CN106580778A

CN106580778A - 澳洲坚果青皮提取物及以其为活性成分的化妆品及其制备方法

Info

Publication number: CN106580778A
Application number: CN201611140423.9A
Authority: CN
Inventors: 徐斌; 万举河; 卢淼
Original assignee: JIANGCHENG ZHONGAO AGRICULTURE TECHNOLOGY DEVELOPMENT Co Ltd
Current assignee: JIANGCHENG ZHONGAO AGRICULTURE TECHNOLOGY DEVELOPMENT Co Ltd
Priority date: 2016-12-12
Filing date: 2016-12-12
Publication date: 2017-04-26

Abstract

提供一种澳洲坚果青皮提取物澳洲坚果青皮多酚或澳洲坚果青皮水提物，由下述方法制备而得：取澳洲坚果青皮粉末，加温水浸提三次，再加入5％硫酸，冷浸24h，过滤；用去离子水洗涤滤饼除去残留的硫酸，至洗涤液为中性，得澳洲坚果青皮多酚；或，将澳洲坚果青皮原药材粗粉水洗干净，投入沸水中煮30min，停止加热保持水温在60℃‑70℃，用超声波提取1h，水提取液于2000r/min离心4min得上清液，然后浓缩成稠膏状，得澳洲坚果青皮水提物。澳洲坚果青皮提取物用于制备成化妆水和化妆乳液。同时提供澳洲坚果青皮多酚或澳洲坚果青皮水提物在制备化妆品中的应用，在制备酪氨酸酶抑制剂和抗氧化剂中的应用。

Description

澳洲坚果青皮提取物及以其为活性成分的化妆品及其制备方法

技术领域

本发明属于植物天然提取物和化妆品领域，具体涉及一种澳洲坚果青皮提取物，以其为活性成分的化妆品及其制备方法。

背景技术

澳洲坚果Macadamia ternifoliaF.Muell为山龙眼科(Proteaceae)，澳洲坚果属(Macadamia)，属常绿乔木，双子叶植物，原产于澳大利亚昆士兰与新南威尔士的亚热带雨林。澳大利亚坚果果仁具有独特的风味和丰富的营养成分，是世界著名的四大坚果之一，在欧美被认为是世界上最好的桌上坚果之一，有“干果皇后”美誉。

澳洲坚果20世纪60～70年代开始引入中国。近年来，我国云南省大力发展，已初步形成产业，特别在德宏州引种栽培后，已规模化种植，并将逐步成为德宏州主要经济林产品。随着中国经济的发展，生活水平的提高，澳洲坚果与核桃、杏仁、腰果一样，普遍被接受。

澳洲坚果自引种云南以来，在云南省适宜地区已大量栽培，取得了相当可观的经济效益。澳洲坚果已经成为德宏州等地的农业支柱产业之一。目前澳洲坚果的主要利用部分是果仁，因此，对果仁的基础和开发利用研究取得了丰硕的成果，已经形成了产业化。但是对云南坚果进行合理的全果开发和综合利用，仍然是我省澳洲坚果行业延伸产业链综合利用及提高澳洲坚果附加值面临的重要问题。

澳洲坚果的青皮少量用作沤肥和饲料，绝大部分未被开发利用，而作为废弃物大量丢弃，青皮中蕴含的大量活性物质基本没有得到合理的开发利用，利用效率极低。我们前期研究和资料表明澳洲坚果的青皮富含维生素、单宁、熊果苷等药妆活性成分，开发利用成为附加值高的产品是可行的。

本发明对青皮药妆性活性成分进行系统定量分析，为药妆产品的开发提供理论上的支持；对青皮药妆性活性成分的有效提取，为药妆产品的开发提供技术保障；最后研发出以青皮药妆性活性成分的药妆产品，为后期青皮综合开发利用打下基础。

通过文献调研，从同科山龙眼属植物深绿山龙眼,曾用名萝卜树H.erraticaHook.的种子中分离出豆腐果苷(helicid)[5]和豆腐果苷Ⅱ(helicidⅡ),对羟甲基苯-O-β-D-阿洛吡喃糖苷)；从山地山龙眼的果实中分离出豆腐果苷、豆腐果苷Ⅲ(helicidⅢ,对甲醛基苯-O-β-D-葡萄吡喃糖苷)、倮倮栗苷(clivicolide,对甲酸乙酯基苯-O-β-D-葡萄吡喃糖苷)；从焰序山龙眼的果实中分离出豆腐果苷、豆腐果苷Ⅲ、倮倮栗苷、焰序苷(pyrrhobotryide,2-甲醛基苯-O-β-D-阿洛吡喃糖(6→1)-O-β-D-阿洛吡喃糖苷)和β-谷甾醇。迄今为止从该属植物中共分离出5种苷类成分和β-谷甾醇。而澳洲坚果青皮的化学成分未见报道，前期研究表明，该种植物青皮部分含有熊果苷、单宁酸等可用于药妆产品的化学成分，因此具有很大的开发潜力。

澳洲坚果青皮主要含有澳洲坚果青皮胶、粘液质及多糖等，目前对皮肤美白抑制黑色素的研究较少，并且，“天然”是现在时代所追求的，天然的美白护肤产品，具有广阔的发展空间和应用前景。澳洲坚果青皮化妆品在消炎、止痒、消退色斑、消除痤疮、防止粗糙、抗冻和防裂等诸多方面具有良好的护肤美容作用，因此澳洲坚果青皮化妆品的研究也成了澳洲坚果青皮经济价值研究一种趋势。目前，现有技术中尚未有含澳洲坚果青皮提取物的化妆品的报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术存在的空白，提供一种抗酪氨酸酶活性高和抗氧化活性高的澳洲坚果青皮化妆品，及其制备方法与应用。澳洲坚果Macadamia ternifoliaF.Muell为山龙眼科(Proteaceae)，澳洲坚果属(Macadamia)植物。澳洲坚果青皮主要含有澳洲坚果青皮多酚、天然熊果苷及多糖等，本发明采用植物化学分离手段从澳洲坚果青皮药材中提取澳洲坚果青皮多糖、澳洲坚果青皮水提取物、澳洲坚果青皮多酚等不同提取物，测定不同澳洲坚果青皮提取物的抗氧化和酪氨酸酶抑制活性，通过测定澳洲坚果青皮水提取物抗酪氨酸酶活性最高，其浓度为60mg/ml抑制率为68.5％，澳洲坚果青皮水提取物抗氧化活性也是最高，其浓度为40mg/ml抗氧化活性为95.1％，因此，本发明将澳洲坚果青皮水提物以浓度为60mg/ml制备成澳洲坚果青皮保湿水化妆乳，为澳洲坚果青皮提取物的开发利用奠定基础。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

澳洲坚果青皮提取物澳洲坚果青皮多酚或澳洲坚果青皮水提物，由下述方法制备而得：

取澳洲坚果青皮粉末，加温水浸提三次，再加入5％硫酸，冷浸24h，过滤；用去离子水洗涤滤饼除去残留的硫酸，至洗涤液为中性，得澳洲坚果青皮多酚；

或，将澳洲坚果青皮原药材粗粉水洗干净，投入沸水中煮30min，停止加热保持水温在60℃-70℃，用超声波提取1h，水提取液于2000r/min离心4min得上清液，然后浓缩成稠膏状，得澳洲坚果青皮水提物。

如所述的澳洲坚果青皮提取物澳洲坚果青皮多酚或澳洲坚果青皮水提物，其由下述方法制备而得：

取10g的澳洲坚果青皮粉末，加入50ml温水浸提三次，共150ml水，再向烧瓶中加入7.5ml5％硫酸，冷浸24h，过滤；再用去离子水洗涤滤饼除去残留的硫酸，至洗涤液为中性，得澳洲坚果青皮多酚；

或，将6.0g澳洲坚果青皮原药材粗粉水洗干净，投入100mL沸水中煮30min，停止加热保持水温在60℃-70℃，用超声波59kH500W提取1h，水提取液于2 000r/min离心4min得上清液，然后浓缩成相对密度为0.9-1.2mg/mL稠膏状，即为澳洲坚果青皮水提物。

一种澳洲坚果青皮提取物澳洲坚果青皮多酚或澳洲坚果青皮水提物的制备方法，该方法包括：

或，将6.0g澳洲坚果青皮原药材粗粉水洗干净，投入100mL沸水中煮30min，停止加热保持水温在60℃-70℃，用超声波59kH500W提取1h，水提取液于2 000r/min离心4min得上清液，然后浓缩至100ml成稠膏状，得澳洲坚果青皮水提物。

本发明另外还提供了一种澳洲坚果青皮保湿水，其由下述重量百分比的配方所组成：

澳洲坚果青皮多酚或澳洲坚果青皮水提物6％，羟乙基纤维素0.2％,甘油10.0％，尼泊金乙酯0.2％，丙二醇6.0％，氢氧化钾0.2％，乙醇4.0％，余量为去离子水。

如所述的澳洲坚果青皮保湿水，其中所述的澳洲坚果青皮多酚或澳洲坚果青皮水提物浓度为60mg/ml。

本发明同时还提供了一种澳洲坚果青皮化妆乳液，其由表1的配方所组成，PH为5.0-7.0.

表1化妆乳液配方

所述的澳洲坚果青皮化妆乳液的制备方法，将A相、B相分别加热至80℃，将B相缓慢搅拌加入A相，搅拌至冷却40℃，加入C相，搅拌至冷却，既得。

本发明还提供了所述的澳洲坚果青皮提取物澳洲坚果青皮多酚或澳洲坚果青皮水提物在制备化妆品中的应用。所述的澳洲坚果青皮提取物澳洲坚果青皮多酚或澳洲坚果青皮水提物在制备酪氨酸酶抑制剂中的应用。所述的澳洲坚果青皮提取物澳洲坚果青皮多酚或澳洲坚果青皮水提物在制备抗氧化剂中的应用。

附图说明

图1为葡萄糖标准曲线图；

图2为澳洲坚果青皮水提取物对酪氨酸酶抑制率；

图3为澳洲坚果青皮多酚抗氧化活性；

图4为澳洲坚果青皮水提物抗氧化活性。

具体实施方式

下面结合附图，用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。

实施例1：

实验材料、仪器和试剂：

材料：干澳洲坚果青皮、澳洲坚果青皮果实。

仪器：超声波提取器、7200型分光光度计、离心机、水浴锅

试剂试品：无水乙醇、磷酸缓冲液、1％NAOH、酪氨酸酶、酪氨酸、DPPH、蒽酮、浓硫酸、葡萄糖。

实验步骤：

澳洲坚果青皮多酚的提取：

取10g的澳洲坚果青皮粉末，加入50ml温水浸提三次，共150ml水，再向烧瓶中加入7.5ml5％硫酸，冷浸24h，过滤；再用去离子水洗涤滤饼除去残留的硫酸，至洗涤液为中性，得到粗提澳洲坚果青皮多酚。

澳洲坚果青皮水提物的制备：

超声波水提取物的制备：将6.0g原药材粗粉水洗干净，投入100mL沸水中煮30min，停止加热保持水温在60℃一70℃，用超声波(59kH500W)提取1h。水提取液于2 000r/min离心4min得上清液，然后浓缩至100ml成稠膏状并称量。

抗酪氨酸酶的活性测定：

测定澳洲坚果青皮多糖对酪氨酸酶的抑制方法：

根据美白功效评价的方法进行改良，测定酪氨酸酶抑制率。按照表2配好试剂。

表2测定酪氨酸酶抑制率

其中：配好试剂摇匀，在37℃水浴中加热10min，C1中加入1ml酶，仍在37℃下加热5min，以C2为参比测，调零，在475nm吸光度值测C1吸光度；同样，按此方法以T2测T1吸光度。计算样品对酪氨酸酶的抑制率，公式为①。

公式：

T＝(C1-T1)/C1×100％ ①

测定澳洲坚果青皮浸膏对酪氨酸酶的抑制方法：

根据美白功效评价的方法进行改良，测定酪氨酸酶抑制率。按照表3配好试剂。

配好试剂摇匀，在37℃水浴中加热10min，再加入酪氨酸酶，仍在37℃下加热5min，，以磷酸缓冲液为对照品，在475nm吸光度值测Ta、Tb、Tc、Td吸光度；计算样品对酪氨酸酶的抑制率，公式为：

T＝[(Ta-Tb)-(Tc-Td)]/(Ta-Tb)×100％ ②

表4测定酪氨酸酶抑制率方法

抗氧化活性测定：

当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用分光光度计进行快速的定量分析参照文献^[3]进行。配置浓度为1×10^-4mol/ml的DPPH·无水乙醇溶液。取定容后的样品溶液6ml与6ml的DPPH溶液混合，放置30min，以80％乙醇调零，在517nm处测定吸光度记为A_i，同法6ml溶剂加6mlDPPH溶液混匀测定吸光度Ac，6ml样品溶液加6ml的溶剂混匀测吸光度A_j。(上述所说的溶剂均为80％的乙醇)，按照公式计算自由基清除率IP％＝[1-(A_i-A_j)/Ac]×100。式中A_j为样品自身对吸光度的贡献,Ac为DPPH本身吸收,A_i样品对DDPH作用后的吸光度数值。

本实验测定了澳洲坚果青皮多糖的抗氧化活性、澳洲坚果青皮稠膏的抗氧化活性、石榴皮和石榴籽的抗氧化活性，分别进行比较。

美白功效评价：

美白剂通过作用于皮肤黑素的形成、代谢途径的某个阶段控制或抑制黑素的成，从而降低皮肤色度或减轻色素沉着，最终达到美白皮肤的目的。美白剂作外来物质，在干预皮肤黑素细胞的黑素合成功能，达到美白皮肤目的的同时，干扰了皮肤正常的生理功能，甚至产生皮肤损害”。在美白剂的生产、使用过程存在许多盲区，这包括常用美白剂的功效和对黑素细胞的毒性不明确。经过文献记载，目前我还没有颁布实施美白化妆品功效评价程序，使得美白化妆品在投入市场前无肯的、科学的功效检测报告，造成消费者选择化妆品的困难，也使各级监督部门施监督无据可依。祛斑美白化妆品功效评价方法大致可分为间接法和直接法间接法可分为化学分析法和细胞学实验法，化学分析法是据黑色素形成机理，通过测定细胞内酪氨酸酶的活性是否受到制而评价。酪氨酸酶抑制率是评价美白效果最重要指标。

化妆品评价方法：护肤用品的感官评价是通过对其使用性能的定来评价的，要包括以下几方面内容：

铺展性：主要指产品在涂抹过程中是否容易展。是否会起白条现象；

渗透性：指护肤产品在使用过程中，其中的脂、活性成分是否容易渗透进皮肤中；

滋润性：指护肤产品赋予皮肤的滋润感；

油腻性：指护肤产品在使用中没有过度的油感；

粘起感：指用指头将膏体挑起时的难易程度此时的膏体形状。

化妆品稳定性试验：

1.耐热试验

将制备好的化妆水和乳液各两份，取乳液和化妆水各一瓶放入电热恒温箱中调节到40℃，放置24h，恢复到室温后与另一份样品进行比较，观察是否有变稀、变色、分层及硬度的变化。

2.耐寒试验

取制备好的化妆水和乳液各两瓶，其中一瓶放入冰箱(-5-15℃)保持24h，取出，恢复到室温再与另一份样品进行比对，观察是否有变稀、变色、分层及硬度的变化。

3.测定化妆品PH：

用PH测定化妆水和化妆乳液的PH，并记录结果。适合人类皮肤吸收的化妆品PH在5.0-7.0范围内。

4.抗过敏测试：

选择一定数量健康人，年龄在22～60岁，与受试对象签订知情同意书，测定其脸颊的色素含量及皮肤颜色，然后发放受试化妆品。受试对象连续使用某美白化妆品样品，每天早晚各使用1次，洁面后敷用。在实验期间停用其他美白化妆品，观察是否有过敏现象。

实施例2：

澳洲坚果青皮多糖的提取：

称取干澳洲坚果青皮粉末10g，为棕褐色，呈粘稠状，既得浅棕褐色的澳洲坚果青皮粉末。新鲜澳洲坚果青皮，经过脱水后，得到粉色粘稠物，在低温40℃烘干后，其粉末呈深紫色粉末。新鲜澳洲坚果青皮和干澳洲坚果青皮经过多糖提取，所得多糖，新鲜澳洲坚果青皮含胶质比干澳洲坚果青皮多，10g澳洲坚果青皮提取，干澳洲坚果青皮得到多糖6.894g,新鲜澳洲坚果青皮得到多糖4.743g。新鲜澳洲坚果青皮含水量较大，所以同等重量的新鲜澳洲坚果青皮和干澳洲坚果青皮，干澳洲坚果青皮所提取的多糖含量较高。因此选取干澳洲坚果青皮做主要实验材料。

澳洲坚果青皮多糖含量测定：

通过蒽酮硫酸法测定标准曲线,在分光光度仪下，在620nm下测定吸光光度值如表6。并且制作了葡萄糖标准曲线图1。

表6蒽酮硫酸法测定吸光度值

通过计算得出回归方程为：

Y＝0.1032X+0.3108(r²＝0.9924) ③

标准曲线方程为Y＝0.1032X+0.3108，r²＝0.9924，在浓度1.0-5.0mg/mL范围内线性关系良好。

澳洲坚果青皮多酚的提取：

取10g的澳洲坚果青皮粉末，加入50ml温水浸提三次，共150ml水，再向烧瓶中加入7.5ml5％硫酸，冷浸24h，过滤；再用去离子水洗涤滤饼除去残留的硫酸，至洗涤液为中性，得到了淡褐色的粗提澳洲坚果青皮多酚1.3g。

澳洲坚果青皮水提物的提取：

将6g干澳洲坚果青皮制成稠膏状，所得稠膏质量浓度为：6.59mg/ml。稠膏置于4℃冰箱备用。所得结果如表7。

表7澳洲坚果青皮水提物至稠膏结果

所得物品为棕色稠膏状，将其浓缩成一定浓度，为方便取用时可以定量取用。由于澳洲坚果青皮含有丰富的澳洲坚果青皮胶，所以所得物粘稠度很高。在将其配成一定浓度溶液时，需将其在40℃一下加热，在超声波震荡下将其溶解。

澳洲坚果青皮水提物对酪氨酸酶抑制的测定：

通过分光光度仪测出在514nm处的a、b值如表9；在不同浓度下测定样品对酪氨酸酶抑制的吸光光度值表11；根据公式：⑤计算出澳洲坚果青皮水提物对酪氨酸酶抑制率如表10。图2为澳洲坚果青皮水提物对酪氨酸酶抑制率的曲线。

公式：

T＝[(Ta-Tb)-(Tc-Td)]/(Ta-Tb)×100％ ⑤

表8澳洲坚果青皮水提物a、b吸光光度值

表9澳洲坚果青皮水提物不同浓度c、d吸光光度值

表10澳洲坚果青皮水提物对酪氨酸酶抑制率

通过测量浓度为10、20、40、60mg/ml的澳洲坚果青皮水提物对酪氨酸的抑制率，得到图2质量浓度—抑制率曲线，结果表明，澳洲坚果青皮水提物对酪氨酸酶具有抑制作用，抑制率随着澳洲坚果青皮水提物质量浓度增大而增大。在60mg/ml最高抑制率为68.5％。

实施例3：

澳洲坚果青皮多酚抗氧化活性：

通过分光光度仪测定出澳洲坚果青皮多酚Ac吸光度值：0.542、0.542、0.541，平均值0.542；在517nm处测定吸光度Ai、Aj吸光光度值如表14；根据公式：⑦得出澳洲坚果青皮水提物抗氧化活性IP％如表12；图3澳洲坚果青皮多酚抗氧化活性曲线。

公式：

IP％＝[1-(A_i-A_j)/Ac]×100％ ⑦

表11澳洲坚果青皮多酚抗氧化活Ai、Aj吸光光度值

表12澳洲坚果青皮多酚抗氧化活性

通过测量浓度为0.1、0.2、0.4、0.6mg/ml的澳洲坚果青皮多酚的抗氧化活性测定，得到图3质量浓度—IP％率曲线，结果表明，澳洲坚果青皮多酚有抗氧化作用，抗氧化性随着澳洲坚果青皮水提物质量浓度增大而增大，在0.6mg/ml最高为52.6％。

澳洲坚果青皮水提物抗氧化活性：

通过分光光度仪测定出澳洲坚果青皮水提物Ac吸光度值：0.866、0.867、0.867，平均值：0.867；在517nm处测定吸光度Ai、Aj吸光光度值如表17；根据公式：IP％＝[1-(A_i-A_j)/Ac]×100％得出澳洲坚果青皮水提物抗氧化活性IP％如表14；图4澳洲坚果青皮水提物抗氧化活性曲线。

表13澳洲坚果青皮水提物抗氧化活性Ai、Aj吸光光度值

表14澳洲坚果青皮水提物抗氧化活性

通过测量浓度为10、20、40、60、70mg/ml的澳洲坚果青皮水提物抗氧化活性，得到图4质量浓度—IP％曲线，结果表明，澳洲坚果青皮水提物具有抗氧化性，随着澳洲坚果青皮水提物质量浓度增大而增大。在40mg/ml最高抑制率为95.1％。

实施例4：

化妆品的制备及评价：

根据保湿水配方制作如表3，按照制备工艺顺序加入各试剂，最终做成化妆水。

表3保湿水配方

取样品1g用4mL乙醇溶解，加入丙二醇6ml，甘油10ml，羟乙基纤维素0.2g；将氢氧化钾0.2g,溶于微量水，融化后，加入上述溶液，加入防腐剂0.2g,加水至100ml。

乳液的制备：O/W型乳剂配方如表1：

表1化妆乳液配方

将A相、B相分别加热至80℃，将B相缓慢搅拌加入A相，搅拌至冷却40℃，加入C相，搅拌至冷却，既得。

化妆水的制备：

根据实验比较，结果表明，澳洲坚果青皮多酚和澳洲坚果青皮水提物的抗酪氨酸酶和抗氧化活性较高，所以将澳洲坚果青皮多酚或澳洲坚果青皮水提物加入至化妆水中，制成具有美白效果的化妆水。化妆水具有保湿美白效果。制作出来的化妆水均匀清透，无杂质。

化妆乳液的制备：

通过实验比较，澳洲坚果青皮多酚和澳洲坚果青皮水提物的抗酪氨酸酶和抗氧化活性较高，因此将其加入到化妆品中，根据化妆乳液的制作配方，将澳洲坚果青皮多酚或澳洲坚果青皮水提物加入到化妆乳液中，所制作成的乳液，均匀，乳白色，无杂质，无油腻感。

化妆品效果评价：

美白剂通过作用于皮肤黑素的形成、代谢途径的某个阶段控制或抑制黑素的成，从而降低皮肤色度或减轻色素沉着，最终达到美白皮肤的目的。酪氨酸酶的抑制率是美白化妆品重要的评价指标，通过实验可得到结论，澳洲坚果青皮水提物的酪氨酸酶抑制率最高，因此澳洲坚果青皮水提物具有美白的功能。同时，也进行化妆品感官评价如表5。

表5化妆品感官评价

稳定性测定结果：

化妆品经过耐热性和耐寒性的测试的比较，结果如表15、16：

表15耐热性实验结果比较

表16耐寒性实验结果比较

结果表明在40℃温度下和-4℃下的化妆品，稳定性好，无明显变化。

通过对化妆水和化妆乳液的PH测定，得到PH适合人类皮肤吸收的PH范围为5.0～7.0。

过敏性测定：选取10个人进行抗过敏测试后，通过擦拭一只手后对比过敏反应、红肿现象，均无出现过敏红肿现象。

本发明通过对澳洲坚果青皮进行提取后，将提取物澳洲坚果青皮多糖、澳洲坚果青皮多酚、澳洲坚果青皮水提物进行了，酪氨酸酶的抑制率测定和抗氧化活性的测定，得出结论，干澳洲坚果青皮多糖为黄褐色，新鲜澳洲坚果青皮多糖为深紫色，在同质量下提取干澳洲坚果青皮多糖含量较多。并且对澳洲坚果青皮多糖进行测定，标准曲线方程为Y＝0.1032X+0.3108，r²＝0.9924，在浓度1.0-5.0mg/mL范围内线性关系良好。澳洲坚果青皮多糖并没有抗酪氨酸活性和抗氧化活性，澳洲坚果青皮多酚和澳洲坚果青皮水提物具有抗氧化活性，但澳洲坚果青皮多酚的抗氧化性并没有澳洲坚果青皮水提物的效果好，澳洲坚果青皮多酚在时抗氧化活性最高为52.6％，澳洲坚果青皮水提物的抗氧化活性最高为95.1％，澳洲坚果青皮水提取物的抗酪氨酸酶活性抑制率为68.5％，综合考虑，选择澳洲坚果青皮水提物浓度为60mg/ml制备成澳洲坚果青皮保湿水化妆乳，并且经过化妆品PH测为6.5，适合人类皮肤吸收，也进行了稳定性测试，耐热耐寒性良好，并且经过感官评价后，化妆水和化妆乳制作成功，为澳洲坚果青皮提取物的开发利用提供了成熟技术。

本发明通过提取澳洲坚果青皮多糖比较了新鲜澳洲坚果青皮和干澳洲坚果青皮的多糖粉末，发现同等质量下，干澳洲坚果青皮所得多糖粉末较多，并且在浸泡时，干澳洲坚果青皮可以磨成粉末，使得充分浸泡，而新鲜澳洲坚果青皮，难以粉磨，其水分较多，会出现大量粘液，只有将其切碎，在浸泡时，未能充分浸泡，使得其提取的多糖含量较少。在澳洲坚果青皮多糖含量测定时，蒽酮硫酸，需要现配现用，同时还需要注意加入硫酸的方法，以免烧伤，甚至发生爆炸，以及冷却时，需要在自来水下冲洗至冷。

在测量酪氨酸酶抑制率时，一开始由于测定澳洲坚果青皮多糖对酪氨酸酶的抑制时，在摸取方法时，在酪氨酸酶量不多的情况下，也浪费了一些，导致了后面再想测定其他样品时，试品不够，所以在每次试验前，一定要做好计划和试验制定，以免出现贵重药品的浪费。在酪氨酸酶的测定时，由于实验条件的限制，只有在测定酪氨酸酶抑制时，需要在时间测量上一定要准确，因为酶反应是很快的。所以要控制好测定时间。

在测定抗氧化活性时，本发明选用的是DPPH测定抗氧化活性，DPPH需要放在4℃冰箱里备用，以免变质导致结果不准确，在测定多糖抗氧化活性时，由于多糖遇乙醇会产生沉淀，所以选择沉淀过滤后再进行抗氧化性的测定。

Claims

1.澳洲坚果青皮提取物澳洲坚果青皮多酚或澳洲坚果青皮水提物，由下述方法制备而得：

2.如权利求1所述的澳洲坚果青皮提取物澳洲坚果青皮多酚或澳洲坚果青皮水提物，其特征在于其由下述方法制备而得：

取10g的澳洲坚果青皮粉末，加入50ml温水浸提三次，共150ml水，再向烧瓶中加入7.5ml5％硫酸，冷浸24h，过滤；再用去离子水洗涤滤饼除去残留的硫酸，至洗涤液为中性，得澳洲坚果青皮多酚；或，将6.0g澳洲坚果青皮原药材粗粉水洗干净，投入100mL沸水中煮30min，停止加热保持水温在60℃-70℃，用超声波59kH500W提取1h，水提取液于2 000r/min离心4min得上清液，然后浓缩至成相对密度为0.9-1.2mg/mL稠膏状，即为澳洲坚果青皮水提物。

3.一种澳洲坚果青皮提取物澳洲坚果青皮多酚或澳洲坚果青皮水提物的制备方法，其特征在于该方法包括：

4.澳洲坚果青皮保湿水，其特征在于其由下述重量百分比的配方所组成：

5.如权利要求4所述的澳洲坚果青皮保湿水，其特征在于所述的澳洲坚果青皮多酚或澳洲坚果青皮水提物浓度为60mg/ml。

6.澳洲坚果青皮化妆乳液，其特征在于其由表1的配方所组成，PH为5.0-7.0，

表1 化妆乳液配方

7.权利要求6所述的澳洲坚果青皮化妆乳液的制备方法，其特征在于将A相、B相分别加热至80℃，将B相缓慢搅拌加入A相，搅拌至冷却40℃，加入C相，搅拌至冷却，既得。

8.权利要求1所述的澳洲坚果青皮提取物澳洲坚果青皮多酚或澳洲坚果青皮水提物在制备化妆品中的应用。

9.权利要求1所述的澳洲坚果青皮提取物澳洲坚果青皮多酚或澳洲坚果青皮水提物在制备酪氨酸酶抑制剂中的应用。

10.权利要求1所述的澳洲坚果青皮提取物澳洲坚果青皮多酚或澳洲坚果青皮水提物在制备抗氧化剂中的应用。