组。
图4为Pantoea vagans BWL1对花生黄曲霉病的抑制效果。经Pantoea vagansBWL1处理后,花生发病程度显著减轻。
图5为Pantoea vagans BWL1对花生黄曲霉素AFB1产生量的抑制效果。经Pantoeavagans BWL1处理后,花生中AFB1含量相比对照降低88%。
图6为Pantoea vagans BWL1对玉米黄曲霉病的抑制效果。经Pantoea vagansBWL1处理后,玉米发病程度显著减轻。
图7为Pantoea vagans BWL1对玉米黄曲霉素AFB1产生量的抑制效果。经Pantoeavagans BWL1处理后,玉米中AFB1含量相比对照降低91%。
实施例2:一株黄曲霉拮抗菌的应用
一株黄曲霉拮抗菌的应用,将含有生防菌Pantoea vagans BWL1的微生物制剂与饲料混合均匀;所述生防菌Pantoea vagans BWL1,已于2021年1月4日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC),保藏编号为CCTCC NO:M2021001。
所述微生物制剂的生防菌Pantoea vagans BWL1的活菌数大于或等于108CFU/mL。
微生物制剂与饲料的质量比例为1:500。
实施例3:一株黄曲霉拮抗菌的应用
一株黄曲霉拮抗菌的应用,将含有生防菌Pantoea vagans BWL1的微生物制剂与饲料混合均匀;所述生防菌Pantoea vagans BWL1,已于2021年1月4日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC),保藏编号为CCTCC NO:M2021001。
所述微生物制剂的生防菌Pantoea vagans BWL1的活菌数大于或等于108CFU/mL。
微生物制剂与饲料的质量比例为1:1000。
以上所述者仅为用以解释本发明之较佳实施例,并非企图具以对本发明做任何形式上之限制,是以,凡有在相同之发明精神下所作有关本发明之任何修饰或变更,皆仍应包括在本发明意图保护之范畴。
序列表
<110> 合肥工业大学
<120> 一株黄曲霉拮抗菌的应用
<160> 9
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1401
<212> DNA
<213> 16SrDNA基因扩增片段测序结果
<400> 1
gcagtcggac ggtagcacag agagcttgct cttgggtgac gagtggcgga cgggtgagta 60
atgtctgggg atctgcccga tagaggggga taaccactgg aaacggtggc taataccgca 120
taacgtcgca agaccaaaga gggggacctt cgggcctctc actatcggat gaacccagat 180
gggattagct agtaggcggg gtaatggccc acctaggcga cgatccctag ctggtctgag 240
aggatgacca gccacactgg aactgagaca cggtccagac tcctacggga ggcagcagtg 300
gggaatattg cacaatgggc gcaagcctga tgcagccatg ccgcgtgtat gaagaaggcc 360
ttcgggttgt aaagtacttt cagcggggag gaaggcgatg cggttaataa ccgcgtcgat 420
tgacgttacc cgcagaagaa gcaccggcta actccgtgcc agcagccgcg gtaatacgga 480
gggtgcaagc gttaatcgga attactgggc gtaaagcgca cgcaggcggt ctgttaagtc 540
agatgtgaaa tccccgggct taacctggga actgcatttg aaactggcag gcttgagtct 600
tgtagagggg ggtagaattc caggtgtagc ggtgaaatgc gtagagatct ggaggaatac 660
cggtggcgaa ggcggccccc tggacaaaga ctgacgctca ggtgcgaaag cgtggggagc 720
aaacaggatt agataccctg gtagtccacg ccgtaaacga tgtcgacttg gaggttgttc 780
ccttgaggag tggcttccgg agctaacgcg ttaagtcgac cgcctgggga gtacggccgc 840
aaggttaaaa ctcaaatgaa ttgacggggg cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa 900
ttcgatgcaa cgcgaagaac cttacctact cttgacatcc acggaatttg gcagagatgc 960
cttagtgcct tcgggaaccg tgagacaggt gctgcatggc tgtcgtcagc tcgtgttgtg 1020
aaatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc aacccttatc ctttgttgcc agcgattcgg 1080
tcgggaactc aaaggagact gccggtgata aaccggagga aggtggggat gacgtcaagt 1140
catcatggcc cttacgagta gggctacaca cgtgctacaa tggcgcatac aaagagaagc 1200
aacctcgcga gagcaagcgg acctcacaaa gtgcgtcgta gtccggatcg gagtctgcaa 1260
ctcgactccg tgaagtcgga atcgctagta atcgtggatc agaatgccac ggtgaatacg 1320
ttcccgggcc ttgtacacac cgcccgtcac accatgggag tgggttgcaa aagaagtagg 1380
tagcttaacc tcggaggcgc t 1401
<210> 2
<211> 1247
<212> DNA
<213> atpD基因扩增片段测序结果
<400> 2
agtatgaatg gtgatgcgcg tctggtgctg gaagttcagc aacagctcgg cggcggcgta 60
gtacgtacca tcgcaatggg tacgtctgac ggcctgaagc gtggtctgag cgtcaacgac 120
ctgcagaaac cgattcaggt acccgtcggt aaagcgaccc tgggccgtat catgaacgtt 180
ctcggcgagc caatcgatat gaaaggcgag ctgaaagaag aagatggcag cgcagtagag 240
atcgcctcta ttcaccgcgc agccccttct tatgaagatc agtctaactc gcaggaactg 300
ctggaaaccg gcatcaaggt tatcgacctg atgtgtccgt ttgctaaagg cggtaaagtc 360
ggtctgttcg gtggtgcggg tgtaggtaaa accgtcaaca tgatggaact gatccgtaac 420
atcgcggctg aacactcagg ttactcagtg tttgccggtg tgggtgagcg tactcgtgag 480
ggtaacgact tctaccacga aatgactgac tctaacgtta tcgataaagt tgcactggtc 540
tatggccaga tgaacgagcc gccgggtaac cgtctgcgcg tagcactgac cggtctgacc 600
atggcggaaa aattccgtga tgaaggccgc gacgttctgc tgttcatcga taacatctac 660
cgttataccc tggccggtac agaagtttct gcactgctgg gtcgtatgcc atctgcggta 720
ggttaccagc caacgctggc agaagagatg ggtgtgttgc aggagcgtat tacctccacc 780
aagaccggtt caatcacctc cgtacaggcc gtttacgtcc ctgcggatga cctgactgac 840
ccatcaccag caactacctt tgcgcactta gactcaacgg taacgctgag ccgtcagatc 900
gcctctctgg gtatctaccc ggccgttgac ccgctggact ctaccagccg tcagctggat 960
ccgctggttg tcggtcagga gcactatgat gttgcacgtg gcgttcagtc actgctgcag 1020
cgttatcagg aactgaaaga catcatcgcc atcctcggta tggatgagct gtctgaagaa 1080
gacaaactgc tggtggcacg tgcgcgtaag attcagcgct tcctgtctca gccgttcttc 1140
gttgcagaag tattcaccgg ttcaccgggc aaatacgtga cgctgaaaga cactatccgt 1200
ggctttaaag gcatcatgga aggtgagttt gaccacctgc caagagc 1247
<210> 3
<211> 638
<212> DNA
<213> recA基因扩增片段测序结果
<400> 3
gcgtaaggta aacctgtgcc tttatcgatg ccgagcatgc gcttgatccg gtttacgcca 60
agaaactcgg cgtagacatt gataacctgc tctgctctca gccagacact ggtgagcagg 120
cgctggaaat ttgtgatgcg ctggcgcgct ctggtgccgt tgacgtgatc atcgtcgact 180
ccgtcgcggc gctgacgcct aaagcggaaa tcgaaggtga aatcggtgac tcacacatgg 240
gcctcgcggc acgtatgatg agccaggcga tgcgtaaact ggccggtaac ctgaagcagt 300
ccaataccct gctgattttc atcaaccaga tccgtatgaa aattggtgtg atgtttggta 360
acccggaaac caccactggt ggtaacgcgc tgaagttcta cgcctctgtc cgtcttgata 420
tccgccgtat cggtgcaatc aaagagggcg ataacgtggt cggcagtgag acccgcgtta 480
aagtggtgaa aaacaaaatc gccgcgccat tcaaacaggc tgagttccag atcatgtacg 540
gcgaaggtat caataccttt ggtgagctgg tcgacctggg cgtgaagcac aagctgattg 600
aaaaagcggg tgcatggtac agctacaatg gcgacaag 638
<210> 4
<211> 18
<212> DNA
<213> 16s rDNAF
<400> 4
gagtttgatc ctggctca 18
<210> 5
<211> 19
<212> DNA
<213> 16s rDNAR
<400> 5
ggttaccttg ttacgactt 19
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> atpDF
<400> 6
gacgtcgaat tccctcarga 20
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> atpDR
<400> 7
tsgctttttc cacagcttct 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> recAF
<400> 8
garkcbtcng gtaaaacvac 20
<210> 9
<211> 21
<212> DNA
<213> recAR
<400> 9
ttcgcyttrc cctgrccrat c 21
Claims (3)
1.一株黄曲霉拮抗菌的应用,其特征在于:将含有生防菌Pantoea vagans BWL1的微生物制剂与饲料混合均匀;所述生防菌Pantoea vagans BWL1,已于2021年1月4日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC),保藏编号为CCTCC NO:M2021001。
2.根据权利要求1所述的黄曲霉拮抗菌的应用,其特征在于:所述微生物制剂的生防菌Pantoea vagans BWL1的活菌数大于或等于108CFU/mL。
3.根据权利要求1所述的黄曲霉拮抗菌的应用,其特征在于:微生物制剂与饲料的质量比例为1:500-1000。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110878778.2A CN113367232B (zh) | 2021-08-02 | 2021-08-02 | 一株黄曲霉拮抗菌的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110878778.2A CN113367232B (zh) | 2021-08-02 | 2021-08-02 | 一株黄曲霉拮抗菌的应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN113367232A true CN113367232A (zh) | 2021-09-10 |
CN113367232B CN113367232B (zh) | 2024-01-30 |
Family
ID=77576722
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202110878778.2A Active CN113367232B (zh) | 2021-08-02 | 2021-08-02 | 一株黄曲霉拮抗菌的应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN113367232B (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112746041A (zh) * | 2021-01-11 | 2021-05-04 | 安徽农业大学 | 广布泛菌lsnsy15-4菌株及其在促进烟草生长方面的应用 |
CN115851533A (zh) * | 2022-12-05 | 2023-03-28 | 众乐(潍坊)生物科技有限公司 | 一种苏云金杆菌及其在抑制畜禽饲料霉菌中的应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105899668A (zh) * | 2013-11-11 | 2016-08-24 | 巴斯夫欧洲公司 | 抗真菌青霉属菌株,其杀真菌extrolite,及其用途 |
JP2018172389A (ja) * | 2018-05-31 | 2018-11-08 | 住友化学株式会社 | 殺菌剤に対して感受性が低下した植物病原性微生物の防除方法 |
WO2021028911A1 (en) * | 2019-08-14 | 2021-02-18 | Lavie Bio Ltd. | Bacterial strains having fungicidal activity, compositions comprising same and use thereof |
-
2021
- 2021-08-02 CN CN202110878778.2A patent/CN113367232B/zh active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105899668A (zh) * | 2013-11-11 | 2016-08-24 | 巴斯夫欧洲公司 | 抗真菌青霉属菌株,其杀真菌extrolite,及其用途 |
JP2018172389A (ja) * | 2018-05-31 | 2018-11-08 | 住友化学株式会社 | 殺菌剤に対して感受性が低下した植物病原性微生物の防除方法 |
WO2021028911A1 (en) * | 2019-08-14 | 2021-02-18 | Lavie Bio Ltd. | Bacterial strains having fungicidal activity, compositions comprising same and use thereof |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
XIE, YANLI ET.AL: "Purification and identification of an aflatoxin B-1 degradation enzyme from Pantoea sp. T6", 《TOXICON》, pages 35 - 42 * |
胡欣洁等: "泛菌B3.2.1对黄曲霉抑菌效果的研究", 《江苏农业科学》, pages 294 - 297 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112746041A (zh) * | 2021-01-11 | 2021-05-04 | 安徽农业大学 | 广布泛菌lsnsy15-4菌株及其在促进烟草生长方面的应用 |
CN112746041B (zh) * | 2021-01-11 | 2022-04-19 | 安徽农业大学 | 广布泛菌lsnsy15-4菌株及其在促进烟草生长方面的应用 |
CN115851533A (zh) * | 2022-12-05 | 2023-03-28 | 众乐(潍坊)生物科技有限公司 | 一种苏云金杆菌及其在抑制畜禽饲料霉菌中的应用 |
CN115851533B (zh) * | 2022-12-05 | 2023-06-27 | 众乐(潍坊)生物科技有限公司 | 一种苏云金杆菌及其在抑制畜禽饲料霉菌中的应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN113367232B (zh) | 2024-01-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN111154688B (zh) | 一株生防贝莱斯芽孢杆菌sf259及其应用 | |
CN109468243B (zh) | 一株暹罗芽孢杆菌及其应用 | |
CN110452832B (zh) | 一株耐酸性解淀粉芽孢杆菌Kc-5及其应用 | |
CN111254093A (zh) | 一株贝莱斯芽孢杆菌229-15及其应用 | |
CN113980846B (zh) | 一种拮抗尖孢镰刀菌的高效抗逆贝莱斯芽孢杆菌 | |
CN109456921B (zh) | 一种多粘类芽孢杆菌、应用及微生物菌剂、粉剂和颗粒剂 | |
CN113367232B (zh) | 一株黄曲霉拮抗菌的应用 | |
CN110878265B (zh) | 一株降解黄曲霉毒素的枯草芽孢杆菌及其应用 | |
CN114921360A (zh) | 一株贝莱斯芽孢杆菌ub201712及其发酵液的制备方法和应用 | |
CN113755389A (zh) | 一种贝莱斯芽孢杆菌及其应用 | |
CN114437994A (zh) | 一种生物防治菌Bacillus siamensis HT1及其在制备生防菌剂中的应用 | |
CN110184224B (zh) | 一株表皮葡萄球菌及其应用 | |
CN117126790B (zh) | 一种普利茅斯沙雷氏菌及抑制玉米赤霉烯酮的应用 | |
CN117106649A (zh) | 一株拮抗黄曲霉的菌株及其在黄曲霉生物防治中的应用 | |
CN109266570B (zh) | 一种拮抗黄曲霉生长的微生物制剂及应用 | |
CN109355222B (zh) | 对水稻白叶枯病菌具有拮抗作用的芽孢杆菌及分离与应用 | |
CN115851512B (zh) | 一种枯草芽孢杆菌沙漠亚种及其应用 | |
CN110878263A (zh) | 粪产碱杆菌及其代谢产物在防治储藏期粮油黄曲霉菌及毒素中的应用 | |
CN113046264B (zh) | 一种产3-甲硫基丙醇的链霉菌及其在防治植物卵菌和真菌病害中的应用 | |
CN113773981A (zh) | 一株高效拮抗青霉菌和灰霉菌的生防菌及其在猕猴桃贮藏中的应用 | |
CN110551649B (zh) | 一株拮抗植物乳杆菌及其在防治草莓灰霉病中的应用 | |
CN115418326A (zh) | 一种复合菌剂及其应用 | |
CN113684158A (zh) | 一种暹罗芽孢杆菌jy-1及其制剂和应用 | |
CN116200300A (zh) | 一株食窦魏斯氏菌及其应用 | |
CN117721038B (zh) | 生防菌株e16及其在防治黄曲霉菌中的应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |