CN117517635A - 一种皮肤控油方案综合控油效果判断方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种外用综合控油的调控体系，属于皮肤控油技术领域。通过检测待测物质是否既调控SREBP‑1、SCD1、FASN的蛋白表达量下降又调控AMPK、ABCA1的蛋白表达量上升，来判断皮肤油脂的实际效果；同时满足对这5个靶点调控作用而被筛选出的物质，一方面可以抑制皮脂腺油脂进一步分泌，另一方面可以促进生成的油脂进一步排出体外的效果，实现了皮肤综合控油效果，可以有效维持皮肤表面油脂平衡；本发明提供的筛选评价体系操作简便，结果直观，实验周期短，可用于检测产品的综合控油效果，亦可以用于筛选具有综合油脂效果的配方；本发明提供的筛选评价体系适用范围广泛，可广泛应用于日化产品，也可用于日化产品原料。

Description

一种皮肤控油方案综合控油效果判断方法
技术领域
本发明属于皮肤控油技术领域，具体地，涉及一种皮肤控油方案综合控油效果判断方法。
背景技术
控油功效是2021年药监局发布的第50号公告附件《化妆品功效宣称评价规范》中化妆品允许使用的主要宣称之一。是整个行业功效研究的热点，亦是人们日益丰富的护肤需求中的热点问题之一。
目前化妆品领域对控油功效的验证主要采用5α还原酶抑制模型的验证方案，如专利文献CN104069034B涉及一种具有控油、收缩毛孔功效的护肤组合物及化妆品，根据其说明书的记载，在实施例2中是通过验证抑制5α还原酶实验来测试该组合物控制油脂分泌量效果。然而5α还原酶只是人体油脂产生的众多调控因子中的一个，该模型靶点单一，评价得出的组合物控油效果并不具有稳定性，或对油脂表现出过度抑制效果，或控油效果不佳。
发明内容
本发明的目的在于提供一种皮肤控油方案综合控油效果判断方法，旨在提供一套可用于快速评价皮肤用控油产品的综合控油效果的方法，经此评价方法筛选所得物质具有稳定良好的控油效果。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
一种皮肤控油方案综合控油效果判断方法，对施行皮肤控油方案后的皮肤进行以下判断：
若不符合A.皮肤上的皮脂腺斑面积增长率低于空白组并具有显著性差异，则判断皮肤控油方案不具有综合控油效果；
若不符合B.皮肤上的调控因子SREBP-1、SCD1和FASN蛋白表达量均低于空白组并具有显著性差异，则判断皮肤控油方案不具有综合控油效果；
若不符合C.皮肤上的调控因子AMPK和ABCA1蛋白表达量高于空白组并具有显著性差异，则判断皮肤控油方案不具有综合控油效果。
作为本发明的一种优选方案，所述判断方法包括以下操作步骤：
S1、对多只受试动物进行适应性喂养，喂养后随机分组，分成测试组、空白组和阳性组，分别按照S21、S22、S23进行4-6周的试验，其中：
S21、将待评价的测试原料涂布于受试动物的皮肤组织；
S22、对空白组，不进行皮肤组织涂布处理；
S23、对阳性组受试动物予药灌胃；
S3、对测试组、空白组和阳性组同步进行皮脂腺斑面积增长率以及调控因子SREBP-1、SCD1、FASN、AMPK和ABCA1的蛋白表达量的测试，根据测试所得数据判断皮肤控油方案是否具有综合控油效果。
作为本发明的一种优选方案，所述蛋白表达量是否具有显著性差异，具体用t-test方法进行统计分析，P-value＜0.05即为具备显著性差异。
作为本发明的一种优选方案，所述受试动物为金黄地鼠、大鼠或家兔。
作为本发明的一种优选方案，S21中，对测试组受试动物的皮肤组织涂布处理的涂布量为1mL，且/或涂布位置为背部皮脂腺斑处。
作为本发明的一种优选方案，S21中，对测试组受试动物的皮肤组织涂布处理为每日2次。
作为本发明的一种优选方案，S21中，所述受试动物皮肤组织为侧腹部、耳部、背部当中至少一处。
作为本发明的一种优选方案，S23中，对阳性组予药灌胃的具体操作为：将4mg/(kg·d)罗格列酮片溶于2mL蒸馏水，灌胃,每日1次，每次0.1mL/只。
作为本发明的一种优选方案，S23中，对阳性组予药灌胃的频率为每日1次。
本发明的有益效果：
1、本发明所提供的皮肤控油方案综合控油效果判断方法，通过检测待测物质是否既调控SREBP-1、SCD1、FASN蛋白表达量下降又调控AMPK、ABCA1的蛋白表达量上升，来判断皮肤油脂的实际效果；
SREBP-1胆固醇调节元件结合蛋白(sterolregulatory element bindingprotein. SREBP )是脂肪代谢的主要转录调控因子，它的活性降低可以抑制脂肪酸和甘油三酯等脂质合成相关酶的表达水平包括脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)等，进而实现抑制皮肤油脂代谢的作用；
SCD1硬脂酰辅酶A去饱和酶1(stearoyl-Co A desaturase 1,SCD1)和脂质代谢显著相关，SCD1的表达对油脂的分泌起到抑制作用；
FASN脂肪酸合成酶(Fattsynthase, FASN)在脂肪酸合成中起着至关重要的作用。它含有7个活性位点在还原型辅酶II的存在下FASN负责乙辅A(acetyl-CoA)和丙二辅A(malony-CoA)从头合成一种长链软脂酸（棕榈酸酯）的所有催化步骤。FASN基因的表达直接影响着脂肪酸合成酶多寡对控制动物体脂沉积具有重要的意义，进而实现了对皮肤油脂的调控作用；
AMPK腺苷酸活化蛋白激酶(adenosinemonophosphate activated proteinkinaseAMPK)是一种细胞能量传感器，在真核生物中作为异源三聚体复合物表达，AMPK通过调控一些参与脂质代谢的关键活性及靶基因的表达水平，在调节脂质代谢的上游过程中发挥关键性作用；AMPK 蛋白激酶通过直接磷酸化 SREBP-1c 的相应靶点抑制 SREBP-1c基因的表达，从而抑制脂质的合成过程；AMPK也可以抑制ACC2（乙酰辅酶A羧化酶2），减少丙二酰辅酶A的生成，降低其对肉毒碱棕榈酰转移酶1（CPT1）的抑制作用，促进细胞中脂肪酸的氧化。
ABCA1三磷酸腺苷结合转运体A1(ATP binding cassettetransporter A1,ABCA1)是一个膜整合出口蛋白，可介导胆固醇等脂质从细胞内转出，是RCT过程的关键调控因子。其以ATP作为能源将胞内游离的胆固醇及磷脂转运至胞膜的外侧面，最终与贴附在细胞表面的载脂蛋白Al(apoprotein Al，apoAl)结合，形成新生高密度脂蛋白HDL颗粒，促进脂质排出。
同时满足对这5个靶点调控作用而被筛选出的物质，一方面可以抑制皮脂腺油脂进一步分泌，另一方面可以促进生成的油脂进一步排出体外的效果，实现了皮肤综合控油效果，可以有效维持皮肤表面油脂平衡。
2、本发明提供的筛选评价体系操作简便，结果直观，实验周期短，可用于检测产品的综合控油效果，亦可以用于筛选具有综合控油效果的配方。
3、本发明提供的筛选评价体系适用范围广泛，可广泛应用于作用于皮肤的具有综合控油效果的日化产品，也可用于具有综合控油效果的日化产品原料。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一、制备植物组合物作为测试原料
测试原料1
水油两相除杂：称取100g质量比为1:1:1的槐米、葛根、知母干药材饮片为原料，不进行粉碎，加入外循环提取罐中，再加入干药材质量6倍的水油两相萃取剂进行外循环提取除杂，所述水油两相萃取剂为质量比为4:6的水：辛酸癸酸甘油三酯；所述水油两相萃取剂中的水相用酸调节pH为4；设置外循环提取罐温度为90℃，循环速度为5倍罐体积/h，萃取时间为2h；弃去萃取液，留药渣a；
提取离心分离：往药渣a中加入质量浓度为50%的多元醇溶液，于90℃，循环速度为8倍罐体积/h进行循环提取3h；提取结束，用离心机于1000r/min离心20min，除去药渣留滤液b；将滤液b用离心机于15000r/min离心20min,弃上层油层和底部固体，取中间层离心液；所述多元醇溶液为1,3-丁二醇的水溶液，质量为干药材的6倍；
微滤交联吸附：对中间层离心液，用0.45微米膜进行过滤，再用50nm陶瓷膜循环浓缩至生药量200%，过程压力控制1bar；再用0.45微米膜过滤得滤液c；将加入后质量浓度为0.6‰的壳聚糖和5%的氧化镁加入滤液c中，60℃搅拌30min，转速50rpm，结束后静置2h，用0.45微米膜过滤得滤液d；继续补入相同质量浓度的多元醇溶液至100%生药浓度得混合液；
冷热交替老化：让混合液在-20~-15℃/12h和50~60℃/12h交替，例如在-20℃/12h和50℃/12h，进行3组循环，用0.45微米膜过滤得滤液e；
超滤处理：用5000 Dal滤膜对滤液e进行超滤，至透过液超过总量的80%时，补总量20~30%的相同质量浓度的多元醇溶液，继续超滤至透过液体积与滤液e体积相同，控制所述超滤及继续超滤的压力为2bar，取透过液即得具有外用综合控油作用的组合物。
测试原料2
水油两相除杂：称取100g质量比为1:3:3的槐米、葛根、知母干药材饮片为原料，不进行粉碎，加入外循环提取罐中，再加入干药材质量5倍的水油两相萃取剂进行外循环提取除杂，所述水油两相萃取剂为质量比为1:1的水：辛酸癸酸甘油三酯；所述水油两相萃取剂中的水相用酸调节pH为4.5；设置外循环提取罐温度为80℃，循环速度为7倍罐体积/h，萃取时间为2.5h；弃去萃取液，留药渣a；
提取离心分离：往药渣a中加入质量浓度为60%的多元醇溶液，于80℃，循环速度为7倍罐体积/h进行循环提取2.5h；提取结束，用离心机于2000r/min离心10min，除去药渣留滤液b；将滤液b用离心机于18000r/min离心15min,弃上层油层和底部固体，取中间层离心液；所述多元醇溶液为1,3-丁二醇的水溶液，质量为干药材的7倍；
微滤交联吸附：对中间层离心液，用0.45微米膜进行过滤，再用50nm陶瓷膜循环浓缩至生药量200%，过程压力控制2bar；再用0.45微米膜过滤得滤液c；将加入后质量浓度为0.7‰的壳聚糖和4%的氧化镁加入滤液c中，55℃搅拌35min，转速80rpm，结束后静置2h，用0.45微米膜过滤得滤液d；继续补入相同质量浓度的多元醇溶液至100%生药浓度得混合液；
冷热交替老化：让混合液在-20~-15℃/12h和50~60℃/12h交替，例如在-18℃/12h和55℃/12h，进行3组循环，用0.45微米膜过滤得滤液e；
超滤处理：用10000 Dal滤膜对滤液e进行超滤，至透过液超过总量的80%时，补总量20~30%的相同质量浓度的多元醇溶液，继续超滤至透过液体积与滤液e体积相同，控制所述超滤及继续超滤的压力为2bar，取透过液即得具有外用综合控油作用的组合物。
测试原料3
与测试原料1差异在于所述组合物原料在控制总质量相同的前提下由以下质量比的原料制成：
槐米：葛根：知母=1:7:0.5。
测试原料4
与测试原料1差异在于所述组合物原料在控制总质量相同的前提下由以下质量比的原料制成：
槐米：葛根=1:2。
测试原料5
与测试原料1差异在于所述组合物原料在控制总质量相同的前提下由以下质量比的原料制成：
葛根：知母=1:2。
二、关于测试原料的是否满足A.皮肤上的皮脂腺斑面积增长率低于空白组并具有显著性差异，对测试原料1~5进行金黄地鼠皮脂腺斑组织测定实验
试验方法：适应性喂养1周后将金黄地鼠随机分组，分成空白组、阳性药物组各1组和测试组5组（分别施用测试原料1~5），共计7组，每组6只。实验开始前、实验最后一天测量各组小鼠背部皮脂腺面积。空白组不予特殊干预；阳性药组予罗格列酮片4mg/(kg·d)（溶于2mL蒸馏水）灌胃，每日1次，每次0.1mL/只，测试组皮外涂布相应浓度的样品1mL，均为每日2次，局部外用于金黄地鼠背部皮脂腺斑处。连续干预4周后腹腔注射10%水合氯醛麻醉，切取双侧背部约1cm×1cm大小皮脂腺斑处皮肤组织，置于4%甲醛溶液中进行固定，做好标记待检，并将取材后的金黄地鼠脱颈处死后置于规定位置。HE染色，观察各组金黄地鼠皮脂腺斑组织病理学表现，免疫组化检测皮脂腺斑中油脂调控因子的综合表达，并采用图像分析系统(Aipathwell)分析计算，干预前后各组金黄地鼠皮脂腺斑面积见表1。
表1 干预前后各组金黄地鼠皮脂腺斑面积（±s/mm2）
组别 干预前 干预后
空白 31.179±2.122 52.895±6.561
测试原料1 29.964±5.298 38.064±2.747**
测试原料2 29.659±3.014 40.217±2.706**
测试原料3 27.117±5.156 46.724±1.910
测试原料4 32.116±6.045 45.851±3.978
测试原料5 30.762±1.972 46.416±7.799
阳性对照（罗格列酮） 30.614±3.337 41.817±3.857**
用t-test方法进行统计分析，与空白组相比，显著性以*表示，P-value＜0.05表示为*，P-value＜0.01表示为**；n=6；
由表1可得，实验干预前后空白组皮肤组织皮脂腺面积大幅增加；适用测试原料1和测试原料2的测试组和阳性对照组这两者皮脂腺面积轻度增加，而与空白组相比有显著性差异，且测试组效果优于阳性对照，满足综合油脂效果的必要条件A。而测试原料3，测试原料4和测试原料5组相比空白组干预后皮脂腺面积下降不明显，不满足综合油脂效果的必要条件A。
三、关于测试原料是否满足B.皮肤上的调控因子SREBP-1、SCD1和FASN蛋白表达量均低于空白组并具有显著性差异；C.皮肤上的调控因子AMPK和ABCA1蛋白表达量高于空白组并具有显著性差异，对各组金黄地鼠皮脂腺斑组织中各调控因子蛋白的平均光密度测定，所述测试方法如下：
显微镜：尼康仪器有限公司E100；
（一）石蜡切片制作
1、固定取材：剖取新鲜组织立即投入组织固定液内或者组织对应的特殊固定液内固定24h以上，常温保存运输。将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整，将修切好的组织和对应的标签放于包埋框内。
2、脱水浸蜡：将脱水盒放进脱水机内依次梯度酒精进行脱水。75%酒精4h，85%酒精2h，90%酒精2h，95%酒精1h，无水乙醇I 30min，无水乙醇II 30min，醇苯5-10min，二甲苯I5-10min，二甲苯II 5-10min，65°融化石蜡I 1h，65°融化石蜡II 1h，65°融化石蜡III 1h。
3、石蜡包埋：将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋框，待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。于-20℃冻台冷却，蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。
4、石蜡切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机切片，厚4μm。切片漂浮于摊片机40℃温水上将组织展平，载玻片将组织捞起，60℃烘箱内烤片。水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。
（二）染色步骤
1.石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入环保型脱蜡液Ⅰ20min—环保型脱蜡液Ⅱ20min—无水乙醇Ⅰ5min—无水乙醇Ⅱ5min—75%酒精5min，自来水洗。
冰冻切片复温固定：将冰冻切片从-20°冰箱取出恢复至室温，用组织固定液固定15min后，流水冲洗。
2.苏木素染色：切片入苏木素染液染3-5min，自来水洗，分化液分化，自来水洗，返蓝液返蓝，流水冲洗。
3.伊红染色：切片依次入85%、95%的梯度酒精脱水各5min，入伊红染液中染色5min。
4.脱水封片：切片依次放入无水乙醇I 5min -无水乙醇II 5min-无水乙醇Ⅲ5min-二甲Ⅰ5min- 二甲苯Ⅱ5min透明，中性树胶封片。
5.显微镜镜检，图像采集分析。
（三）免疫组化实验步骤
1.石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入环保型脱蜡液Ⅰ10min-环保型脱蜡液Ⅱ10min-环保型脱蜡液Ⅲ10min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-无水乙醇Ⅲ5min-蒸馏水洗。
2.抗原修复：此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS（pH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。(修复液和修复条件根据组织来确定）
3.阻断内源性过氧化物酶：切片放入3%双氧水溶液，室温避光孵育25min，将玻片置于PBS（pH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
4.血清封闭:在组化圈内滴加3%BSA 均匀覆盖组织，室温封闭30min。（一抗是山羊来源的用兔血清封闭，其他来源的用BSA封闭）
5.加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于湿盒内4℃孵育过夜。
6.加二抗：玻片置于PBS（pH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗（HRP标记）覆盖组织，室温孵育50min。
7. DAB显色：玻片置于PBS（pH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下控制显色时间，阳性为棕黄色，自来水冲洗切片终止显色。
8.复染细胞核：苏木素复染3min左右，自来水洗，苏木素分化液分化数秒，自来水冲洗，苏木素返蓝液返蓝，流水冲洗。
9.脱水封片：将切片依次放入75%酒精5min--85%酒精5min --无水乙醇Ⅰ5min --无水乙醇Ⅱ5min--正丁醇5min--二甲苯Ⅰ5min 中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，封片胶封片。
10.镜检：置于白光显微镜下进行结果判读。
所得结果见表2。
表2 各组金黄地鼠皮脂腺斑组织中各调控因子蛋白的平均光密度
组别 SREBP-1 SCD1 FASN AMPK ABCA1
空白 0.1373±0.0053 0.1574±0.0051 01174±0.0086 0.1125±0.0051 0.1500±0.0052
测试原料1 0.1221±0.0060** 0.1393±0.0069** 0.0655±0.0066** 0.1313±0.0085** 0.1823±0.0078**
测试原料2 0.1211±0.0062** 0.1211±0.0050** 0.0783±0.0096** 0.1336±0.0061** 0.1929±0.0046**
测试原料3 0.1270±0.0088* 0.1537±0.0077 0.0980±0.0153* 0.1219±0.0069* 0.1670±0.0079**
测试原料4 0.1396±0.0037 0.1599±0.0088 0.1064±0.0215 0.1098±0.0040 0.1555±0.0064
测试原料5 0.1247±0.0112* 0.1420±0.0128* 0.1118±0.0181 0.1232±0.077* 0.1622±0.0065**
阳性对照（罗格列酮） 0.1174±0.0063** 0.1347±0.0031** 0.0784±0.0041** 0.1272±0.0045** 0.1744±0.0047**
用 t-test 方法进行统计分析，与空白组相比，显著性以*表示，P-value＜0.05表示为*，P-value＜0.01 表示为**；n=6。
由表2各调控因子蛋白的平均光度测试数据可得，相比空白组，测试原料1和测试原料2能降低SREBP-1、SCD1、FASN蛋白的表达量，升高AMPK、ABCA1蛋白表达量，并且与空白组相比均具有显著性差异，满足综合控油效果的必要条件B和必要条件C。
结合表1可知，测试原料1和测试原料2均满足综合控油效果的必要条件A、必要条件B和必要条件C，因此测试原料1和测试原料2具有良好的综合控油效果。即测试原料1和测试原料2通过显著降低SREBP-1、SCD1、FASN蛋白的表达量，显著升高AMPK蛋白表达量，减少油脂的生成并能间接促进已经生成的油脂进入线粒体氧化分解，起到多靶点同时抑制油脂生成的作用，并且测试原料1和测试原料2显著升高ABCA1蛋白的表达量，能加速油脂从细胞内转运，从而减少皮脂腺内油脂的累积，起到促进已生成的油脂排出体外的作用，实现了综合控油效果。
而测试原料3~5不能完全实现5个靶点同步调控，无法实现5个靶点均具有显著性，即不满足综合控油效果的必要条件B和必要条件C，结合表1可知，测试原料3~5不具备良好的综合控油效果。
为了验证本发明方案与5α还原酶单靶点表征效果差异，还对5α还原酶进行测试，所得结果见表3。
表3：传统控油靶点5α还原酶测试结果
样品 测试浓度 抑制率%
测试原料1 0.2% 20.58±3.46
测试原料2 0.2% 20.47±0.85
测试原料3 0.2% 37.21±6.42
测试原料4 0.2% 44.44±0.98
测试原料5 0.2% 21.68±4.16
非那雄胺 0.5 mg/mL 48.58±0.27
由表3结果可以看出，测试原料1~5对5α还原酶都有较强的抑制作用，且测试原料4和测试原料3的效果最强，但是从表1皮脂腺斑面积增加的结果看，控油的实际效果是测试原料1、2显著优于测试原料3~5，说明仅依靠5α还原酶评价不能精准判断控油最终结果，甚至得出相反的结论。
四、对测试原料1~5进行人体实验
对测试原料1~5进行人体实验来进一步验证此判断方法的准确性。
测试仪器：SebumScale皮脂测量仪，Delfin
样本量：每组受试者30~35名，共5组，受试者为20-60岁健康女性或男性，无皮肤病及皮肤过敏史，测试前1周不能使用同类产品。
测试周期：8周
受试品：添加1%活性物的啫喱，阴性对照为空白啫喱；所述啫喱由以下表4原料及制备方法制成；
表4
采用随机测试法，分别对5组受试者适用啫喱，啫喱分别由添加1%质量浓度的测试原料1~5的组合物所制得，测试方法为半脸盲测，具体为半脸涂用组合物的啫喱，半脸涂覆空白啫喱设置阴性对照；
测试方法：对受试者进行头面部基础数据采集，采集结束后进行受试品和对照品使用，每日2次，测试记录鼻颊相同部位在使用后7d，14d，28d，42d，56d的油脂分泌量和分泌情况，在末次使用样品后的12h以上进行测试，期间禁止洗脸、擦拭；整个测试期间禁止熬夜、吃辛辣食物、酗酒、暴晒；将受试人群分为左右脸平均出油量＜50μg，记作A组（低出油组），左右脸平均出油量≥50μg，记作B组（高出油组），进行分别统计和合并统计分析，测试组油脂分泌统计结果见表5，阴性组油脂分泌统计结果见表6。
表5：测试组油脂分泌统计表
表6 阴性组油脂分泌统计表
由表6可得，阴性对照组的56天趋势以及和测试组0天的数据比较变化较小，因此可得出本次实验受试人群在测试期间皮肤的出油状态是稳定的。
由表5可得，测试原料1和测试原料2针对A组（低出油组）28天以后控油率可达到20%以上；针对B组（高出油组）28天以后控油率可达到38%以上，说明测试原料1和测试原料2具有良好的综合控油效果，并且B组控油效果A组显著高于A组数据，说明本发明评价方法筛选所得组合物测试原料1和测试原料2对高出油组具有良好的选择性。
进一步地，测试原料1和测试原料2组的皮肤油脂变化率在28d达到基本平衡，继续使用本品，不会使得油脂持续线性下降，而会基本维持出油率不变，说明本发明评价方法筛选所得组合物具有长效稳定控油的作用，达到平衡后不会过度降低油脂量，有利于皮肤长期的油脂平衡。
而测试原料3~5组实验组，28天以后控油率在7-14%，并且A组和B组差异性显著降低，甚至B组控油率低于A组，说明测试原料3~5组不具有良好的综合控油效果，且不具备选择性，与本发明判断方法所得结论一致。
综上所述本评价方法筛选出的组合物具有良好的综合控油效果。
如上所述仅为本发明创造的实施方式，不以此限定专利保护范围。本领域技术人员在本发明创造的基础上作出非实质性的变化或替换，仍落入专利保护范围。

Claims (9)

1.一种皮肤控油方案综合控油效果判断方法，对施行皮肤控油方案后的皮肤进行以下判断：若不符合A.皮肤上的皮脂腺斑面积增长率低于空白组并具有显著性差异，则判断皮肤控油方案不具有综合控油效果；
其特征是对施行皮肤控油方案后的皮肤进行以下判断：
若不符合B.皮肤上的调控因子SREBP-1、SCD1和FASN蛋白表达量均低于空白组并具有显著性差异，则判断皮肤控油方案不具有综合控油效果；
若不符合C.皮肤上的调控因子AMPK和ABCA1蛋白表达量高于空白组并具有显著性差异，则判断皮肤控油方案不具有综合控油效果。
2.根据权利要求1所述的皮肤控油方案综合控油效果判断方法，其特征在于包括以下操作步骤：
S1、对多只受试动物进行适应性喂养，喂养后随机分组，分成测试组、空白组和阳性组，分别按照S21、S22、S23进行4-6周的试验，其中：
S21、将待评价的测试原料涂布于受试动物的皮肤组织；
S22、对空白组，不进行皮肤组织涂布处理；
S23、对阳性组受试动物予药灌胃；
S3、对测试组、空白组和阳性组同步进行皮脂腺斑面积增长率以及调控因子SREBP-1、SCD1、FASN、AMPK和ABCA1的蛋白表达量的测试，根据测试所得数据判断皮肤控油方案是否具有综合控油效果。
3.根据权利要求2所述的皮肤控油方案综合控油效果判断方法，其特征在于，所述蛋白表达量是否具有显著性差异，具体用t-test方法进行统计分析，P-value＜0.05即为具备显著性差异。
4.根据权利要求2所述的皮肤控油方案综合控油效果判断方法，其特征在于，所述受试动物为金黄地鼠、大鼠或家兔。
5.根据权利要求2所述的皮肤控油方案综合控油效果判断方法，其特征在于，S21中，对测试组受试动物的皮肤组织涂布处理的涂布量为1mL，且/或涂布位置为背部皮脂腺斑处。
6.根据权利要求2所述的皮肤控油方案综合控油效果判断方法，其特征在于，S21中，对测试组受试动物的皮肤组织涂布处理为每日2次。
7.根据权利要求2所述的皮肤控油方案综合控油效果判断方法，其特征在于，S21中，所述受试动物皮肤组织为侧腹部、耳部、背部当中至少一处。
8.根据权利要求2所述的皮肤控油方案综合控油效果判断方法，其特征在于，S23中，对阳性组予药灌胃的具体操作为：将4mg/(kg·d)罗格列酮片溶于2mL蒸馏水，灌胃,每日1次，每次0.1mL/只。
9.根据权利要求2所述的一种皮肤控油方案综合控油效果判断方法，其特征在于，S23中，对阳性组予药灌胃的频率为每日1次。
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