CN117434190B - 一种测定肠道内容物或粪便中的短链脂肪酸含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及定量检测技术领域，提供一种测定肠道内容物或粪便中的短链脂肪酸含量的方法，所述方法包括样品前处理的步骤，该步骤中，先采用丙酮作为提取溶剂提取肠道内容物或粪便样品中的短链脂肪酸，再通过固相萃取柱分离纯化提取得到的短链脂肪酸丙酮提取液，所述固相萃取柱的填料使用C8和SAX。本发明的方法具有回收率高、检测限低和耗时短的特点。
Description
技术领域
本发明涉及定量检测技术领域，尤其涉及一种测定肠道内容物或粪便中的短链脂肪酸含量的方法。
背景技术
短链脂肪酸（ShortChain Fatty Acids，SCFA）是大肠中的肠道微生物群通过发酵食物中未吸收的成分产生，最丰富的SCFA是乙酸、丙酸和丁酸，占结肠中SCFA总量的90%-95%。它们主要来自于碳水化物，但一些氨基酸（特别是缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸）可以转化为支链SCFA，例如异丁酸、异戊酸，对SCFA的总量略有贡献。肠道中SCFA的存在有一些优点，例如它们降低管腔pH值，有利于营养吸收并减少一些病原微生物的形成。
目前，有多种分析方法可以检测SCFA，例如气相色谱（GC）、高效液相色谱（HPLC）、毛细管电泳（CE）或核磁共振（NMR）等。其中，GC是最常用的技术，因为SCFA的挥发性以及该技术和样品预处理的高灵敏度，良好的分辨率和相对较低的成本。GC可以与火焰离子化检测器（FID）偶联，此外，GC与质谱仪（MS）的耦合可以进一步提高方法的选择性和灵敏度。在SCFA分析之前，样品预处理通常包括提取，在某些情况下还包括纯化和/或衍生化。例如，CN110045040A、CN116124905A等公开了测定短链脂肪酸含量的方法，但上述方法的准确性和高效性都有待提高。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明提供一种测定肠道内容物或粪便中的短链脂肪酸含量的方法。
本发明提供一种测定肠道内容物或粪便中的短链脂肪酸含量的方法，包括样品前处理的步骤，所述样品前处理步骤中，先采用丙酮作为提取溶剂提取肠道内容物或粪便样品中的短链脂肪酸，再通过固相萃取柱分离纯化提取得到的短链脂肪酸丙酮提取液，所述固相萃取柱的填料使用C8和SAX。
其中，C8是硅胶键合辛烷基，SAX是键合有季胺基官能团的强阴离子交换填料。
优选地，C8和SAX的质量比为1:3~3:1，分段填充，C8填料在上，SAX填料在下。也就是说，提取液经过固相萃取柱时，先经过C8填料，后经过SAX填料。其中，C8和SAX的质量比可以为1:3~3:1范围内的任一数值，例如1:3、1.5:2.5、2:2、2.5:1.5或3:1等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。
本发明采用丙酮进行提取短链脂肪酸，提取后再通过特定填料的固相萃取柱纯化，可以得到纯度高、杂质少且分离度好的样品溶液，以便后续气相色谱检测，最终快速获得准确的短链脂肪酸含量。
在本发明的一些实施例中，所述肠道内容物或粪便样品的用量为50-150mg，例如50mg、80mg或100mg等。所述丙酮的用量为1mL。
在本发明的一些实施例中，所述提取包括：将50-150mg肠道内容物或粪便样品加入离心管中，加入300-400μL丙酮后进行研磨，再加入600-700μL丙酮将样品涡旋均匀，涡旋后进行高速离心，4℃下10000g- 12000 g 离心10-15min。
优选的，肠道内容物或粪便样品在处理前保存在-80℃，避免短链脂肪酸的挥发和损失。
优选的，每个样品独立使用一根电动研磨棒，用过的研磨棒浸泡在75%的乙醇中，试验结束后洗干净并用高压灭菌锅灭菌，干燥后保存备用。
在本发明的一些实施例中，所述分离纯化包括：先用丙酮活化固相萃取柱，并吹干残留丙酮，再将短链脂肪酸丙酮提取液加入固相萃取柱中，流出的即为短链脂肪酸样品溶液。
在本发明的一些实施例中，所述方法还包括：将所述样品前处理得到的样品溶液采用气相色谱法测定短链脂肪酸含量。
在本发明的一些实施例中，所述气相色谱法采用升温程序进行测定，所述升温程序为：色谱柱初始温度50℃，保持1 min，以15℃/min升温至120℃，保持0min，再以6℃/min升温至200℃，保持0min，共运行19 min；后升温至235℃运行3 min。
在本发明的一些实施例中，所述气相色谱法的检测条件为：色谱柱为安捷伦DB-FFAP（30m，0.25mm×0.25μm），N2作为载气，流速1 mL/min，压力11.258 psi，进样口温度为280℃，FID检测器温度250℃，H2流量40 mL/min，空气流量300 mL/min，N2尾吹流量25 mL/min；进样量1 μL，清洗溶剂A为水，清洗溶剂B为丙酮。
优选的，气相色谱仪进样口衬管为超高惰性、分流、降压低、带玻璃毛（安捷伦，5190-3165），进50个样品左右需要检查衬管是否变脏，容易引起杂峰，此时可用尖头镊子轻轻去除脏的玻璃棉，衬管还能继续使用。
优选的，进50个样品左右，气相色谱仪进样口隔垫需要及时更换新的，避免仪器漏气报错和污染衬管。
优选的，进50个样品左右需要设置高温清洗色谱柱的方法，进2针丙酮空白，避免杂峰残留干扰结果。高温清洗色谱方法为：安捷伦7820A气相色谱仪进样口加热器为280℃，压力11.258 psi，分流比10：1；色谱柱为安捷伦DB-FFAP（30m，0.25mm×0.25μm），N2作为载气，流速1 mL/min，压力11.258 psi，柱温箱50 ℃，保持1 min，以5 ℃/min升温至150 ℃，保持10min，再以5 ℃/min升温至240 ℃，保持10min，共运行59 min；FID检测器，加热250℃，H2流量40 mL/min，空气流量300 mL/min，尾吹流量（N2）25 mL/min；GC自动进样器，进样量1 μL，清洗溶剂A为水，清洗溶剂B为丙酮，进样前AB各洗两次最大体积，样品清洗2次4 μL，样品抽吸3次。
本发明所述短链脂肪酸包括乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸和己酸。
本发明还提供所述测定肠道内容物或粪便中的短链脂肪酸含量的方法在制备短链脂肪酸含量检测试剂盒中的应用。
本发明提供了一种测定肠道内容物或粪便中的短链脂肪酸含量的方法，通过采用丙酮进行提取短链脂肪酸，提取后再通过特定填料的固相萃取柱纯化，增加了样品在气相色谱仪进样口的气化时间，该方法简单、快捷、高效，能够准确测定肠道内容物或粪便中的短链脂肪酸含量。
附图说明
图1为L3浓度下的短链脂肪酸混合标准品的气相色谱检测图；
图2为小鼠盲肠内容物中短链脂肪酸的气相色谱检测图；
图3为小鼠粪便中短链脂肪酸的气相色谱检测图；
图4为猪盲肠内容物中短链脂肪酸的气相色谱检测图；
图5为猪粪便中短链脂肪酸的气相色谱检测图；
图6为蜜蜂肠道内容物中短链脂肪酸的气相色谱检测图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。
方法验证
1、标准曲线、检测限和定量限确定
短链脂肪酸标准品制备：分别称60μL乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸、己酸到同一个10 mL容量瓶中，记录每种酸的质量；然后加丙酮定容到10 mL，计算每种酸的摩尔浓度，结果如表1所示。该短链脂肪酸母液可在-20℃存放一个月。
表1配制短链脂肪酸母液
L1：990 μL丙酮+10 μLSCFA母液（表1），涡旋混合均匀；
L2：500 μL丙酮+500 μL L1，涡旋混合均匀；
L3：990 μL丙酮+10 μL L1，涡旋混合均匀；
L4：990 μL丙酮+10μL L2，涡旋混合均匀；
L5：990 μL丙酮+10μL L3，涡旋混合均匀；
L6：990 μL丙酮+10μL L5，涡旋混合均匀。
表2 配制梯度短链脂肪酸标准品
每个浓度标准分析物质平行测定3次，取基线噪音的3倍为每种短链脂肪酸的最低检测限(LOD)；取基线噪音的10倍为每种短链脂肪酸的最低定量限(LOQ)。见表3。
表3标准溶液中短链脂肪酸的响应时间、检出限、定量限和标准曲线
2、可重复性测试
针对L3浓度的标准品，平行检测3次，计算精密度（RSD，%）观察重复性。将L3浓度的标准品在上午、下午和晚上进样，计算精密度（RSD，%）观察日内稳定性。将L3浓度的标准品在第1天、第2天和第3天进样，计算精密度（RSD，%）观察日间稳定性。结果如表4所示。
表4 L3浓度标准品可重复性测试结果
由表4中可以看出，3份L3浓度的短链脂肪酸标准品进样后，出峰面积RSD在0.36%-0.85%，表明仪器方法重复性和精密度良好。分别在上午、下午和晚上测定L3浓度的短链脂肪酸标准品后，出峰面积的RSD在1.04%-1.30%，表明此色谱方法日内稳定性良好。分别在第1天、第2天和第3天测定L3浓度的短链脂肪酸标准品后，出峰面积的RSD在0.88%-1.23%，表明此色谱方法日间稳定性良好。
3、回收率测定
（1）基质样品获得：
将猪粪便进行高温烘干磨粉，然后用丙酮进行粗提，离心后弃上清液，除去粪便中的短链脂肪酸，再将沉淀物进行高温烘干，获得粪便基质样品。
（2）基质样品加标准品溶解：
H1：50 mg粪便基质样品+990 μL丙酮+10 μLSCFA母液（表1），涡旋混合均匀；
H2：50 mg粪便基质样品+500 μL丙酮+500 μL L1，涡旋混合均匀；
H3：50 mg粪便基质样品+990 μL丙酮+10 μL L1，涡旋混合均匀；
H4：50 mg粪便基质样品+990 μL丙酮+10μL L2，涡旋混合均匀；
H5：50 mg粪便基质样品+990 μL丙酮+10μL L3，涡旋混合均匀；
将样品对称放在高速离心机中4 ℃ 12000 g 离心10 min。
（3）基质加标样品纯化：
用1 mL丙酮活化C8+SAX固相萃取小柱（其中C8：SAX质量比=1：1，且C8在上，SAX在下），并吹干残留丙酮；在固相萃取小柱下面放置干净的10 mL离心管，将基质加标样品的丙酮提取液加入固相萃取小柱中，杂质被吸附到固相萃取小柱的填料中，流下的样品即为短链脂肪酸。
（4）基质加标样品检测：
通过安捷伦7820A气相色谱和安捷伦DB-FFAP气相色谱柱进行色谱分析。气相分析条件为：进样口加热器为280℃，压力11.258 psi，分流比10：1；色谱柱为安捷伦DB-FFAP（30m，0.25mm×0.25μm），N2作为载气，流速1 mL/min，压力11.258 psi，柱温箱50 ℃，保持1min，以15 ℃/min升温至120 ℃，保持0min，再以6℃/min升温至200 ℃，保持0min，共运行19 min；后运行235 ℃，3 min；FID检测器，加热250℃，H2流量40 mL/min，空气流量300 mL/min，尾吹流量（N2）25 mL/min；GC自动进样器，进样量1 μL，清洗溶剂A为水，清洗溶剂B为丙酮，进样前AB各洗两次最大体积，样品清洗2次4 μL，样品抽吸3次。
（5）回收率计算公式：
回收率=（加标基质浓度-基质浓度）/（添加标准品浓度）×100%。结果如表5所示。
表5
表5结果表明，不同浓度短链脂肪酸在处理过的猪粪便中加标回收率为81.94%-137.83%，说明本方法有较好的回收率，结果准确可靠。
实施例1
本实施例分别提供一种小鼠粪便、猪粪便中短链脂肪酸含量的测定方法，包括如下步骤：
1）样品溶解：称取50 mg粪便到1.5 mL离心管中，加入300 μL丙酮后用电动研磨棒充分研磨粪便残渣，再加入700 μL丙酮将样品涡旋均匀；将样品对称放在高速离心机中4℃ 12000 g 离心10 min。
2）样品纯化：用1mL丙酮活化C8+SAX固相萃取小柱（其中C8：SAX质量比=1：1，且C8在上，SAX在下），并吹干残留丙酮；在固相萃取小柱下面放置干净的10 mL离心管，将样品的丙酮提取液加入固相萃取小柱中，杂质被吸附到固相萃取小柱的填料中，流下的样品即为短链脂肪酸。
3）样品检测：通过安捷伦7820A气相色谱和安捷伦DB-FFAP气相色谱柱进行色谱分析。气相分析条件为：进样口加热器为280℃，压力11.258 psi，分流比10：1；色谱柱为安捷伦DB-FFAP（30m，0.25mm×0.25μm），N2作为载气，流速1 mL/min，压力11.258 psi，柱温箱50℃，保持1 min，以15 ℃/min升温至120 ℃，保持0min，再以6℃/min升温至200 ℃，保持0min，共运行19 min；后运行235 ℃，3 min；FID检测器，加热250℃，H2流量40 mL/min，空气流量300 mL/min，尾吹流量（N2）25 mL/min；GC自动进样器，进样量1 μL，清洗溶剂A为水，清洗溶剂B为丙酮，进样前AB各洗两次最大体积，样品清洗2次4 μL，样品抽吸3次。
实施例2
本实施例分别提供一种小鼠盲肠内容物、猪盲肠内容物、蜜蜂肠道内容物中短链脂肪酸含量的测定方法，包括如下步骤：
1）样品获得：在操作台上使用干净的剪刀和镊子解剖小鼠、猪或蜜蜂的肠道，将取出的肠道内容物迅速置于液氮中，最终转移到-80 ℃储存样品。
2）样品溶解：称取50 mg肠道内容物到1.5 mL离心管中，加入300 μL丙酮后用电动研磨棒充分研磨粪便残渣，再加入700 μL丙酮将样品涡旋均匀；将样品对称放在高速离心机中4 ℃ 12000 g 离心10 min。
3）样品纯化：用1 mL丙酮活化C8+SAX固相萃取小柱（其中C8：SAX质量比=1：1，且C8在上，SAX在下），并吹干残留丙酮；在固相萃取小柱下面放置干净的10 mL离心管，将样品的丙酮提取液加入固相萃取小柱中，杂质被吸附到固相萃取小柱的填料中，流下的样品即为短链脂肪酸。
4）样品检测：通过安捷伦7820A气相色谱和安捷伦DB-FFAP气相色谱柱进行色谱分析。气相分析条件为：进样口加热器为280℃，压力11.258 psi，分流比10：1；色谱柱为安捷伦DB-FFAP（30m，0.25mm×0.25μm），N2作为载气，流速1 mL/min，压力11.258 psi，柱温箱50℃，保持1 min，以15 ℃/min升温至120 ℃，保持0min，再以6℃/min升温至200 ℃，保持0min，共运行19 min；后运行235 ℃，3 min；FID检测器，加热250℃，H2流量40 mL/min，空气流量300 mL/min，尾吹流量（N2）25 mL/min；GC自动进样器，进样量1 μL，清洗溶剂A为水，清洗溶剂B为丙酮，进样前AB各洗两次最大体积，样品清洗2次4 μL，样品抽吸3次。
用本发明方法检测小鼠肠道内容物、小鼠粪便、猪肠道内容物、猪粪便和蜜蜂肠道内容物中短链脂肪酸含量的结果如表6所示。
表6
由表6可以看出，乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸在肠道内容物和粪便中都可以检出，己酸部分检出（不是所有的肠道内容物和粪便都含有己酸）。
另外，图1为L3浓度下的短链脂肪酸混合标准品的气相色谱检测图；图2-6分别为小鼠肠道内容物、小鼠粪便、猪肠道内容物、猪粪便和蜜蜂肠道内容物的气相检测谱图。由图1短链脂肪酸标准品检测结果可知，本发明的方法可将乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸和己酸理想地分开。由图2-6可以看出，采用本发明的方法可以将肠道内容物或粪便中的乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸和己酸很好的检测出来，杂质少。
对比例1
本对比例分别使用丙酮、甲醇和乙腈提取添加混合标准品的猪粪便样品基质中的短链脂肪酸，包括如下步骤：
（1）基质样品加标准品溶解：
丙酮提取液：50 mg粪便基质样品+990 μL丙酮+10 μL L1，涡旋混合均匀；
甲醇提取液：50 mg粪便基质样品+990 μL甲醇+10 μL L1，涡旋混合均匀；
乙腈提取液：50 mg粪便基质样品+990 μL乙腈+10 μL L1，涡旋混合均匀；
标准品添加浓度分别为：乙酸107.4069μM、丙酸80.3186μM、异丁酸63.1065μM、丁酸64.9225μM、异戊酸53.5581μM、戊酸54.3414μM、己酸45.8858μM。
每种溶剂进行6个平行处理，将样品对称放在高速离心机中4 ℃ 12000 g 离心10min。
（2）基质加标样品纯化：
分别用1 mL丙酮、甲醇和乙腈活化C8+SAX固相萃取小柱（其中C8：SAX质量比=1：1，且C8在上，SAX在下），并吹干残留溶剂；在固相萃取小柱下面放置干净的10 mL离心管，将基质加标样品的上清提取液加入净化小柱中，杂质被吸附到固相萃取小柱的填料中，流下的样品即为短链脂肪酸。
（3）基质加标样品检测：
通过安捷伦7820A气相色谱和安捷伦DB-FFAP气相色谱柱进行色谱分析。气相分析条件为：进样口加热器为280℃，压力11.258 psi，分流比10：1；色谱柱为安捷伦DB-FFAP（30m，0.25mm×0.25μm），N2作为载气，流速1 mL/min，压力11.258 psi，柱温箱50 ℃，保持1min，以15 ℃/min升温至120 ℃，保持0min，再以6℃/min升温至200 ℃，保持0min，共运行19 min；后运行235 ℃，3 min；FID检测器，加热250℃，H2流量40 mL/min，空气流量300 mL/min，尾吹流量（N2）25 mL/min；GC自动进样器，进样量1 μL，清洗溶剂A为水，清洗溶剂B为丙酮，进样前AB各洗两次最大体积，样品清洗2次4 μL，样品抽吸3次。
（4）回收率计算公式：
回收率=（加标基质浓度-基质浓度）/（添加标准品浓度）×100%。结果如表7所示。
表7
表7结果表明，丙酮溶剂提取短链脂肪酸在处理过的猪粪便中加标回收率为83.42%-97.79%，甲醇溶剂提取短链脂肪酸的加标回收率为66.11%-84.09%，乙腈溶剂提取短链脂肪酸的加标回收率为70.83%-84.42%，说明丙酮提取方法的回收率更好。
对比例2
本对比例使用丙酮提取添加混合标准品的猪粪便样品基质中的短链脂肪酸，分别经过C8+SAX、SAX、CN氰基材料进行净化。
包括如下步骤：
（1）基质样品加标准品溶解：
丙酮提取液：50 mg粪便基质样品+990 μL丙酮+10 μL L1，涡旋混合均匀；
标准品添加浓度分别为：乙酸107.4069μM、丙酸80.3186μM、异丁酸63.1065μM、丁酸64.9225μM、异戊酸53.5581μM、戊酸54.3414μM、己酸45.8858μM。
每种净化材料进行6个平行处理，将样品对称放在高速离心机中4 ℃ 12000 g 离心10 min。
（2）基质加标样品纯化：
用1 mL丙酮活化分别活化C8+SAX（其中C8：SAX质量比=1：1，且C8在上，SAX在下）、SAX和CN氰基材料固相萃取小柱，并吹干残留溶剂；在固相萃取小柱下面放置干净的10 mL离心管，将基质加标样品的上清提取液加入固相萃取小柱中，杂质被吸附到固相萃取小柱的填料中，流下的样品即为短链脂肪酸。
（3）基质加标样品检测：
通过安捷伦7820A气相色谱和安捷伦DB-FFAP气相色谱柱进行色谱分析。气相分析条件为：进样口加热器为280℃，压力11.258 psi，分流比10：1；色谱柱为安捷伦DB-FFAP（30m，0.25mm×0.25μm），N2作为载气，流速1 mL/min，压力11.258 psi，柱温箱50 ℃，保持1min，以15 ℃/min升温至120 ℃，保持0min，再以6℃/min升温至200 ℃，保持0min，共运行19 min；后运行235 ℃，3 min；FID检测器，加热250℃，H2流量40 mL/min，空气流量300 mL/min，尾吹流量（N2）25 mL/min；GC自动进样器，进样量1 μL，清洗溶剂A为水，清洗溶剂B为丙酮，进样前AB各洗两次最大体积，样品清洗2次4 μL，样品抽吸3次。
（4）回收率计算公式：
回收率=（加标基质浓度-基质浓度）/（添加标准品浓度）×100%。结果如表8所示。
表8
表8结果表明，C8+SAX材料提取短链脂肪酸在处理过的猪粪便中加标回收率为84.62%-95.73%，SAX材料提取短链脂肪酸的加标回收率为72.48%-87.84%，CN氰基材料提取短链脂肪酸的加标回收率为72.75%-79.29%，说明C8+SAX材料提取方法的回收率更好。
需要说明的是，在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“具体实施方式”、或“一些具体实施方式”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明实施例的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (3)
1.一种测定肠道内容物或粪便中的短链脂肪酸含量的方法，其特征在于，包括样品前处理的步骤，所述样品前处理步骤中，先采用丙酮作为提取溶剂提取肠道内容物或粪便样品中的短链脂肪酸，再通过固相萃取柱分离纯化提取得到的短链脂肪酸丙酮提取液，所述固相萃取柱的填料使用C8和SAX，C8和SAX的质量比为1:3~3:1，分段填充，C8填料在上，SAX填料在下；
所述提取的操作为：将50mg-150mg肠道内容物或粪便样品加入离心管中，加入300μL-400μL丙酮后进行研磨，再加入600μL-700μL丙酮将样品涡旋均匀，涡旋后进行高速离心，4℃下10000g-12000 g 离心10min-15min；
所述分离纯化的操作为：先用丙酮活化固相萃取柱，吹干残留丙酮，再将短链脂肪酸丙酮提取液加入固相萃取柱中，流出的即为短链脂肪酸样品溶液；
所述方法还包括：将所述样品前处理得到的样品溶液采用气相色谱法测定短链脂肪酸含量，所述气相色谱法中采用的色谱柱为安捷伦DB-FFAP，检测器为FID；
所述短链脂肪酸为乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸和己酸。
2.根据权利要求1所述的测定肠道内容物或粪便中的短链脂肪酸含量的方法，其特征在于，所述气相色谱法采用升温程序进行测定，所述升温程序为：色谱柱初始温度50℃，保持1 min，以15℃/min升温至120℃，保持0min，再以6℃/min升温至200℃，保持0min，共运行19 min；后升温至235℃运行3 min。
3.根据权利要求1或2所述的测定肠道内容物或粪便中的短链脂肪酸含量的方法，其特征在于，所述气相色谱法的检测条件为：色谱柱为安捷伦DB-FFAP，30m，0.25mm×0.25μm ，N2作为载气，流速1 mL/min，压力11.258 psi，进样口温度为280℃，FID检测器温度250℃，H2流量40 mL/min，空气流量300 mL/min，N2尾吹流量25 mL/min；进样量1 μL，清洗溶剂A为水，清洗溶剂B为丙酮。
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