CN117427021B - 一种具有外平衡油脂作用的植物组合物及制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种具有外平衡油脂作用的植物组合物及制备方法和应用，属于皮肤控油技术领域。本发明提供的植物组合物由质量比为1:6~10:6~10的薏苡仁、柚子皮和知母原料制成，实现了控油但不过度的平衡皮肤油脂分泌的效果，能够在不依赖保湿成分的条件下实现对皮肤油脂的平衡调控作用，进而强化了皮肤的屏障功能；本发明还提供了植物组合物的制备方法，具有提取效率高，产物纯度高，稳定性强的特点；本发明还提供了植物组合物在皮肤化学用品中的应用，适用范围广，可施用于面部皮肤或头部皮肤；本发明组合物在添加量1~4wt%内还表现出近似的皮脂腺抑制率，该浓度范围内的组合物对于不同状态的皮肤均具有良好的控油效果。
Description
技术领域
本发明属于皮肤控油技术领域，具体地，涉及一种具有外平衡油脂作用的植物组合物及制备方法和应用。
背景技术
皮肤表面的天然油脂主要由皮脂腺分泌产生，其主要成分为角鲨烯、蜡酯/固醇酯、甘油酯、游离脂肪酸等。皮脂腺油脂使皮肤平滑、柔润、富有光泽，并有防止水分蒸发的作用，可以降低皮肤的经皮水分散失，起到皮肤保湿效果，强化皮肤屏障功能。但是过量的油脂分泌也是一系列皮肤问题的根本原因，如黑头、脂肪粒、体臭、皮肤敏感、过敏、痤疮、脂溢性皮炎、头屑和脱发等都与皮肤油脂分泌过度有关。因此在日常生活中维持皮肤油脂平衡，不使皮肤油脂过度分泌是维持皮肤健康的极为重要因素。
目前，相关控油现有技术中，对于外平衡油脂作用是通过强控油成分复配保湿成分实现的，如专利文献CN113908095A针对有效控油和头皮水分失衡问题，提供一种控油保湿发用组合物，其首次使用芒果叶提取物，与乳酸锌、葡糖酸锌搭配后具有协同增效作用，显著提高控油效果，进一步辅以小麦蛋白、蚕丝蛋白和泛醇等保湿成分，达到控油的同时具有保湿的功效。该组合物对头皮油脂平衡的实现需要通过复配保湿成分小麦蛋白、蚕丝蛋白和泛醇实现，若仅凭借其中的单一控油组分而不辅以保湿成分，过度抑制油脂分泌难以实现头皮油脂平衡，对皮脂腺油脂分泌水平不能起到良好的平衡调控效果。现有技术中鲜有组合物能不依赖复配保湿成分，难以实现对皮脂腺油脂分泌的平衡调控，从而起到强化皮肤屏障功能的作用。
一般情况下控油成分的效果随着控油成分浓度的增加而增强，而不同状态的皮肤油脂平衡需要不同含量产品才能具有良好的控油效果。市面上还未出现具有综合平衡作用的控油成分能够对于不同状态的皮肤均具有良好的控油效果，产品因浓度不同而引发控油效果不足或过度控油的情况时有发生。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有外平衡油脂作用的植物组合物，通过该组合物可以在不依赖保湿成分的条件下实现对皮肤油脂的平衡调控作用，并且针对于不同的皮肤，均具有良好的平衡油脂作用。
本发明的第二个目的在于提供上述植物组合物的制备方法。
本发明的第三个目的在于提供上述植物组合物在皮肤化学用品中的应用。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
一种具有外平衡油脂作用的植物组合物，由以下质量比的原料制成：
薏苡仁：柚子皮：知母=1:6~10:6~10；
制备步骤包括：用50~70wt%的醇溶液对原料进行提取，浓缩至生药浓度50~60%。
作为本发明的一种优选方案，所述植物组合物由以下质量比的原料制成：
薏苡仁：柚子皮：知母=1:6~8:8~10或1:8~10:6~8。
上述植物组合物的制备方法，在常温下进行以下操作：
研磨初提：将粉碎后的薏苡仁、柚子皮和知母原料，连同壳聚糖和溶剂放入循环式胶体磨中进行碾磨提取；
乳化均质：将研磨初提后的原料进行搅拌均质；
循环提取：将乳化均质后的原料放置于外循环提取罐中进行循环提取得混合液。
作为本发明的一种优选方案，所述壳聚糖为加入后总体系质量的0.3~0.5‰，使用前，将其用柠檬酸预溶成1wt%的壳聚糖溶液，壳聚糖溶液中壳聚糖和柠檬酸的质量比为1:1，所述1wt%的壳聚糖溶液中壳聚糖的粘度＜300 mpa.s。
作为本发明的一种优选方案，还包括在所述循环提取后进行的离心超滤除杂，其包括如下步骤：
将循环提取所得混合液于1500~2000rpm离心15~20min得第一离心混合液；
将第一离心混合液于12000~15000rpm离心15~20min得第二离心混合液；
将第二离心混合液调节pH至8.5~9.5，于50~100rpm搅拌20~30min，15000~18000rpm离心10~15min得第三离心混合液；
将第三离心混合液调节pH至3.5~4.0，于50~100rpm搅拌20~30min，15000~18000rpm离心10~15min,得离心液；
将离心液调节pH至5.0~5.5，用10000Dal的滤膜进行超滤得透过液。
作为本发明的一种优选方案，所述制备方法还包括纳滤处理，在所述离心超滤除杂后进行，具体为：
将透过液用500Dal的纳滤膜进行浓缩和脱盐得截流液，控制操作压力为5~8bar，当至截留液生药含量50~60%时，停止纳滤，所得截留液为植物组合物。
上述植物组合物植物组合物作为皮肤控油成分在制造皮肤化学用品中的应用。
作为本发明的一种优选方案，所述皮肤化学用品的剂型选自化妆水、精华液、膏霜或乳液。
作为本发明的一种优选方案，所述植物组合物在皮肤化学用品中的添加量为0.1~10wt%。
作为本发明的一种优选方案，所述植物组合物在皮肤化学用品中的添加量为1~4wt%。
本发明的有益效果：
1.本发明提供的植物组合物由质量比为1:6~10:6~10的薏苡仁、柚子皮和知母原料制成，经试验发现，其通过作用于皮脂腺细胞多靶点，实现了同时抑制胆固醇调节元件结合蛋白（SREBP-1）的表达和促进过氧化物酶体增殖物激活受体γ（pparγ）的表达的效果，起到平衡油脂的作用，pparγ和SREBP-1又共同作用于SCD1，实现对硬脂酰辅酶A去饱和酶1（SCD1）的表达调控，确保组合物整体产生的是控油效果，从而达到控油但不过度的平衡皮肤油脂分泌的效果，能够在不依赖保湿成分的条件下实现对皮肤油脂的平衡调控作用，进而强化了皮肤的屏障功能。
2.本发明还提供了上述植物组合物的制备方法，具有提取效率高，产物纯度高，稳定性强的特点，原理如下：
该制备方法全过程采用常温制备工艺，有效避免了植物成分中热敏和受热变色的成分（如多酚类成分）的氧化、糖和蛋白的美拉德反应等，规避了产品的刺激性，所得植物组合物安全性更高，稳定性强；
该制备方法采用“胶体磨+壳聚糖絮凝+乳化均质+循环提取”的提取方式，显著提升了提取效果，详述如下：（1）研磨初提步骤中，胶体磨机器实现循环研磨提取，使原料体系保持较高的外扩散水平，相比于常规的研磨后提取工艺提升了原料的提取率；（2）在研磨初提阶段加入壳聚糖可缩短工艺流程；循环研磨则可以防止壳聚糖絮凝产生结块，以避免影响提取效果；（3）在研磨初提步骤中，用胶体磨研磨原料，使得原料与溶剂充分接触，溶剂进入原料的含量充分，在此基础上进行乳化均质，其进一步提升了溶剂进入原料的含量，有助于在后续循环提取环节提升提取率；（4）外循环提取使得原料体系在保持较高水平的外扩散水平同时实现有效成分提取，并同步进行了絮凝除杂。上述操作协调配合，显著提升了提取效果。
优选采用离心超滤除杂，即“分步离心+超滤”的方式，有效提升产物纯度，除杂效果更高，详述如下：（1）用差速离心法分步除去固体小颗粒和大分子物质；分步去除后再调节pH，可以有效去除酸碱可溶的大分子物质对后续pH调节的影响；（2）用调碱离心除去生物碱、碱性等电点蛋白等杂质，用调酸离心除去有机酸、酸性等电点蛋白等杂质；分步除酸碱可以防止具有酸碱缓冲效果的杂质一步无法除尽。进一步地，本发明中还设置纳滤操作，实现进一步脱色、除菌、脱盐、浓缩效果。
3.本发明还提供了上述植物组合物在皮肤化学用品中的应用，适用范围广，皮肤化学用品的剂型选自化妆水、精华液、膏霜或乳液，可施用于面部皮肤或头部皮肤；本发明组合物在添加量1~4wt%内还表现出近似的皮脂腺抑制率，可见该浓度范围内组合物具有良好的缓冲效果，因此不需要为了不同程度的控油效果而提供不同浓度的组合物，该浓度范围内的组合物对于不同状态的皮肤均具有良好的控油效果。
具体实施方式
以下结合具体实施方式对本发明创造作进一步详细说明。
实施例1
执行以下步骤制备植物组合物：
定量粉碎：在常温下将100g质量比为1:6:10的薏苡仁、柚子皮和知母原料粉碎成粗粉；
研磨初提：所述粗粉基础上加8倍原料质量的50%的1,3-丁二醇，加入后总体系质量0.3‰的壳聚糖，使用前，将其用柠檬酸预溶成1wt%的壳聚糖溶液，壳聚糖溶液中壳聚糖和柠檬酸的质量比为1:1，所述1wt%的壳聚糖溶液中壳聚糖的粘度＜300 mpa.s，用循环式胶体磨进行碾磨提取，设置循环时间为10min，循环速度为1倍体积/min，所述体积为胶体磨可容料体的体积；
乳化均质：将研磨初提后的原料转移至乳化罐进行搅拌均质提取，搅拌速度200rpm，均质速度2500rpm，时间30min；
循环提取：将乳化均质后的原料转移至外循环提取罐中进行循环提取得混合液，搅拌速度200rpm，循环速度3倍罐体积/h，时间2h；
离心超滤除杂：
S1、将循环提取所得离心液于2000rpm离心15min得第一离心混合液；
S2、将第一离心液15000rpm离心15min得第二离心混合液；
S3、将第二离心混合液用质量浓度10%的氢氧化钠溶液调节pH至8.5，100rpm搅拌30min，15000rpm离心15min,得第三离心混合液；
S4、第三离心混合液用10%柠檬酸溶液调节pH至4.0，50rpm搅拌30min，18000rpm离心10min,得离心液；
S5、离心液调节至pH为5.5，用10000 Dal滤膜进行超滤至所得液体超过离心液总体积的80%时，补充离心液总体积20~30%的质量浓度为50%的1,3-丁二醇，继续超滤至所得液体与S4所得离心液总体积相同时，取所得液体作为透过液，控制压力为2bar；
纳滤处理：将透过液用500Dal纳滤膜进行浓缩和脱盐，操作压力5bar，至截留液生药含量50~60%时，停止纳滤，制备所得截留液为植物组合物。
实施例2
执行以下步骤制备植物组合物：
定量粉碎：在常温下将100g质量比为1:10:6的薏苡仁、柚子皮和知母原料粉碎成粗粉；
研磨初提：所述粗粉基础上加6倍原料质量的70%的1,3-丁二醇，加入后总体系质量0.5‰的壳聚糖，使用前，将其用柠檬酸预溶成1wt%的壳聚糖溶液，壳聚糖溶液中壳聚糖和柠檬酸的质量比为1:1，所述1wt%的壳聚糖溶液中壳聚糖的粘度＜300 mpa.s，用循环式胶体磨进行碾磨提取，设置循环时间为15min，循环速度为0.5倍体积/min，所述体积为胶体磨可容料体的体积；
乳化均质：将研磨初提后的原料转移至乳化罐进行搅拌均质提取，搅拌速度150rpm，均质速度3000rpm，时间20min；
循环提取：将乳化均质后的原料转移至外循环提取罐中进行循环提取得混合液，搅拌速度100rpm，循环速度5倍罐体积/h，时间1.5h；
离心超滤除杂：
S1、将循环提取所得离心液于1500rpm离心20min得第一离心混合液；
S2、将第一离心液18000rpm离心20min得第二离心混合液；
S3、将第二离心混合液用质量浓度10%的氢氧化钾溶液调节pH至9.5，50rpm搅拌20min，18000rpm离心10min,得第三离心混合液；
S4、第三离心混合液用10%盐酸溶液调节pH至3.5，100rpm搅拌20min，15000rpm离心15min,得离心液；
S5、离心液调节至pH为5.0，用10000 Dal滤膜进行超滤至所得液体超过离心液总体积的80%时，补充离心液总体积20~30%的质量浓度为70%的1,3-丁二醇，继续超滤至所得液体与S4所得离心液总体积相同时，取所得液体作为透过液，控制压力为3bar；
纳滤处理：将透过液用500Dal纳滤膜进行浓缩和脱盐，操作压力8bar，至截留液生药含量50~60%时，停止纳滤，制备所得截留液为植物组合物。
实施例3
执行以下步骤制备植物组合物：
定量粉碎：在常温下将100g质量比为1:8:8的薏苡仁、柚子皮和知母原料粉碎成粗粉；
研磨初提：所述粗粉基础上加7倍原料质量的60%的1,3-丙二醇，加入后总体系质量0.4‰的壳聚糖，使用前，将其用柠檬酸预溶成1wt%的壳聚糖溶液，壳聚糖溶液中壳聚糖和柠檬酸的质量比为1:1，所述1wt%的壳聚糖溶液中壳聚糖的粘度＜300 mpa.s，用循环式胶体磨进行碾磨提取，设置循环时间为13min，循环速度为0.8倍体积/min，所述体积为胶体磨可容料体的体积；
乳化均质：将研磨初提后的原料转移至乳化罐进行搅拌均质提取，搅拌速度180rpm，均质速度2800rpm，时间25min；
循环提取：将乳化均质后的原料转移至外循环提取罐中进行循环提取得混合液，搅拌速度150rpm，循环速度4倍罐体积/h，时间1.7h；
离心超滤除杂：
S1、将循环提取所得离心液于1800rpm离心25min得第一离心混合液；
S2、将第一离心液16500rpm离心18min得第二离心混合液；
S3、将第二离心混合液用质量浓度10%的氢氧化钾溶液调节pH至9.0，75rpm搅拌25min，16500rpm离心12min,得第三离心混合液；
S4、第三离心混合液用10%盐酸溶液调节pH至3.7，75rpm搅拌25min，16500rpm离心12min,得离心液；
S5、离心液调节至pH为5.2，用10000 Dal滤膜进行超滤至所得液体超过离心液总体积的80%时，补充离心液总体积20~30%的质量浓度为60%的1,3-丙二醇，继续超滤至所得液体与S4所得离心液总体积相同时，取所得液体作为透过液，控制压力为4bar；
纳滤处理：将透过液用500Dal纳滤膜进行浓缩和脱盐，操作压力5bar，至截留液生药含量50~60%时，停止纳滤，制备所得截留液为植物组合物。
对比例1
与实施例1差异仅在于所述植物组合物原料在控制总质量相同的前提下由以下质量比的原料制成：
柚子皮：知母=7:10。
对比例2
与实施例1差异仅在于所述植物组合物原料在控制总质量相同的前提下由以下质量比的原料制成：
柚子皮：薏苡仁=11:6。
对比例3
与实施例1差异仅在于所述植物组合物原料在控制总质量相同的前提下由以下质量比的原料制成：
知母：薏苡仁=16:1。
对比例4
与实施例1差异仅在于所述植物组合物原料在控制总质量相同的前提下由以下质量比的原料制成：
薏苡仁：柚子皮：知母=1:5:11。
对比例5
与实施例1差异仅在于所述植物组合物原料为与实施例1植物组合物原料等质量的柚子皮。
对比例6
与实施例1差异仅在于所述植物组合物原料为与实施例1植物组合物原料等质量的知母。
对比例7
与实施例1差异仅在于所述植物组合物原料为与实施例1植物组合物原料等质量的薏苡仁。
对比例8
与实施例1差异在于所述植物组合物通过以下工艺制得：
把药材粉碎成粗粉，采用索氏提取法进行提取，提取溶剂为体积比50%的乙醇溶液，固液体积比为1:10，提取时间4h，提取液用15000rpm离心15min得离心液，65~70℃减压浓缩至生药浓度200%，补加1,3-丁二醇和水，至溶剂中丁二醇含量为50%，生药浓度为50~60%，0.45μm膜过滤至澄清，即得植物组合物。
试验例1 理化性质测试
对实施例1-3和对比例8进行如下测试：
一、稳定性测试：
将待测样品置于4℃、48℃、常温光照各条件下，记录在三个温度条件下均能保持无严重变色、无肉眼可见析出、总皂苷含量减少≤10%的最长时间，所得结果见表1。
二、活性物含量测定：
活性物含量=总皂苷含量+总黄酮含量，为此，以下分别测试总皂苷含量和总黄酮含量；
1.总皂苷检测方法：
检测仪器：752G紫外分光光度计(上海仪电科学仪器股份有限公司)
样品处理：取定量样品用甲醇定容稀释至显色后吸光度数值在0.1~1；对照品溶液配制：精密称取知母皂苷A3对照品5.0mg，置10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容。标准品精密量取知母皂苷A3对照品溶液0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL、待测样品1mL分别置于10mL具塞比色管中，水浴蒸干，加0.5%茴香醛硫酸溶液0.5mL，混匀，放置冰水浴中冷却5min后取出，精密量取一定纯甲醇加入至10mL，摇匀，以相应试剂为空白，于430nm测定其吸光度。以吸光度(A)为纵坐标，知母皂苷A3对照品溶液体积（mL）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=aX+b，根据标准曲线得的线性方程式Y=aX+b，按下列公式（1）计算结果：
其中，Y——样品吸光度值；
a、b——线性方程式系数；
C0——加入知母皂苷A3的浓度，mg/mL；
P0——加入知母皂苷A3的纯度，%；
N——供试品稀释倍数；
V——加入待测样的体积，mL，此处为1mL；
2.总黄酮检测方法
检测仪器：752G紫外分光光度计(上海仪电科学仪器股份有限公司)
芦丁标准液：准确称量干燥至恒重的芦丁标准品5.0mg，60%乙醇定容至25mL容量瓶。
待测样品：取定量样品用70%乙醇定容稀释至显色后吸光度数值在0.1~1。
标准品精密量取芦丁对照品溶液0、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、待测样品1mL分别置于25mL容量瓶中，依次加入质量浓度60%的乙醇10mL和质量浓度5%的亚硝酸钠溶液1mL，摇匀，放置6min，再加入质量浓度10%的硝酸铝1mL，摇匀，放置6min，加1.0mol/L氢氧化钠溶液5mL，用60%乙醇定容，摇匀，放置10min后，以相应试剂为空白，于504nm测定其吸光度。以吸光度(A)为纵坐标，芦丁对照品溶液体积（mL）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=aX+b，根据标准曲线得的线性方程式Y=aX+b，按下列公式（1）计算结果：
其中，Y——样品吸光度值；
a、b——线性方程式系数；
C0——加入芦丁的浓度，mg/mL；
P0——加入芦丁的纯度，%；
N——供试品稀释倍数；
V——加入待测样的体积，mL，此处为1mL。
三、刺激性测试
通过鸡胚试验测试试样的刺激性：参照SNT2329-2009-化妆品眼刺激性-腐蚀性的鸡胚绒毛尿囊膜试验测试，IS＜1为无刺激；1≤IS＜5为轻度刺激；5≤IS＜9为中度刺激，所得结果见表1。
表1 理化指标汇总
| 颜色 | 活性物含量mg/mL | 稳定性 | 5%浓度下鸡胚试验IS值 | |
| 实施例1 | 浅棕色 | 32 | ＞3个月 | 0.1 |
| 实施例2 | 浅棕色 | 34 | ＞3个月 | 0.1 |
| 实施例3 | 浅棕色 | 31 | ＞3个月 | 0.1 |
| 对比例8 | 黑色 | 27 | 7天 | 2.1 |
由表1可得，本发明实施例1-3所得植物组合物颜色为浅棕色，活性物含量均>3，稳定性均在3个月以上，并且鸡胚试验IS值均为0.1，无刺激性，而对比例8所得植物组合物颜色为黑色，活性物含量为2.7，相较于本发明实施例1-3所得植物组合物活性物含量有所下降，稳定性为7天，相较于实施例1-3均在3个月以上有明显下降，5%浓度下鸡胚试验IS值为2.1，表现出轻度刺激，可见本发明实施例所得植物组合物颜色浅、稳定性安全性大幅提高，活性物含量提高，说明本发明所提供的植物组合物的制备方法同时具有提取效率高，产物纯度高安全性高，稳定性强的特点。
试验例2 控油效果测试
四、对实施例1-3和对比例1-8所得植物组合物通过金黄地鼠皮脂腺斑组织测定实验检测组合物的控油效果：
试验方法：将108只金黄地鼠适应性喂养1周后随机分组，分为空白组、阳性药物组及测试组16组（分别施用1wt%的实施例1、实施例3和对比例1-8所得植物组合物，2wt%的实施例1和实施例3，4wt%的实施例1和实施例3，8wt%的实施例1和实施例3），共计18组，每组6只。实验开始前、实验最后一天都测量各组小鼠背部皮脂腺面积。空白组不予特殊干预；阳性药组予罗格列酮片4mg/(kg·d)（溶于2mL蒸馏水）灌胃，每日1次，每次0.1mL/只，测试组皮外涂布相应浓度的样品1mL，均为每日2次，局部外用于金黄地鼠背部皮脂腺斑处。连续干预4周后腹腔注射10%水合氯醛麻醉，切取双侧背部约1cm×1cm大小皮脂腺斑处皮肤组织，置于4%甲醛溶液中进行固定，做好标记待检，并将取材后的金黄地鼠脱颈处死后置于规定位置。HE染色，观察各组金黄地鼠皮脂腺斑组织病理学表现，免疫组化检测皮脂腺斑中油脂调控因子的综合表达，并采用图像分析系统(Aipathwell)分析计算，干预前后各组金黄地鼠皮脂腺斑面积见表2。
表2 干预前后各组金黄地鼠皮脂腺斑面积（±s/mm2）
用t-test方法进行统计分析，与空白组相比，显著性以*表示，P-value＜0.05表示为*，P-value＜0.01表示为**；n=6；皮脂腺面积增长率=（测试组干预后面积-测试组干预前面积）/（空白组干预后面积-空白组干预前面积）*100%。
对表2中实施例1浓度梯度之间皮脂腺斑面积的显著性进行分析得表3，对表2中实施例3浓度梯度之间皮脂腺斑面积的显著性进行分析得表4。
表3 实施例1浓度梯度之间皮脂腺斑面积的显著性差异统计表
| 实施例1 | 1wt% | 2wt% | 4wt% | 8wt% |
| 1wt% | 0.527 | 0.203 | 0.104 | |
| 2wt% | 0.095 | 0.052 | ||
| 4wt% | 0.549 | |||
| 空白组 | 0.003 | 0.002 | 0.045 | 0.140 |
表4 实施例3浓度梯度之间皮脂腺斑面积的显著性差异统计表
| 实施例3 | 1wt% | 2wt% | 4wt% | 8wt% |
| 1wt% | 0.547 | 0.295 | 0.278 | |
| 2wt% | 0.076 | 0.127 | ||
| 4wt% | 0.728 | |||
| 空白组 | 0.006 | 0.001 | 0.026 | 0.117 |
由表2可得，实验干预前后空白组皮肤组织皮脂腺面积大幅增加；1wt%添加量下，实施例1、实施例3和阳性对照组皮脂腺面积轻度增加，与空白组相比有显著性差异，且实施例效果优于阳性对照，说明实施例1和实施例3所制得的植物组合物具有良好的控油效果。对比例1-3用等量一种原料代替第三种原料，对比例5-7只用等量一种原料代替，上述对比例与实施例1相比较皮脂腺面积均明显增加，控油效果明显下降，说明在本发明提供的原料下，薏苡仁、柚子皮和知母三者制得的植物组合物发生了协同增效作用，皮脂腺的控油效果显著提升，而对比例4与实施例1相比虽原料成分相同但原料质量配比不同，所测得皮脂腺面积相较于实施例1皮脂腺面积也有明显增加，说明原料成分间的配比也是影响功效的主要因素；对比例8和实施例的配方组成是一样的但工艺不同，结果显示对比例8也有一定的控油效果，但效果比实施例1差，说明本发明的特殊工艺对功效也有贡献。
由表2可知，从实施例1和实施例3的浓度梯度（1wt%、2wt%、4wt%、8wt%）皮脂腺面积增长率数据可以看出，在1~4wt%的浓度范围内，各浓度下皮脂腺面积相对增长率与空白组相比，具有显著性差异，在8wt%浓度下，皮脂腺面积相对增长率与空白组相比显著性消失，即皮脂腺面积增长率不与组合物浓度呈线性变化，体现出平衡油脂的特征；由表3和表4可知，实施例1和实施例3在1~4wt%的浓度范围内，皮脂腺斑面积的显著性和空白组相比均小于0.05，具有显著性差异，说明本发明所得植物组合物具有控油效果；当浓度达到8wt%时，皮脂腺斑面积的显著性和空白组相比为0.140%，大于0.05，没有显著性差异，所得植物组合物不会过度控油，即具有平衡油脂的作用，其平衡控油效果的浓度范围是添加量1~4wt%，在该浓度范围的添加量下，该植物组合物的控油效果稳定，可适应不同的皮肤需求。
五、对各组金黄地鼠皮脂腺斑组织中各调控因子蛋白的平均光密度测定，所述测试方法如下：
显微镜：尼康仪器有限公司E100；
（一）石蜡切片制作
1、固定取材：剖取新鲜组织立即投入组织固定液内或者组织对应的特殊固定液内固定24h以上，常温保存运输。将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整，将修切好的组织和对应的标签放于包埋框内。
2、脱水浸蜡：将脱水盒放进脱水机内依次梯度酒精进行脱水。75%酒精4h，85%酒精2h，90%酒精2h，95%酒精1h，无水乙醇I 30min，无水乙醇II 30min，醇苯5-10min，二甲苯I5-10min，二甲苯II 5-10min，65°融化石蜡I 1h，65°融化石蜡II 1h，65°融化石蜡III 1h。
3、石蜡包埋：将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋框，待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。于-20℃冻台冷却，蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。
4、石蜡切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机切片，厚4μm。切片漂浮于摊片机40℃温水上将组织展平，载玻片将组织捞起，60℃烘箱内烤片。水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。
（二）染色步骤
1.石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入环保型脱蜡液Ⅰ20min—环保型脱蜡液Ⅱ20min—无水乙醇Ⅰ5min—无水乙醇Ⅱ5min—75%酒精5min，自来水洗。
冰冻切片复温固定：将冰冻切片从-20°冰箱取出恢复至室温，用组织固定液固定15min后，流水冲洗。
2.苏木素染色：切片入苏木素染液染3-5min，自来水洗，分化液分化，自来水洗，返蓝液返蓝，流水冲洗。
3.伊红染色：切片依次入85%、95%的梯度酒精脱水各5min，入伊红染液中染色5min。
4.脱水封片：切片依次放入无水乙醇I 5min -无水乙醇II 5min-无水乙醇Ⅲ5min-二甲Ⅰ5min- 二甲苯Ⅱ5min透明，中性树胶封片。
5.显微镜镜检，图像采集分析。
（三）免疫组化实验步骤
1.石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入环保型脱蜡液Ⅰ10min-环保型脱蜡液Ⅱ10min-环保型脱蜡液Ⅲ10min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-无水乙醇Ⅲ5min-蒸馏水洗。
2.抗原修复：此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS（pH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。(修复液和修复条件根据组织来确定）
3.阻断内源性过氧化物酶：切片放入3%双氧水溶液，室温避光孵育25min，将玻片置于PBS（pH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
4.血清封闭:在组化圈内滴加3%BSA 均匀覆盖组织，室温封闭30min。（一抗是山羊来源的用兔血清封闭，其他来源的用BSA封闭）
5.加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于湿盒内4℃孵育过夜。
6.加二抗：玻片置于PBS（pH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗（HRP标记）覆盖组织，室温孵育50min。
7.DAB显色：玻片置于PBS（pH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下控制显色时间，阳性为棕黄色，自来水冲洗切片终止显色。
8.复染细胞核：苏木素复染3min左右，自来水洗，苏木素分化液分化数秒，自来水冲洗，苏木素返蓝液返蓝，流水冲洗。
9.脱水封片：将切片依次放入75%酒精5min--85%酒精5min --无水乙醇Ⅰ5min --无水乙醇Ⅱ5min--正丁醇5min--二甲苯Ⅰ5min 中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，封片胶封片。
10.镜检：置于白光显微镜下进行结果判读。
所得结果见表5。
表5 各组金黄地鼠皮脂腺斑组织中各调控因子蛋白的平均光密度
用 t-test 方法进行统计分析，与空白组相比，显著性以*表示，P-value＜0.05表示为*，P-value＜0.01 表示为**；n=6。
由表5各油脂调控因子数据检测结果可以看出，相比空白组，在1~4wt%添加量下，实施例1和实施例3能显著降低SREBP-1、SCD1蛋白的表达量，起到抑制油脂生成的作用，同时实施例1和实施例3能显著升高pparγ蛋白的表达量，起到促进油脂生成的作用，从而起到平衡油脂、不过量降低油脂的作用；1~8wt%浓度下,实施例1和实施例3的SREBP-1蛋白表达量呈持续下降趋势且与空白组相比有显著性差异，pparγ蛋白表达量呈持续上升降趋势且与空白组相比有显著性差异；SCD1蛋白表达量在添加量1~4wt%范围内显著性降低，当浓度达到8wt%时，显著性消失或者活性反而增高，表明SREBP-1与pparγ表现出良好的调控油脂分泌效果，SCD1受到SREBP-1与pparγ综合调控的影响，不会随植物组合物浓度增大而呈线性增大趋势，实现了平衡油脂效果；而对比例1-8测试结果中均不具备显著性，未对SREBP-1、pparγ和SCD1这3个靶点均起到良好的调控作用，可知对比例1-8无法同时调控SREBP-1、pparγ和SCD1这三个靶点，无法起到良好的平衡油脂效果。结合表2-表4，SREBP-1、pparγ和SCD1这3个调控因子的变化的综合效果与皮脂腺面积的增长呈相关性，表现在皮脂腺面积增长率上，在实施例1和实施例3中，呈现出在1~4wt%的低浓度上增长率大，在8wt%的高浓度下增长率小的规律，且各浓度之间没有显著性差异，在1~4wt%浓度范围内具有控油为主的效果，8wt%浓度下与空白组没有显著性差异，但不会产生加重出油的反作用。即本发明添加量与SREBP-1呈负相关、本发明添加量与pparγ表达量呈正相关，本发明添加量对SCD1呈低浓度抑制表达，高浓度抑制效果减弱的关系，说明本发明组合物实现了抑制SREBP-1降低油脂量、促进pparγ增加油脂量，并由SREBP-1和pparγ对SCD1从中进行平衡，达到平衡油脂，不会过度控油的效果。
对比例8和实施例1的配方组成是一样的但工艺不同，结果显示对比例8对3个靶点均有一定的效果，但效果比实施例1差，说明本发明的特殊工艺对功效也有贡献。
实施例4
一种控油精华，包含实施例2制得的植物组合物，
该控油精华原料组分及制备方法如下：
实施例5
一种控油洗发水，包含实施例1制得的植物组合物，
该控油精华原料组分及制备方法如下：
如上所述仅为本发明创造的实施方式，不以此限定专利保护范围。本领域技术人员在本发明创造的基础上作出非实质性的变化或替换，仍落入专利保护范围。
Claims (8)
1.一种具有外平衡油脂作用的植物组合物，其特征在于，由以下质量比的原料制成：
薏苡仁：柚子皮：知母=1:6~10:6~10；
制备步骤包括：用50~70wt%的醇溶液对原料进行提取，浓缩至生药浓度50~60%；所述醇溶液使用1,3-丙二醇或1,3-丁二醇；
所述植物组合物的制备方法包括常温下进行以下操作：
研磨初提：将粉碎后的薏苡仁、柚子皮和知母原料，连同壳聚糖和溶剂放入循环式胶体磨中进行碾磨提取，溶剂即所述醇溶液；所述壳聚糖为加入后总体系质量的0.3~0.5‰；使用所述壳聚糖前，将其用柠檬酸预溶成1wt%的壳聚糖溶液，壳聚糖溶液中壳聚糖和柠檬酸的质量比为1:1，所述1wt%的壳聚糖溶液中壳聚糖的粘度＜300 mpa.s；
乳化均质：将研磨初提后的原料进行搅拌均质；
循环提取：将乳化均质后的原料放置于外循环提取罐中进行循环提取得混合液；
离心超滤除杂：将循环提取所得的混合液离心得第一离心混合液；
将第一离心混合液离心得第二离心混合液；将第二离心混合液调节pH至8.5~9.5后离心得第三离心混合液；将第三离心混合液调节pH至3.5~4.0，搅拌后离心得离心液；将离心液调节pH至5.0~5.5，超滤得透过液；
纳滤处理。
2.根据权利要求1所述的植物组合物，其特征在于，所述植物组合物由以下质量比的原料制成：
薏苡仁：柚子皮：知母=1:6~8:8~10或1:8~10:6~8。
3.根据权利要求1所述的植物组合物，其特征在于，在所述离心超滤除杂步骤中：
循环提取所得的混合液的离心条件为：于1500~2000rpm离心15~20min；
第一离心混合液的离心条件为：于12000~15000rpm离心15~20min；
调节pH至8.5~9.5后的第二离心混合液的离心条件为：于50~100rpm搅拌20~30min，再于15000~18000rpm离心10~15min；
调节pH至3.5~4.0后的第三离心混合液的搅拌条件为：于50~100rpm搅拌20~30min；离心条件为：于15000~18000rpm离心10~15min；
对所述离心液的超滤是用10000Dal的滤膜进行的。
4.根据权利要求1所述的植物组合物，其特征在于，所述纳滤处理具体为：
将透过液用500Dal的纳滤膜进行浓缩和脱盐得截流液，控制操作压力为5~8bar，当至截留液生药含量50~60%时，停止纳滤，所得截留液为植物组合物。
5.一种如权利要求1-2任一项所述的植物组合物作为皮肤控油成分在制造皮肤化学用品中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述皮肤化学用品的剂型选自化妆水、精华液、膏霜或乳液。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述植物组合物在皮肤化学用品中的添加量为0.1~10wt%。
8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述植物组合物在皮肤化学用品的添加量为1~4wt%。
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- 2023-12-19 CN CN202311744165.5A patent/CN117427021B/zh active Active
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