CN107348323A - 一种枯草芽孢杆菌、脱霉剂及脱霉剂的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种枯草芽孢杆菌、脱霉剂及脱霉剂的应用,属于生物技术领域。所述枯草芽孢杆菌于2017年5月2日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M 2017230。所述脱霉剂包括:蒙脱石、酵母细胞壁、乳酸菌、维生素E和如权利要求1或2所述的枯草芽孢杆菌,所述蒙脱石、所述酵母细胞壁、所述乳酸菌、所述维生素E和所述枯草芽孢杆菌的重量份分别为:30~60份、20~35份、5~50份、5~10份和10~30份,所述乳酸菌为屎肠球菌。该枯草芽胞杆菌具有良好的吸附性能,对霉菌毒素的脱霉能力强。

Description

一种枯草芽孢杆菌、脱霉剂及脱霉剂的应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域,特别涉及一种枯草芽孢杆菌、脱霉剂及脱霉剂 的应用。
背景技术
霉菌毒素(mycotoxins)主要是指霉菌或其它真菌产生的有毒代谢产物,它 们可通过饲料或食品进入人和动物的体内,引起人和动物的急性或慢性中毒。 目前危害谷物饲料的主要有六大霉菌毒素包括:黄曲霉毒素、呕吐毒素、烟曲 霉毒素、赭曲霉毒素、T2毒素和玉米赤霉烯酮。
与传统的物理和化学脱霉方法相比,生物脱霉法不会破坏饲料的营养成分, 也不会影响饲料的品质,生物脱霉法为霉菌毒素的脱霉提供了新的发展方向。 现有的生物脱霉法去除霉菌毒素的具体方法为:采用筛选分离出具有降解霉菌 毒素功能的菌株,通过菌株吸附霉菌毒素。但是,目前筛选分离出的菌株吸附 效果不佳。
发明内容
为了解决现有技术中筛选分离出的菌株吸附效果不佳的问题,本发明实施 例提供了一种枯草芽孢杆菌、脱霉剂及脱霉剂的应用。所述技术方案如下:
一方面,本发明实施例提供了一种枯草芽孢杆菌,所述枯草芽孢杆菌于2017 年5月2日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M 2017230。
具体地,所述保藏编号为CCTCC NO:M 2017230的枯草芽孢杆菌的16Sr DNA序列如序列表中SEQ IN NO:1所示。
另一方面,本发明实施例提供了一种脱霉剂,所述脱霉剂包括:上述枯草 芽孢杆菌。
具体地,所述脱霉剂还包括:蒙脱石、酵母细胞壁、乳酸菌和维生素E,所 述蒙脱石、所述酵母细胞壁、所述乳酸菌、所述维生素E和所述枯草芽孢杆菌 的重量份分别为:33~43份、21~28份、11~16份、5~10份和10~20份,所述乳 酸菌为屎肠球菌。
具体地,所述蒙脱石为纳米级蒙脱石。该纳米级蒙脱石能够提高脱霉剂的 吸附效率。
进一步地,所述蒙脱石、所述酵母细胞壁、所述乳酸菌、所述维生素E和 所述枯草芽孢杆菌的重量份分别为:40份、25份、15份、10份和10份。
优选地,所述蒙脱石、所述酵母细胞壁、所述乳酸菌、所述维生素E和所 述枯草芽孢杆菌的重量份分别为:43份、21份、16份、5份和15份。
优选地,所述蒙脱石、所述酵母细胞壁、所述乳酸菌、所述维生素E和所 述枯草芽孢杆菌的重量份分别为:33份、28份、12份、7份和20份。
优选地,所述蒙脱石、所述酵母细胞壁、所述乳酸菌、所述维生素E和所 述枯草芽孢杆菌的重量份分别为:37份、26份、11份、8份和18份。
又一方面,本发明实施例提供了一种上述脱霉剂在降解霉菌毒素中的应用, 所述应用包括:将所述脱霉剂按照质量分数为0.05%~2%添加到饲料中。
具体地,将所述脱霉剂按照质量分数为1%添加到饲料中。
具体地,所述霉菌毒素包括玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素和呕吐毒素中的至 少一种。
本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是:
(1)本发明实施例提供的枯草芽胞杆菌针对玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素和 呕吐毒素中具有良好的吸附性能,对玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素和呕吐毒素中 的脱霉能力强。特别地,该枯草芽孢杆菌的生物代谢的胞外产物能够高效降解 呕吐毒素,在生物体内的消化道中能够将呕吐毒素降解为无毒的分子片段,且 降解过程不产生毒副作用。
(2)本发明实施例提供的脱霉剂具有良好的吸附性能、抑菌和杀菌的功能, 可提高动物的繁殖性能,提高仔猪的生长性能,并具有对抗体效价的保护作用。 其中,该脱霉剂通过物理吸附和生物吸附相结合使得该脱霉剂具有良好的脱霉 效果。具体而言,该脱霉剂通过蒙脱石进行物理吸附,蒙脱石层间距离较大, 这使得蒙脱石具有最佳的阳离子交换平衡性,从而使脱霉剂既能够对体积较大 的霉菌毒素具有良好的吸附性能,如玉米赤霉烯酮,又能够对极性较弱的霉菌 毒素的能力具有较强的吸附性能,如呕吐毒素和玉米赤霉烯酮,脱霉剂利用枯 草芽胞杆菌实现生物吸附,同时酵母细胞壁能够结合霉菌毒素实现生物吸附, 从而有效脱去饲料中的霉菌毒素。
(3)本发明实施例提供的脱霉剂具有解毒护肝的益生功能,该脱霉剂能 够促进超氧化物歧化酶、还原性谷胱甘肽等抗氧化物质的产生,从而减少肝脏 因霉菌毒素中毒而受到氧化损伤,进而减少脂肪肝的发生,保护肝脏细胞免受 自由基损伤。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案,下面将对实施例描述中所 需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明 的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下, 还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例四提供的对照组与脱霉剂组的对比图,图中左侧为对 照组,右侧为脱霉剂组;
图2是本发明实施例四提供的培养有大肠杆菌K88的培养基的抑菌圈结果 图;
图3是本发明实施例四提供的培养有大肠杆菌K99的培养基的抑菌圈结果 图;
图4是本发明实施例四提供的培养有大肠杆菌O157的培养基的抑菌圈结果 图;
图5是本发明实施例四提供的培养有大肠杆菌O139的培养基的抑菌圈结果 图;
图6是本发明实施例四提供的培养有金葡萄球菌的培养基的抑菌圈结果图;
图7是本发明实施例四提供的培养有沙门氏菌的培养基的抑菌圈结果图。
本发明实施例提供的枯草芽孢杆菌TM02(Bacillus subtilis TM02)于2017 年5月2日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M 201 7230,保藏单位地址为中国湖北省武汉市珞珈山武汉大学。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合附图对本发明 实施方式作进一步地详细描述。
本实施例提供的蒙脱石来源于赤峰市恒润工贸有限公司,该公司提供的蒙 脱石含量92%以上;酵母细胞壁来源于山东潍坊雅致生物有限公司,该公司提 供酵母细胞壁的粗蛋白<25%;乳酸菌来源于湖北华大瑞尔科技有限公司,该公 司提供的乳酸菌大于30亿CFU/g;维生素E来源于北京卓龙兴业有限公司,该 公司提供的维生素E的单位为2000IU。
实施例一
本发明实施例提供了一种脱霉剂,该脱霉剂包括:蒙脱石、酵母细胞壁、 乳酸菌、维生素E和枯草芽孢杆菌TM02,蒙脱石、酵母细胞壁、乳酸菌、维生 素E和枯草芽孢杆菌的重量份分别为:40份、25份、15份、10份和10份,具 体地,蒙脱石、酵母细胞壁、乳酸菌、维生素E和枯草芽孢杆菌分别为40g、25g、 15g、10g和10g。其中,枯草芽孢杆菌于2017年5月2日保藏于中国典型培养 物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M 2017230,其16Sr DNA序列如序列表中SEQ IN NO:1所示。其中,乳酸菌的来源为湖北华大瑞尔科技有限公司生产 的屎肠球菌。蒙脱石为纳米级蒙脱石,该纳米级蒙脱石能够提高脱霉剂的吸附 效率。霉菌毒素包括玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素和呕吐毒素中的至少一种。
实施例二
本发明实施例提供了一种脱霉剂,该脱霉剂包括:纳米级蒙脱石、酵母细 胞壁、乳酸菌、维生素E和枯草芽孢杆菌,纳米级蒙脱石、酵母细胞壁、乳酸 菌、维生素E和枯草芽孢杆菌的重量份分别为:43份、21份、16份、5份和15 份。具体地,纳米级蒙脱石、酵母细胞壁、乳酸菌、维生素E和枯草芽孢杆菌 分别为43g、21g、16g、5g和15g。
实施例三
本发明实施例提供了一种脱霉剂,该脱霉剂包括:纳米级蒙脱石、酵母细 胞壁、乳酸菌、维生素E和枯草芽孢杆菌,纳米级蒙脱石、酵母细胞壁、乳酸 菌、维生素E和枯草芽孢杆菌的重量份分别为:33份、28份、12份、7份和20 份。具体地,纳米级蒙脱石、酵母细胞壁、乳酸菌、维生素E和枯草芽孢杆菌 分别为33g、28g、12g、7g和20g。
实施例四
本发明实施例提供了一种脱霉剂,该脱霉剂包括:纳米级蒙脱石、酵母细 胞壁、乳酸菌、维生素E和枯草芽孢杆菌,纳米级蒙脱石、酵母细胞壁、乳酸 菌、维生素E和枯草芽孢杆菌的重量份分别为:37份、26份、11份、8份和18 份。具体地,纳米级蒙脱石、酵母细胞壁、乳酸菌、维生素E和枯草芽孢杆菌 分别为37g、26g、11g、8g和18g。
脱霉剂体外吸附性能测试
在四个20mL带塞离心管中,分别加入浓度为1μg/mL的ZEN(玉米赤霉 烯酮)-PBS缓冲液中,向四个离心管中分别添加实施例一、二、三和四中所得 的脱霉剂5mg,振荡2h之后,离心10min,测定上清液中ZEN含量,计算脱霉 率,筛选最佳脱霉剂。
按下列公式计算吸附率Y(%):Y=100×(C0-C)/C0,其中:C0和C分 别表示反应前ZEN的浓度(mg/L)和反应后ZEN的浓度(mg/L)。
每个做3个平行样,取平均值作为测定结果。
根据吸附率的大小评价各脱霉剂对ZEN的体外吸附效果的优劣,具体结果 见表1。
在四个20mL带塞离心管中,分别加入浓度为5μg/mL的DON(脱氧雪腐 镰刀菌烯醇)-PBS缓冲液中,向四个离心管中分别添加实施例一、二、三和四 中所得的脱霉剂5mg,振荡2h之后,离心10min,测定上清液中DON含量, 计算脱霉剂的吸附率,筛选最佳脱霉剂。
按下列公式计算吸附率Y(%):Y=100×(C0-C)/C0,其中:C0和C分 别表示反应前DON的浓度(mg/L)和反应后DON的浓度(mg/L)。
每个做3个平行样,取平均值作为测定结果。
根据吸附率的大小评价各脱霉剂对DON的体外吸附效果的优劣,具体结果 见表1。
在四个20mL带塞离心管中,分别加入浓度为0.1μg/mL的AFB1(黄曲霉 毒素B1)-PBS缓冲液中,向四个离心管中分别添加实施例一、二、三和四中所 得的脱霉剂5mg,振荡2h之后,离心10min,测定上清液中AFB1含量,计算 脱霉剂的吸附率,筛选最佳脱霉剂。
按下列公式计算吸附率Y(%):Y=100×(C0-C)/C0,其中:C0和C分 别表示反应前AFB1的浓度(mg/L)和反应后AFB1的浓度(mg/L)。
每个做3个平行样,取平均值作为测定结果。
根据吸附率的大小评价各脱霉剂对AFB1的体外吸附效果的优劣,具体结 果见表1。
对照例一为0.01g纳米级蒙脱石分别加入浓度为1μg/mL的ZEN(玉米赤 霉烯酮)-PBS缓冲液、浓度为5μg/mL的DON(脱氧雪腐镰刀菌烯醇)-PBS 缓冲液和浓度为0.1μg/mL的AFB1(黄曲霉毒素B1)-PBS缓冲液中。
对照例二为0.01g酵母细胞壁分别加入浓度为1μg/mL的ZEN(玉米赤霉 烯酮)-PBS缓冲液、浓度为5μg/mL的DON(脱氧雪腐镰刀菌烯醇)-PBS缓 冲液和浓度为0.1μg/mL的AFB1(黄曲霉毒素B1)-PBS缓冲液中。
对照例三为0.01g本发明实施例提供的枯草芽孢杆菌分别加入浓度为1μ g/mL的ZEN(玉米赤霉烯酮)-PBS缓冲液、浓度为5μg/mL的DON(脱氧雪 腐镰刀菌烯醇)-PBS缓冲液和浓度为0.1μg/mL的AFB1(黄曲霉毒素B1)-PBS 缓冲液中。
表1为本发明四个实施例对ZEN、DON和AFB1的吸附率
组别 ZEN DON AFB1
对照例一(蒙脱石) 27.4% 26.4% 60.6%
对照例二(酵母细胞壁) 41.73% 43.07% 21.73%
对照例三(枯草芽孢杆菌) 15.5% 57.7% 25.5%
实施例一 48.6% 44.1% 90.2%
实施例二 60.4% 34.2% 94.1%
实施例三 78.3% 64.8% 93.3%
实施例四 72.3% 45.5% 87.3%
由此可见,本发明实施例提供的脱霉剂的吸附率均较高,且当枯草芽孢杆 菌TM02含量丰富时能够对非极性的DON具有良好的吸附能力。
脱霉剂对抗体效价的保护作用
试验分3组,分别为对照组、霉变日粮组和脱霉剂组,每组选用16头猪, 其中,8头阉割公猪,8头母猪,且每组试验做4个重复试验并取平均值,每组 共取64头猪。3组猪先喂养相同的未霉变的基础日粮3天(预饲期),然后再分 别喂养35天(正式期)未霉变的基础日粮、霉变日粮(将未霉变的基础日粮放 在潮湿处,随后测定其中霉菌毒素含量,确认霉菌毒素超标后用于试验。在本 实施例中,选取将基础日粮放置13天后霉变的霉变日粮,经测定该霉变日粮中 黄曲霉毒素的浓度为47ppb,呕吐毒素的浓度为1500ppb,玉米赤霉烯酮的浓度 为668ppb,并将该霉变日粮用于试验)和霉变日粮+实施例一提供的脱霉剂。试 验的35天可以具体从猪的28日龄开始饲养到62日龄结束,饲喂试验的时间为 仔猪保育阶段,饲养试验结果见表2。
表2为试验分组处理
将表2中的三组分别进行特异性抗体测定,具体方法如下:
特异性抗体指标包括猪瘟(HC)抗体,用相应的酶联免疫吸附测定抗体检 测试剂盒(由武汉科前动物生物制品有限责任公司提供)检测猪疫苗免疫后机 体抗体水平。具体操作按照酶联免疫吸附测定抗体检测试剂盒的说明书进行。
表3为特异性抗体试验结果
组别 OD630nm
对照组一 0.51±0.04
对照组二 0.33±0.07
脱霉剂组 0.48±0.04
由表3可知,脱霉剂组的特异性抗体的数值明显该与对照组二,并接近对 照组二,可见本发明实施例提供的脱霉剂能够使服用过脱霉剂的猪产生抗体, 从而能有效降低饲料中霉菌毒素对猪的免疫系统的损伤,进而提高疫苗的保护 效力。
脱霉剂对繁殖性能的影响
试验对象:经产的怀孕母猪(避免使用第一次怀孕的母猪),且母猪怀孕的 胎次在2-5次之间。
试验分组:随机分为2个组,分别为试验组和对照组,其中,试验组的母 猪选取253头,对照组母猪选取251头,且每组做4个重复试验并取平均值。 对照组喂基础日粮。试验组基础日粮+实施例一提供的脱霉剂,且脱霉剂按照质 量分数为0.1%添加到基础日粮中。试验组母猪产活仔为3163头,对照组母猪产 活仔为3037头。分别对试验组和对照组的活仔进行统计用于评估脱霉剂对繁殖 性能的影响,结果见表4。
表4为脱霉剂对繁殖性能的影响
项目 试验组(头) 对照组(头) 改善程度
窝产活仔猪数 12.5 12.1 +0.4头
窝产弱仔数 0.897 1.175 减少23.7%
窝产健仔数 11.6 10.9 +0.7头
木乃伊数 88 153 减少42.9%
死胎数 137 220 减少38.5%
表4中改善程度表示:试验组相对于对照组的改善程度,计算时采用:(试 验组-对照组)/对照组×100%。由表4可知,使用脱霉剂后可以提高怀孕母猪 的生产健康仔猪的数量,利于母猪的繁殖性能,从而提高经济效益。同时,根 据窝产死胎数/(活仔数+窝产死胎数)计算试验组中窝产死胎率为4.15%,对照 组中窝产死胎率为6.75%。试验组中窝产死胎率相比于对照组中窝产死胎率降低 了2.6%。可见使用脱霉剂后可以降低窝产死胎率。
脱霉剂对仔猪生长性能的影响
试验对象:体况良好、体重相近的35日龄的断奶仔猪300头。
试验分组:随机分为2个组,分别为试验组和对照组,每组50头,且每组 做3个重复试验并取平均值。
预饲期3天,正式期为25天。对照组喂基础日粮(保育料),试验组在每 吨基础日粮中添加1kg本实施例一提供的脱霉剂。
表5为脱霉剂对仔猪生长性能的影响
由表5可知,试验组相比于对照组对仔猪的生长性能均具有促进作用,同 时还能降低料肉比,可见使用脱霉剂可以提高仔猪生长性能,降低料肉比,从 而提高经济效益。
脱霉剂的抑菌性能
将大肠杆菌K88、大肠杆菌K99、大肠杆菌O157、大肠杆菌O139、金葡萄 球菌和沙门氏菌分别进行平板划线培养,大肠杆菌K88、大肠杆菌K99、大肠 杆菌O157、大肠杆菌O139、金葡萄球菌和沙门氏菌均来自于湖北华大瑞尔科 技有限公司,培养于36℃下20h,挑取单菌落置于MH肉汤培养基中(直接购 买的商品化培养基,称取21g,加入1000mL ddH2O完全溶解后,调pH值至7.3 ±0.1,121℃灭菌15min后使用),置于37℃振荡培养16h。将培养后的菌液通 过0.01mol/L PBS缓冲液(磷酸盐缓冲液)配置成1×107cfu/ml的指示菌菌液待 用。
将枯草芽孢杆菌TM02进行平板划线培养,培养于36℃下20h,挑取枯草 芽孢杆菌TM02菌株于50mL的LB液体培养基(胰蛋白胨10g,酵母提取物 5g,氯化钠10g,琼脂粉15g,加入1000mL ddH2O完全溶解后,调pH值至7.3 ±0.1,121℃灭菌20min后使用)中,于37℃摇床转速200r/min的条件下培养24h 后作为种子液;将种子液以1%的接种量接种到100mL的LB液体培养基中, 于37℃摇床转速200r/min的条件下培养24h作为发酵液;将制备好的发酵液于 10000r/min的条件下离心5min,取离心后的上清液并用0.22μm的无菌过滤器 过滤后待用。
取6个指示菌菌液各100μl,分别滴于6个LB固体平板培养基上并用涂布 棒涂布均匀,直至无可见水滴,再用无菌镊子取灭菌的牛津杯,轻轻放于LB固 体平板培养基的表面,每个LB固体平板培养基上均匀放置1只牛津杯。用微量 移液器吸取枯草芽孢杆菌TM02菌液265μl,注入到放置平稳的每个牛津杯内 (小心加入,切勿滴洒在牛津杯之外的LB固体平板培养基上)。再用灭菌陶瓷 盖换掉LB固体平板培养基上的玻璃平皿盖,其中,灭菌陶瓷盖用于吸收LB固 体平板培养基在后面实验过程中所蒸腾出的水分。
将上述加有枯草芽孢杆菌TM02的LB固体平板培养基放置于4℃的冰箱进 行扩散,8h后再将LB固体平板培养基放入37℃的恒温培养箱内,培养16h~24h 后,进行拍照记录,结果如图2至图7所示。测量抑菌圈的大小,每组做3个 重复试验并取平均值并记录在表6中。
表6为枯草芽孢杆菌TM02的抑菌性能
致病菌名称 抑菌圈大小(mm)
大肠杆菌K88 20
大肠杆菌K99 22
大肠杆菌O157 32
大肠杆菌O139 20
金葡萄球菌 32
沙门氏菌 18.5
抑菌圈直径≥15mm时,表示样品对指示菌的抑制效果明显;抑菌圈直径< 15mm时,表示样品对指示菌有抑制效果,但效果不明显;抑菌圈直径=0mm时, 表示样品对于指示菌无抑制效果。由表6可知,枯草芽孢杆菌TM02对以上6 种致病菌的抑菌圈直径均大于15mm,说明枯草芽孢杆菌TM02对以上6种致病 菌有很强的抑制效果,由此可判断含有枯草芽孢杆菌TM02的脱霉剂也具有良 好的抑菌性能。
脱霉剂的脱毒性能
将呕吐毒素标准品粉剂和纯水(蒸馏水)配置出3管装有20ml呕吐毒素标 准品溶液(1000ng/ml)备用。
试验分组:对照组和脱霉剂组。对照组为1000ng/ml呕吐毒素标准品溶液, 不加脱霉剂;脱霉剂组为1000ng/ml呕吐毒素标准品溶液中加入0.01g本发明实 施例三提供的脱霉剂(按1吨饲料添加500g脱霉剂);
样品处理:将对照组和脱霉剂组分别置于台式振荡器中振荡2h,各取5ml 溶液加入装有25ml浓度为70%的甲醇溶液的50ml离心管中,涡旋仪高速涡旋 3min,静置10min,取静置后的上清液200μl,加入装有3.8ml蒸馏水的离心管 中,充分混匀后待检。
样品检测:提前15min打开免疫定量速测系统,使孵化器温度达到37℃, 取呕吐毒素快速检测卡,取上述两个混匀后待检样品溶液各50μl分别加入到呕 吐毒素快速检测卡的点样孔处,孵化检测10min后得出结果。试验结果如表7:
表7为脱霉剂的脱毒结果
实验组别 对照组 脱霉剂
检测值(单位:ppb) 997.7 257.44
脱毒率 74.2%
由表7可知,脱霉剂组的呕吐毒素含量明显降低,可见,本实施例提供的 脱霉剂具有良好的脱霉效果。
脱霉剂的抗氧化性能
称取0.03g固体高锰酸钾加入100ml水中,搅拌混匀后得到浓度为0.03%的 高锰酸钾溶液,将高锰酸钾溶液分装到2个玻璃试管中,分别作为对照组和脱 霉剂组。
将本发明实施例三获得的脱霉剂加入浓度为0.03%的高锰酸钾溶液中,混合 均匀后静置30min,观察各组分的颜色变化,结果如图1所示,右边的脱霉剂组 颜色明显浅于左边的对照组。由此可知,脱霉剂组能够使高锰酸钾溶液褪色, 证明本实施例提供的脱霉剂具有很强的抗氧化性能。
(1)本发明实施例提供的枯草芽胞杆菌针对玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素和 呕吐毒素中具有良好的吸附性能,对玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素和呕吐毒素中 的脱霉能力强。特别地,该枯草芽孢杆菌的生物代谢的胞外产物能够高效降解 呕吐毒素,在生物体内的消化道中能够将呕吐毒素降解为无毒的分子片段,且 降解过程不产生毒副作用。
(2)本发明实施例提供的脱霉剂具有良好的吸附性能、抑菌和杀菌的功能, 可提高动物的繁殖性能,提高仔猪的生长性能,并具有对抗体效价的保护作用。 其中,该脱霉剂通过物理吸附和生物吸附相结合使得该脱霉剂具有良好的脱霉 效果。具体而言,该脱霉剂通过蒙脱石进行物理吸附,蒙脱石层间距离较大, 这使得蒙脱石具有最佳的阳离子交换平衡性,从而使脱霉剂既能够对体积较大 的霉菌毒素具有良好的吸附性能,如玉米赤霉烯酮,又能够对极性较弱的霉菌 毒素的能力具有较强的吸附性能,如呕吐毒素和玉米赤霉烯酮,脱霉剂利用枯 草芽胞杆菌实现生物吸附,同时酵母细胞壁能够结合霉菌毒素实现生物吸附, 从而有效脱去饲料中的霉菌毒素。
(3)本发明实施例提供的脱霉剂具有解毒护肝的益生功能,该脱霉剂能 够促进超氧化物歧化酶、还原性谷胱甘肽等抗氧化物质的产生,从而减少肝脏 因霉菌毒素中毒而受到氧化损伤,进而减少脂肪肝的发生,保护肝脏细胞免受 自由基损伤。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的 精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的 保护范围之内。
序列表
<110> 湖北华大瑞尔科技有限公司
<120> 一种枯草芽孢杆菌、脱霉剂及脱霉剂的应用
<160> 1
<170>PatentIn version 3.4
<210> 1
<211> 1598
<212>DNA
<213> 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)
<400> 1
cttgcttacg aatacgagct cggtacccta gggacctcta gagattggtt accttgttac 60
gacttcaccc caatcatctg tcccaccttc ggcggctggc tcctaaaagg ttacctcacc 120
gacttcgggt gttacaaact ctcgtggtgt gacgggcggt gtgtacaagg cccgggaacg 180
tattcaccgc ggcatgctga tccgcgatta ctagcgattc cagcttcacg cagtcgagtt 240
gcagactgcg atccgaactg agaacagatt tgtgggattg gcttaacctc gcggtttcgc 300
tgccctttgt tctgtccatt gtagcacgtg tgtagcccag gtcataaggg gcatgatgat 360
ttgacgtcat ccccaccttc ctccggtttg tcaccggcag tcaccttaga gtgcccaact 420
gaatgctggc aactaagatc aagggttgcg ctcgttgcgg gacttaaccc aacatctcac 480
gacacgagct gacgacaacc atgcaccacc tgtcactctg cccccgaagg ggacgtccta 540
tctccaggat tgtcagagga tgtcaagacc tggtaaggtt cttcgcgttg cttcgaatta 600
aaccacatgc tccaccgctt gtgcgggccc ccgtcaattc ctttgagttt cagtcttgcg 660
accgtactcc ccaggcggag tgcttaatgc gttagctgca gcactaaggg gcggaaaccc 720
cctaacactt agcactcatc gtttacggcg tggactacca gggtatctaa tcctgttcgc 780
tccccacgct ttcgctcctc agcgtcagtt acagaccaga gagtcgcctt cgccactggt 840
gttcctccac atctctacgc atttcaccgc tacacgtgga attccactct cctcttctgc 900
actcaagttc cccagtttcc aatgaccctc cccggttgag ccgggggctt tcacatcaga 960
cttaagaaac cgcctgcgag ccctttacgc ccaataattc cggacaacgc ttgccaccta 1020
cgtattaccg cggctgctgg cacgtagtta gccgtggctt tctggttagg taccgtcaag 1080
gtgccgccct atttgaacgg cacttgttct tccctaacaa cagagcttta cgatccgaaa 1140
accttcatca ctcacgcggc gttgctccgt cagactttcg tccattgcgg aagattccct 1200
actgctgcct cccgtaggag tctgggccgt gtctcagtcc cagtgtggcc gatcaccctc 1260
tcaggtcggc tacgcatcgt cgccttggtg agccgttacc tcaccaacta gctaatgcgc 1320
cgcgggtcca tctgtaagtg gtagcggaag ccacctttta tgtctgaatc atgcggttca 1380
aacaaccatc cggtattagc cccggtttcc cggagttatc ccagtcttac aggcaggtta 1440
cccacgtgtt actcacccgt ccgccgctaa catcagggag caagctccca tctgtccgct 1500
cgacttgcat gtattaggca cgccgccagc gttcgtcctg agccaggatc aactctaatc 1560
gtcgacctgc aggcatgcaa gctggcacga ccgtcgtg 1598

Claims (10)

1.一种枯草芽孢杆菌,其特征在于,所述枯草芽孢杆菌于2017年5月2日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M 2017230。
2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌,其特征在于,所述保藏编号为CCTCC NO:M2017230的枯草芽孢杆菌的16Sr DNA序列如序列表中SEQ INNO:1所示。
3.一种脱霉剂,其特征在于,所述脱霉剂包括:如权利要求1或2所述的枯草芽孢杆菌。
4.根据权利要求3所述的脱霉剂,其特征在于,所述脱霉剂还包括:蒙脱石、酵母细胞壁、乳酸菌和维生素E,所述蒙脱石、所述酵母细胞壁、所述乳酸菌、所述维生素E和所述枯草芽孢杆菌的重量份分别为:33~43份、21~28份、11~16份、5~10份和10~20份,所述乳酸菌为屎肠球菌。
5.根据权利要求4所述的脱霉剂,其特征在于,所述蒙脱石、所述酵母细胞壁、所述乳酸菌、所述维生素E和所述枯草芽孢杆菌的重量份分别为:40份、25份、15份、10份和10份。
6.根据权利要求4所述的脱霉剂,其特征在于,所述蒙脱石、所述酵母细胞壁、所述乳酸菌、所述维生素E和所述枯草芽孢杆菌的重量份分别为:43份、21份、16份、5份和15份。
7.根据权利要求4所述的脱霉剂,其特征在于,所述蒙脱石、所述酵母细胞壁、所述乳酸菌、所述维生素E和所述枯草芽孢杆菌的重量份分别为:33份、28份、12份、7份和20份。
8.一种权利要求3-7中任一项所述的脱霉剂在降解霉菌毒素中的应用,其特征在于,所述应用包括:
将所述脱霉剂按照质量分数为0.05%~2%添加到饲料中。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,将所述脱霉剂按照质量分数为0.1%添加到饲料中。
10.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述霉菌毒素包括玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素和呕吐毒素中的至少一种。
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Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107853456A (zh) * 2017-11-24 2018-03-30 大连三仪动物药品有限公司 生物脱霉剂及制备方法
CN108094681A (zh) * 2018-01-04 2018-06-01 商丘塞弗顿生物工程有限公司 一种解毒脱霉的饲料添加剂及其制备方法
CN108813289A (zh) * 2018-06-01 2018-11-16 湖北华大瑞尔科技有限公司 一种高效生物降解霉菌毒素的制剂及其制备方法与应用
CN109452490A (zh) * 2018-11-15 2019-03-12 山西大学 一种防治由霉菌毒素中毒引起的鸡肌胃炎、腺胃炎的饲料添加剂及其应用
CN110393256A (zh) * 2019-08-07 2019-11-01 中鲨动物保健品(厦门)有限公司 一种以酿酒酵母细胞壁为载体的霉菌处理剂
CN110495554A (zh) * 2019-07-26 2019-11-26 湖北华大瑞尔科技有限公司 一种玉米赤霉烯酮脱毒剂及其制备方法
CN110506888A (zh) * 2019-08-22 2019-11-29 英联普美欣科技(江西)有限公司 用于脱除霉菌毒素的脱毒剂、制备方法及应用
CN110583963A (zh) * 2019-08-29 2019-12-20 湖北华大瑞尔科技有限公司 一种呕吐毒素脱毒剂及其制备方法
CN112293568A (zh) * 2020-11-19 2021-02-02 辽宁华辰生物科技有限公司 发酵中草药及其制备方法以及饲料霉菌毒素脱霉剂及其制备方法
CN113980838A (zh) * 2021-09-30 2022-01-28 安阳中农大生物技术有限公司 一株高效定向表达细菌素m6的枯草芽孢杆菌及其应用
CN115305213A (zh) * 2021-11-02 2022-11-08 河北农业大学 一株枯草芽孢杆菌及其培养方法和应用
CN115651859A (zh) * 2022-08-10 2023-01-31 好氧探索(武汉)生物科技有限公司 枯草芽孢杆菌dp-3及其应用

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101705203A (zh) * 2009-12-21 2010-05-12 中国农业大学 用于降解黄曲霉毒素的枯草芽孢杆菌
CN102028129A (zh) * 2010-12-24 2011-04-27 北京大北农科技集团股份有限公司 新型饲料用霉菌毒素脱毒剂及其制备方法和饲料添加剂
CN102178128A (zh) * 2011-03-24 2011-09-14 南昌大学 枯草芽孢杆菌zdy1982在降解真菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇中的应用
WO2014056007A2 (de) * 2012-10-09 2014-04-17 Erber Aktiengesellschaft Enzympräparation zur transformation von ergopeptinen verfahren hierfür und futtermittel sowie futtermittelzusatzstoff oder silagezusatz enthaltend dieselbe
CN103859165A (zh) * 2014-03-06 2014-06-18 苏州万生源生物科技有限公司 一种饲料用霉菌毒素脱毒剂及其制备方法与应用
CN104099280A (zh) * 2014-07-17 2014-10-15 湖北华大瑞尔科技有限公司 一株缓解畜禽应激的枯草芽孢杆菌选育及应用
CN105385616A (zh) * 2015-09-02 2016-03-09 国家粮食局科学研究院 高效降解玉米赤霉烯酮的枯草芽孢杆菌及其应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101705203A (zh) * 2009-12-21 2010-05-12 中国农业大学 用于降解黄曲霉毒素的枯草芽孢杆菌
CN102028129A (zh) * 2010-12-24 2011-04-27 北京大北农科技集团股份有限公司 新型饲料用霉菌毒素脱毒剂及其制备方法和饲料添加剂
CN102178128A (zh) * 2011-03-24 2011-09-14 南昌大学 枯草芽孢杆菌zdy1982在降解真菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇中的应用
WO2014056007A2 (de) * 2012-10-09 2014-04-17 Erber Aktiengesellschaft Enzympräparation zur transformation von ergopeptinen verfahren hierfür und futtermittel sowie futtermittelzusatzstoff oder silagezusatz enthaltend dieselbe
CN103859165A (zh) * 2014-03-06 2014-06-18 苏州万生源生物科技有限公司 一种饲料用霉菌毒素脱毒剂及其制备方法与应用
CN104099280A (zh) * 2014-07-17 2014-10-15 湖北华大瑞尔科技有限公司 一株缓解畜禽应激的枯草芽孢杆菌选育及应用
CN105385616A (zh) * 2015-09-02 2016-03-09 国家粮食局科学研究院 高效降解玉米赤霉烯酮的枯草芽孢杆菌及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
董济军,等: "《浮动草床与微生态制剂调控养殖池塘水环境新技术》", 31 March 2017, 海军出版社 *

Cited By (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107853456A (zh) * 2017-11-24 2018-03-30 大连三仪动物药品有限公司 生物脱霉剂及制备方法
CN107853456B (zh) * 2017-11-24 2021-03-23 大连三仪动物药品有限公司 生物脱霉剂及制备方法
CN108094681A (zh) * 2018-01-04 2018-06-01 商丘塞弗顿生物工程有限公司 一种解毒脱霉的饲料添加剂及其制备方法
CN108813289B (zh) * 2018-06-01 2022-05-17 湖北华大瑞尔科技有限公司 一种高效生物降解霉菌毒素的制剂的应用方法及其制备方法
CN108813289A (zh) * 2018-06-01 2018-11-16 湖北华大瑞尔科技有限公司 一种高效生物降解霉菌毒素的制剂及其制备方法与应用
CN109452490A (zh) * 2018-11-15 2019-03-12 山西大学 一种防治由霉菌毒素中毒引起的鸡肌胃炎、腺胃炎的饲料添加剂及其应用
CN110495554A (zh) * 2019-07-26 2019-11-26 湖北华大瑞尔科技有限公司 一种玉米赤霉烯酮脱毒剂及其制备方法
CN110393256A (zh) * 2019-08-07 2019-11-01 中鲨动物保健品(厦门)有限公司 一种以酿酒酵母细胞壁为载体的霉菌处理剂
CN110506888A (zh) * 2019-08-22 2019-11-29 英联普美欣科技(江西)有限公司 用于脱除霉菌毒素的脱毒剂、制备方法及应用
CN110583963A (zh) * 2019-08-29 2019-12-20 湖北华大瑞尔科技有限公司 一种呕吐毒素脱毒剂及其制备方法
CN112293568A (zh) * 2020-11-19 2021-02-02 辽宁华辰生物科技有限公司 发酵中草药及其制备方法以及饲料霉菌毒素脱霉剂及其制备方法
CN113980838A (zh) * 2021-09-30 2022-01-28 安阳中农大生物技术有限公司 一株高效定向表达细菌素m6的枯草芽孢杆菌及其应用
CN115305213A (zh) * 2021-11-02 2022-11-08 河北农业大学 一株枯草芽孢杆菌及其培养方法和应用
CN115305213B (zh) * 2021-11-02 2023-06-20 河北农业大学 一株枯草芽孢杆菌及其培养方法和应用
CN115651859A (zh) * 2022-08-10 2023-01-31 好氧探索(武汉)生物科技有限公司 枯草芽孢杆菌dp-3及其应用
CN115651859B (zh) * 2022-08-10 2023-05-23 好氧探索(武汉)生物科技有限公司 枯草芽孢杆菌dp-3及其应用

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