CN117643566A - 用于皮肤抗衰的干细胞活性因子精华及其制备方法 - Google Patents
用于皮肤抗衰的干细胞活性因子精华及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117643566A CN117643566A CN202311694875.1A CN202311694875A CN117643566A CN 117643566 A CN117643566 A CN 117643566A CN 202311694875 A CN202311694875 A CN 202311694875A CN 117643566 A CN117643566 A CN 117643566A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- parts
- stem cell
- cell active
- active factor
- essence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 62
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 title claims abstract description 23
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 26
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 26
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 claims description 25
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 claims description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 235000011399 aloe vera Nutrition 0.000 claims description 17
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 claims description 17
- 241001116389 Aloe Species 0.000 claims description 16
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 claims description 14
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N Betaine Natural products C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 claims description 13
- 235000010799 Cucumis sativus var sativus Nutrition 0.000 claims description 13
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 108010022355 Fibroins Proteins 0.000 claims description 13
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O N,N,N-trimethylglycinium Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 13
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 claims description 13
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 claims description 13
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 claims description 13
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 claims description 13
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 12
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 10
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 9
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 9
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 7
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims description 6
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 claims description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 6
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 6
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 4
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 4
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 4
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 claims description 3
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 claims description 3
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 claims description 3
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 claims description 3
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000935043 Homo sapiens Integrin beta-1 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100025304 Integrin beta-1 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 claims description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 230000032683 aging Effects 0.000 claims description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 3
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims 5
- 230000006872 improvement Effects 0.000 abstract description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 6
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 102000001187 Collagen Type III Human genes 0.000 description 4
- 108010069502 Collagen Type III Proteins 0.000 description 4
- 210000003780 hair follicle Anatomy 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 3
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 2
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 2
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 description 2
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 description 2
- 210000002514 epidermal stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 210000001732 sebaceous gland Anatomy 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 235000002961 Aloe barbadensis Nutrition 0.000 description 1
- 244000186892 Aloe vera Species 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N N-[2-oxo-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010063493 Premature ageing Diseases 0.000 description 1
- 208000032038 Premature aging Diseases 0.000 description 1
- 206010072170 Skin wound Diseases 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000032677 cell aging Effects 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 229940096422 collagen type i Drugs 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 description 1
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000002894 multi-fate stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000037070 skin defense Effects 0.000 description 1
- 230000036559 skin health Effects 0.000 description 1
- 230000036560 skin regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 102000055501 telomere Human genes 0.000 description 1
- 108091035539 telomere Proteins 0.000 description 1
- 210000003411 telomere Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0668—Mesenchymal stem cells from other natural sources
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/40—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing nitrogen
- A61K8/44—Aminocarboxylic acids or derivatives thereof, e.g. aminocarboxylic acids containing sulfur; Salts; Esters or N-acylated derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/67—Vitamins
- A61K8/676—Ascorbic acid, i.e. vitamin C
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
- A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
- A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
- A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
- A61K8/9794—Liliopsida [monocotyledons]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
- C12N2509/10—Mechanical dissociation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Birds (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Botany (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明提供了一种用于皮肤抗衰的干细胞活性因子精华及其制备方法。该方法相比于传统方法而言，具备工艺简单，且能有效锁定大量的干细胞活性因子浓缩液，有效提高了制备方法的效率，可用于抵抗皮肤衰老。
Description
技术领域
本发明涉及皮肤抗衰老技术领域，特别涉及用于皮肤抗衰的干细胞活性因子精华及其制备方法。
背景技术
近年来，皮肤健康日益成为当下男女老少关心的话题。皮肤衰老被认为是生理功能的下降或恶化。皮肤衰老的原因，通常归于基因变异，端粒异常，蛋白质和细胞损伤增加，炎症增加，细胞衰老增加，内源性干细胞耗尽，还有细胞传递故障等问题。如何缓解皮肤过早衰老是目前行业的主要研发方向。
皮肤研究中发现，干细胞的调节和协调在修复老化的皮肤中扮演相当重要的角色。通过伤口愈合和基因敲除实验，证明了在皮肤中存在着几种干细胞群，例如：表皮干细胞(epidermal stem cells)，可促进及维持表皮转换和体内平衡；毛囊干细胞(hairfollicle stem cells)，参与了即时性的皮肤伤口的修复；Lrig1+干细胞，存在于毛囊交界区；Gli1+干细胞，可维持皮脂腺；皮肤中最主要的干细胞是Lgr6+干细胞。Lgr6+干细胞是凸起于毛囊上方的的多能细胞，其活跃地循环以促进表皮和皮脂腺的生长及分泌。研究显示Lgr6+干细胞参与伤口愈合及其多能性是皮肤衰老和再生研究的两个关键点。在皮肤的防御上，Lgr6+干细胞也扮演着相当重要的角色，可促进伤口的愈合及新角质细胞的产生。
然而，目前缺乏有效的用于皮肤抗衰的干细胞活性因子产品及其制备方法。
发明内容
针对现有技术所存在的技术问题，本发明提供了一种用于皮肤抗衰的干细胞活性因子精华及其制备方法。该方法相比于传统方法而言，具备工艺简单，且能有效锁定大量的干细胞活性因子浓缩液，有效提高了制备方法的效率，可用于抵抗皮肤衰老。
具体而言，本发明首先提供了一种用于皮肤衰老的干细胞活性因子精华液，其特征在于，所述精华液包括上述方法制备的得到的50-80份干细胞活性因子浓缩液、50-80份芦荟汁、10-20份蚕丝蛋白、5-10份甘油、0.1-0.5份维生素C、5-10份黄瓜提取物、5-10份燕麦提取物、8-15份甜菜碱和80-100份离子水组成。
优选地，所述用于皮肤衰老的干细胞活性因子精华液，其特征在于，所述精华液包括上述方法制备的得到的50份干细胞活性因子浓缩液、50份芦荟汁、10份蚕丝蛋白、5份甘油、0.1份维生素C、5份黄瓜提取物、5份燕麦提取物、8份甜菜碱和80份离子水组成。
优选地，所述用于皮肤衰老的干细胞活性因子精华液，其特征在于，所述精华液包括上述方法制备的得到的60份干细胞活性因子浓缩液、60份芦荟汁、15份蚕丝蛋白、8份甘油、0.3份维生素C、8份黄瓜提取物、8份燕麦提取物、10份甜菜碱和90份离子水组成。
优选地，所述用于皮肤衰老的干细胞活性因子精华液，其特征在于，所述精华液包括上述方法制备的得到的80份干细胞活性因子浓缩液、80份芦荟汁、20份蚕丝蛋白、10份甘油、0.5份维生素C、10份黄瓜提取物、10份燕麦提取物、15份甜菜碱和100份离子水组成。
进一步地，所述干细胞活性因子浓缩液的制备方法包括如下步骤：
1)从人体脐带组织消化得单细胞悬液，利用流式细胞仪分选CD44+CD29+CD73+CD14-CD34-CD20-的脐带间充质干细胞；
2)将步骤1)获得的脐带间充质干细胞至于DMEM/F12培养液中培养，待其细胞汇合度达80-90％时传代；
3)将步骤2)中的脐带间充质干细胞进行连续传代三次后，备用；
4)取步骤3)传代稳定的脐带间充质干细胞进行摇瓶培养，经连续培养20-30h后，超高速离心法收集外泌体，并采用0.22-0.45μm滤膜过滤除菌；
5)将步骤4)中剩余的细胞沉淀经生理盐水重悬后进行超声破碎仪破碎，再次进行超高速离心法收集外泌体，并采用0.22-0.45μm滤膜过滤除菌；
6)将步骤4)和步骤5)经过滤后的外泌体混合，采用截留分子量为5-10KD的纯化超滤系统浓缩，即得干细胞外泌体活性因子浓缩液。
本发明的另一方面在于还提供了一种有上述方法制备得到的干细胞外泌体活性因子浓缩液。
进一步优选地，所述干细胞外泌体活性因子浓缩液在制备用于制备抵抗皮肤衰老精华液中的用途。
本发明的另一方面在于还提供了所述用于皮肤衰老的干细胞外泌体活性因子精华液的制备方法包括如下步骤：
1)取80-100份去离子水中，依次加入10-20份蚕丝蛋白、5-10份甘油、5-10份黄瓜提取物、5-10份燕麦提取物、8-15份甜菜碱，经在25-37℃水浴环境下使其充分溶解；
2)向步骤1)中依次加入50-80份干细胞外泌体活性因子、0.1-0.5份维生素C，并于经在20-30℃水浴环境下使其充分溶解；
3)向步骤2)的溶液中加入50-80份芦荟汁，缓慢搅拌至其充分溶解，即得。
进一步优选地，所述用于皮肤衰老的干细胞外泌体活性因子精华液在制备用于制备抵抗皮肤衰老产品中的用途。
进一步优选地，所述抵抗皮肤衰老产品中还包括化妆品上常见的辅料。
进一步优选地，所述产品可有效促进成纤维细胞的增殖和刺激胶原蛋白的分泌。
本发明的优点如下：本发明是利用脐带组织中提取干细胞外泌体活性因子浓缩液，并基于该干细胞外泌体活性因子浓缩液配合芦荟汁和维生素C、黄瓜提取物、燕麦提取物、甜菜碱联合用于制备精华液，经验证，该精华液可有效促成纤维细胞增殖活性，促成纤维细胞分泌I型和III型胶原，可用于抵抗皮肤衰老。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明，以使本领域的技术人员更加清楚地理解本发明。
以下各实施例，仅用于说明本发明，并不用来限制本发明的范围。基于本发明中的具体实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的情况下，所获得的其他所有实施例，都属于本发明的保护范围。
在本发明实施例中，若无特殊说明，所有原料组分均为本领域技术人员熟知的市售产品；在本发明实施例中，若未具体指明，所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例
脐带间充质干细胞活性因子的制备方法，所述方法包括如下步骤：
1)从人体脐带组织消化得单细胞悬液，利用流式细胞仪分选CD44+CD29+CD73+CD14-CD34-CD20-的脐带间充质干细胞；
2)将步骤1)获得的脐带间充质干细胞至于DMEM/F12培养液中培养，待其细胞汇合度达80-90％时传代；
3)将步骤2)中的脐带间充质干细胞进行连续传代三次后，备用；
4)取步骤3)传代稳定的脐带间充质干细胞进行摇瓶培养，经连续培养20-30h后，超高速离心法收集外泌体，并采用0.22-0.45μm滤膜过滤除菌；
5)将步骤4)中剩余的细胞沉淀经生理盐水重悬后进行超声破碎仪破碎，再次进行超高速离心法收集外泌体，并采用0.22-0.45μm滤膜过滤除菌；
6)将步骤4)和步骤5)经过滤后的外泌体混合，采用截留分子量为5-10KD的纯化超滤系统浓缩，即得干细胞外泌体活性因子浓缩液。
干细胞外泌体活性因子精华液，其特征在于，所述精华液包括上述方法制备的得到的50-80份干细胞外泌体活性因子浓缩液、50-80份芦荟汁、10-20份蚕丝蛋白、5-10份甘油、0.1-0.5份维生素C、5-10份黄瓜提取物、5-10份燕麦提取物、8-15份甜菜碱和80-100份离子水组成。
所述精华液的制备方法包括如下步骤：
1)取80-100份去离子水中，依次加入10-20份蚕丝蛋白、5-10份甘油、5-10份黄瓜提取物、5-10份燕麦提取物、8-15份甜菜碱，经在25-37℃水浴环境下使其充分溶解；
2)向步骤1)中依次加入50-80份干细胞外泌体活性因子、0.1-0.5份维生素C，并于经在20-30℃水浴环境下使其充分溶解；
3)向步骤2)的溶液中加入50-80份芦荟汁，缓慢搅拌至其充分溶解，即得。
对比例
对比例1的制备方法步骤同实施例1，区别在于，脐带间充质干细胞外泌体活性因子的制备方法中未经过步骤5)处理，直接将步骤4)得到的细胞上清液进行冷冻保存，其与方法步骤相同；
对比例2的制备方法步骤同实施例1，区别在于，干细胞外泌体活性因子精华液中不含有芦荟汁；
对比例3的制备方法步骤同实施例1，区别在于，干细胞外泌体活性因子精华液中不含有蚕丝蛋白。
试验例
干细胞活性因子精华液对成纤维细胞增殖的影响：采用MTT方法检测实施例和对比例的干细胞活性因子精华液对成纤维细胞HFF-1的增殖影响。具体检测步骤可根据试剂盒说明书进行常规调整，其中，空白组为DMEM完全培养基，实验组1-3分别含有10μg/ml、20μg/ml和30μg/ml本发明实施例1干细胞外泌体活性因子精华液的DMEM完全培养基，对照组1-3为含有10μg/ml对比例1-3所述的干细胞活性因子精华液的DMEM完全培养基，实验组和对照组中的细胞用量均在6×103个。
表1成纤维细胞增殖分析
| 组别 | OD值 |
| 空白组 | 0.225±0.068 |
| 实验组1 | 0.897±0.025 |
| 实验组2 | 0.956±0.034 |
| 实验组3 | 1.210±0.069 |
| 对照组1 | 0.308±0.015 |
| 对照组2 | 0.415±0.032 |
| 对照组3 | 0.312±0.021 |
检测结果如下表1所示：空白组不能有效促进成纤维细胞的增殖，其增殖能力有限，而采用本发明实验组的干细胞活性因子精华液可以高效率地促进成纤维细胞进行增殖，且其促增殖效果明显优于对照组(P＜0.05)，差异显著，具有统计学意义。
干细胞活性因子精华液对成纤维细胞胶原蛋白分泌的影响：根据上述分组情况，分别处理后的成纤维细胞HFF-1进行培养，培养24h后，收集细胞，通过ELISA试剂盒检测I型和III型胶原分泌情况。结果如表2所示。
表2I型和III型胶原分泌
| 组别 | I型胶原(ng/mL) | III型胶原(ng/mL) |
| 空白组 | 103±2.78 | 1.45±0.032 |
| 实验组1 | 325±2.56 | 7.24±0.064 |
| 实验组2 | 356±4.21 | 7.89±0.032 |
| 实验组3 | 398±5.23 | 8.25±0.015 |
| 对照组1 | 204±1.36 | 2.56±0.245 |
| 对照组2 | 265±2.58 | 2.96±0.115 |
| 对照组3 | 226±1.54 | 2.85±0.568 |
从表2的结果可以看出，采用本发明干细胞活性因子精华液可以高效率地促进成纤维细胞分泌I型和III型胶原，该效果明显优于对照组(P＜0.05)，差异显著，具有统计学意义。
在此有必要指出的是，以上实施例仅限于对本发明的技术方案做进一步的阐述和说明，并不是对本发明的技术方案的进一步的限制，本发明的方法仅为较佳的实施方案，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种用于皮肤衰老的干细胞活性因子精华液，其特征在于，所述精华液包括50-80份干细胞活性因子浓缩液、50-80份芦荟汁、10-20份蚕丝蛋白、5-10份甘油、0.1-0.5份维生素C、5-10份黄瓜提取物、5-10份燕麦提取物、8-15份甜菜碱和80-100份离子水组成。
2.如权利要求1所述的精华液，其特征在于，所述用于皮肤衰老的干细胞活性因子精华液，其特征在于，所述精华液包括上述方法制备的得到的50份干细胞活性因子浓缩液、50份芦荟汁、10份蚕丝蛋白、5份甘油、0.1份维生素C、5份黄瓜提取物、5份燕麦提取物、8份甜菜碱和80份离子水组成。
3.如权利要求1所述的精华液，其特征在于，所述用于皮肤衰老的干细胞活性因子精华液，其特征在于，所述精华液包括上述方法制备的得到的60份干细胞活性因子浓缩液、60份芦荟汁、15份蚕丝蛋白、8份甘油、0.3份维生素C、8份黄瓜提取物、8份燕麦提取物、10份甜菜碱和90份离子水组成。
4.如权利要求1所述的精华液，其特征在于，所述用于皮肤衰老的干细胞活性因子精华液，其特征在于，所述精华液包括上述方法制备的得到的80份干细胞活性因子浓缩液、80份芦荟汁、20份蚕丝蛋白、10份甘油、0.5份维生素C、10份黄瓜提取物、10份燕麦提取物、15份甜菜碱和100份离子水组成。
5.权利要求1-4任一项所述精华液中的干细胞活性因子浓缩液的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
1)从人体脐带组织消化得单细胞悬液，利用流式细胞仪分选CD44+CD29+CD73+CD14-CD34-CD20-的脐带间充质干细胞；
2)将步骤1)获得的脐带间充质干细胞至于DMEM/F12培养液中培养，待其细胞汇合度达80-90％时传代；
3)将步骤2)中的脐带间充质干细胞进行连续传代三次后，备用；
4)取步骤3)传代稳定的脐带间充质干细胞进行摇瓶培养，经连续培养20-30h后，超高速离心法收集外泌体，并采用0.22-0.45μm滤膜过滤除菌；
5)将步骤4)中剩余的细胞沉淀经生理盐水重悬后进行超声破碎仪破碎，再次进行超高速离心法收集外泌体，并采用0.22-0.45μm滤膜过滤除菌；
6)将步骤4)和步骤5)经过滤后的外泌体混合，采用截留分子量为5-10KD的纯化超滤系统浓缩，即得干细胞外泌体活性因子浓缩液。
6.一种由权利要求5所述方法制备得到的干细胞活性因子浓缩液。
7.权利要求6所述的干细胞活性因子浓缩液在制备用于制备抵抗皮肤衰老精华液中的用途。
8.权利要求1-4任一项所述用于皮肤衰老的干细胞活性因子精华液的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
1)取80-100份去离子水中，依次加入10-20份蚕丝蛋白、5-10份甘油、5-10份黄瓜提取物、5-10份燕麦提取物、8-15份甜菜碱，经在25-37℃水浴环境下使其充分溶解；
2)向步骤1)中依次加入50-80份干细胞活性因子、0.1-0.5份维生素C，并于经在20-30℃水浴环境下使其充分溶解；
3)向步骤2)的溶液中加入50-80份芦荟汁，缓慢搅拌至其充分溶解，即得。
9.权利要求1-4任一项所述的用于皮肤衰老的干细胞活性因子精华液在制备用于制备抵抗皮肤衰老产品中的用途。
10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述产品可有效促进成纤维细胞的增殖和刺激胶原蛋白的分泌。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311694875.1A CN117643566A (zh) | 2023-12-11 | 2023-12-11 | 用于皮肤抗衰的干细胞活性因子精华及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311694875.1A CN117643566A (zh) | 2023-12-11 | 2023-12-11 | 用于皮肤抗衰的干细胞活性因子精华及其制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117643566A true CN117643566A (zh) | 2024-03-05 |
Family
ID=90044966
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311694875.1A Pending CN117643566A (zh) | 2023-12-11 | 2023-12-11 | 用于皮肤抗衰的干细胞活性因子精华及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117643566A (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108186548A (zh) * | 2018-03-19 | 2018-06-22 | 上海莱馥生命科学技术有限公司 | 一种具有抗衰老效果的干细胞因子精华液的制备方法 |
| CN110934814A (zh) * | 2019-12-06 | 2020-03-31 | 杭州恩格生物医疗科技有限公司 | 一种含干细胞活性因子的护肤精华液及其应用 |
| CN111973547A (zh) * | 2020-09-08 | 2020-11-24 | 深圳市先康达生物科技有限公司 | 干细胞活性因子及其冻干粉剂 |
| CN112143708A (zh) * | 2020-10-12 | 2020-12-29 | 张川 | 一种脐带间充质干细胞、干细胞精华因子和在抗皮肤衰老方面的应用 |
| CN113832108A (zh) * | 2021-09-24 | 2021-12-24 | 淮安泰凯睿医药科技有限公司 | 一种脐带间充质干细胞外泌体及其抗皮肤衰老用途 |
| CN114159374A (zh) * | 2021-12-10 | 2022-03-11 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 用于皮肤抗衰老间充质干细胞外泌体组合物的制备方法及产品和应用 |
-
2023
- 2023-12-11 CN CN202311694875.1A patent/CN117643566A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108186548A (zh) * | 2018-03-19 | 2018-06-22 | 上海莱馥生命科学技术有限公司 | 一种具有抗衰老效果的干细胞因子精华液的制备方法 |
| CN110934814A (zh) * | 2019-12-06 | 2020-03-31 | 杭州恩格生物医疗科技有限公司 | 一种含干细胞活性因子的护肤精华液及其应用 |
| CN111973547A (zh) * | 2020-09-08 | 2020-11-24 | 深圳市先康达生物科技有限公司 | 干细胞活性因子及其冻干粉剂 |
| CN112143708A (zh) * | 2020-10-12 | 2020-12-29 | 张川 | 一种脐带间充质干细胞、干细胞精华因子和在抗皮肤衰老方面的应用 |
| CN113832108A (zh) * | 2021-09-24 | 2021-12-24 | 淮安泰凯睿医药科技有限公司 | 一种脐带间充质干细胞外泌体及其抗皮肤衰老用途 |
| CN114159374A (zh) * | 2021-12-10 | 2022-03-11 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 用于皮肤抗衰老间充质干细胞外泌体组合物的制备方法及产品和应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105543313B (zh) | 一种人源间充质干细胞因子及其制备方法和用途 | |
| KR101844598B1 (ko) | 화장품 조성물 | |
| CN110540956B (zh) | 由胎盘间充质干细胞简易制备细胞因子的方法 | |
| US20220127578A1 (en) | Novel exosome production method and application thereof | |
| CN103898049B (zh) | 一种活细胞精华液产品及其制备方法和应用 | |
| CN108578266B (zh) | 一种抗氧化组合物及其在面膜液中的应用 | |
| CN104818264A (zh) | 一种消化酶组合物及其制剂、应用 | |
| CN114699446A (zh) | 一种用于治疗脱发的外泌体复合液及其制备方法 | |
| CN112111451B (zh) | 提高干细胞细胞因子产量的方法 | |
| KR102439866B1 (ko) | 생산성 향상 및 생리활성 강화를 위한 엑소좀의 생산방법 및 이의 응용 | |
| CN110604704A (zh) | 一种肽类组合物化妆品及其制备方法 | |
| CN108220230A (zh) | 一种人脂肪干细胞的分离与培养方法 | |
| CN112891297A (zh) | 一种改善皮肤光泽度的蛋白复配液及制备方法 | |
| CN113041206A (zh) | 一种含间充质干细胞因子的精华液及其制备方法 | |
| CN113736731B (zh) | 脂肪间充质干细胞的无血清培养基及其制备方法和应用 | |
| CN108753712B (zh) | 一种脂肪干细胞提取方法 | |
| CN106491439A (zh) | 一种抗痘精华液组合物、抗痘精华液及制备工艺 | |
| CN112409456B (zh) | 干细胞细胞因子在制备化妆品或药物中的用途 | |
| CN117643566A (zh) | 用于皮肤抗衰的干细胞活性因子精华及其制备方法 | |
| WO2024045404A1 (zh) | 一种骨髓上清液及其在细胞培养中的应用 | |
| KR20190050927A (ko) | Mmp2 유전자 발현 및 콜라겐 분해를 억제하는 조성물을 제조하기 위한 미모사 추출물의 용도 | |
| CN117643565A (zh) | 一种含有干细胞分泌因子的面膜冻干粉的制备方法 | |
| CN114561344A (zh) | 可提高干细胞免疫调控能力的无血清培养基及制备方法和应用 | |
| CN109876012B (zh) | 一种药用组合物及其在促进皮肤伤口愈合中的应用 | |
| EP4227403A1 (en) | Exosome and preparation process and use thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |