CN114921360A

CN114921360A - 一株贝莱斯芽孢杆菌ub201712及其发酵液的制备方法和应用

Info

Publication number: CN114921360A
Application number: CN202210387408.3A
Authority: CN
Inventors: 霍光华; 崔朝宇; 郑先能; 潘春奇; 霍达; 吴天福; 龙昊知
Original assignee: Jiangxi Agricultural University
Current assignee: Jiangxi Agricultural University
Priority date: 2021-10-22
Filing date: 2022-04-13
Publication date: 2022-08-19

Abstract

本发明公开了一株贝莱斯芽孢杆菌UB201712及其发酵液的制备方法和应用，该菌株作为柑橘采后青、绿霉病原的伴生菌被分离，鉴定属于贝莱斯芽孢杆菌，故命名为贝莱斯芽孢杆菌UB201712，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.15614。贝莱斯芽孢杆菌UB201712能同时抑制意大利青霉和指状青霉，起到柑橘采后防腐保鲜效果，为防治柑橘采后青、绿霉病提供了新的选择。贝莱斯芽孢杆菌UB201712是天然病原拮抗菌，以及传统食品发酵用解淀粉芽孢杆菌类群成员，因此病原不易产生抗药性，且环境相容和食品安全性好。

Description

一株贝莱斯芽孢杆菌UB201712及其发酵液的制备方法和应用

技术领域

本发明涉及微生物生防菌剂领域，尤其是涉及一株贝莱斯芽孢杆菌 UB201712及其发酵液的制备方法和应用。

背景技术

柑橘和水稻分别是我国最主要果树作物和粮食作物。柑橘采后贮藏和运输过程中，外界的机械损伤和其自身新陈代谢衰老极易招致病原侵染而腐烂变质，腐烂率在20％～40％，其中意大利青霉(Penicillium italicum)和指状青霉(P. digitatum)是引起柑橘采后青、绿霉病腐烂的最主要病原，占总腐烂率的 70％～80％。水稻生产过程，由稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)引起的稻瘟病是水稻灾难性的病害，该病潜伏期长，发病部位多，分布广泛，危害严重。选育出的抗性品种并不能获得对高度变异的稻瘟病菌的持续抗性，仅能维持2 3 个季节，或者2年，可因环境的改变，肥、水管理等使品种丧失抑病性，甚至变抑病为感病，同时携带抗稻瘟病基因的水稻还存在所产稻米品质低下的问题。化学防治成为上述两类病害防治的一种不可缺少的手段。然而现行化学防治出现的药物残留、病原抗药性等问题，迫使某些化学杀菌剂被禁用或限制使用，生物源杀菌剂因其环境相容性好、病原难以产生抗药性等特点已逐步占领杀菌剂农药市场，成为防治作物病害的发展方向。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)自1835年正式命名以来，其研究已有186 年的历史，分子生物学等手段应用，人们发现枯草芽孢杆菌实际上不仅是一个表型相似的群体，而且枯草芽孢杆菌的产耐热暴露和干燥芽孢、分泌抗菌肽等特性极具生防价值，因此，近年世界各国竞向开发枯草芽孢杆菌类生防产品。现已有商业化供应的产品有：基于枯草芽孢杆菌某些菌株生产的AvogreenR(南非Ocean Agriculture公司)、Bio safeR(巴西Biocontrole Farroupilha实验室)、Biosubtilin(印度Biotech international公司)、Ecoshot(日本 Kumiai化学工业)、FZB24RWG和Rhizo PlusR(德国ABiTEP GmbH公司)、BalladR、RhapsodyR和SerenadeR(美国AgraQuest公司)、CeaseR(美国 BioWorks公司)、CompanionR(美国Growth Products公司)、KodiakR(美国 Gustafson公司)、HiStick N/TR/SubtilexR/Pro-MixR(美国Becker Underwood 和加拿大Premier Horticulture公司)；基于短小芽孢杆菌某些菌株生产的 Ballad Plus i SonataR和Yield ShieldR(美国BayerCropScience公司)；基于地衣芽孢杆菌某些菌株生产的EcoGuard TM(丹麦Novozymes A/S公司)、 Biofungicide(美国Novozymes Biologicals公司)；基于解淀粉芽孢杆菌某菌株生产的RhizoVitalR42和RhizoVitalR42TB(德国ABiTEP GmbH公司)。2005 年在西班牙Malaga省Velez河发现贝莱斯芽孢杆菌(B.velezensis CR-502T和CR-14b)；2016年，发现的甲基营养芽孢杆菌与贝莱斯芽孢杆菌在表现型和基因型上存在高度一致性，故将两者合并为贝莱斯芽孢杆菌。作为一种新型菌种，现今世界上利用该菌的仅有其菌发现国：西班牙的Agricaldes公司近年利用贝莱斯芽孢杆菌某菌株生产了一种用于防治灰霉病菌(Botrytiscinerea)的 Botrybel产品，然而至今未发现有用于柑橘采后青、绿霉病防治的贝莱斯芽孢杆菌产品。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一株对柑橘采后青、绿霉病原和水稻稻瘟病原等多种病原有强烈抑制作用的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis) UB201712。

本发明的第二个目的在于提供一株贝莱斯芽孢杆菌UB201712发酵液的制备方法。

本发明的第三个目的在于提供贝莱斯芽孢杆菌UB201712在抑制作物病原，特别是防治柑橘采后青、绿霉病上的应用，它能替代现有柑橘采后青、绿霉病化学药剂防治方法，并可缓解环境污染和病原抗药性的技术问题。

本发明的第一个目的是这样实现的：

一株贝莱斯芽孢杆菌UB201712，特征是：现保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.15614，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2018年4月13日；

所述菌株UB201712是申请人在培养柑橘采后病原时发现一株青、绿霉病原伴生菌，显示出对柑橘采后青、绿霉病原有强烈抑制作用，该菌为杆菌、革兰氏染色阳性、内生孢子、产淀粉酶，16s rDNA基因序列分析比对属于解淀粉芽孢杆菌类群，rpoB基因序列分析比对属于贝莱斯芽孢杆菌，具有以下具体特征：

A、形态特征：菌落干燥、乳白色、圆形边缘不规则、表面褶皱、中间有环状凸起、菌落直径为2～3mm，菌体杆状、革兰氏染色为阳性、产芽孢；

B、生理生化特性：菌株能利用D-木糖、D-果糖、蔗糖、麦芽糖、乳酮糖、木聚糖，不能利用D-阿拉伯糖；氧化酶、接触酶、V-P反应为阳性，甲基红反应和柠檬酸盐利用为阴性；菌株能使淀粉水解、明胶液化，可产淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶；菌株能在10％NaCl浓度下生长，生长最低pH为4.5；

C、分子特征：对菌株DNA抽提，16s rDNA和rpoB基因扩增，分别进行序列分析并上传到NCBI，获得序列号为MN596018和MN608112，blast比对并构建系统发育树。

本发明的第二个目的是这样实现的：

一株贝莱斯芽孢杆菌UB201712发酵液的制备方法，特征是：按下列步骤进行：

A、挑取活化好的菌株UB201712的单菌落于15～30mL的NA(营养琼脂) 液体培养基中，置于28～37℃、160～200rpm摇床中振荡培养14～18h，取对数生长期的菌体发酵液，调节菌体发酵液OD₆₀₀至0.8～1.2，制备得到种子液；

B、将所述步骤A中的种子液接种于装有发酵培养基的三角瓶中，装液量为60～80mL/250mL，种子液的接种量为5～8％，在30～37℃、160～200rpm 摇床中振荡培养50～58h，制备得到所述贝莱斯芽孢杆菌UB201712发酵液。

步骤B中所述的发酵培养基包括豆粕2～6g/L、酵母浸粉3～7g/L、麸皮 4～6g/L、糖蜜4～6g/L、硫酸镁1～2.5g/L，硫酸锰0.01～0.03g/L，pH5.5～ 7.0。

步骤B中所制备的贝莱斯芽孢杆菌UB201712发酵液的芽孢数为0.5× 10⁹～3×10¹⁰CFU/mL。

本发明的第三个目的是这样实现的：

贝莱斯芽孢杆菌UB201712发酵液在抑制作物病原，特别是防治柑橘采后青、绿霉病上的应用。

A、抑制作物病原：

采用平板对峙法测定菌株UB201712对病原真菌的抑菌活性：将7mm病原真菌菌块接种于PDA(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)平板的中央，在距离中心点2.5cm处接种调节菌液浓度的贝莱斯芽孢杆菌UB201712发酵液，对照组只接种病原真菌，置于28℃培养6d后，十字交叉法测定实验组和对照组菌落直径，每处理重复三次，按照如下公式计算抑菌率，抑菌率＝(对照组菌落直径 -实验组菌落直径)/对照组菌落直径×100％。

涉及的作物病原有意大利青霉P.italicum、指状青霉P.digitatum、稻瘟病菌M.oryzae、水稻纹枯病菌Rhizoctonia soloni、猕猴桃链格孢菌Alternaria sp.、西瓜枯萎病菌Fusarium oxysporum f.sp.niveum、黄瓜枯萎病菌F.oxysporum f.sp. cucumerinum、辣椒疫霉菌F.oxysporum f.sp.vasinfectum、葡萄座腔病菌 Botryosphaeria dothidea、棉花枯萎病菌F.oxysporum f.sp.vasinfectum、烟草黑胫病菌Phytophthora parasiticavar.Nicotianae。

B、防治柑橘采后青、绿霉病上的应用：

将7mm意大利青霉或指状青霉的菌块接种于预制的含有贝莱斯芽孢杆菌UB201712浓度分别为0、10¹、10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶、10⁷、10⁸、10⁹cfu/mL 的PDA平板中央，置于28℃培养6d后，测定各处理病原菌落直径，每处理重复三次，按照如下公式计算抑菌率，抑菌率＝(零浓度菌落直径-其它浓度菌落直径)/零浓度菌落直径×100％。

将意大利青霉或指状青霉接入预制的南丰蜜桔表皮孔内，室温25℃保湿培养1d后，在接入病原处滴加系列浓度贝莱斯芽孢杆菌UB201712发酵液至病原菌浸润，同温、同湿下继续培养4d。

与现有技术相比，本发明提供的所述贝莱斯芽孢杆菌UB201712能同时抑制意大利青霉和指状青霉，从而为防治柑橘采后青、绿霉病提供了新的选择。由于本发明提供的贝莱斯芽孢杆菌作为青、绿霉病原的伴生菌株被分离，是天然病原拮抗菌，且发酵液为生物菌剂，因此病原不易产生抗药性、环境相容性好。另外，贝莱斯芽孢杆菌还是传统食品发酵(如中国的豆豉、韩国的doenjang 和ganjang、泰国的poo-khem)用解淀粉芽孢杆菌类群成员，因此在柑橘采后防腐上应用，食品安全性也没问题。

附图说明

图1为本发明提供的菌株UB201712在NA固体或液体培养基培养后的菌落、菌体和芽孢形态图，其中：A为菌落形态，B为革兰氏染色的菌体，C为含芽孢的菌体；

图2为菌株UB201712的16s rDNA基因序列的系统发育树；

图3为菌株UB201712的rpoB基因序列的系统发育树；

图4为本发明提供的菌株UB201712与包括柑橘采后主要病原意大利青霉和指状青霉，以及其它作物病原的平板对峙实验图；

图5为本发明提供的贝莱斯芽孢杆菌UB201712防治柑橘采后青、绿霉病的效果图，其中：a：防治绿霉病效果，上排为无菌水CK组，下排为处理组； b:防治青霉病效果，上排为无菌水CK组，下排为处理组。

具体实施方式

下面结合实施实例并对照附图对本发明作进一步详细说明。

实施例1：菌株UB201712鉴定、初步发酵制备和拮抗病原菌的筛选

1.本发明采用以下方法对UB-201712进行鉴定：

菌株UB201712的形态鉴定请参阅附图1，附图1为本发明提供的拮抗菌株UB201712在NA固体或液体培养基培养后的菌落、菌体和芽孢形态图。具体为将活化后的菌株UB201712接种至NA液体培养基中，置于37℃摇床中180 rpm振荡培养18h后；取稀释后的菌液0.1mL涂布于NA固体培养基中，晾干后置于恒温培养箱中，37℃培养24h。由附图1A可看出，菌株UB201712的菌落干燥、乳白色、圆形边缘不规则、表面褶皱、中间有环状凸起、菌落直径为2～3mm；附图1B可知，菌株UB201712杆状、革兰氏染色呈阳性；附图 1C可见，被染成蓝色的为芽孢。

菌株UB201712的生理生化鉴定菌株UB201712能利用D-木糖、D-果糖、蔗糖、麦芽糖、乳酮糖、木聚糖等糖类，不能利用D-阿拉伯糖。氧化酶、接触酶、V-P反应为阳性，甲基红反应和柠檬酸盐利用为阴性。菌株能使淀粉水解、明胶液化，可产淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶。菌株可在10％NaCl浓度下生长，生长最低pH为4.5。

菌株UB201712的分子鉴定挑取一个单菌落，菌株UB201712接种于NA 液体培养液中，置于37℃、180rpm摇床中培养16h后，收集菌体。用细菌DNA 提取试剂盒提取基因组DNA。以菌株UB201712基因组DNA为模板。参照以下扩增体系进行PCR扩增。

表1PCR扩增反应体系

其中1.1×T3 super PCR mix购自北京擎科生物技术有限公司，其中预含有 DNA聚合酶、dNTPs和反应缓冲液、电泳缓冲液等PCR扩增所需的常用试剂，本领域技术人员可根据需要直接选择其他PCR扩增试剂盒，或是根据需要自行采用独立的DNA聚合酶、dNTPs和反应缓冲液进行PCR扩增。本实施例中，16S rRNA基因扩增引物为27F和1492R，rpoB基因扩增引物为rpoB-F和rpoB-R。

各引物的具体序列为：

27F：5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’；

1492R：5’-CAAACTTGGTCATTAGAGGA-3’；

rpoB-F：5’-AGGTCAACTAGTTCAGTATGGAC-3’；

rpoB-R：5’-AAGAACCATAACCGGCAACTT-3’。

扩增条件为：

95℃预变性5min；95℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸60s，重复30 个循环；72℃补平10min。

经过PCR扩增得到的扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳分离，随后对扩增产物进行双向测序，测序得到的基因序列，分别上传到NCBI，获得序列号为 MN596018和MN608112。测序得到的基因序列与NCBI数据库(https:// www.ncbi.nlm.nih.gov)中的核苷酸序列进行比对，序列比对结果显示， UB-201712与数据库中贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis对应序列相似性达 100％。

综合菌株UB201712的形态结构、生理生化和分子等特征，故确定并命名该菌株为贝莱斯芽孢杆菌UB201712。保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNo.15614。

2.菌株UB201712初步采用以下方法发酵制备：

挑取活化好的菌株UB201712的单菌落于20mL于NA液体培养基中，置于 37℃、180rpm摇床中振荡培养18h，调节菌液OD600至0.1，初步制备得到发酵液，供筛选敏感病原使用。

3.菌株UB201712拮抗作物病原的抑制活性：

采用平板对峙法测定菌株UB201712对病原真菌的抑菌活性：将7mm病原真菌菌块接种于PDA(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)平板的中央，在距离中心点2.5cm处接种调节菌液浓度的菌株UB201712发酵液，对照组只接种病原真菌，置于28℃培养6d后，十字交叉法测定实验组和对照组菌落直径，每处理重复三次，按照如下方程计算抑菌率。抑菌率＝(对照组菌落直径-实验组菌落直径)/对照组菌落直径×100％。

贝莱斯芽孢杆菌UB2017对柑橘采后主要致腐病原意大利青霉和指状青霉抑菌率分别为67.65％、58.58％，对稻瘟病菌、水稻纹枯病菌、猕猴桃链格孢菌抑菌率分别为79.80％、66.89％和66.47％，对西瓜枯萎病菌、黄瓜枯萎病菌、辣椒疫霉菌、葡萄座腔病菌、棉花枯萎病菌、烟草黑胫病菌等均有60％左右的抑菌率(附图4)。

实施例2：菌株UB201712、发酵制备和防治柑橘采后青霉病

菌株UB201712，现保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.15614。

菌株UB201712发酵制备：挑取活化好的菌株UB201712的单菌落于30mL NA液体培养基中，置于35℃、160rpm摇床中振荡培养16h，取对数生长期的菌体发酵液，调节菌液OD₆₀₀至1.2，制备得到种子液；

将所述种子液接种于装有发酵培养基的三角瓶中，装液量为80mL/250mL，种子液的接种量为8％，在37℃、180rpm摇床中振荡培养55h，制备得到所述贝莱斯芽孢杆菌UB201712。其中所述发酵培养基包括豆粕4.8g/L、酵母浸粉5g/L、麸皮5g/L、糖蜜4g/L、硫酸镁2.3g/L，硫酸锰0.01g/L，pH6.5。所制备的贝莱斯芽孢杆菌UB201712发酵液的芽孢数为1.5×10¹⁰CFU/mL。

将7mm病原意大利青霉菌块接种于预制的含有贝莱斯芽孢杆菌 UB201712浓度分别为0、10¹、10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶、10⁷、10⁸、10⁹cfu/mLPDA 的平板中央，置于28℃培养6d后，测定各处理菌落直径，每处理重复三次，按照如下方程计算抑菌率。抑菌率＝(零浓度菌落直径-其它浓度菌落直径)/ 零浓度菌落直径×100％。

表2贝莱斯芽孢杆菌UB201712对意大利青霉的抑菌效果

将意大利青霉接入预制的南丰蜜桔表皮孔内，室温25℃保湿培养1d后，在接入病原菌处滴加贝莱斯芽孢杆菌UB201712发酵液至病原菌浸润，同温、同湿下继续培养4d。该菌液防病保鲜效果良好(见附图5b)。

实施例3：菌株UB201712、发酵制备和防治柑橘采后绿霉病

菌株UB201712发酵制备：挑取活化好的菌株UB201712的单菌落于25mL NA液体培养基中，置于30℃、170rpm摇床中振荡培养16h，取对数生长期的菌体发酵液，调节菌液OD₆₀₀至1.0，制备得到种子液；

将所述种子液接种于装有发酵培养基的三角瓶中，装液量为70mL/250mL，种子液的接种量为5％，32℃、170rpm摇床中振荡培养50h，制备得到所述 UB-201712发酵液菌剂。其中所述发酵培养基包括豆粕5g/L、酵母浸粉4g/L、麸皮4g/L、糖蜜5g/L、硫酸镁2g/L、硫酸锰0.01g/L，pH6.0。所制备的贝莱斯芽孢杆菌UB201712发酵液芽孢数为2×10⁹CFU/mL。

将7mm病原指状青霉菌块接种于预制的含有贝莱斯芽孢杆菌UB201712 浓度分别为0、10¹、10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶、10⁷、10⁸、10⁹cfu/mL的PDA平板中央，置于28℃培养6d后，测定各处理菌落直径，每处理重复三次，按照如下方程计算抑菌率。抑菌率＝(零浓度菌落直径-处理组菌落直径)/零浓度菌落直径×100％。

表3贝莱斯芽孢杆菌UB201712对指状青霉的抑菌效果

将指状青霉接入预制的南丰蜜桔表皮孔内，室温25℃保湿培养1d后，在接入病原菌处滴加菌株UB201712发酵液至病原菌浸润，同温、同湿下继续培养4d。该菌液防病保鲜效果良好(见附图5a)。

序列表

<110> 江西农业大学

<120> 一株贝莱斯芽孢杆菌UB201712及其发酵液的制备方法和应用

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1400

<212> DNA

<213> 贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）(Bacillus velezensis)

<400> 1

tgcagtcgag cggacagatg ggagcttgct ccctgatgtt agcggcggac gggtgagtaa 60

cacgtgggta acctgcctgt aagactggga taactccggg aaaccggggc taataccgga 120

tggttgtttg aaccgcatgg ttcagacata aaaggtggct tcggctacca cttacagatg 180

gacccgcggc gcattagcta gttggtgagg taacggctca ccaaggcgac gatgcgtagc 240

cgacctgaga gggtgatcgg ccacactggg actgagacac ggcccagact cctacgggag 300

gcagcagtag ggaatcttcc gcaatggacg aaagtctgac ggagcaacgc cgcgtgagtg 360

atgaaggttt tcggatcgta aagctctgtt gttagggaag aacaagtgcc gttcaaatag 420

ggcggcacct tgacggtacc taaccagaaa gccacggcta actacgtgcc agcagccgcg 480

gtaatacgta ggtggcaagc gttgtccgga attattgggc gtaaagggct cgcaggcggt 540

ttcttaagtc tgatgtgaaa gcccccggct caaccgggga gggtcattgg aaactgggga 600

acttgagtgc agaagaggag agtggaattc cacgtgtagc ggtgaaatgc gtagagatgt 660

ggaggaacac cagtggcgaa ggcgactctc tggtctgtaa ctgacgctga ggagcgaaag 720

cgtggggagc gaacaggatt agataccctg gtagtccacg ccgtaaacga tgagtgctaa 780

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atgtggttta attcgaagca acgcgaagaa ccttaccagg tcttgacatc ctctgacaat 960

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ccgaagtcgg tgaggtaacc 1400

<210> 2

<211> 528

<212> DNA

<213> 贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）(Bacillus velezensis)

<400> 2

agctatgctc gcattagcga agtgttagaa ttaccaaatc tcattgaaat tcaaacctct 60

tcttatcagt ggtttcttga tgagggtctt agagagatgt ttcaagacat atcaccaatt 120

gaggatttca ctggtaacct ctctctagag ttcattgact acagtttagg agatcctaag 180

tatcccgttg aagagtcaaa agaacgtgat gtgacttact cagctccgct gagagtgaag 240

gttcgtttaa ttaacaaaga aactggagag gtaaaagatc aggatgtctt catgggtgat 300

ttccctatta tgacagatac cggtactttt atcatcaacg gtgcagaacg tgttatcgta 360

tctcagcttg ttcggtctcc aagtgtatat ttcagtggta aagtagacaa aaacggtaaa 420

aaaggtttta ccgcgactgt cattccaaac cgtggcgcat ggttagaata cgaaactgat 480

gcgaaagatg ttgtgtatgt ccgcattgat cgcacacgta agttgccg 528

Claims

1.一株贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis UB201712，其特征在于：现保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.15614。

2.一株贝莱斯芽孢杆菌UB201712发酵液的制备方法，其特征在于：按下列步骤进行：

A、挑取活化好的菌株UB201712的单菌落于15～30mL的NA液体培养基中，置于28～37℃、160～200 rpm摇床中振荡培养14～18 h，取对数生长期的菌体发酵液，调节菌体发酵液OD₆₀₀至0.8～1.2，制备得到种子液；

B、将所述步骤A中的种子液接种于装有发酵培养基的三角瓶中，装液量为60～80mL/250mL，种子液的接种量为5～8％，在30～37℃、160～200 rpm摇床中振荡培养50～58h，制备得到所述的贝莱斯芽孢杆菌UB201712发酵液。

3.根据权利要求2所述的贝莱斯芽孢杆菌UB201712的制备方法，其特征在于：步骤B中所述的发酵培养基包括豆粕2～6 g/L、酵母浸粉3～7 g/L、麸皮4～6 g/L、糖蜜4～6 g/L、硫酸镁1～2.5 g/L，硫酸锰0.01～0.03 g/L，pH5.5～7.0。

4.根据权利要求2所述的贝莱斯芽孢杆菌UB201712的制备方法，其特征在于：步骤B中所制备的贝莱斯芽孢杆菌UB201712发酵液的芽孢数为0.5×10⁹～3×10¹⁰CFU/mL。

5.贝莱斯芽孢杆菌UB201712发酵液在抑制作物病原上的应用。

6.根据权利要求5所述的贝莱斯芽孢杆菌UB201712发酵液在抑制作物病原上的应用，其特征在于：贝莱斯芽孢杆菌UB201712发酵液防治柑橘采后青、绿霉病上的应用。

7.根据权利要求5所述的贝莱斯芽孢杆菌UB201712发酵液在抑制作物病原上的应用，其特征在于：贝莱斯芽孢杆菌UB201712发酵液对意大利青霉、指状青霉、稻瘟病菌、水稻纹枯病菌、猕猴桃链格孢菌、西瓜枯萎病菌、黄瓜枯萎病菌、辣椒疫霉菌、葡萄座腔病菌、棉花枯萎病菌、烟草黑胫病菌这十一种病原均具抑制作用。