CN108191988A - 甘草多糖提取工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了甘草多糖提取工艺，包括：提取、除杂、脱蛋白、脱色，将甘草干粉先后进行水提和醇提得到提取液，以熟石灰对提取液进行除杂，以石油醚脱脂，然后以氯仿、正丁醇、乙酸和酒石酸二甲酯的混合溶液进行脱蛋白，最后在分离出的甘草多糖溶液中加入活性炭进行脱色。有益效果为：甘草多糖提取工艺简单易行，蛋白质残余率低，甘草多糖的纯度可达75%以上，甘草多糖具有调节机体免疫功能、提高动物抗病力的作用，同时其抗病毒、抗肿瘤及抑菌作用显著，此外还可以清除多余的氧自由基，提高抗氧化能力，可以作为饲料添加剂以及病毒抑制剂。
Description
技术领域
本发明涉及植物多糖领域，尤其是涉及甘草多糖提取工艺。
技术背景
甘草多糖是从甘草中提取出的一类α-D-吡喃多糖。甘草又名美草，蜜草，国老，甜草，粉草，棒草，灵通。为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的根及根状茎。多年生草本，高30-100cm。根茎圆柱形，主根粗壮而长。外皮红褐色至暗褐色，内部橘黄色至鲜黄色，有甜味。茎直立，稍带木质。小枝有时有棱角，全株被白色短毛和刺状腺体。单数羽状复叶互生；小叶7-17片，卵形，广卵形或近圆形，先端急尖或钝，基部圆形，两面有短毛和腺体。托叶披针形。总状花序腋生。花萼广钟形，萼齿披针形;花冠蝶形，紫红或紫色无毛。荚果弯曲成镰刀状或环状，密生刺毛状腺体。种子 6-8粒，花期6-8月，果期7-9月。甘草含有多种活性成分，主要是三萜类、黄酮类、甘草多糖类，另外还有香豆素类、氨基酸类、生物碱类、挥发油类及多种微量元素等。
甘草中的一种重要生物活性组分是甘草多糖，甘草多糖是一种天然植物多糖,具有抗病毒、免疫调节以及抗肿瘤的活性。甘草多糖具有明显的抗病毒效应, 对I型单纯疱疹病毒、水泡性口炎病毒、腺病毒Ⅲ型、牛痘病毒、爱滋病毒均有抑制作用, 特别是对艾滋病毒的抑制率为36.2%；免疫调节作用主要体现在对小鼠网状内皮系统中单核巨噬细胞系统功能的影响, 也可激活静止小鼠脾淋巴细胞增殖效应以及抗补体活性等；甘草多糖可以单独或者协同化疗药共同作用于肿瘤细胞。
发明内容
本发明的目的在于提供甘草多糖提取工艺，甘草多糖提取工艺简单易行，甘草多糖的得率与含量较高，蛋白含量较低，甘草多糖的活性较高。
本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：甘草多糖提取工艺，包括：提取、除杂、脱蛋白、脱色，具体包括以下步骤：
提取：称取20-23份甘草干粉，置于圆底烧瓶中，用7-8倍量蒸馏水于75-78℃水浴锅中回流提取2-3次，每次60-80分钟，合并滤液并抽滤，将滤液减压浓缩至含水量为10-15%，置于烧杯中冷却至室温，向浓缩液中缓慢地滴加体积分数为95-98%的乙醇并快速搅拌，调节水提液中乙醇体积分数为75-80%，静置冷藏24-36小时后抽滤，向滤饼中加入蒸馏水超声溶解，减压浓缩至质量浓度为0.8-1.0g/mL，置于烧杯中冷却至室温；醇提与水提结合可以大大提高甘草多糖的得率，不会破坏多糖的结构，同时提取溶剂容易除去，不会增加除杂工序；
除杂：取2-3份熟石灰加入到50-80份蒸馏水配成乳液，在不断搅拌下，向提取液中慢慢滴入石灰乳，调节pH值至10.8-11.0，静置片刻后，放入78-80℃水浴锅中保温45-60分钟，抽滤除去不溶物，收集滤液；将滤液pH值以磷酸调节至8.0-8.1，以3500-3800r/min离心15-25分钟，收集离心液；向离心液中加入15-18倍量的石油醚，用分液漏斗萃取，静置分层，上层为石油醚层，下层为水层，收集下层，重复2-3次，除去脂溶性杂质；除杂操作可以有效的除去大蛋白、脂质等杂质，同时还可以使残存的蛋白质与多糖解离开来，有利于进一步的脱蛋白；
脱蛋白：将氯仿、正丁醇、乙酸按照体积比50-55:8-10:1的比例混合均匀，混合溶液中还含有1.2-1.5‰的酒石酸二甲酯，酒石酸二甲酯中L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯的比例为14.0-14.3:1；在不断搅拌下，按照体积比1:6-7的比例将混合溶液缓慢倒入除杂后的提取液中，密封后用磁力搅拌器搅拌45-60分钟，倒入分液漏斗中，静止分层后收集上层溶液，并离心分离出少量变性蛋白质，按上述步骤重复操作4-5次，使提取液中的蛋白质脱除完全；氯仿、正丁醇的混合溶液可以将游离蛋白转变为不溶性物质，经离心去除，可以达到去除甘草多糖中蛋白质的目的，同时，乙酸和适当比例的酒石酸二甲酯可以作用于蛋白质变性胶状物，降低蛋白质变性胶状物包裹的甘草多糖，从而可以大大降低甘草多糖被分离出去，提高甘草多糖的得率与含量；
脱色：量取提取液体积20-30%的活性炭倒入提取液中，搅拌均匀后，放于80-82℃恒温水浴锅中保温30-45分钟，趁热抽滤后将滤液冷却至室温；将提取液倒入冷冻盘中，并放于冰箱中冷冻12-24小时，冷冻结实后放于冷冻干燥机中干燥即得甘草多糖；本甘草多糖提取工艺简单易行，蛋白质残余率低，甘草多糖的纯度可达75%以上，甘草多糖具有调节机体免疫功能、提高动物抗病力的作用，同时其抗病毒、抗肿瘤及抑菌作用显著，此外还可以清除多余的氧自由基，提高抗氧化能力，可以作为饲料添加剂以及病毒抑制剂。
与现有技术相比，本发明的优点在于：1）氯仿、正丁醇的混合溶液可以将游离蛋白转变为不溶性物质，经离心去除，可以达到去除甘草多糖中蛋白质的目的，同时，乙酸和适当比例的酒石酸二甲酯可以作用于蛋白质变性胶状物，降低蛋白质变性胶状物包裹的甘草多糖，从而可以大大降低甘草多糖被分离出去，提高甘草多糖的得率与含量；2）本甘草多糖提取工艺简单易行，蛋白质残余率低，甘草多糖的纯度可达75%以上，甘草多糖具有调节机体免疫功能、提高动物抗病力的作用，同时其抗病毒、抗肿瘤及抑菌作用显著，此外还可以清除多余的氧自由基，提高抗氧化能力，可以作为饲料添加剂以及病毒抑制剂。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
甘草多糖提取工艺，包括以下步骤：
1）称取20份甘草干粉，置于圆底烧瓶中，用7倍量蒸馏水于75℃水浴锅中回流提取2次，每次60分钟，合并滤液并抽滤，将滤液减压浓缩至含水量为10%，置于烧杯中冷却至室温，向浓缩液中缓慢地滴加体积分数为95%的乙醇并快速搅拌，调节水提液中乙醇体积分数为75%，静置冷藏24小时后抽滤，向滤饼中加入蒸馏水超声溶解，减压浓缩至质量浓度为0.8g/mL，置于烧杯中冷却至室温；2）取2份熟石灰加入到50份蒸馏水配成乳液，在不断搅拌下，向提取液中慢慢滴入石灰乳，调节pH值至10.8，静置片刻后，放入78℃水浴锅中保温45分钟，抽滤除去不溶物，收集滤液；将滤液pH值以磷酸调节至8.0，以3500r/min离心15分钟，收集离心液；向离心液中加入15倍量的石油醚，用分液漏斗萃取，静置分层，上层为石油醚层，下层为水层，收集下层，重复2次，除去脂溶性杂质；3）将氯仿、正丁醇、乙酸按照体积比50:8:1的比例混合均匀，混合溶液中还含有1.2‰的酒石酸二甲酯，酒石酸二甲酯中L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯的比例为14:1；在不断搅拌下，按照体积比1:6的比例将混合溶液缓慢倒入除杂后的提取液中，密封后用磁力搅拌器搅拌45分钟，倒入分液漏斗中，静止分层后收集上层溶液，并离心分离出少量变性蛋白质，按上述步骤重复操作4次，使提取液中的蛋白质脱除完全；4）量取提取液体积20%的活性炭倒入提取液中，搅拌均匀后，放于80℃恒温水浴锅中保温30分钟，趁热抽滤后将滤液冷却至室温；将提取液倒入冷冻盘中，并放于冰箱中冷冻12小时，冷冻结实后放于冷冻干燥机中干燥即得甘草多糖；本甘草多糖提取工艺简单易行，蛋白质残余率低，甘草多糖的纯度可达75%以上，甘草多糖具有调节机体免疫功能、提高动物抗病力的作用，同时其抗病毒、抗肿瘤及抑菌作用显著，此外还可以清除多余的氧自由基，提高抗氧化能力，可以作为饲料添加剂以及病毒抑制剂。
实施例2：
甘草多糖提取工艺，包括以下步骤：
1）提取：称取23份甘草干粉，置于圆底烧瓶中，用8倍量蒸馏水于78℃水浴锅中回流提取3次，每次80分钟，合并滤液并抽滤，将滤液减压浓缩至含水量为15%，置于烧杯中冷却至室温，向浓缩液中缓慢地滴加体积分数为98%的乙醇并快速搅拌，调节水提液中乙醇体积分数为80%，静置冷藏36小时后抽滤，向滤饼中加入蒸馏水超声溶解，减压浓缩至质量浓度为1.0g/mL，置于烧杯中冷却至室温；醇提与水提结合可以大大提高甘草多糖的得率，不会破坏多糖的结构，同时提取溶剂容易除去，不会增加除杂工序；
2）取3份熟石灰加入到80份蒸馏水配成乳液，在不断搅拌下，向提取液中慢慢滴入石灰乳，调节pH值至11.0，静置片刻后，放入80℃水浴锅中保温60分钟，抽滤除去不溶物，收集滤液；将滤液pH值以磷酸调节至8.1，以3800r/min离心25分钟，收集离心液；向离心液中加入18倍量的石油醚，用分液漏斗萃取，静置分层，上层为石油醚层，下层为水层，收集下层，重复3次，除去脂溶性杂质；除杂操作可以有效的除去大蛋白、脂质等杂质，同时还可以使残存的蛋白质与多糖解离开来，有利于进一步的脱蛋白；
3）脱蛋白：将氯仿、正丁醇、乙酸按照体积比55:10:1的比例混合均匀，混合溶液中还含有1.5‰的酒石酸二甲酯，酒石酸二甲酯中L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯的比例为14.3:1；在不断搅拌下，按照体积比1:7的比例将混合溶液缓慢倒入除杂后的提取液中，密封后用磁力搅拌器搅拌60分钟，倒入分液漏斗中，静止分层后收集上层溶液，并离心分离出少量变性蛋白质，按上述步骤重复操作5次，使提取液中的蛋白质脱除完全；氯仿、正丁醇的混合溶液可以将游离蛋白转变为不溶性物质，经离心去除，可以达到去除甘草多糖中蛋白质的目的，同时，乙酸和适当比例的酒石酸二甲酯可以作用于蛋白质变性胶状物，降低蛋白质变性胶状物包裹的甘草多糖，从而可以大大降低甘草多糖被分离出去，提高甘草多糖的得率与含量；
4）脱色：量取提取液体积30%的活性炭倒入提取液中，搅拌均匀后，放于82℃恒温水浴锅中保温45分钟，趁热抽滤后将滤液冷却至室温；将提取液倒入冷冻盘中，并放于冰箱中冷冻24小时，冷冻结实后放于冷冻干燥机中干燥即得甘草多糖；本甘草多糖提取工艺简单易行，蛋白质残余率低，甘草多糖的纯度可达75%以上，甘草多糖具有调节机体免疫功能、提高动物抗病力的作用，同时其抗病毒、抗肿瘤及抑菌作用显著，此外还可以清除多余的氧自由基，提高抗氧化能力，可以作为饲料添加剂以及病毒抑制剂。
实施例3：
甘草多糖提取工艺，包括：提取、除杂、脱蛋白、脱色，具体包括以下步骤：
提取：称取22份甘草干粉，置于圆底烧瓶中，用8倍量蒸馏水于76℃水浴锅中回流提取2次，每次70分钟，合并滤液并抽滤，将滤液减压浓缩至含水量为12%，置于烧杯中冷却至室温，向浓缩液中缓慢地滴加体积分数为96%的乙醇并快速搅拌，调节水提液中乙醇体积分数为78%，静置冷藏24小时后抽滤，向滤饼中加入蒸馏水超声溶解，减压浓缩至质量浓度为0.9g/mL，置于烧杯中冷却至室温；醇提与水提结合可以大大提高甘草多糖的得率，不会破坏多糖的结构，同时提取溶剂容易除去，不会增加除杂工序；
除杂：取2.5份熟石灰加入到70份蒸馏水配成乳液，在不断搅拌下，向提取液中慢慢滴入石灰乳，调节pH值至10.8，静置片刻后，放入78℃水浴锅中保温50分钟，抽滤除去不溶物，收集滤液；将滤液pH值以磷酸调节至8.0，以3600r/min离心20分钟，收集离心液；向离心液中加入16倍量的石油醚，用分液漏斗萃取，静置分层，上层为石油醚层，下层为水层，收集下层，重复3次，除去脂溶性杂质；除杂操作可以有效的除去大蛋白、脂质等杂质，同时还可以使残存的蛋白质与多糖解离开来，有利于进一步的脱蛋白；
脱蛋白：将氯仿、正丁醇、乙酸按照体积比52:9:1的比例混合均匀，混合溶液中还含有1.4‰的酒石酸二甲酯，酒石酸二甲酯中L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯的比例为14.2:1；在不断搅拌下，按照体积比1:6.8的比例将混合溶液缓慢倒入除杂后的提取液中，密封后用磁力搅拌器搅拌45分钟，倒入分液漏斗中，静止分层后收集上层溶液，并离心分离出少量变性蛋白质，按上述步骤重复操作5次，使提取液中的蛋白质脱除完全；氯仿、正丁醇的混合溶液可以将游离蛋白转变为不溶性物质，经离心去除，可以达到去除甘草多糖中蛋白质的目的，同时，乙酸和适当比例的酒石酸二甲酯可以作用于蛋白质变性胶状物，降低蛋白质变性胶状物包裹的甘草多糖，从而可以大大降低甘草多糖被分离出去，提高甘草多糖的得率与含量；
脱色：量取提取液体积22%的活性炭倒入提取液中，搅拌均匀后，放于80℃恒温水浴锅中保温35分钟，趁热抽滤后将滤液冷却至室温；将提取液倒入冷冻盘中，并放于冰箱中冷冻15小时，冷冻结实后放于冷冻干燥机中干燥即得甘草多糖；本甘草多糖提取工艺简单易行，蛋白质残余率低，甘草多糖的纯度可达75%以上，甘草多糖具有调节机体免疫功能、提高动物抗病力的作用，同时其抗病毒、抗肿瘤及抑菌作用显著，此外还可以清除多余的氧自由基，提高抗氧化能力，可以作为饲料添加剂以及病毒抑制剂。
本发明操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.甘草多糖提取工艺，包括：提取、除杂、脱蛋白、脱色，其特征在于：所述脱蛋白步骤为：将氯仿、正丁醇、乙酸混合均匀，混合溶液中还含有1.2-1.5‰的酒石酸二甲酯；在不断搅拌下，按照体积比1:6-7的比例将混合溶液缓慢倒入除杂后的提取液中，密封后用磁力搅拌器搅拌45-60分钟，倒入分液漏斗中，静止分层后收集上层溶液，并离心分离出少量变性蛋白质，按上述步骤重复操作4-5次，使提取液中的蛋白质脱除完全。
2.根据权利要求1所述的甘草多糖提取工艺，其特征在于：所述脱蛋白步骤中，氯仿、正丁醇、乙酸的体积比为50-55:8-10:1。
3.根据权利要求1所述的甘草多糖提取工艺，其特征在于：所述脱蛋白步骤中，酒石酸二甲酯中L-酒石酸二甲酯与D-酒石酸二甲酯的比例为14.0-14.3:1。
4.根据权利要求1所述的甘草多糖提取工艺，其特征在于：所述提取步骤为：称取20-23份甘草干粉，置于圆底烧瓶中，用7-8倍量蒸馏水于75-78℃水浴锅中回流提取2-3次，每次60-80分钟，合并滤液并抽滤，将滤液减压浓缩至含水量为10-15%，置于烧杯中冷却至室温，向浓缩液中缓慢地滴加体积分数为95-98%的乙醇并快速搅拌，调节水提液中乙醇体积分数并静置冷藏后抽滤，向滤饼中加入蒸馏水超声溶解，减压浓缩至质量浓度为0.8-1.0g/mL，置于烧杯中冷却至室温。
5.根据权利要求4所述的甘草多糖提取工艺，其特征在于：所述提取步骤中，调节水提液中乙醇体积分数为75-80%，静置冷藏24-36小时后抽滤。
6.根据权利要求1所述的甘草多糖提取工艺，其特征在于：所述除杂步骤为：取2-3份熟石灰加入到50-80份蒸馏水配成乳液，在不断搅拌下，向提取液中慢慢滴入石灰乳，静置保温，抽滤除去不溶物，收集滤液；将滤液pH值以磷酸调节至8.0-8.1，以3500-3800r/min离心15-25分钟，收集离心液；向离心液中加入15-18倍量的石油醚，用分液漏斗萃取，静置分层，上层为石油醚层，下层为水层，收集下层，重复2-3次，除去脂溶性杂质。
7.根据权利要求6所述的甘草多糖提取工艺，其特征在于：所述除杂步骤中，向提取液中慢慢滴入石灰乳后，调节提取液的pH值至10.8-11.0，静置片刻后，放入78-80℃水浴锅中保温45-60分钟。
8.根据权利要求1所述的甘草多糖提取工艺，其特征在于：所述脱色步骤为：量取提取液体积20-30%的活性炭倒入提取液中，搅拌均匀后，放于80-82℃恒温水浴锅中保温30-45分钟，趁热抽滤后将滤液冷却至室温；将提取液倒入冷冻盘中，并放于冰箱中冷冻12-24小时，冷冻结实后放于冷冻干燥机中干燥即得甘草多糖。
9.根据权利要求8所述的甘草多糖提取工艺，其特征在于：所述脱色步骤中，活性炭的添加量为提取液体积的20-30%。
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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